ES2597755T3 - Sales de arginina de un agonista de TLR7 - Google Patents

Sales de arginina de un agonista de TLR7 Download PDF

Info

Publication number
ES2597755T3
ES2597755T3 ES13708142.8T ES13708142T ES2597755T3 ES 2597755 T3 ES2597755 T3 ES 2597755T3 ES 13708142 T ES13708142 T ES 13708142T ES 2597755 T3 ES2597755 T3 ES 2597755T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
salt
arginine
compound
formula
antigen
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES13708142.8T
Other languages
English (en)
Inventor
Stephanie Kay Dodd
Siddartha JAIN
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
GlaxoSmithKline Biologicals SA
Original Assignee
GlaxoSmithKline Biologicals SA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by GlaxoSmithKline Biologicals SA filed Critical GlaxoSmithKline Biologicals SA
Application granted granted Critical
Publication of ES2597755T3 publication Critical patent/ES2597755T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/66—Phosphorus compounds
    • A61K31/675—Phosphorus compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. pyridoxal phosphate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/6561—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing systems of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring or ring system, with or without other non-condensed hetero rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

Una sal de arginina del ácido 3-(5-amino-2-(2-metil-4-(2-(2-(2-fosfonoetoxi)etoxi)etoxi) fenetil) benzo(f)[1,7]naftiridin-8-il)propanoico.

