ES2847774T3 - Evaluación y tratamiento de un órgano aislado - Google Patents

Abstract

Procedimiento para evaluar un órgano durante la perfusión de un órgano aislado, comprendiendo el procedimiento las etapas de: perfundir el órgano aislado con un perfusado; medir la concentración en el perfusado de uno o más biomarcadores que incluyen un marcador de rotura celular, en el que el marcador de rotura celular es ADNdc, ADN mitocondrial o un ribosoma; y comparar la concentración medida en el perfusado del uno o más biomarcadores frente a valores de referencia, y determinar si seleccionar o no el órgano para el trasplante sobre la base de la comparación; en el que si, después de la evaluación, el órgano se trasplanta, no se trasplanta al cuerpo del que procede.

Description

d e s c r ip c ió n

Evaluación y tratamiento de un órgano aislado

Sector de la invención

La presente invención se refiere a procedimientos para la evaluación y el tratamiento de órganos durante la perfusión de un órgano aislado.

Estado de la técnica anterior

Entre los órganos que se pueden trasplantar de una persona o animal a otro se incluyen el corazón, los riñones, el hígado, los pulmones, el páncreas y los intestinos. Los trasplantes de riñón se realizan con mayor frecuencia. También se realizan periódicamente trasplantes de corazón, hígado y pulmones. Sin embargo, hay muchas más personas que necesitan trasplantes de órganos que órganos disponibles y, trágicamente, muchas personas mueren mientras esperan un órgano adecuado.

Es muy importante que los órganos se mantengan en las mejores condiciones posibles entre la recogida y el trasplante. Para mantener el órgano en las mejores condiciones posibles, el órgano puede aislarse de la circulación sanguínea del donante y perfundirse con un perfusado. Por ejemplo, la perfusión pulmonar ex vivo (EVLP, ex vivo lung perfusion) se considera hoy en día un procedimiento seguro con la capacidad de aumentar el número de pulmones disponibles para el trasplante. Se han realizado más de 350 trasplantes después de la EVLP. Sin embargo, el procedimiento solo se lleva a cabo en unos pocos centros de trasplante de pulmón en todo el mundo. A efectos de tener más pulmones disponibles para salvar más pacientes con enfermedades pulmonares terminales, la técnica debe ser adoptada por más centros. Sin embargo, una de las dificultades actuales es que los procedimientos de evaluación de un órgano para determinar si es apto o no para el trasplante no están muy avanzados. La adopción más amplia de esta técnica sería más probable si se dispusiera de datos objetivos para determinar si se debe utilizar o no el órgano para el trasplante.

Un procedimiento de perfusión de órganos aislados actual implica extraer un órgano, tal como un pulmón o pulmones, de un donante y conectarlo a un circuito de perfusión, que comprende una bomba o bombas, un depósito, un calentador, un enfriador, un oxigenador y un ventilador. Si el órgano es otro órgano distinto de un pulmón, no se utiliza un ventilador. La vasculatura del órgano se bombea con un perfusado. El perfusado puede ser, por ejemplo, una solución STEEN (véase la Patente WO2002/035929) u otra solución apropiada para perfusión de órganos. La solución puede contener eritrocitos y puede estar oxigenada. La EVLP es solo una forma de perfusión de órganos aislados. Otros órganos sólidos como corazón, riñón, hígado, páncreas e intestino delgado también se pueden perfundir en un modelo de perfusión de órganos ex vivo (EVOP, ex vivo organ perfusion). Además, un órgano puede aislarse de forma circulatoria mientras permanece dentro del cuerpo en una perfusión aislada in vivo (IVIP, in vivo isolated perfusion). La perfusión aislada también puede ampliarse para comprender una mano, brazo, pierna o cualquier otra parte del cuerpo que pueda aislarse temporalmente de forma circulatoria.

Se pueden evaluar diferentes parámetros específicos de órganos durante la perfusión, pero hasta la fecha estos parámetros han sido principalmente parámetros físicos. Por ejemplo, si el órgano es un pulmón, se han monitorizado parámetros, tales como la resistencia vascular pulmonar (PVR, pulmonary vascular resistance), la distensibilidad y la capacidad de oxigenación. Si bien estos parámetros proporcionan cierta información al usuario, no proporcionan una información definitiva sobre si un órgano debe seleccionarse o no para el trasplante y, de este modo, la decisión de trasplantar o no se basa, en gran medida, en una evaluación subjetiva. Por lo tanto, existe una necesidad urgente de parámetros objetivos adicionales que puedan utilizarse para determinar la calidad de un órgano durante la evaluación de la perfusión de un órgano.

El enfoque sobre biomarcadores moleculares en la bibliografía se ha relacionado con la señalización de interleucinas, en especial IL-1 p, IL.6, IL-8, IL-10 y TNFa. Sin embargo, a pesar de varias publicaciones, no se ha demostrado que estos marcadores sean útiles en un entorno clínico. Una de las razones es que generalmente no se analizan con procedimientos de “point of care” (PoC) y, por lo tanto, la información, aunque sea clínicamente valiosa, no está disponible para los médicos cuando se debe tomar la decisión de trasplantar o no. Un procedimiento de EVLP normalmente dura entre 2 y 6 horas, y la información no disponible en este período de tiempo no sirve para informar sobre la decisión de trasplantar o no ese órgano.

Además, la lesión por isquemia-reperfusión (IRI, ischemia reperfusion injury) es una complicación bien conocida para el trasplante de órganos. Se produce en el momento de la recirculación del órgano con sangre oxigenada. Aunque es una reacción de fase aguda, se cree que los efectos de esta lesión temprana contribuyen significativamente a la morbilidad y mortalidad posteriores en los receptores de órganos. Una mejor capacidad para seleccionar y deseleccionar órganos para el trasplante podría aliviar la IRI y mejorar la supervivencia y la salud de los receptores tanto a corto como a largo plazo.

Características de la invención

Según un primer aspecto, la presente invención se refiere a un procedimiento de evaluación de un órgano durante la perfusión de un órgano aislado, comprendiendo el procedimiento las etapas de: perfundir el órgano aislado con un perfusado; y medir la concentración en el perfusado de uno o más biomarcadores que incluyen un marcador de rotura celular, en el que el marcador de rotura celular es ADNdc, ADN mitocondrial o un ribosoma; y comparar la concentración medida en el perfusado del uno o más biomarcadores frente a valores de referencia, y determinar si seleccionar o no el órgano para el trasplante en base a la comparación; en el que si, después de la evaluación, el órgano se trasplanta, no se trasplanta al cuerpo del que procede.

La presente solicitud también describe un procedimiento de tratamiento de un órgano durante la perfusión del órgano aislado, comprendiendo el procedimiento la etapa de perfundir el órgano aislado con un perfusado, en el que el perfusado comprende una molécula supresora de TF.

La presente solicitud también describe el uso de una molécula supresora de TF para regular por descenso la expresión de TF durante la perfusión de un órgano aislado.

La presente solicitud también describe un kit para el análisis de un perfusado durante la perfusión de un órgano aislado, comprendiendo el kit un análisis inmunológico para TF, tPA, ADNdc, SpA o SpD o un análisis cromogénico para TF o tPA o un análisis Picogreen para ADNdc.

