ES2687480T3 - Dispositivo para suspender células - Google Patents
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Abstract
Un dispositivo de mezcla que comprende: un primer imán (1), que rota alrededor de un eje longitudinal (2); una barra de mezcla (4), fijada a una montura, de tal manera que la montura incluye un segundo imán (3) que tiene un eje de rotación, de tal modo que el eje longitudinal (2) del primer imán es sustancialmente coaxial con el eje de rotación del segundo imán (3), caracterizado por que la montura se ha proporcionado a modo de soporte con una o dos articulaciones a modo de lámina (6, 6') que oscilan o vibran alrededor de un segundo eje (5) de manera tal, que la montura se mueve en un movimiento sustancialmente ortogonal (6'') con respecto al eje longitudinal de la barra de mezcla (4) por la interacción magnética del primer imán rotativo con el segundo imán (3).
Description
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DESCRIPCION
Dispositivo para suspender celulas
Esta invencion se refiere a un metodo y a un dispositivo para suspender partfculas en el seno de un fluido, especialmente para suspender celulas vivas en pequenos volumenes de fluidos.
Antecedentes
Las muestras biologicas tales como celulas necesitan ser suspendidas en el seno de un lfquido para propositos de cultivo o de analisis. Tales suspensiones resultan adecuadas durante un corto tiempo, hasta que la muestra comienza a sedimentarse, lo que hace necesaria la remezcla. La mezcla de suspensiones de muestras biologicas es una tecnica conocida desde hace mucho tiempo, para la que se dispone comercialmente de diversos dispositivos. El diseno y el funcionamiento de los dispositivos de mezcla dependen de la naturaleza y del volumen de la muestra que se ha de mezclar, del tamano y de la forma del recipiente de mezcla, y de las subsiguientes etapas de tratamiento de la muestra.
Ademas de mezclar una suspension por medio de un agitador acoplado a un motor electrico, son de uso comun los agitadores de celulas magneticos. A fin de proporcionar volumenes mayores de suspensiones, los documentos EP 53869, US 3.854.704 y US 3.572.651 divulgan un agitador de celulas magnetico en el que la suspension es mezclada por medio de un iman rotativo colocado dentro del recipiente de mezcla, a traves de un arbol flexible. El iman situado dentro del recipiente es forzado a un movimiento de rotacion por un iman situado en el exterior del recipiente, que, a su vez, es hecho rotar por un aparato de agitacion magnetica convencional. El arbol flexible esta fijado al recipiente de mezcla y no puede ser retirado o insertado dentro del recipiente.
El documento US 3.780.992 divulga una pipeta vibratoria en la cual un oscilador mecanico esta fijado a la pipeta a modo de barra de agitacion.
El documento US 4.204.774 describe un agitador de celulas magnetico en el cual la suspension es mezclada por una barra de agitacion rotativa. La barra es hecha rotar en una trayectoria circular dentro del recipiente mezclador por unos medios excentricos y un motor sincronico. El agitador de celulas magnetico esta firmemente fijado al recipiente de mezcla y no puede ser retirado del recipiente o insertado en el.
Las muestras biologicas para propositos de ensayo o analisis se proporcionan habitualmente en pequenos volumenes que oscilan entre menos de 10 pl y 5 ml. Por ejemplo, las microplacas que se utilizan comunmente proporcionan hasta 1.024 pocillos que tienen un volumen menor que un mililitro. La mezcla de cantidades tan pequenas por mera agitacion resulta diffcil como consecuencia de las fuerzas capilares y de la pequena relacion entre superficie y volumen del recipiente, resultado de la adhesion del lfquido a las paredes del recipiente. La mezcla por agitacion genera una unica corriente de lfquido que se mueve en un cfrculo adyacente a la pared del recipiente, la cual tiene una baja turbulencia y, de acuerdo con ello, una baja eficiencia de mezcla.
A este respecto, el documento US 2008/0078257 divulga un procedimiento de mezcla y un dispositivo de mezcla de acuerdo con el preambulo de la reivindicacion 1, en el cual una barra de mezcla magnetica es movida por un segundo iman que rota en torno a la barra de mezcla.
