ES2593905T3 - Análogos del ácido epoxieicosatrienoico y métodos de preparación y usos de los mismos - Google Patents

Análogos del ácido epoxieicosatrienoico y métodos de preparación y usos de los mismos Download PDF

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Abstract

Compuesto seleccionado del grupo que consiste en **Fórmula**

Description

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25
30
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40
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50
55
60
65
DESCRIPCION
Analogos del acido epoxieicosatrienoico y metodos de preparacion y uso de los mismos Campo de la invencion
Esta invencion se refiere en general a analogos del acido epoxieicosatrienoico (EET). Mas particularmente, la presente invencion se refiere a analogos de EET que actuan como agonistas de EET y son utiles como medicamentos en el tratamiento de nefrotoxicidad inducida por farmacos, hipertension y otros estados relacionados.
Antecedentes de la invencion
Los acidos epoxieicosatrienoicos (EET) son moleculas de senalizacion que pueden actuar como hormonas de corto alcance (es decir son mediadores autocrinos y paracrinos) del sistema cardiovascular y del rinon. Producen vasorelajacion asf como efectos antiinflamatorios y profibrinolfticos.
Hipertension y estados relacionados. La enfermedad cardiovascular afecta a 81 millones de los 300 millones de personas de los Estados Unidos y 75 millones de esas personas tienen hipertension. Los metabolitos de CYP epoxigenasa tienen acciones biologicas que los implican como factores contribuyentes importantes en la funcion cardiovascular y el control de la tension arterial.
Una de las primeras actividades biologicas descritas para los acidos epoxieicosatrienoicos (EET) fue la inhibicion de la reabsorcion tubular renal de sodio. Posteriormente, se determino que los EET dilataban los vasos sangufneos y se identificaron como factor hiperpolarizante derivado del endotelio. Estas acciones biologicas concuerdan con la idea de que los EET serfan eicosanoides que contribuyen a la reduccion de la tension arterial y previenen la hipertension sensible a la sal.
Los niveles alterados de EET pueden contribuir a la hipertension en seres humanos. Un polimorfismo de un solo nucleotido en un gen de CYP epoxigenasa se asocia con hipertension. Estudios experimentales en roedores tambien han demostrado hipertension en estados en los que disminuyeron los niveles de EET y/o enzima CYP epoxigenasa del rinon. El aumento de los niveles de EET con 11,12-EET-SI, un analogo de 11,l2-EET, mejoro la funcion arteriolar aferente renal in vitro.
Actualmente, se usan inhibidores de la epoxido hidrolasa soluble (sEHI) in vivo para aumentar los niveles de EET y esto da como resultado un aumento generalizado de 11,12-EET y 14,15-EET y en menor medida de 8,9-EET. Estudios in vivo recientes han demostrado que analogos de EET reducen la tension arterial en ratas hipertensas y tambien mejoran el fenotipo del sfndrome metabolico en ratones deficientes en hemo oxigenasa-2 y previenen el dano renal y vascular asociado con la adiposidad. Parece como si alguno de los agonistas de EET como NUDSA pudiera tambien inhibir sEH y aumentar la expresion de la CYP2C epoxigenasa. Este tipo de de actividad combinatoria descrita para NUDSA podrfa proporcionar efectos beneficiosos anadidos. En su conjunto, estos hallazgos han generado interes en la seleccion como diana de la ruta de la CYP epoxigenasa y los EET para el tratamiento de hipertension.
Aunque los EET tienen acciones sobre el transporte tubular renal y la funcion vascular que son esenciales para la regulacion de la tension arterial, ha resultado evidente que acciones biologicas adicionales atribuidas a los EET hacen que sean una diana terapeutica excelente para otras enfermedades cardiovasculares. Estas actividades adicionales demostradas para los EET incluyen la inhibicion de la agregacion plaquetaria y la actividad antiinflamatoria. Tambien se ha encontrado que los EET tienen efectos sobre la proliferacion y la migracion vascular, incluyendo el fomento de la angiogenesis. Por tanto, los EET se han convertido en una diana terapeutica para el dano del organo blanco asociado con enfermedades cardiovasculares, lesion isquemica cardiaca, aterosclerosis y accidente cerebrovascular.