Por consiguiente, la presente invención da a conocer un procedimiento muy necesario para evaluar un órgano de una manera objetiva midiendo la concentración en el perfusado de uno o más biomarcadores clave que pueden indicar la salud del órgano. A continuación, se proporciona más información sobre cada uno de los biomarcadores. El órgano aislado puede ser de un animal o de un ser humano, y es normalmente un pulmón o pulmones, un riñón, un hígado, un corazón, un páncreas o un intestino. Por aislado, los inventores de la presente invención quieren decir que el órgano está aislado del sistema circulatorio. Puede aislarse in vivo o aislarse ex vivo, tal como ya se conoce en la perfusión de órganos. A continuación, se perfunde con un perfusado y se puede analizar el perfusado. De manera específica, se mide la concentración en el perfusado de uno o más biomarcadores. La presente invención se refiere, de manera específica, a la medición de uno o más biomarcadores que incluyen un marcador de rotura celular que es ADN de doble cadena (ADNdc), ADN mitocondrial o ribosomas. También se pueden medir TF, tPA, SpA y SpD.

Se puede tomar una única medida de la concentración del biomarcador, pero es preferente que la concentración del uno o más biomarcadores se mida de manera continua durante un periodo de tiempo predeterminado o de manera repetida a intervalos predeterminados, es decir, de manera preferente, a lo largo del periodo de perfusión que suele ser entre 1 y 6 horas.

A efectos de utilizar el procedimiento para evaluar el órgano en la práctica, las concentraciones medidas en el perfusado del uno o más biomarcadores se comparan con los valores de referencia, y, a continuación, el órgano se selecciona o deselecciona en función de cómo se comparan las concentraciones medidas con los valores de referencia. Esto proporciona al médico un parámetro objetivo para utilizar para determinar si el órgano es adecuado o no para el trasplante. Si bien la concentración de solo uno de los biomarcadores seleccionados puede proporcionar una información valiosa para evaluar un órgano, este procedimiento es particularmente valioso cuando se mide la concentración, como mínimo, de dos de los biomarcadores. El análisis combinatorio puede conducir a predicciones particularmente buenas de qué órganos serán exitosos y cuáles no para el trasplante, y se puede utilizar para mejorar así los resultados del paciente.

Adicionalmente, el órgano aislado en realidad se puede tratar según cómo se comparan las concentraciones medidas de biomarcador con los valores de referencia. Si se cumplen ciertas condiciones, el órgano aislado se puede tratar mediante la adición de un componente al perfusado. De manera ventajosa, el efecto del tratamiento del componente sobre el órgano aislado se puede monitorizar mediante una evaluación adicional. Un ejemplo de esto es que se puede añadir una molécula supresora de TF al perfusado para regular por descenso la expresión de TF cuando la concentración medida de TF supera el valor de referencia. A continuación, se describen más ejemplos para los diferentes biomarcadores específicos.

También se describen procedimientos de tratamiento de un órgano durante la perfusión de un órgano aislado. Tal como se describe a continuación, es muy probable que el órgano haya estado sometido a estrés, simplemente por los efectos negativos de la muerte cerebral o por la interrupción de la circulación en un donante en asistolia. Por consiguiente, el órgano se puede tratar independientemente de la evaluación, por ejemplo, mediante la adición de una molécula supresora de TF al perfusado para regular por descenso la expresión de TF. Esto presenta la ventaja de que el tratamiento puede comenzar inmediatamente y normalmente se utiliza junto con la evaluación, es decir, el tratamiento es antes o durante la evaluación.

El objetivo general de la presente invención es el de mejorar la tasa de éxito de los trasplantes a efectos de mejorar la calidad de vida de los pacientes. Otro objetivo general es tratar los órganos de manera que más órganos puedan trasplantarse con éxito y más personas puedan beneficiarse de los trasplantes de órganos. Los órganos, en general, se trasplantan a otra persona y no se vuelven a trasplantar al donante.

Descripción

Una particularidad con la perfusión de órganos aislados y, más aún, con la perfusión de órganos aislados utilizando una solución definida, tal como una solución STEEN, como el perfusado, es que no hay otros sistemas de órganos presentes. Esto proporciona una oportunidad única para investigar un sistema de órganos, pero, al mismo tiempo, la fisiología es abrupta. En realidad, se sabe muy poco sobre cómo responde un órgano aislado a su entorno no fisiológico. Se podría prever que el órgano inicia sus reacciones fisiológicas normales, por ejemplo, a inflamación y coagulación, pero lo que sucede cuando el órgano no está recibiendo las respuestas externas se previó en una situación in vivo. Este es un campo de investigación que está ampliamente inexplorado.

Los expertos en la materia conocen perfusados, tales como la solución STEEN. En la presente invención se puede utilizar cualquier perfusado adecuado. La perfusión de órganos aislados, en general, no se realiza con un perfusado de sangre completa. Una de las principales razones de esto es que la sangre contiene varios sistemas enzimáticos que, cuando se activan, pueden dañar el órgano. Entre los ejemplos de estos sistemas se encuentran la coagulación y la activación del complemento. El órgano ya ha estado bajo estrés en el donante y está más o menos dañado por los efectos sistémicos de la muerte cerebral o el paro circulatorio. Este daño existente podría activar estos sistemas enzimáticos y dañar aún más el órgano. Las células inmunes presentes en la sangre total también son particularmente dañinas durante estas circunstancias. Por lo tanto, una solución como una solución STEEN, que comprende sales fisiológicas, dextrano y albúmina, se considera más segura para el órgano. Como no están presentes ninguno de los sistemas enzimáticos ni ninguna de las células inmunes derivadas de la sangre que no sean los residentes en el órgano, se le da la oportunidad al órgano de curarse y de volver a ganar la función en condiciones óptimas.

Este sistema relativamente puro permite la investigación de la señalización molecular realizada por el propio órgano y células inmunes que el órgano aloja, sin alteraciones de la señalización de otros sitios.

Este sistema no sólo proporciona una oportunidad para evaluar la función del órgano, sino que también ofrece una oportunidad para tratar el órgano. Durante la perfusión aislada, el órgano puede tratarse con dosis normales o elevadas de productos farmacéuticos o biológicos, ya que no se producirán efectos secundarios sistémicos.

Factor tisular - Estado de la técnica anterior

El factor tisular (TF) es una proteína transmembrana de 46 KDa cuando tiene la longitud completa. En circunstancias normales, el TF no está expuesto a sangre. Se expresa y/o se expone a la sangre cuando se ha producido una lesión en el endotelio vascular. La expresión de TF es mayor en órganos con alto contenido vascular como el tejido cerebral y pulmonar. El TF expuesto a la sangre se une y activa del Factor VII (FVII) al FVIIa. El FVIIa permanece unido al TF y esta interacción aumenta la actividad del FVIIa en 2 x 107 veces. El TF y FVIIa, a continuación, activan los zimógenos Factor IX (FIX) y Factor X (FX) a FIXa y FXa. FXa y FIXa se unen a sus respectivos cofactores Factor Va y Factor FVIIIa. El FXa activa la protrombina (FII) a trombina y la trombina escinde el fibrinógeno en monómeros de fibrina que se polimerizan para formar coágulos de sangre. Por lo tanto, el TF es un potente iniciador de la coagulación de la sangre.

