ES2599033T3 - Tratamiento de neoplasias con neurotoxina - Google Patents

Abstract

Una neurotoxina botulínica farmacéuticamente aceptable para su uso en la potenciación de la eficacia de un fármaco anticanceroso o terapia anticancerosa mediante la inhibición del crecimiento o metástasis de una neoplasia en un paciente en combinación con un fármaco anticanceroso o terapia anticancerosa y/o para el tratamiento de un síntoma de una neoplasia en un paciente, comprendiendo dicho procedimiento administrar en la zona no neoplásica alrededor de dicha neoplasia una cantidad terapéuticamente eficaz de dicha neurotoxina botulínica farmacéuticamente aceptable en combinación con un fármaco anticanceroso o terapia anticancerosa, en la que la cantidad terapéuticamente eficaz de la neurotoxina botulínica no penetra en la neoplasia, en la que la neurotoxina botulínica debilita la contracción de las fibras musculares en el tejido no neoplásico alrededor de la neoplasia.

Description

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la propagación de células neoplásicas a través del tejido y a través de los túbulos que drenan la neoplasia. En ciertas realizaciones, los procedimientos descritos en el presente documento paralizan el músculo linfático que aprieta las células neoplásicas y la linfa a través de la circulación. En ciertas realizaciones, los procedimientos descritos en el presente documento también modulan positivamente el sistema inmunológico para mejorar los mecanismos celulares o humorales contra la neoplasia. Después de la administración de la toxina botulínica alrededor de una neoplasia, la extensión regional y distante se reduce o elimina.

Es un objeto de la invención administrar la neurotoxina botulínica de una manera tal que una cantidad terapéuticamente eficaz de la neurotoxina botulínica rodea a una neoplasia pero no penetra en ella. Es otro objeto de la invención administrar la toxina botulínica para inhibir el crecimiento, la invasión o la propagación de las células neoplásicas. Los procedimientos descritos en el presente documento se adaptan fácilmente a, por ejemplo, la terapia del cáncer en el momento en que un cáncer se diagnostica inicialmente y podría mejorar significativamente el resultado de un paciente diagnosticado con cáncer mediante la reducción de la propagación local, regional o distante de las células cancerosas. Los procedimientos descritos en el presente documento se utilizan para pacientes sometidos a cirugía, radioterapia, quimioterapia u otras formas de tratamiento para el cáncer que se ha diagnosticado.

Es otro objeto más de la invención administrar la neurotoxina botulínica, en combinación con un fármaco anticanceroso, por vía tópica o por inyección en el tejido no neoplásico adyacente a una neoplasia. La neurotoxina botulínica puede administrarse a través de una inyección única o varias inyecciones. La neurotoxina botulínica puede administrarse también por aerosol para el tratamiento de, por ejemplo, cáncer de pulmón. Se entiende que la neurotoxina se puede aplicar al tejido no metastásico/no canceroso alrededor de una metástasis para inducir los efectos deseados.

Es otra realización más de la invención que la neurotoxina botulínica, en combinación con un fármaco anticanceroso, se puede inyectar en el tejido linfoide local, regional o distante que se puede realizar con guía visual (ojo o lupa) o radiográfica, tal como una TAC o guía de ultrasonidos.

Es otro objeto que la neurotoxina botulínica, en combinación con un fármaco anticanceroso, se puede aplicar a, pero sin limitaciones, los siguientes sitios: área de los músculos regionales (incluso a nivel microscópico) que rodean a los tejidos linfoides regionales (si el cáncer estaba presente en una superficie de mucosa); las cuencas ganglionares regionales; el timo; el bazo; y la médula ósea u otros sitios hematopoyéticos.

También se divulga un tratamiento con toxina botulínica, sola o en combinación con un fármaco anticanceroso, que puede ser aplicable a otras enfermedades caracterizadas por una mala respuesta celular o humoral. En una realización, la toxina botulínica, sola o en combinación con un fármaco anticanceroso, se puede inyectar localmente en áreas caracterizadas por una baja respuesta celular o humoral, tal como en el páncreas en el paciente con diabetes dependiente de insulina, en la mucosa de la nariz en un paciente con sinusitis fúngica, en la verruga en el paciente con verruga vulgar o en una herida en el paciente con una herida que no cicatriza, o en el timo, el bazo o la médula ósea en el caso de un paciente con inmunodeficiencia.

La presente invención proporciona una neurotoxina botulínica farmacéuticamente aceptable para su uso en la potenciación de la eficacia de un fármaco anticanceroso o terapia anticancerosa mediante la inhibición del crecimiento o metástasis de una neoplasia en un paciente en combinación con un fármaco anticanceroso o terapia anticancerosa, que comprende aplicar a la zona no neoplásica alrededor de dicha neoplasia una cantidad terapéuticamente eficaz de la neurotoxina botulínica en combinación con un fármaco anticanceroso o terapia anticancerosa, en el que la cantidad terapéuticamente eficaz de la neurotoxina botulínica no penetra en la neoplasia. En una realización, la neoplasia se selecciona del grupo que consiste en neoplasias digestivas/intestinales, del sistema nervioso, hepatobiliar, genitourinario, de mama, respiratorias, del integumento, musculoesqueléticas, hematopoyéticas, de los órganos sensoriales, endocrinas o neuroendocrinas. En otra realización, la toxina botulínica es toxina botulínica de tipo A. En otra realización más, la toxina botulínica es toxina botulínica de tipo B.

En una realización adicional, la dosis de la toxina botulínica no excede de 500 unidades por aplicación. En una realización, la dosis de la toxina botulínica es de entre 0,01 y 100 unidades por aplicación. En otra realización, la dosis de toxina botulínica está entre aproximadamente 1 unidad a aproximadamente 50 unidades por aplicación, en otra realización más, la toxina botulínica se aplica por vía tópica, mediante inhalación o mediante inyección.