Las suspensiones del interior de los pocillos de la microplaca son, por tanto, habitualmente mezcladas mediante sacudimiento o vibracion de toda la microplaca, esto es, de todos los pocillos simultaneamente. El sacudimiento de suspensiones de celulas en el interior de una microplaca puede dar como resultado una perdida de celulas, ya que pueden adherirse celulas a las paredes de un pocillo, por encima de la superficie del lfquido. Resultana beneficioso proporcionar suspensiones de pequeno volumen de muestras biologicas sin agitacion del fluido en cfrculo y/o sin necesidad de sacudir / hacer vibrar otros recipientes. Sena, por lo demas, deseable proporcionar un dispositivo para generar tales suspensiones que pueda ser implementado en dispositivos analfticos como maquinas de FACS [Clasificacion de Celulas Activadas por Fluorescencia -“Florescence-Activated Cell Sorting”-] para la preparacion de muestras, aguas arriba con respecto al dispositivo de analisis de celulas.
De forma sorprendente, se encontro que las suspensiones de partfculas, especialmente en recipientes de pequeno volumen, pueden ser eficazmente homogeneizadas por medio de un dispositivo en el cual una barra de mezcla magnetica es movida de una manera oscilante por su interaccion con un segundo iman rotativo.
Objeto de la invencion
De acuerdo con ello, el objeto de la invencion consiste en un dispositivo de mezcla de acuerdo con la reivindicacion 1. Tambien se divulga un procedimiento para mezclar una muestra biologica, tal como una suspension de celulas, consistente en proporcionar a un recipiente de mezcla una muestra biologica en el seno de un lfquido, sumergir una barra de mezcla en el lfquido y agitar el lfquido por medio de un primer iman (1) que rota alrededor de un eje longitudinal (2); una barra de mezcla (4), fijada a una montura (6), de tal manera que la montura incluye un segundo iman (3), de tal modo que la montura (6) se mueve en un movimiento sustancialmente ortogonal al eje longitudinal de la barra de mezcla (4) por la interaccion del primer iman rotativo con el segundo iman (3).
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Con el dispositivo de la invencion, es posible suspender partmulas incluso en pequenos volumenes de fluido, sin perdida de partmulas o de fluido debidas a los derrames o a la reaglomeracion.
Dentro del alcance de la invencion, los terminos «mezcla» o «suspension» son sinonimos y estan encaminados a proporcionar una suspension de partmulas, tales como celulas, en el seno de un fluido.
El dispositivo de acuerdo con la invencion es especialmente util para la suspension de partmulas como las de una muestra biologica en el seno de un lfquido o fluido por medio del movimiento de la barra de mezcla (4) en el seno de la muestra biologica. «Muestra biologica» puede ser cualquier tipo de tejido o celulas que se vayan a suspender en un fluido apropiado, tal como una solucion amortiguadora de nutricion de las celulas.
Breve descripcion de los dibujos
La Figura 1 muestra el dispositivo provisto de un primer iman (1), un primer eje longitudinal (2), un segundo iman (3), una barra de mezcla (4), una montura (6, 6') y un segundo eje (5).
La Figura 2 muestra el primer iman (1), montado en un motor electrico (8), con un contrapeso (9) que rota alrededor del primer eje longitudinal (2'').
La Figura 3 muestra el iman (3), fijado a la montura de la barra de mezcla (4), articulada a las juntas (6, 6'). Las juntas estan aseguradas mediante orificios pasantes (7), por lo que el movimiento de la montura es limitado, como se ha representado por la lmea discontinua 6''. La barra de mezcla (4) es guiada por un manguito (10).
La Figura 4 es una vista lateral del sistema de mezcla, provisto de un motor electrico (8) y de la barra de mezcla (4).
La Figura 5 es una vista frontal del sistema de mezcla, del que se han retirado las juntas articuladas (6, 6') para la barra de mezcla (4). La barra de mezcla (4) es guiada por el soporte o manguito (10).
La Figura 6 muestra ejemplos del movimiento de la barra de mezcla (4) (lmea delgada) asf como de las corrientes de conveccion resultantes de los fluidos (lmea gruesa).
Descripcion detallada de la invencion
El movimiento preferido de la barra de mezcla (4) a traves del fluido es sustancialmente ortogonal o lateral con respecto al eje longitudinal de la barra de mezcla. Tal movimiento, asf como las corrientes resultantes en el lfquido, se representan en la Figura 6, con flechas que indican el sentido del movimiento. Al mover la barra de mezcla (4) (lmeas delgadas) a traves del fluido, se producen como resultado corrientes de conveccion de fluido (lmeas gruesas) con una zona comun de turbulencia. Las corrientes fluyen con direcciones opuestas y comparten al menos una zona comun de turbulencia.
