ES2617783T3 - Sensor del sustrato de quinasa - Google Patents

Sensor del sustrato de quinasa Download PDF

Info

Publication number
ES2617783T3
ES2617783T3 ES12706065.5T ES12706065T ES2617783T3 ES 2617783 T3 ES2617783 T3 ES 2617783T3 ES 12706065 T ES12706065 T ES 12706065T ES 2617783 T3 ES2617783 T3 ES 2617783T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
luciferase
tyk2
rpapi
pxp2d2
pmet7
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES12706065.5T
Other languages
English (en)
Inventor
Jan Tavernier
Samuel LIEVENS
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Universiteit Gent
Vlaams Instituut voor Biotechnologie VIB
Original Assignee
Universiteit Gent
Vlaams Instituut voor Biotechnologie VIB
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Universiteit Gent, Vlaams Instituut voor Biotechnologie VIB filed Critical Universiteit Gent
Application granted granted Critical
Publication of ES2617783T3 publication Critical patent/ES2617783T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/12—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
    • C12N15/1034—Isolating an individual clone by screening libraries
    • C12N15/1055—Protein x Protein interaction, e.g. two hybrid selection
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/48—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving transferase
    • C12Q1/485—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving transferase involving kinase
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/536—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase
    • G01N33/542—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase with steric inhibition or signal modification, e.g. fluorescent quenching
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Computational Biology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Un complejo de proteínas citoplasmáticas que comprende (a) una primera proteína de fusión recombinante que comprende una quinasa mutante condensada a un primer polipéptido de interacción, en donde dicha quinasa mutante se selecciona del grupo que consiste en una tirosina quinasa constitutiva mutante y una tirosina quinasa inactiva que es activada por la adición de un pequeño compuesto exógeno y (b) una segunda proteína de fusión recombinante que comprende un dominio que comprende un sitio de fosforilación del informador, con lo que dicho dominio está condensado a un segundo polipéptido de interacción.