Description

5
10
15
20
25
30
35
40
DESCRIPCION
Sales de arginina de un agonista de TLR7 SOLICITUDES RELACIONADAS
La presente solicitud reivindica el beneficio de la Solicitud Provisional de EE.UU. n.° 61/608.011, que se envio el 7 de marzo de 2012.
Campo tecnico
La presente invencion esta en el campo de formas de sal de un compuesto inmunopotenciador y su formulacion para uso in vivo. En particular la presente invencion se refiere a sales de arginina.
Listado de secuencias
La presente solicitud contiene un listado de secuencias que se ha presentado a traves de la Web EFS. La copia ASCII, creada el 4 de marzo de 2013 se llama 54848_SeqListing.TXT y tiene 24.989 bytes de tamano.
Antecedentes de la invencion
La deteccion temprana de clases especificas de patogenos se realiza por el sistema inmune innato con la ayuda de receptores de reconocimiento de patron (PRR, por sus siglas en ingles). Los patogenos detectados incluyen virus, bacterias, protozoos y hongos y cada uno expresa constitutivamente un grupo de moleculas resistentes a mutacion, especificas de clase llamadas patrones moleculares asociados a patogeno (PAMP, por sus siglas en ingles).
Los receptores tipo Toll (TLR, por sus siglas en ingles) son una familia importante de PRR y se expresan ampliamente en celulas del sistema inmune innato, incluyendo celulas dendriticas (DC, por sus siglas en ingles), macrofagos, mastocitos, neutrofilos, celulas endoteliales y fibroblastos. Los TLR tienen especificidad amplia para patrones moleculares conservados compartidos por bacterias, virus y parasitos.
Se ha caracterizado un numero de TLR diferentes. Estos TLR enlazan y se tornan activados por diferentes ligandos, los cuales a su vez se ubican en diferentes organismos o estructuras. El desarrollo de compuestos inmunopotenciadores que son capaces de producir respuestas en TLR especificos tienen interes en la tecnica.
Por ejemplo, la referencia 1 describe una clase amplia de inmunopotenciadores de molecula pequena (SMIP, por sus siglas en ingles) que son compuestos agonistas de TLR7. Composiciones inmunogenicas y las composiciones farmaceuticas que comprenden estos compuestos son tambien se describen en la referencia.
Es un objeto de la presente invencion proporcionar formas de sal de un compuesto TLR7 especifico que tiene la formula (I) mostrada a continuacion que tiene propiedades mejoradas, tales como solubilidad mejorada y fotoestabilidad y reduce la naturaleza gelificante de la sal cuando se compara con la base libre.
El documento WO 2011/049677 A1 se refiere a composiciones para el tratamiento de enfermedades o trastornos asociados a los Receptores 7 tipo Toll. El documento WO2011027222 A2 se refiere a composiciones para el tratamiento de enfermedades o trastornos asociados a los Receptores 7 tipo Toll. El documento WO2013030378 A1 se refiere a antigenos adyuvantes de S. aureus con una mezcla de un agonista de TLR y una sal metalica insoluble.
Divulgacion de la invencion
La presente invencion se refiere a sales de un compuesto inmunopotenciador de formula (I) mostrada a continuacion, siendo dicho compuesto un agonista de TLR7 humano, el acido 3-(5-amino-2-(2-metil-4-(2-(2-(2- fosfonoetoxi)etoxi)etoxi)fenetil)benzo(f)(1,7) naftiridin-8-il)propanoico.
imagen1
En particular, la presente invencion se refiere a sales de arginina del compuesto de formula (I). En estudios en diferentes formas de sal del compuesto anterior la sal de arginina se descubrio sorprendentemente que es la mas favorable a traves de un intervalo de criterios de ensayo como solubilidad, rendimiento, fotoestabilidad, estabilidad
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
del contraion y termoestabilidad a pH fisiologico. En particular, las sales de arginina de la presente invencion muestran una fotoestabilidad mejorada en solucion cuando se comparan con el compuesto base libre de formula (I).
Debido a la naturaleza multibasica tanto del compuesto de formula (I) como de la arginina, las sales de la presente invencion pueden existir en diversas estequiometrias con respecto al numero de moles del compuesto de formula (I) y el contraion de arginina. Por ejemplo, la estequiometna del compuesto de formula (I):arginina puede ser 1:1, 1:2 o 1:3. Preferentemente, la estequiometna es 1:1.
Las sales de la presente invencion pueden ser solvatadas o no solvatadas. Por ejemplo, las sales pueden existir como formas hidratadas o anhidras. Las sales pueden existir como mono o di-hidratos (es decir que contienen 1 o 2 moles de agua). Preferentemente, la sal es un monohidrato.
Las sales de arginina de la presente invencion pueden existir como solidos amorfos o cristalinos. Alternativamente, las sales existen como solidos parcialmente cristalinos que contienen tanto solidos amorfos como cristalinos. En un aspecto de la presente invencion, las sales son sustancialmente amorfas que contienen porciones del orden de intervalo corto. En una realizacion, la forma cristalina de la sal exhibe al menos los siguientes picos de difraccion de polvo de rayos X, expresados en grados 20; 10, 14 y 18,5. La forma de sal puede tener un patron de difraccion de polvo de rayos X substancialmente igual a aquel mostrado en la Figura 1. Los espectros de RMN de 13C y 15N de las sales de arginina de la presente invencion en el estado solido se muestran en las Figuras 1a y 1b respectivamente.
La presente invencion tambien proporciona una sal de arginina del compuesto de formula (I) para uso en terapia. La presente invencion ademas proporciona el uso de una sal de arginina del compuesto de formula (I) en la fabricacion de un medicamento para uso en terapia. En cada caso, la terapia puede ser un procedimiento para aumentar una respuesta inmune en un sujeto.
Se proporciona tambien un procedimiento para aumentar una respuesta inmune en un sujeto que comprende la etapa de administrar al sujeto una sal de arginina del compuesto de formula (I) como se describe en el presente documento.
El PK/PD de los inmunopotenciadores (y en particular agonistas de TLR) puede mejorarse adsorbiendolos en sales de metal insolubles, tales como sales de aluminio (ver referencia 2). La adsorcion estable de los compuestos tiene lugar idealmente por intercambio de ligando por medio de una porcion adsortiva, tal como un grupo fosfonato, el cual puede mediar la adsorcion. Los SMIP que tienen porciones adsortiva pueden retener su actividad inmunologica in vivo cuando se suministra en una forma adsorbida, y por lo tanto las propiedades mejoradas de PK/PD no son a costa de la actividad. La adsorcion de los compuestos significa que tienen mayor tiempo de residencia en sitios de inyeccion intramuscular, controlando de esta manera el nivel de exposicion sistemica. Una alta exposicion sistemica puede originar la produccion de altos niveles de citocinas proinflamatorias en la sangre, por lo tanto mayor tiempo de residencia en un sitio de inyeccion puede minimizar la produccion de citocinas proinflamatorias en la sangre, de esta forma mejorando la seguridad y/o tolerabilidad de los compuestos.
Este concepto de mejora de propiedades PK/PD de inmunnopotenciadores por adsorcion a sales de metales insolubles tiene aplicabilidad en la presente invencion. De esta forma, la presente invencion proporciona una composicion que comprende una sal de arginina del compuesto de formula (I) como se describe en el presente documento y una sal de metal insoluble. Preferentemente, el compuesto de formula (I) como se describe en la presente de la sal de arginina se adsorbe en la sal de metal insoluble. En una realizacion la composicion incluye un tampon.
La presente invencion tambien proporciona una composicion que comprende una sal de arginina del compuesto de formula (I) como se describe en el presente documento, una sal de metal insoluble y un antfgeno. Preferentemente, el compuesto de formula (I) como se describe en el presente documento de la sal arginina de la composicion se adsorbe en la sal de metal insoluble.
En otro aspecto, la presente invencion proporciona un procedimiento para preparar una sal de arginina del compuesto de formula (I) como se describe en el presente documento, en el que el procedimiento comprende la etapa de poner en contacto el compuesto de formula (I) con arginina en un disolvente, como metanol. El procedimiento puede ademas comprender cristalizar la sal de arginina, por ejemplo por medio de la adicion de etanol al disolvente (por ejemplo a metanol). En otro aspecto, la presente invencion proporciona un procedimiento para preparar una forma cristalina de una sal de arginina del compuesto de formula (I) como se describe en el presente documento, en el que el procedimiento comprende la etapa de poner en contacto la sal de arginina de un compuesto de formula (I) como se describe en el presente documento con un disolvente, tal como isopropanol o acetonitrilo. La arginina puede ser L- o D-arginina o una mezcla racemica. Preferentemente se usa L-arginina.
En un aspecto adicional, la presente invencion proporciona un procedimiento para preparar un complejo adyuvante, que comprende una etapa de mezclar una sal de arginina del compuesto de formula (I) con una sal de metal insoluble de tal forma que el compuesto de formula (I) como se describe en el presente documento de la sal de arginina se adsorbe a la sal de metal insoluble para formar el complejo. La presente invencion tambien proporciona un complejo adyuvante obtenido u obtenible por este procedimiento. El complejo puede mezclarse con un inmunogeno para proporcionar una composicion inmunogenica. En otro aspecto, la presente invencion proporciona
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
un procedimiento para preparar un complejo adyuvante esteril, que comprende las etapas de: (i) mezclar una sal de arginina del compuesto de la formula (I) con una sal de metal insoluble de tal forma que el compuesto de la formula
(I) como se describe en el presente documento de la sal de arginina se adsorbe a la sal de metal insoluble para formar el complejo; y (ii) esterilizar el complejo. La presente invention tambien proporciona un complejo adyuvante esteril obtenido u obtenible por este procedimiento. El complejo esteril puede mezclarse con un antfgeno para proporcionar una composition inmunogenica. La esterilizacion puede lograrse convenientemente por llevar a autoclave (o procedimientos similares [3]).
La presente invencion tambien proporciona un procedimiento para preparar un complejo adyuvante esteril, que comprende las etapas de: (i) esterilizar una solution o suspension de una sal de arginina del compuesto de formula (I) como se describe en el presente documento; y (ii) combinar la solucion o suspension esterilizada con una sal de metal insoluble esteril. La presente invencion tambien proporciona un procedimiento para preparar un complejo adyuvante esteril, que comprende las etapas de: (i) esterilizar una sal de metal insoluble; y (ii) combinar la sal de metal insoluble esterilizada con una solucion o suspension esteril de una sal de arginina del compuesto de formula (I) como se describe en el presente documento. La presente invencion tambien proporciona un procedimiento para preparar un complejo adyuvante esteril, que comprende una etapa de combinar una solucion o suspension esteril de una sal de arginina del compuesto de formula (I) como se describe en el presente documento con una sal de metal insoluble esteril. La esterilizacion de la solucion/suspension de sal de arginina puede lograrse convenientemente por filtration esteril y este material puede prepararse en forma concentrada. La esterilizacion de la sal de metal insoluble puede lograrse convenientemente por llevar a autoclave. La sal de metal insoluble esteril puede ser tfpicamente una suspension acuosa. La presente invencion tambien proporciona un complejo adyuvante esteril obtenido u obtenible por cualquiera de los procedimientos anteriormente mencionados.
De acuerdo con otro aspecto, la presente invencion proporciona un procedimiento para preparar una composicion inmunogenica, en el que el procedimiento comprende mezclar una sal de arginina del compuesto de formula (I) como se describe en el presente documento, una sal de metal insoluble y un inmunogeno, de esta manera proporcionando la composicion inmunogenica. La presente invencion tambien proporciona una composicion inmunogenica obtenida u obtenible por este procedimiento.
Arginina
La arginina es un a-aminoacido que tiene la formula mostrada a continuation.
NH O
imagen2
NH2
La arginina tiene un centro quiral (el atomo de carbono marcado con un asterisco) y puede existir en las denominadas formas L o D. La forma L de arginina tiene una estereoqmmica absoluta de S en su centro quiral mientras que la forma D tiene una estereoqmmica absoluta de R en su centro quiral.
Tanto L-arginina como D-arginina son capaces de formar sales con compuestos acidos debido a sus propiedades basicas del grupo guanidinio. En algunas realizaciones, las sales de arginina de la presente invencion se forman entre el compuesto de formula (I) descrito en el presente documento y L-arginina. En algunas realizaciones las sales de arginina de la presente invencion se forman entre el compuesto de formula (I) como se describe en el presente documento y D-arginina. Preferentemente, la sal de arginina del compuesto de formula (I) descrito en el presente documento es la sal de L-arginina.
Sales de metal insoluble
El compuesto inmunopotenciador descrito en el presente documento (es decir los compuestos de formula (I)) de las formas de sal de arginina puede adsorberse a sales de metal insoluble, de esta manera formando un complejo adsorbido. Por ejemplo, el compuesto inmunopotenciador descrito en el presente documento de las formas de sal de arginina puede adsorberse a sales de calcio insolubles (por ejemplo, fosfato de calcio) o preferentemente a sales de aluminio insolubles. Tales sales de aluminio tienen una larga historia de uso en vacunas, como adyuvantes, por ejemplo. Las sales de aluminio que incluyen iones hidroxido son las sales de metal insoluble preferidas para usar con la presente invencion.
De esta forma la presente invencion proporciona diversas realizaciones en las cuales el compuesto de la formula (I) de las sales de arginina descritas en el presente documento se adsorbe a tales sales de metal insolubles.
Las sales de aluminio utiles incluyen, pero no se limitan a, hidroxido de aluminio, oxihidroxido de aluminio e hidroxifosfatos de aluminio (incluyendo sulfato de hidroxifosfato y aluminio). Las sales son descritas por ejemplo en los capftulos 8 y 9 de la referencia 4.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
Las sales de metal insolubles preferidas son oxihidroxidos de aluminio y/o hidroxifosfato de aluminio. Estas tienen restos de hidroxilo superficiales que pueden facilmente someterse a intercambio de ligando con el grupo fosfonato del compuesto inmunopotenciador para proporcionar adsorcion estable.
Los adyuvantes comunmente conocidos como "hidroxido de aluminio" son tipicamente sales de oxihidroxido de aluminio, que son normalmente al menos parcialmente cristalinos. El oxihidroxido de aluminio, que puede representarse por la formula AIO(OH), puede distinguirse de otros compuestos de aluminio, tales como hidroxido de aluminio Al(oH)3, por espectroscopfa infrarroja (IR), en particular por la presencia de una banda de adsorcion en 1070 cm-1 y una arista fuerte en 3090-3100 cm-1 (capttulo 9 de la referencia 4). Se refleja el grado de cristalinidad de un adyuvante de hidroxido de aluminio por el ancho de la banda de difraccion en altura media (WHH por sus siglas en ingles) mostrando las partmulas deficientemente cristalinas un ancho de lmea mayor debido a tamanos de cristalito mas pequenos. El area superficial se aumenta en cuanto se aumenta WHH y se ha visto que adyuvantes con mayores valores WHH para tener mayor capacidad para adsorcion de antigeno. Una morfologfa fibrosa (por ejemplo, como se observa en micrograffas de electrones de transmision) es tfpica para adyuvantes de hidroxido de aluminio. El pl de adyuvantes de hidroxido de aluminio esta de forma tfpica aproximadamente en 11 es decir el adyuvante por sf mismo tiene una carga superficial positiva a pH fisiologico. Se han informado capacidades adsortivas de entre 1,8-2,6 mg de protema por mg de Al3+ a pH 7,4 para adyuvantes de hidroxido de aluminio.
Los adyuvantes comunmente conocidos como "fosfato de aluminio" son tfpicamente hidroxifosfatos de aluminio, frecuentemente tambien que contienen una cantidad pequena de sulfato (es decir sulfato de aluminio e hidroxifosfato). Pueden obtenerse por precipitacion y las condiciones de reaccion y concentraciones durante la precipitacion influyen en el grado de substitucion de fosfato para hidroxilo en la sal. Los hidroxifosfatos generalmente tienen una relacion molar PO43-/Al3+ entre 0,3 y 1,2. Los hidroxifosfatos pueden distinguirse de AlPO4 estricto por la presencia de grupos hidroxilo. Por ejemplo, una banda de espectro IR en 3164 cm-1 (por ejemplo, cuando se calienta a 200 °C) indica la presencia de hidroxilos estructurales (capftulo 9 de la referencia 4).
La proporcion molar PO43"/Al3+ de un adyuvante de fosfato de aluminio generalmente sera entre 0,3 y 1,2, preferentemente entre 0,8 y 1,2 y mas preferentemente 0,95 + 0,2. El fosfato de aluminio generalmente sera amorfo, particularmente para sales de hidroxifosfato. Un adyuvante tfpico es hidroxifosfato de aluminio amorfo con proporcion molar de PO43+/Al3+ entre 0,84 y 0,92, incluido en 0,6 mg de Al3+/ml. El fosfato de aluminio generalmente sera particulado (por ejemplo, morfologfa tipo plato como se observa en micrograffas de electrones de transmision). Los diametros tfpicos de las partmulas estan en el intervalo de 0,5-20 pm (por ejemplo aproximadamente 5-10 pm) despues de cualquier adsorcion de antfgeno. Las capacidades adsortivas de entre 0,7-1,5 mg de protema por mg Al3+ en pH 7,4 se han informado para adyuvantes de fosfato de aluminio.
El punto de carga cero (PZC, por sus siglas en ingles) del fosfato de aluminio esta inversamente relacionado con grado de substitucion de fosfato para hidroxilo y este grado de substitucion puede variar dependiendo de las condiciones de reaccion y concentracion de reactivos usados para preparar la sal por precipitacion. El PZC tambien se altera por cambiar la concentracion de iones de fosfato libres en solucion (mas fosfato = mas PZC acido) o por anadir un tampon como tampon de histidina (hace PZC mas basico). Los fosfatos de aluminio usados de acuerdo con la presente invencion generalmente tienen un PZC de entre 4,0 y 7,0 mas preferentemente entre 5,0 y 6,5 por ejemplo aproximadamente 5,7.
En solucion tanto el fosfato de aluminio como los adyuvantes de hidroxido tienden a formar agregados porosos estables de 1-10 pm de diametro [5].
Una composicion que incluye la forma de sal de la presente invencion adsorbida a una sal de metal insoluble puede tambien incluir un tampon (por ejemplo un tampon fosfato o uno histidina o uno Tris).
Debido a la insolubilidad de las sales de metal adsortivos las cuales son utiles con la presente invencion, las composiciones que contienen la forma de sal adsorbida de la presente invencion generalmente seran suspensiones que tienen una apariencia nebulosa. Esto puede enmascarar crecimiento bacteriano contaminante y por lo tanto una composicion de la presente invencion puede incluir un conservador como tiomersal o 2- fenoxietanol. Se prefiere que una composicion deba ser sustancialmente libre de (por ejemplo <10 pg/ml) de material de mercurio por ejemplo libre de tiomersal. Se prefieren mas vacunas que no contienen mercurio.
