ES2643064T3 - Método para la síntesis de clofarabina - Google Patents

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ES2643064T3 ES15717892.2T ES15717892T ES2643064T3 ES 2643064 T3 ES2643064 T3 ES 2643064T3 ES 15717892 T ES15717892 T ES 15717892T ES 2643064 T3 ES2643064 T3 ES 2643064T3
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Description

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DESCRIPCION
Metodo para la sintesis de clofarabina Campo de la invencion
La presente invencion se refiere a un metodo para la produccion de clofarabina con alto rendimiento y sin formacion de estereoisomeros a-N9 no deseados.
Antecedentes de la invencion
La clofarabina (nombre sistematico IUPAC: 5-(6-amino-2-cloro-purin-9-il)-4-fluoro-2-(hidroxilmetil)oxolan-3-ol) es un antimetabolito de nucleotido de purina usado para el tratamiento de diversos tipos de leucemias, en particular leucemia linfoblastica aguda.
Actualmente se establecen en la tecnica varios metodos para la produccion de clofarabina. Las rutas de sintesis se basan por lo general en una reaccion de acoplamiento entre los derivados de purina y un fragmento de arabinofuranosilo. Dependiendo del metodo de introduccion del atomo de fluor, estos esquemas de sintesis se pueden dividir en dos grupos: (i) metodos en los que un atomo de fluor esta incluido en un fragmento de ribofuranosa e introducido en la molecula en la etapa de acoplamiento; (ii) metodos en los que se introduce un atomo de fluor despues de la etapa de acoplamiento mediante transformaciones quimicas del nucleosido obtenido previamente.
La Patente de los Estados Unidos 5,034,518 describe el esquema de sintesis original para producir clofarabina desarrollado por Montgomery y colaboradores. La ruta de sintesis se ilustra en la figura 1. En resumen, un 1 -bromo- 2-fluoro-azucar 1 se acopla con 2,6-dicloropurina 2, seguido por las etapas de aminacion y desproteccion. Esta etapa de acoplamiento da como resultado la formacion de una mezcla de anomeros a y P del producto 3. Despues de la separacion cromatografica, es posible aislar el anomero P deseado con un rendimiento de solo 32%. Los inconvenientes principales de este metodo son, de hecho, el bajo rendimiento global del producto deseado (13% con respecto a 1), una baja estabilidad del bromuro de partida 1 y una purificacion desafiante del producto de reaccion de copulacion 3 debido a la presencia de isomero a.
La Patente de los Estados Unidos 6,949,640 describe una modificacion de la ruta de sintesis anterior que implica (i) el uso de sales formadas por tratamiento de 2-cloro-6-sustituida-purina con bases fuertes (tales como NaH) en lugar de las formas NH- de purinas, y (ii) el uso de bromuro de 2-desoxi-2-fluoro-3,5-di-O-benzoil-a-D-arabinofuranosilo 4 en lugar del derivado de O-acetilo 1 (esta ruta de sintesis se ilustra en la figura 2). Estas modificaciones permitieron aumentar el rendimiento total de clofarabina hasta aproximadamente 40% basado en el compuesto 4. Sin embargo, el esquema de sintesis se ve obstaculizado por la baja estabilidad del bromuro 4, que es dificil de producir, y la formacion de una mezcla de anomeros en la etapa de acoplamiento, que requiere cromatografia en columna desafiante para la separacion del producto deseado.
