ES2640353T3 - Dispositivo para análisis microbiológico - Google Patents

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Abstract

Un conjunto que comprende soportes y un dispositivo para el análisis microbiológico de dichos soportes, de tal manera que dichos soportes están configurados para contener microorganismos marcados por un agente fluoróforo, incluyendo dichos soportes un soporte (41) en el que están presentes dichos microorganismos, de modo que dicho agente está configurado para, al contacto con dichos microorganismos, absorber energía luminosa con un espectro de absorción (53) que tiene una cresta (53') en una longitud de onda de absorción predeterminada (λ2), y para liberar esa energía emitiendo luz fluorescente con un espectro de emisión (54) que tiene una cresta (54') en una longitud de onda de emisión predeterminada (λ3), distinta de dicha longitud de onda de absorción (λ2), de tal manera que dicho dispositivo comprende medios de iluminación (3), configurados para iluminar dicho soporte (41) al objeto de que dichos microorganismos marcados emitan, en respuesta a la luz de excitación emitida por esos medios de iluminación (3), luz con dicho espectro de emisión (54), caracterizado por que el espectro (55) de la luz de excitación que llega de los medios de iluminación (3) comprende una cresta (55') en una longitud de onda de excitación predeterminada (λ1) distinta de dichas longitudes de onda de absorción (λ2) y de emisión (λ3) de dicho agente fluoróforo, de modo que dicha longitud de onda de absorción (λ2) está situada entre dichas longitudes de onda de excitación (λ1) y de emisión (λ3), con una diferencia predeterminada entre las longitudes de onda de excitación (λ1) y de absorción (λ2), en virtud de lo cual se facilita la discriminación de la luz emitida por dicho agente fluoróforo de dichos microorganismos marcados presentes en dicho soporte, de la luz que llega procedente de los medios de iluminación (3); y por que los medios de iluminación (3) tienen una dispersión espectral no despreciable y no hay ningún filtro de entrada entre los medios de iluminación (3) y dicho soporte.

Description

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DESCRIPCION
Dispositivo para analisis microbiologico
La presente invencion se refiere a un dispositivo para el analisis microbiologico de soportes que pueden contener microorganismos, con el fin de detectar la presencia o ausencia de esos microorganismos.
Una manera de analizar tales soportes consiste en detectar la presencia de los microorganismos mediante el analisis de la fluorescencia emitida por esos microorganismos una vez que han sido marcados con lo que se ha referido como marcadores fluorogenicos o fluoroforos.
Estos marcadores tienen la particularidad de emitir fluorescencia unicamente cuando han sido activados de antemano por una enzima contenida en los microorganismos.
Estos marcadores comprenden, generalmente, un grupo fluoroforo asf como un grupo capaz de ocultar o evitar que se muestre la fluorescencia del grupo fluoroforo. Cuando estan presentes los microorganismos, el efecto de la enzima de los mismos consiste en modificar ese segundo grupo con el fin de que la fluorescencia del primer grupo pueda ser detectada.
De esta forma, como se ilustra por los espectros 53 y 54 de la Figura 7, cuando los microorganismos asf marcados son sometidos a una luz de excitacion apropiada, el grupo fluoroforo es capaz de absorber energfa luminosa con un espectro de absorcion 53 cuya cresta 53' se encuentra en una longitud de onda X2, y de liberar esa energfa en la forma de un espectro de emision fluorescente caractenstico 54 cuya cresta 54' se encuentra en una longitud de onda X3, distinta de X2.
Para observar la fluorescencia emitida por los microorganismos en presencia de tales marcadores, y como se ilustra en la Figura 9, se conocen ya dispositivos (integrados en microscopios) para el analisis microbiologico que comprenden medios de iluminacion para emitir la luz de excitacion y cuyo espectro 50, con una forma de distribucion gaussiana, tiene una cresta 50' en una longitud de onda X1 que se escoge igual a la longitud de onda X2 para excitar el fluoroforo con la suficiente energfa como para que este emita, en presencia de microorganismos, luz con su espectro de emision 54.
