ES2808677T3 - Cepas termoestables, productos y métodos de las mismas - Google Patents

Cepas termoestables, productos y métodos de las mismas Download PDF

Info

Publication number
ES2808677T3
ES2808677T3 ES15846869T ES15846869T ES2808677T3 ES 2808677 T3 ES2808677 T3 ES 2808677T3 ES 15846869 T ES15846869 T ES 15846869T ES 15846869 T ES15846869 T ES 15846869T ES 2808677 T3 ES2808677 T3 ES 2808677T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
lactobacillus
present disclosure
microorganism
strains
lactobacillus acidophilus
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES15846869T
Other languages
English (en)
Inventor
Desiraju Aditya
Desiraju Shrilakshmi
Sharieff Irfanulla
Prakash Abhilash
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Triphase Pharmaceuticals Pvt Ltd
Original Assignee
Triphase Pharmaceuticals Pvt Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Triphase Pharmaceuticals Pvt Ltd filed Critical Triphase Pharmaceuticals Pvt Ltd
Application granted granted Critical
Publication of ES2808677T3 publication Critical patent/ES2808677T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A21—BAKING; EDIBLE DOUGHS
    • A21D—TREATMENT, e.g. PRESERVATION, OF FLOUR OR DOUGH, e.g. BY ADDITION OF MATERIALS; BAKING; BAKERY PRODUCTS; PRESERVATION THEREOF
    • A21D8/00—Methods for preparing or baking dough
    • A21D8/02—Methods for preparing dough; Treating dough prior to baking
    • A21D8/04—Methods for preparing dough; Treating dough prior to baking treating dough with microorganisms or enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23G—COCOA; COCOA PRODUCTS, e.g. CHOCOLATE; SUBSTITUTES FOR COCOA OR COCOA PRODUCTS; CONFECTIONERY; CHEWING GUM; ICE-CREAM; PREPARATION THEREOF
    • A23G1/00—Cocoa; Cocoa products, e.g. chocolate; Substitutes therefor
    • A23G1/30—Cocoa products, e.g. chocolate; Substitutes therefor
    • A23G1/32—Cocoa products, e.g. chocolate; Substitutes therefor characterised by the composition containing organic or inorganic compounds
    • A23G1/42—Cocoa products, e.g. chocolate; Substitutes therefor characterised by the composition containing organic or inorganic compounds containing microorganisms or enzymes; containing paramedical or dietetical agents, e.g. vitamins
    • A23G1/423—Cocoa products, e.g. chocolate; Substitutes therefor characterised by the composition containing organic or inorganic compounds containing microorganisms or enzymes; containing paramedical or dietetical agents, e.g. vitamins containing microorganisms, enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L23/00—Soups; Sauces; Preparation or treatment thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23F—COFFEE; TEA; THEIR SUBSTITUTES; MANUFACTURE, PREPARATION, OR INFUSION THEREOF
    • A23F3/00—Tea; Tea substitutes; Preparations thereof
    • A23F3/16—Tea extraction; Tea extracts; Treating tea extract; Making instant tea
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23G—COCOA; COCOA PRODUCTS, e.g. CHOCOLATE; SUBSTITUTES FOR COCOA OR COCOA PRODUCTS; CONFECTIONERY; CHEWING GUM; ICE-CREAM; PREPARATION THEREOF
    • A23G3/00—Sweetmeats; Confectionery; Marzipan; Coated or filled products
    • A23G3/34—Sweetmeats, confectionery or marzipan; Processes for the preparation thereof
    • A23G3/36—Sweetmeats, confectionery or marzipan; Processes for the preparation thereof characterised by the composition containing organic or inorganic compounds
    • A23G3/364—Sweetmeats, confectionery or marzipan; Processes for the preparation thereof characterised by the composition containing organic or inorganic compounds containing microorganisms or enzymes; containing paramedical or dietetical agents, e.g. vitamins
    • A23G3/366—Sweetmeats, confectionery or marzipan; Processes for the preparation thereof characterised by the composition containing organic or inorganic compounds containing microorganisms or enzymes; containing paramedical or dietetical agents, e.g. vitamins containing microorganisms, enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/11—Lactobacillus
    • A23V2400/113—Acidophilus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/11—Lactobacillus
    • A23V2400/169—Plantarum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K2035/11—Medicinal preparations comprising living procariotic cells
    • A61K2035/115—Probiotics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/225—Lactobacillus
    • C12R2001/23—Lactobacillus acidophilus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/225—Lactobacillus
    • C12R2001/25—Lactobacillus plantarum

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)

Abstract

Un producto alimenticio que comprende un microorganismo termoestable de Lactobacillus, en donde el microorganismo termoestable se selecciona del grupo que consiste en Lactobacillus plantarum con ATCC SD Nº 6863 y Lactobacillus acidophilus con ATCC SD Nº 6864.