Las células endoteliales se activan para producir el TF después de la estimulación con citocinas proinflamatorias, tales como el factor de necrosis tumoral alfa (TNFa), interleucina 1p (IL-1p) y ligando CD40, y también con la activación de aminas biogénicas, tales como histamina o serotonina y por LDL oxidada y VEGF (véase Steffel et al.

2006). Los monocitos y macrófagos también se activan para producir el TF por citocinas proinflamatorias y endotoxinas. El TF circulado se encuentra en micropartículas que se liberan de células endoteliales, células de músculo liso vascular y monocitos. Esto proporciona una fuente del factor TF que es absorbido por las plaquetas, que no tiene producción propia de TF. Una forma de TF empalmada de manera diferente produce un TF procoagulante que se libera en forma libre a la circulación. Esta forma de TF es estimulada por citocinas.

El TF también es proinflamatorio y juega un papel crucial en el circuito de coagulación-inflamación-trombosis. Este circuito se ha implicado en muchas afecciones, tales como cánceres, diabetes, obesidad, sepsis, CID, disfunción cardiovascular o arterosclerosis, etc.

Se cree que el TF es expresado por monocitos, macrófagos y granulocitos después de estimulación y el factor tisular soluble (sTF) se libera de las células endoteliales después de la estimulación de citocinas proinflamatorias. Se sabe que la regulación por incremento o la exposición de TF son estimuladas por LPS, IL, TNFa, IFN, etc. También se sabe que es regulado por incremento durante la hipoxia.

Fragmentos de membrana de tejido dañado que comprenden TF son otra fuente de TF circulante.

Se sabe que la regulación por descenso de TF se produce después de la exposición a inhibidores de la HMG-CoA reductasa, inhibidores de la ciclooxigenasa (COX), paclitaxel, lisofosfatidilcolina, insulina, nicotinamida, óxido nítrico (NO)/o activador de la guanilato ciclasa soluble, hidroxiurea, piruvato de etilo, dimetilsulfóxido (DMSO), inhibidores de la enzima convertidora de angiotensina (ECA), adiponectina, ácido retinoico, ácido transretinoico, vitamina D3, PGJ2, activadores de agonistas de PPARa (WY14643 y ácido eicosatetraenoico), agonistas del receptor X del hígado, pentroxifilina, fenólicos/derivados de resveratrol, indobufeno, amiodarona, metformina, AMPc intracelular elevado y señalización de PI3K/Akt/PKB, etc. Otras formas conocidas de regular por descenso el TF son utilizar miR-19, ARN en horquilla corta, ribozima en horquilla u ODN antisentido.

Se ha sugerido que el TF está implicado en la lesión pulmonar en el síndrome de dificultad respiratoria aguda (SDRA). Se ha demostrado que los anticuerpos contra TF humanizados mejoran la lesión pulmonar en un modelo de SDRA de ratón “knock-in” de TF humano (véase He et al 2008). También se ha mencionado que el TF está regulado por incremento después de la IRI (véase Yamane et al 2005), aunque no se mostraron datos. Se ha demostrado que el TF está regulado por incremento en los receptores de trasplante de corazón que desarrollaron vasculopatía del aloinjerto cardíaco (véase Yes et al 2002). Se demostró que la pentoxifilina evitaba la regulación por incremento del TF de monocitos en receptores de trasplante renal y mejoraba la función del injerto (véase Susen et al 2000). Sin embargo, ninguna de las referencias mencionadas estaba relacionada con la perfusión de órganos aislados. La evaluación o el tratamiento de un órgano durante la perfusión aislada no se han asociado antes con el TF.

Factor tisular - En la presente invención

Los inventores demostraron que el TF estaba presente en el perfusado durante la EVLP. Aumentó con el tiempo y más en pulmones que no se consideraban trasplantables. Esto muestra que el TF es un biomarcador importante de la función pulmonar durante la EVLP. Dado que el TF es liberado por la vasculatura, los tejidos y las células inmunes, se prevé que la misma situación es relevante para otros órganos sólidos a trasplantar, tales como corazones, hígados, páncreas, intestinos y riñones. Por lo tanto, el análisis del TF en el perfusado de un órgano durante la perfusión de un órgano aislado es un biomarcador de la función y el bienestar del órgano. La perfusión de órganos aislados puede ser un procedimiento in vivo, en el que el órgano todavía está en el cuerpo, pero la circulación se ha aislado. Dicho procedimiento podría utilizarse, por ejemplo, para la terapia contra el cáncer, o para otras terapias, en las que deben evitarse reacciones adversas en otros órganos o de forma sistémica. Además, el análisis de TF podría utilizarse como parámetro para decidir cómo tratar el órgano durante la perfusión aislada, ya sea in vivo o ex vivo.

El TF podría analizarse mediante ensayos inmunológicos o de actividad. Con la tecnología disponible en la actualidad, se preferiría un ensayo de actividad, ya que la concentración de TF en el perfusado está dentro de la escala de picogramos a nanogramos. Dicha baja concentración se adapta bien a los ensayos basados en actividad. Sin embargo, dado que es probable que la tecnología basada en un ensayo inmunológico evolucione aún más, se puede contemplar un ensayo inmunológico de PoC. En cualquier caso, el ensayo utilizado debería proporcionar resultados en aproximadamente una hora o, de manera más preferente, en 30 minutos para que sean útiles durante el procedimiento real.

Un ensayo de actividad utiliza los sistemas de amplificación enzimática que son impulsados por el factor analizado. En el caso del TF, dicho ensayo podría basarse en la activación de FVII, FIX, FX o FII y la medición de la escisión del sustrato. Por ejemplo, la actividad del TF podría medirse mediante la adición de FVII, que es activado por TF a FVIIa y el sustrato a FVIIa. La escisión enzimática del sustrato de FVIIa podría monitorizarse cinéticamente o después de una reacción detenida. El sustrato podría ser un sustrato cromogénico. Un ensayo más amplificado comprendería FX, además de FVII. En este caso, el complejo TF/FVIIa activa FX a FXa y la actividad de FXa se monitoriza con el sustrato de FXa. La escisión enzimática del sustrato de FXa podría monitorizarse cinéticamente o después de una reacción detenida. El sustrato podría ser un sustrato cromogénico. En un ensayo aún más amplificado, aunque más complejo, también se podría utilizar la activación de FII y la monitorización se realizaría entonces con un sustrato de FII en una reacción cinética o detenida.

El TF podría medirse una vez o de manera repetida durante la perfusión de órganos aislados. La perfusión de órganos aislados podría ser una EVOP, una EVLP, una perfusión de órganos aislados in vivo (IVIOP) o una perfusión de pulmón aislado in vivo (IVILP). Las mediciones podrían realizarse, por ejemplo, cada V hora o cada hora o cada dos horas de las EVOP, IVIOP o, de manera más específica, de las EVLP o IVILP.

El TF que se mide en el perfusado podría ser de cualquier origen. Por ejemplo, podría estar presente como micelas de membrana liberadas de células moribundas o de células sometidas a un esfuerzo cortante. Podría ser TF soluble (sTF) liberado de las membranas o producido directamente a través de patrones de corte y empalme alternativos o podría estar unido a células inmunes de la circulación dentro del perfusado, tales como monocitos o granulocitos o cualquier otro origen.