Semejante dispositivo esta provisto de un filtro de entrada, dispuesto entre los medios de iluminacion y el soporte con el fin de iluminar, tal como el filtro de paso de banda cuyo espectro 51 se ilustra en la Figura 9, de manera que este filtro tiene una banda de paso muy estrecha centrada en la longitud de onda X1, a fin de seleccionar, dada la amplia anchura espectral de los medios de iluminacion correspondientes al espectro 50, unicamente la longitud de onda que resulta de utilidad para excitar el fluoroforo apropiadamente en la energfa deseada.
Este dispositivo tambien comprende un filtro dispuesto entre el soporte para analizar y la zona para ver la luz que llega desde el soporte, de tal manera que el filtro se ilustra por el espectro 52 de la Figura 9 (aqrn, un filtro de paso de banda con una banda de paso estrecha y centrada en la longitud de onda X2), a fin de dejar pasar unicamente la luz que se emite por el fluoroforo en respuesta a la luz de excitacion, de la que se eliminan por filtrado todo el resto de longitudes de onda extranas.
Dispositivos que tienen tal disposicion se describen, por ejemplo, en la Patente de los EE.UU. N° US 7.397.602. La Solicitud PCT N° 02/061405 describe un dispositivo de mano portatil con esta clase de disposicion, pero para discriminar entre tejido normal y tejido enfermo de un paciente.
La invencion se refiere a la provision de un dispositivo para llevar a cabo, como el dispositivo de la tecnica anterior, la deteccion de la fluorescencia pero que es tanto mas economico como mas simple, al tiempo que proporciona un rendimiento que es igual de bueno.
El corrimiento espectral entre las crestas de los espectros de excitacion y de absorcion con la longitud de onda de absorcion X2, que esta, de este modo, situada entre las longitudes de onda de excitacion X1 y de emision X3, hace posible, ventajosamente, situar entre esas longitudes de onda de absorcion y de emision la porcion del espectro de la luz de excitacion situada mas alla de X1, a fin de obtener luz que tiene alta energfa a la longitud de onda X2 para excitar el fluoroforo de manera que este emita luz por fluorescencia, y que tenga un pequeno solapamiento del espectro de excitacion con el espectro de emision a la longitud de onda X3 (y a las longitudes de onda vecinas), a fin de que la luz que llega desde los medios de iluminacion y que se refleja en el soporte que se ha de analizar no provoque una interferencia parasita significativa con la luz emitida por el agente fluoroforo en presencia de microorganismos, de tal modo que se facilita la discriminacion de la luz emitida por el agente fluoroforo de la que llega de los medios de iluminacion.
Mas particularmente, al ser, de esta forma, el solapamiento entre el espectro de excitacion y el espectro de emision pequeno en virtud del corrimiento espectral del dispositivo de acuerdo con la invencion, la cresta del espectro de emision del fluoroforo esta mas desprendida con respecto a la cresta del espectro de la luz de excitacion, y se mejora considerablemente la relacion entre la energfa parasita en la longitud de onda de emision del fluoroforo (que tiene su origen en la luz emitida por los medios de iluminacion en esa longitud de onda) y la energfa que llega
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realmente de la fluorescencia los microorganismos marcados.
Es asf posible detectar facilmente en el soporte los puntos brillantes correspondientes a los microorganismos marcados, con el contraste suficiente para que sean claramente observables y, en particular, a simple vista.
El corrimiento espectral hace posible, de esta forma, incluso para medios de iluminacion que tienen una dispersion espectral no despreciable (tal como la que se ilustra por los espectros 50 y 55 en las Figuras 7 y 9), prescindir de disponer el filtro de entrada de los dispositivos de la tecnica anterior, sin que sea necesario, sin embargo, reemplazar tales medios de iluminacion por otros medios de iluminacion cuya dispersion espectral sea mas baja (tales como, por ejemplo, un laser, que es, en general, extremadamente costoso).
Ello hace, de esta forma, posible reducir significativamente el coste de fabricacion de semejante dispositivo, al tiempo que se minimizan las perdidas de energfa luminosa, puesto que la presencia de un filtro de entrada, en particular, un filtro con una banda de paso estrecha, conduce necesariamente a una cafda sustancial en la entrega de energfa (y, por consiguiente, en la calidad de la luz que llega al soporte que se ha de iluminar) para semejante dispositivo.