En una realización, la neurotoxina se aplica mediante inyección.

También se divulga un procedimiento para inhibir la metástasis de una neoplasia en un paciente, que comprende la inyección de una cantidad terapéuticamente eficaz de una neurotoxina botulínica en ganglio o ganglios linfáticos regionales o distales o tejido ganglionar regional o distal, timo, bazo o médula ósea del paciente. En una realización, la toxina botulínica es la neurotoxina botulínica de tipo A.

También se divulga un procedimiento de tratamiento de una enfermedad no cancerosa en un ser humano que se caracteriza por la reducción del número de células NK, su función o actividad, que comprende: a) aplicar, aplicar en sus proximidades o aplicar a una zona fuera de las proximidades del tejido afectado por dicha enfermedad, una cantidad terapéuticamente eficaz de la toxina botulínica; b) aplicar una cantidad terapéuticamente eficaz de dicha

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toxina botulínica a uno o más ganglios linfáticos que están próximos a dicho tejido afectado; y c) aplicar opcionalmente una cantidad terapéuticamente eficaz de dicha toxina botulínica a uno o más ganglios linfáticos que están distales a dicho tejido afectado. En una realización, la neurotoxina se inyecta en el bazo, el timo o en el bazo y en el timo. En una realización, la toxina botulínica es toxina botulínica de tipo A. En otra realización, la toxina botulínica es toxina botulínica de tipo B. En una realización de la presente invención, la enfermedad se selecciona del grupo que consiste en infecciones víricas, enfermedades víricas, crecimientos inducidos por virus, enfermedad autoinmune, esclerosis múltiple, heridas crónicas, artritis reumatoide, miastenia gravis, VIH, síndrome de fatiga crónica y hepatitis.

En otras realizaciones más, la presente invención proporciona un procedimiento para tratar un síntoma de una neoplasia en un paciente, que comprende aplicar a la zona no neoplásico alrededor de dicha neoplasia una cantidad terapéuticamente eficaz de la neurotoxina botulínica, en el que la cantidad terapéuticamente eficaz de la neurotoxina botulínica no penetra en la neoplasia.

En una realización, la neurotoxina desnerva el tejido muscular que rodea a la neoplasia y/o reduce al mínimo y/o detiene el flujo linfático en la región fuera de la neoplasia.

En otra realización, la toxina botulínica debilita la contracción de las fibras musculares en el tejido no neoplásico alrededor de la neoplasia.

La presente invención proporciona una neurotoxina botulínica farmacéuticamente aceptable para su uso en la potenciación de la eficacia de un fármaco anticanceroso o terapia anticancerosa mediante la inhibición del crecimiento o metástasis de una neoplasia en un paciente en combinación con un fármaco anticanceroso o terapia anticancerosa, que comprende administrar en la zona no neoplásica alrededor de dicha neoplasia una cantidad terapéuticamente eficaz de la neurotoxina botulínica en combinación con un fármaco anticanceroso o terapia anticancerosa, en el que la cantidad terapéuticamente eficaz de la neurotoxina botulínica no penetra en la neoplasia de acuerdo con las reivindicaciones adjuntas. En una realización, la neurotoxina botulínica se administra antes de administrar el fármaco anticanceroso o la terapia anticancerosa. En otra realización, la neurotoxina botulínica se administra junto con el fármaco anticanceroso o la terapia anticancerosa. En ciertas realizaciones, el fármaco anticanceroso se selecciona del grupo que consiste en un agente alquilante, un antimetabolito, una antraciclina, mitoxantrona, topoisomerasa, un inhibidor de la mitosis, un esteroide, un agente de diferenciación, una hormona o un agente de inmunoterapia. En otra realización, el inhibidor de la mitosis se selecciona del grupo que consiste en un taxano, una epotilona y un alcaloide de la vinca. En una realización, el taxano es paclitaxel o docetaxel. En otra realización, el taxano es paclitaxel.

Breve descripción de los dibujos

La siguiente descripción detallada, proporcionada a modo de ejemplo pero con la que no se pretende limitar la invención únicamente a las realizaciones específicas descritas, se puede entender junto con las figuras adjuntas, en las que:

La figura 1 muestra una representación gráfica de los volúmenes tumorales relativos medios para cada día de medición tratado en el ejemplo 14. La figura 2 muestra un modelo de crecimiento de los tumores individuales tratados en el ejemplo 14.

Descripción detallada de la invención

La presente invención trata células no neoplásicas (por ejemplo, normales, no enfermas, no cancerosas) con el fin de tratar una neoplasia. Tratamiento significa reducir, prevenir o eliminar las células neoplásicas o la propagación de las células neoplásicas o los síntomas de una neoplasia en la circulación, regional o sistémica. La presente invención trata afecciones no cancerosas (benignas), precancerosas y cancerosas (malignas), así como crecimientos o trastornos mediados por virus, infecciones crónicas y trastornos inmunitarios mediante la inyección de la toxina botulínica lejos del sitio de origen de la neoplasia, afección, crecimiento, infección o trastorno. Las inyecciones de toxina botulínica pueden reducir o eliminar los síntomas de la neoplasia, afección, crecimiento, infección o trastorno.

Como se utiliza en el presente documento, el término "neoplasia" incluye tumores benignos (no cancerosos), precancerosos o cancerosos (malignos). La expresión "células neoplásicas" incluye células benignas (no cancerosas), precancerosas o cancerosas (malignas) procedentes de una neoplasia. La frase "células no neoplásicas" se refiere a las células normales y sanas no procedentes de una neoplasia. Las células no neoplásicas son células no precancerosas, no cancerosas, no enfermas.

