ES2631558T3 - Método para inducir resistencia a enfermedades en las plantas - Google Patents
Método para inducir resistencia a enfermedades en las plantas Download PDFInfo
- Publication number
- ES2631558T3 ES2631558T3 ES12719247.4T ES12719247T ES2631558T3 ES 2631558 T3 ES2631558 T3 ES 2631558T3 ES 12719247 T ES12719247 T ES 12719247T ES 2631558 T3 ES2631558 T3 ES 2631558T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- brassinosteroid
- plants
- natural
- analog
- citrus
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N43/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
- A01N43/02—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one or more oxygen or sulfur atoms as the only ring hetero atoms
- A01N43/04—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one or more oxygen or sulfur atoms as the only ring hetero atoms with one hetero atom
- A01N43/22—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one or more oxygen or sulfur atoms as the only ring hetero atoms with one hetero atom rings with more than six members
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N43/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
- A01N43/90—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having two or more relevant hetero rings, condensed among themselves or with a common carbocyclic ring system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N49/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, containing compounds containing the group, wherein m+n>=1, both X together may also mean —Y— or a direct carbon-to-carbon bond, and the carbon atoms marked with an asterisk are not part of any ring system other than that which may be formed by the atoms X, the carbon atoms in square brackets being part of any acyclic or cyclic structure, or the group, wherein A means a carbon atom or Y, n>=0, and not more than one of these carbon atoms being a member of the same ring system, e.g. juvenile insect hormones or mimics thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N65/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing material from algae, lichens, bryophyta, multi-cellular fungi or plants, or extracts thereof
- A01N65/08—Magnoliopsida [dicotyledons]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J73/00—Steroids in which the cyclopenta[a]hydrophenanthrene skeleton has been modified by substitution of one or two carbon atoms by hetero atoms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J9/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of more than two carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, coprostane
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Insects & Arthropods (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Cultivation Of Plants (AREA)
Abstract
La presente invención describe un método para la estimulación de la defensa natural y la inducción de resistencia a enfermedades en plantas, mediante la activación simultánea de genes relacionados con la ruta del ácido salicílico, ácido jasmónico/etileno y la respuesta de hipersensibilidad. La invención también contempla el uso de brasinosteroides para el tratamiento preventivo y curativo de las plantas contra las enfermedades causadas por patógenos. Además, incluye un método para la prevención y el tratamiento de la enfermedad Huanglongbing en los cítricos.
Description
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
DESCRIPCION
Metodo para inducir resistencia a enfermedades en las plantas Campo de la invencion
La presente invencion se refiere al campo de la biotecnologla agricola, especlficamente a la estimulacion de la defensa natural y a la induccion de resistencia a enfermedades en las plantas, para evitar o combatir las enfermedades causadas por patogenos.
Tecnica anterior
En las ultimas decadas se han realizado muchos estudios sobre las interacciones planta-patogeno, desde el punto de vista morfologico, fisiologico, bioqulmico y molecular. Sin embargo, los resultados obtenidos hasta la fecha no satisfacen las necesidades y el conocimiento de los principales grupos de investigacion del mundo y no se logra un alto rendimiento mediante una protection estable y eficiente de los cultivos. A pesar de las numerosas medidas adoptadas a nivel mundial para una proteccion integrada de los cultivos, se notifican anualmente grandes perdidas de cultivos de las enfermedades, que alcanzan el 80% de la production, especialmente en las situaciones en que se producen epidemias (Gao et al. (2000) Nature Biotechnol. 18: 1307-1310).
Las plantas y patogenos han coevolucionado durante millones de anos. Durante esta interaction, han surgido estrategias que permiten a las plantas reconocer potenciales patogenos invasores y desencadenar una defensa exitosa. Del mismo modo, los patogenos han desarrollado mecanismos que les permiten evadir y/o suprimir las respuestas de defensa de las plantas. La influencia de esta presion selectiva sobre las plantas ha llevado a la mejora de sus mecanismos de defensa. Como resultado, el exito del patogeno para causar la enfermedad, lejos de ser la regla es una exception (Staskawicz (2001) Plant Physiology 125: 73-76).
La perception de los elicitores especlficos y generales por las plantas no solo permite el reconocimiento de patogenos, sino que permite la transduction de senales para la activation de mecanismos de respuesta. Entre las diversas rutas de serialization activadas estan aquellas mediadas por intermedios tales como oxlgeno reactivo, acido salicllico, etileno y acido jasmonico. El cruce entre estas rutas de senalizacion de fitohormonas proporciona un potencial regulador que permite la activacion de una combination optima de respuestas dependiendo del patogeno especlfico. Tambien se activan la expresion de genes relacionados con la patogenicidad (PR) y la slntesis de compuestos antimicrobianos que son generalmente fitoalexinas, defensinas, fenolicos y flavonoides producidos para atacar directamente al patogeno (Baker et al. (1997) Science 276: 726-733).
Existen otros mecanismos de respuesta que operan en plantas, cuyos efectos persisten durante un periodo de tiempo relativamente largo despues de la infection. Se llaman: respuesta localizada adquirida y respuesta adquirida sistemica. La respuesta localizada adquirida se observa en un anillo de celulas, de 5-10 mm de espesor, sobre lesiones causadas por la respuesta hipersensible. Esta area se caracteriza por una gran acumulacion de protelnas relacionadas con la patogenesis, principalmente basicas (Fritig et al. (1998) Current Opinion of Immunology 10: 16-22) y la estimulacion de enzimas tales como metiltransferasas (Legrand et al. (1978) Planta 144: 101-108), la ruta del fenilpropanoide, que esta implicada en la produccion de antibioticos tales como la escopoletina, que no proporciona un ambiente apropiado para patogenos, impidiendo su diseminacion por toda la planta. La respuesta adquirida sistemica da a la planta un mayor nivel de resistencia contra una infeccion posterior del mismo patogeno. Se desarrolla no solo en los tejidos infectados, sino en toda la planta. Se caracteriza por la acumulacion de protelnas PR, particularmente acidas, que estan relacionadas con el mecanismo de senalizacion del acido salicllico (Cordelier et al. (2003) Plant Molecular Biology 51: 109-118).
Las plantas tienen la capacidad de sintetizar una variedad de esteroides que funcionan como hormonas. Sin embargo, no fue hasta 1979 que la presencia de hormonas esteroides se confirmo en las plantas. En ese ano, los cientlficos estadounidenses publicaron datos sobre una nueva lactona esteroidal llamada brasinolida, que se aislo de Brassica napus L. pollen (Grove et al. (1979) Nature 281: 216-217). Los brasinoesteroides han sido reconocidos como una nueva clase de fitohormonas que juegan un papel importante en la regulation del crecimiento (Azpiroz et al. (1998) Plant Cell 10: 219-230). Las propiedades fisiologicas de los brasinoesteroides nos permiten considerarlos como muy prometedores para su uso sin afectar el medio ambiente. Las sustancias naturales pueden ser apropiadas para una amplia aplicacion en la proteccion de las plantas y el fomento de la eficiencia en la agricultura.