Dado que el TF es un marcador tanto para un estado hipercoagulable como para un estado proinflamatorio, un aumento del TF es un marcador de una función del órgano después del trasplante afectado negativamente y se puede utilizar el nivel como un indicador de si una órgano debe ser trasplantado o no. Además, la información sobre niveles elevados de TF podría utilizarse para monitorizar el estado de un órgano durante la IVIOP o, de manera específica, la IVILP. El TF puede utilizarse como una señal para inducir terapias que reducen la actividad y/o expresión del TF y, de este modo, mejoran el órgano. Como el TF, en general, aumenta algo durante la perfusión aislada, esta terapia podría iniciarse independientemente del análisis, sin embargo, los efectos de la terapia podrían seguirse entonces durante la perfusión del órgano aislado como una reducción en la concentración de TF en el perfusado.

Una terapia con TF podría incluir el agotamiento con un anticuerpo contra TF para eliminar el TF ya formado. De manera más preferente, la terapia podría incluir la utilización de una sustancia que regule por descenso la expresión de TF. En esta realización de la presente invención, se añade una molécula supresora de TF al perfusado cuando la concentración medida de TF supera un valor de referencia. Dichas moléculas supresoras de TF son conocidas en la técnica anterior y podrían seleccionarse, por ejemplo, entre inhibidores de la HMG-CoA reductasa, inhibidores de la ciclooxigenasa (COX), paclitaxel, lisofosfatidilcolina, insulina, nicotinamida, óxido nítrico (NO)/o activador de la guanilato ciclasa soluble, hidroxiurea, piruvato de etilo, dimetilsulfóxido (DMSO), inhibidores de la enzima convertidora de angiotensina (ECA), adiponectina, ácido retinoico, ácido transretinoico, vitamina D3, PGJ2, activadores de agonistas de PPARa (WY14643 y ácido eicosatetraenoico), agonistas del receptor X del hígado, pentroxifilina, fenólicos/derivados de resveratrol, indobufeno, amiodarona, metformina, AMPc intracelular elevado y señalización de PI3K/Akt/PKB, etc., o equivalentes de cualquiera de estas moléculas. Otras formas conocidas de regular por descenso el TF son utilizar miR-19, ARN en horquilla corta, ribozima en horquilla u ODN antisentido. La regulación por descenso del TF podría realizarse utilizando dosis aceptadas fisiológicamente de una o más de las moléculas mencionadas anteriormente solas o en combinación. Como el órgano está aislado de forma circulatoria, se podría utilizar una concentración elevada de una o más de las moléculas mencionadas anteriormente sin provocar efectos adversos sistémicos.

De manera preferente, la molécula reguladora por descenso del TF se selecciona entre inhibidores de COX, paclitaxel, ácido retinoico, vitamina D3, derivado de resveratrol, indobufeno, amiodarona o metformina o una combinación de los mismos o equivalentes de cualquiera de estas sustancias.

La concentración de inhibidores de COX podría utilizarse, para inhibidores de COX no selectivos, tales como aspirina, naproxeno e ibuprofeno o sus equivalentes, en concentraciones entre 1 mg/l de perfusado y 10 g/l de perfusado, de manera más preferente, entre 10 mg/l de perfusado y 2 g/l de perfusado, de manera aún más preferente, entre 150 mg/l de perfusado y 1000 mg/l de perfusado.

Los inhibidores de COX-2 selectivos, tales como celecoxib, rofecoxib y otros AINE selectivos de COX-2, podrían utilizarse en concentraciones entre 1 mg/l de perfusado y 10 g/l de perfusado, de manera más preferente, entre 10 mg/l de perfusado y 2 g/l de perfusado, de manera aún más preferente, entre 50 mg/l de perfusado y 500 mg/l de perfusado.

La concentración de paclitaxel o sus equivalentes podría ser de entre 1 mg/l de perfusado y 10 g/l de perfusado, de manera más preferente, entre 10 mg/l de perfusado y 2 g/l de perfusado, de manera aún más preferente, entre 15 mg/l de perfusado y 500 mg/l de perfusado.

La concentración de ácido retinoico podría ser de entre 0,1 mg/l de perfusado y 1 g/l de perfusado, de manera más preferente, entre 0,5 mg/l de perfusado y 500 mg/l de perfusado, de manera aún más preferente, entre 1 mg/l de perfusado y 100 mg/l de perfusado.

La concentración de vitamina D3 podría ser de entre 0,1 |¿g/l de perfusado y 100 mg/l de perfusado, de manera más preferente, entre 1 |¿g/l perfusado y 100 mg/l de perfusado, de manera aún más preferente, entre 1 |¿g/l perfusado y 1 mg/l de perfusado.

La concentración de indobufeno o sus equivalentes podría ser de entre 1 mg/l de perfusado y 10 g/l de perfusado, de manera más preferente, entre 10 mg/l de perfusado y 2 g/l de perfusado, de manera aún más preferente, entre 15 mg/l de perfusado y 1000 mg/l de perfusado.

La concentración de amiodarona o sus equivalentes podría ser de entre 1 mg/l de perfusado y 10 g/l de perfusado, de manera más preferente, entre 10 mg/l de perfusado y 2 g/l de perfusado, de manera aún más preferente, entre 15 mg/l de perfusado y 1,2 g/l de perfusado.

La concentración de metformina o sus equivalentes podría ser de entre 1 mg/l de perfusado y 50 g/l de perfusado, de manera más preferente, entre 10 mg/l de perfusado y 10 g/l de perfusado, de manera aún más preferente, entre 100 mg/l de perfusado y 5 g/l de perfusado.

El acortamiento del ciclo vicioso de coagulación-inflamación dependiente de TF, con terapia de supresión de TF durante la perfusión del órgano aislado, no solo mejoraría la función inmediata del órgano, sino también la función en una etapa posterior. En el trasplante de órganos, el daño inicial después de la reperfusión IRI es un factor determinante de la futura supervivencia y salud del receptor. Para el trasplante de pulmón, la IRI se considera un factor determinante del desarrollo del síndrome de bronco obliterante (BOS), el rechazo y otras formas de disfunción orgánica durante varios años después del trasplante. Por lo tanto, una IRI menor conseguida a través de la terapia con TF tendría un efecto duradero en el receptor.

Se podría utilizar un valor de referencia de corte específico para la concentración aceptable de TF o se podría seguir la concentración a lo largo del tiempo durante la perfusión del órgano aislado y los cambios se podrían utilizar para decidir si el órgano funciona bien o no o si está respondiendo al tratamiento. El análisis se podría utilizar por sí solo o en combinación con otros análisis. Un enfoque combinatorio podría mejorar la sensibilidad y/o especificidad del análisis a medida que se prueban más funciones del órgano.

Por ejemplo, un valor de referencia de corte para la concentración de TF en el perfusado podría estar por encima de 50 pg/ml o por encima de 75 pg/ml o por encima de 100 pg/ml o por encima de 130 pg/ml o por encima de 150 pg/ml o por encima de 175 pg/ml o por encima de 200 pg/ml. Por encima de estos valores, el órgano podría deseleccionarse para el trasplante o podría tomarse la decisión de tratar el órgano mediante la adición de una molécula, tal como una molécula supresora de TF al perfusado.

