ES2842029T3 - Procedimiento y autómata para incluir una muestra de tejido en un medio de inclusión - Google Patents

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Markus Berberich
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Abstract

Procedimiento para incluir una muestra (1) de tejido en un medio (5) de inclusión, caracterizado por las siguientes etapas: a. sujetar la muestra (1) de tejido en una orientación deseada en un recipiente (2) por medio de un elemento (3) de sujeción que presiona la muestra (1) de tejido contra una base (4) del recipiente (2), b. verter en el recipiente (2) un medio (5) de inclusión líquido, en concreto parafina, que presenta un punto de gota en el intervalo de 50 grados Celsius a 60 grados Celsius y tiene una temperatura de 4 grados Celsius a 7 grados Celsius por encima del punto de gota del medio (5) de inclusión, c. enfriar la base (4) del recipiente (2) poniendo en contacto térmicamente conductor el recipiente (2) con un elemento enfriador, d. realizar un movimiento de separación mediante el cual se alejan uno de otro la muestra (1) de tejido y el elemento (3) de sujeción, donde i. o bien se inicia de manera automática el movimiento de separación inmediatamente después de transcurrido un plazo (t1) de tiempo en el intervalo de 1 segundo a 4 segundos desde el comienzo del enfriamiento, o bien, en lugar de ello, se mide con un sensor de temperatura la temperatura del medio (5) de inclusión o del recipiente (2) o del elemento (3) de sujeción y se activa de manera automática el movimiento de separación tan pronto como la temperatura medida alcanza una temperatura de activación predeterminada o predeterminable, y donde ii. las capas del medio (5) de inclusión a través de las cuales se mueve el elemento (3) de sujeción durante el movimiento de separación son todavía líquidas durante el movimiento de separación y tienen temperaturas en el intervalo de 54 grados Celsius a 64 grados Celsius, en particular 60 grados Celsius, y/o donde las porciones del medio (5) de inclusión inmediatamente adyacentes en cada caso al elemento (3) de sujeción son todavía líquidas durante el movimiento de separación y tienen una temperatura en el intervalo de 54 grados Celsius a 64 grados Celsius, en particular 60 grados Celsius.

Description

DESCRIPCIÓN
Procedimiento y autómata para incluir una muestra de tejido en un medio de inclusión
La invención se refiere a un procedimiento para incluir una muestra de tejido en un medio de inclusión.
La invención se refiere además a un autómata para llevar a cabo tal procedimiento, así como al uso de un casete para tejido, que tiene un recipiente con una base y un elemento de sujeción para, cuando se lleva a cabo tal procedimiento, sujetar en la base al menos una muestra de tejido.
Es conocido cómo procesar una muestra de tejido biológico para un examen histológico. En primer lugar, se efectúa el corte de la muestra de tejido y la introducción en un casete. A continuación se prepara la muestra para su examen microscópico mediante una variedad de tratamientos químicos. Así, primeramente se fija la muestra con un medio fijante, se elimina el agua presente en la muestra, y eventualmente se completan otras etapas de tratamiento. Pone término a este proceso de varias etapas la infiltración de un medio de infiltración, la mayoría de las veces parafina, en la muestra.
Luego se incluye la muestra, la mayoría de las veces manualmente, en un medio de inclusión, por ejemplo parafina. Para ello se coloca la muestra en una cavidad para colada, también denominada molde, y se llena la cavidad para colada con el medio de inclusión inicialmente líquido. Después, el medio de inclusión se endurece. Se obtiene como resultado un bloque de inclusión en el cual la muestra ha quedado rodeada por el medio de inclusión y fijada de manera firme en su lugar.
Después del endurecimiento del medio de inclusión, con el micrótomo se puede cortar en delgadas secciones de muestra individuales el bloque de inclusión que contiene la muestra, que en una etapa posterior se pueden teñir y luego examinarse con un microscopio. Es importante para ello que la muestra de tejido presente una determinada orientación dentro del bloque de inclusión. Esto es así, en particular, para garantizar un corte adecuado y para garantizar que la muestra de tejido pueda ser cortada a lo largo de las capas de muestra con interés para el examen microscópico.