Description

DESCRIPCIÓN
Cepas termoestables, productos y métodos de las mismas
Campo técnico
La presente divulgación se refiere al campo de la microbiología y la biotecnología industrial. En particular, la presente divulgación se refiere a cepa(s) termoestable(s) o estable(s) al calor de microorganismos, productos alimenticios probióticos que comprenden cepa(s) termoestable(s), método de preparación de productos alimenticios que comprenden cepa(s) termoestable(s) y método de tratamiento de diversos trastornos usando las cepas termoestables.
Antecedentes y estado de la técnica de la divulgación
El género Lactobacillus es un grupo variado de bacterias ácido lácticas que tiene importantes implicaciones en la fermentación de alimentos y se encuentra comúnmente en productos alimenticios fermentados como el yogurt. La capacidad de estas bacterias para colonizar una variedad de hábitats es una consecuencia directa de la amplia versatilidad metabólica de este género de bacterias, es decir, Lactobacillus.
Se conoce que la presencia de especies de Lactobacillus en el intestino tiene las siguientes ventajas:
• La abundante producción de ácido láctico en el intestino reduce el pH del intestino para prevenir bacterias tales como Clostridium, Salmonella, Shigella, etc.
• Disminuye la producción de una variedad de metabolitos tóxicos o carcinogénicos.
• Ayuda en la absorción de minerales, especialmente calcio, debido a la elevada acidez intestinal.
• Ayuda en la producción de enzimas p- D- galactosidasa que degradan la lactosa.
• Producen un amplio intervalo de sustancias antimicrobianas, tales como - Acidofilina, bacteriocina, etc., para controlar bacterias patógenas.
• Producción de vitaminas (especialmente vitamina B y vitamina K).
Así, los Lactobacilli encuentran aplicación en la biotecnología de los alimentos y los piensos, que incluye su uso como probióticos, iniciadores lácteos, inoculantes para ensilado y fábricas de células microbianas. Se incorporan en productos alimenticios nutracéuticos para tratar trastornos relacionados con el intestino como infecciones por cólico, inflamación de colon, infecciones urinarias y genitales. Por tanto, existe una gran demanda de suplementos alimenticios de lactobacilos en el mercado. Además, dichos productos alimenticios pueden ser un beneficio para las personas que padecen intolerancia a la lactosa, evitando el consumo de leche y productos lácteos. Los artículos / productos alimenticios que contienen Lactobacilli se han producido, en forma de bebidas probióticas, cuajada probiótica, etc. Los probióticos incorporados en los alimentos tienen diversas ventajas cuando se comparan con el consumo de probióticos por separado:
• Efecto sinérgico entre componentes de alimentos y cultivos probióticos.
• La amortiguación natural del ácido estomacal por el alimento también potencia la estabilidad de los probióticos consumidos.
• Los productos lácteos que contienen probióticos proporcionan varios nutrientes de alta calidad que incluyen calcio, proteína, péptidos bioactivos, esfingolípidos y ácidos linoleicos conjugados.
• La incorporación de alimentos que contienen probióticos en elecciones diarias de alimentos puede llegar a ser un hábito del estilo de vida.
El mayor inconveniente asociado a la fabricación de productos alimenticios que contienen Lactobacilli es el problema de la sensibilidad al calor/térmica de Lactobacilli, es decir, estas bacterias pierden su viabilidad a altas temperaturas. Durante el proceso de fabricación de diversos productos alimenticios, a medida que sube la temperatura, los Lactobacilli no son capaces de sobrevivir y mueren en el proceso. Puesto que se conoce bien que los probióticos tienen que estar vivos cuando se administran, una de las principales preocupaciones reside en la 'viabilidad' y la 'reproducibilidad' de Lactobacilli a gran escala de los resultados observados, así como la viabilidad y la estabilidad de Lactobacilli durante el uso y el almacenamiento y finalmente la capacidad para sobrevivir en el ecosistema intestinal.
Por tanto, solo los productos que contienen organismos vivos que se mostró en estudios humanos reproducibles que conferían un beneficio para la salud pueden afirmar en realidad que son un probiótico. La correcta definición de beneficio para la salud, respaldado por pruebas científicas, es un elemento fuerte para la apropiada identificación y evaluación del efecto de un probiótico. Este aspecto representa un reto importante para las investigaciones científicas e industriales debido a que surgen varias dificultades, tales como la variabilidad en el sitio para el uso de probióticos (oral, vaginal, intestinal) y el modo de administración.
Otro inconveniente asociado a dichos productos alimenticios probióticos es que necesitan ser transportados y conservados eficazmente para mantener la viabilidad de estos probióticos que se han incorporado en los productos alimenticios. Un método común para conservar los productos alimenticios probióticos es el almacenamiento en frío, que es un proceso caro y complicado. Las cadenas del frío son comunes en las industrias alimentarias y farmacéuticas y también en algunos envíos químicos. Un intervalo de temperatura común para una cadena del frío en las industrias farmacéuticas es 2 °C a 8 °C, pero las tolerancias de temperatura específica (y tiempo a esa temperatura) dependen del producto real que se envía. Única para los cargamentos de productos frescos, la cadena del frío requiere además mantener parámetros ambientales específicos del producto que incluyen niveles de calidad del aire (dióxido de carbono, oxígeno, humedad y otros), lo que hace que esta sea la cadena de frío más complicada de operar.
Para vencer los inconvenientes del estado de la técnica, la presente divulgación proporciona cepa(s) termoestable(s) y alimentos o productos alimenticios que comprenden la(s) cepa(s) termoestable(s) que tratan y gestionan los problemas asociados al intestino e inmunitarios, eliminando simultáneamente la necesidad de almacenamiento en frío, que es un enorme ahorro de costes para la cadena de suministro.
Declaración de la divulgación
Por consiguiente, la presente divulgación se refiere a un producto alimenticio que comprende un microorganismo termostable de Lactobacillus, en donde el microorganismo termostable se selecciona del grupo que consiste en Lactobacillus plantarum con ATCC SD N° 6863 y Lactobacillus acidophilus con ATCC SD N° 6864; un método de preparación de un producto alimenticio, comprendiendo dicho método el acto de combinar una cepa termostable seleccionada del grupo que consiste en Lactobacillus plantarum con ATCC SD N° 6863 y Lactobacillus acidophilus con ATCC SD N° 6864, con un componente del producto alimenticio durante o después de la preparación del producto alimenticio; un microorganismo termostable de Lactobacillus seleccionado del grupo que consiste en Lactobacillus plantarum con ATCC SD N° 6863 y Lactobacillus acidophilus con ATCC s D N° 6864; un microorganismo termoestable para su uso en el tratamiento de un trastorno en un sujeto, en donde el microorganismo se selecciona del grupo que consiste en Lactobacillus plantarum con ATCc SD N° 6863 y Lactobacillus acidophilus con ATCC SD N° 6864.
Breve descripción de las figuras adjuntas
Con el fin de que la divulgación pueda ser fácilmente entendida y puesta en efecto práctico, ahora se hará referencia a realizaciones a modo de ejemplo como se ilustra con referencia a las figuras adjuntas. Las figuras junto con una descripción detallada a continuación, se incorporan y forman parte de la memoria descriptiva, y sirven para ilustrar adicionalmente las realizaciones y explicar diversos principios y ventajas, según la presente divulgación, en donde:
La Figura 1 representa el diagrama de flujo para la fabricación del alimento probiótico de la presente divulgación.
La Figura 2A representa la estabilidad de la cepa termostable Lactobacillus acidophilus (TSP-La1) a 70 °C durante diferentes intervalos de tiempo en gominolas.
La Figura 2B representa la estabilidad de la cepa termostable Lactobacillus acidophilus (TSP-La1) a 55 °C para diferentes intervalos de tiempo en chocolates.
La Figura 3 representa la estabilidad de la cepa termostable Lactobacillus acidophilus TSP-La1 a 55 °C durante el periodo inicial y después de 10 minutos en sopa.
Las Figuras 4A, 4B y 4C representan la estabilidad de la cepa termostable Lactobacillus plantarum TSP-Lp1 a 90 °C, 140 °C y 160 °C.
Las Figuras 4D, 4E y 4F representan la estabilidad de la cepa termostable Lactobacillus acidophilus TSP-La1 a 90 °C, 140 °C y 160 °C.
Las Figuras 5A y 5B representan la estabilidad de la cepa termostable Lactobacillus acidophilus TSP-La1 y Lactobacillus plantarum TSP-Lp1 a 160 °C durante el periodo inicial y después de 15 minutos en muffins. La Figura 6 representa la estabilidad de la cepa termostable Lactobacillus acidophilus TSP-La1 a 240 °C durante el periodo inicial y después de 10 minutos en pan.
Las Figuras 7A y 7B representan la viabilidad de la cepa termostable Lactobacillus acidophilus TSP-La1 en una muestra de té Twining a 50 °C y 60 °C, respectivamente, durante un periodo de tiempo variado.
La Figura 8 representa el análisis cuantitativo de tolerancia a los ácidos para la cepa termostable Lactobacillus acidophilus TSP-La1 a diferentes pH.
La Figura 9 representa el análisis cuantitativo de tolerancia a los ácidos para Lactobacillus plantarum TSP-Lp1 a diferentes pH.
La Figura 10 representa la tolerancia a la bilis de la cepa termostable Lactobacillus acidophilus TSP-La1 a diferentes valores de concentración de bilis e intervalos de tiempo.
La Figura 11 representa la tolerancia a la bilis de la cepa termostable Lactobacillus plantarum TSP- Lp1 a diferentes valores de concentración de bilis e intervalos de tiempo.
Las Figuras 12A y 12B representa la estabilidad de Lactobacillus acidophilus TSP-La1 y Lactobacillus plantarum TSP-Lp1 en galleta a 180 °C durante 12 minutos.
La Figura 13 representa los resultados de la prueba de fermentación de hidratos de carbono con cepas termoestables de la presente divulgación.
Descripción detallada de la divulgación
La presente divulgación se refiere a un producto alimenticio que comprende un microorganismo termoestable de Lactobacillus, en donde el microorganismo termoestable se selecciona del grupo que consiste en Lactobacillus plantarum con ATCC SD N° 6863 y Lactobacillus acidophilus con ATCC SD N° 6864.
La presente divulgación también se refiere a un método de preparación de un producto alimenticio, comprendiendo dicho método el acto de combinar una cepa termostable seleccionada del grupo que consiste en Lactobacillus plantarum con ATCC SD N° 6863 y Lactobacillus acidophilus con ATCC SD N° 6864; con un componente del producto alimenticio durante o después de la preparación del producto alimenticio.
En una realización de la presente divulgación, el producto alimenticio se selecciona del grupo que consiste en bebida, yogurt, producto lácteo, néctar, zumo de frutas, bebida energética, alimento de panadería, chocolate, cereal y sopa.
En otra realización de la presente divulgación, el microorganismo termoestable es viable a temperatura que varía desde aproximadamente 25 °C hasta 250 °C.
La presente divulgación también se refiere a un microorganismo termoestable de Lactobacillus seleccionado del grupo que consiste en Lactobacillus plantarum con ATCC SD N° 6863 y Lactobacillus acidophilus con ATCC SD N° 6864.
En una realización de la presente divulgación, Lactobacillus plantarum tiene la secuencia genómica expuesta en SEQ ID No. 1.
En otra realización de la presente divulgación, Lactobacillus acidophilus tiene la secuencia genómica expuesta en SEQ ID No. 2.
En otra realización más de la presente divulgación, el microorganismo termoestable es viable a temperatura que varía desde aproximadamente 25 °C hasta 250 °C.
La presente divulgación también se refiere a un microorganismo termoestable para su uso en el tratamiento de un trastorno en un sujeto, en donde el microorganismo se selecciona del grupo que consiste en Lactobacillus plantarum con ATCC SD N° 6863 y Lactobacillus acidophilus con ATCC SD N° 6864.
En una realización de la presente divulgación, el trastorno se selecciona de grupo que comprende diarrea, diarrea asociada a antibióticos, síndrome del intestino irritable, estreñimiento, intolerancia a la lactosa, infección vaginal, infección intestinal, enfermedad inflamatoria del intestino y combinaciones de las mismas.
En otra realización de la presente divulgación, el microorganismo está en forma libre o forma de producto alimenticio.
En otra realización más de la presente divulgación, el sujeto se selecciona de grupo que comprende animal y ser humano.
La presente divulgación se refiere a cepa(s) termoestable(s) de microorganismo(s).
En una realización de la presente divulgación, el (los) microorganismo(s) son de especies de Lactobacillus.