Como las perdidas de energfa luminosa son menores en el dispositivo del conjunto de acuerdo con la invencion, es, asf, posible, para un mismo consumo de energfa electrica, iluminar superficies de soporte para su analisis (tales como las superficies de membranas de filtro microporosas, por ejemplo) mas grandes que en la aplicacion al microscopio del dispositivo de la tecnica anterior.
De acuerdo con caractensticas que son preferidas por razones de simplicidad y de conveniencia, tanto para la fabricacion como para el uso:
- dicha longitud de onda de excitacion ( Xi) es mas corta que dicha longitud de onda de absorcion (X2), la cual es, a su vez, mas corta que dicha longitud de onda de emision (X3);
- dicho espectro de la luz de excitacion comprende un pico de intensidad luminosa maxima centrado en dicha longitud de onda de excitacion (Xi);
- la diferencia entre dichas longitudes de onda de excitacion (Xi) y de absorcion (X2) es menor que la diferencia entre dichas longitudes de onda de absorcion (X2) y de emision (X3) de dicho agente fluoroforo;
- dicho dispositivo tambien comprende una ventana para observar la luz emitida por dicho agente fluoroforo, provista de un filtro que se ha configurado para dejar que pasen las longitudes de onda mas largas y cuya longitud de onda de corte esta situada entre dicha longitud de onda de absorcion (X2) y dicha longitud de onda de emision
(X3);
- dichos medios de iluminacion comprenden al menos una base sobre la que se monta al menos un grupo de fuentes de luz, de tal modo que dichas fuentes de ese grupo se encuentran uniformemente separadas las unas de las otras para formar un conjunto geometricamente ordenado de iluminacion para dicho soporte;
- dichos medios de iluminacion comprenden dos de dichas bases, inclinadas la una con respecto a la otra en la direccion de una posicion predeterminada para la recepcion de dicho soporte en el dispositivo;
- dichas fuentes de luz son diodos electroluminiscentes.
Las caractensticas y ventajas de la invencion se pondran de manifiesto por la siguiente descripcion, dada a modo de ejemplo preferido pero no limitativo, con referencia a los dibujos que se acompanan, en los cuales:
- la Figura 1 es un diagrama de un dispositivo de un conjunto de acuerdo con la invencion;
- la Figura 2 es una vista en perspectiva de ese dispositivo, al lado del cual se ha representado una unidad de filtro para el analisis en el interior del dispositivo;
- las Figuras 3 y 4 son, respectivamente, una vista en perspectiva tomada desde debajo, y una vista en corte y en alzado, tomada sobre un plano meridiano de simetna del dispositivo;
- la Figura 5 es una vista en perspectiva de una de las dos placas de circuito impreso de ese dispositivo, sobre la que se fijan dos grupos de diodos electroluminiscentes, cada uno de los cuales emite luz en una longitud de onda predeterminada;
- la Figura 6 es una vista en perspectiva de otra realizacion del dispositivo de un conjunto de acuerdo con la invencion;
- la Figura 7 ilustra los diagramas espectrales de diferentes miembros opticos de un dispositivo de un
conjunto de acuerdo con la invencion, asf como el diagrama espectral del agente fluoroforo que se utiliza con ese
dispositivo con el fin de marcar los microorganismos, con una escala comun de longitudes de onda a lo largo del eje
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- la Figura 8 es un diagrama de una parte de una realizacion del dispositivo de un conjunto de utilidad para la comprension de la invencion; y
- la Figura 9 ilustra diagramas espectrales similares a los de la Figura 7, pero para un dispositivo de acuerdo con la tecnica anterior previamente descrita.
Se proporcionara a continuacion una descripcion de una realizacion preferida del dispositivo de un conjunto de acuerdo con la invencion, con la ayuda de las Figuras 1 a 5, antes de detallar su modo de funcionamiento con la ayuda de los diagramas espectrales ilustrados en la Figura 7.
El dispositivo 1 ilustrado en las Figuras 1 a 5 comprende una caja 2, medios de iluminacion 3 constituidos por dos miembros de iluminacion 4, un cajon deslizante 5 y una ventana de observacion 7.