Para poder automatizar el proceso de inclusión, es necesario que la muestra de tejido conserve su orientación deseada con respecto al recipiente de vertido durante el proceso de inclusión. Si se utiliza un elemento de sujeción que mantenga la muestra de tejido en su orientación, existe el problema de que el elemento de sujeción quede inevitablemente incluido junto con la muestra de tejido y dificulte la posterior producción de secciones de muestra y/o incluso dañe la cuchilla del micrótomo.
A partir del documento EP 2322938 B1 es conocida una máquina automatizada que está configurada para incluir muestras de tejido, las cuales deben ser dispuestas sobre soportes muy especiales, y los soportes son aptos para ser cortados mediante un micrótomo, junto con la muestra incluida. La máquina presenta varias sujeciones inamovibles, estando cada sujeción configurada para sujetar uno de los soportes especiales durante todo el proceso de inclusión. Después de haber colocado en una sujeción un soporte que contiene una muestra, se llena el soporte con un medio de inclusión dispensado desde un dispensador. A continuación, el soporte es enfriado a través de la sujeción, que también está configurada como unidad enfriadora para realizar una función adicional.
En lugar de un soporte que se puede cortar, también se puede utilizar un casete especial para tejido, como es conocido a partir del documento DE 102013204651 A1. En este documento se describe un proceso de inclusión en el cual no es necesario ningún soporte especial apto para ser cortado. En este proceso de inclusión se vierte parafina en el casete para tejido y después se apoya el casete para tejido contra una superficie de enfriamiento, a fin de que la parafina comience a enfriarse en el fondo del casete para tejido. Debido a la parafina que se enfría en esa zona, una primera capa delgada de parafina solidificada adhiere la muestra de tejido a la base. Mientras el resto de la parafina sigue estando fundida, un miembro de retracción tira de una primera superficie de acoplamiento de tejido en una dirección que se aleja de la muestra de tejido.
En concreto, a partir del documento DE 102013204651 A1 es conocido un casete para tejido destinado a sujetar una muestra de tejido, que presenta un componente de retención que tiene una primera superficie de acoplamiento de tejido y al menos un elemento de pretensado. La primera superficie de acoplamiento de tejido está unida de forma móvil al componente de retención por medio del elemento de pretensado. Una base presenta una segunda superficie de acoplamiento de tejido y está configurada de manera que se acopla al componente de retención para definir una región interna, donde la primera y la segunda superficies de acoplamiento de tejido están enfrentadas entre sí. El elemento de pretensado está configurado de manera que empuja la primera superficie de acoplamiento de tejido hacia la segunda superficie de acoplamiento de tejido, a fin de retener entre ellas la muestra de tejido en la región interna. Un componente de retracción está conectado al miembro de retención, y está configurado de manera que retrae la primera superficie de acoplamiento de tejido y comprime el elemento de pretensado para formar un hueco entre la muestra de tejido y, o bien la primera superficie de acoplamiento de tejido, o bien la segunda superficie de acoplamiento de tejido.
Con todo, el uso en la práctica de un casete para tejido de este tipo no está exento de problemas, ya que pueden aparecer toda una serie de fenómenos incomodantes que incluso pueden hacer que la muestra de tejido quede inutilizable. Por ejemplo, puede suceder que se mueva o se dañe involuntariamente la muestra de tejido durante el proceso de retracción, o incluso que la superficie de acoplamiento de tejido no pueda retraerse en absoluto, o no en un grado suficiente.
Por tanto, la misión de la presente invención es proporcionar un procedimiento que se pueda llevar a cabo de manera automatizada y que permita producir de forma fiable un bloque de inclusión en el cual una muestra de tejido tenga una orientación predefinida.