El potencial terapeutico para los agonistas de EET y los sEHI podrfa extenderse mas alla de la hipertension y las enfermedades cardiovasculares. La proteccion neural frente a una lesion isquemica se ha atribuido a acciones de sEHI sobre los vasos sangufneos y las neuronas. Hay cada vez mas pruebas de que los sEHI proporcionan proteccion frente al dano isquemico en el cerebro y el corazon a traves de efectos sobre cascadas de senalizacion de la apoptosis. Los agonistas de EET y los sEHI tambien han demostrado modular el dolor en diversos modelos con animales experimentales. Seguramente se descubran otras posibles aplicaciones terapeuticas para los agonistas de EET cuando estos agentes se sometan a prueba en otros modelos de enfermedad.
Por consiguiente, existe la necesidad en la tecnica de agonistas de EET novedosos que sean activos como agentes terapeuticos contra la hipertension y la enfermedad cardiovascular y neural asociada.
Nefrotoxicidad inducida por farmacos. Un efecto secundario comun de muchos farmacos usados en el tratamiento de diversos estados es la nefrotoxicidad. Por ejemplo, el cisplatino, un compuesto inorganico basado en platino, es uno de los agentes para quimioterapia mas potentes y ampliamente usados disponibles para tratar una variedad de
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tumores malignos, incluyendo canceres de ovarios, pulmon, testfculo y vejiga. Aunque, el cisplatino se usa como importante farmaco para quimioterapia en la practica clfnica, tiene efectos adversos potencialmente letales. El mas comun de estos efectos adversos es la nefrotoxicidad (el 25-40% de los pacientes tratados con cisplatino desarrolla insuficiencia renal aguda), lo que limita el uso seguro y eficaz de este agente quimioterapico ampliamente usado. La fisiopatologfa de la nefrotoxicidad inducida por cisplatino implica estres oxidativo potenciado, inflamacion, aumento del estres del retfculo endoplasmatico (RE) y apoptosis de celulas renales.
EET es un importante mediador lipfdico que ejerce varias acciones biologicas incluyendo actividades antiinflamatorias, antioxidativas y antiapoptoticas. Varios estudios demostraron que con actividades antiinflamatorias, antiapoptoticas y antioxidativas, EET presenta un gran potencial de proteccion de organos. Por ejemplo, un aumento de la biodisponibilidad de EET que resulta de la conversion reducida de EET en su forma menos activa por el inhibidor de la epoxido hidrolasa soluble (sEH) proporciona proteccion renal en varios modelos preclfnicos de enfermedades humanas. Estos estudios demostraron que el efecto protector renal de EET estaba relacionado con los efectos antiinflamatorios y antioxidativos de EET. De hecho, hay evidencias claras de que EET tiene efectos antiinflamatorios contra la inflamacion agua y cronica. Aparte de la inflamacion, EET tambien protege las celulas frente a la apoptosis. Por tanto, hay evidencias claras de la capacidad de EET para proteger organos mediante mecanismos que implican sus actividades antiinflamatorias, antiapoptoticas y antioxidativas.
Sin embargo, se sabe que los EET producidos de forma endogena son labiles qufmica y metabolicamente. Tambien limitan la perspectiva terapeutica de EET los problemas de metabolismo rapido, baja solubilidad y acumulacion. Como tal, se ha suscitado un interes considerable en desarrollar estrategias para potenciar la biodisponibilidad de EET. En este empeno, se han realizado intentos para desarrollar analogos de EET que presenten actividad mimetica de EET junto con varias caracterfsticas clave importantes para la estabilidad y la biodisponibilidad. Varios de tales analogos de EET han demostrado varias actividades biologicas incluyendo la proteccion de organos.
En el presente estudio se ha investigado el efecto protector renal de dos analogos de EET activos por via oral recien desarrollados en la nefrotoxicidad inducida por cisplatino. Se ha demostrado que los analogos de EET ofrecieron una nefroproteccion notable durante la administracion de cisplatino y este efecto se relaciono con sus actividades antioxidativas, antiinflamatorias, contra el estres del RE y antiapoptoticas. Se ha demostrado ademas que aunque protegfan el rinon frente a los efectos nefrotoxicos perjudiciales de cisplatino, estos analogos de EET no comprometfan el efecto quimioterapico del cisplatino.
Por consiguiente, existe la necesidad en la tecnica de agonistas de EET novedosos que sean activos como agentes terapeuticos contra los efectos nefrotoxicos perjudiciales del cisplatino.
Sumario de la invencion
En el presente documento, los inventores muestran composiciones novedosas de analogos de acidos epoxieicosatrienoicos (EET) y metodos de uso de los mismos para el tratamiento de enfermedad cardiovascular, particularmente el uso de tales composiciones como antihipertensores.