Activador del plasminógeno tisular - Estado de la técnica anterior

El activador del plasminógeno tisular (tPA) es un activador del plasminógeno de la serina proteasa. El plasminógeno activado, la plasmina, lisa los coágulos de sangre mediante la degradación de la fibrina. Por tanto, el tPA forma parte del sistema fibrinolítico. Los coágulos de sangre y los microtrombos a menudo se acumulan en los pulmones, ya que los pulmones funcionan como un filtro de coágulos antes de que la sangre entre en la circulación sistémica. El pulmón es relativamente resistente a esto, ya que se oxigena tanto del aire como de la circulación sanguínea. Sin embargo, los coágulos y los microtrombos deben eliminarse continuamente. Esta depuración implica la activación del plasminógeno por tPA. Por lo tanto, el tPA se libera del endotelio del pulmón en respuesta a coágulos o microtrombos. El endotelio en otros lugares también libera tPA para activar el plasminógeno y existe la necesidad en todos los tejidos y órganos de eliminar los coágulos de sangre y los microtrombos.

Se utilizó uroquinasa, un activador del plasminógeno alternativo, durante EVLP en un estudio de Inci et al. 2007. Esto se realizó sin estar relacionado con el nivel de tPA en el perfusado. Este estudio mostró que la utilización de uroquinasa durante la EVLP mejoraba la función pulmonar en los pulmones de donantes en asistolia (NHBD). Se sabe que los órganos de los NHBD contienen más coágulos y microtrombos a medida que cesa la circulación en el donante. Por otro lado, Zhao et al. 2010 demostraron que el agotamiento de tPA atenúa la lesión por reperfusión isquémica en un modelo de ratón. El tPA no se había medido antes en el perfusado durante la perfusión de un órgano aislado.

Activador del plasminógeno tisular - En la invención

Los inventores de la presente invención entienden que el tPA en el perfusado podría considerarse un marcador de un estado fibrinolítico en el órgano perfusado. Es probable que todos los órganos tengan cierto grado de coágulos o microtrombos y, por lo tanto, una respuesta endotelial con liberación de tPA podría considerarse como una respuesta orgánica funcional normal. Si la respuesta al tPA no es adecuada, podría significar que el endotelio no está lo suficientemente sano para responder. Sin embargo, si la respuesta es muy elevada, podría sugerir que el órgano está muy restringido a nivel circulatorio con coágulos de sangre. Por lo tanto, se sugiere que un órgano sano debería responder con una elevación moderada del tPA durante la perfusión de un órgano aislado. Como el pulmón funciona como filtro de coágulos de sangre y microtrombos de la circulación, contiene, en general, más coágulos y microtrombos que otros órganos y, por lo tanto, es especialmente dependiente de la fibrinólisis.

A pesar de que los inventores de la presente invención han demostrado este efecto en los pulmones, todos los órganos contienen vasculatura y, por lo tanto, liberan tPA al perfusado y se prevén las mismas relaciones.

El análisis de tPA se podría realizar con procedimientos inmunológicos o como un ensayo de la actividad. En cualquier caso, el ensayo utilizado debería proporcionar resultados en aproximadamente una hora o, de manera más preferente, en 30 minutos, para que sea útil durante el procedimiento real. Si se utiliza un ensayo de actividad, la actividad podría medirse utilizando un sustrato de tPA directamente o mediante la adición de plasminógeno y midiendo la actividad de plasmina resultante con un sustrato de plasmina. El sustrato de tPA o plasmina podría ser un sustrato cromogénico.

51 la actividad del tPA en el órgano no se considera suficiente después del análisis, se podría incluir un agente fibrinolítico en el perfusado. Este agente fibrinolítico podría ser, por ejemplo, tPA, estreptoquinasa o uroquinasa. La concentración del agente fibrinolítico podría ser de entre 0,1 |¿g/l de perfusado y 100 mg/l de perfusado, de manera más preferente, entre 1 |¿g/l de perfusado y 800 |¿g/l de perfusado.

Se han definido valores de referencia para tPA, y se podrían utilizar valores de corte específicos para una concentración aceptable de tPA o podría seguirse la concentración con el tiempo durante la perfusión del órgano aislado y los cambios se podrían utilizar para decidir si el órgano funciona bien o no. El análisis se puede utilizar por sí solo o en combinación con otros análisis. Un enfoque combinatorio podría mejorar la sensibilidad y/o especificidad del análisis a medida que se prueban más funciones del órgano.

Por ejemplo, los valores de referencia de corte podrían ser > 4000 pg/ml y < 7400 pg/ml o > 3500 pg/ml y < 7400 pg/ml o > 4500 pg/ml y < 7400 pg/ml o > 4500 pg/ml y < 8000 pg/ml o > 4000 pg/ml y < 8000 pg/ml o > 3500 pg/ml y < 8000 pg/ml. De manera alternativa, podría utilizarse un único nivel de corte. Estos podrían utilizarse para determinar que el órgano se selecciona para el trasplante o para un tratamiento o análisis posterior solo si la concentración del tPA en el perfusado está dentro de estos valores de referencia.

Relación TF/tPA

El equilibrio entre la procoagulación y la fibrinólisis es importante para la función del órgano. Por lo tanto, una relación entre TF y tPA también podría proporcionar información valiosa como una relación procoagulante/anticoagulante. Aunque los inventores de la presente invención han demostrado este efecto solo en los pulmones, todos los órganos contienen vasculatura y, por lo tanto, liberan ambas sustancias al perfusado y se prevén las mismas relaciones.

Se podrían utilizar otros biomarcadores relacionados con un estado trombótico/antitrombótico o trombótico/fibrinolítico para determinar la función de un órgano durante la perfusión de un órgano aislado. Dichos biomarcadores podrían implicar el análisis del dímero D, el factor von Willebrand (vWF), el inhibidor del activador del plasminógeno (PAI), etc. Estos biomarcadores podrían analizarse para determinar la función del órgano por sí mismos o en relación con otros biomarcadores o en combinación con otros biomarcadores. .

Marcadores de rotura celular - Estado de la técnica anterior

El ADN de doble cadena (ADNdc) normalmente está contenido en el núcleo celular. Su liberación a la circulación es un evento anormal. Existen otros componentes intracelulares que no se liberan a la circulación en el tejido sano, tal como ADN mitocondrial, ribosomas, etc.

Marcadores de rotura celular - En la invención

El ADN de doble cadena (ADNdc) es un marcador de rotura celular y su presencia en el perfusado podría verse como un signo de muerte celular dentro del órgano. La muerte celular podría deberse a la necrosis o apoptosis y podría ser una respuesta a la hipoxia, lo que conduce al hinchamiento de las células cuando las bombas de iones ya no tienen energía para funcionar. La explosión resultante de las células provoca la liberación de productos intracelulares al perfusado. La medición de ADNdc en el perfusado durante la perfusión de órganos aislados podría generar información sobre la función del órgano, en el que un nivel elevado de ADNdc representa una muerte celular más grave dentro del órgano. El órgano podría ser, por ejemplo, un pulmón, un corazón, un riñón, un hígado, un páncreas o un intestino. Como alternativa, se podrían utilizar ADN mitocondrial o ribosomas en lugar de ADNdc para el análisis.