La modificacion adicional del metodo de Montgomery y colaboradores de trabajo se describe en La Patente de los Estados Unidos 6,680,382 y se ilustra adicionalmente en la figura 3. Esta modificacion implica el uso de la sal potasica de 2-cloroadenina 5 obtenida por tratamiento de 2-cloroadenina con t-BuOK en lugar de la sal sodica de 2,6-dicloropurina, el uso de una mezcla ternaria de solventes (por ejemplo, alcohol tert-amilico, CH2Cl2, CH3CN) y adicion de CaH2 para la eliminacion completa de agua de solventes. El uso de solventes de baja polaridad en la etapa de acoplamiento permitio conseguir un procedimiento estereoselectivo de la reaccion (con una proporcion de anomero p a a de hasta 15:1). Ademas, la presencia de un grupo amino en el material de partida 2-cloroadenina hizo posible evitar una etapa de aminacion del producto de reaccion de acoplamiento. Como resultado, el rendimiento total de clofarabina purificada a base de azucar fluorado 4 es de aproximadamente 32%. Sin embargo, el azucar fluorado 4 (obtenido en cuatro etapas a partir de 1-O-acetil-2,3,5-tri-O-benzoil-p-D-ribofuranosa) es dificil de producir y tiene una baja estabilidad, dos inconvenientes todavia existentes de este metodo.
El metodo descrito en la Publicacion de la Patente de los Estados Unidos 2012/0010397 se refiere al segundo grupo de metodos de preparacion de clofarabina anteriormente mencionado. Se ilustra en la figura 4. La 2’,3’,5’-Tri-0- benzoil-2-cloroadenosina 8 se obtiene en la primera etapa por acoplamiento de azucar 6 y 2-cloroadenina protegida con TMS 7. La desbenzoilacion adicional con hidrato de hidrazina da como resultado la formacion de una mezcla de derivados 3’,5’- y 2’,5"-di-0-benzoilo. Despues de la isomerizacion del derivado 2’,5’-di-0-benzoilo en el derivado 3', 5' 9, el triflato 10 se obtiene por tratamiento del compuesto 9 con anhidrido trifilico. El triflato 10, despues de su fluoracion y desproteccion, da como resultado el producto final clofarabina. Sin embargo, las desventajas de este metodo son el gran numero de isomeros (que son dificiles de separar) formados en la etapa de acoplamiento entre 6 y 7 (isomeros p-N9, a-N7, p-N7), el uso de hidrato de hidrazina altamente toxico, siendo el rendimiento global de clofarabina purificada solamente del 15%.
Fateev et al. (Fateev, I.V. et al. (2014) Beilstein J. Org. Chem. 10, 1657-1669) describen un procedimiento enzimatico para producir clofarabina con alto rendimiento por condensacion de 2-desoxi-2-fluoro-a-D- arabinofuranosa-1-fosfato con 2- cloroadenina, catalizada por purina nucleosido fosforilasa de E. coli recombinante. Ademas, Burns et al. (Burns, C.L. et al. (1993) J. Med. Chem. 36, 378-384) describe la sintesis enzimatica de 65 alcoxipurina-2,3-didesoxinucleosidos usando fosforilas de E. coli.
Por lo tanto, todavia existe una necesidad continua de metodos mejorados para la sintesis de clofarabina que superen las limitaciones de los esquemas de sintesis establecidos. En particular, existe la necesidad de un esquema de sintesis que da como resultado un alto rendimiento del producto y no implica la formacion de estereoisomeros no deseados.
10 De acuerdo con lo anterior, es un objeto de la presente invencion proporcionar dicho metodo para la produccion de clofarabina.
Resumen de la invencion
En un aspecto, la presente invencion se refiere a un metodo para la produccion de clofarabina, que comprende:
(a) preparar 2-cloroadenosina mediante transglicosilacion enzimatica entre 2-cloroadenina y un compuesto de 15 formula 1,
H0_l o.
HO OH
en la que R1 es purina o base de pirimidina de formula 2 o formula 3, respectivamente,
imagen1
en la que R2 y R3 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en -H, -NH2, -OH y -CH3; y R4 se 20 selecciona del grupo que consiste en -H y -CH3;
(b) proteger parcialmente los grupos hidroxilo de 2-cloroadenosina para obtener una mezcla de un compuesto de formula 4 y un compuesto de formula 5,
imagen2
(c) isomerizar el compuesto de formula 4 en el compuesto de formula 5;
(d) preparar un compuesto de formula 6 a partir del compuesto de formula 5,
imagen3
en la que OR6 es un grupo saliente;
(e) fluoracion del compuesto de formula 6 a un compuesto de formula 7; y
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(f) desproteger el compuesto de formula 7 para obtener la clofarabina.