En una realización de la presente divulgación, la(s) cepa(s) termoestable(s) de la presente divulgación tienen una tolerancia a altas temperaturas.
En la presente divulgación, el término "termostable" pretende transmitir que las cepas sean capaces de sobrevivir a altas temperaturas durante un largo periodo de tiempo.
En realizaciones de la presente divulgación, las cepas son viables, tolerantes y resistentes a altas temperaturas. En realizaciones de la presente divulgación, las cepas termoestables son cepas termostables aisladas.
En realizaciones de la presente divulgación, las cepas termoestables representan viabilidad que varía desde 1 % hasta 99 %.
En realizaciones de la presente divulgación, la viabilidad de las cepas depende de factores ambientales tales como pH, temperatura y periodo de tiempo.
En realizaciones de la presente divulgación, se considera que la viabilidad de las cepas termoestables es igual y superior a 1,0 -1,5 X 109 unidades formadoras de colonias (ufc) es satisfactoria para su uso en un producto alimenticio.
Se debe observar que el número de ufc en un producto se diferencia dependiendo del modo de los productos. Por ejemplo, para comprimidos/sobres/cápsulas, se expresa por comprimido/sobre/cápsula, mientras que en alimento, ejemplo, como chocolate/muffin/galleta/pan se expresa basado en la ración.
La dosificación de probiótico varía dependiendo del producto y la indicación específica. No existe consenso sobre el número mínimo de microorganismos que se deben ingerir para obtener un efecto beneficioso. Normalmente, un probiótico debe contener varios billones de microorganismos para aumentar la probabilidad de colonización intestinal adecuada. Para lactobacilos, las dosis típicas usadas varían desde 1-20 billones de unidades formadoras de colonias por día.
En realizaciones de la presente divulgación, la cepa termoestable se mezcla o combina con un componente de alimento durante la preparación del producto alimenticio.
En realizaciones de la presente divulgación, la cepa termoestable se mezcla o combina con el producto alimenticio después de la preparación del producto alimenticio.
En una realización de la presente divulgación, 1,00 g de un muestra en polvo secada por pulverización de Lactobacillus acidophilus TSP-La1 contiene un recuento total de células viables de 82,0 billones de ufc/g.
En una realización de la presente divulgación, 1,00 g de una muestra en polvo secada por pulverización de Lactobacillus plantarum TSP-Lp1 contiene un recuento total de células viables de 248,25 billones de ufc/g.
En realizaciones, la temperatura varía desde aproximadamente 25 °C hasta aproximadamente 250 °C.
En realizaciones de la presente divulgación, la forma libre de las cepas de la divulgación se selecciona de grupo que comprende cápsula secada por pulverización, polvo, comprimido, sobre, comprimido bucodispersable y comprimido masticable.
En la forma de un producto alimenticio, el polvo secado por pulverización se usa en la preparación de diferentes alimentos, por ejemplo, gominolas, chocolate, galletas, muffins, pan, etc.
En realizaciones particulares de la presente divulgación, las cepas tienen la capacidad de realizar sus funciones en diferentes productos alimenticios incluso a temperaturas más altas, que hace que sean terapéuticamente eficaces. Lactobacillus acidophilus es una bacteria beneficiosa que existe de forma natural que mantiene la salud del tubo digestivo. Mantiene una microflora saludable protegiendo el cuerpo contra un crecimiento excesivo de bacterias perjudiciales, ayuda a mejorar la digestión, protege contra molestias gastrointestinales, dolores abdominales, estreñimiento y diarrea inducida por antibióticos.
Lactobacillus plantarum puede vivir en el estómago durante un periodo considerable. Combate continuamente la enfermedad y previene la entrada de microorganismos patógenos. También mejora la salud digestiva, ayuda a tratar el síndrome del intestino irritable (SII) y previene alergias alimentarias.
En la presente divulgación, el término "UFC" se refiere a unidades formadoras de colonias.
En la presente divulgación, el término "MIC" se refiere a concentración mínima inhibitoria.
En la presente divulgación, el término "TVCC" se refiere a recuento total de células viables.
En la presente divulgación, el término "GYEA" se refiere a "agar extracto de levadura-glucosa".
En la presente divulgación, el término "PBS" se refiere a "solución salina tamponada con fosfato".
En la presente divulgación, el término bebida incluye - sopa, té, café, bebidas energéticas y zumos de frutas.
En la presente divulgación, el término alimento de panadería incluye pan, muffins y galletas.
Las cepas probióticas estables a la temperatura, de Lactobacillus plantarum (TSP-Lp1) y Lactobacillus acidophilus (TSP-La1), tienen la capacidad de soportar los rigurosos procesos de fabricación, especialmente los requeridos durante la preparación del alimento / bebida y en las industrias farmacéuticas. La mayoría de los probióticos actualmente disponibles en el mercado no pueden sobrevivir al riguroso entorno observado durante la fabricación y el entorno ácido del estómago. Estos probióticos actualmente disponibles tienen recubrimiento entéri soportar las rigurosas condiciones. Es probable que los probióticos que no lleguen a alcanzar el tubo digestivo vivos no proporcionen ayuda digestiva e inmunitaria. En la tabla proporcionada a continuación, las cepas de la presente divulgación se comparan con cepas comerciales y se resaltan sus ventajosas características.
TABLA 1
Figure imgf000006_0001
En la presente divulgación, el término "tratando" o "tratamiento" o "tratar" incluye actividades terapéuticas y profilácticas. Incluye el tratamiento y la curación de una enfermedad o trastorno, o efectos de la enfermedad o efectos secundarios de la enfermedad o el trastorno. El término también incluye la prevención del progreso adicional de la enfermedad o el trastorno, y la prevención del progreso adicional de los efectos de la enfermedad o los efectos secundarios de la enfermedad o el trastorno. Incluye además el mantenimiento del estado óptimo en un individuo. En la presente divulgación, está dentro del conocimiento del experto en la técnica determinar una dosificación adecuada de las cepas y la forma farmacéutica a administrar a un sujeto particular.
En otra realización de la presente divulgación, la cepa termoestable de Lactobacillus se selecciona de un grupo que comprende Lactobacillus plantarum y Lactobacillus acidophilus
En otra realización más de la presente divulgación, la cepa termoestable de Lactobacillus es Lactobacillus plantarum TSP-Lp1.
Las cepas originales para la presente divulgación se han conseguido de la Colección de Cultivos Tipo Microbianos (MTCC).
En otra realización más de la presente divulgación, el Lactobacillus plantarum termoestable es Lactobacillus plantarum TSP-Lp1.
La cepa de Lactobacillus plantarum de la presente divulgación también se denomina LP en toda la presente divulgación.
En otra realización adicional de la presente divulgación, Lactobacillus acidophilus termoestable es Lactobacillus acidophilus TSP-La1.
La cepa de Lactobacillus acidophilus de la presente divulgación también se denomina La en toda la presente divulgación.
Las novedosas cepas de la presente divulgación se han depositado en la Colección Americana de Cultivos Tipo (ATCC), Virginia, EE. UU. A las cepas se les han asignado los siguientes números de acceso:
• Lactobacillus plantarum SD 6863 (SD-Safe Deposit)
• Lactobacillus acidophilus SD 6864 (SD-Safe Deposit)
En otra realización más, la(s) cepa(s) termoestable(s) de la presente divulgación son capaces de soportar la temperatura que varía desde temperatura ambiente, es decir, aproximadamente 25 °C hasta aproximadamente 250 °C.
La presente divulgación se refiere a producto alimenticio que comprende cepa(s) termoestable(s) de microorganismo(s).
La presente divulgación se refiere a productos alimenticios probióticos que comprenden cepa(s) termoestable(s) de microorganismo(s).
En una realización de la presente divulgación, el (los) microorganismo(s) son de especies de Lactobacillus.
En una realización de la presente divulgación, el alimento o producto alimenticio contiene microorganismo(s) de especies de Lactobacillus.
En otra realización de la presente divulgación, la(s) cepa(s) de Lactobacillus en el producto alimenticio/productos alimenticios probióticos se seleccionan de un grupo que comprende Lactobacillus plantarum y Lactobacillus acidophilus y combinaciones de los mismos.
Los productos alimenticios según la presente divulgación pueden comprender una o más cepas seleccionadas de las cepas anteriormente definidas. Dentro del alcance de la presente divulgación se usan ventajosamente otras mezclas o cepas termostables individuales.
Estas novedosas cepas sobreviven largos periodos de almacenamiento a temperatura ambiente y son tolerables. Así, los productos alimenticios que contienen las cepas de la presente divulgación tienen una larga estabilidad en almacén y son fácilmente incluidas en diferentes productos alimenticios.
En otra realización más, los productos alimenticios probióticos de la presente divulgación que comprenden cepa(s) termoestable(s) de Lactobacillus proporcionan una nutrición potenciada y ayudan a eliminar los trastornos relacionados con el intestino, siendo el trastorno seleccionado de un grupo que comprende, pero no se limita a, síndrome del intestino irritable, diferentes formas de diarrea, trastorno del intestino irritable, estreñimiento, intolerancia a la lactosa y cualquier combinación de los mismos e infecciones vaginales.
En otra realización adicional, el producto alimenticio se selecciona de un grupo que comprende, pero no se limita a, bebida, yogurt, producto lácteo, néctar, zumo de frutas, bebida energética, alimento de panadería, chocolate, cereal, sopa y combinaciones de los mismos.
En otra realización adicional, el producto alimenticio que tiene cepa(s) de microorganismo(s) estable(s) al calor o termostable(s) se denomina producto alimenticio probiótico dentro del ámbito de la presente divulgación.
En otra realización adicional, la presente divulgación proporciona productos alimenticios probióticos que implican calentar a altas temperaturas, especialmente las requeridas para preparar bebidas calientes como sopa, té, café, chocolates, cereales y otros productos alimenticios ya que las cepas probióticas de la presente divulgación son capaces de soportar las altas temperaturas.
En otra realización adicional, la(s) cepa(s) termoestable(s) en el producto alimenticio de la presente divulgación son capaces de soportar la alta temperatura que varía desde temperatura ambiente de aproximadamente 25 °C hasta aproximadamente 250 °C.
En otra realización más, los productos alimenticios probióticos de la presente divulgación eliminan el requisito de almacenamiento en frío y así son económicamente beneficiosos para el usuario final.
En otra realización más, los productos alimenticios de la presente divulgación que tienen cepa(s) estable(s) al calor de la presente divulgación cuando se calientan a una alta temperatura no se afectan en términos de sabor o eficacia del cultivo probiótico.
La presente divulgación se refiere a un proceso de obtención de cepa(s) de microorganismo(s) estable(s) al calor que comprende el acto de fermentación y secado por pulverización.
La presente divulgación también se refiere a un proceso de fabricación de un producto alimenticio que comprende cepa(s) termoestable(s) de microorganismo(s), en donde el proceso comprende el acto de mezclar la(s) cepa(s) termoestable(s) con al menos uno de los componentes del producto alimenticio en cualquier momento durante la preparación del producto alimenticio
En una realización de la presente divulgación, el alimento probiótico de la presente divulgación tiene diversas ventajas que se enumeran a continuación:
• Capaz de sobrevivir al paso a través del aparato digestivo.
• Capaz de fijarse a los epitelios intestinales y de colonizar eficazmente y multiplicarse. Capaz de mantener una buena viabilidad.
• Capaz de utilizar los nutrientes y los sustratos en una dieta normal.
• No patógenos y no tóxicos.
• Capaz de ejercer un efecto beneficioso sobre el hospedador. Estabilidad de las características deseadas durante el procesamiento, almacenamiento y transporte.
• De naturaleza antiinflamatoria, antimutagénica e inmunoestimulante.
Así, la presente divulgación proporciona cepa(s) microbiana(s) estable(s) al calor/termoestable(s) capaz (capaces) de sobrevivir a las altas temperaturas, en donde esta(s) cepa(s) incorporada(s) en alimentos sirven de alimentos probióticos y tratan enfermedades/trastornos.
En toda la memoria descriptiva, el producto alimenticio que comprende cepa(s) microbiana(s) termoestable(s) de la divulgación también se denomina alternativamente "Alimento probiótico" o "Producto alimenticio probiótico" y los términos tienen el mismo significado y alcance.