El ADNdc podría analizarse para utilizar procedimientos inmunológicos o utilizar una tinción de ácido nucleico específico de ADNdc, tal como Picogreen®. En cualquier caso, el ensayo utilizado debería proporcionar resultados en aproximadamente una hora o, de manera más preferente, en 30 minutos para que sean útiles durante el procedimiento real.

Se pueden definir valores de referencia y se puede utilizar un valor de corte específico para la concentración aceptable de ADNdc o se podría seguir la concentración con el tiempo durante la perfusión del órgano aislado y los cambios se podrían utilizar para decidir si el órgano está funcionando bien o no. El análisis se podría utilizar por sí solo o en combinación con otros análisis. Un enfoque combinatorio podría mejorar la sensibilidad y/o especificidad del análisis a medida que se prueban más funciones de órganos.

Por ejemplo, se podría utilizar un valor de referencia que es un punto de corte de 2000 ng/ml o 3000 ng/ml o 3500 ng/ml o 4000 ng/ml. De manera preferente, se debería utilizar un punto de corte de 3000 ng/ml. Esto significaría que si se detectara una concentración de marcadores de rotura celular, en especial ADNdc, por encima del valor de referencia de corte, el órgano se deseleccionaría para el trasplante. De manera alternativa, el órgano podría tratarse cuando se supere el valor de referencia. De manera específica, podría añadirse un agente antiapoptótico al perfusado. Entre los ejemplos de agentes antiapoptóticos adecuados se incluyen inhibidores de c-Myc, Bax, p53, tBid, BCL y caspasa.

Proteínas A y D surfactantes - Estado de la técnica anterior

Las proteínas A y D surfactantes (SpA y SpD) son proteínas solubles en agua con actividad inmunitaria y funcionan como opsoninas en la parte epitelial/alveolar del pulmón. La SpA es un importante modulador inmunológico. Tanto la SpA como la SpD son proteínas multiméricas grandes. La proteína A surfactante también está implicada en el control de la liberación de surfactantes a través de la exocitosis de cuerpos lamelares de células epiteliales de tipo II y, en cierta medida, de las células Clara en las vías respiratorias pequeñas. El efecto sobre la liberación de surfactante de SpA es supresor y su efecto es opuesto al de la SpD.

Se ha demostrado que la SpD se reduce en muestras de lavado bronquio-alveolar (BAL, bronchio-alveolar lavage) de pacientes con EPOC, pero aumentaba en muestras de sangre, lo que indica un escape (véase Stockley 2014). No se ha probado antes en el perfusado durante la perfusión de un órgano aislado.

Proteínas A y D surfactantes - En la invención

El escape de las proteínas A y D surfactantes (SpA y SpD) de la parte alveolar a la vasculatura podría verse como un signo de rotura de la barrera aire-líquido en el pulmón. Cuanto más pronunciada es esta alteración, peor es la función del pulmón. La medición de la SpA y/o SpD en el perfusado de un pulmón aislado generaría, por tanto, información sobre la función pulmonar.

SpA y SpD podrían analizarse para utilizar, por ejemplo, ensayos inmunológicos. En cualquier caso, el ensayo utilizado debería proporcionar resultados en aproximadamente una hora o más, de manera preferente, en 30 minutos para que fuese útil durante el procedimiento real.

Se pueden definir valores de referencia, ya sea cuando se pueda utilizar un valor de corte específico para la concentración aceptable de SpA y/o SpD o se pueda seguir la concentración con el tiempo durante la perfusión de pulmón aislado y se podrían utilizar los cambios para decidir si el órgano está funcionando bien o no y, por lo tanto, si debe seleccionarse para trasplante y/o tratamiento y/o evaluación posterior. El análisis podría utilizarse por sí solo o en combinación con otros análisis. Un enfoque combinatorio podría mejorar la sensibilidad y/o especificidad del análisis a medida que se prueban más funciones de órganos.

Por ejemplo, el valor de referencia podría ser un nivel de corte de la SpA en el perfusado por encima de 10 |¿g/ml o por encima de 30 |¿g/ml o por encima de 40 |¿g/ml o por encima de 60 |¿g/ml o por encima de 80 |¿g/ml.

Por ejemplo, el valor de referencia podría ser un nivel de corte de la SpD en el perfusado por encima de 50 ng/ml o por encima de 80 ng/ml o por encima de 100 ng/ml o aproximadamente 120 ng/ml o por encima de 130 ng/ml o aproximadamente 140 ng/ml o aproximadamente 150 ng/ml o por encima de 160 ng/ml o por encima de 180 ng/ml o por encima de 200 ng/ml.

Por encima de los valores de referencia, el órgano se deseleccionaría para el trasplante. En el valor de referencia o por debajo del mismo, el órgano podría seleccionarse para el trasplante, el tratamiento y/o la monitorización posterior.

Análisis combinatorio

La presente invención implica la medición de biomarcadores de rotura celular ADNdc, ADN mitocondrial o ribosomas. Estos y otros biomarcadores que incluyen TF, tPA, SpA, SpD y cualquier otro biomarcador potencialmente útil podrían utilizarse como biomarcadores individuales o podrían utilizarse en cualquier combinación para proporcionar información sobre la función o el bienestar del órgano. Una combinación podría comprender la selección, como mínimo, de dos de los biomarcadores TF, tPA, ADNdc, SpA y SpD, incluyendo ADNdc o, como mínimo, tres de los biomarcadores TF, tPA, ADNdc, SpA y SpD, incluyendo ADNdc o, como mínimo, cuatro de los biomarcadores. TF, tPA, ADNdc, SpA y SpD, incluyendo ADNdc. Estos análisis también podrían combinarse con cualquier otro para el biomarcador o prueba de funcionalidad relevante para el órgano.

Los análisis de SpA y SpD son específicos para los pulmones y no son relevantes para otros órganos. TF, tPA y ADNdc son relevantes, ya sea solos o en cualquier combinación, para cualquier órgano durante la perfusión de órganos aislados in vivo o ex vivo.

El análisis podría utilizar valores de referencia basados en intervalos normales, valores de corte o cambio de concentración con el tiempo. El análisis también podría utilizarse para monitorizar el tratamiento de un órgano. El tratamiento podría comprender una o más sustancias antiinflamatorias y/o una o más sustancias antitrombóticas y/o una o más sustancias antiapoptóticas.

Ejemplos

TF en el perfusado

Se perfundieron ex vivo 45 grupos de pulmones humanos utilizando la solución STEEN como el perfusado. La perfusión se realizó hasta las siete horas, aunque en la mayoría de los casos se interrumpió la perfusión después de tres o cuatro horas, ya sea para trasplantar el pulmón o para descartar un pulmón que no se consideraba apto para el trasplante. El perfusado se recogió y se congeló para el posterior análisis inmunológico de TF. Las muestras se recogieron normalmente al principio y, a continuación, cada hora. Sin embargo, no en todos los casos se recogieron muestras en todos los tiempos. Esto se atribuyó a la situación clínica en la que se iba a realizar la recogida de muestras. El cuidado del órgano fue la tarea principal, la recogida de muestras necesariamente estaba en segundo lugar.