Es esencial para el dispositivo de mezcla de acuerdo con la invencion el movimiento de la barra de mezcla (4) alrededor del segundo eje (5). El termino «sustancialmente» significa que el movimiento puede desviarse ligeramente del movimiento lateral. Por ejemplo, en la Figura 6a, el dibujo muestra en lmea delgada unas trayectorias sustancialmente laterales de movimiento de la barra de mezcla. Se prefiere que el movimiento de la barra de mezcla (4) sea lateral, es decir, ortogonal al eje longitudinal de la barra de mezcla (4), tal como se muestra en la Figura 6b.
En el dispositivo de mezcla de acuerdo con la invencion, en un estado inactivo del primer iman, el eje longitudinal (2) del primer iman puede ser sustancialmente coaxial con un eje de rotacion del segundo iman (3).
El movimiento de la barra de mezcla se origina a partir de la rotacion del primer iman (1) en torno al primer eje (2). El movimiento de rotacion es transferido por la interaccion magnetica entre el primer iman (1) y el segundo iman (3), a la montura (6) y, por ultimo, a la barra de mezcla (4). La interaccion magnetica entre el primer iman (1) y el segundo iman (3) requiere que la distancia entre ambos imanes sea suficientemente pequena. Dependiendo de la orientacion de los polos de los primer y segundo imanes, la interaccion puede generar fuerzas atractivas o repulsivas. En la presente invencion, los primer y segundo imanes se orientan, preferiblemente, con los polos semejantes enfrentados entre sf (N-N o S-S). El movimiento de rotacion del primer iman (1) y las fuerzas opuestas entre los imanes «empujan» el segundo iman (3) a movimiento.
El primer iman (1) y el segundo iman (3) son imanes permanentes sin ningun requisito especial.
En las Figuras 1 y 3, la barra de mezcla (4) es guiada por un manguito o grna (10) que se fija a la montura o articulacion (6, 6'). La trayectoria de movimiento de la barra de mezcla (4) se define o restringe por la montura (6, 6'), que permite el movimiento del segundo iman (3) en torno a un segundo eje (5). De acuerdo con la invencion, la montura se proporciona a modo de soporte provisto de una o dos articulaciones a modo de lamina (6, 6'), que unicamente pueden oscilar o vibrar en torno al segundo eje (5).
En una realizacion preferida del dispositivo de mezcla, la barra de mezcla (4) se acopla a una montura (6) por medio de un manguito (10), de tal manera que el manguito permite el movimiento de la barra de mezcla a lo largo de su eje
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longitudinal. Puede darse acomodo al movimiento ortogonal de la barra de mezcla mediante una pluralidad de juntas dispuestas en al menos dos lados de la montura (6). Esta realizacion se muestra en la Figura 3 y da como resultado un movimiento lateral sustancial de la barra de mezcla (4) a lo largo de la lmea discontinua 6''.
Como se ha mostrado en la Figura 2, la rotacion del primer iman (1) se lleva a efecto por medio de un motor electrico (8) que rota en torno a un primer eje (2). El primer iman (1) puede estar asegurado en lmea con el primer eje (2) o, en una realizacion preferida, de forma asimetrica con el primer eje (2), esto es, colocado con una distancia de entre 1 mm y 5 mm con el primer eje (2). En esta realizacion, preferiblemente, se ha colocado un contrapeso (9) con respecto al primer iman (1), a la misma distancia del primer eje (2), a fin de evitar el desequilibrio.
La barra de mezcla (4) se ha fabricado de un material como el acero inoxidable u otro similar, en contraste con materiales flexibles como polfmeros, caucho, etc. La barra de mezcla (4) puede ser maciza o haberse proporcionado en forma de tubo o canula.
En caso de que se proporcione en forma de tubo o canula, la barra de mezcla (4) puede ser utilizada para llenar el recipiente de mezcla con las partmulas y fluidos destinados a ser mezclados / suspendidas. En otra variante de la invencion, las partmulas (muestra biologica / celda) y/o el fluido son, al menos en parte, insertados o extrafdos del recipiente de mezcla a traves de una barra de mezcla (4) proporcionada a modo de tubo. Las partmulas y los fluidos pueden haber sido ya premezclados antes de ser proporcionados en el interior del recipiente de mezcla. Para este proposito, la barra de mezcla (4) esta provista, opcionalmente, de conectadores apropiados como el sistema Luer para su conexion con un conjunto de tubos.