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En realizaciones preferidas, la transglicosilacion en la etapa (a) se lleva a cabo usando purina nucleosido fosforilasa o una combinacion de purina nucleosido fosforilasa y uridina fosforilasa.
En otras realizaciones preferidas, la fluoracion en la etapa (e) se lleva a cabo usando un agente de fluoracion. Preferiblemente, el agente de fluoracion se selecciona del grupo que consiste en acido fluorhidrico y una mezcla de acido fluorhidrico y una base de Lewis organica. Particularmente preferible, la base de Lewis organica (usada mezclada con acido fluorhidrico) es una amina.
En aun otras realizaciones preferidas, el sustituyente R1 es una base de pirimidina que representa uridina; y/o el sustituyente R5 es un grupo protector de hidroxilo que representa benzoilo; y/o el sustituyente OR6 es un grupo saliente que representa trifluorometanosulfonato.
Breve descripcion de los dibujos
La figura 1 ilustra el esquema de sintesis para la produccion de clofarabina como se describe en la Patente de los Estados Unidos 5,034,518.
La figura 2 ilustra el esquema de sintesis para la produccion de clofarabina como se describe en la Patente de los Estados Unidos 6,949,640.
La figura 3 ilustra el esquema de sintesis para la produccion de clofarabina como se describe en la Patente de los Estados Unidos 6,680,382.
La figura 4 ilustra el esquema de sintesis para la produccion de clofarabina como se describe en la publicacion de patente US 2012/0010397.
La figura 5 ilustra el esquema de sintesis para la produccion de clofarabina de acuerdo con la presente invencion. Descripcion detallada de la invencion
La presente invencion se basa en el hallazgo inesperado de que, a partir de 2-cloroadenosina, la realizacion de una cascada de reaccion que comprende etapas de transglicosilacion enzimatica, benzoilacion, isomerizacion, formacion de esteres de sulfonato (esto es, sulfonilacion), fluoracion y desproteccion, da como resultado la produccion de alto rendimiento de clofarabina sin la formacion concomitante de estereoisomeros no deseados, evitando asi desventajas mayores de los metodos establecidos y proporcionando un esquema de sintesis mas eficiente y menos laborioso.
La presente invencion se describira a continuacion con respecto a realizaciones particulares y con referencia a ciertos dibujos, pero la invencion debe ser entendida como no limitada a la misma, sino solo por las reivindicaciones adjuntas. Los dibujos descritos son solo esquematicos y representativos y se deben considerar no limitativos.
Cuando se utiliza el termino "que comprende" en la presente descripcion y en las reivindicaciones, no excluye otros elementos o etapas. Para los propositos de la presente invencion, se considera que el termino "que consiste en" es una realizacion preferida del termino "que comprende". Si en lo que sigue se define un grupo como comprendiendo al menos un cierto numero de realizaciones, tambien se debe entender que describe un grupo, que preferiblemente consiste unicamente en estas realizaciones.
Cuando se usa un articulo indefinido o definido cuando se hace referencia a un sustantivo singular, por ejemplo, "un", "uno" o "el", esto incluye un plural de ese sustantivo, a menos que se especifique lo contrario.
En el caso de que se indiquen valores numericos en el contexto de la presente invencion, el experto entendera que el efecto tecnico de la caracteristica en cuestion esta asegurado dentro de un intervalo de precision que por lo general abarca una desviacion del valor numerico dado de ± 10%, y preferiblemente de ± 5%.
Ademas, los terminos primero, segundo, tercero, (a), (b), (c), y similares en la descripcion y en las reivindicaciones, se usan para distinguir entre elementos similares y no necesariamente para describir una secuencia u orden cronologico. Se debe entender que los terminos asi utilizados son intercambiables bajo circunstancias apropiadas y que las realizaciones de la invencion descritas en este documento son capaces de funcionar en otras secuencias que las descritas o ilustradas en la presente memoria.