Una composicion puede incluir una mezcla tanto de hidroxido de aluminio como sales de fosfato de aluminio, y la forma de sal de arginina del compuesto de formula (I) descrita en el presente documento puede adsorberse a una o ambas de estas sales de metal.
La concentracion de Al3+ en una composicion para administracion a un paciente es preferentemente menos de 10 mg/ml por ejemplo < 5 mg/ml, < 4 mg/ml, < 3 mg/ml, < 2 mg/ml, < 1 mg/ml, etc. Un intervalo preferido esta entre 0,3 y 1 mg/ml. Se prefiere un maximo de < 0,85 mg/dosis. Ya que la inclusion de una sal de arginina del compuesto de formula (I) puede mejorar el efecto de adyuvante de sales de aluminio entonces la presente invencion permite ventajosamente cantidades menores de Al3+ por dosis, y por lo tanto una composicion de la presente invencion puede incluir utilmente entre 10 y 250 ug de Al3+ por unidad de dosis. Las vacunas pediatricas actuales incluyen tfpicamente por lo menos 300 pg de Al3+. En terminos de concentracion, una composicion de la presente invencion
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
puede tener una concentracion de Al3+ entre 10 y 500 |jg/ml por ejemplo entre 10-300 |jg/ml, entre 10-200 |jg/ml, o entre 10-100 jg/ml.
En general, cuando una composicion incluye tanto una sal de arginina de la presente invencion como una sal de aluminio, la proporcion en peso de agonista a Al3+ sera menor de 5:1 por ejemplo menor de 4:1, menor de 3:1, menor de 2:1 o menor de 1:1. De esta forma, por ejemplo, con una concentracion de Al3+ de 0,5 mg/ml la concentracion maxima de una sal de arginina de la presente invencion puede ser 2,5 mg/ml. Pero pueden usarse niveles superiores o inferiores; una masa menor de sal de arginina que de Al3+ es tfpica por ejemplo por dosis, 100 jig de sal de arginina con 0,2 mg de Al3+. Un maximo de 2,5 mg del compuesto de formula 1 por unidad de dosis humana (por ejemplo por 0,5 ml de inyeccion) es preferido.
Donde una composicion incluye una sal de arginina del compuesto de formula (I) como se describe en el presente documento y una sal de metal insoluble, se prefiere que por lo menos 50 % (por masa) del inmunopotenciador en la composicion sea adsorbido a la sal de metal por ejemplo > 60 %, > 70 %, > 80 %, > 85 %, > 90 %, > 92 %, > 94 %, > 95 %, > 96 %, > 97 %, > 98 %, > 99 %, o incluso > 100 %. Un mmimo de 80 % de adsorcion es tfpico, y por lo menos se prefiere 90 % o 95 %.
Como se analiza anteriormente, como un resultado de adsorcion a una sal de metal insoluble el comportamiento in vivo de SMIP puede modificarse. De esta forma un SMIP adsorbido puede exhibir un tiempo de residencia mayor (por ejemplo por lo menos 2 veces mas largo) en inyeccion muscular despues de intramuscular, con relacion al mismo SMIP inyectado en una forma no adsorbida. Puede ocurrir alguna eliminacion, pero una porcion detectable del SMIP inyectado estara todavfa presente. De esta forma, por ejemplo, un SMIP adsorbido puede, cuando se inyecta intramuscularmente, todavfa estar presente en el musculo inyectado por lo menos 12 horas despues por ejemplo 24 horas mas tarde.
En algunas realizaciones, una sal de arginina adsorbida puede exhibir una concentracion de suero de pico menor, con relacion a la forma no adsorbida. Este pico es usualmente expresado como un valor Cmax. Por ejemplo, una forma adsorbida puede, cuando se inyecta intramuscularmente, tener un valor Cmax serico menor que cuando se inyecta intramuscularmente en una forma no adsorbida (por ejemplo <95% de la Cmax no adsorbida, <80 % de la Cmax no adsorbida, <50 % de la Cmax no adsorbida, o incluso <30 % de la Cmax no adsorbida).
En algunas realizaciones, la sal de arginina adsorbida puede exhibir una exposicion sistemica total inferior despues de la inyeccion, con relacion a la misma sal no inyectada en forma no adsorbida. Los niveles de exposicion sistemica se expresan usualmente como valores AUC (area bajo la curva de tiempo - concentracion) (por ejemplo en h-nM). Ventajosamente, por ejemplo, un SMIP adsorbido puede, cuando se inyecta intramuscularmente, tener un valor AUC serico inferior en las 24 horas siguientes a la inyeccion que la misma sal de arginina cuando se inyecta intramuscularmente en forma no adsorbida (por ejemplo <90 % de la AUC no adsorbida, <80 % de la AUC no adsorbida o incluso <50 % de la AUC no adsorbida, etc.).
Inmunogenos
Los complejos de formas de sal del compuesto de formula (I) como se describe en el presente documento adsorbidos a sales de metal insolubles son utiles durante la inmunizacion. Un complejo adsorbido de la presente invencion puede de esta forma usarse junto con uno o mas antfgenos. Los complejos de antfgeno pueden proporcionarse como una mezcla o pueden proporcionarse separadamente para uso despues de mezclado. En algunas realizaciones, una forma de sal de la presente invencion puede combinarse con un antfgeno en la ausencia de una sal de metal insoluble y puede despues de esto ser ya sea administrada a un mairnfero o puede combinarse con una sal de metal insoluble para administracion tardfa a un mamffero.
La presente invencion puede usarse con un intervalo amplio de antfgenos, para tratar o proteger contra un intervalo amplio de enfermedades. El antfgeno puede producir una respuesta inmunologica que protege contra una enfermedad viral (por ejemplo debido a un virus desarrollado o no desarrollado), una enfermedad bacteriana (por ejemplo debido a bacterias Gram negativas o Gram positivas), una enfermedad fungica, una enfermedad parasita, una enfermedad autoinmunologica, o cualquier otra enfermedad. El antfgeno puede tambien ser util en inmunoterapia por ejemplo para tratar un tumor/cancer, enfermedad de Alzheimer o una adiccion.
El antfgeno puede tomar varias formas por ejemplo un organismo entero, una vesfcula de membrana externa, un polipeptido, un sacarido, un liposacarido, un conjugado (por ejemplo de un portador y un hapteno, o de un portador y sacarido o liposacarido), etc. Donde el antfgeno es un polipeptido sera tipicamente un polipeptido superficial por ejemplo una adhesina, hemaglutinina, glicoprotema de cubierta, glicoprotema pico, etc.
El antfgeno puede producir una respuesta inmunologica contra un virus de gripe, incluyendo gripe de virus A y B. Varias formas de antfgeno de virus de gripe estan actualmente disponibles, tfpicamente en base ya sea en virus vivo o virus inactivado. Vacunas inactivadas pueden basarse en viriones enteros, viriones de division, o en antfgenos superficiales purificados. Los antfgenos de gripe pueden tambien presentarse en la forma de virosomas. La hemaglutinina es el antfgeno principal en vacunas inactivadas actuales, y dosis de vacuna son estandarizadas por referencia a niveles de HA, tfpicamente medidas por SRID. Vacunas existentes contienen tfpica y aproximadamente 15 jg de HA por cadena, aunque dosis menores pueden usarse por ejemplo por ninos o en situaciones pandemicas,
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
o cuando se usan como adyuvante. Dosis fraccionales como A (es decir 7,5 |jg de HA por cepa), % y 1/8 se han usado, como tener dosis superiores (por ejemplo, 3x o 9 x dosis (6,7)). De esta forma las composiciones pueden incluir entre 0,1 y 150 jg de HA por cepa de gripe, preferentemente entre 0,1 y 50 jg por ejemplo 0,10-20 jg, 0,1-15 jg, 0,1-10 jg, 0,1-7,5 jg, 0,5-5 jg, etc. Dosis particulares incluyen por ejemplo aproximadamente 45, aproximadamente 30, aproximadamente 15, aproximadamente 10, aproximadamente 7,5, aproximadamente 5, aproximadamente 3,8, aproximadamente 3,75, aproximadamente 1,9, aproximadamente 1,5 etc. por cepa. Es usual incluir substancialmente la misma masa de HA para cada cepa incluida en la vacuna por ejemplo de tal forma que la masa de HA para cada cepa esta dentro de 10 % de la masa HA promedio por cepa y preferentemente dentro de 5% del promedio. Para vacunas vivas, la dosificacion es medida por dosis infecciosa de cultivo de tejido medio (TCIDsq por sus siglas en ingles) mas que el contenido de HA, y una TCID50 de entre 106 y 108 (preferentemente entre 106'5 -107'5) por cepa es tfpico. Mas que el uso de huevos SPF como el substrato para crecimiento viral, donde el virus es cosechado a partir de fluidos alantoicos infectados de huevos de gallina, pueden usarse lmeas celulares que soportan replicacion de virus de gripe. La lmea celular sera tfpicamente de origen mairnfero por ejemplo MDCK. Antigenos de virus A de gripe pueden ser de cualesquiera cepa subtipo HA adecuada por ejemplo H1, H3, H5, H7, H9 etc., como cepa H1N1, H3N2 y/o H5N1.
El inmunogeno puede producir una respuesta inmunologica contra un hongo de candida como C. albicans. Por ejemplo, el inmunogeno puede ser un p-glucano, el cual puede conjugarse a una protema portadora. El glucano puede incluir enlaces p-1,3 y/o p-1,6. Los inmunogenos adecuados incluyen aquellos descritos en las referencias 8 y 9.
El inmunogeno puede producir una respuesta inmunologica contra una bacteria Streptococcus, incluyendo S. agalactiae, S. pneumoniae y S. pyogenes. Por ejemplo, el inmunogeno puede ser un sacarido capsular, el cual puede conjugarse a una protema portadora. Para S. agalactiae el sacarido puede ser de uno o mas de serotipos la, lb, II, Ill y/o V. Para S. pneumoniae el sacarido puede ser de uno o mas de serotipos 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F y/o 23F. Ademas de (o en lugar de) inmunogeno o inmunogenos de sacarido capsular, pueden usarse inmunogenos de polipeptido para producir una respuesta inmunologica anti-estreptococos protectora por ejemplo que comprende RrgB, como se describe en la referencia 10.
El inmunogeno puede producir una respuesta inmune contra una bacteria de Staphylococcus, incluyendo S. aureus o S. epidermidis. Por ejemplo, el inmunogeno puede comprender un antfgeno IsdA, un antfgeno IsdB, un antfgeno ClfA, un antfgeno ClfB, un antfgeno SdrD, un antfgeno Spa, un antfgeno EsxA, un antfgeno EsxB, un antfgeno Sta006, una hemolisina, y/o un antfgeno Sta011. Los inmunogenos de S. aureus y sus combinaciones se describen en la referencia 11.
El inmunogeno puede producir una respuesta inmunologica contra una bacteria de meningococo (Neisseria meningitidis). Por ejemplo, el inmunogeno puede ser un sacarido capsular, el cual puede conjugarse a una protema portadora. Los sacaridos capsulares son particularmente utiles para proteger contra serogrupos de meningococos A, C, W135 y/o Y. Ademas de (o en lugar de) antfgenos de sacarido capsulares, antfgenos de polipeptido y/o vesmulas de membrana externa pueden usarse para producir una respuesta inmunologica antimeningococo protectora, particularmente para uso contra serogrupo B por ejemplo como se describe en la referencia 12. Una cantidad tfpica de sacarido capsular por dosis de unidad de una vacuna esta entre 2.5-10 jg, aunque pueden usarse dosis menores con la presente invencion debido a la naturaleza ahorro de antfgeno de los adyuvantes.
El inmunogeno puede producir una respuesta inmunologica contra un virus de hepatitis, como virus de hepatitis A, virus de hepatitis B, virus de hepatitis C y/o virus de hepatitis E. Por ejemplo, el antfgeno puede ser antfgeno de superficie de virus de hepatitis B (HbsAg, por sus siglas en ingles). Una cantidad tfpica de HbsAg por dosis de unidad de una vacuna esta entre 5-20 jg, pero dosis menores pueden usarse con la presente invencion debido a la naturaleza ahorro de antfgeno de los adyuvantes.
El inmunogeno puede producir una respuesta inmunologica contra un virus sincitial respiratorio. Los antfgenos pueden ser de un grupo A RSV y/o un grupo B RSV. Los inmunogenos adecuados pueden comprender las glicoprotemas F y/o G o fragmentos de los mismos, por ejemplo como se describe en las referencias 13 y 14.
El inmunogeno puede producir una respuesta inmunologica contra la bacteria Chlamydia incluyendo C. trachomatis y C. pneumoniae. Los inmunogenos adecuados incluyen aquellos descritos en las referencias 15-21.
El inmunogeno puede producir una respuesta inmunologica contra la bacteria Escherichia coli, incluyendo cepas patogenicas extraintestinales. Los inmunogenos adecuados incluyen aquellos descritos en las referencias 22-24.
El inmunogeno puede producir una respuesta inmunologica contra un coronavirus, como el coronavirus SARS humano. Los inmunogenos adecuados pueden comprender la glicoprotema pico.
El inmunogeno puede producir una respuesta inmunologica contra una bacteria Helicobacteri pylori. Antfgenos adecuados incluyen CagA (25-28), VacA (29,30) y/o NAP (31-33).
El inmunogeno puede producir una respuesta inmunologica contra una bacteria Corynebacterium diphtheriae. Los inmunogenos adecuados incluyen el toxoide difteria ("DT"). Una cantidad tfpica de DT por dosis de unidad de una
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
vacuna pediatrica es entre 15-30 Lf ("dosis de floculacion de cal", aunque dosis menores pueden usarse con la presente invencion debido a la naturaleza ahorro de antigeno de los adyuvantes. Cantidades menores son tambien tipicas en vacunas de refuerzo de adolescentes o adultos por ejemplo entre 1-10Lf/dosis.
El inmunogeno puede producir una respuesta inmunologica contra una bacteria Clostricdum tetani. Los inmunogenos adecuados incluyen toxoide de tetanos ("TT"). Una cantidad tfpica de TT por dosis de unidad de una vacuna pediatrica esta entre 5-15 Lf (dosis de floculacion de cal") aunque dosis menores pueden usarse con la presente invencion debido a la naturaleza ahorro de antigeno de los adyuvantes. Cantidades menores son tambien tfpicas en vacunas de refuerzo de adolescentes o adultos por ejemplo entre 1-5 Lf/dosis.
El inmunogeno puede producir una respuesta inmunologica contra una bacteria Bordetella pertussis. Antigenos de Pertussis son ya sea celulares (celula entera, en la forma de celulas B. pertussis inactivada "wP") o acelulares ("aP"). Donde se usan inmunogenos acelulares, uno, dos o (preferentemente) tres de los siguientes antfgenos son incluidos: (1) toxina pertussis detoxificada (toxoide pertussis, o "PT"), (2) hemaglutinina filamentosa ("FHA"), (3) pertactina (tambien conocida como la "protema de membrana externa de 69 kilodaltons"). El PT puede detoxificarse qmmicamente o puede ser un PT mutante en el cual la actividad enzimatica ha sido reducida por mutagenesis (34) por ejemplo el mutante doble 9k/129G (35). Asf como tambien PT, FHA y pertactina, es tambien posible incluir fimbriae (por ejemplo aglutinogenos 2 y 3) en un componente de antfgeno pertussis acelular. Una cantidad tfpica de Pt en una vacuna pediatrica es 10-30 |j,g/dosis. Una cantidad tfpica de FHA en una vacuna pediatrica es 15-30 pg/dosis. Una cantidad tfpica de pertactina en una vacuna pediatrica es 2-10 inmunogeno /dosis. Dosis menores pueden usarse con la presente invencion debido a la naturaleza ahorro de antfgeno de los adyuvantes. Cantidades menores son tambien tfpicas en vacunas de refuerzo por ejemplo ~3 veces menor.
El antfgeno puede producir una respuesta inmunologica contra bacterias tipo B de Haempophilus influenzae (Hib, por sus siglas en ingles). Los inmunogenos adecuados incluyen conjugados del sacarido capsular Hib (PRP, por sus siglas en ingles) por ejemplo conjugado a toxoide tetanico, toxoide difteria, el derivado CRM197 de toxoide difteria, protema H.influenzae y un complejo de protema de membrana externa a partir de meningococo del serogrupo B. Una cantidad tfpica de conjugado Hib (medido como sacarido) esta entre 2,5-15 pg por dosis, aunque dosis menores pueden usarse con la presente invencion debido a la naturaleza ahorro de antfgeno de los adyuvantes.
El antfgeno puede producir una respuesta inmunologica contra un poliovirus. Los inmunogenos adecuados incluyen virus inactivados. Una composicion tfpica incluira tres antfgenos de poliovirus - poliovirus del tipo 1 (por ejemplo cepa Mahoney), poliovirus del tipo 2 (por ejemplo cepa MEF-1) y poliovirus tipo 3 (por ejemplo cepa Saukett). Una cantidad tfpica de poliovirus por dosis es 40 DU ("unidad de antfgeno D") para tipo 1, 8 DU para tipo 2, y 32 DU para tipo 3, aunque dosis menores pueden usarse con la presente invencion debido a la naturaleza de ahorro de antfgeno de los adyuvantes.
El inmunogeno puede producir una respuesta inmunologica contra un citomegalovirus (CMV, por sus siglas en ingles). Por ejemplo el antfgeno puede ser una glicoprotema recombinante B, por ejemplo el antfgeno soluble usado en la referencia 36.
El inmunogeno puede producir una respuesta inmunologica contra un virus de inmunodeficiencia humana por ejemplo contra VIH-1 o VlH-2. Por ejemplo, el antfgeno puede ser una glicoprotema de cubierta de VIH. Por ejemplo, las glicoprotemas de cubierta modificadas son disponibles, como gp140, las cuales pueden formar oligomeros (referidos como "o-gp140"). El polipeptido gp140 incluye la secuencia gp120 y el ectodominio de gp41 (37) y ha sido reportado para ser un mejor antfgeno que gp120 (38). De esta forma una glicoprotema de cubierta util puede incluir una porcion de gp41 pero no incluir su dominio transmembranal. La forma gp140 de la glicoprotema de cubierta puede tener su circuito V2 eliminado, para dar mutantes gp140AV2, y las eliminaciones han sido reportadas para mejorar inmunogenicidad. Los mutantes AV2 de gp140 han sido mostrados para formar tnmeros (39).
El inmunogeno puede producir una respuesta inmunologica contra virus de rabia. Un antfgeno adecuado es un virus de rabia inactivado (referencia 40, RabAvert™).
El inmunogeno puede producir una respuesta inmunologica contra un papilovirus humano. Los inmunogenos utiles son protemas de capside L1, los cuales pueden ensamblar para formar estructuras conocidas como partmulas similares a virus (VLP, por sus siglas en ingles). Las VLP pueden producirse por expresion recombinante de L1 en celulas de levaduras (por ejemplo en S. cerevisiae) o en celulas de insectos (por ejemplo en celulas Spodoptera, como S. frugiperda, o en celulas de Drosophila). Para celulas de levaduras, los vectores de plasmido pueden portar el gen L1, para celulas de insectos, los vectores de baculovirus pueden portar el gen L1. Mas preferentemente, la composicion incluye VLP de L1 de tanto cepas HPV-16 y HPV-18. Esta combinacion bivalente ha sido mostrada para ser altamente efectiva (41). Ademas de las cepas HPV-16 y HPV-18, es tambien posible incluir VLP de L1 a partir de cepas HPV-6 y HPV-11.
El inmunogeno puede producir una respuesta inmunologica contra un antfgeno de tumor, como MAGE-1, MAGE- 2, MAGE-3, (MAGE-A3), MART-1/Melan A, tirosinasa,, gp100, TRP-2, etc.) El antfgeno puede producir una respuesta inmunoterapeutica contra cancer de pulmon, melanoma, cancer de mama, cancer de prostata, etc.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
El inmunogeno puede producir una respuesta inmunologica contra un hapteno conjugado a una protema portadora, donde el hapteno es un farmaco de abuso (42). Ejemplos incluyen, pero no se limitan a, opiatos, marihuana, anfetaminas, cocama, barbituratos, glutetimida, metiprilon, cloral hidratado, metaqualona, benzodiazepinas, LSD, nicotina, farmacos anticolinergicos, farmacos antipsicoticos, triptamina, otros farmacos psicomimeticos, sedantes, fenciclidina, psilocibina, nitrito volatil y otros farmacos que inducen dependencia ffsica y/o psicologica.
Pueden usarse diversos otros inmunogenos.
Composiciones para inmunizacion contra Neisseria meningitidis
La presente invencion es particularmente util para inmunizar contra meningococos por ejemplo contra serogrupo B.