Desde el principio, los brasinoesteroides se consideraron compuestos prometedores para su aplicacion en la agricultura porque mostraban diferentes tipos de actividad reguladora en el crecimiento y desarrollo de plantas y su valor economico como promotor del rendimiento (Khripach et al. (2000) Ann. Botany 86: 441-447). Una caracterlstica importante es la capacidad de los brasinoesteroides para actuar en concentraciones extremadamente bajas. Una confirmation indirecta de este fenomeno es la baja concentration de brasinoesteroides en las plantas. Una cantidad tlpica para uso en la agricultura esta entre 5 y 50 mg por hectarea para plantas en crecimiento (Khripach et al. (2000) Ann. Botany 86: 441-447).
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
Los brasinoesteroides tambien pueden jugar un papel en la respuesta de las plantas a los patogenos. La resistencia a patogenos bacterianos y fungicos ha sido inducida por los brasinoesteroides en arroz y tabaco, esta resistencia no se correlaciono con una mayor acumulacion de acido salicllico o una mayor expresion de genes asociados con resistencia adquirida sistemica (Nakashita et al. (2003) Plant Journal 33: 887-898).
El “Huanglongbing” (HLB) causado por la bacteria Candidatus “Liberibacter asiaticus” es la enfermedad mas destructiva de los cltricos en todo el mundo por la severidad de los slntomas, la velocidad con la que se propaga y afecta a todas las especies comerciales de cltricos. Es una enfermedad que todavla no tiene cura (Gottwald (2010) Annu. Rev. Phytopathol. 48: 6.1-6.21). La enfermedad se detecto por primera vez en Asia a finales del siglo XIX, y luego su presencia se informo en Sudafrica a principios del siglo XX, lo que ayudo a la propagacion en los dos continentes a traves de los anos (Gottwald (2010) Annu. Rev. Phytopathol. 48: 6.1-6.21). Actualmente se reconocen tres variantes de la enfermedad (asiatica, africana y americana). El organismo causal es una bacteria gramnegativa "fastidiosa", que no se puede obtener en cultivo puro en medios artificiales. Este organismo esta restringido al floema de Rutaceae, aunque tiene la capacidad de multiplicarse en la hemolinfa y en las glandulas salivales de los vectores de psllidos (psllido cltrico asiatico-Diaphorina citri). En los insectos, penetra en la pared intestinal para alcanzar las glandulas salivales, ruta hemolinfa en un perlodo de 1 a 3 semanas dependiendo de la virulencia de la cepa.
Los slntomas varlan con la variedad y edad de la planta afectada, ya que estos se observan claramente en arboles jovenes y vigorosos, mientras que los afectados despues del desarrollo presentan slntomas menos marcados. En las hojas maduras, los tejidos a lo largo de la vena media y secundaria se vuelven amarillos y la clorosis se extiende en las venas laterales hasta que cae la hoja (da Graca (1991) Annu. Rev. Phytopathol. 29:109-36). El proceso es mas severo en hojas jovenes, que siguen siendo de pequeno tamano. Las plantas muestran una defoliation considerable con muerte apical unos pocos anos despues de la infection, tambien se generalizan moteado y amarillamiento. Desarrollan brotes multiples con hojas pequenas, palidos y moteados. Durante la infeccion hay un pobre grupo de frutas, la calda temprana de estos y los que permanecen en el arbol son pequenos y asimetricos, tomando el color correcto solo el lado exponen a la luz del sol, mientras que el otro lado tiene una intensa coloration verde oliva (Bove J (2006) Plant Pathol. 88: 7-37). Los frutos tienen una baja cantidad de jugo, y una baja concentration de solidos y azucares solubles, convirtiendose en altamente acidos y no apropiados para ser utilizados en la industria (Gottwald (2010) Annu. Rev. Phytopathol. 48: 6.1-6.21).
El impacto economico para la presencia de HLB en los palses productores de cltricos ha aumentado ano tras ano, con perdidas estimadas en aproximadamente un 30-100%, debido a la reduction de los rendimientos y la calidad de los frutos. Hasta ahora, no existe una region en el mundo donde el HLB este adecuadamente controlado y la enfermedad no exista, lo que contribuye a incrementar su gravedad e incidencia (Gottwald (2010) Annu. Rev. Phytopathol. 48: 6.16.21). Recientemente, el uso de resistencia adquirida sistemica se ha evaluado utilizando compuestos tales como acido salicllico y fosfito en combination con micronutrientes para mantener los arboles infectados con HLB en un estado productivo. Sin embargo, en algunos casos, no hubo una diferencia significativa entre los arboles tratados y los no tratados, en relation con la disminucion de la HLB, la calda de la fruta, el rendimiento y la calidad (Gottwald (2010) Annu. Rev.Phytopathol. 48: 6.1-6.21). El documento EP 1621629 A 1 describe un metodo transgenico para inducir resistencia en plantas, introduciendo en plantas una secuencia de ADN que codifica un receptor para un compuesto sistemico de senal.
Por lo tanto, un problema importante que queda en la agricultura es el control de las enfermedades de las plantas, que limitan la production agricola anualmente en todo el mundo.
Descripcion detallada de la invencion
Esta invention ayuda a resolver el problema mencionado anteriormente proporcionando un metodo eficaz para estimular la defensa natural y la induction de resistencia a enfermedades en las plantas, aplicando un compuesto que simultaneamente activa genes relacionados con la ruta del acido salicllico, acido jasmonico/etileno y la respuesta hipersensible en ellos.
La induccion de resistencia a enfermedades es un metodo de gran importancia e interes en la actualidad, lo que permite el uso de mecanismos bioqulmicos y moleculares que ya existen en la planta para uso en el control de enfermedades. La defensa de las plantas contra las enfermedades comprende una serie de eventos relacionados con el reconocimiento, serialization y respuesta definidos como inmunidad innata en las plantas. Esta inmunidad innata puede ser activada por una serie de factores que contribuyen decisivamente al control de la enfermedad. Entre los mecanismos de defensa que son activados por la planta esta la slntesis de fitoalexinas antimicrobianas, defensinas y protelnas relacionadas con la patogenesis. Estas respuestas estan mediadas por la activation de genes relacionados con acido salicllico, acido jasmonico/etileno y respuesta hipersensible.