Otras definiciones del termino se daran a continuacion en el contexto del cual se usan los terminos. Los siguientes terminos o definiciones se proporcionan unicamente para ayudar en la comprension de la invencion. Estas definiciones no deben interpretarse que tengan un alcance menor de lo que comprende un experto en el arte. La presente invencion se refiere a un metodo para la produccion de clofarabina, que comprende:
(a) preparar 2-cloroadenosina mediante transglicosilacion enzimatica entre 2-cloroadenina y un compuesto de formula 1,
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en la que R1 es purina o base de pirimidina de formula 2 o formula 3, respectivamente,
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en la que R2 y R3 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en -H, -NH2, -OH y -CH3; y R4 se selecciona del grupo que consiste en -H y -CH3;
(b) proteger parcialmente los grupos hidroxilo de 2-cloroadenosina para obtener una mezcla de un compuesto de formula 4 y un compuesto de formula 5,
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imagen7
en la que R5 es independientemente un grupo protector de hidroxilo;
(c) isomerizar el compuesto de formula 4 en el compuesto de formula 5;
(d) preparar un compuesto de formula 6 a partir del compuesto de formula 5,
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en la que OR6 es un grupo saliente;
(e) fluoracion del compuesto de formula 6 a un compuesto de formula 7; y
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(f) desproteger el compuesto de formula 7 para obtener la clofarabina.
El metodo segun la presente invencion se resume esquematicamente en la figura 5. A continuacion, la numeracion de los compuestos corresponde a la nomenclatura utilizada en la figura 5. La 2-cloroadenosina (III) se obtiene mediante una reaccion de transglicosilacion enzimatica entre la 2-cloroadenina (II) y cualquier nucleosido que contenga ribosa, preferiblemente uridina (I) (ya que es facilmente soluble y facilmente accesible) usando enzimas tales como preferiblemente purina nucleosido fosforilasa (PNP) y uridina fosforilasa (UP). Esta reaccion es reversible. Para desplazar el equilibrio hacia el producto (III), se usa un exceso de uridina de 1.5 a 5 equivalentes, preferiblemente 3.3. La reaccion se puede llevar a cabo a una temperatura de 40 a 70°C, preferiblemente a una temperatura de 58 a 61 °C.
Debido a la estereoespecificidad de la transglicosilacion enzimatica, el unico producto de la glicosilacion es el anomero p (III). La 2-cloroadenosina se puede purificar a partir de los reactivos de partida (I), (II) y uracilo (subproducto), por ejemplo, usando cromatografia preparativa a baja presion. Por lo general, se eligieron las condiciones que permitian retener 2-cloroadenosina por el sorbente, mientras que la gran mayoria de impurezas no se retenian en la columna. Esto permitio simplificar el procedimiento de purificacion, comprendiendo solo etapas de "aplicacion" y "lavado".
La 2-cloroadenosina obtenida es preferiblemente benzoilada con cloruro de benzoilo en presencia de piridina. En esta reaccion, el cloruro de benzoilo se puede emplear en una cantidad que varia desde 1.8 a 2.5 equivalentes, preferiblemente 2.3 equivalentes, en base al compuesto de triol de formula (III). La reaccion se puede llevar a cabo a una temperatura de -10 a 20°C, preferiblemente a una temperatura de 0 a 5°C.
Como subproducto, se puede formar hasta un 35% de 2’,3’,5’-tri-0-benzoil-2-cloroadenosina (IV). Sin embargo, la presencia de este subproducto no interfiere con la posterior etapa de isomerizacion y tampoco se puede separar
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facilmente durante la cristalizacion del derivado 3’,5’-di-O-benzoilo. De este modo, casi la cantidad total del compuesto de partida 2-cloroadenosina finalmente da como resultado la formacion del derivado 3’,5’-di-O-benzoilo.