En toda la memoria descriptiva, la(s) cepa(s) microbiana(s) termoestable(s) de la divulgación se denominan alternativamente "cepa(s) microbiana(s) estable(s) al calor", "cepa(s) microbiana(s) estable(s) al calor/termoestable(s)".
La presente divulgación se elabora además con referencia a los siguientes ejemplos, que son solo de naturaleza ilustrativa y no se deben interpretar de ningún modo como limitantes del alcance de la presente divulgación.
Ejemplos
Ejemplo 1: Método de producción de probióticos, es decir, cepas estables al calor de Lactobacillus plantarum
Se proporcionan brevemente a continuación las diversas etapas implicadas en la producción de probióticos:
Tecnología de fermentación / perfusión: Se cultiva la cepa madre de Lactobacillus spp. en medio a temperaturas optimizadas. Las especies termoestables de Lactobacillus de la presente divulgación se fabrican usando un procedimiento de fermentación empleando el modo de perfusión. La tecnología de perfusión mejora las densidades celulares durante la fermentación.
Secado por pulverización: Esta etapa se lleva a cabo para obtener la forma de polvo de probióticos, en donde el medio que contiene las cepas se rocía sobre las paredes del secador y se seca sometiéndolas a una temperatura de aproximadamente 90 °C - 120 °C. El proceso aguas abajo para las especies de Lactobacillus se completa con una secadora por pulverización a medida en donde las cepas microbianas / probióticos están en polvo.
Ensayo (QA/QC): Se realiza un análisis microbiológico completo para el recuento viable de unidades formadoras de colonias/g de Lactobacillus spp. en el producto secado por pulverización.
Ejemplo 2: Método de formulación de productos alimenticios que contienen cepas de Lactobacillus estables al calor
En la Figura 1 de la presente divulgación se proporciona el diagrama de flujo para la fabricación de alimento probiótico de la presente divulgación.
Como se observa, se recoge el cultivo probiótico en un vial de inóculo y entonces se añade a un matraz oscilante. El medio preparado se añade al fermentador de semillas junto con la cepa probiótica del matraz oscilante. Entonces se transfiere todo el cultivo a un fermentador de producción y se deja que crezca. Entonces, se filtran o se centrifugan, y se secan por pulverización o se secan a vacío, las células del cultivo para obtener las células en forma de polvo. Esto va seguido por la formulación del probiótico, después de que el producto se envase y etiquete.
Después de la preparación de las cepas probióticas, se formulan en los artículos alimenticios para producir diversos productos alimenticios tales como, pero no se limitan a, bebidas, yogurt, productos lácteos, néctares, zumos de frutas, bebidas energéticas, alimento de panadería, chocolates, cereales, sopa y combinaciones de los mismos. Preparación de gominolas probióticas:
Ingredientes para el tamaño de lote de 230 g:
• Fase A - Agua - 36 g y gelatina - 21,0 g
• Fase B - Jarabe de maíz - 66,4 g, agua - 66,3 g y azúcar - 90,2 g
• Fase C - Ácido cítrico - 0,9 g, color rojo N° 40 - 1,2 g y aroma de bayas mixtas - 0,9 g
• Lactobacillus acidophilus - 3,0 g (desde 1,5 x 109)
• Lactobacillus plantarum - 0,28 g (desde 1,9 x 1011)
Temperatura: 70 °C
Método de preparación:
1. Se pesa el ingrediente de la fase A y se mezcla y se mantiene a temperatura ambiente durante 10-15 minutos.
2. Se pesan los ingredientes de la fase B y se disuelven. Se mantienen los ingredientes de la fase B para la ebullición hasta que la mezcla que se forma es densa y viscosa.
3. Entonces se pesan y se disuelven los ingredientes de la fase C.
4. Entonces se mezclan uniformemente los ingredientes de la fase A y B y se añaden a los ingredientes de la fase C y se mezclan durante 2 - 3 minutos.
5. Cuando la temperatura es aproximadamente 70 °C, se pesan los probióticos (Lactobacillus acidophilus/ Lactobacillus plantarum) según se requiera (500 millones de ufc/gominola), se añaden y se mezclan uniformemente.
6. Entonces se vierte en los moldes y se conserva refrigerado 45 minutos, para que cuajen las gominolas.
7. Después de 45 minutos, las gominolas se someten a acondicionamiento durante 24 horas. Se recogen las muestras de gominola para análisis del recuento total viable para comprobar la viabilidad del probiótico.
Preparación de sopa probiótica:
Ingredientes para el tamaño de lote de 100 ml:
• Sopa Knorr (preparada) - 7,5 g
• Lactobacillus acidophilus - 0,75 g (desde 1,6x109)
• Lactobacillus plantarum - 0,065 g (desde 2,48x1011)
Temperatura: 55 °C
Método de preparación:
1. Se mezcla una cantidad conocida (7,5 g) de sopa Knorr con agua (100 ml) de manera que no exista formación de grumos.
2. Se coloca en un fogón y se lleva a ebullición mientras se agita continuamente, luego se hierve a fuego lento durante 3 minutos.
3. Después de 3 minutos, se baja la temperatura de la sopa a 55 °C y se mantiene.
4. Cuando la temperatura de la sopa es 55 °C, se pesa el probiótico (Lactobacillus acidophilus/ Lactobacillus plantarum) según se requiera (160 millones de ufc/ración), se añade y se mezcla minuciosamente.
5. Se mantiene la temperatura de la sopa a 55 °C y se toman muestras de la sopa en el minuto 5°, 10° y 15°, respectivamente.
6. Entonces se recogen muestras de diferentes intervalos de tiempo para el análisis del recuento total viable de análisis para comprobar el porcentaje de probiótico viable.
Preparación de chocolate probiótico:
Ingredientes del tamaño de lote de 25 g:
• Coberturas de caramelo de Wilton (pepitas de chocolate preparadas) - 25 g
• Lactobacillus acidophilus - 1,5 g (desde 1,6 x 109)
• Lactobacillus plantarum - 0,13 g (desde 1,9 x 1011)
Temperatura: 70 °C
Método de preparación:
1. Se someten las pepitas de chocolate previamente pesadas a calentamiento en el horno a 70 °C durante 1 a 2 minutos hasta que se fundan las pepitas de chocolate.
2. Una vez se funden las pepitas de chocolate y la temperatura es aproximadamente 70 °C, se pesa el probiótico (Lactobacillus acidophilus/Lactobacillus plantarum) según se requiera (100 millones de ufc/chocolate), se añade y se mezcla minuciosamente durante 2 minutos para conseguir una distribución uniforme.
3. Entonces se refrigera durante 20 minutos para que solidifique el chocolate y luego se recoge para el análisis del recuento total viable para comprobar el porcentaje de probiótico viable.
Preparación de pan probiótico:
Ingredientes para el tamaño de lote de 20 g:
• Harina común - 10,0 g
• Bicarbonato sódico - 0,4 g
• Sal - 0,1 g
• Mantequilla -1,23 g
• Leche - 8,08 g
• Lactobacillus acidophilus - 0,7 g (desde 1,44 x 1011)
• Lactobacillus plantarum - 0,52 g (desde 2,38 x 1011)
Temperatura: 240 °C
Tiempo de horneado: 10 minutos
Método de preparación:
1. Se prepara masa de pan usando harina común, se añade a ella bicarbonato sódico, sal, mantequilla, leche y cepa probiótica (Lactobacillus acidophilus/Lactobacillus plantarum).
2. Inicialmente, la masa se prepara añadiendo una cantidad parcial de la harina común, leche y cantidad parcial del probiótico (L. acidophilus/L. plantarum) y se mezclan minuciosamente durante 10 a 15 minutos.
3. La masa se mantiene a temperatura ambiente durante 42 horas y se mantiene la cepa probiótica restante (L. acidophilus/L. plantarum) para la rehidratación durante 42 horas a temperatura ambiente.
4. Después de 42 horas, se mezclan los ingredientes restantes como la (mantequilla, leche) con la masa y se amasan durante 15- 20 minutos hasta que no esté ni húmeda ni pegajosa.
5. Entonces se engrasa la masa y se fermenta durante 2 horas a temperatura ambiente.
6. Entonces se hornea la masa a 240 °C durante 10 minutos.
7. Después de esto, se enfría el pan durante 10 - 15 minutos.
8. Entonces se recoge el pan para el análisis del recuento total de células viables para comprobar la viabilidad del probiótico.
Preparación de muffin probiótico:
Ingredientes para el tamaño de lote de 20 g:
Harina común - 4,82 g
Levadura en polvo - 0,329 g
Azúcar - 2,85 g
Mantequilla sin sal - 4,82 g
Huevo - 4,3 g
Pepitas de chocolate negro - 2,85 g
Lactobacillus acidophilus - 1,42 g (desde 1,4x 1011)
Lactobacillus plantarum - 0,572 g (desde 1,9 x 1011)
Temperatura: 160 °C
Tiempo de horneado: 15 minutos
Método de preparación:
1. Se suspende el polvo de probióticos (Lactobacillus acidophilus/Lactobacillus plantarum) en 0,9 % de NaCl durante la noche (15-17 horas).
2. Se prepara la masa de muffin usando mantequilla sin sal, azúcar y huevo, se baten juntos para la mezcla uniforme, a ésta se añade a ella el polvo de probiótico durante la noche (Lactobacillus acidophilus/Lactobacillus plantarum).
3. Entonces se pesan los ingredientes secos (harina común, levadura en polvo, azúcar) y se añaden a la masa líquida y se mezclan completamente durante 5 - 10 minutos.
4. Entonces se engrasa el molde del muffin y la masa se fermenta durante 1 hora a temperatura ambiente.
5. Se mantiene el horno para el precalentamiento y se hornea la masa de muffin a 160 °C durante 15 minutos. 6. Después del horneado, se enfría el muffin durante 5 -10 minutos a temperatura ambiente.
7. Entonces se recoge el muffin para el análisis del recuento viable para comprobar la viabilidad del probiótico.
Polvo de té probiótico:
Ingredientes:
Té Twining y Brooke Bond - 2,0 g
Lactobacillus acidophilus - 0,1682 g (desde 1,44 x 1011)
Lactobacillus plantarum - 0,001 g (desde 1,9 x 1011)
Temperatura: 50 °C, 60 °C y 70 °C
Método de preparación:
1. Se coge la bolsita de té previamente pesada y se infunde a 100 °C durante 2 minutos.
2. Entonces se reduce la temperatura de la disolución de té hasta 50 °C, 60 °C y 70 °C y se mantiene.
3. Entonces se pesa el probiótico (Lactobacillus acidophilus/Lactobacillus plantarum) según se requiera (100 millones de ufc/bolsita de té), se introduce en la disolución de té y se mezcla.
1. Se mantiene la temperatura de la disolución de té a 50 °C , 60 °C y 70 °C, se sacan las muestras de la disolución de té en el 1° minuto, 3° minuto, 5° minuto, 7° minuto y 10° minuto, respectivamente.
2. Entonces se recogen las muestras de diferentes intervalos de tiempo para el análisis del recuento total viable para comprobar el porcentaje de probiótico viable.
Galleta probiótica:
Ingredientes para el tamaño de lote de 15 g:
Harina común -7,51 g
Levadura en polvo - 0,237 g
Azúcar - 2,37 g
Mantequilla sin sal - 2,68 g
Leche - 1,426 g
Sal - 0,01 g
Esencia de vainilla - 0,118 g
Lactobacillus acidophilus - 0,51 g (desde 1,44 x 1011)
Lactobacillus plantarum - 0,55 g (desde 2,38 x 1011)
Temperatura: 180 °C
Tiempo de horneado: 12 minutos
Método de preparación:
1. Se suspende el polvo probiótico (Lactobacillus acidophilus/Lactobacillus plantarum) en 0,9 % de NaCl durante la noche (15-17 horas)
2. Entonces se pesan los ingredientes secos (harina común, sal, levadura en polvo) y se mezclan minuciosamente durante 5 -10 minutos.
3. Entonces se pone la mantequilla en un vaso de precipitados y se añade azúcar granulada y se bate hasta que se vuelve esponjoso después de aproximadamente 2 - 3 minutos.
4. Entonces, a esto se añade la disolución de probiótico durante la noche (Lactobacillus acidophilus/Lactobacillus plantarum) previamente pesada según se requiera (5,0 billones de ufc/galleta) y se mezcla uniformemente. 5. A esto se añade extracto de vainilla y leche y entonces se baten juntos todos los ingredientes durante 5-10 minutos.
6. Entonces se extiende la masa de galletas sobre un papel para horno y se enfría en el refrigerador (4-8 °C) durante 1 hora
7. Después de 1 hora, se mantiene el horno para el precalentamiento y se hornea la masa para galletas a 180 °C durante 12 minutos.
8. Después del horneado durante 12 minutos la galleta se enfría durante 5 -10 minutos a temperatura ambiente.
9. Entonces se recoge la galleta para el análisis del recuento total viable para comprobar la viabilidad del probiótico.
Ejemplo 3: Estabilidad al calor de cepas termostables
Ejemplo 3A- Se determina en este ejemplo la estabilidad de la cepa probiótica estable al calor de Lactobacillus plantarum.
Se comprueba la estabilidad de Lactobacillus plantarum a 90 °C, 140 °C y160 °C durante diferentes intervalos de tiempo en un horno de aire caliente. Los resultados se representan en la tabla a continuación.
T l 2A
Figure imgf000011_0001
continuación
Figure imgf000012_0005
Se deduce de la tabla anterior y la Figura 4A de la presente divulgación que Lactobacillus plantarum es 95 % viable a 90 °C durante 120 segundos.
T l 2B
Figure imgf000012_0006
Se deduce de la tabla anterior y la Figura 4B de la presente divulgación que Lactobacillus plantarum es 88 % viable a 140 °C durante 120 segundos.
T l 2
Figure imgf000012_0004
Se deduce de la tabla anterior y la Figura 4C de la presente divulgación que Lactobacillus plantarum es aún 11 % viable a 160 °C durante 300 segundos.
Ejemplo 3B_- Se determina en este ejemplo la estabilidad de la cepa probiótica estable al calor de Lactobacillus acidophilus TSP-La-1.