En la presente invencion se logra, por primera vez, la activacion simultanea de enzimas quitinasa, beta 1,3 glucanasa, glutation peroxidasa, fenilalanina amonlaco-liasa, superoxido dismutasa y aleno oxido sintasa, que forman parte de las rutas de senalizacion de acido salicllico, acido jasmonico/etileno y la respuesta hipersensible. Esta activacion se correlaciona con la protection contra bacterias, oomicetos y hongos.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
Adicionalmente, se demuestra la activacion simultanea de un grupo de nuevos genes, pertenecientes a la ruta del acido salicllico, acido jasmonico/etileno y respuesta hipersensible, cuya activacion se correlaciona con la proteccion contra bacterias, oomicetos y hongos. Estos genes fueron identificados y caracterizados por la tecnica de Serial Analysis of Gene Expression (SuperSAGE). Es sorprendente, teniendo en cuenta el estado de la tecnica anterior, que la activacion de genes que pertenecen a la ruta del acido salicllico, el acido jasmonico/etileno y la respuesta hipersensible se producen simultaneamente en respuesta a la aplicacion de un compuesto natural.
En el contexto de la invencion dicho compuesto puede ser una fitohormona, un acido nucleico, un llpido o un peptido, entre otros compuestos.
En una realization de la invencion, se produce la estimulacion de la defensa natural y la induction de resistencia a enfermedades en las plantas mediante la activacion simultanea de genes asociados con acido salicllico, acido jasmonico/etileno y respuesta hipersensible despues de la aplicacion de fitohormonas a tales plantas. En particular, la fitohormona es un brasinoesteroide natural o su analogo (25R)-3-hidroxi-C-homo-11-oxa-5-espirostan-12-ona.
El metodo descrito en esta invencion permite el tratamiento preventivo y curativo de enfermedades de plantas causadas por bacterias, oomicetos y hongos a traves de la activacion simultanea de genes relacionados con la ruta del acido salicllico, acido jasmonico/etileno y respuesta hipersensible. En una realizacion de la invencion, la enfermedad que se trata o se previene es el “Huanglongbing” (HLB), producido por la bacteria Candidatus “Liberibacter asiaticus” en cltricos. En otra realizacion, la enfermedad que se trata o se previene es la causada por Alternaria solani en los cultivos de tomate, o la causada por Phytophthora parasitica en cultivos de tabaco.
La presente invencion tambien describe por primera vez la concentration y frecuencia de aplicacion de los brasinoesteroides naturales (y sus analogos) para permitir el control eficaz de enfermedades de las plantas. En una realizacion de la invencion, la aplicacion del brasinoesteroide natural o analogo, en un intervalo de concentracion desde 0.01 a 20 mM, permite una reduction drastica de los agentes que causan enfermedades de origen bacteriano y fungico, reduciendo el numero de copias de la bacteria, oomicetos u hongos, mediante el tratamiento de plantas enfermas. El metodo propuesto en la presente invencion se puede utilizar para prevenir la infection de plantas sanas mediante la aplicacion periodica de un brasinoesteroide natural y su analogo. En una realizacion particular de la invencion, la aplicacion del brasinoesteroide a la planta se produce al menos una vez en un mes. En otra realizacion, la aplicacion del brasinoesteroide a las plantas enfermas se produce con una frecuencia de al menos dos veces en un mes. El intervalo de concentracion de brasinoesteroides que se va a aplicar, tanto natural como analogo, varla en funcion del cultivo que se va a proteger o tratar, y tambien en funcion de la tecnologla de aplicacion. Como se conoce por los expertos en este campo tecnico, las concentraciones efectivas del compuesto pueden disminuir considerablemente cuando se usa una aplicacion de bajo volumen o aplicacion de volumen ultra bajo.
En una realizacion de la invencion, el metodo para estimular la defensa natural e inducir resistencia a enfermedades en las plantas implica la aplicacion de un brasinoesteroide o un analogo en combination con un plaguicida.
Otro objeto de la presente invencion es una composition para estimular la defensa natural e inducir resistencia a enfermedades en las plantas que comprende un compuesto que activa simultaneamente genes relacionados con la ruta del acido salicllico, el acido jasmonico/etileno y la respuesta de hipersensibilidad, y en el que dicho compuesto es una fitohormona.
En una realizacion preferida, dicha composicion comprende un brasinoesteroide natural o un analogo de brasinoesteroide. En una realizacion particular de la invencion, los brasinoesteroides naturales y los analogos se obtienen por slntesis qulmica. Para los fines de la invencion, los brasinoesteroides se pueden formular a traves de una solution, suspension, emulsion, polvo, granulo, concentrado emulsionable, aerosol, granulo impregnado, adyuvante, pasta o mediante encapsulaciones.
En una realizacion de la invencion, en la composicion para prevenir o curar enfermedades vegetales, el brasinoesteroide natural o el analogo de brasinoesteroide esta en un intervalo entre 0.01 a 20 mM, o su equivalente para uso en volumen bajo o ultra bajo.
Otro objeto de la presente invencion es el uso de un brasinoesteroide para preparar una composicion para la estimulacion de la defensa natural y la induccion de resistencia a enfermedades en las plantas, donde la composicion se aplica periodicamente. En una realizacion de la invencion, las enfermedades de las plantas que se pueden prevenir o tratar mediante este nuevo uso de los brasinoesteroides son causadas por una bacteria, un hongo o un oomiceto.
Otro aspecto de la presente invencion se refiere a un metodo para la prevention o tratamiento de la enfermedad de Huanglongbing (HLB) en cltricos, donde se aplica periodicamente un brasinoesteroide a la planta, al menos una vez al mes. En dicho metodo, el brasinoesteroide puede ser un compuesto natural o un analogo de brasinoesteroide.
Breve description de los dibujos
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Figura 1. Expresion relativa de genes relacionados con respuestas de defensa a enfermedades en las plantas de citricos tratadas con el analogo de brasinoesteroide (25R)-3-hidroxi-C-homo-11-oxa-5-espirostan-12-ona. Muestra la expresion relativa de genes que codifican para: quitinasa (A), b-1,3-glucanasa (B), glutation peroxidasa (C), fenilalanina amonlaco-liasa (D), superoxido dismutasa (E), aleno oxido sintasa (F). Las barras en las curvas representan la desviacion estandar de la media de 10 plantas para cada tiempo probado. Los genes probados estan relacionados con la resistencia de las plantas a traves del acido salicllico, acido jasmonico/etileno y la respuesta de hipersensibilidad.
Figura 2. Expresion relativa de nuevos genes identificados por la tecnica SuperSAGE, activados durante los tratamientos con un analogo de brasinoesteroide. Las barras representan las desviaciones estandar de la media de 10 hojas por planta en cada punto de tiempo. Los genes se agruparon en las siguientes categorlas: genes relacionados con la respuesta de defensa en plantas frente a patogenos en general (A); genes relacionados con la respuesta de defensa en las plantas contra la bacteria (B); factores de transcripcion relacionados con la defensa de la planta contra la enfermedad (C); senalizacion a respuesta de defensa (D); y genes relacionados con la bioslntesis de fitoalexina (E).