Posteriormente, se lleva a cabo una isomerizacion del isomero 2’,5’-di-0-benzoilo (V) al isomero 3’,5’-di-O-benzoilo (VI). La migracion del grupo benzoilo preferido de la posicion 2’ a la posicion 3' en los nucleosidos establecidos en la tecnica (vease, entre otros, Maruyama, T. et al. (l999) Chem. Pharm. Bull. 47, 966-970). Preferiblemente, la reaccion de isomerizacion se lleva a cabo por ebullicion en metanol durante 40-45 horas con agitacion vigorosa. Los cristales resultantes obtenidos despues de una filtracion en caliente de la mezcla de reaccion tienen una pureza > 98% (HPLC), mientras que casi todas las impurezas permanecen en el licor madre, a partir de las cuales se puede aislar la 2-cloroadenosina despues de la repeticion del procedi miento.
La sulfonilacion posterior del compuesto de formula VI se realiza por tratamiento con Tf2O usando piridina como una base. En esta reaccion, el anhidrido triflico se puede emplear en una cantidad que varia desde 1.3 a 2.0 equivalentes, preferiblemente 1.6 equivalentes, con respecto al compuesto de formula (Vl). El solvente puede ser un solvente organico, tal como acetonitrilo, tetrahidrofurano, diclorometano, cloroformo, preferiblemente diclorometano. La reaccion se puede llevar a cabo a una temperatura de -20 a 30°C, preferiblemente a una temperatura de -10 a 0°C.
En la etapa siguiente, el fluoroderivado (VIII) se puede obtener por tratamiento del triflato (VII) con agentes de fluoracion, tales como NEt3*3HF, TBAF o TBAF*(f-BuOH)4, preferiblemente NEt3*3HF, por ejemplo, usando diisopropiletilamina como base. El solvente puede ser, por ejemplo, acetato de etilo, tetraclorometano, tolueno, acetonitrilo, preferiblemente tolueno. La reaccion se puede llevar a cabo a una temperatura de 0 a 100°C, preferiblemente a una temperatura de 35 a 40°C. La clofarabina protegida obtenida se puede cristalizar a partir de una mezcla de acetato de etilo y metanol. Bajo las condiciones anteriores, el rendimiento del producto de reaccion despues de la cristalizacion es de aproximadamente el 60%.
Finalmente, la clofarabina protegida se desprotege bajo condiciones suaves. Estas condiciones suaves (30 min a 30°C) permiten llevar a cabo la reaccion sin reacciones secundarias. El benzoato de metilo formado se separa por extraccion con cloruro de metileno, y la clofarabina, contenida en la fase acuosa, se purifica usando cromatografia preparativa a baja presion seguida de cristalizacion. La clofarabina obtenida tiene una alta pureza sin cantidades detectables de impurezas. El rendimiento global de clofarabina es de aproximadamente 30-40%.
La invencion se describe adicionalmente mediante las figuras y los siguientes ejemplos, que son unicamente con el proposito de ilustrar realizaciones especificas de esta invencion, y no deben interpretarse como limitantes del tema reivindicado de ninguna manera.
EJEMPLOS
Ejemplo 1a: Preparacion de 2-cloroadenosina (III) a partir de 2-cloroadenina y uridina
Se disolvieron 400 g de uridina y 150 g de KH2PO4 con agitacion en una mezcla de agua (52 l) y DMSO (1.8 l) a 58- 61°C. A la solucion resultante se le adiciono una primera porcion (0.75 l) de una solucion preparada a partir de 2- cloroadenina (85 g), agua (7 l) y KOH (120 g). El pH de la mezcla resultante se ajusto a 7.1-7.2 con solucion acuosa de KOH. Se adicionaron soluciones de uridina fosforilasa y purina nucleosido fosforilasa con agitacion a 58-61°C. La segunda porcion restante de la solucion de 2-cloroadenina se adiciono sucesivamente con agitacion durante un periodo de 3 horas a la mezcla de reaccion a 58-61 °C manteniendo el pH en el intervalo de 7.1-7.2 con solucion acuosa de HCl. Despues, la mezcla de reaccion se agito durante 1 hora a 58-61°C, y se adiciono NaOH para ajustar el pH 11.
La solucion resultante que contiene 2-cloroadenosina se purifico por medio de cromatografia preparativa, seguido por aislamiento del producto que implicaba cristalizacion en agua, produciendo 120 g del compuesto base. La pureza tipica de 2-cloroadenosina fue > 99%, y el rendimiento sobre la base de 2-cloroadenina fue > 85%.