Description

imagen1
imagen2
imagen3
imagen4
imagen5
imagen6
imagen7
imagen8
El plásmido informador pXP2d2-rPAPI-luciferasa utilizado en los ejemplos contiene el promotor rPAPI (Proteína I Asociada a la Pancreatitis de rata) dependiente STAT3 que dirige un gen informador de luciferasa de luciérnaga como se ha descrito previamente (documento WO0190188, Eyckerman et al., 2001).
Procedimiento de transfección
5 Las transfecciones se llevaron a cabo utilizando un método de fosfato de calcio estándar. Células HEK293-T fueron sembradas en placas negras de 96 pocillos tratadas con cultivo de tejido a razón de 10.000 células/pocillo en un medio de cultivo de 100 μΙ (DMEM suplementado con FCS al 10%). Veinticuatro horas más tarde, se prepararon mezclas de ADN de plásmido que contenía los plásmidos que codifican las proteínas de fusión con la primera y segunda proteínas interactuantes y plásmidos informadores. El ADN fue suplementado con 10 μΙ de CaCl2 2,5 M y
10 agua doblemente destilada a un volumen final de 100 μΙ. Esta mezcla se añadió gota a gota a 100 μΙ de tampón 2xHeBS (NaCl 280 mM, Na2HPO4 1,5 mM, Hepes 50 mM, pH 7,05), al tiempo que se sometían vigorosamente a un vórtex. Después de incubación a temperatura ambiente durante 15 min para permitir que se formaran precipitados de ADN, la disolución se añadió a las células a razón de 10 μΙ/pocillo. Las células se incubaron a 37°C, 8% de CO2. Cuarenta y ocho horas después de la transfección, se midió la actividad luciferasa utilizando el kit de sistema de
15 ensayo de luciferasa (Promega) en un luminómetro TopCount (Perkin-Elmer). Cada una de las transfecciones se realizó por triplicado y se utilizó la media de las lecturas de actividad de luciferasa en los cálculos. Una disolución madre de Nutlina-3 (Sigma) de 20 mM en DMSO se diluyó en medio de cultivo y se añadió a las células 24 h después de la transfección. Se añadió imidazol (Sigma) diluido en medio de cultivo a las células 24 h después de la transfección.
Código del cebador oligonucleótidos
de SEQ N° ID Secuencia (5' > 3')
MBU-O-6486
imagen9 8 imagen10 imagen11
MBU-O-6487
imagen12 9 imagen13 GGGGAATTCGCACACGCTGAACACTGAAGG
MBU-O-3879
imagen14 10 imagen15 imagen16
MBU-O-3880
imagen17 11 imagen18 imagen19
MBU-O-3912
imagen20 12 imagen21 GCGGAATTCATGTGCAATACCAACATGTCTG
MBU-O-3913
imagen22 13 imagen23 CGCGCGGCCGCCTAGGGGAAATAAGTTAGCAC
MBU-O-2277
imagen24 14 imagen25 GCGAGAATTCGAGGAGCCGCAGTCAGATCC
MBU-O-2273
imagen26 15 imagen27 CGCTGCGGCCGCTTAGCGGGGAGCAGCCTCTGGC
MBU-O-6653
imagen28 16 imagen29 imagen30
MBU-O-6655
imagen31 17 imagen32 GGGCTCGAGGAATTCCGCAGCTATACTGTCCCGG
MBU-O-6656
imagen33 18 imagen34 imagen35
10 5
10
15
20
25
30
Código del cebador oligonucleótidos
de SEQ N° ID Secuencia (5' > 3')
MBU-O-6657
imagen36 19 imagen37 GGGCTCGAGGAATTCGAAGTAGTCCTCCAGGAAGG
MBU-O-3813
imagen38 20 imagen39 CGTACGAATTCGGGAGCTCGTTTTTAGATGGAATAG
MBU-O-3814
imagen40 21 imagen41 imagen42
MBU-O-7811
imagen43 22 imagen44 CATTTAATTAAACCTCTGCGCCACTGGGGG
MBU-O-7812
imagen45 23 imagen46 CATGAATTCGCACACGCTGAACACTGAAGGG
MBU-O-7341
imagen47 24 imagen48 CCGAGACCTAGCCGCGGCCAACGTGCTGC
MBU-O-7342
imagen49 25 imagen50 GCAGCACGTTGGCCGCGGCTAGGTCTCGG
Ejemplo 1: Detección de la interacción entre subunidades de transcriptasa inversa (RT) de VIH1
Con el fin de determinar la funcionalidad del ensayo, se sometió a ensayo la interacción entre las subunidades de VIH1 que forman homodímeros y heterodímeros mediante la transfección de las siguientes combinaciones de plásmidos (100 ng de la construcción de fusión Tyk2(C), 1 µg de la construcción de fusión gp130 y 50 ng de la construcción de informador de luciferasa) de acuerdo con los métodos descritos anteriormente:
a) pMET7-HA-Tyk2(C)-RTp66 + pMG2-RTp51 + pXP2d2-rPAPI-luciferasa
b) pMET7-HA-Tyk2(C)-RTp66 + pMG2-RTp66 + pXP2d2-rPAPI-luciferasa
c) pMET7-HA-Tyk2(C)-RTp51 + pMG2-RTp51 + pXP2d2-rPAPI-luciferasa
Se determinó la señal de fondo para cada uno de los polipéptidos de fusión Tyk2(C) mediante la transfección del plásmido que lo codifica junto con un plásmido que codifica un fragmento de gp130 no condensado (pMG1) y el plásmido informador de luciferasa (pMET7-HA-Tyk2(C)-RTp66 + pMG1 + pXP2d2-rPAPI-luciferasa en a) y b); pMET7-HA-Tyk2(C)-RTp51 + pMG1 + pXP2d2-rPAPI-luciferasa en c)). La inducción múltiple para cada una de las interacciones testadas se calculó como la relación de la actividad de luciferasa medida en relación con la actividad de luciferasa medida para la señal de fondo correspondiente. Los resultados (Figura 2A) muestran señales claras tanto para los homodímeros como para los heterodímeros de RT. La señal más fuerte era la del heterodímero p66p51, se obtuvieron señales inferiores, pero aún robustas para los homodímeros p66 y p51. Esta tendencia se corresponde con las afinidades medidas para las interacciones p66-p51, p66-p66 y p51-p51 en ensayos de interacción in vitro, que se informó que eran 0,3 μΜ, 4μΜ y 230 μΜ, respectivamente (Venezia et al., 2006). Estos datos ilustran la alta sensibilidad del método.
Ejemplo 2: Interacción entre proteínas nucleares
Para determinar si el método puede detectar interacciones entre proteínas nucleares, los autores de la invención han sometido a ensayo la interacción entre la integrasa (IN) de VIH1 y LEDGF humana y entre p53 y MDM2 humanas, proteínas con una localización nuclear. Las células se transfectaron con las siguientes combinaciones de plásmidos (250 ng de la construcción de fusión Tyk2(C), 500 ng de la construcción de fusión gp130 y 50 ng de la construcción de informador de luciferasa) de acuerdo con los métodos descritos anteriormente:
a) pMET7-HA-Tyk2(C)-LEDGF + pMG2-IN + pXP2d2-rPAPI-luciferasa