La caja es de una forma general paralelepipedica y tiene una pared superior 10 y cuatro paredes laterales 11 a 14, de tal manera que una parte de la pared 14 no se ha mostrado deliberadamente con el fin de mostrar el interior del dispositivo.
La ventana de observacion 7 esta, aqm, constituida por un filtro de paso bajo 6 (del que se ha de decir que permite el paso de las frecuencias mas bajas, y, por tanto, de las longitudes de onda mas largas), de tal manera que se ha formado una abertura 9 en la pared superior 10 de la caja 2 para recibir ese filtro 6 en su interior.
Como se observara mas adelante, el interior de esta caja 2, delimitado por las paredes 10 a 14 y 30, constituye una camara de analisis aislada de la luz del entorno y en cuyo interior es recibido el soporte que se va a analizar.
El soporte que se ha de analizar es, aqm, una membrana microporosa 41 perteneciente a una unidad de filtro 40, aqm, una unidad comercializada por la Millipore© bajo la marca comercial Milliflex®. Esta membrana 41 tiene un diametro de 55 mm y esta rodeada por un cuerpo 42 de la unidad de filtro.
La membrana 41 aqm utilizada es de ester de celulosa y tiene un tamano de los poros configurado para retener los microorganismos cuya presencia se desea detectar, de la forma mas frecuente entre 0,10 y 100 micras.
El cajon 5 tiene un cuerpo 30, un collar 31 y una orejeta de agarre 32.
Dentro del cuerpo 30 se ha formado una cavidad cilmdrica 33 dispuesta para recibir una unidad de filtro 40.
Se describiran a continuacion los medios de iluminacion 3 con la ayuda de las Figuras 3 a 5.
Estos medios 3 comprenden dos miembros de iluminacion independientes 4.
Cada miembro 4 comprende una montura 20 de seccion trapezoidal, una placa de circuito impreso 21 sobre la que se disponen dos grupos 27 y 28 de diodos 22 y 23, un difusor 24 que cubre estos diodos, y dos pantallas negras 26, situadas entre los bordes de la placa 21 y los del difusor 24.
Las monturas 20 se fijan dentro de la caja 2, en la pared 10 de esa caja, en tanto que las placas 21 se fijan a las monturas 20, sobre las caras inclinadas de las mismas, que estan mas lejos de las dispuestas apoyadas en la pared 10, de tal manera que esas placas estan inclinadas la una hacia la otra en la direccion de la zona de recepcion 33 para el soporte 41.
Cada montura 20 se ha proporcionado, de esta forma, de tal manera que cada placa 21 tiene una inclinacion A (Figura 1) de 45° con respecto a la pared 10 y a la posicion predeterminada que ocupa la membrana 41, cuando la unidad 40 se encuentra dentro del alojamiento 33 del dispositivo (Figura 1).
Los bordes superiores 25 de las placas 21 se encuentran a una distancia el uno del otro igual a 100 mm, al tiempo que esos bordes 25 se encuentran a una distancia de 23 mm de la pared 10.
Las cuspides de los diodos electroluminiscentes 22 y 23 estan situadas a una distancia de 15 mm de los difusores 24.
Estos difusores 24 estan, aqm, hechos a partir de una placa de vidrio, una de cuyas caras ha sido sometida a abrasion con arena (la cara que esta situada mirando a los diodos).
En cada placa de circuito impreso, y segun se ilustra en la Figura 5, se ha dispuesto un primer grupo 27 de diodos, constituido por dieciseis diodos 22, asf como un segundo grupo 28 de diodos, constituido por cuatro diodos 23.
Los diodos 22 se encuentran uniformemente separados los unos de los otros y estan dispuestos en cuatro filas equidistantes de cuatro diodos, de tal manera que cada diodo 22 esta situado a una distancia de 16 mm de los diodos 22 directamente adyacentes al mismo. Este grupo 27 constituye, asf, un conjunto geometricamente ordenado de diodos que hace posible iluminar uniformemente la membrana 41 cuando esta se dispone dentro de la caja 2 en
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su posicion predeterminada, de tal manera que el centro 29 de ese conjunto geometricamente ordenado esta situado a una altura H de 54,75 mm con respecto a esa posicion predeterminada (Figura 1).