La misión se logra mediante un procedimiento que se caracteriza por las siguientes etapas:
a. sujetar la muestra de tejido en una orientación deseada en un recipiente por medio de un elemento de sujeción que presiona la muestra de tejido contra una base del recipiente,
b. verter en el recipiente un medio de inclusión líquido, en concreto parafina, que presenta un punto de gota en el intervalo de 50 grados Celsius a 60 grados Celsius y tiene una temperatura de 4 grados Celsius a 7 grados Celsius por encima del punto de gota del medio de inclusión,
c. enfriar la base del recipiente poniendo en contacto térmicamente conductor el recipiente (2) con un elemento enfriador,
d. realizar un movimiento de separación mediante el cual se alejan uno de otro la muestra de tejido y el elemento de sujeción, donde
i. o bien se inicia de manera automática el movimiento de separación inmediatamente después de transcurrido un plazo (t1) de tiempo en el intervalo de 1 segundo a 4 segundos desde el comienzo del enfriamiento, o bien, en lugar de ello, se mide con un sensor de temperatura la temperatura del medio de inclusión o del recipiente o del elemento de sujeción y se activa de manera automática el movimiento de separación tan pronto como la temperatura medida alcanza una temperatura de activación predeterminada o predeterminable, y donde ii. las capas del medio de inclusión a través de las cuales se mueve el elemento de sujeción durante el movimiento de separación son todavía líquidas durante el movimiento de separación y tienen temperaturas en el intervalo de 54 grados Celsius a 64 grados Celsius, en particular 60 grados Celsius, y/o donde las porciones del medio de inclusión inmediatamente adyacentes en cada caso al elemento de sujeción son todavía líquidas durante el movimiento de separación y tienen una temperatura en el intervalo de 54 grados Celsius a 64 grados Celsius, en particular 60 grados Celsius.
La misión se logra también mediante un autómata según la reivindicación 10.
La invención tiene la ventaja muy particular de que, por un lado, siempre está asegurada de forma fiable una sujeción de la muestra de tejido en su orientación con respecto al recipiente y, por otro lado, se garantiza al mismo tiempo que se pueda retirar el elemento de sujeción sin quedar atascado en el medio de inclusión y sin cambiar de posición la muestra de tejido ni mucho menos dañarla.
De acuerdo con la invención, se ha reconocido que las porciones del medio de inclusión adyacentes a la base enfriada ya están lo suficientemente endurecidas como para mantener la muestra de tejido en su posición y orientación cuando la temperatura del medio de inclusión en la ubicación del elemento de sujeción está todavía en el intervalo de 54 grados Celsius a 64 grados Celsius, en particular en 60 grados Celsius, de modo que se puede retirar el elemento de sujeción de la muestra de tejido. En este intervalo de temperatura, el medio de inclusión sigue siendo suficientemente líquido como para poder retirar libremente el elemento de sujeción y, en particular, sin influir o alterar la posición u orientación de la muestra de tejido ni influir negativamente en la calidad del proceso de endurecimiento. En particular, se puede prever ventajosamente que el medio de inclusión tenga una temperatura media en el intervalo de 54 grados Celsius a 64 grados Celsius, en particular 60 grados Celsius, mientras se realiza el movimiento de separación.
Para llevar a cabo las etapas de procedimiento individuales a las temperaturas arriba mencionadas, cuando se utiliza parafina como medio de inclusión se prevé en particular que la parafina presente un punto de gota en el intervalo de 50 grados Celsius a 60 grados Celsius. Si se utilizan medios de inclusión con otros puntos de gota, se pueden ajustar en consecuencia las temperaturas a las que se llevan a cabo las etapas de procedimiento individuales. En particular, se puede prever ventajosamente que el movimiento de separación se active, en particular de manera automática, tan pronto como la capa del medio de inclusión inmediatamente adyacente a la base haya alcanzado una temperatura de 52 grados Celsius. Según la invención, se ha reconocido que esto sucede cuando la temperatura del medio de inclusión en la ubicación del elemento de sujeción se sitúa en el intervalo de 54 grados Celsius a 64 grados Celsius, en particular en 60 grados Celsius.