Ejemplo 1b: Preparacion de 2-cloroadenosina (III) a partir de 2-cloroadenina y guanosina
Se disolvieron 229 g de guanosina y 75 g de KH2PO4 con agitacion en una mezcla de agua (52 l) y DMSO (1.8 l) a 58-61°C. A la solucion resultante, se le adiciono una primera porcion (0.75 l) de una solucion preparada a partir de 2- cloroadenina (42 g), agua (7 l) y KOH (60 g). El pH de la mezcla resultante se ajusto a 7.1-7.2 con solucion acuosa de KOH. Se adiciono una solucion de purina nucleosido fosforilasa con agitacion a la mezcla de reaccion a 58-61°C. La segunda porcion restante de la solucion de 2-cloroadenina se adiciono sucesivamente con agitacion durante un periodo de 3 horas a la mezcla de reaccion a 58-61 °C manteniendo el pH en el intervalo de 7.1-7.2 con solucion acuosa de HCl. Despues, la mezcla de reaccion se agito durante 1 hora a 58-61°C, y se adiciono NaOH para ajustar el pH 11.
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La solucion resultante que contiene 2-cloroadenosina se purifico mediante cromatografia en columna de fase reversa de baja presion, seguido por aislamiento del producto que implicaba cristalizacion en agua, produciendo 53 g del compuesto base. La pureza tipica de 2-cloroadenosina fue > 99%, y el rendimiento sobre la base de 2- cloroadenina fue > 70%.
Ejemplo 2: Benzoilacion de 2-cloroadenosina
Se enfrio una solucion de 2-cloroadenosina (750 g) en piridina (7.5 l) a -5-0°C. Despues, se adiciono lentamente a la mezcla de reaccion una solucion de cloruro de benzoilo (720 g) en acetonitrilo (1440 ml) con agitacion y enfriamiento. Por consiguiente, la temperatura interna de la mezcla de reaccion no debe ser superior a 5°C. La mezcla se incubo durante 30 min en las mismas condiciones. A continuacion, los solventes se evaporaron a presion reducida a una temperatura de 60°C. El residuo se disolvio en ChhCL. y se lavo sucesivamente con solucion acuosa de H2SO4 1 M, solucion acuosa saturada de NaHCO3, y agua. La fase organica se evaporo a presion reducida para obtener una mezcla de 2-cloro-9-(2’,5’-di-0-benzoil-p-D-ribofuranosil)-adenina y 2-cloro-9-(3’,5’-di-O-benzoil-p-D- ribofuranosil)-adenina (ambos juntos aproximadamente 65% en total por HPLC), asi como 2’,3’,5’-tri-O-benzoil-2- cloroadenosina (aproximadamente 30% por HPLC).
Ejemplo 3: Isomerizacion de 2-cloro-9-(2’,5’-di-O-benzoil-p-D-ribofuranosil)-adenina (V) a 2-cloro-9-(3’,5’-di-O- benzoil-p-D-ribofuranosil)-adenina (VI).
La mezcla de 2-cloro-9-(2’,5’-di-O-benzoil-p-D-ribofuranosil)-adenina y 2’,3’,5’-tri-O-benzoil-2-cloroadenosina como se prepara en el ejemplo 2 a 25 l de MeOH. La mezcla resultante se calento a reflujo durante 40-45 horas con agitacion vigorosa. Despues, la mezcla se filtro en caliente a vacio y la torta de filtracion se lavo con MeOH. El filtrado que contiene 2’,3’,5’-tri-O-benzoil-2-cloroadenosina y 2-cloro-9-(2’,5’-di-O-benzoil-p-D-ribofurano-sil)-adenina se condujo a la repeticion del procedimiento con el fin de obtener 2-cloroadenosina por hidrolisis. El solido se seco a vacio a 50°C para obtener 880 g de 2-cloro-9-(3’,5’-di-O-benzoil-p-D-ribofuranosil)-adenina con una pureza por HPLC > 98%.