En aun otra realizacion de la invencion, el dispositivo de mezcla esta provisto de al menos un recipiente de mezcla, y la barra de mezcla puede ser insertada dentro del recipiente de mezcla y extrafda de este. La insercion / extraccion de la barra de mezcla del receptaculo requiere, bien mover el recipiente de mezcla con respecto a una barra de mezcla estacionaria, o bien mover la barra de mezcla con respecto a un recipiente de mezcla estacionario. Esta variante se muestra en las Figuras 4 y 5, en las que la posicion de la barra de mezcla (4) es ajustable con respecto a un recipiente de mezcla, no mostrado, en la direccion de la lmea discontinua (13).
En una primera variante de esta realizacion de la invencion, el dispositivo de mezcla esta provisto de al menos un recipiente de mezcla que contiene un lfquido, por debajo de la montura (6), de tal manera que la barra de mezcla es sumergida en el lfquido para agitar el lfquido por medio del movimiento ortogonal. En esta variante, el dispositivo de mezcla comprende, de manera adicional, un dispositivo de accionamiento 14 acoplado al motor 8, que detiene e invierte el movimiento de la barra de mezcla (4), como se muestra en la Figura 2.
En una segunda variante de esta realizacion de la invencion, el dispositivo de mezcla esta provisto de al menos un recipiente de mezcla, y la barra de mezcla (4) es insertada en el recipiente de mezcla y retirada de este moviendo el recipiente de mezcla en la direccion que va a lo largo del eje longitudinal de la barra de mezcla.
Como recipientes de mezcla, se prefieren los pocillos de las microplacas que se encuentran comercialmente disponibles. Por supuesto, el movimiento del segundo iman (3) y de la barra de mezcla (4) alrededor del segundo eje (5) necesita ser ajustado al espacio de que se dispone dentro del recipiente. La barra de mezcla mezclara el lfquido sin tocar las paredes del recipiente a todo lo largo de su movimiento.
El metodo se lleva a cabo preferiblemente en un recipiente de mezcla en el cual la relacion entre el diametro exterior de la barra de mezcla (4) y la anchura interior maxima del recipiente de mezcla esta comprendida entre 0,1 y 0,3. Por ejemplo, la barra de mezcla puede tener un diametro exterior de entre 1,5 mm y 0,3 mm y puede ser utilizada en recipientes de mezcla con una anchura interior maxima de entre 1 mm y 10 mm.
El dispositivo de la invencion puede ser utilizado para mezclar o suspender de forma subsiguiente una pluralidad de muestras diferentes. Es otro proposito de la invencion evitar la contaminacion de una muestra que se ha de poner en suspension por trazas o gotas de una muestra diferente que esta adherida a la barra de mezcla.
En realizaciones adicionales de la invencion, la superficie de la barra de mezcla es limpiada o desnudada de mezcla en adhesion por medio de una rasqueta de limpieza o de un lfquido de limpieza. Para este proposito, la montura (6) puede haberse provisto de al menos una rasqueta de limpieza que retira material de la barra de mezcla. La rasqueta de limpieza puede estar hecha de cualquier material adecuado para absorber por empapamiento lfquidos, como el algodon o el papel tisu.
Puede conseguirse una mejor limpieza de la barra de mezcla utilizando un lfquido de limpieza y lavando la barra de mezcla. En esta realizacion de la invencion, la montura (6) esta provista de al menos un orificio (11, 12) que permite la introduccion de un lfquido dentro del manguito (10). La barra de mezcla es entonces guiada a traves de un deposito del lfquido de limpieza o a traves de una corriente de lfquido de limpieza, con lo que se asegura que la barra de mezcla esta unicamente en contacto con lfquido de limpieza fresco, sin contaminar.
La Figura 3 muestra esta realizacion de la invencion, en la cual la junta o articulacion (6, 6') esta provista de un manguito o grna (10) para la barra de mezcla (4), que puede ser lavado por circulacion con lfquido de limpieza aportado y eliminado a traves de unos orificios (11) y (12).
El dispositivo de acuerdo con la invencion es de especial utilidad para la preparacion de muestras en tratamiento automatizado o para el analisis de muestras biologicas. Por lo comun, tal tratamiento requiere una suspension homogenea de la muestra en el seno de un fluido. Lo mejor es que la muestra homogenea sea suspendida en el fluido poco antes de su tratamiento.
5 De acuerdo con ello, se divulga tambien un procedimiento para proporcionar una suspension, que comprende: colocar partfculas, tales como una muestra biologica, y un fluido dentro de un recipiente de mezcla; colocar la barra de mezcla del dispositivo de mezcla como se ha descrito, dentro del recipiente de mezcla y suspender las partfculas en el seno del lfquido / fluido. La barra de mezcla puede, con ello, mezclar la muestra biologica.