Neurotoxina botulínica" puede significar una neurotoxina botulínica ya sea como toxina pura o en complejo. En una realización, la neurotoxina botulínica puede ser neurotoxina botulínica de los serotipos A, B, C1, D, E, F y G. En otra realización, la neurotoxina botulínica es del serotipo A o el serotipo B. En otra realización más, la neurotoxina botulínica es de serotipo A.

La presente invención se basa en la conocida afinidad de la toxina botulínica por el músculo, específicamente el

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Para el tratamiento de las afecciones anteriores, la neurotoxina también se puede aplicar a la zona que rodea al tejido afectado. Además, la neurotoxina puede además inyectarse en los ganglios linfáticos proximales, los ganglios linfáticos distales, el timo y/o el bazo.

Algunas enfermedades, tales como fatiga crónica, VIH y SIDA, son sistémicas y no implican a un solo sistema 5 orgánico o tejido. En ese caso, la afección se trata inyectando en el timo, el bazo o la médula ósea. También se pueden inyectar en los ganglios linfáticos.

Para la inyección de un órgano o un tejido, especialmente uno que no pueda visualizarse, la aguja puede guiarse a su lugar usando técnicas convencionales. Estas técnicas incluyen, pero no se limitan a las mismas, palpitaciones, guía de ultrasonido, guía de exploración CAT y la guía de rayos X.

10 La tabla 1 siguiente muestra varias realizaciones diferentes de la presente invención.

Tipo de neoplasia/cáncer que se va a tratar

Gastrointestinal

Mama Piel Respiratoria Próstata

Localización

mucosa rodeando a la Subcutánea Parénquima Parénquima

de la

neoplasia en el intradérmica

administración

submucosa tejido mamario subdérmica

de toxina botulínica

muscular extraserosa profunda

Momento de la

– en la visita inicial igual igual igual igual

administración

–segunda visita después de la confirmación del cáncer

Terapia

–ninguna (por ejemplo, igual igual igual igual

adicional

toxina botulínica sola) –cirugía –quimioterapia –radioterapia –inmunoterapia

Dosis de

Hasta 500 unidades igual igual igual igual

toxina

botulínica

Administración/sitio de inyección

Número de sitios de inyección

Hasta 10 sitios igual igual igual igual

Procedimiento

Endoscopia, guía de Mamografía, Visualización guía TAC/RM, Guía DR/RM,

de localización

ultrasonidos con fluoroscopia, directa, guía broncoscopia, visualización

endoscopio,

guía de de visualización transrrectal,

visualización directa

ultrasonidos o ultrasonidos directa durante ultrasonidos

durante la cirugía, guía

TAC/RM, la cirugía transrrectales o

TAC/RM

visualización inyección

directa durante

guiada por

la cirugía

citoscopia,

inyección

endoscópica

transuretral

Toxina botulínica

La bacteria anaerobia grampositiva Clostridium botulinum produce una potente neurotoxina polipeptídica, la toxina botulínica, que puede causar una neuroparálisis en los seres humanos. La neuroparálisis habitualmente se conoce

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diferencian en células plasmáticas y secretan anticuerpos (el sistema inmunológico humoral). Después de la diferenciación, los linfocitos B viajan a los ganglios linfáticos, el bazo y, especialmente, las placas de Peyer en el intestino (Junqueira, citado anteriormente, página 312).

Ganglios linfáticos: Los ganglios linfáticos son áreas de tejido linfoide periférico encapsulado. Se distribuyen por todo el cuerpo, siempre a lo largo del curso de los vasos linfoides, que llevan la linfa a los conductos torácicos y linfáticos (Junqueira, citado anteriormente, página 313). Los ganglios linfáticos se agregan en sitios particulares, tales como el cuello, las axilas, las ingles y la región para-aórtica. La ubicación precisa de los ganglios linfáticos es bien conocida. Véase, por ejemplo, Le, UAMS Department of Anatomy Lymphatics Tables (Jul. 16, 2005).

La linfa entra en los ganglios linfáticos a través del canal linfático aferente y sale a través del canal eferente. El flujo es unidireccional. A medida que la linfa fluye a través de los senos, el 99 % o más de los antígenos u otros desechos se eliminan por la actividad fagocítica de los macrófagos en el ganglio. Parte del material está atrapado en la superficie de las células dendríticas, que a continuación se exponen en la superficie de la célula dendrítica y son reconocidas por los linfocitos inmunocompetentes actúan sobre ellos. El parénquima de un ganglio linfático tiene tres regiones generales, la corteza, la paracorteza y la médula.

En la corteza, si un linfocito B reconoce un antígeno (y a veces con la ayuda de los linfocitos T), el linfocito B puede activarse y sintetizar anticuerpos que se liberan en el líquido linfático y después en la circulación. Los linfocitos B activados permanecen dentro del ganglio linfático. Los linfocitos B no estimulados salen del ganglio linfático y vuelven a la circulación general.

Los linfocitos T permanecen predominantemente en la región paracortical del ganglio linfático. Los linfocitos T activados pasan a la circulación para llegar al sitio periférico. Otros tipos de células, predominantemente las células presentadoras de antígeno, residen en la región paracortical del ganglio linfático.

La médula es rica en células plasmáticas que producen anticuerpos y macrófagos adicionales.