Los diodos 23 se distribuyen en las cuatro esquinas de un cuadrado entrelazado en el centro del conjunto geometricamente ordenado de diodos 22, de tal manera que cada diodo 23 esta situado a una distancia de 32 mm de los dos diodos 23 adyacentes al mismo, y en el centro de un cuadrado en cuyas esquinas estan situados cuatro diodos 22 (Figura 5). El centro de este conjunto geometricamente ordenado coincide con el centro 29 del conjunto geometricamente ordenado constituido por los diodos 22.
Los diodos 22 son diodos de la comparna LUMILED®, comercializados bajo la referencia LXHL-PB01 y cuyo espectro de emision 55 se ilustra en la Figura 7, de tal modo que este espectro, con una forma de distribucion gaussiana, tiene una cresta 55' en la longitud de onda Xi de 470 nm, por lo que emite en azul.
Los diodos 23 son diodos de la misma comparna, comercializados bajo la referencia LXHL-PD01 y cuyo espectro de emision, que no se ilustra en los dibujos, es tambien de una forma de distribucion gaussiana y tiene una cresta en la longitud de onda de 625 nm, por lo que emite en rojo.
Estos diodos tienen un angulo solido de emision de 140° para un valor de intensidad relativa del 25%, y un angulo solido de emision de 90° para un valor de intensidad relativa del 60%.
Los diodos 23 tienen una potencia de emision sustancialmente cuatro veces mayor que la de los diodos 22, de tal modo que son cuatro veces menos numerosos que los diodos 22.
Los conjuntos geometricamente ordenados de diodos 22 y 23 estan entrelazados (es decir, alojados unos dentro de los otros) al objeto de obtener la luz mas homogenea posible en la unidad de filtro que se ha de iluminar, ya llegue la luz de los diodos 22 o de los diodos 23.
Cada grupo de diodos produce un espectro luminoso centrado en una longitud de onda predeterminada con el fin de ser capaz de excitar tipos predeterminados diferentes de fluoroforos.
Las pistas conductoras de cada placa 32 estan electricamente conectadas a una unidad de gobierno y control para el dispositivo (no mostrada).
Se describira a continuacion brevemente la preparacion de una muestra para su analisis.
Antes de la etapa de deteccion en sf, el operario recoge una muestra para analizar (que puede contener microorganismos) por filtracion a traves de una membrana 41 de una unidad 40.
Una vez que los microorganismos han sido filtrados y retenidos en la membrana, puede incluirse una etapa opcional de crecimiento de microorganismos en contacto con un medio de cultivo apropiado. Este medio de cultivo es, preferiblemente, un medio de gel sobre el que se deposita la membrana tras su filtracion. Esta etapa, que es opcional, permite la obtencion de colonias de cada uno de los microorganismos inicialmente filtrados, lo que aumenta el numero de celdas que detectar.
La membrana y los microorganismos que esta contiene se colocan entonces en contacto con una composicion destinada a hacer que las paredes de los microorganismos sean permeables, y se colocan entonces los marcadores fluoroforos al seno de la composicion de aporte de permeabilidad, a fin de entrar dentro de los microorganismos que se han de detectar.
Se proporcionara en lo que sigue una descripcion de la implementacion de la determinacion de la presencia o ausencia de microorganismos en una muestra asf preparada, basandose en el dispositivo del conjunto de acuerdo con la invencion.
En una primera fase, se tira del cajon 5 y el operario coloca la unidad de filtro 40 (que puede, cabe la posibilidad, cubrirse con una cubierta transparente, no ilustrada, a fin de proteger la membrana de la contaminacion exterior) dentro de la cavidad 33 de ese cajon. El cajon 5 es entonces empujado hasta que el collar 31 contacta a tope con la pared 13, de tal manera que la membrana 41 se dispone en su posicion predeterminada dentro de la caja 2, a fin de ser iluminada.
Dependiendo del fluoroforo que se utilice para marcar los microorganismos, el operario selecciona, a continuacion (por ejemplo, por medio de un conmutador, no ilustrado en los dibujos), los diodos correspondientes 22 o 23 para encenderlos (los diodos 22 en el ejemplo ilustrado), a fin de iluminar uniformemente la totalidad de la superficie de la membrana 41 y excitar con la longitud de onda adecuada el fluoroforo que sirvio para la marcacion.