El procedimiento puede ser utilizado en automatas o robots de alta capacidad de tratamiento para analizar una 10 pluralidad de muestras biologicas. Por lo tanto, se utilizan, preferiblemente, microplacas de multiples pocillos como recipiente de mezcla en el procedimiento, y la barra de mezcla es insertada en cada pocillo / recipiente de mezcla para mezcla y es extrafda una vez completada la suspension / mezcla.
El dispositivo de la invencion puede ser utilizado para el tratamiento en paralelo de una pluralidad de muestras. Por ejemplo, la suspension de una pluralidad de muestras biologicas en microplacas de multiples pocillos puede ser 15 llevada a cabo en paralelo por entre 2 y 6 dispositivos de la invencion. Para este proposito, el dispositivo de mezcla puede comprender de 1 a 6 barras de mezcla (4) y monturas (10) adicionales que son accionadas en paralelo.
Por otra parte, el dispositivo de mezcla puede ser utilizado para volumenes mas grandes mediante el uso de una unica montura (6) que incluye una pluralidad de barras de mezcla (4).
El dispositivo de mezcla de la invencion puede ser utilizado para cualquier tratamiento automatizado o analisis 20 automatizado para muestras biologicas en suspension o en solucion, especialmente para los sistemas ELIZA o FACS.
Claims (13)
- 5101520253035REIVINDICACIONES1. - Un dispositivo de mezcla que comprende:un primer iman (1), que rota alrededor de un eje longitudinal (2);una barra de mezcla (4), fijada a una montura, de tal manera que la montura incluye un segundo iman (3) que tiene un eje de rotacion, de tal modo que el eje longitudinal (2) del primer iman es sustancialmente coaxial con el eje de rotacion del segundo iman (3), caracterizado por que la montura se ha proporcionado a modo de soporte con una o dos articulaciones a modo de lamina (6, 6') que oscilan o vibran alrededor de un segundo eje (5) de manera tal, que la montura se mueve en un movimiento sustancialmente ortogonal (6'') con respecto al eje longitudinal de la barra de mezcla (4) por la interaccion magnetica del primer iman rotativo con el segundo iman (3).
- 2. - El dispositivo de mezcla de acuerdo con la reivindicacion 1, caracterizado por que la barra de mezcla es un tubo.
- 3. - El dispositivo de mezcla de acuerdo con la reivindicacion 1 o la reivindicacion 2, caracterizado por que la barra de mezcla (4) esta acoplada a una montura por medio de un manguito (10), de tal modo que el manguito permite el movimiento de la barra de mezcla a lo largo de su eje longitudinal.
- 4. - El dispositivo de mezcla de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado por que la montura esta provista de al menos un orificio (11, 12) que permite la introduccion de un lfquido dentro del manguito (10).
- 5. - El dispositivo de mezcla de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado por que la montura esta provista de al menos una rasqueta de limpieza que retira material de la barra de mezcla.
- 6. - El dispositivo de mezcla de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado por que se ha proporcionado al menos un recipiente de mezcla que contiene un lfquido, por debajo de la montura, de tal modo que la barra de mezcla (4) es sumergida en el lfquido con el fin de agitar el lfquido por el movimiento ortogonal.
- 7. - El dispositivo de mezcla de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado por que se ha proporcionado al menos un recipiente de mezcla, y la barra de mezcla (4) es insertada en el recipiente de mezcla y extrafda de el moviendo el recipiente de mezcla en la direccion que va a lo largo del eje longitudinal de la barra de mezcla (4).
- 8. - El dispositivo de mezcla de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el cual la barra de mezcla (4) no toca las paredes del recipiente a todo lo largo de su movimiento.
- 9. - El dispositivo de mezcla de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 6 a 8, en el cual el diametro exterior de la barra de mezcla (4) se encuentra entre aproximadamente 0,1 y 0,3 de un diametro del recipiente.
- 10. -El dispositivo de mezcla de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, que comprende, adicionalmente, de 1 a 6 barras de mezcla (4) y monturas adicionales que son accionadas en paralelo.
- 11. - El dispositivo de mezcla de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en el cual la montura incluye una pluralidad de barras de mezcla (4).
- 12. -El dispositivo de mezcla de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, que comprende adicionalmente un dispositivo de accionamiento que detiene e invierte el movimiento de la barra de mezcla.
- 13. - El dispositivo de mezcla de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, en el cual la barra de mezcla (4) mezcla una muestra biologica.
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