Una vez que se ha completado el movimiento de separación, se deja que el medio de inclusión se continúe enfriando hasta que se haya endurecido por completo y se pueda extraer del recipiente el bloque de inclusión resultante. En una realización particularmente ventajosa, el elemento de sujeción no se retira por completo del medio de inclusión. Antes bien, el movimiento de separación puede finalizar ventajosamente mientras el elemento de sujeción se encuentra aún dentro del medio de inclusión. De este modo, el elemento de sujeción queda igualmente incluido. Esta realización tiene la ventaja muy particular de que el elemento de sujeción confiere una estabilidad mecánica adicional al bloque de inclusión originado por el enfriamiento del medio de inclusión. Se evita así, ventajosamente, que el bloque de inclusión se deforme sin querer durante el estiramiento posterior y/o al cortar con un micrótomo. También es posible utilizar para crear tensión salientes conectados al elemento de sujeción, que sobresalen del bloque de inclusión. Así, aunque el elemento de sujeción haya sido retirado de la muestra de tejido por el movimiento de separación, ventajosamente se asegura al mismo tiempo, sin embargo, que no hay necesidad de realizar cortes en el elemento de sujeción estabilizador cuando se obtienen secciones de tejido.
La invención no se limita a incluir una única muestra de tejido cada vez. Antes bien, es posible asimismo incluir simultáneamente varias muestras de tejido en el mismo recipiente de la manera descrita. Cuando en el marco de la presente solicitud se habla de incluir una muestra de tejido, ello sirve exclusivamente para explicar de manera más sencilla la invención, sin que deba asociarse con una restricción.
Por ejemplo, el medio de inclusión puede ser parafina o, de manera particularmente predominante, contener parafina.
En una realización muy particularmente ventajosa del procedimiento, el medio de inclusión, que consiste en parafina con un punto de gota en el intervalo de 50 grados Celsius a 60 grados Celsius, tiene, cuando es vertido, una temperatura superior a 64 grados Celsius. De este modo está asegurado que el medio de inclusión llene todo el espacio disponible dentro del recipiente antes de enfriarse. Resulta particularmente ventajosa una temperatura de vertido en el intervalo de 65 a 67 grados Celsius, en particular una temperatura de 66 grados Celsius. Con esta temperatura está asegurado que la muestra de tejido quede rodeada, de manera fiable y por todos lados, por el medio de inclusión. Además, el tiempo necesario para que el medio de inclusión se endurezca en la zona de la base y después para el endurecimiento completo en las restantes zonas es particularmente corto. De este modo se consigue una elevada productividad, es decir, se puede realizar la inclusión de un número particularmente grande de muestras de tejido por unidad de tiempo, por ejemplo mediante un autómata.
El punto de gota puede diferir para distintos tipos de medios de inclusión. Existen, por ejemplo, medios de inclusión que tienen un punto de gota en el intervalo de 52 grados Celsius a 58 grados Celsius, como se describe, por ejemplo, en el documento DE 102009035019 A1.
Conforme a la invención, se prevé que el medio de inclusión tenga, cuando es vertido, una temperatura que esté de 4 grados Celsius a 7 grados Celsius por encima del punto de gota del medio de inclusión. En particular, se puede prever ventajosamente que el medio de inclusión tenga, cuando es vertido, una temperatura que esté de 5 a 7 grados Celsius por encima del punto de gota del medio de inclusión y/o que esté 6 grados Celsius por encima del punto de gota del medio de inclusión. Por ejemplo, un medio de inclusión que tenga un punto de gota de 55 grados Celsius, por ejemplo, puede ser vertido ventajosamente, en particular, a una temperatura de 61 grados Celsius. En lo que sigue se explica cómo, y en particular cuándo, se inicia el movimiento de separación.