b) pMET7-HA-Tyk2(C)-MDM2 + pMG1-p53 + pXP2d2-rPAPI-luciferasa
Se determinó la señal de fondo para cada uno de los polipéptidos de fusión Tyk2(C) mediante la transfección del plásmido que lo codifica junto con un plásmido que codifica un fragmento de gp130 no condensado (pMG1) y el plásmido informador de luciferasa (pMET7-HA-Tyk2(C)-LEDGF + pMG1 + pXP2d2-rPAPI-luciferasa en a); pMET7-HA-Tyk2(C)-MDM2 + pMG1 + pXP2d2-rPAPI-luciferasa en b)). La inducción múltiple para cada una de las interacciones testadas se calculó como la relación de la actividad de luciferasa medida en relación con la actividad de luciferasa medida para la señal de fondo correspondiente. El resultado (Figura 3) demuestra que estas
11 5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
interacciones dan lugar a señales fuertes, lo que indica que el método es capaz de detectar interacciones en el núcleo.
Ejemplo 3: Interrupción dependiente de la dosis de la interacción entre p53 y MDM2 humana por Nutlina-3
Para demostrar que el método puede detectar la modulación de las interacciones proteína-proteína de moléculas pequeñas los autores de la invención analizaron la interacción entre p53 y MDM2, que se ha informado que es interrumpida por Nutlina-3, un miembro de la familia de nutlinas de potenciales nuevos compuestos contra el cáncer (Vassilev et al., 2004). Las células fueron transfectadas con las siguientes combinaciones de plásmidos (100 ng de la construcción de fusión Tyk2(C), 1000 ng de la construcción de fusión gp130 y 50 ng de la construcción de informador de luciferasa) de acuerdo con los métodos descritos anteriormente:
a) pMET7-HA-Tyk2(C)-p53(N) + pMG1 + pXP2d2-rPAPI-luciferasa
b) pMET7-HA-Tyk2(C)-p53(N) + pMG1-EFHA1 + pXP2d2-rPAPI-luciferasa
c) pMET7-HA-Tyk2(C)-p53(N) + pMG2-MDM2 + pXP2d2-rPAPI-luciferasa
Después de la transfección, las células fueron tratadas con 0-14-41-123-370-1111-3333nM Nutlina-3, concentración final. Los resultados mostrados en la Figura 4 demuestran una disminución dependiente de la dosis de la señal para la interacción entre p53 (región N-terminal que contiene el dominio de unión de MDM2) y MDM2 tras el tratamiento con Nutlina-3, mientras que la señal correspondiente a la interacción con EFHA1 (que se une a Tyk2(C) en sí) no se ve afectada por este tratamiento. La señal procedente de una transfección de control de combinar pMET7-HATyk2(C)-p53(N) y el plásmido pMG1 que codifica un fragmento de receptor gp130 no condensado es baja y tampoco se ve afectada por el tratamiento de Nutlina-3. Estos datos indican que el método puede detectar cambios dinámicos en los complejos de proteínas que dependen de la adición de componentes exógenos.
Ejemplo 4: Incorporación de otros dominios de quinasa en el método
Para apoyar el hecho de que el método no se limita al uso del dominio quinasa derivado de Tyk2, los autores de la invención han sometido a ensayo proteínas de fusión que comprenden los dominios de quinasa de Jak2 o c-Src. De manera similar a Tyk2, Jak2 pertenece a la familia Jak de tirosina quinasas asociadas al receptor. c-Src pertenece a la familia de tirosina quinasas no receptora de Src. Las células fueron transfectadas con las siguientes combinaciones de plásmidos (250 ng de la construcción de fusión de quinasa, 1000 ng de la construcción de fusión gp130 y 50 ng de la construcción de informador de luciferasa) de acuerdo con los métodos descritos anteriormente:
a) pMET7-HA-Tyk2(C)-RTp66 + pMG2-RTp66 + pXP2d2-rPAPI-luciferasa
b) pMET7-HA-Jak2(C)-RTp66 + pMG2-RTp66 + pXP2d2-rPAPI-luciferasa
c) pMET7-HA-c-Src(K)-RTp66 + pMG2-RTp66 + pXP2d2-rPAPI-luciferasa La actividad de luciferasa se muestra como la inducción múltiple con respecto a la actividad de luciferasa medida en células transfectadas con la misma fusión del dominio RTp66-quinasa, un fragmento de gp130 no condensado y el plásmido informador de luciferasa (pMET7-HA-Tyk2(C)-RTp66 + pMG1 + pXP2d2-rPAPI-luciferasa en a); pMET7HA-Jak2(C)-RTp66 + pMG1 + pXP2d2-rPAPI-luciferasa en b); pMET7-HA-c-Src(K)-RTp66 + pMG1 + pXP2d2-rPAPIluciferasa en c)). La inducción múltiple para cada una de las interacciones testadas se calculó como la relación de la actividad de luciferasa medida en relación con la actividad de luciferasa medida para la señal de fondo correspondiente. El resultado (Figura 5) indica que la interacción entre las subunidades RTp66 también puede detectarse utilizando proteínas de fusión con dominios de quinasa de otras quinasas distintas de Tyk2.
Ejemplo 5: Versión inducible del método
Una versión inducible del método fue ideada para añadir un nivel adicional de control y para permitir la separación temporal de los eventos de interacción de proteínas y de generación de la señal. Esto último podría ser importante en los casos en que la modificación de los polipéptidos de interacción por parte de la actividad de quinasa prohíbe la interacción. Se ha descrito un mutante de tirosina quinasa Src cuya actividad se hace inducible por la pequeña molécula imidazol por una mutación de arginina a alanina en el centro catalítico de la enzima (Qiao et al., 2006). La mutación puntual correspondiente de esta arginina catalítica conservada (R1027) fue generada en Tyk2, condensada a RTp66 y testada en una versión inducible por imidazol del ensayo. Las células fueron transfectadas con las siguientes combinaciones de plásmidos (250 ng de la construcción de fusión de quinasa, 250 ng de la construcción de fusión gp130 y 50 ng de la construcción informador de luciferasa) de acuerdo con los métodos descritos anteriormente:
a) pMET7-HA-Tyk2(C)-RTp66 + pMG1 + pXP2d2-rPAPI-luciferasa
b) pMET7-HA-Tyk2(C)-RTp66 + pMG2-RTp51 + pXP2d2-rPAPI-luciferasa
12
imagen51