Figura 3. Efecto de un analogo de brasinoesteroide sobre la reduccion de HLB en plantas de citricos en desarrollo (A) y adulto (B), medidas como copias de la bacteria HLB por reaccion, determinadas por reaccion en cadena de la polimerasa (PCR). Las barras en las curvas representan la desviacion estandar de la media de 10 hojas para cada vez que se prueban.
Figura 4. Microscopla electronica de hojas de plantas infectadas con HLB tratadas (A) y no tratadas (B) con un analogo de brasinoesteroide. Se realizaron veinte micrograflas electronicas para cada muestra analizada con diferentes aumentos. Se estudiaron un total de 10 rejillas por muestra. Cada rejilla de cobre tiene 400 agujeros para observation.
Figura 5. Evaluation del efecto del brasinoesteroide natural y del analogo en la reduccion del HLB, medido como copias de la bacteria HLB por reaccion. Las barras en las curvas representan la desviacion estandar de la media de 10 plantas para cada tiempo probado.
Figura 6. Efecto de la frecuencia de aplicacion del analogo de brasinoesteroide (25R)-3-hidroxi-C-homo-11-oxa-5- espirostan-12-ona sobre la reduccion del HLB, medida como copias de la bacteria HLB por reaccion PCR. Las barras en las curvas representan la desviacion estandar de la media de 10 hojas por planta por cada vez que se prueban.
Figura 7. Efecto protector del analogo de brasinoesteroide (25R)-3-hidroxi-C-homo-11-oxa-5-espirostan-12-ona sobre HLB de cltrico, medido como copias de la bacteria HLB por reaccion PCR. Las aplicaciones del producto se realizaron una vez al mes. Las barras en las curvas representan la desviacion estandar de la media de 10 hojas por planta por cada vez que se prueban.
Ejemplos
Ejemplo 1. Activation simultanea de genes relacionados con la resistencia natural de las plantas a enfermedades despues del tratamiento con un analogo de brasinoesteroide.
Las plantas de citricos (Citrus sinensis) se trataron con el analogo de brasinoesteroide (25R)-3-hidroxi-C-homo-11-oxa- 5-espirostan-12-ona a 20 pM (Iglesias et al. (1998) Synthetic Communications 28: 75-81). Se recogieron hojas de cinco plantas a 0, 1, 5, 10, 24 y 48 horas despues de la aplicacion por pulverization. El ARN total se extrajo de hojas utilizando el kit RNeasy (Qiagen, Valencia, CA) de acuerdo con las instrucciones del fabricante, que incluye un tratamiento con DNasa. Los ADNc se sintetizaron usando el cebador oligo-dT y el kit de transcripcion inversa SuperScript III (Invitrogen, Carlsbad, CA) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. La PCR cuantitativa en tiempo real se realizo utilizando una maquina de PCR RotorGene 3000 (Corbett, Australia) y un kit de PCR QuantiTect SYBR Green (Qiagen). Todas las secuencias de cebadores para genes relacionados con la defensa contra las enfermedades de plantas de citricos se muestran en la tabla 1. Las condiciones de reaccion en PCR de tiempo real fueron: una etapa de desnaturalizacion inicial a 95°C, durante 15 min., seguido de desnaturalizacion a 95°C, durante 15 s, una etapa de alineacion durante 30 s a 60°C y una etapa de extension durante 30 s a 72°C, durante 40 ciclos. El analisis se llevo a cabo utilizando el software RotorGene 3000 (Corbett, Australia) y se utilizaron cinco repeticiones para cada muestra. Los experimentos se repitieron dos veces.
Tabla 1. Lista de oligonucleotidos usados en los experimentos.
Genes de Citrus sinensis analizados Oligonucleotidos
quitinasa 5'-TCTTCGACGGCATAAAGAATCA-3'
5'-CCAAATTGAGGATAAGCCTTGG-3' beta-1,3-glucanasa 5'-TCGTTGGTGACCGTCAAATATC-3'
5
10
15
20
25
30
35
Fenilalanina amonlaco-liasa
superoxido dismutasa
aleno oxido sintasa
glutation peroxidasa
actina
5'-TTT CTCCAACGCAGCGT AAGT A-3'
5'-AACGGGTTGCCTTCAAATCTTA-3'
5'-ACATGATTGGTGACAGGATTGG-3'
5'-CAGTTGCAGTTCTTGGTGGAAC-3'
5'-AGACCAGAGAGGCTTCCT GAAA- 3'
5'-CCACACTTGGCTCGGATGC-3'
5'-CGTGCGGAGCAATGGTTC-3'
5'-GAATGTTGTTGAGCGTTATGCC-3'
5'-AGCTGATCATGCAAGTTGTAGCA-3'
5'-GTGGCTCCACCAGAGAGAAA-3'
5'-TGGATGGACCAGACTCATCA-3'
La figura 1 muestra que todos los genes analizados fueron activados despues del tratamiento de plantas de cltricos con el analogo de brasinoesteroide. El gen aleno oxido sintasa tenia el nivel de expresion mas alto a las 24 horas, mientras que el resto de los genes tenlan su expresion mas alta a las 5 horas despues de la aplicacion del analogo. Este grupo de genes tiene un papel importante en la defensa de las plantas contra los patogenos.
Ejemplo 2. Identificacion de nuevos genes relacionados con la respuesta natural de defensa en plantas tratadas con un analogo de brasinoesteroide.
Se trataron plantas de cltricos (Citrus sinensis) con el analogo de brasinoesteroide (25R)-3-hidroxi-C-homo-11-oxa-5- espirostan-12-ona a 20 pM. Se recogieron hojas de cinco plantas a las 1, 5, 10, 24 y 48 horas despues de la aplicacion por pulverizacion. El ARN total se extrajo de hojas usando el kit RNeasy (Qiagen, Valencia, CA) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Los ADNc se sintetizaron usando el cebador biotinilado oligo-dT y el kit de transcripcion inversa Superscript III (Invitrogen, Carlsbad, CA) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Se utilizaron como control muestras de cinco plantas de cltricos tratadas con agua y recogidas durante los tiempos indicados anteriormente. La identificacion y caracterizacion de nuevos genes se realizo mediante la construccion de dos bibliotecas de ADNc mediante la tecnica de SuperSAGE (Matsumura et al. (2003) PNAS 100: 15718-15723). La biblioteca de control fue la mezcla de hojas de plantas tratadas con agua en tiempos diferentes y la muestra diana fue la mezcla de hojas de plantas de cltricos tratadas con el analogo en diferentes momentos. Se aislaron, secuenciaron y analizaron los nuevos genes relacionados con la respuesta de la planta al HLB, activados por la aplicacion del analogo de brasinoesteroide. La figura 2 muestra los nuevos genes activados por el analogo, que estan relacionados con el mecanismo de defensa natural de las plantas contra las enfermedades. Es importante destacar que, como este analogo de los brasinoesteroides simultaneamente activa genes relacionados con la respuesta hipersensible, acido salicilico y acido jasmonico/etileno, este es un nuevo mecanismo hasta ahora no descrito.