Por ejemplo, como se ha mencionado más arriba, puede estar previsto que el movimiento de separación se active, en particular de manera automática, cuando se alcanza una temperatura de activación predeterminada o predeterminable en el medio de inclusión o en el recipiente o en el elemento de sujeción. Para ello, se mide directamente la temperatura con un sensor de temperatura. Como alternativa, también es posible deducir la temperatura a través de otro parámetro, para comprobar si se ha alcanzado la temperatura de activación. En particular, es posible inferir la temperatura del medio de inclusión o del recipiente o del elemento de sujeción a partir del tiempo transcurrido desde el inicio del proceso de enfriamiento por la base. En particular, se puede realizar una medición de calibración antes de llevar a cabo el procedimiento, con el fin de determinar el plazo de tiempo al cabo del cual se llega a la temperatura de activación. La magnitud de dicho plazo de tiempo puede depender, en particular, del tipo y tamaño del recipiente y del tipo de medio de inclusión.
Ventajosamente, el elemento de sujeción puede estar configurado, por ejemplo, a modo de malla. Un elemento de sujeción configurado de esta manera tiene la ventaja de que el medio de inclusión puede fluir a través de las aberturas de la malla durante el movimiento de separación. De esta manera se consigue ventajosamente que durante el movimiento de separación se eviten en gran medida turbulencias en el medio de inclusión, que podrían influir negativamente en la orientación de la muestra de tejido. Además, esta configuración tiene la ventaja adicional de que se opone menos resistencia al movimiento de separación y se reduce el riesgo de que el elemento de sujeción quede atascado.
El elemento de sujeción se puede mover de las formas más dispares para realizar el movimiento de separación. Por ejemplo, es posible ejercer mediante un imán una fuerza sobre el elemento de sujeción. Para ello, el elemento de sujeción puede estar constituido, al menos en parte, por un material magnético. También es posible mover horizontal y/o verticalmente el elemento de sujeción por medio de una pinza. La pinza puede estar configurada, por ejemplo, a modo de gancho que engancha en el elemento de sujeción para realizar el movimiento de separación. Como ya se ha mencionado, también puede estar previsto que, para realizar el movimiento de separación, el elemento de sujeción sea movido por un mecanismo de sujeción que posea un componente con memoria de forma, por ejemplo a base de polímeros con memoria.
Está previsto, conforme a la invención, utilizar como base de tiempo el instante del comienzo el enfriamiento, y que el movimiento de separación se inicie inmediatamente después de transcurrido un plazo de tiempo predeterminado o predeterminable desde el comienzo del enfriamiento, y/o que el movimiento de separación comience de manera automática inmediatamente después de transcurrido un plazo de tiempo predeterminado o predeterminable. Conforme a la invención, se prevé que el intervalo de tiempo entre el inicio del enfriamiento y el inicio del movimiento de separación se sitúe en el intervalo de 1 segundo a 4 segundos, en particular en el intervalo de 2 segundos a 3 segundos.
En particular, para garantizar que el elemento de sujeción no quede detenido de manera indeseada en el medio de inclusión que se está enfriando y solidificando cada vez más, antes de que finalice el movimiento de separación, el movimiento de separación debe discurrir dentro de una ventana de tiempo predeterminada o predeterminable, y/o durar un plazo de tiempo predeterminado o predeterminable. Se obtienen resultados particularmente buenos si la ventana de tiempo tiene una amplitud de 17 a 20 segundos y/o si el plazo de tiempo dura de 17 a 20 segundos. El enfriamiento de la base del recipiente se efectúa poniendo el recipiente en contacto térmicamente conductor con un elemento enfriador. El elemento enfriador puede ser, por ejemplo, una placa enfriadora sobre la que se coloca el recipiente.
Para llevar a cabo el procedimiento es posible, por ejemplo, verter primeramente el medio de inclusión en el recipiente y acto seguido enfriar la base del recipiente, por ejemplo poniéndolo en contacto con una placa enfriadora. En una realización de este tipo, se puede utilizar el momento de la puesta en contacto como punto de partida del plazo de tiempo transcurrido el cual se inicia el movimiento de separación. Como alternativa, también es posible enfriar primeramente el recipiente por la base, por ejemplo poniéndolo en contacto con una placa enfriadora, y luego verter el medio de inclusión. En este caso, el momento del llenado, en particular el instante en el que finaliza el proceso de llenado, se puede utilizar como punto de partida del plazo de tiempo transcurrido el cual se inicia el movimiento de separación.