Los difusores 24 asf como la distribucion espacial de los diodos sobre las placas 21 hace posible tener una iluminacion particularmente homogenea de toda la superficie de la membrana 41, cualquiera que sea el grupo de diodos que se utilice.
Como las placas 21 estan dispuestas una a cada lado de la abertura 9 que recibe el filtro 6, la luz que llega de la
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unidad de filtro 40, que es emitida en respuesta a la luz de excitacion procedente de los diodos, pasa a traves de ese filtro, como se ilustra en la Figura 1, de tal manera que es posible observar la respuesta luminosa de la membrana 41 a traves del filtro 6 a simple vista, o, si no, por medio de una camara.
Se detallara a continuacion la respuesta luminosa obtenida en presencia de microorganismos utilizando los diferentes diagramas espectrales ilustrados en la Figura 7.
En la Figura 7, el espectro 55 es de forma gaussiana y corresponde al espectro de la luz de excitacion (aqrn, el espectro producido por los diodos 232), el cual tiene un pico cuya cresta 55' correspondiente al valor de intensidad luminosa maxima se encuentra en una longitud de onda X1 igual a 470 nm.
Los espectros 53 y 54 se corresponden, respectivamente, con el espectro de absorcion y con el espectro de emision del fluoroforo escogido aqrn para marcar el microorganismo presente en la membrana.
El fluoroforo aqrn representado es el 5-6 CFDA (carboxi-fluorescema-di-acetato).
El espectro de absorcion 53 presenta una cresta 53' en la longitud de onda X2, mayor que X1, y el espectro de emision 54 tiene una cresta 54' en la longitud de onda X3, mayor que X2.
En el ejemplo ilustrado, X2 es igual a 492 nm y X3 es igual a 517 nm, de tal manera que la diferencia entre Xi y X2 es, aqrn, menor que la diferencia entre X2 y X3.
La longitud de onda de excitacion Xi se escoge exprofeso de manera que sea menor que X2, de tal modo que la cresta 55' del espectro 55 esta descentrada con respecto a la cresta 53' del espectro 53, en el lado opuesto con respecto al espectro 54. Este corrimiento se escoge a fin de que la luz que llega de los medios de iluminacion tenga la suficiente energfa para excitar el fluoroforo, sin que esa luz provoque una interferencia parasita significativa con la emitida por el fluoroforo en respuesta a esa luz de excitacion.
El espectro 56 es el del filtro 6 de la ventana de observacion, habiendose escogido su frecuencia de corte (aqrn, del orden de 550 nm) para dejar pasar esencialmente la luz emitida por el fluoroforo (espectro 54) y para detener la luz de longitudes de onda mas cortas, en particular, las que llegan de los diodos 22 tras reflejarse en la unidad 40.
Este filtro de salida (un filtro de color) es debilmente selectivo con el fin de permitir que retorne una cantidad suficiente de luz a los ojos del usuario, lo que proporciona una escena generalmente brillante y que es, asi, comoda de observar, al tiempo que garantiza un grado de contraste que se adecua a la observacion a simple vista.
Cuando la luz de excitacion que llega de los medios de iluminacion 3 ilumina la membrana 41 de la unidad de filtro 40, cada posicion de esa membrana que tiene microorganismos marcados por el fluoroforo se hace visible en la forma de un punto brillante de pequeno tamano (unos pocos cientos de micras), directamente observable a simple vista y que aparece en el filtro 6.
Los valores del angulo A y de la altura H proporcionan una manifestacion optima para la lectura de los puntos brillantes de la membrana 41, ya sea a simple vista o por medio de una camara.
Estos valores se han determinado aplicando una marca negra y una marca amarilla fluorescente a una membrana de control y buscando, para valores diferentes de ese angulo A y de esa altura H, las configuraciones A, H para las que es maximo el brillo de la banda fluorescente, a la vez que se minimiza el brillo parasito en la marca negra.