Ejemplo 4: Preparacion de 2-cloro-9-(3’,5’-di-O-benzoil-2’-O-trifluorometilsulfonyl-p-D-ribofuranosil)-adenina (VII)
Se suspendio 2-cloro-9-(3’,5’-di-O-benzoil-p-D-ribofuranosil)-adenina (880 g) en una mezcla de piridina (0.8 l) y CH2Cl2 (8 l). En atmosfera de N2, la solucion de anhidrido trifilico (455 ml) en CH2Cl2 (1500 ml) se adiciono lentamente a la mezcla de reaccion con agitacion y enfriamiento a -10-0°C. La mezcla de reaccion se incubo durante 30 min en las mismas condiciones. A continuacion, se adiciono solucion acuosa saturada de NaHCO3 con agitacion hasta que el pH de la mezcla resultante se ajusto a 7. La fase organica se separo, se lavo con agua y se evaporo a presion reducida para producir 1000 g (rendimiento del 95%) del producto base, que tiene una pureza por HPLC > 95%.
Ejemplo 5: Preparacion de 2-cloro-9-(3’,5’-di-O-benzoil-2’-desoxi-2’-fluoro-p-arabinofuranosil)-adenina (VIII)
Se suspendio 2-cloro-9-(3’,5’-di-O-benzoil-2’-O-trifluorometilsulfonyl-p-D-ribofuranosil)-adenina como se preparo en el ejemplo 4 en 5 litros de tolueno. Se adicionaron sucesivamente N, N-diisopropiletilamina (350 ml) y trihidrofluoruro de trietilamina (1.2 l) con agitacion. La mezcla de reaccion se agito durante 48 horas a 35-40°C y se evaporo a presion reducida. El residuo se trato con acetato de etilo y se filtro. Se adiciono solucion acuosa saturada de NaHCO3 al filtrado con agitacion hasta que el pH de la mezcla resultante se ajusto a 7. La fase organica se separo, se lavo con agua y se evaporo a presion reducida. El residuo se disolvio en metanol (1.5 l) mientras se agitaba a 60°C. La solucion obtenida se mantuvo a 2-6°C durante 2-3 horas hasta precipitacion completa. El precipitado formado se filtro, se lavo con metanol y se seco para producir 540 g (60% de rendimiento) del producto base, con una pureza por HPLC de > 95%.
Ejemplo 6: Preparacion de 2-cloro-9-(2’-desoxi-2’-fluoro-p-D-arabinofuranosil)-adenina (esto es, clofarabina)
Se suspendio 2-cloro-9-(3’,5’-di-O-benzoil-2’-desoxi-2’-fluoro-p-D-arabinofuranosil)-adenina como se preparo en el ejemplo 5 en 1.5 l de metanol. Se adicionaron 30 ml de una solucion metanolica de MeONa al 10% y la mezcla de reaccion se agito durante 30 min a 30°C. Despues, se adicionaron agua (1.5 l) y CH2Cl2 (1.5 l) a la mezcla de reaccion. Despues de agitar durante 10 minutos, la fase acuosa se separo y se evaporo bajo presion reducida hasta un volumen de aproximadamente 1.5 l. La solucion resultante que contenia clofarabina se purifico por medio de cromatografia en columna preparativa a baja presion, seguido por aislamiento del producto que implicaba cristalizacion en una mezcla agua/acetona, produciendo 260 g del compuesto base. La pureza tipica de la clofarabina fue > 99.9%, y el rendimiento global (despues de 6 etapas) fue del 32%.