Se comprueba la estabilidad de Lactobacillus acidophilus a 90 °C, 140 °C y 160 °C durante diferentes intervalos de tiempo en un horno de aire caliente. Los resultados se representan en la tabla a continuación.
Figure imgf000012_0003
Conclusión: Los datos anteriores y la Figura 4D muestran que Lactobacillus acidophilus es aún estable al calor y viable a 81 % a 90 °C durante 120 s.
T l 2E
Figure imgf000012_0002
Conclusión: Los datos anteriores y la Figura 4E muestra que Lactobacillus acidophilus es aún estable al calor y viable a 71 % a 140 °C durante 120 s.
T l 2F
Figure imgf000012_0001
Conclusión: Los datos anteriores y la Figura 4F muestran que Lactobacillus acidophilus 4,09 % es aún estable al calor a 160 °C durante 120 s
Ejemplo 3C - Durante la preparación de gominolas probióticas, chocolates y sopa, las cepas probióticas se someten a altas temperaturas donde las cepas probióticas están presentes/añadidas. La estabilidad al calor presentada por estas cepas probióticas en los productos alimenticios se determina comprobando su viabilidad.
Como se muestra en la Tabla 3A a continuación y la Figura 2A, se observa que en gominolas, Lactobacillus acidophilus es 92,0 % viable a 70 °C durante una duración de tiempo de hasta 3 minutos.
T l A
Figure imgf000013_0001
Como se muestra en la Tabla 3B a continuación y la Figura 2B, se observa que en chocolates, Lactobacillus acidophilus es 83,3 % viable a 55 °C durante la duración de tiempo hasta 2 minutos.
T l B
Figure imgf000013_0002
Los resultados anteriores representan que Lactobacillus acidophilus es estable hasta 83 % y viable a 55 °C durante hasta 2 minutos y es 68,0 % viable a 55 °C hasta 3 minutos.
Como se muestra en la Tabla 3C a continuación y la Figura 3, se observa que en sopa (medio líquido), Lactobacillus acidophilus es 57 % viable a 55 °C durante 5 minutos y 26 % viable hasta 10 minutos.
T l
Figure imgf000013_0003
Se realiza el mismo experimento que antes introduciendo cepas de Lactobacillus plantarum en sopa y comprobando la viabilidad a 55 °C y 75 °C, donde se encuentra que la viabilidad es buena, como se muestra en la Tabla 3D.
T l D
Figure imgf000013_0004
Ejemplo 3D - Se incorpora cepa de Lactobacillus plantarum (TSP-Lp 1) y Lactobacillus acidophilus TSP-La1 en masa de galleta, se hornean las galletas y se comprueba su estabilidad a 180 °C. Los resultados se proporcionan en las Tablas 4A y 4B a continuación.
T l 4A - L ill i hil T P-L 1
Figure imgf000013_0005
T l 4B - L ill l n r m T P-L 1
Figure imgf000013_0006
Se extrae de las Tablas 4A y 4B, y las Figuras 12A y 12B, que Lactobacillus acidophilus es 55 % viable a 180 °C durante 12 minutos y Lactobacillus plantarum es 37 % viable a 180 °C durante 12 minutos.
Ejemplo 4: Estabilidad al calor de cepas termostables en el producto alimenticio muffins
Se preparan muffins probióticos añadiendo las cepas de Lactobacillus acidophilus TSP-La1 y Lactobacillus plantarum TSP-Lp1 a ellos durante su preparación. Se hornean los muffins en un horno a 160 °C durante 15 minutos.
T l A
Figure imgf000014_0002
T l B
Figure imgf000014_0003
Se observa de las Tablas 5A-5B y las Figuras 5A-5B que la cepa termoestable Lactobacillus acidophilus en el muffin representa una viabilidad de hasta 75 % a 160 °C durante 15 minutos. Además, Lactobacillus plantarum es 77 % viable a 160 °C durante 15 minutos.
Ejemplo 5A: Estabilidad al calor de Lactobacillus acidophilus en el producto alimenticio pan
Este estudio se realiza para comprobar la estabilidad de Lactobacillus acidophilus en pan que se hornea en un horno a temperaturas superiores a 200 °C. La Tabla N° 6 como se representa a continuación muestra que las cepas de Lactobacillus acidophilus de la presente divulgación son estables a temperaturas de hasta 240 °C durante un periodo de aproximadamente 10 minutos.
T l
Figure imgf000014_0004
Así, es evidente que las cepas de Lactobacillus acidophilus de la presente divulgación son estables a temperaturas extremadamente altas como 240 °C con una viabilidad de 60 % y así proporcionan cepas eficientes estables al calor. Los datos anteriores en la tabla y la Figura 6 muestran que Lactobacillus acidophilus es 60 % viable a 240 °C durante 10 minutos.
Ejemplo 5B: Estabilidad al calor de Lactobacillus plantarum en el producto alimenticio pan
Este estudio se realiza para comprobar la estabilidad de Lactobacillus plantarum en pan que se hornea en horno a temperaturas superiores a 200 °C. Este estudio muestra que las cepas de Lactobacillus plantarum de la presente divulgación son estables a temperaturas de hasta 240 °C durante un periodo de aproximadamente 10 minutos.
T l 7
Figure imgf000014_0005
Ejemplo 6A: Estabilidad al calor de lactobacillus acidophilus en té a 50 °C y 60 °C durante diferentes intervalos de tiempo
Se establece en el estado de la técnica que las especies de Lactobacillus no son viables en medio líquido. Sin embargo, cuando Lactobacillus acidophilus TSP-La1 de la presente divulgación se formula en un producto de té (té Twining), que después se suspende en agua mientras se infunde el té, se observa una cantidad significativa de viabilidad de aproximadamente 39 % a 50 °C y 60 °C durante hasta 7 minutos.
T l A
Figure imgf000014_0001
continunación
Figure imgf000015_0001
T l B
Figure imgf000015_0002
A partir de los datos anteriores en las tablas y de las Figuras 7A y 7B, se deduce que las cepas de LA de la presente divulgación son viables en medio líquido a temperatura ambiente y temperaturas más altas como 50 °C y 60 °C y por tanto estas cepas se pueden formular incluso en medio/producto basado en líquido.
Ejemplo 6B: Estabilidad al calor de Lactobacillus plantarum en té a 50 °C y 60 °C durante diferentes intervalos de tiempo
Se establece en el estado de la técnica que las especies de Lactobacillus no son viables en medio líquido. Sin embargo, cuando Lactobacillus plantarum TSP-Lp1 de la presente divulgación se formula en un producto de té (té Twining), que después se suspende en agua mientras que se infunde el té, se observa una cantidad significativa de viabilidad a 50 °C y 60 °C.
T l A
Figure imgf000015_0003
T l B
Figure imgf000015_0004
Ejemplo 7: Tolerancia a los ácidos de Lactobacillus acidophilus a diferentes pH e intervalos de tiempo Se someten las cepas de Lactobacillus acidophilus a condiciones de pH extremo dentro del intervalo de 1,5 a 3,0 para determinar que los productos alimenticios que contienen estas cepas son capaces de sobrevivir a la baja acidez del estómago durante la digestión. Recuentos totales de placas de Lactobacillus acidophilus sobre agares GYEA a diferentes valores de pH de 1,5, 3,0 y 7,2 (control) durante intervalos de 1,5 horas. La Tabla N° 10 a continuación representa la viabilidad en placa de las cepas de LA cuando se someten a pH 1,5, 2,53,0 y 7,2 durante 0,5, 1,5 y 3 horas. El periodo de 0 horas es el tiempo cuando los cultivos se siembran inmediatamente para el ensayo tras ser expuestos a PBS con diferentes valores de pH.
Tabla 10 -
Figure imgf000016_0001
Se observa de la tabla anterior y la Figura 8 que las cepas son capaces de resistir al bajo pH del estómago y son viables en el estómago. A pH 3,0, Lactobacillus acidophilus tiene viabilidad estacionaria hasta 3,0 horas.
Así, las cepas termoestables de la presente divulgación son adecuadas para ser incorporadas en productos alimenticios y actúan beneficiosamente en el entorno del estómago.
Ejemplo 8: Tolerancia a los ácidos de Lactobacillus plantarum a diferentes pH e intervalos de tiempo Se realiza la misma prueba de tolerancia a los ácidos que se proporcionó en el Ejemplo 7 con Lactobacillus plantarum TSP-Lp1 y se observan resultados similares. La Tabla N° 11 a continuación indica el % de viabilidad de las cepas de LP sometida al bajo pH normalmente presente en el estómago. El periodo de 0 horas es el tiempo cuando los cultivos se siembran inmediatamente para el ensayo tras ser expuestos a PBS con diferente valor de pH.
T l 11
Figure imgf000016_0002
De los resultados anteriores de la tabla y la Figura 9, es evidente que las cepas de LP de la presente divulgación son viables a bajo pH durante una cantidad considerable de tiempo. A pH 3,0, Lactobacillus plantarum tiene viabilidad estacionaria hasta 3,0 horas.
Así, las cepas termoestables de la presente divulgación son adecuadas para ser incorporadas en productos alimenticios y actúan beneficiosamente en el entorno del estómago.
Ejemplo 9: Perfiles de susceptibilidad a los antibióticos de Lactobacillus acidophilus por el método de difusión en disco
Para determinar la sensibilidad de las cepas termoestables en los productos alimenticios hacia antibióticos, se crea el perfil de susceptibilidad a antibióticos para Lactobacillus acidophilus por el método de difusión de discos. Los criterios de susceptibilidad usados se establecen por Charteris et al. Se cultiva Lactobacillus acidophilus en agar Man Rogosa Sharpe (MRSA).
Agar MRS de Lactobacillus M641 - Método de preparación
Se recomienda agar MRS de Lactobacillus para el cultivo de todas las especies de Lactobacillus.
Composición
Ingredientes Gramos / Litro
Proteosa peptona 10,000
Extracto de res 10,000
Extracto de levadura 5,000
Dextrosa 20,000
Polisorbato 80 1,000
Citrato de amonio 2,000
Acetato sódico 5,000
Sulfato de magnesio 0,100
Manganeso sulfato 0,050
Fosfato de dipotasio 2,000
Agar 12,000
Final pH (a 25 °C) 6,5 ± 0,2
Se suspenden 67,15 gramos en 1000 ml de agua destilada y se calientan hasta ebullición para disolver el medio completamente. Se esteriliza por autoclave a 15 libras de presión (121 °C) durante 20 minutos, se mezcla bien y se vierte en placas de Petri estériles.
La tabla a continuación representa los resultados realizados para una lista de antibióticos comunes. Se ha incluido la concentración de los antibióticos probados dependiendo de sus concentraciones mínimas inhibitorias.
T l 12
Figure imgf000017_0001
Se observa de la tabla anterior que la cepa de Lactobacillus acidophilus de la presente divulgación es sensible a amoxicilina, ciprofloxacino, cefalotina, cloranfenicol, clindamicina, meticilina, rifampicina y estreptomicina y es resistente a ampicilina, eritromicina, gentamicina, kanamicina, oxacilina, tetraciclina y vancomicina.
Ejemplo 10: Perfiles de susceptibilidad a antibióticos de Lactobacillus plantarum por el método de difusión de discos
Se realiza el mismo conjunto de estudios que en el ejemplo previo usando la cepa de Lactobacillus plantarum de la presente divulgación y los resultados para el estudio se representan en la Tabla N° 13 como a continuación. Los criterios de susceptibilidad usados se establecen por Charteris et al. Se cultiva Lactobacillus acidophilus en agar de Man Rogosa Sharpe.
T l 1
Figure imgf000017_0002
A partir de la tabla anterior, se observa que Lactobacillus plantarum es sensible a amoxicilina, ciprofloxacino, cefalotina, cloranfenicol, clindamicina, eritromicina, meticilina, rifampicina, estreptomicina y tetraciclina y resistente a ampicilina, gentamicina, kanamicina, oxacilina y vancomicina.
Ejemplo 11: Tolerancia a la bilis de Lactobacillus acidophilus a diferentes valores de concentración de bilis e intervalos de tiempo
Se prueban las cepas de la cepa de Lactobacillus acidophilus TSP-La1 termostable de la presente divulgación para su tolerancia hacia diversas concentraciones a la bilis en el cuerpo. Por tanto, se someten diversas concentraciones de bilis que varían desde 0,3 % hasta 1 % a las cepas de LA de la presente divulgación como se representa en la Tabla N° 14 a continuación.
Se proporcionan recuentos totales de placas para Lactobacillus acidophilus sobre agares GYEA a diferente concentración de bilis de 0,3 %, 0,5 %, 1,0 % y control durante intervalos de 0, 3,0 y 6,0 horas en la tabla a continuación. El periodo de 0 horas es el tiempo cuando los cultivos se siembran inmediatamente para el ensayo después de ser expuestos a PBS con diferentes valores de concentración de bilis.
Se debe observar que la concentración para bilis en el cuerpo solo alcanza un máximo de 1 %.
T l 14
Figure imgf000018_0001
De la tabla anterior y la Figura 10 de la presente divulgación, es evidente que las cepas de LA de la presente divulgación son capaces de tolerar altas concentraciones de bilis. Así, las cepas termoestables de la presente divulgación son adecuadas para ser incorporadas en productos alimenticios y actúan beneficiosamente en el entorno del estómago.
Ejemplo 12: Tolerancia a la bilis de Lactobacillus plantarum a diferente concentración de bilis e intervalos de tiempo
Se lleva a cabo el mismo estudio que se describe en el ejemplo con la cepa de Lactobacillus plantarum TSP-Lp1 de la presente divulgación, en donde la cepa se somete a diferentes concentraciones de bilis, es decir, 0,3 % a 1 %.