Ejemplo 3. Evaluacion del efecto de la aplicacion de un analogo de brasinoesteroide sobre el control de HLB de cltricos en plantas en la fase de desarrollo y en plantas adultas.
a) Evaluacion del efecto sobre plantas de cltricos en la fase de desarrollo.
El experimento se desarrollo bajo condiciones de invernaderos. Las plantas (Citrus sinensis) con sintomas de HLB se colocaron en bolsas de plastico negro con un regimen de riego apropiado. Los niveles de la bacteria Candidatus “Liberibacter asiaticus” en plantas con sintomas de HLB se determinaron por PCR en tiempo real, mediante la cuantificacion absoluta de bacterias (copias de bacterias por reaccion) en las hojas de acuerdo con la curva estandar y ADN ribosomico 16S amplificado de las bacterias. La cuantificacion de las bacterias se evaluo cada mes durante 6 meses. La ultima evaluacion se desarrollo tomando todas las hojas de la planta y realizando una mezcla antes del aislamiento del ADN. La concentracion del analogo de brasinoesteroide (25R)-3-hidroxi-C-homo-11-oxa-5-espirostan- 12-ona fue de 20 pM y se aplico por pulverizacion cada 15 dias. El ADN se extrajo de las hojas de acuerdo con el protocolo para el aislamiento de ADN de Promega. La PCR cuantitativa en tiempo real se realizo utilizando una maquina de PCR RotorGene 3000 (Corbett, Australia) y un kit de PCR QuantiTect SyBr Green (Qiagen). Los oligos utilizados para la cuantificacion de bacterias fueron: CTAATCCCCAAAAGCCATCTC y CTTcAgGCaAaACCAACTCC. Las condiciones de reaccion en PCR en tiempo real fueron: una etapa de desnaturalizacion inicial a 95°C, durante 15 min., seguido de desnaturalizacion a 95°C, durante 15 s, una etapa de alineacion durante 30 s a 60°C y una etapa de
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
extension durante 30 s a 72°C, durante 40 ciclos. El analisis se llevo a cabo utilizando el software RotorGene 3000 (Corbett, Australia) y se utilizaron cinco repeticiones para cada muestra. Los experimentos se repitieron dos veces. Como controles, se utilizaron plantas de cltricos enfermas, a las que no se aplico el brasinoesteroide. Como hubo una reduccion significativa en los niveles de bacterias a partir del mes, alcanzando niveles indetectables a partir del mes 4, la ultima evaluation, al final del experimento como se muestra en la figura 3A, hubo una reduccion significativa en los niveles de bacterias a partir del segundo mes, alcanzando niveles indetectables a partir del mes 4, que se mantuvo hasta la ultima evaluacion, realizada al final del experimento. Es importante destacar que este comportamiento se observo en todas las plantas que fueron tratadas con este analogo de brasinoesteroide.
b) Evaluacion del efecto sobre plantas de cltricos adultas.
El experimento se desarrollo bajo condiciones naturales. Los niveles de la bacteria Candidatus “Liberibacter asiaticus” en 30 plantas con slntomas de HLB se determinaron por PCR en tiempo real, mediante la cuantificacion absoluta de bacterias (copias de bacterias por reaction) en las hojas de acuerdo con la curva estandar y el ADN ribosomico 16S amplificado de las bacterias. La cuantificacion de las bacterias se evaluo cada mes durante un ano. La ultima evaluacion se desarrollo tomando todas las hojas de la planta y realizando una mezcla antes del aislamiento del ADN. La concentration del analogo de brasinoesteroide (25R)-3-hidroxi-C-homo-11-oxa-5-espirostan-12-ona fue de 20 mM y se aplico por pulverization cada 15 dlas. El ADN se extrajo de las hojas de acuerdo con el protocolo para el aislamiento de ADN de Promega. La PCR cuantitativa en tiempo real se realizo como se describe en el ejemplo 3a. Las plantas de cltricos enfermas, a las que no se aplico el brasinoesteroide, se utilizaron como controles. Como se muestra en la figura 3B, hubo una reduccion significativa en los niveles de bacterias a partir de los terceros meses, alcanzando niveles indetectables a partir de los meses 8, un patron que continuo hasta la ultima evaluacion, realizada al final del experimento. Todas las plantas que fueron tratadas con este analogo de brasinoesteroide redujeron los niveles de bacterias.
c) Microscopla electronica de plantas de cltricos tratadas.
El objetivo de este experimento fue el diagnostico de la bacteria Candidatus “Liberibacter asiaticus” mediante un estudio ultraestructural por microscopla electronica de transmision en plantas de cltricos infectadas con HLB (Citrus sinensis), tratadas con el mismo analogo de brasinoesteroide. Se tomaron muestras de hojas de plantas de cltricos infectadas con HLB (Candidatus “Liberibacter asiaticus”), tratadas durante un ano. Como control, se tomaron muestras de hojas de plantas infectadas sin la aplicacion del producto. Las diferentes muestras se fijaron en glutaraldehldo al 5% durante la noche bajo vaclo a 4°C y se fijaron posteriormente en tetroxido de osmio al 1%, durante 12 horas a 4°C. Posteriormente, las muestras se lavaron en solution reguladora de cacodilato a pH 7.4 y se deshidrataron en concentraciones crecientes de acetona (20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 y 100%) durante 15 minutos cada vez a 4°C, excepto 100 % que tuvo lugar a temperatura ambiente durante 1 hora. La inclusion se realizo con baja viscosidad. Las secciones ultradelgadas se realizaron con un ultramicrotomo (NOVA, LKB) con un espesor de 40-50 nm, y se colocaron sobre rejillas de cobre de 400 orificios. A continuation, las mallas se contrastaron con acetato de uranilo saturado y citrato de plomo y se examinaron con un JEOL JEM 2000 EX (JEOL). Se hicieron 20 micrograflas electronicas para cada muestra analizada con diferentes ampliaciones. Se estudiaron un total de 10 rejillas por muestra. Cada rejilla de cobre tiene 400 agujeros para observation. En las muestras tratadas no se observo presencia de bacterias (Figura 4A), mientras que en las hojas de cltricos no tratadas (control) se observo la presencia de bacterias longitudinal y transversal Candidatus “Liberibacter asiaticus” al nivel ultraestructural (Figura 4B).
Ejemplo 4. Evaluacion de diferentes concentraciones del analogo de brasinoesteroide (25R)-3-hidroxi-C-homo-11-oxa-5- espirostan-12-ona en el control de HLB de cltricos.