Claims (1)

  1. imagen1
ES12706065.5T 2011-03-01 2012-02-29 Sensor del sustrato de quinasa Active ES2617783T3 (es)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161464285P 2011-03-01 2011-03-01
US201161464285P 2011-03-01
GB201103453 2011-03-01
GBGB1103453.5A GB201103453D0 (en) 2011-03-01 2011-03-01 Kinase substrate sensor
PCT/EP2012/053463 WO2012117031A1 (en) 2011-03-01 2012-02-29 Kinase substrate sensor

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2617783T3 true ES2617783T3 (es) 2017-06-19

Family

ID=43904346

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES12706065.5T Active ES2617783T3 (es) 2011-03-01 2012-02-29 Sensor del sustrato de quinasa

Country Status (9)

Country Link
US (2) US10280410B2 (es)
EP (1) EP2681319B1 (es)
AU (1) AU2012222398C1 (es)
CA (1) CA2828649C (es)
DK (1) DK2681319T3 (es)
ES (1) ES2617783T3 (es)
GB (1) GB201103453D0 (es)
HU (1) HUE031971T2 (es)
WO (1) WO2012117031A1 (es)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB201103453D0 (en) 2011-03-01 2011-04-13 Vib Vzw Kinase substrate sensor
CA2866097C (en) 2012-03-06 2021-02-02 Vib Vzw Membrane span-kinase fusion protein and the uses thereof
GB201504859D0 (en) 2015-03-23 2015-05-06 Vib Vzw Viral particle based small molecule-protein interaction trap
CA3125527A1 (en) * 2018-12-20 2020-06-25 Orionis Biosciences, Inc. Particle based small molecule-protein complex trap
US20230026360A1 (en) * 2019-12-17 2023-01-26 Orionis Biosciences, Inc. Detection of molecular interactions