En una realización muy particularmente ventajosa, se enfría el recipiente exclusivamente por la base. Tal realización tiene la ventaja muy particular de que se evitan eficazmente las grietas por tensión dentro del medio de inclusión enfriado.
Como ya se ha mencionado, el procedimiento conforme a la invención se puede utilizar en particular en un procesamiento automatizado de muestras de tejido. En particular, en ese caso es posible incluir simultáneamente un gran número de muestras de tejido que estén contenidas en un gran número de recipientes, en los cuales las muestras de tejido son sujetadas en su respectiva orientación deseada. Así, por ejemplo, se pueden sujetar en cada caso varios recipientes en una sujeción común respectiva, por ejemplo a modo de matriz y de manera coplanar en un plano. Se puede colocar fácilmente una sujeción de este tipo sobre una placa enfriadora, por ejemplo, para enfriar simultáneamente los múltiples recipientes respectivamente por su base. No obstante, también es posible, por ejemplo, utilizar una sujeción en la cual los recipientes estén dispuestos en disposición apilada. En una realización semejante podrían estar previstos, por ejemplo, varios dedos enfriadores que llegasen a los espacios intermedios entre los recipientes, con el fin de enfriar los recipientes individuales desde abajo, por su base. El uso de una sujeción para varios recipientes tiene la ventaja de que un autómata puede transportar simultáneamente varios recipientes asiéndolos de la sujeción común, llenarlos con un medio de inclusión y enfriarlos, lo que eleva la productividad.
En particular, el procedimiento conforme a la invención también puede ser parte de un procedimiento de orden superior para procesar una muestra de tejido o varias muestras de tejido en el cual, además de una inclusión, se llevan a cabo también, de manera previa o con posterioridad, otras etapas de procedimiento. En particular, estos otras etapas de procedimiento pueden consistir en, antes de la inclusión, fijar la muestra de tejido con al menos un agente fijante y/o infiltrar en la muestra de tejido un medio de infiltración, en particular parafina. En particular, se puede prever aquí que los otras etapas de procedimiento también se lleven a cabo después de que la muestra de tejido haya sido dispuesta con su orientación deseada en el recipiente. La muestra de tejido permanece así en el mismo recipiente durante la inclusión y durante al menos una etapa previo de procedimiento adicional, hasta que queda incluida por completo.
Resulta particularmente ventajoso para llevar a cabo el procedimiento conforme a la invención el uso de un casete para tejido, que posee un recipiente con una base y un elemento de sujeción para sujetar en la base al menos una muestra de tejido.
El objeto de la invención está representado esquemáticamente y a modo de ejemplo en los dibujos, y se describe a continuación por medio de las figuras, en donde a elementos que son iguales o actúan de igual forma se les han asignado en su mayoría el mismo símbolo de referencia. Se muestran:
en las Figuras 1 a 5, una ilustración de las etapas según un ejemplo de realización del procedimiento conforme a la invención, y
en la Figura 6, una ilustración del curso temporal de temperatura de la temperatura de un medio de inclusión vertido en un recipiente, y una ilustración de los plazos de tiempo relevantes cuando se lleva a cabo un ejemplo de realización del procedimiento conforme a la invención.
La Figura 1 ilustra la situación en una primera etapa para llevar a cabo un ejemplo de realización del procedimiento conforme a la invención. Una muestra 1 de tejido es mantenida en una orientación deseada en un recipiente 2 por medio de un elemento 3 de sujeción que presiona la muestra 1 de tejido contra una base 4 del recipiente 2. El elemento 3 de sujeción puede estar configurado, por ejemplo, a modo de malla accionada por resorte. Al oprimir la muestra 1 de tejido entre el elemento 3 de sujeción y la base 4 se asegura que la muestra 1 de tejido conserve su orientación deseada.