El objetivo de este experimento fue evaluar la concentracion minima necesaria del analogo de brasinoesteroide (25R)-3- hidroxi-C-homo-11-oxa-5-espirostan-12-ona para controlar el HLB de los cltricos. Se utilizaron cinco plantas de cltricos (Citrus sinensis) con HLB, para cada concentracion del analogo. Las concentraciones ensayadas fueron de 0.001, 0.01, 0.1, 1, 5, 10, 20, 40, 60 mM, y se aplico por pulverizacion cada 15 dlas durante 6 meses. La evaluacion se realizo 6 meses despues del tratamiento. Los niveles de la bacteria Candidatus “Liberibacter asiaticus” se determinaron segun el ejemplo 3a. Como se muestra en la tabla 2, a partir de las concentraciones de 0.01 y hasta 60 mM del analogo de brasinoesteroide, los niveles de bacterias se redujeron drasticamente.
Tabla 2. Efecto de diferentes concentraciones del analogo de brasinoesteroide (25R)-3-hidroxi-C-homo-11-oxa-5-
espirostan-12-ona sobre bacterias.
- Concentracion del analogo de brasinoesteroide (mM)
- Concentracion absoluta de la bacteria despues de 6 meses de tratamiento (Copias de las bacterias por reaccion)
- 0
- 2788
- 0.001
- 522
- 0.01
- 29
- 1
- 1
- 5
- 0
- 10
- 0
- 20
- 0
- 40
- 0
- 60
- 0
Ejemplo 5. Evaluacion del efecto de la aplicacion de un brasinoesteroide natural (brasinolida) y un analogo de brasinoesteroide en el control de HLB de citricos.
Con el fin de evaluar el efecto de un brasinoesteroide natural (brasinolida) (Khripach et al. (2000) Ann. Botany 86: 4415 447) y el analogo de brasinoesteroide (25R)-3-hidroxi-C-homo-11-oxa-5-espirostan-12-ona en el control de HLB en el
mismo experimento, se usaron 10 plantas de citricos infectadas con HLB para cada tratamiento. Ambos compuestos se aplicaron por pulverizacion a una concentracion de 1 pM cada 15 dias durante 6 meses. Los niveles de la bacteria Candidatus “Liberibacter asiaticus” se determinaron de acuerdo con el ejemplo 3a. La figura 5 muestra como tanto el compuesto natural como el analogo tuvieron un efecto positivo al lograr una reduction significativa en los niveles de 10 bacterias durante el periodo de evaluacion.
Ejemplo 6. Evaluacion del efecto de la frecuencia de aplicacion de un analogo de brasinoesteroide sobre el control de HLB de citricos.
El objetivo de este experimento fue determinar la influencia de la frecuencia de aplicacion por pulverizacion del analogo de brasinoesteroide (25R)-3-hidroxi-C-homo-11-oxa-5-espirostan-12-ona en el control de HLB en plantas de citricos 15 enfermas. Se utilizaron cinco plantas por tratamiento y las frecuencias de aplicacion fueron 1, 2 y 4 veces al mes. La concentracion del analogo utilizada fue de 1 pM y las determinaciones del nivel de bacterias se realizaron cada mes hasta el sexto mes. Los niveles de la bacteria Candidatus “Liberibacter asiaticus” se determinaron de acuerdo con el ejemplo 3a. Como se muestra en la figura 6, se observo reduccion bacteriana en todas las variantes ensayadas. La aplicacion del compuesto dos veces al mes y semanalmente redujo significativamente los niveles de bacterias, mas 20 temprano, en comparacion con una sola aplicacion por mes.
Ejemplo 7. Evaluacion del efecto preventivo de un analogo de brasinoesteroide sobre HLB de citricos.
Este experimento se desarrollo para determinar el efecto preventivo de la aplicacion del analogo (25R)-3-hidroxi-Chomo- 11-oxa-5-espirostan-12-ona dos veces al mes a una concentracion de 1 pM en plantas de citricos sin HLB en un area con plantas de citricos con HLB y altas poblaciones de insectos vectoriales (Asian citrus psyllid - Diaphorina citri). Se 25 aplicaron por pulverizacion diez hojas al analogo y se usaron otras 10 hojas sin aplicacion del producto. Los niveles de la bacteria Candidatus “Liberibacter asiaticus” se determinaron segun el ejemplo 3a. Como se muestra en la figura 7, la aplicacion del analogo de plantas de citricos sin HLB permitio protegerlas contra la infection de bacterias a traves del vector, mientras que las plantas a las que no se aplico el analogo, a medida que pasaban los meses, aumentaban los niveles de bacterias y sintomas de HLB. Este fue otro resultado sorprendente e inesperado, que permite el uso de este 30 metodo para la protection de los citricos contra esta enfermedad importante.
Ejemplo 8. Evaluacion del efecto de la aplicacion de un brasinoesteroide natural y un analogo sobre el control de otras enfermedades de las plantas.
Con el fin de evaluar el efecto del analogo de brasinoesteroide (25R)-3-hidroxi-C-homo-11-oxa-5-espirostan- 12-ona y un brasinoesteroide natural (brasinolida), sobre el control de otras plantas, se realizaron experimentos con plantas de 35 tabaco y tomate inoculadas con Phytophthora parasitica y Alternaria solani, respectivamente. Tanto el brasinoesteroide natural como el analogo se aplicaron por pulverizacion a una concentracion de 1 pM cada 15 dias, durante 3 meses. La tasa de mortalidad se determino a los 3 meses. La tabla 3 muestra como ambos brasinoesteroides tuvieron un efecto marcado en la reduccion de la incidencia de enfermedades causadas por estos patogenos. Se utilizaron cien plantas para cada tratamiento. Se usaron plantas no tratadas como controles.
40 Tabla 3. Efecto del brasinoesteroide natural y de un analogo en el control de enfermedades causadas por oomicetos y hongos.
- Patogeno/planta
- Control* Brasinoesteroide natural Analogo de brasinoesteroide
- Alternaria solani/tomate
- 84 12 9
- Phytophthora parasitica/tabaco
- 81 13 11
- * Los valores representan el porcentaje de mortalidad por enfermedades causadas por estos patogenos.
Claims (10)
- 510152025REIVINDICACIONES1. Un metodo para la estimulacion de la defensa natural y la induccion de resistencia a enfermedades en las plantas, caracterizado por la aplicacion a las plantas de un compuesto que activa simultaneamente genes relacionados con la ruta del acido salicllico, acido jasmonico/etileno y la respuesta hipersensible, en el que el compuesto es un brassinosteroide o el analogo brassinosteroide (25R)-3-hidroxi-C-homo-11-oxa-5-espirostan-12-ona, y en el que la enfermedad es enfermedad de Huanglongbing en cltricos causada por la bacteria Candidatus Liberibacter asiaticus.
- 2. El metodo de la reivindicacion 1, en el que el brassinosteroide o el analogo brassinosteroide (25R)-3-hidroxi-C-homo- 11-oxa-5-espirostan-12-ona, se aplica periodicamente a la planta, preferiblemente al menos una vez al mes.