Tejido no encapsulado: EL tejido linfoide no encapsulado se puede encontrar sobre todo en el tejido conjuntivo laxo de muchos órganos, principalmente en la lámina propia del aparato digestivo, el aparato respiratorio superior y las vías urinarias (Junqueira, citado anteriormente, página 323). Las amígdalas palatinas, linguales y faríngeas son otro sitio principal del tejido linfoide no encapsulado. Este denominado tejido linfoide asociado a mucosas (MALT) incluye tejido linfoide asociado al intestino (GALT), tejido linfoide asociado a los bronquios/tráquea (BALT), linfoide asociado a la nariz (NALT) y el tejido linfoide asociado a la vía vulvovaginal (VALT). Existe MALT adicional dentro de los órganos accesorios del aparato digestivo, predominantemente en la glándula parótida.

El MALT puede comprender una colección de células linfoides o puede incluir pequeños ganglios linfáticos solitarios. La estimulación de los linfocitos B conduce a la producción de inmunoglobulina A (IgA) e IgM dentro de las placas de Peyer. Además, las superficies epiteliales contienen células M que son células especializadas que absorben, transportan y presentan los antígenos a las células linfoides subepiteliales, tales como las células colaboradoras 1 de tipo CD4, las células presentadoras de antígeno y las células de memoria.

Una discusión más específica de los linfocitos se expondrá a continuación, pero en general, los linfocitos contienen receptores de antígenos que desencadenan la diferenciación. En los órganos periféricos, los linfocitos interaccionan con antígenos apropiados, aumentan de tamaño y luego se dividen. Algunos se convierten en células efectoras y otros se convierten en células de memoria que son responsables de la respuesta inmunitaria secundaria. Para generar una respuesta inmunitaria y para generar las células efectoras, el antígeno debe ser liberado a ellas. Este es el trabajo de las células presentadoras de antígenos, que incluyen células dendríticas, macrófagos y células de Langhans en la epidermis.

Las células efectoras se pueden ser linfocitos B o T activados. Los linfocitos B efectores son células plasmáticas que secretan inmunoglobulinas en los tejidos conjuntivos circundantes. Los linfocitos T efectores son de varios tipos e incluyen linfocitos T colaboradores, linfocitos T supresores y linfocitos T citotóxicos. Las células atacadas incluyen células infectadas por virus y tumorales. Los linfocitos T y los macrófagos secretan linfocinas que regulan la proliferación tanto de los linfocitos T como B.

Flujo linfático

El sistema linfático se encuentra en casi todos los órganos excepto el sistema nervioso central y la médula ósea. La circulación linfática está ayudada por la acción de fuerzas externas, tales como la contracción del músculo esquelético que rodea en sus paredes. (Junqueira, citado anteriormente, página 269). Estas fuerzas producen el transporte a lo largo de los canales linfáticos. La contracción del músculo liso en las paredes de los vasos linfáticos más grandes también ayuda a impulsar la linfa. El transporte de la linfa depende de las fuerzas de conducción activa y pasiva. La fuerza de conducción activa resultante de la actividad de la bomba intrínseca en algunos vasos linfáticos desempeña un papel importante en la propulsión de flujo de la linfa (Hosaka K, y col., Am J Physiol Heart Circ Physiol 284, 2003, resumen) Hay un tono miogénico en los canales linfáticos. Se ha demostrado que la vía de la cinasa Rho (que es inhibida por la toxina botulínica) ayuda a regular la actividad de la bomba de linfa (Hosaka, citado anteriormente). De hecho, se ha demostrado que los vasos linfáticos son capaces de regular el flujo a través

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Las respuestas inmunitarias antitumorales pueden ser innatas (natural) o adquiridas (adaptativa). La inmunidad innata está mediada por las células o factores solubles que existen de forma natural en los tejidos de los fluidos corporales y puede interferir con el crecimiento del tumor (Whiteside T L. J. Allergy Clin Immunol 2003; 111, S677– 86). Las células hematopoyéticas incluidas son macrófagos, granulocitos, células asesinas naturales, células T no restringidas por MHC y los linfocitos T gamma/delta. Asimismo, los anticuerpos naturales dirigidos a los componentes de la superficie de las células tumorales, componentes del complemento, proteína C reactiva, proteína amiloide A sérico, proteína de unión a manosa también están incluidos (Whiteside, citado anteriormente). La inmunidad adaptativa está mediada por los linfocitos T que reconocen los péptidos derivados del tumor unidos a moléculas auto-MHC expresadas sobre las células presentadoras de antígenos (CPA). Estas células incluyen células citolíticas efectoras, que son CD8 + y restringidas por MHC de clase I, pero también linfocitos T colaboradores CD4 + (Whiteside, citado anteriormente).

Las respuestas inmunitarias a las células malignas se pueden clasificar como locales/regionales o sistémicas. Las respuestas locales incluyen leucocitos infiltrantes de tumor (LIT). Existen respuestas sistémicas y se miden por la hipersensibilidad de tipo retardado (HTR) en la circulación periférica en pacientes con cáncer.

2) Células inmunitarias en el microambiente tumoral

Whiteside, citado anteriormente, revisa el microambiente tumoral. Los LIT se encuentran frecuentemente en los tumores. Estas células pueden incluir células que median la inmunidad innata y adaptativa. Diversos productos solubles, tales como citocinas y anticuerpos, también pueden liberarse en el microambiente. En teoría estos productos combinados con la interacción directa de las células efectoras infiltrantes deberán producir la muerte de las células cancerosas, pero debido a los mecanismos descritos anteriormente, esto no suele ocurrir.