Las composiciones inmunogenicas preferidas de la presente invencion comprenden: (i) un adyuvante de hidroxido de aluminio; (ii) una sal de arginina del compuesto de formula (I) descrita en el presente documento y (iii) un polipeptido que comprende SEQ ID NO:1, en la que el compuesto de formula (1) descrito en el presente documento de la sal de arginina de (ii) se adsorbe al hidroxido de aluminio.
Las composiciones inmunogenicas preferidas de la presente invencion comprenden: (i) un adyuvante de hidroxido de aluminio; (ii) una sal de arginina del compuesto de formula (I) descrita en el presente documento; y (iii) un polipeptido que comprende SEQ ID NO:2; en la que el compuesto de formula (I) descrito en el presente documento de la sal de arginina de (ii) se adsorbe al hidroxido de aluminio.
Las composiciones inmunogenicas preferidas de la presente invencion comprenden: (i) un adyuvante de hidroxido de aluminio, (ii) una sal de arginina del compuesto de formula (I) descrita en el presente documento; (iii) un primer polipeptido que comprende SEQ ID NO:1 y (iv) un segundo polipeptido que comprende SEQ ID NO:2, en la que el compuesto de la formula (I) descrito en el presente documento de la sal de arginina de (ii) se adsorbe al hidroxido de aluminio. Esta composicion puede incluir polipeptidos adicionales por ejemplo que comprende cualquiera de la SEQ ID NO: 3, 4 o 5.
Las composiciones inmunogenicas preferidas de la presente invencion comprenden: (i) un adyuvante de hidroxido de aluminio; (ii) una sal de arginina del compuesto de formula (I) descrita en el presente documento; (iii) un primer polipeptido que comprende SEQ ID NO:1; (iv) un segundo polipeptido que comprende SEQ ID NO:2; y (v) un tercer polipeptido que comprende SEQ ID NO:3; en la que el compuesto de formula (I) descrito en el presente documento de la sal de arginina de (ii) se adsorbe al hidroxido de aluminio.
Las composiciones inmunogenicas preferidas de la presente invencion comprenden: (i) un adyuvante de hidroxido de aluminio; (ii) una sal de arginina del compuesto de formula (I) descrita en el presente documento; (iii) un primer polipeptido que comprende SEQ ID NO:1, (iv) un segundo polipeptido que comprende SEQ ID NO:2 y (v) un tercer polipeptido que comprende SEQ ID NO:4; en la que la sal de arginina de (ii) se adsorbe al hidroxido de aluminio; SEQ ID NO:4 es SEQ ID NO:126 de la referencia 43.
Las composiciones inmunogenicas preferidas de la presente invencion comprenden: (i) un adyuvante de hidroxido de aluminio; (ii) una sal de arginina del compuesto de formula (I) descrita en el presente documento; (iii) un primer polipeptido que comprende SEQ ID NO:1; (iv) un segundo polipeptido que comprende SEQ ID NO:2; y (v) un tercer polipeptido que comprende SEQ ID NO:5, en la que el compuesto de formula (I) descrito en el presente documento de la sal de arginina de (ii) se adsorbe al hidroxido de aluminio.
Cualquiera del primer, segundo y/o tercer polipeptidos puede diferir de la SEQ ID NO:1, 2, 3, 4, o 5 relevante por hasta 3 aminoacidos, con la condicion de que el polipeptido puede todavfa producir anticuerpos los cuales enlazan a un polipeptido el cual consiste de SEQ ID NO:1, 2, 3, 4 o 5 como sea apropiado.
Idealmente 1, 2 o 3 de los primeros segundos y/o tercer polipeptidos se adsorben tambien al hidroxido de aluminio. Estos polipeptidos se describen con mas detalle en las referencias 12, 44 y 45. La composicion puede incluir 5- 100 |jg de cada polipeptido. La composicion idealmente no incluye ninguna vesmula de membrana externa bacteriana.
La composicion puede incluir de 5-100 jg de una sal de arginina del compuesto de formula (I).
La composicion puede incluir un tampon de histidina por ejemplo un tampon de histidina 10 mM. Puede incluir sacarosa y/o cloruro de sodio. Puede administrarse en un volumen de dosis de 0,5 ml por ejemplo para inyeccion intramuscular.
Las composiciones inmunogenicas adicionales de la presente invencion pueden comprender: (i) un adyuvante de hidroxido de aluminio, (ii) una sal de arginina del compuesto de formula (I) descrita en el presente documento; (iii) un antfgeno de protema de enlace al factor H de meningococo, con la condicion de que este antfgeno no sea una protema de fusion que tiene una secuencia de aminoacido que comprende SEQ ID NO:8 a partir de la referencia 46. El antfgeno de protema de enlace de factor H puede adsorberse al hidroxido de aluminio tambien.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
Composiciones con multiples antiaenos diferentes
De acuerdo con un aspecto adicional, la presente invencion proporciona una composicion que comprende un complejo adyuvante de la presente invencion en combinacion con por lo menos dos antigenos diferentes.
La presente invencion tambien proporciona un kit que comprende (i) un complejo adyuvante en un primer recipiente y (ii) por lo menos un antigeno en un segundo recipiente. El primer recipiente puede incluir opcionalmente por lo menos un inmunogeno ademas del complejo.
El compuesto inmunogenico en el complejo adyuvante puede ser cualquier sal de arginina del compuesto de formula (I) como se describe en el presente documento.
Los "por lo menos dos antigenos diferentes" en algunas realizaciones no consiste en: (i) una combinacion de un antigeno de virus de sarampion, un antigeno de virus de paperas y un antigeno de virus de rubeola; (ii) una combinacion de un antigeno de virus de sarampion, un antigeno de virus de paperas, un antigeno de virus de rubeola, y un antigeno de virus de varicela, (iii) una vacuna contra difteria, una vacuna contra tetanos, y una vacuna contra pertussis; (iv) una combinacion tetravalente de conjugados a partir de serogrupos A, C, W135 e Y de meningococo; (v) una combinacion de antigenos bacterianos a partir de serogrupos A, B, C, W135 y/o Y de N. meningitidis; (vi) una combinacion que incluye antfgenos de dos o mas cepas diferentes de virus de gripe, (vii) una combinacion de vesfculas de membrana externa de los serogrupos A, C, Wl35, Y, X y/o B de N. meningitidis; (viii) una combinacion de sacaridos de diferentes serotipo de neumococo; (ix) una combinacion de antfgenos Moraxella catarrhalis (x) una combinacion de holotoxina de Bordetella pertussis, hemaglutinina filamentosa, pertactina y/o aglutinogenos 2 y 3; (xi) una combinacion de diferentes antfgenos de polipeptido multiples a partir de N. meningitidis.
Los "por lo menos dos diferentes antfgenos" en algunas realizaciones no consiste en una combinacion de multiples antfgenos de polipeptido diferentes a partir de N. meningitictis como la combinacion descrita en las referencias 12 y 46.
Los "por lo menos dos antfgenos diferentes" puede incluir por lo menos un antfgeno bacteriano y por lo menos un antfgeno viral.
Si los "por lo menos dos antfgenos diferentes" incluyen solamente antfgenos bacterianos entonces incluyen idealmente antfgenos para por lo menos dos especies diferentes de bacterias (de esta forma, por ejemplo, excluyendo una combinacion de diferentes sacaridos capsulares de meningococos, ya que estos son todos de una sola especie).
El "por lo menos dos antfgenos diferentes" no debe conjugarse entre sf De esta forma un conjugado de un sacarido Hib y un toxoide tetanico no es "por lo menos dos diferentes antfgenos" como se usa en el presente documento.
Las realizaciones preferidas de "por lo menos dos antfgenos diferentes" incluyen composiciones, como: (i) un toxoide de difteria, un toxoide de tetanos, y un antfgeno pertussis acelular por ejemplo que comprende un toxoide pertussis, hemaglutinina filamentosa y/o pertactina, (ii) un toxoide de difteria, un toxoide de tetanos, un antfgeno de pertussis, y un conjugado de sacarido capsular del tipo B de H. influenzae; (iii) un toxoide de difteria, un toxoide de tetanos, un antfgeno pertussis y un antfgeno de superficie de virus de hepatitis B, (iv) un toxoide difteria, un toxoide de tetanos un antfgeno de pertussis, un antfgeno de superficie de virus de hepatitis B y un conjugado de sacarido capsular del tipo B de H. influenzae; (v) un toxoide de difteria, un toxoide de tetanos, un antfgeno de pertussis y un antfgeno de poliovirus inactivado; (vi) un toxoide de difteria, un toxoide de tetanos, un antfgeno de pertussis, un conjugado de sacarido capsular del tipo B de H. gripe, un antfgeno de superficie de virus de hepatitis B y un antfgeno de poliovirus inactivo o (vii) un antfgeno de virus de hepatitis A y un antfgeno de virus de hepatitis B.
Donde una composicion incluye un antfgeno de poliovirus inactivado preferentemente este incluye antfgenos de cada uno del tipo I de poliovirus (por ejemplo cepa Mahoney), tipo 2 de poliovirus (por ejemplo cepa MEF-1) y tipo 3 de poliovirus (por ejemplo cepa Saukett).
Donde una composicion incluye un antfgeno pertussis este idealmente no incluye celulas B. pertussis inactivadas enteras es decir es idealmente una vacuna acelular.
Asf como que tambien incluye D, T, Pa, HBsAg, Hib y/o antfgenos de poliovirus, una composicion de la presente invencion puede incluir ademas antfgenos por ejemplo de patogenos adicionales. Por ejemplo, estos antfgenos pueden ser de N. meningitidis (uno o mas de serogrupos A, B, C, W135 y/o Y) o S. pneumoniae. De esta forma una composicion puede incluir dos o tres de: (i) uno o mas de D, T, Pa, HBsAg, antfgenos de poliovirus y/o Hib, (ii) un sacarido capsular conjugado a partir de uno o mas serogrupos de meningococos A, C, W135 y/o; (iii) un antfgeno de polipeptido a partir de meningococos, como fHbp.
Las composiciones de la presente invencion las cuales incluyen antfgenos multiples preferentemente no incluyen ninguna vesfcula de membrana externa bacteriana.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
Procedimientos de precipitacion in situ
De acuerdo con un aspecto, la presente invencion proporciona un procedimiento para preparar un complejo adyuvante, que comprende etapas de (i) preparar una mezcla acuosa de una sal de arginina del compuesto de formula (I) como se describe en el presente documento y una sal de aluminio soluble; despues (ii) anadir una sal no de aluminio a la mezcla acuosa con el fin de formar una sal de aluminio precipitada a la cual se adsorbe el compuesto de la formula (I) como se describe en el presente documento.
De acuerdo con otro aspecto, la presente invencion proporciona un procedimiento para preparar una composicion inmunogenica, que comprende una etapa de mezclar (i) una mezcla acuosa una sal de arginina del compuesto de formula (I) como se describe en el presente documento y una sal de aluminio soluble con (ii) una mezcla acuosa tamponada de un antfgeno, en donde la etapa de mezclado provoca precipitacion de una sal de aluminio a la cual se adsorben el compuesto de formula (I) como se describe en el presente documento y el antigeno.
La presente invencion tambien proporciona un procedimiento para preparar una composicion inmunogenica, que comprende una etapa de mezclar (i) una solucion acuosa de una sal de aluminio soluble con (ii) una mezcla acuosa tamponada de un antigeno y una sal de arginina del compuesto de formula (I) como se describe en el presente documento, en donde la etapa de mezclado provoca precipitacion de una sal de aluminio a la cual se adsorben el compuesto de la formula (I) como se describe en el presente documento y el antigeno.
La presente invencion tambien proporciona un procedimiento para preparar una composicion inmunogenica, que comprende una etapa de mezclar (i) una solucion acuosa de una sal de aluminio soluble y un antigeno con (ii) una mezcla acuosa tamponada de una sal de arginina del compuesto de la formula (I) como se describe en el presente documento, en donde la etapa de mezclado provoca precipitacion de una sal de aluminio a la cual se adsorbe el compuesto de la formula (I) como se describe en el presente documento y el antigeno.
La presente invencion tambien proporciona composiciones inmunogenicas obtenidas u obtenibles por estos procedimientos.
En estos procedimientos la sal de aluminio soluble sera tipicamente el aluminio (Kal(SO4)2, tipicamente como Kal(SO4)2.l2H2O) o cloruro de aluminio. Anadir un anion alternativo a esta sal soluble puede provocar que una sal de aluminio precipite in situ.
El anion alternativo se anade tfpicamente como parte de un tampon. De esta forma, por ejemplo, si se anade un tampon de fosfato a la sal de aluminio soluble entonces puede precipitar un adyuvante de fosfato de aluminio. El tampon tfpicamente sera un tampon de acetato, carbonato o fosfato. Ademas del tampon a una solucion de aluminio lleva a precipitacion de un hidroxisulfato (anion tampon) de aluminio amorfo por ejemplo hidroxifosfatosulfato de aluminio (ver capttulo 9 de referencia 4).
Composiciones y Productos Farmaceuticos
La presente invencion proporciona una composicion farmaceutica que comprende una sal de arginina del compuesto de formula (I) como se describe en el presente documento. Esta composicion puede tambien incluir una sal de metal insoluble y/o un inmunogeno.
La presente invencion tambien proporciona una composicion farmaceutica que comprende una sal de arginina del compuesto de formula (I) como se describe en el presente documento y una sal de metal insoluble. Esta composicion puede tambien incluir un inmunogeno.
La presente invencion tambien proporciona una composicion farmaceutica inmunogenica que comprende una sal de arginina del compuesto de formula (I) como se describe en el presente documento y un inmunogeno. Esta composicion puede tambien incluir una sal de metal insoluble.
La presente invencion tambien proporciona un procedimiento para preparar una composicion farmaceutica, que comprende una etapa de combinar una sal de arginina del compuesto de la formula (I) como se describe en el presente documento con uno o mas excipientes aceptables farmaceuticamente.
Las composiciones farmaceuticas usualmente incluyen componentes ademas de la sal de arginina del compuesto de formula (I) como se describe en el presente documento, la sal de metal insoluble y/o el inmunogeno por ejemplo incluyen tfpicamente uno o mas vehfculo o vehfculos o excipiente o excipientes farmaceuticos. Una discusion total de los componentes es disponible en la referencia 47.
Las composiciones farmaceuticas estan preferentemente en forma acuosa, particularmente en el punto de administracion, pero pueden tambien presentarse en formas lfquidas no acuosas o en formas secas, por ejemplo como capsulas de gelatina o como liofilizados, etc.
Las composiciones farmaceuticas pueden incluir uno o mas conservantes, como tiomersal o 2-fenoxietanol. Se prefieren composiciones libres de mercurio y pueden prepararse vacunas libres de conservadores.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
Las composiciones farmaceuticas pueden incluir una sal fisiologica, como una sal de sodio por ejemplo para controlar tonicidad. El cloruro de sodio (NaCl) es tipico, que puede estar presente en entre 1 y 20 mg/ml por ejemplo 10 +2 mg/ml o 9 mg/ml. Otras sales que pueden estar presentes incluyen cloruro de potasio, fosfato dihidrogeno de potasio, fosfato disodico deshidratado, cloruro de magnesio, cloruro de calcio, etc.
Las composiciones farmaceuticas pueden tener una osmolaridad de entre 200 mOsm/kg y 400mOsm/kg, por ejemplo entre 240-360 mOsm/kg o entre 290-310 mOsm/kg.
Las composiciones farmaceuticas pueden incluir compuestos (con o sin una sal de metal insoluble) en agua corriente (por ejemplo w.f.i.) pero usualmente incluira uno o mas tampones. Los tampones tfpicos incluyen: un tampon de fosfato (excepto en el decimoquinto aspecto); un tampon de Tris; un tampon de borato; un tampon de succinato; un tampon de histidina (particularmente con un adyuvante de hidroxido de aluminio) o un tampon de citrato. Las sales de tampon se incluiran tfpicamente en el intervalo de 5-20 mM.
Las composiciones farmaceuticas tienen tfpicamente un pH entre 5,0 y 9,5 por ejemplo entre 6,0 y 8,0.
Las composiciones farmaceuticas son preferentemente esteriles.
Las composiciones farmaceuticas preferentemente no pirogenicas por ejemplo que contienen <IEU (unidad de endotoxina, una medicion estandar) por dosis y preferentemente <0,1 EU por dosis.
Las composiciones farmaceuticas son preferentemente libres de gluten.
Las composiciones farmaceuticas son adecuadas para administracion a pacientes animales (y, en particular, humanos) y de esta forma incluyen tanto usos humanos como veterinarios. Pueden usarse en un procedimiento para aumentar una respuesta inmunologica en un paciente, que comprende la etapa de administrar la composicion al paciente. Las composiciones farmaceuticas pueden prepararse en una forma de dosis de unidad. En algunas realizaciones una dosis de unidad puede tener un volumen de entre 0.1-1,0 ml por ejemplo aproximadamente 0,5 ml.
La presente invencion proporciona tambien un dispositivo de suministro (por ejemplo jeringa, nebulizador, dispersor, inhalador, parche dermico, etc.) que contiene una composicion farmaceutica de la presente invencion por ejemplo que contiene una dosis unitaria. Este dispositivo puede usarse para administrar la composicion a un sujeto vertebrado.
La presente invencion tambien proporciona un contenedor esteril (por ejemplo un vial) que contiene una composicion farmaceutica de la presente invencion por ejemplo que contiene una dosis unitaria.
La presente invencion tambien proporciona una dosis unitaria de una composicion farmaceutica de la presente invencion.
La presente invencion tambien proporciona un contenedor sellado hermeticamente que contiene una composicion farmaceutica de la presente invencion. Los contenedores adecuados incluyen por ejemplo un vial.
La presente invencion tambien desvela un kit que comprende un primer y segundo componentes de kit, en el que. (i) el primer componente de kit comprende una sal de metal insoluble y un inmunogeno, y(ii) el segundo componente de kit comprende una sal de arginina del compuesto de formula (I) como se describe en el presente documento. El segundo componente idealmente no incluye una sal de metal insoluble y/o no incluye un inmunogeno. El primer y segundo componentes pueden combinarse para proporcionar una composicion adecuada para administracion a un sujeto.
La presente invencion tambien desvela un kit que comprende primero y segundos componentes de kit, en el que: (i) el primer componente de kit comprende una sal de metal insoluble y una sal de arginina del compuesto de la formula (I) como se describe en el presente documento; y (ii) el segundo componente de kit comprende un inmunogeno. El segundo componente idealmente no incluye una sal de metal insoluble y/o un agonista de TLR. En algunas realizaciones, el segundo componente esta liofilizado. El primer y segundo componentes pueden combinarse para proporcionar una composicion farmaceutica adecuada para administracion a un sujeto.
La presente invencion tambien desvela un kit que comprende primer y segundos componentes de kit, en el que: (i) el primer componente de kit comprende un antfgeno y una sal de arginina del compuesto de la formula (I) como se describe en el presente documento; y (ii) el segundo componente de kit comprende una sal de metal insoluble. El segundo componente idealmente no incluye un antfgeno y/o un agonista de tLr. El primer y segundo componentes pueden combinarse para proporcionar una composicion farmaceutica para administracion a un sujeto.