La tabla a continuación proporciona el % de viabilidad de las cepas de LP de la presente divulgación cuando se somete a concentraciones variables de bilis. Se proporcionan recuentos totales de placas para Lactobacillus plantarum sobre agares GYEA a diferente concentración de bilis de 0,3 %, 0,5 %, 1,0 % y control durante intervalos de 0, 3,0 y 6,0 horas. El periodo de 0 horas es el tiempo cuando los cultivos se siembran inmediatamente para el ensayo después de exponerse a PBS con diferentes valores de concentración de bilis.
T l 1
Figure imgf000018_0002
A partir de la tabla anterior y la Figura 11 de la presente divulgación, es evidente que las cepas de LP de la presente divulgación son capaces de tolerar altas concentraciones de bilis. Así, las cepas termoestables de la presente divulgación son adecuadas para ser incorporadas en productos alimenticios y actúan beneficiosamente en el entorno del estómago.
Ejemplo 13: Pruebas para la identificación de Lactobacillus acidophilus
En este estudio, se llevan a cabo estudios de identificación para determinar el comportamiento morfológico, bioquímico y fisiológico de las cepas de la presente divulgación. Como se observa en la tabla a continuación, la cepa de Lactobacillus acidophilus TSP-La1 se identifica como Bacillus (bacilo), Gram-positivo e inmóvil.
Procedimiento de tinción de Gram
Materiales requeridos
Portaobjetos de vidrio limpios, bucle de inoculación, quemador Bunsen, microscopio, aceite de inmersión, solución salina y cultivos.
Reactivos
1. Tinción primaria - Cristal violeta
2. Mordiente - Yodo de Gram
3. Decolorante - Alcohol etílico
4. Tinción secundaria - Safranina
Procedimiento de tinción de Gram
1. Se dispone el portaobjetos con extensión fijada por calor sobre bandeja de tinción.
2. Se inunda la extensión con cristal violeta y se mantiene a un lado durante 1 minuto.
3. Se inclina ligeramente el portaobjetos y se aclara suavemente con agua de grifo o agua destilada usando un frasco lavador.
4. Se inunda la extensión con yodo de Gram y se mantiene a un lado durante 1 minuto.
5. Se inclina ligeramente el portaobjetos y se aclara suavemente con agua de grifo o agua destilada usando un frasco lavador. La extensión aparece como un círculo púrpura sobre el portaobjetos.
6. Se decolora usando 95 % de alcohol etílico o acetona. Se inclina ligeramente el portaobjetos y se aplica el alcohol gota a gota durante 5 a 10 segundos hasta que el alcohol corre casi claro.
7. Se aclara inmediatamente el portaobjetos con agua.
8. Se inunda el portaobjetos con safranina para la contratinción y se mantiene a un lado durante 45 segundos. 9. Se inclina ligeramente el portaobjetos y se aclara suavemente con agua de grifo o agua destilada usando un frasco lavador.
10. Se secó el portaobjetos con papel absorbente.
11. Se visualiza la extensión usando un microscopio óptico bajo inmersión en aceite.
Procedimiento de ensayo de motilidad
Punzada de agar blando (método del tubo)
Materiales requeridos
• Dos tubos de ensayo con medio de agar nutritivo
• Aguja de pinchar de inoculación
• Cultivos de crecimiento durante la noche - 18-24 horas (Lactobacillus acidophilus y Lactobacillus plantarum) PROCEDIMIENTO
1. Se etiquetan los tubos de agar nutritivo con los nombres de los organismos.
2. Se aplica llama a la aguja de pinchar de inoculación y se enfría y se inserta en el cultivo después de llamear el cuello del tubo.
3. Se retira la tapa del tubo de medio, se aplica llama al cuello y se pincha 2/3 del camino hacia el final. Se aplica nuevamente llama al cuello del tubo antes de volver a poner la tapa al tubo.
4. Se incuban los tubos a 37 °C durante 24 a 48 horas.
5. Se examinan los cultivos para la presencia o ausencia de un precipitado a lo largo de la línea de la inoculación por pinchado.
T l 1
Figure imgf000019_0001
“+” es positivo
“-” es negativo
“+/-” indica la producción de ácido pero no produce gas
“+/+” indica la producción de tanto ácido como gas
Ejemplo 14: Pruebas para la identificación de Lactobacillus plantarum
En este estudio, se realizan el mismo conjunto de estudios morfológicos, biológicos y fisiológicos para la cepa, es decir, Lactobacillus plantarum TSP-Lp1 de la presente divulgación. La tabla a continuación lista las características morfológicas y fisiológicas de la cepa de LP.
T l 17
Figure imgf000020_0001
Como se observa en la tabla anteriormente, la cepa de Lactobacillus plantarum TSP -Lp1 se identifica como Bacillus (bacilo), Gram-positivo e inmóvil.
Ejemplo 15: Utilización de hidratos de carbono
Este ejemplo establece que las cepas termoestables de la presente divulgación son capaces de utilizar los nutrientes y sustratos en una dieta normal.
Materiales requeridos
1. Caldo de fermentación de hidratos de carbono con rojo fenol.
2. Cultivo bacteriano.
3. Bucle de inoculación.
4. Estufa de incubación (37 °C).
I. Preparación de caldo de fermentación de hidratos de carbono
1. Se pesan tripticasa, cloruro sódico y rojo de fenol y se disuelven en 100 ml de agua destilada y se transfieren a matraces cónicos.
2. Se añade 0,5 % a 1 % del hidrato de carbono deseado a todos los matraces.
3. Se insertan tubos de Durham invertido en todos los tubos, y los tubos de Durham deben estar completamente llenos de caldo.
4. Se esterilizan los tubos a 121 °C durante 20 minutos.
5. Es importante no sobrecalentar el caldo de fermentación de hidratos de carbono con rojo fenol. El sobrecalentamiento dará como resultado la degradación de las moléculas y formará compuestos con un color y aroma característicos.
6. Se transfiere el azúcar a tubos con tapa de rosca o tubos de fermentación y se etiquetan apropiadamente. Ingredientes del caldo de fermentación:
1. Tripticasa: 1 g
2. Hidrato de carbono: 0,5 g (glucosa, dextrosa, sacarosa, maltosa, fructo-oligosacárido (FOS))
3. Cloruro sódico: 0,5 g
4. Rojo de fenol: 0,0189 mg
Se esterilizó en autoclave a 121 °C durante 20 minutos.
II. Inoculación de cultivo bacteriano en el caldo de hidrato de carbono con rojo fenol
1. Se inocula asépticamente cada caldo de hidrato de carbono etiquetado con tanto las cepas termoestables de la presente divulgación como tubos no inoculados que se guardan como tubos de control.
2. Los tubos se incuban a 18-24 horas a 37 °C.
3. Se observa la reacción y los resultados se proporcionan en la Figura 13 de la presente divulgación.
Resultados de la prueba de fermentación de hidratos de carbono
Se observa de la Figura 13 que después de la inoculación con cualquiera de las cepas de la presente divulgación, en los tubos:
1. Producción de ácido: Cambia el medio a color amarillo - el organismo fermenta el hidrato de carbono dado y produce ácidos orgánicos, reduciéndose así el pH del medio en ácido.
2. Producción de ácido y gas: Cambia el medio a color amarillo - el organismo fermenta el hidrato de carbono dado y produce ácidos orgánicos y gas. La producción de gas se puede detectar por la presencia de pequeñas burbujas en los tubos de Durham invertidos.
3. Ausencia de fermentación en el control: El caldo retiene el color rojo. El organismo no está presente, por lo que no se utiliza el hidrato de carbono.
Así, a partir de este ejemplo, se establece que las cepas termoestables de la presente divulgación son capaces de utilizar los nutrientes y sustratos en una dieta normal y así ayudan a proporcionar la buena salud general cuando se consumen.
Ejemplo 16: Comparación con cepas comercialmente disponibles
El objetivo de este experimento es establecer la estabilidad de la cepa Lactobacillus acidophilus TSP-La1 estable a la temperatura de la presente divulgación en comparación con Lactobacillus acidophilus liofilizado comercialmente disponible a 70 °C en chocolates.
Temperatura: 70 °C
Cepa probiótica: Lactobacillus acidophilus TSP-La1 estable a la temperatura
Cepa comercial: Lactobacillus acidophilus liofilizado
T l 1
Figure imgf000021_0002
B) El objetivo de este experimento es establecer la estabilidad de la cepa de Lactobacillus plantarum TSP-Lp1 a temperatura estable de la presente divulgación en comparación con Lactobacillus plantarum liofilizado comercialmente disponible a 70 °C en chocolates.
Temperatura: 70 °C
Cepa probiótica: Lactobacillus plantarum TSP-Lp1 estable a la temperatura
Cepa comercial: Lactobacillus plantarum liofilizado.
T l 1
Figure imgf000021_0001
continuación
Figure imgf000022_0002
Se observa de la tabla anterior que las cepas comerciales, así como las cepas de la presente divulgación, están presentes en chocolate en una cantidad superior a 100 millones de ufc/chocolate. Sin embargo, después de calentar el chocolate hasta 70 °C, se destruyen todas las células de la cepa comercialmente disponible, mientras que la viabilidad de las cepas termoestables de la presente divulgación es alta. Así, se llega a la conclusión de que las cepas de la presente divulgación son viables y estables a 70 °C (la temperatura usada para preparar los chocolates como prototipo).
Ejemplo 17: Estudios de estabilidad a largo plazo
El objetivo de este ejemplo es establecer la estabilidad de las cepas termoestables de la presente divulgación durante un periodo de 1-9 meses.
Ejemplo 17A-PRODUCTO: Lactobacillus acidophilus TSP-La1
ESTUDIOS DE ESTABILIDAD: A temperatura ambiente a 25 ± 2 °C
PERIODO DE PRUEBA: 1, 2, 3, 6, 9, 12, 18, y 24 Meses
CANTIDAD: 50 g
T l 2
Figure imgf000022_0001
NLT - No menos de
NMD - No más de
B ufc/g: Billones de ufc/g.
No se observan cambios significativos durante los estudios. Así, se llega a la conclusión de que la cepa de la presente divulgación Lactobacillus acidophilus TSP-La1 es estable durante un periodo de hasta 9 meses a temperatura ambiente.
Ejemplo 17B-En este ejemplo, la gominola probiótica con la cepa Lactobacillus acidophilus TSP-La1 se almacena a 25 ± 2 °C y humedad relativa de 60 ± 5 % de humedad relativa. Se realizan pruebas para el color y el aroma. También se realizan ensayos. Las pruebas se realizan cada mes durante un periodo de 6 meses
Ensayo A - Recuento total de levaduras y mohos.
Ensayo B - Recuento total de células viables.
Los resultados se proporcionan a continuación.
Tabla 21
Figure imgf000023_0002
NLT - No menos de
TA - Temperatura ambiente
NMD - No más de
No se observa cambio significativo durante los estudios. Así, la cepa probiótica que contiene producto es estable en la condición de temperatura ambiente durante 6 meses.
Ejemplo 18: Estudios de estabilidad en galletas
El objetivo de este ejemplo es establecer la estabilidad de las cepas termoestables de la presente divulgación en galletas a 20 °C durante un periodo de 6 días.
Se preparan galletas probióticas con una mezcla de 2 cepas Lactobacillus acidophilus TSP-La1 y Lactobacillus plantarum TSP-Lp1 de la presente divulgación en 12,5 g de cada galleta. Los estudios de estabilidad se llevan a cabo a 20 ± 2 °C y la humedad se mantiene a 50 ± 5 %. Los resultados se proporcionan en la tabla a continuación.
Figure imgf000023_0001
Se llega a la conclusión de la tabla anterior que las cepas de la presente divulgación son viables durante hasta 97,2 % durante 6 días a 20 °C.
Ejemplo 19: Secuencia del genoma de las cepas termoestables
En este ejemplo, se proporciona la secuenciación de genes 16S ARNr de las cepas de la presente divulgación. El microorganismo termoestable Lactobacillus plantarum tiene la secuencia genómica expuesta en SEQ ID No. 1. El microorganismo termoestable Lactobacillus acidophilus tiene la secuencia genómica expuesta en SEQ ID No. 2.
SEO ID N o.l- LactobaciUus ptantamm TSP-Lpl
AATCATCTGT CCACCTTAAG GCGGCTGGGT TCCTAAAAGGG TTACCCCACC GACTTTGGGT GGTTACAAAC TCTCATGGGT GTGACGGGCG GTGTGTACAA GGCCCGGGAA CGTATTCACC GCGGCATGCT GATCCGCGAT TACTAGCGAT TCCGACTTCA TGTAGGCGAG TTGCAGCCTA CAATCCGAAC TGAGAATGGC TTTAAGAGAT TAGCTTACTC TCGCGAGTTC GCAACTCGTT GTACCATCCA TTGTAGCACG TGTGTAGCCC AGGTCATAAG GGGCATGATG ATTTGACGTC ATCCCCACCT TCCTCCGGTT TGTCACCGGC AGTCTCACCA GAGTGCCCAA CTTAATGCTG GCAACTGATA ATAAGGGTTG CGCTCGTTGC GGGACTTAAC CCAACATCTC ACGACACGAG CTGACGACAA CCATGCACCA CCTGTATCCA TGTCCCCGAA GGGAACGTCT AATCTCTTAG ATTTGCATAG TATGTCAAGA CCTGGTAAGG TTCTTCGCGT AGCTTCGAAT TAAACCACAT GCTCCACCGC TTGTGGGGGCC CCCGTCAATTC CTTTGAGTTT CAGCCTTGCG GGCGTACTCC CCAGGCGGAA TGCTTAATGC GTTAGCTGCA GCACTGAAGG GCGGAAACCC TCCAACACTT AGCATTCATC GTTTACGGTA TGGACTACCA GGGTATCTAA TCCTGTTTGC TACCCATACT TTCGAGCCTC AGCGTCAGTT ACAGACCAGA CAGCCGCCTT CGCCACTGGT GTTCTTCCAT ATATCTACGC ATTTCACCGC TACACATGGA GTTCCACTGT CCTCTTCTGC ACTCAAGTTT CCCAGTTTCC GATGCACTTC TTCGGTTGAG CCGAAGGCTT TCACATCAGA CTTAAAAAAC CGCCTGCGCT CGCTTTACGC CCAATAAATC CGGACAACGC TTGCCACCTA CGTATTACCG CGGCTGCTGG CACGTAGTTA GCCGTGGCTT TCTGGTTAAA TACCGTCAAT ACCTGAACAG TTACTCTCAG ATATGTTCTT CTTTAACAAC AGAGTTTTAC GAGCCGAA AC CCTTCTTCAC TCACGCGGCG TTGCTCCATC AGACTTTCGT CCATTGTGGA AGATTCCCTA CTGCTGCCTC CCGTAGGAGT TTGGGCCGTG TCTCAGTCCC AATGTGGCCG ATTACCCTCT CAGGTCGGCT ACGTATCATT GCCATGGTGA GCCGTTACCC CACCATCTAG CTAATACGCC GCGGGACCAT CCAAAAGTGA TAGCCGAAGC CATCTTTCAA ACTCGGACCA TGCGGTCCAA GTTGTTATGC GGTATTAGCA TCTGTTTCCA GGTGTTATCC CCCGCTTCTG GGCAGGTTTC CCACGTGTTA CTCACCAGTT CGCCACTCAC TCAAATGTA AATCATGATG CAAGCACCAA TCAATACCAG AGTTCGTTCG ACTTGCATGT ATTAGGCACG CCGCCAGCGT TCGTCCT