Los linfocitos T son los más abundantes de todos los infiltrados tumorales mononucleares. Se ha demostrado que los linfocitos T en el microambiente tumoral incluyen células CD4 + (colaboradoras) y CD8 + (supresoras). Se ha demostrado que son disfuncionales en pacientes con cáncer y la magnitud de su disfunción puede estar relacionada con el pronóstico y la supervivencia en pacientes con cáncer. Tradicionalmente, la respuesta protectora de los linfocitos T a los tumores se ha atribuido a los linfocitos T CD8 con actividad citotóxica, que están restringidos por las moléculas de MHC de clase I, pero recientemente se ha considerado que las células CD4 desempeñan un papel antitumoral (Gerloni M, y col., Springer Seminars in Immunopathology, Springer–Veriag 2005, 1–15). En general, tanto las respuestas celulares como las mediadas por anticuerpos se utilizan para las respuestas antitumorales. Las respuestas de anticuerpos son las más adecuadas para los patógenos y antígenos extracelulares, y las respuestas mediadas por células son las más adecuadas para los patógenos intracelulares y células tumorales (Gerloni, citado anteriormente). Dado que los antígenos tumorales son siempre antígenos endógenos, los tumores pueden ser más adecuados para su destrucción por la inmunidad mediada por células. Además, ya que los tumores son negativos para MHC II, la mayoría de los esfuerzos se han centrado en los linfocitos T CD8, el papel de los linfocitos CD4 se ha demostrado, así, ya que ayudan a activar y expandir los linfocitos CD8 también. Hay dos subpoblaciones de linfocitos CD4, los linfocitos T colaboradores 1 (Th1) y los linfocitos Th2. Los linfocitos Th1 producen interleucina-2 (IL-2), IL-12 e interferón-gamma (INF-G) y Th2 producen IL-4 e IL-5. Estas citocinas afectan a los linfocitos B y ayudan aún más a la influencia del tipo de respuesta de anticuerpos a la activación por antígeno (Gerloni, citado anteriormente. Las células CD4 pueden ayudar a activar los macrófagos en los ganglios linfáticos drenantes o en el tejido tumoral.

La cooperación célula-célula también puede existir entre las células CD4. Gerloni, citado anteriormente, ha demostrado que una célula CD4 puede activar y expandir otras células CD4 también.

La producción y liberación en la membrana celular de antígenos celulares es importante en la inmunidad y destrucción tumoral. Ambos antígenos restringidos por MHC de clase I y de clase II están involucrados en la respuesta antitumoral. La mayoría de la atención en la inmunidad tumoral se ha centrado en el papel de los antígenos restringidos por el MHC de clase I pero los antígenos de clase II son importantes también. Los antígenos de clase II son específicos de tejido, compartidos entre varios tipos de tumores, antígenos tumorales comunes verdaderos y antígenos virales que causan la transformación tumoral (tales como el virus del papiloma humano o los antígenos del virus de Epstein Barr).

Las células asesinas naturales (NK) median la inmunidad innata y están bien equipados para la lisis de las células tumorales. Se piensa que estas células facilitan las interacciones células dendríticas/linfocitos T y dirigen la respuesta inmunitaria a TAA. En general se piensa que estas células no son abundantes en el microambiente tumoral, pero esto puede ser debido a la dificultad para su identificación fiable. Además, las células NK son dependientes de la interleucina-2 (IL-2) para la activación, que generalmente es deficiente en tumores humanos. (Whiteside, citado anteriormente. Las células NK son también capaces de responder a las células infectadas por virus. Las células NK desempeñan un papel crítico en la limitación de las infecciones virales, como lo han indicado estudios con virus herpes, tales como el citomegalovirus (CMV), el virus herpes simple (VHS) y el virus de Epstein-Barr (EBV), así como el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) (Smyth M J, y col., Molec Immunol 42 (2005) 501–510). Las funciones efectoras de las células NK, incluyendo la citotoxicidad y la capacidad para producir diversas citocinas (incluyendo INF-gamma) después de la activación que restringe la angiogénesis tumoral y estimula la inmunidad adaptativa (Smyth, citado anteriormente. Clinically, enhancement of NK cell function parallels

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embargo, este tipo de tratamiento no se ha demostrado que tenga beneficios consistentes de la supervivencia para el paciente de cáncer. La inmunomodulación específica activa puede incluir la administración de vacunas basadas en células dendríticas o de vacunas basadas en ADN. Esta terapia está en pañales y por lo general está reservada para las enfermedades recurrentes en estadio terminal de cánceres agresivos.

La inmunomodulación pasiva también se divide en terapias inespecíficas y específicas. La terapia pasiva, no específica incluye la administración de citocinas, tales como interferón o interleucina sistémicos o mecanismos de transferencia adoptivos celulares, tales como células asesinas activadas por linfocitos e interleucina-2 administrada localmente. Los resultados de este tipo de tratamiento no fueron consistentes y produjeron altas toxicidades clínicas. Cuando la IL-2 se administra por vía sistémica se observó una tasa inaceptable de toxicidad sistémica, incluyendo fiebre, malestar general, hipotensión, edema pulmonar y shock. La inmunomodulación pasiva específica incluye la administración de anticuerpos dirigidos al receptor del factor de crecimiento epidérmico, o por medio de transferencia adoptiva celular a través de los linfocitos T específicos para el tumor.

7) Importancia de mantener la exocitosis para el reconocimiento inmunitario

Como se ha indicado anteriormente, con el fin de matar con eficacia las células cancerosas, es importante que las células cancerosas mantengan su capacidad para sufrir exocitosis. La exocitosis es el proceso específico por el cual una vesícula celular se fusiona con la membrana plasmática de la célula. Es el proceso por el cual las proteínas y los lípidos que se crean dentro de una célula son transportados al exterior de la célula. (Alberts B, y col., Molecular Biology of the Cell, Tercera edición, 1994, Garland Publishing pg. 626).