Por consiguiente, la invencion abarca en un primer aspecto determinados compuestos que son analogos de 14,15- EET. En determinadas realizaciones, el compuesto tiene la estructura de uno cualquiera de los siguientes compuestos.
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En una realizacion, la invencion comprende los compuestos 7 y 30.
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En otro aspecto, la divulgacion proporciona un metodo de preparacion de cualquiera de los compuestos 1-33 tal como se describe y se reivindica en el presente documento.
Se proporcionan compuestos segun la invencion, en determinadas realizaciones, en forma de una composicion que 10 comprende un compuesto tal como se describe y se reivindica en el presente documento en combinacion con un portador farmaceuticamente aceptable.
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La presente divulgacion abarca ademas metodos para proporcionar un tratamiento de hipertension en un sujeto, dando como resultado una reduccion de la tension arterial en un sujeto. Tales metodos incluyen las etapas de administrar a un sujeto una cantidad terapeuticamente eficaz de cualquiera de los compuestos 1-33, solo o en combinacion, tal como se describe y se reivindica en el presente documento, mediante lo cual se reduce la tension arterial en el sujeto. En un aspecto, el metodo comprende administrar el compuesto 7. En un aspecto alternativo, el metodo comprende administrar el compuesto 30.
En otra realizacion, la presente invencion proporciona analogos de EET que tienen las estructuras seleccionadas del grupo que consiste en
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Todavfa en otra realizacion, la invencion abarca el uso de cualquiera de los analogos de 14,15-EET descritos anteriormente para la fabricacion de un medicamento para el tratamiento de hipertension en un sujeto. Tambien, la presente invencion contempla ademas compuestos segun la invencion para su uso en el tratamiento de hipertension en un sujeto.
La presente divulgacion abarca ademas metodos de tratamiento de nefrotoxicidad inducida por farmacos en un sujeto. En un aspecto, la divulgacion comprende proporcionar un tratamiento para los efectos nefrotoxicos perjudiciales del cisplatino en un sujeto. Tales metodos incluyen las etapas de administrar a un sujeto una cantidad terapeuticamente eficaz de un compuesto tal como se describe y se reivindica en el presente documento, mediante lo cual se reducen los efectos nefrotoxicos perjudiciales del farmaco en el sujeto.
Otros objetos, caracterfsticas y ventajas de la presente invencion resultaran evidentes tras la revision de la memoria descriptiva, las reivindicaciones y los dibujos.
Breve descripcion de los dibujos
La figura 1A representa la estructura qufmica SRD-I-71-9, que corresponde al analogo de EET, compuesto 26 de la tabla 1. La figura 1B muestra la tension arterial medida media en funcion de los dfas de tratamiento en ratas espontaneamente hipertensas a las que se les administro una composicion que contenfa vehfculo o el compuesto 26. La figura 1C muestra la tension arterial medida media en el dfa 0, el dfa 7 y el dfa 14 en ratas espontaneamente hipertensas a las que se les administro una composicion que contenfa vehfculo o el compuesto 26.
La figura 2A representa la estructura qufmica LGK-I-119-15, que corresponde al analogo de EET, compuesto 20 de la tabla 1. La figura 2B muestra la tension arterial medida media en funcion de los dfas de tratamiento en ratas espontaneamente hipertensas a las que se les administro una composicion que contenfa vehfculo o el compuesto 20. La figura 2C muestra la tension arterial medida media en el dfa 0, el dfa 7 y el dfa 14 en ratas espontaneamente hipertensas a las que se les administro una composicion que contenfa vehfculo o el compuesto 20.
La figura 3A representa la estructura qufmica JLJ-I-94-6, que corresponde al analogo de EET, compuesto 7 de la tabla 1. La figura 3B muestra la tension arterial medida media en funcion de los dfas de tratamiento en ratas espontaneamente hipertensas a las que se les administro una composicion que contenfa vehfculo o el compuesto 7. Los datos se representaron graficamente como promedios de 12 horas. Los compuestos se administraron por via i.p. durante 14 dfas. La figura 3C muestra la tension arterial medida media en el dfa 0, el dfa 7 y el dfa 14 con relacion al tratamiento inicial en ratas espontaneamente hipertensas a las que se les administro una composicion que contenfa vehfculo o el compuesto 7.