En algunas realizaciones estos kits comprenden dos viales. En otras realizaciones comprenden una jeringa de llenado facil y un vial, con los contenidos de la jeringa que se mezclan con los contenidos del vial antes a inyeccion. Una disposicion de jeringa/vial es util donde los contenidos del vial estan liofilizados. Usualmente, el primer y segundo componentes de kit estaran ambos en forma lfquida acuosa.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
Las composiciones farmaceuticas de la presente invencion pueden prepararse de varias formas. Por ejemplo, las composiciones pueden prepararse como inyectables, ya sea como soluciones o suspensiones lfquidas. Las formas solidas adecuadas para solucion en, o suspension en, vetuculos lfquidos antes a la inyeccion pueden prepararse tambien (por ejemplo una composicion liofilizada o una composicion secada de congelamiento por aspersion). La composicion puede prepararse por administracion topica como por ejemplo un unguento, crema o polvo. La composicion puede prepararse por administracion oral por ejemplo como un comprimido o una capsula, como una aspersion o como un jarabe (opcionalmente saborizada). La composicion puede prepararse por administracion pulmonar por ejemplo por un inhalador, usando un polvo fino o una dispersion. La composicion puede prepararse como un supositorio o pesario. La composicion puede prepararse para administracion nasal, aural u ocular por ejemplo como una aspersion o gotas. La composicion puede estar en la forma de un kit, disenado de tal forma que una composicion combinada se reconstituye justo antes a la administracion a un paciente. Los kits pueden comprender uno o mas antfgenos en forma lfquida y uno o mas antigenos liofilizados. Son tfpicos inyectables para administracion intramuscular.
Las composiciones comprenden una cantidad eficaz de una sal de arginina del compuesto de formula (I) es decir una cantidad que, cuando se administra a un individuo, ya sea en una dosis simple o como parte de una serie, es eficaz para aumentar la respuesta inmunologica a un antigeno co-administrado. Esta cantidad puede variar dependiendo de la salud y condicion ffsica del individuo a tratarse, edad, el grupo taxonomico del individuo a tratarse (por ejemplo un primate no humano, primate, etc.) la capacidad del sistema inmunologico del individuo para sintetizar anticuerpos, el grado de proteccion deseado, la formulacion de la vacuna, la evaluacion de la situacion medica del doctor que trata y otros factores relevantes. La cantidad caera en un intervalo relativamente amplio que puede determinarse a traves de pruebas de rutina. Puede usarse una cantidad de hasta 2,5 mg por dosis, por ejemplo de 1-1000 jg/dosis o de 10-100 |jg por dosis.
Procedimientos de tratamiento y administracion de composiciones inmunogenicas
La presente invencion es para usar en un procedimiento para aumentar una respuesta inmunologica en un sujeto, que comprende la etapa de administrar al sujeto una sal de arginina del compuesto de formula (I) como se describe en el presente documento, complejo y/o composicion de la presente invencion.
La presente invencion tambien proporciona una sal de arginina del compuesto de formula (I) como se describe en el presente documento, complejo y/o composicion de la presente invencion, para usar en un procedimiento para aumentar una respuesta inmunologica en un sujeto.
La presente invencion tambien proporciona el uso de una sal de arginina del compuesto de formula (I) como se describe en el presente documento o complejo de la presente invencion en la fabricacion de un medicamento para aumentar una respuesta inmunologica en un sujeto.
La presente invencion tambien proporciona el uso de (i) una sal de arginina del compuesto de formula (I) como se describe en el presente documento y (ii) una sal de metal insoluble en la fabricacion de un medicamento para aumentar una respuesta inmunologica en un sujeto. Similarmente, la presente invencion tambien proporciona el uso de (i) una sal de arginina del compuesto de formula (I) como se describe en el presente documento (ii) una sal de metal insoluble y (iii) un antfgeno en la fabricacion de un medicamento (por ejemplo una vacuna) para aumentar una respuesta inmunologica en un sujeto.
La presente invencion es adecuada para aumentar respuestas inmunologicas en sujetos animales humanos o no humanos (en particular marnfferos). Las composiciones preparadas de acuerdo con la presente invencion pueden usarse para tratar tanto ninos como adultos.
La respuesta inmunologica estimulada por estos procedimientos y usos generalmente incluira una respuesta de anticuerpo, preferentemente una respuesta de anticuerpo protectora. Los procedimientos para evaluar respuestas de anticuerpo despues de la inmunizacion son bien conocidos en la tecnica. Por ejemplo, la respuesta inmunologica puede incluir un incremento en IFN-gamma, IL-10, IL-12, MCP-1 y mKC y/o TNF-a.
El tratamiento puede ser un esquema de dosis simple o un esquema de dosis multiple. Dosis multiples pueden usarse en un esquema de inmunizacion primaria y/o en un esquema de inmunizacion de refuerzo. Administracion de mas de una dosis (tfpicamente mas de dosis) es particularmente util en pacientes ingenuos inmunologicamente. Se administraran dosis multiples tfpicamente por lo menos 1 semana aparte (por ejemplo aproximadamente 2 semanas, aproximadamente 3 semanas, aproximadamente 4 semanas, aproximadamente 6 semanas, aproximadamente 8 semanas, aproximadamente 10 semanas, aproximadamente 12 semanas, etc.).
Tambien se describen en el presente documento a compuestos de formula (Ia) mostrada a continuacion.
5
10
15
20
25
30
35
40
imagen3
y sales o solvatos de los mismos. Las sales de los compuestos de formula (la) incluyen sales de arginina, y sales de L-arginina en particular.
General
El termino "que comprende" abarca "que incluye" as^ como tambien "que consiste" y "que consiste esencialmente en" por ejemplo una composicion "que comprende" X puede consistir exclusivamente en X o puede incluir algo adicional por ejemplo X + Y.
La palabra "sustancialmente" no excluye "completamente" por ejemplo una composicion que es "sustancialmente libre" de y puede ser completamente libre de Y. Donde sea necesario, la palabra "sustancialmente" puede omitirse de la definicion de la presente invencion.
El termino "aproximadamente" en relacion a un valor numerico x es opcional y significa, por ejemplo x ±10 %.
A menos que se establezca espedficamente, un procedimiento que comprende una etapa de mezclar dos o mas componentes no requiere ningun orden espedfico de mezclado. De esta forma pueden mezclarse componentes en cualquier orden. Donde hay tres componentes entonces dos componentes pueden combinarse entre sf y entonces la combinacion puede combinarse con el tercer componente, etc.
Donde se usan materiales animales (y particularmente bovinos) en el cultivo de celulas, deben obtenerse de fuentes que son libres de encefalopatfas espongiformes transmisibles (TSE por sus siglas en ingles) y en particular libres de encefalopatfa espongiforme bovina (BSE por sus siglas en ingles). Sobre todo, se prefiere cultivar celulas en la ausencia total de materiales derivados de animales.
Donde un compuesto se administra al cuerpo como parte de una composicion entonces ese compuesto puede reemplazarse alternativamente por un profarmaco adecuado.
El experto en la materia apreciara que los compuestos de formula I pueden existir como tautomeros (por ejemplo el anillo de benzonaftiridina puede tautomerizar). La presente invencion comprende las diferentes formas tautomericas en aislamiento entre sf asf como tambien otras mezclas de estos tautomeros. La preparacion de formas de sal de la base libre puede cambiar el equilibrio de tautomeros con relacion a la base libre.
Los grupos que contienen fosforo empleados con la presente invencion pueden existir en un numero de formas protonadas y desprotonadas dependiendo del pH del ambiente que rodea, por ejemplo el pH del disolvente en el cual se disuelven. Por lo tanto, aunque puede ilustrarse una forma particular se entiende, a menos que se mencione de otra forma, para estas ilustraciones simplemente son representativas y no se limitan a una forma protonada o desprotonada espedfica. Por ejemplo, en el caso de un grupo fosfato, esto se ha ilustrado como - OP(O)(OH)2 pero la definicion incluye las formas protonadas -[OP(O)(OH2)(OH)]+ y -[OP(O)(OH2)2]2+, y las formas desprotonadas - [OP(O)(OH)(O)'] y [OP(O)(O)2]2" por ejemplo que pueden existir a diferentes valores de pH.
Breve descripcion de las figuras
La Figura 1 muestra un analisis de TGA y DSC para una sal de L-arginina del compuesto de formula (I).
La Figura 1a muestra el espectro de RMN 13C para una sal de L-arginina del compuesto de formula (I).
La Figura 1b muestra el espectro de RMN 15N para una sal de L-arginina del compuesto de la formula (I).
La Figura 2 muestra patrones XRPD para una sal de L-arginina y la base libre.
La Figura 3 muestra patrones XRPD para una sal de L-arginina del compuesto de la formula (I) antes y despues de tratamiento DVS.
La Figura 3a muestra patrones XRPD para una muestra de 4 g de una sal de L-arginina del compuesto de formula (I) antes y despues del tratamiento de DVS.
La Figura 4 muestra un analisis de DSC para una sal de L-arginina del compuesto de formula (I) antes y despues de analisis DVS.
La Figura 5 muestra tftulos anti-RSV logio para 10 grupos: (A) A1-H solo; (B) 50 |jg de SMIP, base libre; (C) 50 |jg de SMIP, sal de arginina; (D) 5 jg de SMIP, base libre; (e) 5 jg de SMIP, sal de arginina, (F) 1 jg de sMlP, 5 base libre, (G) 1 jg de SMIP, sal de arginina; (H) IC31; (I) sin adyuvante, (J) tampon solo.
MODOS PARA LLEVAR A CABO LA INVENCION
Smtesis de base libre
La sintesis de acido 3-(5-amino-2-(2-metil-4-(2-(2-(2-fosfonoetoxi)etoxi)etoxi)fenetil)benzo(f)(1,7)naftiridin-8- il)propanoico base libre se describe posteriormente, con referencia al esquema 1.
10 Etapa 1: 3-(3-terc-butoxicarbonilamino)-4-clorofenil)acrilato de (E)-etilo (3)
A una solucion de 5-bromo-2-clorofenilcarbamato de terc-butilo (1) (1,0 equivalentes) en acetonitrilo (0,3 M) y EtOH (0,5 M) se anade K2CO3 (2,0 equivalentes). Se elimina el gas de la reaccion y se hace fluir con N2, despues se anade 3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan- 2-il)acrilato de (E)-etilo (2) (1,2 equivalentes) y Pd(PPh3)4 (0,1 equivalentes). Se hace fluir la reaccion otra vez con N2 y se agita a 100 °C durante la noche. Despues de enfriar a temperatura 15 ambiente, se anade hexano, y se filtra la mezcla a traves de una almohadilla de sflice, eluyendo con EA/Hex (1:1) hasta que se eluye completamente el producto. Se concentra el filtrado y se purifica en Combiflash, eluyendo con 015 % de EA en Hex para dar 3-(3-(terc-butoxicarbonilamino)-4-clorofenil)acrilato de (E)-etilo (3) como un solido blanco.
imagen4
Se anade a una solucion de 3-(3-(terc-butoxicarbonilamino)-4-clorofenil)acrilato de (E)-etilo (3) (1,0 equivalentes) en acetato de etilo/etanol (1:1, 0,3 M) catalizador de Wilkinson (0,10 equivalentes). Se introduce gas hidrogeno por 5 medio de un balon y se agita la reaccion a temperatura ambiente durante 24 horas. Se filtra la mezcla a traves de una almohadilla de celita, se lava con diclorometano. Se concentra el filtrado al vacfo y se purifica por Combiflash usando 0-10 % de acetato de etilo en hexano para dar el 3-(3-(terc-butoxicarbonilamino)-4-clorofenil)propanoato de etilo (4) como un solido.
Etapa 3: 3-(3-(terc-butoxicarbonilamino)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)fenil)propanoato de etilo (5)
10 Se elimina el gas de una solucion de 3-(3-(terc-butoxicarbonilamino)-4-clorofenil)propanoato de etilo (4) (1,0 equivalentes), 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-i(1,3,2-dioxaborolano) (2,0 eq), tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (0,05 equivalentes), 2-diciclohexilfosfino-2',4',6'-triisopropilbifenilo (0,20 equivalentes) y acetato de potasio (2,0 equivalentes) en 1,4-dioxano (0,2 M) y se agita a 100 °C durante la noche. Despues de enfriar a temperatura ambiente, se concentra el contenido de reaccion al vacfo. Se purifica el material sin purificar por Combiflash usando 15 0-50 % de acetato de etilo en hexano para producir 3-(3-(terc-butoxicarbonilamino)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-
dioxaborolan-2-il)propanoato de etilo (5) como un aceite marron. Se almacena el producto a -20°C y se usa despues de un mes de smtesis.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
Etapa 4: 1-bromo-4-(metoximetoxi)-2-metilbenceno (7)
Se anade a una solucion de 4-bromo-3-metilfenol (6) (1,0 equivalentes) en DMF (0,5 M) a 0 °C en forma de porciones del 60 % en peso de NaH (1,5 equivalentes). Se controla la adicion de tal forma que la temperatura de reaccion interna nunca superase los 10 °C. Se agita la reaccion a temperatura ambiente durante 45 minutos, entonces se anade en forma de gotas una solucion de cloro(metoxi)metano (1,2 equivalentes) en DMF (3M) por medio de embudo adicional. Se agita la reaccion en temperatura ambiente durante 3,5 horas, y entonces se detiene por vaciar en hielo. Se agita la mezcla resultante en temperatura ambiente durante 3,5 horas. Se agita la mezcla resultante en temperatura ambiente durante 1 hora. Se anade eter y se separan las dos capas. Se extrae la capa acuosa (1x) con agua. Se lavan las capas organicas combinadas con agua (2x), salmuera, se seca en MgSO4 y se concentra para dar 1-bromo-4-(metoximetoxi)-2-metilbenceno (7) como un aceite incoloro. Se usa el material sin purificar en la siguiente etapa sin purificacion adicional.
Etapa 5: trietil((4-(metoximetoxi)-2-metilfenil)etinil)silano
Se elimina el gas de una solucion de 1-bromo-4-(metoximetoxi)-2-metilbenceno (1,0 equivalentes), trietilamina (5,0 equivalentes) en DMF (0,5 M) y se hace fluir nitrogeno. Se anade a la reaccion TES-acetileno (1,0 equivalentes), Cul (0,098 equivalentes) y Pd (PPh3)2Ch (0,098 equivalentes). Se calienta la reaccion a 60 °C y se agita durante la noche. Despues de enfriar a temperatura ambiente, se anade agua y eter. Se separan las capas y se lava la capa organica con agua (2x). Se separa la capa organica y se pasa a traves de una almohadilla de sflice (envasada con hexano). Se eluye la sflice con 10 % de EA en Hexano. Se combinan las fracciones y se concentran para dar trietil((4-(metoximetoxi)-2-metilfenil)etinil)silano como un aceite negro. Se usa el material bruto en la siguiente etapa sin purificacion adicional.
Etapa 6: 1-etinil-4-(metoximetoxi)-2-metilbenceno (8)
Se anade lentamente a una solucion de trietil((4-(metoximetoxi)2-metilfenil)etinil)etinil)silano (1,0 equivalentes) a 0 °C fluoruro de tetrabutilamonio (solucion 1 M en THF, 0,20 equivalentes). En este punto, se retira el bano de hielo y se permite agitar la mezcla de reaccion a temperatura ambiente durante 45 minutos. Se pasa entonces la mezcla de reaccion a traves de una almohadilla de sflice (envasada con hexano) y se eluye con 20 % de EtOAc en hexanos para retirar sales insolubles. Se purifica entonces el producto bruto por Combiflash usando 0-10 % de EtOAc en hexanos para dar 1-etinil-4-(metoximetoxi)-2-metilbenceno (8) como un lfquido ligeramente marron.
Etapa 7: 3-cloro-3-((4-(metoximetoxi)-2- metilfenil)etinil)picolinonitrilo (10)
Se elimina el gas de una solucion de 1-etinil-4-(metoximetoxi)-2-metilbenceno (8) (1,0 equivalentes), 3,5- dicloropicolinonitrilo (9) (0,90 equivalentes), Cul (0,10 equivalentes) y Pd(PPh3)2Cl2 (0,10 equivalentes) y trietilamina (5,0 equivalentes) en DMF (0,25 M) y se hace fluir con nitrogeno. Se calienta entonces la mezcla de reaccion a 60 °C y se agita durante la noche. Despues de enfriar a temperatura ambiente, se anade agua. Se extrae la mezcla con EA (2x). Se lavan las capas organicas combinadas con 10 % de NH4OH acuoso (2x), salmuera y se concentra. Se filtra el material bruto a traves de una almohadilla de sflice (humedecida con hexano). Se eluye la sflice con 10 % de EA en hexano. Se combinan las fracciones y se concentran. Se lavan los solidos resultantes en eter caliente y se filtran para dar un solido amarillo, el cual se usa en la etapa siguiente sin purificacion adicional. Se concentra y purifica el filtrado por Combiflash usando 0-10 % de EtOAc en hexanos para dar 3-cloro-5-((4-(metoximetoxi)-2- metilfenil)etinil)picolinonitrilo (10) como un solido amarillo.
Etapa 8: 3-(5-amino-2-((4-(metoximetoxi)-2-metilfenil)etinil)- benzol(f)(1,7)naftiridin-8-il)propanoato de etilo (11)
Se elimina el gas de una solucion de 3-cloro-5-((4-(metoximetoxi)-2-metilfenil)etinil)picolinonitrilo (10) (1,0 equivalentes), 3-(3-(terc-butoxicarbonilamino)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenil)propanoato de etilo (5) (1,25 equivalentes), tris(dibencilidenacetona)dipaladio(0) (0,10 equivalentes), diciclohexil(2',6'-dimetoxibifenil-2- il)fosfina (0,20 equivalentes) y bicarbonato de sodio (3,0 equivalentes) en n-butanol/H2O (5:1, 0,2 M) y se agita a 100 °C durante la noche. Despues de enfriar a temperatura ambiente, se diluye el contenido de reaccion con acetato de etilo y agua. Se separan las dos fases y se extrae la capa acuosa dos veces con acetato de etilo. Las capas organicas combinadas se lavan con salmuera, se secan con MgSO4 anhidro y se concentran al vacfo. Se purifica el material bruto por cromatograffa rapida en un sistema COMBIFLASH® (ISCO) usando 0-40 % de acetato de etilo en DCM primero para retirar la impureza, despues 0-4 % de MeOH en DCM para dar 3-(5-amino-2-((4-(metoximetoxi)-2- metilfenil)etinil)-benzo(f)(1,7)naftiridin-8-il)propanoato de etilo (11). Se realiza purificacion adicional por precipitar y lavar en eter caliente.
Etapa 9- 3-(5-amino-2-(4-(metoximetoxi)-2- metilfenetil)benzo(f)(1,7)naftiridin-8-il)propanoato de etilo (12)
Se hace fluir con nitrogeno una solucion de 3-(5- amino-2-((4-metoximetoxi)-2-metilfenil)etinil)- benzo(f)(1,7)naftiridin- 8-il)propanoato de etilo (11) (1,0 equivalentes) en EtOH/THF (3:1, 0,16 M). Entonces se anade 10 % en peso de Pd/C (0,20 equivalentes). Se hace fluir la reaccion con hidrogeno (2x) y se agita bajo un balon de hidrogeno. Despues de 24 horas, se filtra la reaccion a traves de un cojincillo de celita, lavando con MEOH al 5 % en DCM. Se comprueba el filtrado para la presencia de material de partida usando LCMS. Se repite la reaccion de hidrogenacion hasta que no se detecta mas del material de partida alquino o intermediario de alqueno. Se purifica el producto sin
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
purificar por Combiflash usando 0-4 % de MeOH en DCM para dar 3-(5-amino-2-(4-metoximetoxi)-2- metilfenetil)benzo(f)(1,7)naftiridin-8-il)propanoato de etilo (12) como un solido blanco.
Etapa 10 3-(5-amino-2-(4-hidroxi-2- metilfenetil)benzo(f)(1.7)naftiridin-8-il)propanoato de etilo (13)
Se disuelve 3-(5-amino-2-(4-metoximetoxi)-2-metilfenetil)benzo(f)(1.7)naftiridin-8il)propanoato de etilo (12) (1.0 equivalentes) en EtOH (0.2 M). despues se anade una solucion de HCl 4 M en dioxano (0.2 M). El producto precipita como una sal amarilla. Despues de agitar durante 3 horas. se vierte la reaccion en una solucion de agitacion de eter. Se agita la mezcla durante 10 minutos. despues se filtra y se lava con eter. Se obtiene 3-(5-amino-2-(4-hidroxi-2- metilfenetil)benzo(f)(1.7)naftiridin-8-il)propanato de etilo (13) como un solido amarillo el cual se seca al vado durante la noche (sal bis-HCl). Alternativamente. se purifica el producto bruto por Combiflash usando 0-5 % de MeOH en DCM para dar la base libre.
Etapa 11 2-(2-(2-yodoetoxi)etoxi)etilfosfonato de dietilo