Las proteínas pueden secretarse a partir de las células por exocitosis de forma constitutiva o regulada (Alberts, citada anteriormente, página 633). En la vía regulada, las moléculas se almacenan en vesículas secretoras que no se fusionan con la membrana plasmática para liberar su contenido hasta que se recibe una señal extracelular. Mientras que esta vía solo funciona en células seleccionadas especializadas, una vía secretora constitutiva funciona en todas las células, mediada por el transporte vesicular continuo de la cara trans del aparato de Golgi a la membrana plasmática. (Alberts, citado anteriormente, página 633). Este procedimiento permite liberar varias proteínas de membrana, proteínas y lípidos secretados en los dominios de la membrana plasmática apropiados (Alberts, citado anteriormente, página 633).

Un antígeno es una macromolécula que incluye prácticamente todas las proteínas y muchos polisacáridos (Alberts, citado anteriormente, página 1201). Estos denominados determinantes antigénicos estimulan la producción de anticuerpos o respuestas de linfocitos T (Alberts, citado anteriormente, página 1201). Debido a que el sistema inmunológico funciona mediante expansión clonal, incluso un solo determinante antigénico activará muchos clones. Por el contrario, la alteración o regulación por disminución de los determinantes antigénicos puede alterar previsiblemente significativamente la respuesta inmunitaria del huésped a un antígeno tumoral.

La mayoría de los TAA son autoantígenos que se sobreexpresan o están alterados postranscripcionalmente. Con el fin de montar una respuesta adecuada, los linfocitos T específicos de TAA y la inmunidad innata mediada por linfocitos T activados no específicos, células NK activadas y macrófagos activados son necesarios. Con esto en mente, hay dos razones principales por las que los tumores no inducen una respuesta inmunitaria enérgica. En primer lugar, el tumor puede dejar de proporcionar un antígeno apropiado para la respuesta inmunitaria que se desea detectar y al que el sistema inmunológico puede reaccionar. En segundo lugar el tumor puede evitar una respuesta inmunitaria al no proporcionar moléculas accesorias importantes para el desarrollo de una respuesta inmunitaria (Steele, citado anteriormente).

La falta de presentación de antígeno adecuada puede incluir la expresión de una proteína tumoral mutante que no es inmunogénica, que tiene una vía de procesamiento de antígeno defectuosa, de modo que el antígeno no se puede transportar a la superficie celular o enmascarando el antígeno tumoral, por lo que no puede ser visto por las células inmunitarias (Steele, citado anteriormente). Sin la expresión tumoral de moléculas de superficie importantes, no se puede generar una respuesta antitumoral (Steele, citado anteriormente. Estos resultados hacen hincapié en la necesidad de tener un procedimiento intacto de exocitosis en las células cancerosas para permitir que los TAA se expresen en las células cancerosas y provoquen una respuesta inmunitaria.

Se ha demostrado que cuando los cánceres tienen una mayor expresión de beta-2 macroglobulina, un componente del MHC-1, el resultado clínico mejora (Feinmesser M y col., Eur Arch Otorhinolaryngol (2004) 261:359–368). Se sugiere que el incremento de la expresión del antígeno facilita la presentación del antígeno tumoral a los linfocitos CD8.

Además de la expresión de TAA, la exocitosis es importante en la metástasis. La metástasis del cáncer es un proceso que implica un programa coordinado de acontecimientos que incluye cambios en la adhesión celular, la proteolisis polarizada y la migración, la intravasación en la circulación, la posterior adhesión a las células endoteliales, seguida de la extravasación, la invasión y la inducción de la angiogénesis. Las proteínas y receptores de la superficie celular están implicados íntimamente en estos procesos. Por ejemplo, la pérdida de E-cadherina puede reducir la adhesión célula-célula y permitir que las células cancerosas escapen más fácilmente de los tumores. Las integrinas regulan la adhesión celular, la motilidad, la invasión y la angiogénesis, y las metaloproteasas

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Clasificación de los cánceres susceptibles de tratamiento:

Tabla 1: Clasificación de los cánceres susceptibles de tratamiento

Tipo de cáncer

Ejemplos específicos

Cánceres digestivos/intestinales

De glándulas salivales, labios, cavidad oral, orofaringe, hipofaringe, nasofaringe, esófago, estómago, intestino delgado, intestino grueso, anal

Cánceres del sistema nervioso

Cerebro, nervios

Cánceres hepatobiliares

De hígado, vesícula biliar, páncreas, aparato biliar

Cánceres genitourinarios

De riñón, uréter, vejiga, uretra, próstata, pene, vagina, vulva, útero, endometrio, ovario, cervical, testículos

Cáncer de mama

Cánceres respiratorios

De nariz, senos paranasales, nasofaringe, laringe, tráquea, bronquios, pulmón, pleura (mesotelioma)

Cánceres del integumento

Melanoma, carcinoma de células escamosas, carcinoma de células basales, de células de Merkel

Cánceres musculoesqueléticos

rabdomiosarcoma, sarcomas

Cánceres hematopoyéticos

Linfoma, leucemia, mielodisplasia

Cánceres de órganos sensoriales

ojo, oído

Cánceres endocrinos

de tiroides, paratiroides

Cánceres neuroendocrinos

cánceres neuroendocrinos a excepción de las de la médula suprarrenal o tumores del glomus

El control de la metástasis es importante para el tratamiento del cáncer

5 Inhibición de la propagación: la manipulación física o presionar un cáncer a nivel macro o microscópica a través de células contráctiles puede producir una presión física para que las células cancerosas se propaguen o puede permitir que las células cancerosas que ya han entrado en un canal eferente se presione a la circulación más ancha. Por ejemplo, una premisa bien conocida en la cirugía oncológica es reducir al mínimo la manipulación del cáncer durante la resección para reducir al mínimo las fuerzas físicas que pueden conducir a la entrada y la propagación de

10 las células cancerosas en los túbulos, tales como los vasos linfáticos o los sanguíneos. De hecho, cuando sea quirúrgicamente factible, es deseable ligar inicialmente los vasos de un cáncer al cáncer y minimizar la propagación.