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE68927933T2 (de) 1988-09-02 1997-08-14 Dyax Corp Herstellung und auswahl von rekombinantproteinen mit verschiedenen bindestellen
JPH06508511A (ja) 1990-07-10 1994-09-29 ケンブリッジ　アンティボディー　テクノロジー　リミティド 特異的な結合ペアーの構成員の製造方法
EP0588816A1 (en) 1991-05-15 1994-03-30 Institut De Recherches Cliniques De Montreal Transgenic non-human animal carrying a non-infectious hiv genome
US5637463A (en) 1995-05-04 1997-06-10 Hoffmann-La Roche Inc. Method to detect protein-protein interactions
SE9503151D0 (sv) 1995-09-13 1995-09-13 Bioinvent Internatioal Ab Combined ligand and receptor display
JP2000505306A (ja) 1996-02-26 2000-05-09 モルフォシス・アクチェンゲゼルシャフト ２つまたはそれ以上の相互作用性（ポリ）ペプチドをコードする核酸配列の新規同定方法
US5776689A (en) 1996-07-19 1998-07-07 The Regents Of The University Of California Protein recruitment system
EP1283878B1 (en) 2000-05-22 2005-07-27 Vlaams Interuniversitair Instituut voor Biotechnologie vzw. Receptor-based interaction trap
US20020177217A1 (en) * 2001-03-26 2002-11-28 Massachusetts Institute Of Technology Method for studying protein-protein interactions
WO2004062607A2 (en) 2003-01-13 2004-07-29 Ying Zhang Use of weak acids or their precursors for the treatment of tuberculosis (tb) and drug resistant tb
WO2005007822A2 (en) 2003-07-09 2005-01-27 Sentigen Biosciences, Inc. Method for assaying protein-protein interaction
GB201103453D0 (en) 2011-03-01 2011-04-13 Vib Vzw Kinase substrate sensor

Also Published As

Publication number Publication date
US20140030746A1 (en) 2014-01-30
AU2012222398A1 (en) 2013-09-19
AU2012222398B2 (en) 2016-08-04
WO2012117031A1 (en) 2012-09-07
EP2681319A1 (en) 2014-01-08
CA2828649C (en) 2021-02-02
HUE031971T2 (en) 2017-08-28
AU2012222398C1 (en) 2016-11-24
US10280410B2 (en) 2019-05-07
US11242511B2 (en) 2022-02-08
US20190177705A1 (en) 2019-06-13
DK2681319T3 (en) 2017-03-13
EP2681319B1 (en) 2016-12-14
GB201103453D0 (en) 2011-04-13
CA2828649A1 (en) 2012-09-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2617783T3 (es) Sensor del sustrato de quinasa
Seifert et al. The C at S per channel controls chemosensation in sea urchin sperm
Georgoussi et al. Selective interactions between G protein subunits and RGS4 with the C-terminal domains of the μ-and δ-opioid receptors regulate opioid receptor signaling
Geng et al. The putative protein 6 of the severe acute respiratory syndrome-associated coronavirus: expression and functional characterization
Song et al. Legionella pneumophila regulates host cell motility by targeting Phldb2 with a 14-3-3ζ-dependent protease effector
Fourla et al. Selective interactions of spinophilin with the C-terminal domains of the δ-and μ-opioid receptors and G proteins differentially modulate opioid receptor signaling
JP5099560B2 (ja) 一分子型生物発光可視化プローブ
US10556941B2 (en) Polypeptides and uses thereof for reducing CD95-mediated cell motility
Salvi et al. CK2 involvement in ESCRT-III complex phosphorylation
Amin et al. CLIP-170 tethers kinetochores to microtubule plus ends against poleward force by dynein for stable kinetochore–microtubule attachment
Popova et al. Smurf2 regulates IL17RB by proteasomal degradation of its novel binding partner DAZAP2
Ahn et al. The RNA binding protein HuR does not interact directly with HIV-1 reverse transcriptase and does not affect reverse transcription in vitro
De Feo et al. Resistance to N-peptide fusion inhibitors correlates with thermodynamic stability of the gp41 six-helix bundle but not HIV entry kinetics
Kumar et al. Dynamics of physical interaction between HIV-1 Nef and ASK1: identifying the interacting motif (s)
Stork et al. Study of ULK1 catalytic activity and its regulation
WO2014037460A2 (en) Immobilised cyclin-dependent kinase 4 fusion proteins and uses thereof
US20110294144A1 (en) Screening method
WO2005019472A1 (ja) シノビオリン活性調節作用の検出方法
US20020150901A1 (en) Novel nucleic acids, polypeptides, methods of making, and uses thereof
Nishikawa et al. Novel screening systems for HIV-1 fusion mediated by two extra-virion heptad repeats of gp41
Papp et al. The PARP inhibitor rucaparib blocks SARS‐CoV‐2 virus binding to cells and the immune reaction in models of COVID‐19
Zhu et al. Activation of NF-κB induced by TRIMCyp showing a discrepancy between owl monkey and northern pig-tailed macaque
US20150268247A1 (en) Assay for Screening of Anti-Viral Compounds That Inhibit Specific Interaction Interfaces Between Cullin5 and an ElonginB/ElonginC/ CBF-beta/HIV-1 Vif Complex
Hasan et al. Overexpressed Gα13 activates serum response factor through stoichiometric imbalance with Gβγ and mislocalization to the cytoplasm
US20240011107A1 (en) Live cell assay for protease inhibition