Se ha demostrado asi, de forma sorprendente, que el intervalo [40° - 50°] para el angulo A proporcionaba tanto una intensidad luminosa maxima para la marca fluorescente como practicamente una ausencia de luz parasita para la marca negra, por lo que se corresponde, de este modo, a un optimo en terminos de comodidad de lectura.
A fin de tener un cierto margen de seguridad por lo que respecta al juego a la hora de montar el dispositivo, es, asi, el valor promedio de 45° lo que se ha escogido aqrn.
Por lo que respecta al valor de altura H, este es una funcion del tamano del objeto que se ha de iluminar, y las diferentes configuraciones ensayadas han mostrado que, para una membrana de un diametro de 55 mm y para un intervalo de valores para el angulo A comprendido entre 40° y 50°, los mejores resultados se obtuvieron para un intervalo de alturas entre 39,75 mm y 69,75 mm. Similarmente, aqrn, es el valor promedio de 54,75 mm el que se escogio en este ejemplo.
El dispositivo tambien es adaptado, ajustando la altura H, para iluminar tipos de muestras distintos de las membranas y, generalmente, cualquier soporte configurado para contener microorganismos (ya sea sobre una superficie o en el seno de un volumen) y cuya presencia se desee detectar por fluorescencia.
Otra realizacion de este dispositivo se ha representado en la Figura 6.
Hablando en general, los mismos numeros de referencia, incrementados en 100, se utilizan para partes similares.
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El dispositivo 101 tiene las mismas caractensticas que el dispositivo 1, aparte de que carece del cajon 5 (aqm, la unidad de filtro 40 se ha situado directamente sobre una mesa, por ejemplo) y del hecho de que la ventana de observacion 107 esta constituida, aqm, por una tapa corrediza 108 de forma rectangular, dispuesta apoyada en la pared 110 de la caja 102, por cuatro filtros 106 a 106''', de manera que cada uno de los filtros esta alojado en una abertura correspondiente de la tapa corrediza 108.
Cada filtro optico es un filtro de paso bajo, por lo que permite el paso de las frecuencias inferiores (las longitudes de onda mas largas), y cuya frecuencia de corte es distinta de las demas frecuencias de corte.
La tapa corrediza 108 esta acoplada en un rail de gma (no mostrado) de ese dispositivo, a fin de ser capaz de situar cualquier filtro que se escoja de los cuatro filtros 106 a 106''' frente a la abertura 109 de la pared 110.
Es asf posible, dependiendo del fluoroforo escogido y de los diodos que se enciendan, seleccionar de entre los cuatro filtros disponibles el que tenga la frecuencia de corte mas adaptada (a fin de obtener, por ejemplo, el mejor contraste).
En una realizacion no ilustrada, el filtro 6 no es un filtro de paso bajo sino un filtro de paso de banda cuya banda de paso esta centrada en la longitud de onda %2-
En una realizacion ilustrada esquematicamente en la Figura 8, que es de utilidad para la comprension de la invencion, la cresta del espectro de los medios de iluminacion no necesariamente ha de estar localizada y, por tanto, se extiende a lo largo de un intervalo mas grande de longitudes de onda al utilizar, por ejemplo, como medios de iluminacion 203, en lugar de los diodos, una lampara 204 de luz policromatica asociada con un filtro de paso alto 234 configurado para permitir el paso de las frecuencias mas altas, es decir, de las longitudes de onda mas cortas, el cual es menos costoso que el filtro de paso de banda de la tecnica anterior, y cuya longitud de onda de corte Xc esta situada entre la longitud de onda de absorcion X2 y la longitud de onda de emision X3 (Figura 8).
Por ultimo, se apreciara que tal sistema de iluminacion puede tambien ser producido en diferentes versiones para muchas otras aplicaciones, tales como el analisis con microscopio, de tal modo que la configuracion geometrica del dispositivo para cada una de estas aplicaciones es, entonces, con arreglo a una version espedfica de la aplicacion en cuestion. El bastidor del dispositivo al que se fijan las bases 21 no tiene porque ser necesariamente una caja como la caja 2 ilustrada; puede ser, por ejemplo, un aro que rodea la optica de un microscopio.