La toxina botulínica desnervará localmente el tejido muscular

La toxina botulínica inhibirá la contracción de las fibras musculares macro o microscópicas alrededor de un cáncer, inhibiendo de este modo la oportunidad de presionar las células cancerosas en el entorno local o en los túbulos

15 eferentes que transportan al cáncer a distancia. La toxina botulínica paraliza el músculo linfático que se contrae para presionar la linfa y, posiblemente, las células cancerosas en la circulación distante.

La capacidad para inmunomodular positivamente es importante para el tratamiento del cáncer

La toxina botulínica puede aumentar la producción de inmunoglobulina local cuando se aplica a una superficie mucosa. Esto puede mejorar las células “asesinas de tumores” o las propiedades del tejido local y mejorar el efecto

20 anticanceroso.

Se ha demostrado que la toxina botulínica mejorar y/o produce la proliferación de una "célula mioepitelial”, que es un tipo de célula muy específico. La célula mioepitelial se considera una célula de defensa importante en el cáncer de mama por mecanismos desconocidos. Aumentando la proliferación de estas células mioepiteliales, la toxina botulínica puede mejorar el mecanismo de defensa del huésped en los tumores que tienen células mioepiteliales

25 (mama, próstata, pulmón, vías respiratoria, etc.).

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Otros mecanismos desconocidos también pueden participar. Por ejemplo, la señalización célula-célula y el posterior crecimiento/metástasis es una característica de las células cancerosas. Se ha sugerido que mediante la alteración de estas señales, se puede alterar el crecimiento del cáncer. En cuanto a la toxina botulínica, las señales pueden ser químicas (por ejemplo, las sustancias liberadas por exocitosis y bloqueadas por la toxina botulínica) o físicas (por ejemplo, las señales físicas que rodean a las células), pero cualquiera puede ser bloqueada por la toxina botulínica.

Las técnicas que se dirigen a múltiples secuencias de acontecimientos en la progresión del cáncer es más probable que sean beneficiosas que una técnica dirigida a solo una secuencia.

La invención se describirá a continuación mediante los ejemplos siguientes.

Ejemplos

El siguiente ejemplo demuestra la capacidad de la toxina botulínica para mejorar una respuesta inmunitaria celular.

Ejemplo n.º 1

A un paciente con verruga vulgar (verruga común) se inyecta en la base de la verruga y su periferia un total de 25 unidades de toxina botulínica de tipo A. Durante 3-5 semanas, se advierte que el tamaño de la lesión se reduce significativamente en todas las dimensiones (en casi un 90 %), es blanda y apenas perceptible. Después de 3 meses, el tamaño de la lesión vuelve a su tamaño original.

Los siguientes son ejemplos proféticos.

Ejemplo n.º 2

A un paciente de 50 años de edad con un diagnóstico de cáncer de pulmón invasivo se administran localmente 30 unidades de la toxina botulínica de tipo A alrededor del cáncer mediante inyección broncoscópica, aerosol o inyección transtorácica. El cáncer se visualiza clínica o radiográficamente y se inyecta directamente en la zona alrededor del cáncer y se somete al paciente a radiación, quimioterapia o cirugía como estaba previsto inicialmente. La aplicación local de la toxina botulínica también mejora la inmunidad local del paciente que sirve para minimizar la infección durante el tratamiento, dando lugar a un menor número de episodios de neumonía y a menos interrupciones en el tratamiento a causa de la infección. Después de 2 meses de terapia estándar contra el cáncer, se observa que la invasión local y la propagación regional y distante se reducen. El paciente experimenta un resultado clínico mejorado.

En el ejemplo anterior, también se pueden inyectar en cada uno del ganglio o ganglios linfáticos regionales o distantes del paciente, el timo, el bazo o la médula ósea 1-100 unidades de toxina botulínica de tipo A. Los tejidos se inyectan mediante guía radiográfica o visualización directa durante mediastinoscopia o cirugía. Después de la inyección, se observa que hay una respuesta inmunológica mejorada contra el cáncer. El control local y las metástasis locales, regionales y distantes se reducen. La inyección puede repetirse en intervalos de 3-6 meses.

Ejemplo n.º 3

A un varón de 50 años de edad con cáncer de próstata invasivo se inyectan 40 unidades de toxina botulínica de tipo A alrededor del cáncer, que se traduce en un menor número de metástasis regionales o distantes. La inyección es guiada a la zona alrededor del cáncer mediante guía radiográfica (exploración por TAC, ecografía, guía de resonancia magnética u otros). El efecto de la toxina botulínica también se produce en el mioepitelio local y la incidencia durante la metástasis regional y distante en tránsito se reduce. El paciente sigue recibiendo terapia estándar para el cáncer de próstata. Durante el curso del tratamiento hay menos invasión de los tejidos circundantes y menos propagación de las células cancerosas en la circulación regional o sistémica. Se vuelve a evaluar al paciente periódicamente y se observa que se debe repetir la inyección en el cáncer y la región del cáncer en 3 meses, ya que el paciente tiene una enfermedad persistente que no respondió a la terapia estándar. Se inyectan 40 unidades más y el paciente continúa con la terapia planificada. Tres meses después, el tumor se elimina y no se requieren más inyecciones. El paciente experimenta cura y supervivencia mejoradas.

También se pueden inyectar en cada uno de los ganglios linfáticos regionales o distantes del paciente, el timo, el bazo o la médula ósea 1-100 unidades de toxina botulínica de tipo A. Estos tejidos se inyectan mediante guía radiográfica, palpación directa o durante la cirugía. El control local y las metástasis locales, regionales y distantes se reducen. La inyección puede repetirse en intervalos de 3-6 meses.