Se carga un tubo de microondas con una barra de agitacion. 1.2-bis(2-yodoetoxi)etano disponible en el mercado (1.0 equivalentes) y trietilfosfita (1.0 equivalentes). Se tapa el tubo de microondas y entonces se irradia a 160 °C durante 40 minutos con agitacion. Se enfna la mezcla de reaccion a temperatura ambiente y se purifica por Combiflash usando 0-75 % de EtOAc en hexanos o alternativamente por RP-HpLC (0.035 % TfA en AcN:0.05 % de TFA en H2O. columna C18) para dar 2-(2-(2-yodoetoxi)etoxi)etilfosfonato de dietilo como un aceite amarillo palido.
Etapa 12 3-(5-amino-2-(2-(4-(2-(2-(2-(dietoxifosforil)etoxi)etoxi-2-metilfenil)etil)benzo(f)1.7-naftiridin-8-il)propanoato de etilo (15)
Se anade a una solucion de 3-(5-amino-2-(4-hidroxi-2-metilfenetil)benzo(f)(1.7)naftiridin-8-il)propanoato de etilo (13) (1.0 equivalentes) disuelto en DMF (0.14 M) una solucion de 2-(2-(2-yodoetoxi)etoxi)etilfosfonato de dietilo (14): a partir de la etapa 11 anterior (1.3 equivalentes) en DMF (0.7 M) y carbonato de cesio (4 equivalentes). Se agita la reaccion a 60 °C. Despues de 1.5 horas (o hasta que la reaccion se completa por LCMs) se anade DCM (2 volumenes equivalentes) a la reaccion. Los solidos (inorganicos) se filtran y el filtrado se concentra. Se purifica el producto bruto por Combiflash usando 0-5 % de MeOH en DCM para dar 3-(5-amino-2-(2-(4-(2-(2-(2- (dietoxifosforil)etoxi)etoxi)etoxi)-2-metilfenil)etil)benzo(f)1.7- naftiridin-8-il)propanoato de etilo (15).
Etapa 13: acido 3-(5-amino-2-(2-metil-4-(2-(2-(2-fosfonoetoxi)etoxi)etoxi)fenetil)benzo(f)(1.7)naftiridin-8-il)propanoico (16)
Se anade lentamente a una solucion de 3-(5-amino-2-(2-(4-(2-(2-(2-dietoxifosforil)etoxi)etoxi)etoxi)-2-
metilfenil)etil)benzo(f)1.7-naftiridin-8-il)propanoato de etilo (15) (1.0 equivalentes) en DCM (0.16M) a 0 °C TMSBr (10 equivalentes). Se agita la reaccion en temperatura ambiente durante la noche. Se anade TMSBr adicional (5.0 equivalentes) a 0 °C y se agita otra vez la reaccion a temperatura ambiente durante la noche. Se retira el disolvente por evaporacion y se secan los solidos anaranjados sin purificar en alto vacfo brevemente. Se suspenden los solidos en EtOH (0.5 M) y se anade NAOH 2.5 N (10.0 equivalentes). Se agita la reaccion a 80 °C durante 3 horas. Despues de enfriar a temperatura ambiente. se ajusta la mezcla a pH 9 a 10 y directamente se purifica en RP-HPLC usando una columna C18. eluyendo con 10-40 % 95:5 (MeCN/5 mM NH4CAc) en gradiente de NH4CAc 10 mM (pH 9). Las fracciones que contienen el producto se combinan y concentran al vacfo. Se disuelve el gel blanco resultante llevando a reflujo 1:1 EtCH/agua (0.04 M) anadiendo unas pocas gotas de hidroxido de amonio. Mientras esta caliente. se vierte lentamente la mezcla en una solucion caliente en agitacion de acetona (0.009M) precalentada a 50 °C. La suspension de acetona se enfna lentamente a temperatura ambiente durante 15 minutos con agitacion continua. y entonces se asienta en un bano de hielo por 10 minutos. Se filtran los solidos y se lavan sucesivamente con acetona (2x) y eter (2x). Se secan los solidos en alto vacfo durante la noche para dar el compuesto (16) como un solido. La RmN 1H (dimetilsulfoxido-d6) obtenida para acido 3-(5-amino-2-(2-metil-4-(2-(2-(2-
fosfonoetoxi)etoxi)etoxi)fenetil)benzo(f) (1.7)naftiridin-8-il)propanoico es: 5 9.02 (s. 1H). 8.82 (s. 1H). 8.55 (d. 1H. J=8.0 Hz). 7.58 (s. 1H). 7.49 (d. 1H. J=8.4 Hz). 7.06 (d. 1H. J=8.0 Hz). 6.76 (s. 1H). 6.68 (d. 1H. J=8.0 Hz). 4.03-4.00 (m. 2H). 3.71-3.69 (m. 2H). 3.60-3.54 (m. 4H). 3.51-3.49 (m. 2H). 3.16-3.12 (m. 2H). 3.03-2.96 (m. 4H). 2.67-2.66 (m. 2H). 2.33- 2.32 (m. 2H). 2.26 (s. 3H). LRMS [M+H] = 598.2.
Formacion de sal de Arginina
Se pesan 98.025 mg de acido 3-(5-amino-2-(2-metil-4-(2-(2-(2-fosfonoetoxi)etoxi)etoxi)fenetil)benzo(f)(1.7) naftiridin- 8-il)propanoico en un vial de vidrio y se anade 1.7 ml de 0.1 M de arginina en 80/20 metanol/agua para dar una solucion de 57 mg/ml. Se lleva a suspension la solucion durante 60 minutos a 50 °C. Se anade entonces 7 ml de etanol lo cual da como resultado un precipitado esponjoso blanco despues de agitacion durante varias horas. Se filtran los solidos y se secan en un horno de vacfo durante 3 dfas a 40 °C para producir 110 mg de sal de arginina de acido 3-(5-amino-2-(2-metil-4-(2-(2-(2-fosfonoetoxi) etoxi)etoxi)fenetil)benzo(f)(1.7)naftiridin-8-il)propanoico.
Datos de RMN
Las Figuras 1a y 1b muestran espectros de RMN para la sal de L-arginina de la presente invencion comparada con la base libre. La sal de arginina del compuesto de formula (I) (■); base libre ( •) y arginina libre (♦).
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Datos de XRPD
La Figura 2 muestra los datos de XRPD para la sal de L-arginina obtenida comparados con los de la base libre. Sal de arginina (100 mg) (♦ ) y 1000 mg (■)) del compuesto de formula (I); base libre (•).
Estudios de Estabilidad
Se ensayo la sal de L-arginina formada por medio del procedimiento anterior para termo- y fotoestabilidad. Para propositos comparativos, la base libre y la sal de amonio tambien se ensayaron.
Las sales de amonio y arginina de volumen y la base libre a granel del compuesto de formula (I) se ensayaron para fotoestabilidad irradiandose (1,2 millones de horas lux), a 40 °C durante un periodo de 36 horas. La base libre mostro un 12,36 % de degradacion, la sal de arginina mostro un 9,7 % de degradacion y la sal de amonio mostro un 4,6 % de degradacion.
La sal de arginina y la base libre a granel del compuesto de formula (I) tambien se ensayaron para fotoestabilidad en una solucion de tampon fosfato 50 mM (pH 6,8) irradiandose (1,2 millones de horas lux), a 40 °C durante un periodo de 36 horas. La base libre mostro un 23,1 % de degradacion, la sal de arginina mostro un 9,8 % de degradacion. La sal de amonio no se ensayo.
Las sales de amonio y de arginina y la base libre a granel del compuesto de formula (I) tambien se ensayaron para termoestabilidad a pH fisiologico (7,4) calentando a 80 °C durante 7 dfas. Despues de calentar la base libre mostro un 18,1 % de degradacion comparada con un 0,1 % de degradacion de la sal de arginina.
De esta forma, la sal de arginina muestra termoestabilidad en pH fisiologico y fotoestabilidad mejoradas en comparacion con la base libre. Mientras que la sal de amonio muestra ligeramente mejor fotoestabilidad que la sal de arginina, la sal de amonio presenta otras desventajas, en particular que los productos de degradacion son gas de amoniaco toxico. Esto lleva a la sal de amonio a ser inadecuada para uso en formulacion farmaceutica y almacenamiento a largo plazo. Adicionalmente, a altas temperaturas (80 °C), como aquellas usadas durante los procedimientos de esterilizacion comprendidas por la presente invencion (por ejemplo llevar a autoclave) la sal de arginina es mas estable que la sal de amonio. La sal de arginina es tambien mas estable que la base libre a altas temperaturas (80 °C) usadas en autoclave.
Confirmacion Estequiometrica
Se llevo a cabo un analisis elemental en la sal de arginina producida anteriormente. Se muestra el analisis en la tabla a continuacion.
% C
Objetivo % de dif. % H Objetivo % de dif. % N Objetivo % de dif. % P Objetivo % de dif. % H2O
53,93
53,52 -0,77 6,74 6,74 0,00 12,14 12,70 4,41 3,59 3,83 6,27 3,81
Este analisis confirma una estequiometria 1:1 entre el compuesto de la formula (I) y L-arginina. El objetivo es la sal monohidrato teorica del compuesto de formula (I) como se describe en el presente documento.
Analisis Termico
Se analizo la sal de L-arginina producida anteriormente por medio de analisis termogravimetrico (TGA, por sus siglas en ingles) y calorimetna diferencial de barrido (DSC, por sus siglas en ingles). Se muestran los resultados en la Figura 1.
Absorcion de agua
Se realizan experimentos de absorcion de vapor dinamico (DVS, por sus siglas en ingles) en la sal de L- arginina obtenida por medio del procedimiento anterior. El analisis DVS muestra otra vez que la sal de arginina es higroscopica, tomando aproximadamente 18 % de agua en 90 % de humedad relativa. XRPD para la sal pre (♦) y post-DVS (■) se muestran en la Figura 3. La base libre tambien se muestra para comparacion (•). El analisis DSC de la sal de arginina despues del tratamiento DVS tambien se realiza y los resultados pre (♦) y post- DVS (■) tratamiento se muestran en la Figura 4. La base libre tambien se muestra para comparacion (•).
Tambien se realizo DVS en una muestra de 4 g de sal de L-arginina del compuesto de formula (I) descrito anteriormente. El analisis de DVS muestra otra vez que la sal de arginina es higroscopica, tomando aproximadamente 13,71 % de agua en 90 % de humedad relativa. Despues de dos ciclos, la misma cantidad de agua se muestra a adsorberse y desadsorberse, lo cual indica que no se forman hidratos adicionales (los cuales pueden tener un impacto negativo en la solubilidad). No se nota cambio de forma por XRPD. El XRPD para la sal pre (♦) y post-DVS (■) se muestra en la Figura 3a.
5
10
15
20
25
30
35
40
Estudios de Adsorcion - fosfato de aluminio
La adsorcion de una sal de L-arginina del compuesto de formula (I) a un adyuvante de fosfato de aluminio disponible en el mercado produce una eficiencia de adsorcion del 97 % (como se encuentra por recuperar el compuesto de la formula (I) en desorcion). El pretratamiento del adyuvante de fosfato de aluminio con fosfato inorganico (fosfato de potasio) tiene un impacto en la capacidad de adsorcion y la adsorcion se inhibe de una forma dependiente de la concentracion. Sin embargo, la adsorcion permanece >90 % cuando se trata el adyuvante de fosfato de aluminio con 10 mM de fosfato de potasio.
Se preparo una formulacion con 0,4 mg/ml del compuesto de formula (I) de la sal de L-arginina y 3 mg/ml de fosfato de aluminio (expresado como concentracion de Al3+), 10 mM de tampon histidina (pH 6,5). Se trato el fosfato de aluminio durante la noche con varias concentraciones de fosfato de potasio (10 mM, 50 mM, 100 mM, 250 mM y 500 mM) antes de que se incubara el compuesto de formula (I) de la sal de arginina con el fosfato de aluminio.
Pretratamiento con fosfato de potasio (mM)
0 10 50 100 250 500
% de adsorcion
97±1 93±1 81,6±0,1 60±2 52±0,1 65±4
Estudios de adsorcion- Hidroxido de Aluminio
La sal de L-arginina del compuesto de formula (I) se ensayo para adsorcion en 1 mg/ml de concentracion en 3 mg/ml de hidroxido de aluminio ("Al-H"). La eficiencia de adsorcion del compuesto se determino por RP-HPLC como siendo el 99 %.
Estudios de Adsorcion- Fosfato de calcio
Se estudio adsorcion de una sal de L-arginina del compuesto de formula (I) a un adyuvante de fosfato de calcio disponible en el mercado a pH 6,4, sin tampon de histidina. Se preparan dos formulaciones, ambas con 1,12 mg/ml de Ca2+ pero con 0,25 mg/ml o bien 0,125 mg/ml de la sal de arginina. La adsorcion es alrededor del 90 % para ambas formulaciones.
Exposicion sistemica despues de suministro in vivo
La adsorcion del compuesto de formula (I) en Al-H redujo sus concentraciones sericas pico y aumento os tiempos de residencia en sitios de inyeccion intramuscular, como se descubrio para las especies preclmicas ratones y ratas. Esto contribuye bastante en modificar y controlar el nivel de exposicion sistemica evitando el problema potencial de las citocinas proinflamatorias en la sangre, mejorando la seguridad y/o la capacidad de tolerancia de los compuestos de formula (I).
Una dosis unica de dos formulaciones diferentes (una que contiene la base libre y la otra la sal de L-arginina del compuesto de formula (I)) adsorbida a Al-H en 10 mM de tampon de histidina y en presencia de 3 MenB de antfgenos se administra intramuscularmente a ratones en una dosis de 4 mg/kg. La formulacion de fase libre tiene una Ty2 de 9,5 horas, Tmax de 0,83 horas, Cmax de 465 nM y AUC0-24 de 4552 h*nM. El compuesto de formula (I) tiene una Ty2 de 8,48 horas, Tmax de 0,67 horas, Cmax de 453 nM y AUC0-24 de 4538h*nM.
Meningococos B
La referencia 12 describe una vacuna para meningococos ("MenB") del serogrupo B producida a partir de tres polipeptidos separados (vease tambien la referencia 46). Estos tres polipeptidos pueden adsorberse a hidroxido de aluminio ("AL-H") y esta adsorcion ocurrira aun despues de que se pre-adsorba la sal de arginina del compuesto (I) al Al-H.
Se ensayo una version modificada de esta vacuna MenB 3-valente en la cual la protema de fusion GNA2091-1870 se reemplazo por "936-10A-10A" como se describe en la referencia 43. Esta mezcla de protemas se ensayo con el compuesto de formula (I) como base libre o como la sal de arginina, en dos concentraciones diferentes. Se ensayaron suero de ratones inmunizados con la vacuna intraperitonealmente (IP) o intramuscularmente (IM) en un ensayo bactericida (SBA, por sus siglas en ingles) contra 5 cepas diferentes. Los tftulos bactericidas fueron como sigue:
MC58 NZ 961-5945 UK355 5-99
Al-H
IP 4096 2048 >8192 512 >8192
Al-H/50 |jg de base libre
IP >8192 >8192 >8192 >8192 >8192
Al-H/50 jg de sal de Arg
IP >8192 >8192 >8192 >8192 >8192
Al-H/25 jg de base libre
IP >8192 >8192 >8192 >8192 >8192
Al-H/25 jg de sal de Arg
IP >8192 >8192 >8192 >8192 >8192
Al-H
IM 4096 1024 >8192 256 >8192
Al-H/50 jg de base libre
IM >8192 >8192 >8192 4096 >8192
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
(continuacion)
MC58 NZ 961-5945 UK355 5-99
Al-H 50 jg de sal de Arg
IM >8192 >8192 >8192 2048 >8192
De esta manera la base libre y la sal de Arg mejora ambas respuestas con relacion a Al-H solas y puede proporcionar tftulos altos contra todas las cepas en el panel, logrando un tftulo de >8192 contra todas las cepas cuando se administran por la ruta IP, de esta manera mejorando el cubrimiento de cepa de la vacuna.
Ademas, los resultados indican que la adsorcion del compuesto como una base libre o como la sal de L-arginina no cambia bioequivalencia por el ensayo de SBA.
RSV
Se formula glicoprotema trimerica F (3 |jg) de virus sincitial respiratorio (RSV, por sus siglas en ingles) con el compuesto de formula (I) como una base libre o como la sal de arginina (1 jg, 5 jg, 50 jg) adsorbida a Al-H. Para comparacion tambien se ensaya el adyuvante IC31TM. Se inmunizan ratones Balb/C (6 por grupo) en los dfas 0 y 21 y se evaluan las respuestas inmunes. Se muestran tftulos 3 semanas despues de la primera dosis en la Figura 5. En todas las 3 dosis de SMIP la sal de arginina (Figura 5, grupos C, E, G) da tftulos ligeramente superiores que la base libre (grupos B, D, F) y los tftulos se aumentan en comparacion con Al-H solo (grupo A).
REFERENCIAS
[1] WO2011/027222.
[2] PCT/US2011/050231.
[3] Burrell y col. (1999) Vaccine 17:2599-603.
[4] Vaccine Design...(1995) eds. Powell & Newman. ISBN: 030644867X. Plenum.
[5] Clausi y col. (2008) J Pharm Sci DOI 10.1002/jps.21390.
[6] Treanor y col. (1996) J Infect Dis 173:1467-70.
[7] Keitel y col. (1996) Clin Diagn Lab Immunol 3:507-67.
[8] WO03/097091.
[9] Cassone & Torosantucci (2006) Expert Rev Vaccines 5:859- 67.
[10] WO2010/140119.
[11] WO2010/119343.
[12] Giuliani y col. (2006) Proc Natl Acad Sci U S A. 103:10834-9.
[13] WO95/27787.
[14] WO03/010317.
[15] W02007/110700.
[16] WO2006/138004.
[17] WO2005/084306.
[18] WO2005/002619.
[19] WO03/049762.
[20] WO02/02606.
[21] WO00/37494.
[22] W02008/020330.
[23] WO2006/091517.
[24] WO2006/089264.
[25] Covacci & Rappouli (2000) J. Exp. Med. 19:587-592.
[26] WO93/18150.
[27] Covacci y col. (1993) Proc. Natl. Acad Sci. USA 90:5791- 5795.
[28] Tummuru y col. (1994) Infect. Immun. 61:1799-1809.
[29] Marchetti y col. (1998) Vaccine 16:33-37.
[30] Telford y col. (1994) J. Exp. Med. 179:1653-1658.
[31] Evans y col. (1995) Gene 153:123-127.
[32] WO 96/01272 & WO96/01273, especially SEQ ID NO: 6.
[33] WO 97/25429.
[34] Rappouli y col. (1991) TIBTECH 9:232-238.
[35] Nencioni y col. (1991) Infect. Immun. 59(2):625-30.
[36] Dasarai y col. (2011) J Gen Virol PMID: 21307228.
[37] Zhang y col. (2001) J. Biol. Chem. 276:39577-85.
[38] Earl y col. (2001) J Virol 75:645-53.
[39] Barnett y col. (2001) J Virol 75:5526-40.
[40] MMWR Morb Mortal Wkly Rep 1998 Jan 16;47(1):12, 19.
[41] Harper y col. (2004) Lancet 364(9447):1757-65.
[42] US 6,699,474.
[43] WO2011/024072.
[44] WO2007/060548.
[45] WO2009/050586.
[46] WO2004/032958.
[47] Remington: The Science and Practice of Pharmacy (Gennaro, 2000; 20th edition, ISBN: 0683306472). LISTADO DE SECUENCIAS
5 SEQ ID NO: 1
ATNDDDVKKAATVAIAAAYNNGQEINGFKAGETIYDIDEDGTITKKDATAADVEADDFKGLGLKKVVTNLTKTVNEN
KQNVDAKVKAAESEIEKLTTKLADTDAALADTDAALDATTNALNKLGENITTFAEETKTNIVKIDEKLEAVADTVDK
HAEAFNDIADSLDETNTKADEAVKTANEAKQTAEETKQNVDAKVKAAETAAGKAEAAAGTANTAADKAEAVAAKVTD
IKADIATNKDNIAKKANSADVYTREESDSKFVRIDGLNATTEKLDTRLASAEKSIADHDTRLNGLDKTVSDLRKETR
QGLAEQAALSGLFQPYNVG
SEQ ID NO: 2
MASPDVKSADTLSKPAAPVVSEKETEAKEDAPQAGSQGQGAPSAQGGQDMAAVSEENTGNGGAAATDKPKNEDEGAQ NDMPQNAADTDSLTPNHTPASNMPAGNMENQAPDAGESEQPANQPDMANTADGMQGDDPSAGGENAGNTAAQGTNQA ENNQTAGSQNPASSTNPSATNSGGDFGRTNVGNSVVIDGPSQNITLTHCKGDSCSGNNFLDEEVQLKSEFEKLSDAD KISNYKKDGKNDGKNDKFVGLVADSVQMKGINQYIIFYKPKPTSFARFRRSARSRRSLPAEMPLIPVNQADTLIVDG EAVSLTGHSGNIFAPEGNYRYLTYGAEKLPGGSYALRVQGEPSKGEMLAGTAVYNGEVLHFHTENGRPSPSRGRFAA KVDFGSKSVDGIIDSGDGLHMGTQKFKAAIDGNGFKGTWTENGGGDVSGKFYGPAGEEVAGKYSYRPTDAEKGGFGV FAGKKEQDGSGGGGATYKVDEYHANARFAIDHFNTSTNVGGFYGLTGSVEFDQAKRDGKIDITIPVANLQSGSQHFT DHLKSADIFDAAQYPDIRFVSTKFNFNGKKLVSVDGNLTMHGKTAPVKLKAEKFNCYQSPMAKTEVCGGDFSTTIDR TKWGVDYLVNVGMTKSVRIDIQIEAAKQ
SEQ ID NO: 3
MVSAVIGSAAVGAKSAVDRRTTGAQTDDNVMALRIETTARSYLRQNNQTKGYTPQISVVGYDRHLLLLGQVATEGEK QFVGQIARSEQAAEGVYNYITVASLPRTAGDIAGDTWNTSKVRATLLGISPATRARVKIVTYGNVTYVMGILTPEEQ AQITQKVSTTVGVQKVITLYQNYVQRGSGGGGVAADIGAGLADALTAPLDHKDKGLQSLTLDQSVRKNEKLKLAAQG AEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVSRFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQVYKQSHSALTAFQTEQIQDSEHSGKMVAKRQF RIGDIAGEHTSFDKLPEGGRATYRGTAFGSDDAGGKLTYTIDFAAKQGNGKIEHLKSPELNVDLAAADIKPDGKRHA 10 VISGSVLYNQAEKGSYSLGIFGGKAQEVAGSAEVKTVNGIRHIGLAAKQ
SEQ ID NO: 4
MVSAVIGSAAVGAKSAVDRRTTGAQTDDNVMALRIETTARSYLRQNNQTKGYTPQISVVGYDRHLLLLGQVATEGEK
QFVGQIARSEQAAEGVYNYITVASLPRTAGDIAGDTWNTSKVRATLLGISPATRARVKIVTYGNVTYVMGILTPEEQ
AQITQKVSTTVGVQKVITLYQNYVQRGSGGGGVAADIGAGLADALTAPLDHKDKGLQSLTLDQSVRKNEKLKLAAQG
AEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVSRFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQVYKQSHSALTAFQTEQIQDSEHSGKMVAKRQF
RIGDLGGEHTAFNQLPDGKAEYRGTAFGSDDAGGKLTYTIDFTKKQGNGKIEHLKSPELNVELASAEIKADGKSHAV
ILGDVRYGSEEKGSYSLGIFGGRAQEVAGSAEVKTVNGIRHIGLAAKQGSGGGGVAADIGAGLADALTAPLDHKDKG
LQSLTLDQSVRKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVSRFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQVYKQSHSALT
AFQTEQIQDSEHSGKMVAKRQFRIGDLGGEHTAFNQLPDGKAEYRGTAFGSDDAGGKLTYTIDFTKKQGNGKIEHLK
SPELNVELASAEIKADGKSHAVILGDVRYGSEEKGSYSLGIFGGRAQEVAGSAEVKTVNGIRHIGLAAKQ
SEQ ID NO: 5
MGPDSDRLQQRRVAADIGAGLADALTAPLDHKDKSLQSLTLDQSVRKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDK VSRFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQIYKQDHSAVVALQIEKINNPDKIDSLINQRSFLVSGLGGEHTAFNQLPDGKA EYHGKAFSSDDAGGKLTYTIDFAAKQGHGKIEHLKTPEQNVELAAAELKADEKSHAVILGDTRYGSEEKGTYHLALF GDRAQEIAGSATVKIGEKVHEIGIAGKQGSGGGGVAADIGAGLADALTAPLDHKDKGLQSLTLDQSVRKNEKLKLAA QGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVSRFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQVYKQSHSALTAFQTEQIQDSEHSGKMVAKR QFRIGDIAGEHTSFDKLPEGGRATYRGTAFGSDDAGGKLTYTIDFAAKQGNGKIEHLKSPELNVDLAAADIKPDGKR HAVISGSVLYNQAEKGSYSLGIFGGKAQEVAGSAEVKTVNGIRHIGLAAKQGSGPDSDRLQQRRVAADIGTGLADAL TAPLDHKDKGLKSLTLEDSIPQNGTLTLSAQGAEKTFKAGDKDNSLNTGKLKNDKISRFDFVQKIEVDGQTITLASG EFQIYKQNHSAVVALQIEKINNPDKTDSLINQRSFLVSGLGGEHTAFNQLPGGKAEYHGKAFSSDDPNGRLHYSIDF TKKQGYGRIEHLKTLEQNVELAAAELKADEKSHAVILGDTRYGSEEKGTYHLALFGDRAQEIAGSATVKIGEKVHEI GIAGKQ