- 3. El metodo de la reivindicacion 1 o 2, en el que, ademas se aplica un pesticida a la planta.
- 4. El metodo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en el que el brasinoesteroide es un brasinoesteroide natural.
- 5. El metodo de la reivindicacion 4, en el que el brassinosteroide natural o el analogo de brassinosteroide (25R)-3- hidroxi-C-homo-11-oxa-5-espirostan-12-ona se aplica a una concentracion de 0.01-20 pM, o su concentracion equivalente para aplicacion de volumen bajo o ultra bajo, y al menos una vez al mes.
- 6. Metodo para la prevencion o el tratamiento de la enfermedad de Huanglongbing (HLB) en plantas de cltricos, caracterizado por la aplicacion periodica de un brassinosteroide o el analogo de brassinosteroxido (25R)-3-hidroxi-C- homo-11-oxa-5-espirostano-12 -uno a las plantas de cltricos
- 7. El metodo de acuerdo con la reivindicacion 6, en el que el brassinosteroide es un brassinosteroide natural.
- 8. El metodo de acuerdo con la reivindicacion 6 o 7, en el que el brassinosteroide o el analogo brassinosteroide se aplica al menos una vez al mes.
- 9. Uso de un brassinosteroide o el analogo de brassinosteroide (25R)-3-hidroxi-C-homo-11-oxa-5-espirostan-12-on en la estimulacion de la defensa natural y la induccion de resistencia en plantas cltricas a Huanglongbing (HLB), en la que la aplicacion del brassinosteroide o del analogo brassinosteroide activa simultaneamente genes que forman parte de las rutas de serialization del acido salicllico, acido jasmonico/etileno y la respuesta hipersensible.
- 10. Uso de acuerdo con la reivindicacion 9, en el que el brassinoesteroide es un brassinosteroide natural.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CU20110046 | 2011-02-28 | ||
| CU20110046A CU23949B1 (es) | 2011-02-28 | 2011-02-28 | Método para la prevención o tratamiento de la enfermedad huanglongbing |
| PCT/CU2012/000001 WO2012116664A1 (es) | 2011-02-28 | 2012-02-27 | Metodo para la induccion de resistencia a enfermedades en plantas |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2631558T3 true ES2631558T3 (es) | 2017-09-01 |
Family
ID=46044131
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES12719247.4T Active ES2631558T3 (es) | 2011-02-28 | 2012-02-27 | Método para inducir resistencia a enfermedades en las plantas |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US10104889B2 (es) |
| EP (1) | EP2681997B8 (es) |
| JP (1) | JP6109080B2 (es) |
| KR (1) | KR101891950B1 (es) |
| CN (1) | CN103476261B (es) |
| AR (1) | AR085511A1 (es) |
| AU (1) | AU2012222718B2 (es) |
| BR (1) | BR112013021889A2 (es) |
| CA (1) | CA2828237C (es) |
| CL (1) | CL2013002477A1 (es) |
| CU (1) | CU23949B1 (es) |
| ES (1) | ES2631558T3 (es) |
| MX (1) | MX347842B (es) |
| PT (1) | PT2681997T (es) |
| RS (1) | RS56186B1 (es) |
| RU (1) | RU2596923C2 (es) |
| WO (1) | WO2012116664A1 (es) |
| ZA (1) | ZA201306521B (es) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US11178823B2 (en) | 2014-04-07 | 2021-11-23 | Premier Citrus Apz, Llc | Systems and methods for using light energy to facilitate penetration of substances in plants |
| US10278334B2 (en) | 2014-04-07 | 2019-05-07 | Premier Citrus Apz, Llc | Systems and methods for delivering nucleic acids to a plant |
| US9265260B1 (en) | 2014-04-07 | 2016-02-23 | Gpd Technologies Llc | Systems and methods for using light energy to facilitate penetration of substances in plants |
| EP3294062A4 (en) * | 2015-05-14 | 2019-02-13 | The Regents of the University of California | MIMETICS OF BRASSINOSTEROIDS |
| CU24371B1 (es) * | 2015-07-31 | 2018-11-06 | Ct Ingenieria Genetica Biotecnologia | Composición para el tratamiento de las enfermedades de plantas |
| US11191278B2 (en) | 2016-03-25 | 2021-12-07 | Premier Citrus Apz, Llc | Systems and methods for delivering nucleic acids to a plant |
| CN108913702B (zh) * | 2018-08-13 | 2020-07-31 | 青岛农业大学 | 用于提高烟草黑胫病抗性的方法、特异性引物及试剂盒 |
| CN113727607B (zh) * | 2019-02-19 | 2023-07-25 | 奥罗农业股份有限公司 | 用于控制和/或治疗植物的维管组织病害的农业组合物 |
| CN113493816A (zh) * | 2020-04-03 | 2021-10-12 | 河南师范大学 | 一种利用水杨酸检测和提高植物对死体营养型病原的抗性的方法 |
| JPWO2022196649A1 (es) * | 2021-03-19 | 2022-09-22 |
Family Cites Families (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6176404A (ja) * | 1984-09-20 | 1986-04-18 | Zenkoku Nogyo Kyodo Kumiai Rengokai | 植物の耐病性増強剤 |
| US5071466A (en) * | 1987-09-18 | 1991-12-10 | Teijin Limited | Method of decreasing physiological drop from fruit trees using brassinolide |
| SU1745160A1 (ru) * | 1989-11-28 | 1992-07-07 | Институт экологической генетики АН МССР | Способ селекции томатов на устойчивость к альтернариозу |
| DE4039017A1 (de) | 1990-12-04 | 1992-06-11 | Inst Biochemie Der Pflanzen | Mittel zur qualitaetsverbesserung von kernobst |
| GT200400163A (es) * | 2003-08-22 | 2005-06-27 | Metodos para mejorar el crecimiento y la productividad del cultivo de plantas ajustando los niveles, relacionesy/o cofactores de las hormonas vegetales. | |
| EP1621629A1 (en) * | 2004-07-28 | 2006-02-01 | Expressive Research B.V. | A method to increase pathogen resistance in plants |
| US8025875B2 (en) * | 2006-02-24 | 2011-09-27 | Montana State University | Bacillus isolates and methods of their use to protect against plant pathogens |
| EP2224809A4 (en) * | 2007-11-27 | 2014-06-11 | Univ North Carolina State | INHIBITION OF BIOFILMS IN PLANTS WITH IMIDAZOLE DERIVATIVES |
| US20100009002A1 (en) * | 2008-07-14 | 2010-01-14 | Tropicana Products, Inc. | Guava tree extract insect control |
| BRPI0805608B1 (pt) * | 2008-12-15 | 2018-11-21 | Embrapa Pesquisa Agropecuaria | método, equipamento e sistema para diagnóstico de estresses e doenças em plantas superiores |