En una etapa posterior, se vierte en el recipiente un medio 5 de inclusión líquido, que puede ser en particular parafina y que tiene una temperatura superior a 64 grados Celsius, en particular en el intervalo de 65 grados Celsius a 67 grados Celsius, o una temperatura de 66 grados Celsius, lo que se ilustra en la Figura 2. Durante esta etapa, el elemento 3 de sujeción sigue sujetando la muestra 1 de tejido en su posición y en la orientación deseada.
En una etapa posterior se efectúa un enfriamiento de la base 4 del recipiente 2 al poner la base 4 en contacto con un elemento enfriador 6, lo que se ilustra en la Figura 3. En este ejemplo, el elemento enfriador 6 está configurado como una placa enfriadora sobre la cual se pone el recipiente 2. También durante esta etapa el elemento 3 de sujeción sigue sujetando la muestra 1 de tejido en su posición y en la orientación deseada.
Tan pronto como la capa del medio 5 de inclusión en la que se encuentra el elemento 3 de sujeción alcanza una temperatura en el intervalo de 54 grados Celsius a 64 grados Celsius, en particular 60 grados Celsius, se inicia un movimiento de separación, mediante el cual se alejan uno de otro la muestra 1 de tejido y el elemento 3 de sujeción, lo que está representado en la Figura 4. En esta situación, el medio 5 de inclusión ya se ha enfriado, y por lo tanto endurecido, suficientemente en la zona de la base como para retener la muestra 1 de tejido en su posición y su orientación, de manera que se hace innecesaria su sujeción por el elemento 3 de sujeción. Para asegurar que el elemento 3 de sujeción no quede atascado, antes de que se complete el movimiento de separación, en el medio 5 de inclusión que se está enfriando y solidificando cada vez más, el movimiento de separación se completa en el transcurso de una ventana de tiempo predeterminada de 17 a 20 segundos.
A continuación, el medio 5 de inclusión puede continuar enfriándose hasta que esté completamente endurecido, y se puede retirar del recipiente 2 el bloque de inclusión resultante, con la muestra 1 de tejido incluida.
La Figura 6 muestra el curso temporal de temperatura de la temperatura del medio 5 de inclusión, que inicialmente tiene una temperatura de 66 grados Celsius, en la zona del elemento 3 de sujeción tras el comienzo (t = 0) del enfriamiento de la base 4, e ilustra los tramos temporales relevantes cuando se lleva a cabo un ejemplo de realización del procedimiento conforme a la invención.
En este ejemplo de realización, el movimiento de separación comienza inmediatamente después de transcurrido un primer plazo t1 de tiempo después del comienzo (t = 0) del enfriamiento. Se obtienen resultados particularmente buenos cuando el primer plazo t1 de tiempo se sitúa en el intervalo de 1 segundo a 4 segundos o en el intervalo de 2 segundos a 3 segundos.
En particular, para asegurar que el elemento 3 de retención no quede retenido de manera indeseada en el medio 5 de inclusión, que se está enfriando y solidificando cada vez más, antes de que se haya completado el movimiento de separación, el movimiento de separación debe tener lugar y completarse dentro de un segundo espacio t2 de tiempo que sigue inmediatamente al primer espacio t1 de tiempo. Se obtienen resultados particularmente buenos si el segundo espacio t2 de tiempo tiene una duración de 17 a 20 segundos.