Claims (15)

  1. 5
    10
    15
    20
    25
    30
    REIVINDICACIONES
    1. Una sal de arginina del acido 3-(5-amino-2-(2-metil-4-(2-(2-(2-fosfonoetoxi)etoxi)etoxi) fenetil) benzo(f)[1,7]naftiridin-8-il)propanoico.
  2. 2. La sal de acuerdo con la reivindicacion 1, en la que la sal tiene una estequiometna 1:1 de arginina a acido 3-(5- amino-2-(2-metil-4-(2-(2-(2- fosfonoetoxi)etoxi)etoxi)fenetil)benzo(f)[1,7]naftiridin-8-il)propanoico.
  3. 3. La sal de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, en la que la sal de arginina es una sal de L- arginina.
  4. 4. La sal de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que la sal esta hidratada.
  5. 5. La sal de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en la que la sal es un monohidrato.
  6. 6. La sal de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en la que la sal es un solido sustancialmente amorfo.
  7. 7. La sal de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, para su uso en terapia.
  8. 8. Uso de la sal de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en la fabricacion de un medicamento para su uso en terapia.
  9. 9. La sal para su uso o el uso de una sal de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 7 u 8, en la que la terapia es un procedimiento para aumentar una respuesta inmune en un sujeto.
  10. 10. Un procedimiento para la preparacion de la sal de arginina de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, que comprende la etapa de poner en contacto acido 3-(5-amino-2-(2-metil-4-(2-2-(2- fosfonoetoxi)etoxi)etoxi)fenetil)benzo(f)[1,7]naftiridin-8-il)propanoico con arginina en un disolvente.
  11. 11. Una composicion que comprende una sal de arginina del acido 3-(5-amino-2-(2-metil-4-(2-(2-(2- fosfonoetoxi)etoxi)etoxi)fenetil)benzo(f)[1,7]nafptiridin- 8-il)propanoico y una sal de metal insoluble.
  12. 12. La composicion de la reivindicacion 11, que comprende ademas un inmunogeno.
  13. 13. La composicion de la reivindicacion 12, en la que dicho inmunogeno es un polipeptido de superficie
  14. 14. La composicion de la reivindicacion 12, en la que dicho inmunogeno provoca una respuesta inmune que protege contra una enfermedad vmca, una enfermedad bacteriana, una enfermedad fungica, una enfermedad parasita, una enfermedad autoinmune o un tumor.
  15. 15. Un procedimiento para preparar un complejo adyuvante, que comprende una etapa de mezclar una sal de arginina de acido 3-(5-amino-2-(2-metil-4-(2-(2-(2-fosfonoetoxi)etoxi)etoxi)fenetil)benzo[f] [1,7]naptiridin-8- il)propanoico con una sal de metal insoluble de tal forma que el acido adsorbe a la sal de metal insoluble para formar el complejo.
ES13708142.8T 2012-03-07 2013-03-07 Sales de arginina de un agonista de TLR7 Active ES2597755T3 (es)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261608011P 2012-03-07 2012-03-07
US201261608011P 2012-03-07
PCT/EP2013/054548 WO2013131985A1 (en) 2012-03-07 2013-03-07 Immunologically useful arginine salts