Ejemplo n.º 4

Una mujer de 60 años diagnosticada con cáncer de mama se trata con 30 unidades de toxina botulínica de tipo A inyectadas alrededor del cáncer antes de que comience cualquier terapia. La contracción local del tejido de mama se reduce y el paciente experimenta una reducción de la incidencia de propagación local, regional y distante. El resultado clínico mejora.

También se pueden inyectar en cada uno de los ganglios linfáticos regionales o distantes del paciente, el timo, el

22

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Tabla 2 Volumen medio del tumor de xenoinjertos de tumores de cáncer colorrectal humano HCT–116 en ratones desnudos después del tratamiento con la toxina botulínica A, paclitaxel, toxina botulínica A + paclitaxel o los grupos de vehículo correspondientes

Grupo

Tratamiento Volumen tumoral medio (mm3) ± s.e.m. el día

0

5 7 11 14 18 20

1

Vehículo para BTX* 101,7 ± 9,7 194,5 ± 27,2 250,2 ± 32,9 304,5 ± 43,5 398,4 ± 56,7 483,0 ± 76,7 523,2 ± 121,7 (9)

2

BTX 101,2 ± 9,4 96,7 ± 22,5 (4) 135,3 ± 32,5 (4) 172,0 ± 25,4 (4) 203,9 ± 36,1 (4) 250,8 ± 48,8 (4) 245,1 ± 62,1 (4)

3

Vehículo para paclitaxel # 100,6 ± 9,7 164,7 ± 17,7 206,6 ± 23,2 266,6 ± 35,4 351,7 ± 49,9 406,5 ± 52,3 448,5 ± 65,3

4

Paclitaxel 100,0 ± 9,9 175,1 ± 21,9 218,9 ± 27,4 245,2 ± 38,9 306,1 ± 49,3 407,4 ± 74,3 437,6 ± 79,4

5

Vehículo para BTX * + Vehículo para paclitaxel # 100,7 ± 10,2 140,4 ± 13,0 183,6 ± 28,1 241,1 ± 38,4 294,3 ± 42,3 373,6 ± 54,2 455,8 ± 95,7

6

BTX + Paclitaxel 100,8 ± 10,3 125,3 ± 14,4 (5) 141,0 ± 22,7 (5) 180,6 ± 42,5 (5) 231,1 ± 48,6 (5) 262,0 ± 56,4 (5) 256,1 ± 70,7 (5)

* 0,9 % p/v de solución salina estéril. # DMSO en 5 % de etanol, 10 % de cremafor, 85 % de solución salina estéril (0,9 % p/v) n = 10, a menos que se indique de otro modo entre paréntesis.

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Tabla 3 Volumen tumoral relativo medio de xenoinjertos de tumores de cáncer colorrectal humano HCT–116 en ratones desnudos después del tratamiento con la toxina botulínica A, paclitaxel, toxina botulínica A + paclitaxel o los grupos de vehículo correspondientes

Grupo

Tratamiento Volumen tumoral relativo medio (mm3) ± s.e.m. el día:

0

5 7 11 14 18 20

1

Vehículo para BTX* 1,0 ± 0,0 2,0 ± 0,3 2,5 ± 0,4 3,1 ± 0,5 4,0 ± 0,6 4,9 ± 0,9 4,9 ± 1,3 (9)

2

BTX 1,0 ± 0,0 1,0 ± 0,2 (4) 1,5 ± 0,3 (4) 2,0 ± 0,2 (4) 2,3 ± 0,2 (4) 2,8 ± 0,3 (4) 2,6 ± 0,6 (4)

3

Vehículo para paclitaxel # 1,0 ± 0,0 1,8 ± 0,3 2,3 ± 0,4 3,0 ± 0,6 3,9 ± 0,9 4,6 ± 1,0 4,9 ± 1,0

4

Paclitaxel 1,0 ± 0,0 1,7 ± 0,1 2,2 ± 0,1 2,4 ± 0,2 3,0 ± 0,3 4,1 ± 0,5 4,4 ± 0,6

5

Vehículo para BTX * + Vehículo para paclitaxel # 1,0 ± 0,0 1,6 ± 0,4 2,2 ± 0,7 3,0 ± 1,0 3,6 ± 1,1 4,6 ± 1,5 5,8 ± 2,1

6

BTX + Paclitaxel 1,0 ± 0,0 1,2 ± 0,1 (5) 1,4 ± 0,2 (5) 1,7 ± 0,3 (5) 2,2 ± 0,3 (5) 2,5 ± 0,4 (5) 2,4 ± 0,5 (5)

* 0,9 % p/v de solución salina estéril. # DMSO en 5 % de etanol, 10 % de cremafor, 85 % de solución salina estéril (0,9 % p/v) n = 10, a menos que se indique de otro modo entre paréntesis.

5

Tabla 4 Tiempos de duplicación estimados de xenoinjerto de tumores colorrectales humanos HCT–116 después del tratamiento con la toxina botulínica A, paclitaxel, toxina botulínica A + paclitaxel o los grupos de 10 vehículo correspondientes

Tiempo de Inferior Valor p

Superior

duplicación

Grupo Tratamiento

IC del 95 (tratamiento comparado

IC del 95 %

(Días) % con vehículo)

1, 3, 5

Vehículo 9,7 8,5 11,4

2

BTX 12,5 8,3 25,8 0,29

4

Paclitaxel 10,5 8,2 14,4 0,63

6

BTX + Paclitaxel 16,3 10,2 40,8 0,04*

* p = < 0,05.

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Claims (1)

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