| KR20120099396A (ko) * | 2009-09-09 | 2012-09-10 | 바이엘 크롭사이언스 아게 | 식물병원성 박테리아를 구제하기 위한 사이클릭 케토에놀의 용도 |
| WO2012053994A2 (en) | 2010-10-20 | 2012-04-26 | The Thailand Reserach Fund | Ecdysteroid analogues having plant growth promoting activity |
| CN102017998A (zh) * | 2010-12-03 | 2011-04-20 | 河南科技大学 | 一种用于防治灰霉病的制剂及其制备和使用方法 |
| US20130254934A1 (en) | 2010-12-10 | 2013-09-26 | Takeshi Nakano | Disease-resistant plant and method for preparing the same |
-
2011
- 2011-02-28 CU CU20110046A patent/CU23949B1/es unknown
-
2012
- 2012-02-27 EP EP12719247.4A patent/EP2681997B8/en not_active Not-in-force
- 2012-02-27 CN CN201280017832.3A patent/CN103476261B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2012-02-27 CA CA2828237A patent/CA2828237C/en not_active Expired - Fee Related
- 2012-02-27 JP JP2013555745A patent/JP6109080B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2012-02-27 US US14/001,344 patent/US10104889B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2012-02-27 BR BR112013021889A patent/BR112013021889A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2012-02-27 RU RU2013143820/10A patent/RU2596923C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2012-02-27 ES ES12719247.4T patent/ES2631558T3/es active Active
- 2012-02-27 AU AU2012222718A patent/AU2012222718B2/en not_active Ceased
- 2012-02-27 KR KR1020137025358A patent/KR101891950B1/ko active IP Right Grant
- 2012-02-27 WO PCT/CU2012/000001 patent/WO2012116664A1/es active Application Filing
- 2012-02-27 MX MX2013009892A patent/MX347842B/es active IP Right Grant
- 2012-02-27 PT PT127192474T patent/PT2681997T/pt unknown
- 2012-02-27 RS RS20170667A patent/RS56186B1/sr unknown
- 2012-02-28 AR ARP120100651 patent/AR085511A1/es unknown
-
2013
- 2013-08-28 CL CL2013002477A patent/CL2013002477A1/es unknown
- 2013-08-29 ZA ZA2013/06521A patent/ZA201306521B/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| BR112013021889A2 (pt) | 2016-07-19 |
| CN103476261A (zh) | 2013-12-25 |
| MX347842B (es) | 2017-05-16 |
| MX2013009892A (es) | 2013-10-28 |
| AR085511A1 (es) | 2013-10-09 |
| JP2014511385A (ja) | 2014-05-15 |
| RU2596923C2 (ru) | 2016-09-10 |
| AU2012222718A1 (en) | 2013-09-12 |
| CN103476261B (zh) | 2015-04-29 |
| RU2013143820A (ru) | 2015-04-10 |
| EP2681997B8 (en) | 2017-06-28 |
| PT2681997T (pt) | 2017-07-12 |
| ZA201306521B (en) | 2014-07-30 |
| CA2828237C (en) | 2018-01-09 |
| CL2013002477A1 (es) | 2014-02-14 |
| US20140171326A1 (en) | 2014-06-19 |
| KR101891950B1 (ko) | 2018-08-27 |
| RS56186B1 (sr) | 2017-11-30 |
| CU20110046A7 (es) | 2012-10-15 |
| CA2828237A1 (en) | 2012-09-07 |
| KR20140044794A (ko) | 2014-04-15 |
| CU23949B1 (es) | 2013-10-29 |
| EP2681997A1 (en) | 2014-01-08 |
| JP6109080B2 (ja) | 2017-04-05 |
| WO2012116664A1 (es) | 2012-09-07 |
| AU2012222718B2 (en) | 2016-01-14 |
| US10104889B2 (en) | 2018-10-23 |
| EP2681997B1 (en) | 2017-04-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2631558T3 (es) | Método para inducir resistencia a enfermedades en las plantas | |
| Herbel et al. | The antimicrobial peptide snakin-2 is upregulated in the defense response of tomatoes (Solanum lycopersicum) as part of the jasmonate-dependent signaling pathway | |
| JP2018527332A (ja) | 植物における病気の処置方法 | |
| KR101079039B1 (ko) | 식물 휘발성 물질에 의한 식물의 병 저항성 유도 방법 | |
| CA2934289C (en) | Plant-protecting rnai compositions comprising plant-protecting double-stranded rna adsorbed onto layered double hydroxide particles | |
| US9788552B2 (en) | Use of a natural grape marc extract in order to stimulate the natural defenses of plants | |
| CĂULEȚ et al. | Growth and photosynthetic characteristics of two strawberry cultivars in response to furostanol glycosides treatments | |
| WO2019172268A1 (ja) | 植物病害防除剤 | |
| SaberiRiseh et al. | Alginate-induced disease resistance in Plants. Polymers 2022 14: 661 | |
| Cui et al. | Overexpression of SlUPA-like induces cell enlargement, aberrant development and low stress tolerance through phytohormonal pathway in tomato | |
| KR20150021673A (ko) | 옻나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 식물 병원균 방제 및 내성 증진용 조성물 | |
| Ijaz et al. | 13 Effect of Plant Extracts on Improvement of Crop Yield | |
| CN108463108B (zh) | 活性物质用于防治植物病毒感染的用途 | |
| Álvarez Romero et al. | Identification and alternative management of downy mildew in rose | |
| EP3837977A1 (en) | Use of alginates oligomers to improve plant protection against pathogens | |
| Stephen | In vitro evaluation of linear plant host defense peptides Shepherin 2, Skh-AMP1, Cn-AMP1, and Cr-ACP1 for cytotoxicity and antimicrobial activities against potato pathogens | |
| Suwanchaikasem et al. | The Impacts of Chitosan on Plant Root Systems and Its Potential to be Used for Controlling Fungal Diseases in Agriculture | |
| Ullrich et al. | Prevention of plant crown gall tumor development by the anti-malarial artesunate of Artemisia annua | |
| Sangha et al. | Potential use of extracts of seaweeds against plant pathogens | |
| Ahmed et al. | Commercial Algae Products as Biocide Treatments for Controlling Squash Powdery Mildew Disease | |
| Dyer | The Use of Reverse Genetics to Investigate Plant-parasite Interactions | |
| Shafiei-Masouleh et al. | Effects of chitosan and chitosan-based nanoparticles on photosynthesis of plants: an introductory overview | |
| Sekhon | Induced systemic acquired resistance and its implication in plant disease management | |
| AU2022362673A1 (en) | Use of an extract of part of a plant for stimulating plant defenses against viruses, and associated composition and methods | |
| Tariq et al. | Dynamics of total proteins during stress alleviation in tomato infected with cucumber mosaic virus |