Claims (6)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Metodo para la produccion de clofarabina, que comprende:
    (a) preparar 2-cloroadenosina mediante transglicosilacion enzimatica entre 2-cloroadenina y un compuesto de formula 1,
    5
    imagen1
    en la que R1 es purina o base de pirimidina de formula 2 o formula 3, respectivamente,
    imagen2
    en la que R2 y R3 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en -H, -NH2, -OH, y -CH3; y R4 se selecciona del grupo que consiste en -H y -CH3;
    10 (b) proteger parcialmente los grupos hidroxilo de 2-cloroadenosina para obtener una mezcla de un compuesto de
    formula 4 y un compuesto de formula 5,
    imagen3
    en la que R5 es independientemente un grupo protector de hidroxilo;
    (c) isomerizar el compuesto de formula 4 en el compuesto de formula 5;
    15 (d) preparar un compuesto de formula 6 a partir del compuesto de formula 5,
    imagen4
    en la que OR6 es un grupo saliente;
    (e) fluoracion del compuesto de formula 6 a un compuesto de formula 7; y
    imagen5
    5 (f) desproteger el compuesto de formula 7 para obtener la clofarabina.
  2. 2. El metodo de la reivindicacion 1, en el que la transglicosilacion en la etapa (a) se lleva a cabo usando purina nucleosido fosforilasa o una combinacion de purina nucleosido fosforilasa y uridina fosforilasa.
  3. 3. El metodo de la reivindicacion 1 o 2, en el que la fluoracion en la etapa (e) se lleva a cabo usando un agente de fluoracion.
    10 4. El metodo de la reivindicacion 3, en el que el agente de fluoracion se selecciona del grupo que consiste en acido
    fluorhidrico y una mezcla de acido fluorhidrico y una base de Lewis organica.
  4. 5. El metodo de la reivindicacion 4, en el que la base de Lewis organica es una amina.
  5. 6. El metodo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que R1 es una base de pirimidina que representa uridina.
    15 7. El metodo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que R5 es un grupo protector de hidroxilo que
    representa benzoilo.
  6. 8. El metodo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que OR6 es un grupo saliente que representa trifluorometanosulfonato.
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Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3529254B1 (en) * 2016-11-03 2023-02-22 Laurence I. Wu Prodrugs of clofarabine
CN107056860A (zh) * 2017-01-20 2017-08-18 南京海辰药业股份有限公司 2－肼基腺苷及其制备方法
CN109020974B (zh) * 2018-11-02 2021-01-05 哈尔滨商业大学 5′-噻吩甲酰酯-3′-脱氧腺苷的合成方法及其应用
CN113292620B (zh) * 2021-05-24 2022-09-13 神隆医药（常熟）有限公司 氯法拉滨中间体3’,5’-二-o-苯甲酰基-2-氯腺苷制备的改善工艺
CN117467726B (zh) * 2023-12-27 2024-04-16 天津凯莱英生物科技有限公司 一种嘌呤核苷的制备方法

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5034518A (en) 1989-05-23 1991-07-23 Southern Research Institute 2-fluoro-9-(2-deoxy-2-fluoro-β-D-arabinofuranosyl) adenine nucleosides
GB8920534D0 (en) * 1989-09-11 1989-10-25 Wellcome Found Antiviral compounds
WO2001060383A1 (en) 2000-02-18 2001-08-23 Southern Research Institute METHODS FOR SYNTHESIZING 2-CHLORO-9-(2-DEOXY-2-FLUORO-β-D-ARABINOFURANOSYL)-9H-PURIN-6-AMINE
JP4593917B2 (ja) 2001-08-02 2010-12-08 アイレックス オンコロジー， インコーポレイテッド プリンヌクレオシドを調製する方法
CN101265284B (zh) * 2008-05-07 2011-04-27 深圳万乐药业有限公司 氯法拉滨的合成方法
CN102311472B (zh) * 2010-07-09 2014-09-03 神隆(昆山)生化科技有限公司 2-氯-9-(2’-脱氧-2’-氟-β-D-阿拉伯呋喃糖基)-腺嘌呤的制备
CN101891788B (zh) * 2010-07-23 2012-08-08 上海医药集团股份有限公司 一种氯法拉滨及其中间体化合物的制备方法
CN102167716B (zh) * 2011-03-22 2013-09-25 福州海王福药制药有限公司 氯法拉滨的合成方法及其中间体和中间体的制备方法
WO2014177585A2 (en) 2013-04-29 2014-11-06 Plasmia Biotech, S.L Biocatalytic production of nucleoside analogues as active pharmaceutical ingredients

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