Claims (11)

REIVINDICACIONES
1. Un producto alimenticio que comprende un microorganismo termoestable de Lactobacillus, en donde el microorganismo termoestable se selecciona del grupo que consiste en Lactobacillus plantarum con ATCC SD N° 6863 y Lactobacillus acidophilus con ATCC SD N° 6864.
2. Un método de preparación de un producto alimenticio, comprendiendo dicho método el acto de combinar una cepa termostable seleccionada del grupo que consiste en Lactobacillus plantarum con ATCC SD N° 6863 y Lactobacillus acidophilus con ATCC SD N° 6864; con un componente del producto alimenticio durante o después de la preparación del producto alimenticio.
3. El producto alimenticio según la reivindicación 1 y el método según la reivindicación 2, en donde el producto alimenticio se selecciona del grupo que consiste en bebida, yogurt, producto lácteo, néctar, zumo de frutas, bebida energética, alimento de panadería, chocolate, cereal y sopa.
4. El producto alimenticio según la reivindicación 1 y el método según la reivindicación 2, en donde el microorganismo termoestable es viable a temperatura que varía desde 25 °C hasta 250 °C.
5. Un microorganismo termoestable de Lactobacillus seleccionado del grupo que consiste en Lactobacillus plantarum con ATCC SD N° 6863 y Lactobacillus acidophilus con ATCC SD N° 6864.
6. El microorganismo termoestable según la reivindicación 5, en donde Lactobacillus plantarum tiene la secuencia genómica expuesta en SEQ ID No. 1.
7. El microorganismo termoestable según la reivindicación 5, en donde Lactobacillus acidophilus tiene la secuencia genómica expuesta en SEQ ID No. 2.
8. El microorganismo termoestable según la reivindicación 5, en donde el microorganismo termoestable es viable a temperatura que varía desde 25 °C hasta 250 °C.
9. Un microorganismo termostable para su uso en el tratamiento de un trastorno en un sujeto, en donde el microorganismo se selecciona del grupo que consiste en Lactobacillus plantarum con ATCC SD N° 6863 y Lactobacillus acidophilus con ATCC SD N° 6864.
10. El microorganismo termoestable para su uso según la reivindicación 9, en donde el trastorno se selecciona del grupo que consiste en diarrea, diarrea asociada a antibióticos, síndrome del intestino irritable, estreñimiento, intolerancia a la lactosa, infección vaginal, infección intestinal, enfermedad inflamatoria del intestino y combinaciones de los mismos.
11. El microorganismo termoestable para su uso según la reivindicación 9, en donde el microorganismo está en forma libre o forma de producto alimenticio y en donde el sujeto se selecciona de grupo que comprende animal y ser humano.
ES15846869T 2014-10-01 2015-09-30 Cepas termoestables, productos y métodos de las mismas Active ES2808677T3 (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
IN4978CH2014 2014-10-01
PCT/IB2015/057497 WO2016051358A1 (en) 2014-10-01 2015-09-30 Thermo-stable strains, products and methods thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2808677T3 true ES2808677T3 (es) 2021-03-01