Cuando se añaden los datos, se puede observar que los pulmones descartados tienen un mayor incremento de TF que los pulmones trasplantados. Para cada pulmón individual, éste no es siempre el caso, y algunos pulmones trasplantados tienen valores fuera de un punto de corte sugerido. Si la presente invención hubiera estado disponible, estos pulmones podrían haber sido deseleccionados o, de manera preferente, tratados para resultar trasplantables en relación con este parámetro, si el análisis se hubiera realizado durante la EVLP. Dicha manipulación podría tener una menor IRI en el paciente. Los datos de los resultados del paciente se pueden analizar para garantizar que los valores de referencia para la selección, deselección y tratamiento de órganos estén optimizados.

Tabla 1 - Mediciones de TF en pg/ml del perfusado

(continuación)

Como los valores, en general, aumentan con el tiempo, la tasa de aumento o cambio podría ser una medida alternativa de la función o el bienestar del órgano. Este aumento continuo también podría verse como una oportunidad para tratar y monitorizar el efecto del tratamiento.

t-PA en el perfusado

Se perfundieron ex vivo 45 grupos de pulmones humanos utilizando la solución STEEN como el perfusado. La perfusión se realizó hasta las siete horas, aunque en la mayoría de los casos se interrumpió la perfusión después de tres o cuatro horas, ya sea para trasplantar el pulmón o para descartar un pulmón que no se consideraba apto para el trasplante. El perfusado se recogió y se congeló para el posterior análisis inmunológico de tPA. Las muestras se recogieron normalmente al principio y, a continuación, cada hora. Sin embargo, no en todos los casos se recogieron muestras en todos los tiempos. Esto se atribuyó a la situación clínica en la que se iba a realizar la recogida de muestras. El cuidado del órgano fue la tarea principal, la recogida de muestras necesariamente estaba en segundo lugar.

Cuando se añaden los datos, se puede observar que los pulmones descartados tienen un mayor incremento de tPA que los pulmones trasplantados. Para cada pulmón individual, éste no es siempre el caso, y algunos pulmones trasplantados tienen valores fuera de un punto de corte sugerido. Si la presente invención hubiera estado disponible, estos pulmones podrían haber sido deseleccionados o, de manera preferente, tratados para resultar trasplantables en relación con este parámetro, si el análisis se hubiera realizado durante la EVLP. Dicha manipulación podría tener una menor IRI en el paciente. Los datos de los resultados del paciente se pueden analizar para garantizar que los valores de referencia para la selección, deselección y tratamiento de órganos estén optimizados.

Tabla 2 - Mediciones de tPA en pg/ml del perfusado

(continuación)

(continuación)

Como los valores, en general, aumentan con el tiempo, la tasa de aumento o cambio podría ser una medida alternativa de la función o el bienestar del órgano. Este aumento continuo también podría verse como una oportunidad para tratar y monitorizar el efecto del tratamiento.

ADNdc en el perfusado

Se perfundieron ex vivo 45 grupos de pulmones humanos utilizando la solución STEEN como el perfusado. La perfusión se realizó hasta las siete horas, aunque en la mayoría de los casos se interrumpió la perfusión después de tres o cuatro horas, ya sea para trasplantar el pulmón o para descartar un pulmón que no se consideraba apto para el trasplante. El perfusado se recogió y se congeló para el posterior análisis Picogreen® de ADNdc. Las muestras se recogieron normalmente al principio y, a continuación, cada hora. Sin embargo, no en todos los casos se recogieron muestras en todos los tiempos. Esto se atribuyó a la situación clínica en la que se iba a realizar la recogida de muestras. El cuidado del órgano fue la tarea principal, la recogida de muestras necesariamente estaba en segundo lugar.

Cuando se añaden los datos, se puede observar que los pulmones descartados tienen un mayor incremento de ADNdc que los pulmones trasplantados. Para cada pulmón individual, éste no es siempre el caso, y algunos pulmones trasplantados tienen valores fuera de un punto de corte sugerido. Si la presente invención hubiera estado disponible, estos pulmones podrían haber sido deseleccionados o, de manera preferente, tratados para resultar trasplantables en relación con este parámetro, si el análisis se hubiera realizado durante la EVLP. Dicha manipulación podría tener una menor IRi en el paciente. Los datos de los resultados del paciente se pueden analizar para garantizar que los valores de referencia para la selección, deselección y tratamiento de órganos estén optimizados.

Tabla 3 - Mediciones de ADNdc en ng/ml del perfusado

(continuación)

Como los valores, en general, aumentan con el tiempo, la tasa de aumento o cambio podría ser una medida alternativa de la función o el bienestar del órgano. Este aumento continuo también podría verse como una oportunidad para tratar y monitorizar el efecto del tratamiento.

SpA en el perfusado

Se perfundieron ex vivo 45 grupos de pulmones humanos utilizando la solución STEEN como el perfusado. La perfusión se realizó hasta las siete horas, aunque en la mayoría de los casos se interrumpió la perfusión después de tres o cuatro horas, ya sea para trasplantar el pulmón o para descartar un pulmón que no se consideraba apto para el trasplante. El perfusado se recogió y se congeló para el posterior análisis inmunológico de SpA. Las muestras se recogieron normalmente al principio y, a continuación, cada hora. Sin embargo, no en todos los casos se recogieron muestras en todos los tiempos. Esto se atribuyó a la situación clínica en la que se iba a realizar la recogida de muestras. El cuidado del órgano fue la tarea principal, la recogida de muestras necesariamente estaba en segundo lugar.

En este conjunto de datos no hay diferencia en los datos añadidos comparando pulmones trasplantados y no trasplantados. Esto demuestra que la evaluación que se utilizó (solo examen físico) no fue lo suficientemente sofisticada para tener en cuenta el nivel de rotura de la barrera aire-líquido en el pulmón que puede ser indicado por las concentraciones de SpA. Si la presente invención hubiera estado disponible, estos pulmones podrían haber sido deseleccionados o, de manera preferente, tratados para resultar trasplantables en relación con este parámetro, si el análisis se hubiera realizado durante la EVLP. Dicha manipulación podría tener una menor IRI en el paciente. Los datos de los resultados del paciente se pueden analizar para garantizar que los valores de referencia para la selección, deselección y tratamiento de órganos estén optimizados.

Tabla 4 - Mediciones de SpA en ng/ml del perfusado

(continuación)

Como los valores, en general, aumentan con el tiempo, la tasa de aumento o cambio podría ser una medida alternativa de la función o el bienestar del órgano. Este aumento continuo también podría verse como una oportunidad para tratar y monitorizar el efecto del tratamiento.

SpD en el perfusado

Se perfundieron ex vivo 45 grupos de pulmones humanos utilizando la solución STEEN como el perfusado. La perfusión se realizó hasta las siete horas, aunque en la mayoría de los casos se interrumpió la perfusión después de tres o cuatro horas, ya sea para trasplantar el pulmón o para descartar un pulmón que no se consideraba apto para el trasplante. El perfusado se recogió y se congeló para el posterior análisis inmunológico de SpD. Las muestras se recogieron normalmente al principio y, a continuación, cada hora. Sin embargo, no en todos los casos se recogieron muestras en todos los tiempos. Esto se atribuyó a la situación clínica en la que se iba a realizar la recogida de muestras. El cuidado del órgano fue la tarea principal, la recogida de muestras necesariamente estaba en segundo lugar.