Claims (9)

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    REIVINDICACIONES
    1. - Un conjunto que comprende soportes y un dispositivo para el analisis microbiologico de dichos soportes, de tal manera que dichos soportes estan configurados para contener microorganismos marcados por un agente fluoroforo, incluyendo dichos soportes un soporte (41) en el que estan presentes dichos microorganismos, de modo que dicho agente esta configurado para, al contacto con dichos microorganismos, absorber energfa luminosa con un espectro de absorcion (53) que tiene una cresta (53') en una longitud de onda de absorcion predeterminada (X2), y para liberar esa energfa emitiendo luz fluorescente con un espectro de emision (54) que tiene una cresta (54') en una longitud de onda de emision predeterminada (X3), distinta de dicha longitud de onda de absorcion (X2), de tal manera que dicho dispositivo comprende medios de iluminacion (3), configurados para iluminar dicho soporte (41) al objeto de que dichos microorganismos marcados emitan, en respuesta a la luz de excitacion emitida por esos medios de iluminacion (3), luz con dicho espectro de emision (54), caracterizado por que el espectro (55) de la luz de excitacion que llega de los medios de iluminacion (3) comprende una cresta (55') en una longitud de onda de excitacion predeterminada (X1) distinta de dichas longitudes de onda de absorcion (X2) y de emision (X3) de dicho agente fluoroforo, de modo que dicha longitud de onda de absorcion (X2) esta situada entre dichas longitudes de onda de excitacion (X1) y de emision (X3), con una diferencia predeterminada entre las longitudes de onda de excitacion (X1) y de absorcion (X2), en virtud de lo cual se facilita la discriminacion de la luz emitida por dicho agente fluoroforo de dichos microorganismos marcados presentes en dicho soporte, de la luz que llega procedente de los medios de iluminacion (3); y por que los medios de iluminacion (3) tienen una dispersion espectral no despreciable y no hay ningun filtro de entrada entre los medios de iluminacion (3) y dicho soporte.
  2. 2. - Un conjunto de acuerdo con la reivindicacion 1, caracterizado por que dicha longitud de onda de excitacion (X1) es mas corta que dicha longitud de onda de absorcion (X2), que, a su vez, es mas corta que dicha longitud de onda de emision (X3).
  3. 3. - Un conjunto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 y 2, caracterizado por que dicho espectro (55) de la luz de excitacion comprende un pico (55') de intensidad luminosa maxima centrado en dicha longitud de onda de excitacion (X1).
  4. 4. - Un conjunto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado por que la diferencia entre dichas longitudes de onda de excitacion (X1) y de absorcion (X2) es menor que la diferencia entre dichas longitudes de onda de absorcion (X2) y de emision (X3) de dicho agente fluoroforo.
  5. 5. - Un conjunto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado por que dicho dispositivo tambien comprende una ventana (7; 107) para observar la luz emitida por dicho agente fluoroforo, provista de un filtro (6; 106) que esta configurado para dejar que pasen las longitudes de onda mas larga y cuya longitud de onda de corte esta situada entre dicha longitud de onda de absorcion (X2) y dicha longitud de onda de emision (X3).
  6. 6. - Un conjunto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado por que dichos medios de iluminacion (3) comprenden al menos una base (21) sobre la que se monta al menos un grupo (27) de fuentes de luz (22), de tal manera que dichas fuentes (22) de ese grupo (27) estan uniformemente separadas unas de otras para constituir un conjunto geometricamente ordenado de iluminacion para dicho soporte (41).
  7. 7. - Un conjunto de acuerdo con la reivindicacion 6, caracterizado por que dichos medios de iluminacion (3) comprenden dos de dichas bases (21), inclinadas la una con respecto a la otra en la direccion de un emplazamiento predeterminado para la recepcion de dicho soporte (41) dentro del dispositivo.
  8. 8. - Un conjunto de acuerdo con la reivindicacion 7, caracterizado por que cada una de dichas bases (21) esta inclinada en un angulo (A) de entre 40° y 50° con respecto a dicho emplazamiento predeterminado para la recepcion de dicho soporte (41).
  9. 9. - Un conjunto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 8, caracterizado por que dichas fuentes de luz son diodos electroluminiscentes (22).
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