Family

ID=55629507

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES15846869T Active ES2808677T3 (es) 2014-10-01 2015-09-30 Cepas termoestables, productos y métodos de las mismas

Country Status (7)

Country Link
US (1) US10058577B2 (es)
EP (1) EP3237600B1 (es)
CA (1) CA2963213C (es)
DK (1) DK3237600T3 (es)
ES (1) ES2808677T3 (es)
PL (1) PL3237600T3 (es)
WO (1) WO2016051358A1 (es)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114736838B (zh) * 2022-06-14 2022-11-08 广东容大生物股份有限公司 一种肠源性益生菌株及其培养方法和应用

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3689640A (en) * 1967-09-28 1972-09-05 Univ Of Nebraska The Antibiotic acidophilin and process of preparing the same
DE3335351A1 (de) * 1983-09-29 1985-04-11 Diamalt AG, 8000 München Verfahren zur herstellung eines gebrauchsfertigen, getrockneten backkonzentrates und dessen verwendung
IT1309427B1 (it) * 1999-05-28 2002-01-23 Mendes S U R L Composizione dietetica o farmaceutica utile per la prevenzione o iltrattamento dell'iperossaluria e suo uso
US7052898B2 (en) * 2001-07-16 2006-05-30 Bioneer A/S Thermostable isomerase and use hereof, in particular for producing tagatose
US6667165B2 (en) 2001-11-13 2003-12-23 Eppendorf Ag Method and compositions for reversible inhibition of thermostable polymerases
PL1996696T3 (pl) * 2006-03-17 2017-08-31 Probi Aktiebolag Termostabilne szczepy Lactobacillus
WO2011124538A1 (en) 2010-04-06 2011-10-13 Universiteit Gent A thermostable sucrose phosphorylase
KR101372200B1 (ko) * 2010-12-21 2014-03-14 한국생명공학연구원 락토바실러스 플란타룸(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ) ＳＹ99 및 이의 용도
CN102533591B (zh) * 2011-12-15 2013-06-05 天津工业大学 一株耐高温、耐高糖的乳酸菌

Also Published As

Publication number Publication date
US20170157184A1 (en) 2017-06-08
EP3237600B1 (en) 2020-04-29
US10058577B2 (en) 2018-08-28
WO2016051358A1 (en) 2016-04-07
CA2963213C (en) 2021-02-09
CA2963213A1 (en) 2016-04-07
DK3237600T3 (da) 2020-08-03
PL3237600T3 (pl) 2020-11-16
EP3237600A1 (en) 2017-11-01
EP3237600A4 (en) 2018-08-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2294266T3 (es) Composiciones dieteticas y/o farmaceuticas para ser utilizadas por humanos y/o por animales basadas en preparaciones microbianas probioticas.
ES2568955T3 (es) Microorganismos metabólicamente activos y métodos para su producción
DK2348888T3 (en) PROBIOTIC CORN-BASED COMPOSITIONS
US20160348191A1 (en) Lactic acid bacterium lactobacillus fermentum isolated from adults in longevity village, helpful for defecation
WO2012135499A1 (en) Probiotic sports nutrition compositions
CN109069555B (zh) 面向新生儿的用于改善脑功能的组合物
Caramia et al. Probiotics: from the ancient wisdom to the actual therapeutical and nutraceutical perspective
US20190240268A1 (en) Infection protective agent for infants
US20190201459A1 (en) Anti-allergic agent for infants
RU2303058C2 (ru) Средство для лечения кишечных инфекций, осложненных дисбактериозом "биобаланс-к"
US20150246082A1 (en) Pediococcus-Based Probiotics for Body Weight Control
RU2326938C2 (ru) Консорциум штаммов лактобактерий и способ получения на его основе препарата, используемого в качестве биологически активной добавки или закваски для производства кисломолочных продуктов
ES2808677T3 (es) Cepas termoestables, productos y métodos de las mismas
CN115137074A (zh) 婴幼儿用排便促进剂
RU2376366C2 (ru) Консорциум штаммов лактобактерий и способ получения на его основе биологически активной добавки или закваски для производства кисломолочных продуктов
Paliy et al. Influence of various prebiotic components on the main growth indicators of probiotic bacteria
WO2022154692A1 (ru) Консорциум бифидобактерий и штаммы, входящие в состав консорциума
Mostowfi et al. Preparation of file (Sohan) by using the probiotics with chemical and microbiologic analysis for individual's health.
RU2290437C2 (ru) Штамм bifidobacterium lactis 678, используемый для приготовления кисломолочных лечебно-профилактических продуктов, ферментированных и неферментированных пищевых продуктов, биологически активных добавок, пробиотика и косметических средств
RU2290436C2 (ru) Штамм bifidobacterium lactis 676, используемый для приготовления кисломолочных лечебно-профилактических продуктов, ферментированных и неферментированных пищевых продуктов, биологически активных добавок, пробиотика и косметических средств
EA041668B1 (ru) Консорциум бифидобактерий, используемый для приготовления бифидосодержащих продуктов, и штаммы, входящие в состав консорциума
RU2454460C1 (ru) Консорциум микроорганизмов, состоящий из штаммов bifidobacterium bifidum 791, bifidobacterium iongum в-379м, lactobacillus acidophilus nk-1, sterptococcus thermophilus 132, используемый для производства кисломолочных продуктов
WO2019126893A1 (es) Aditivo probiotico para alimento solido deshidratado, preferentemente, cereal; metodo de preparacion de dicho aditivo y alimento solido deshidratado que lo contiene
Sanchez Growth and survivability of bifidobacteria in malt hydrolisate for the development of a new probiotic drink
UA64159A (en) 1mb b-7019 bifidobacterium bifidum strain, the 1mb b-7020 bifidobacterium longum strain, the 1 mb b-7021 lactobacillus acidophilus strain and the 1mb b-7026 streptococcus thermophilus strain for production of bacterial concentrate, the bacterial concentrate "biocor-1" and the biologically active additive "biocorrectin"