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2597755T3 true ES2597755T3 (es) 2017-01-20

Family

ID=47843276

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES13708142.8T Active ES2597755T3 (es) 2012-03-07 2013-03-07 Sales de arginina de un agonista de TLR7

Country Status (18)

Country Link
US (1) US9320748B2 (es)
EP (1) EP2822947B1 (es)
JP (1) JP6325986B2 (es)
CN (1) CN104203946B (es)
AU (1) AU2013229466A1 (es)
CA (1) CA2865759C (es)
CY (1) CY1118091T1 (es)
DK (1) DK2822947T3 (es)
ES (1) ES2597755T3 (es)
HR (1) HRP20161354T1 (es)
HU (1) HUE030175T2 (es)
LT (1) LT2822947T (es)
MX (1) MX346678B (es)
PL (1) PL2822947T3 (es)
PT (1) PT2822947T (es)
RU (1) RU2014140336A (es)
SI (1) SI2822947T1 (es)
WO (1) WO2013131985A1 (es)

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX2012002723A (es) 2009-09-02 2012-04-11 Novartis Ag Composiciones inmunogenicas que incluyen moduladores de la actividad de receptores tipo toll.
WO2012031140A1 (en) 2010-09-01 2012-03-08 Novartis Ag Adsorption of immunopotentiators to insoluble metal salts
EP2680885B8 (en) 2011-03-02 2018-07-25 GlaxoSmithKline Biologicals SA Combination vaccines with lower doses of antigen and/or adjuvant
EP2822581A2 (en) 2012-03-08 2015-01-14 Novartis AG Adjuvanted formulations of dtp booster vaccines
AU2015238512B2 (en) 2014-03-26 2018-02-01 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Mutant staphylococcal antigens
EP3061826A1 (en) 2015-02-27 2016-08-31 Novartis AG Flavivirus replicons
WO2021178306A1 (en) * 2020-03-01 2021-09-10 Dynavax Technologies Corporation Coronavirus vaccines comprising a tlr9 agonist
US20220280482A1 (en) * 2021-03-06 2022-09-08 Mind Medicine, Inc. Formulations of psilocin that have enhanced stability
GB202215414D0 (en) 2022-10-18 2022-11-30 Glaxosmithkline Biologicals Sa Vaccine

Family Cites Families (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6699474B1 (en) 1990-08-20 2004-03-02 Erich Hugo Cerny Vaccine and immunserum against drugs of abuse
DE69334197T2 (de) 1992-03-02 2008-12-11 Novartis Vaccines And Diagnostics S.R.L. Helicobacter pylori Cytotoxin verwendbar in Impfstoffe und Diagnostik
FR2718452B1 (fr) 1994-04-06 1996-06-28 Pf Medicament Elément d'immunogène, agent immunogène, composition pharmaceutique et procédé de préparation.
ATE229978T1 (de) 1994-07-01 2003-01-15 Chiron Corp Helicobacter proteine und impstoffe
GB2324093A (en) 1996-01-04 1998-10-14 Rican Limited Helicobacter pylori bacterioferritin
GB9828000D0 (en) 1998-12-18 1999-02-10 Chiron Spa Antigens
US20040005667A1 (en) 2000-07-03 2004-01-08 Giuloi Ratti Immunisation against chlamydia pneumoniae
FR2827605B1 (fr) 2001-07-20 2004-07-16 Pf Medicament Nouveaux peptides derives de la proteine g du vrs et leur utilisation dans un vaccin
EP2335724A1 (en) 2001-12-12 2011-06-22 Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. Immunisation against chlamydia trachomatis
GB0211118D0 (en) 2002-05-15 2002-06-26 Polonelli Luciano Vaccines
DK1549338T3 (da) 2002-10-11 2011-03-28 Novartis Vaccines & Diagnostic Polypeptidvacciner til bred beskyttelse mod hypervirulente meningokok-afstamningslinier
CN1812809A (zh) 2003-06-26 2006-08-02 希龙公司 用于沙眼衣原体的免疫原性组合物
WO2005084306A2 (en) 2004-03-02 2005-09-15 Chiron Corporation Immunogenic compositions for chlamydia pneunomiae
PL1858920T3 (pl) 2005-02-18 2016-12-30 Białka i kwasy nukleinowe z Escherichia coli związane z zapaleniem opon mózgowych/sepsą
JP2008530245A (ja) 2005-02-18 2008-08-07 ノバルティス ヴァクシンズ アンド ダイアグノスティクス， インコーポレイテッド 尿路病原性菌株由来の抗原
JP2008544745A (ja) 2005-05-12 2008-12-11 ノバルティス ヴァクシンズ アンド ダイアグノスティクス， インコーポレイテッド Ｃｈｌａｍｙｄｉａｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓのための免疫原性組成物
GB0524066D0 (en) 2005-11-25 2006-01-04 Chiron Srl 741 ii
EP1976557A2 (en) 2005-12-22 2008-10-08 Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. Chlamydial antigens
US20100166788A1 (en) 2006-08-16 2010-07-01 Novartis Vaccines And Diagnostics Immunogens from uropathogenic escherichia coli
SI2200642T1 (sl) 2007-10-19 2012-06-29 Novartis Ag Formulacije meningokoknega cepiva
NZ612315A (en) 2009-04-14 2014-10-31 Novartis Ag Compositions for immunising against staphylococcus aureus
AU2010255356A1 (en) 2009-06-01 2011-12-22 Novartis Ag Combinations of pneumococcal RrgB clades
AU2010258677B2 (en) * 2009-06-10 2016-10-06 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Benzonaphthyridine-containing vaccines
BR112012004275A2 (pt) 2009-08-27 2016-11-16 Novartis Ag polipeptídios híbridos incluindo sequências meningocócicas de fhbp
MX2012002723A (es) * 2009-09-02 2012-04-11 Novartis Ag Composiciones inmunogenicas que incluyen moduladores de la actividad de receptores tipo toll.
JO3257B1 (ar) * 2009-09-02 2018-09-16 Novartis Ag مركبات وتركيبات كمعدلات لفاعلية tlr
WO2012031140A1 (en) 2010-09-01 2012-03-08 Novartis Ag Adsorption of immunopotentiators to insoluble metal salts
WO2012103421A1 (en) 2011-01-27 2012-08-02 Novartis Ag Adjuvant nanoemulsions with crystallisation inhibitors
US20140363461A1 (en) * 2011-09-01 2014-12-11 Fabio Bagnoli Adjuvanted formulations of staphylococcus aureus antigens

Also Published As

Publication number Publication date
EP2822947B1 (en) 2016-08-03
MX2014010423A (es) 2014-09-22
AU2013229466A1 (en) 2014-09-04
PL2822947T3 (pl) 2017-01-31
US20150125475A1 (en) 2015-05-07
EP2822947A1 (en) 2015-01-14
MX346678B (es) 2017-03-29
LT2822947T (lt) 2016-10-10
WO2013131985A1 (en) 2013-09-12
SI2822947T1 (sl) 2016-10-28
US9320748B2 (en) 2016-04-26
CN104203946A (zh) 2014-12-10
JP2015511957A (ja) 2015-04-23
CA2865759C (en) 2020-07-21
CY1118091T1 (el) 2017-06-28
CA2865759A1 (en) 2013-09-12
RU2014140336A (ru) 2016-04-27
CN104203946B (zh) 2017-03-22
PT2822947T (pt) 2016-09-26
DK2822947T3 (en) 2016-09-19
JP6325986B2 (ja) 2018-05-16
HUE030175T2 (en) 2017-04-28
HRP20161354T1 (hr) 2016-12-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2597755T3 (es) Sales de arginina de un agonista de TLR7
ES2458355T3 (es) Adsorción de inmunopotenciadores sobre sales metálicas insolubles
ES2387582T3 (es) Vacuna de combinación con cantidades reducidas del antígeno del virus de la polio
US20140363461A1 (en) Adjuvanted formulations of staphylococcus aureus antigens
ES2803578T3 (es) Métodos mejorados para la inactivación del enterovirus, adsorción de adjuvante y composiciones de vacuna de dosis reducida obtenidas de los mismos
JP2022502469A (ja) 低減用量の不活化ポリオウイルスを含む混合ワクチン組成物およびそれを調製するための方法
JP2015509520A (ja) 狂犬病ウイルス免疫原のアジュバント化製剤
ES2365557T3 (es) Vacunas de combinación de poliovirus inactivado.
WO2011024071A1 (en) Adjuvant comprising aluminium, oligonucleotide and polycation
US11793869B2 (en) Methods for enterovirus inactivation, adjuvant adsorption and dose reduced vaccine compositions obtained thereof
TW201008577A (en) Vaccine composition
AU2016204453A1 (en) Adsorption of immunopotentiators to insoluble metal salts
AU2013203167A1 (en) Adsorption of immunopotentiators to insoluble metal salts