Lista de símbolos de referencia:
1 muestra de tejido
2 recipiente
3 elemento de sujeción
4 base
5 medio de inclusión
6 elemento enfriador
t1 primer espacio de tiempo
t2 segundo espacio de tiempo

Claims (9)

REIVINDICACIONES
1. Procedimiento para incluir una muestra (1) de tejido en un medio (5) de inclusión, caracterizado por las siguientes etapas:
a. sujetar la muestra (1) de tejido en una orientación deseada en un recipiente (2) por medio de un elemento (3) de sujeción que presiona la muestra (1) de tejido contra una base (4) del recipiente (2),
b. verter en el recipiente (2) un medio (5) de inclusión líquido, en concreto parafina, que presenta un punto de gota en el intervalo de 50 grados Celsius a 60 grados Celsius y tiene una temperatura de 4 grados Celsius a 7 grados Celsius por encima del punto de gota del medio (5) de inclusión,
c. enfriar la base (4) del recipiente (2) poniendo en contacto térmicamente conductor el recipiente (2) con un elemento enfriador,
d. realizar un movimiento de separación mediante el cual se alejan uno de otro la muestra (1) de tejido y el elemento (3) de sujeción, donde
i. o bien se inicia de manera automática el movimiento de separación inmediatamente después de transcurrido un plazo (t1) de tiempo en el intervalo de 1 segundo a 4 segundos desde el comienzo del enfriamiento, o bien, en lugar de ello, se mide con un sensor de temperatura la temperatura del medio (5) de inclusión o del recipiente (2) o del elemento (3) de sujeción y se activa de manera automática el movimiento de separación tan pronto como la temperatura medida alcanza una temperatura de activación predeterminada o predeterminable, y donde ii. las capas del medio (5) de inclusión a través de las cuales se mueve el elemento (3) de sujeción durante el movimiento de separación son todavía líquidas durante el movimiento de separación y tienen temperaturas en el intervalo de 54 grados Celsius a 64 grados Celsius, en particular 60 grados Celsius, y/o donde las porciones del medio (5) de inclusión inmediatamente adyacentes en cada caso al elemento (3) de sujeción son todavía líquidas durante el movimiento de separación y tienen una temperatura en el intervalo de 54 grados Celsius a 64 grados Celsius, en particular 60 grados Celsius.
2. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado por que el medio (5) de inclusión tiene una temperatura media en el intervalo de 54 grados Celsius a 64 grados Celsius, en particular 60 grados Celsius, mientras se realiza el movimiento de separación.
3. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 2, caracterizado por que el medio (5) de inclusión tiene, cuando es vertido, una temperatura superior a 64 grados Celsius y/o una temperatura en el intervalo de 65 a 67 grados Celsius y/o una temperatura de 66 grados Celsius.
4. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado por que
a. el movimiento de separación discurre dentro de una ventana de tiempo predeterminada o predeterminable y/o dura un plazo (t2) de tiempo predeterminado o predeterminable, y/o por que
b. el movimiento de separación discurre dentro de una ventana de tiempo predeterminada o predeterminable y/o dura un plazo (t2) de tiempo predeterminado o predeterminable, donde la ventana de tiempo tiene una amplitud de 17 a 20 segundos y/o el plazo (t2) de tiempo dura de 17 a 20 segundos.
5. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado por que se enfría el recipiente (2) exclusivamente por la base (4).
6. Procedimiento según una las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado por que el movimiento de separación finaliza mientras el elemento de sujeción se encuentra aún dentro del medio de inclusión y/o por que el elemento de sujeción queda igualmente incluido junto con la muestra de tejido.
7. Procedimiento para procesar una muestra (1) de tejido, en el cual se introduce la muestra (1) de tejido en un recipiente (2) y, mientras se encuentra en el recipiente (2), se fija con al menos un agente fijante y/o se infiltra un medio de infiltración, en particular parafina, caracterizado por que la muestra (1) de tejido permanece en el recipiente (2) después de la fijación y/o la infiltración, y es incluida en un bloque mediante un procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 6.
8. Uso de un casete para tejido que tiene un recipiente (2) con una base (4) y un elemento de sujeción para sujetar al menos una muestra (1) de tejido en la base (4), cuando se lleva a cabo un procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 7.
9. Autómata para llevar a cabo un procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 7, que comprende a. un elemento enfriador (6) para enfriar la base (4) del recipiente y
b. medios para realizar de manera automatizada el movimiento de separación según la etapa d de la reivindicación 1.
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