Cuando se añaden los datos, se puede observar que los pulmones descartados tienen un mayor incremento de SpD que los pulmones trasplantados. Para cada pulmón individual, éste no es siempre el caso, y algunos pulmones trasplantados tienen valores fuera de un punto de corte sugerido. Si la presente invención hubiera estado disponible, estos pulmones podrían haber sido deseleccionados o, de manera preferente, tratados para resultar trasplantables en relación con este parámetro, si el análisis se hubiera realizado durante la EVLP. Dicha manipulación podría tener una menor IRI en el paciente. Los datos de los resultados del paciente se pueden analizar para garantizar que los valores de referencia para la selección, deselección y tratamiento de órganos estén optimizados.

Tabla 5 - Mediciones de SpD en ng/ml del perfusado

(continuación)

Como los valores, en general, aumentan con el tiempo, la tasa de aumento o cambio podría ser una medida alternativa de la función o el bienestar del órgano. Este aumento continuo también podría verse como una oportunidad para tratar y monitorizar el efecto del tratamiento.

Análisis añadidos

Se analizaron los diferentes análisis juntos utilizando los siguientes puntos de corte sugeridos:

TF > 120 pg/ml

tPA > 4.000 y < 7.400 pg/ml

ADNdc > 3.000 ng/ml

SpA > 40.000 ng/ml

SpD > 130 ng/ml

Tabla 6 - Análisis añadidos en los que el valor es el orden del pulmón perfusado

(continuación)

Con estos valores de referencia de corte, hay una diferencia entre el porcentaje de pulmones con 0, como mínimo, 1 o, como mínimo, 3 valores fuera del punto de corte. También se puede observar que en muchas ocasiones estos biomarcadores coexisten, lo que indica que son biomarcadores de la insuficiencia o disfunción orgánica.

T l - r m n r l r n li i ñ i

A medida que se optimizan adicionalmente los valores de referencia del punto de corte, el número de falsos positivos y falsos negativos cambiará. Sin embargo, los ejemplos demuestran que las indicaciones que estarán disponibles utilizando la presente invención a partir de biomarcadores seleccionados para la evaluación se correlacionan con las decisiones que se toman actualmente en base a la apariencia de los órganos. Los datos añadidos muestran claramente que la evaluación, según la presente invención, se correlaciona con los pulmones que se rechazaron y los pulmones que se aceptaron para el trasplante. Se prevé que con la ayuda de la presente invención, los médicos podrían tomar decisiones aún mejores sobre las perspectivas de cualquier órgano en particular para el trasplante.

Se utilizaría una correlación adicional con los datos clínicos para optimizar los niveles de corte. Se prevé que los pacientes que recibieron pulmones con más valores fuera de los intervalos o puntos de corte no lo hicieron tan bien como los pacientes que recibieron pulmones con todos los valores dentro de los intervalos o puntos de corte.

Claims (9)

r e iv in d ic a c io n e s

1. Procedimiento para evaluar un órgano durante la perfusión de un órgano aislado, comprendiendo el procedimiento las etapas de:

perfundir el órgano aislado con un perfusado;

medir la concentración en el perfusado de uno o más biomarcadores que incluyen un marcador de rotura celular, en el que el marcador de rotura celular es ADNdc, ADN mitocondrial o un ribosoma; y

comparar la concentración medida en el perfusado del uno o más biomarcadores frente a valores de referencia, y determinar si seleccionar o no el órgano para el trasplante sobre la base de la comparación;

en el que si, después de la evaluación, el órgano se trasplanta, no se trasplanta al cuerpo del que procede.

2. Procedimiento, según la reivindicación 1, en el que el procedimiento comprende, además, medir la concentración de un biomarcador adicional en el perfusado, en el que el biomarcador se selecciona del grupo que consiste en TF, tPA, SpA y SpD, siempre que cuando el biomarcador sea SpA o SpD, el órgano aislado es un pulmón o pulmones.

3. Procedimiento, según la reivindicación 1 o 2, en el que el órgano aislado es de un animal o un ser humano y es un pulmón o pulmones, un riñón, un hígado, un corazón, un páncreas o un intestino.

4. Procedimiento, según la reivindicación 1, en el que el órgano aislado se aísla de forma circulatoria in vivo o se aísla de forma circulatoria ex vivo.

5. Procedimiento, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la medición de la concentración en el perfusado del uno o más biomarcadores se realiza de forma continua durante un período de tiempo predeterminado o de manera repetida a intervalos predeterminados.

6. Procedimiento, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende, adicionalmente, la etapa de comparar la concentración medida en el perfusado del uno o más biomarcadores frente a valores de referencia, y tratar el órgano aislado mediante la adición de un componente al perfusado sobre la base de la comparación, en el que el procedimiento comprende, adicionalmente, la etapa adicional de monitorizar el efecto del tratamiento del componente sobre el órgano aislado continuando la medición de la concentración del uno o más biomarcadores en el perfusado, en el que el órgano aislado se aísla de manera circulatoria ex vivo.

7. Procedimiento, según la reivindicación 6, en el que se añade una molécula supresora de TF al perfusado cuando la concentración medida de TF supera un valor de referencia, de manera preferente, en el que la molécula supresora de TF se selecciona del grupo que consiste en: inhibidores de la HMG-CoA reductasa, inhibidores de la ciclooxigenasa (COX), paclitaxel, lisofosfatidilcolina, insulina, nicotinamida, óxido nítrico (NO)/o activador de la guanilato ciclasa soluble, hidroxiurea, piruvato de etilo, dimetilsulfóxido (DMSO), inhibidores de la enzima convertidora de angiotensina (ECA), adiponectina, ácido retinoico, ácido transretinoico, vitamina D3, PGJ2, activadores de agonistas de PPARa (WY14643 y ácido eicosatetraenoico), agonistas del receptor X del hígado, pentroxifilina, fenólicos/derivados de resveratrol, indobufeno, amiodarona, metformina, AMPc intracelular elevado y señalización de PI3K/Akt/PKB, miR-19, ARN en horquilla corta, ribozima en horquilla u ODN antisentido

8. Procedimiento, según la reivindicación 6, en el que se añade un agente antiapoptótico al perfusado cuando la concentración medida de uno o más marcadores de rotura celular supera un valor de referencia.

9. Procedimiento, según la reivindicación 6, en el que se mide la concentración del biomarcador adicional tPA en el perfusado y en el que se añade un agente fibrinolítico al perfusado cuando la concentración medida de tPA está por debajo de un valor de referencia, de manera preferente, en el que el agente fibrinolítico es estreptoquinasa o tPA.

r e f e r e n c ia s c it a d a s en l a d e s c r ip c ió n

Esta lista de referencias citada por el solicitante es únicamente para mayor comodidad del lector. No forman parte del documento de la Patente Europea. Incluso teniendo en cuenta que la compilación de las referencias se ha efectuado con gran cuidado, los errores u omisiones no pueden descartarse; la EPO se exime de toda responsabilidad al respecto.

Documentos de patentes citados en la descripción

• WO 2002035929 A