La figura 4A representa la estructura qufmica MV-IV-110-20, que corresponde al analogo de EET, compuesto 30 de la tabla 1. La figura 4B muestra la tension arterial medida media en funcion de los dfas de tratamiento en ratas espontaneamente hipertensas a las que se les administro una composicion que contenfa vehfculo o el compuesto 30. Los datos se representaron graficamente como promedios de 12 horas. La figura 3C muestra la tension arterial medida media en el dfa 0, el dfa 7 y el dfa 14 en ratas espontaneamente hipertensas a las que se les administro una composicion que contenfa vehfculo o el compuesto 30.
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La figura 5A muestra la tension arterial medida media en funcion de los dfas de tratamiento en ratas con hipertension inducida por angiotensina II a las que se les administro una composicion que contenfa vehfculo o el compuesto 7. Los datos se representaron graficamente como promedios de 12 horas. La figura 5B muestra la tension arterial medida media en el dfa 0, el dfa 7 y el dfa 14 en ratas con hipertension inducida por angiotensina II a las que se les administro una composicion que contenfa vehfculo o el compuesto 7.
La figura 6A muestra la tension arterial medida media en funcion de los dfas de tratamiento en ratas con hipertension inducida por angiotensina II a las que se les administro una composicion que contenfa vehfculo o el compuesto 30. Los datos se representaron graficamente como promedios de 12 horas. La figura 6B muestra la tension arterial medida media en el dfa 0, el dfa 7 y el dfa 14 en ratas con hipertension inducida por angiotensina II a las que se les administro una composicion que contenfa vehfculo o el compuesto 30.
Figura 7: (a) Creatinina en plasma, (b) nitrogeno ureico en sangre (BUN), (c) molecula-1 de lesion renal y (d) NA Gin en orina de ratas a las que se les administro cisplatino, pretratadas o bien con los analogos de EET, EET-A y EET-B, o bien con vehfculo. *p<0,05 frente a rata Wistar Kyoto normal; #p<0,05 frente a rata tratada con vehfculo a la que se le administro cisplatino. Datos expresados como la media + EEM, n=5-7.
Figura 8A: Microfotograffas representativas de la tincion de acido peryodico-reactivo de Schiff (PAS) (200x) que representan la formacion de cilindros tubulares junto con los cilindros calculados son una fraccion (%) en las secciones corticales renales de grupos experimentales diferentes. *p<0,05 frente a rata Wistar Kyoto normal; #p<0,05 frente a rata tratada con vehfculo. Datos expresados como la media + EEM, n=5-7.
Figura 8B: Microfotograffas representativas de la tincion de acido peryodico-reactivo de Schiff (PAS) (200x) que representan la formacion de cilindros tubulares junto con la fraccion (%) del area de cilindros calculados en las secciones medulares renales de grupos experimentales diferentes. *p<0,05 frente a rata Wistar Kyoto normal; #p<0,05 frente a rata tratada con vehfculo. Datos expresados como la media + EEM, n=5-7.
Figura 9: Analisis de RT-PCR a partir de expresiones de ARN de (a) NOX1, (b) gp91Phox, (d) SOD1, (e) SOD2, (f) SOD3 y (c) mediciones de sustancias reactivas con acido tiobarbiturico (TBARS) del rinon en ratas a las que se les administro cisplatino tratadas o bien con los analogos de EET, A, B, o bien con vehfculo. *p<0,05 frente a rata Wistar Kyoto normal; # p<0,05 frente a rata pretratada con vehfculo a la que se le administro cisplatino. Datos expresados como la media + EEM, n=5-7.
Figura 10: Expresion renal de genes marcadores inflamatorios TNF-a (a), IL-6 (b) y IL-1 p (c) en ratas a las que se les administro cisplatino pretratadas o bien con los analogos de EET, EET-A y EET-B, o bien con vehfculo. *p<0,05 frente a rata Wistar Kyoto normal; #p<0,05 frente a rata pretratada con vehfculo a la que se le administro cisplatino. Datos expresados como la media + EEM, n=5-7.
Figura 11: Expresion renal de genes marcadores de estres del retfculo endoplasmatico GRP78/BiP(a) y caspasa12 (b) en ratas a las que se les administro cisplatino tratadas o bien con los analogos de EET, EET-A y EET-B, o bien con vehfculo. *p<0,05 frente a rata Wistar Kyoto normal; #p<0,05 frente a rata tratada con vehfculo a la que se le administro. Datos expresados como la media + EEM, n=5-7.
Figura 12: Actividad caspasa-3 cortical renal (a) y expresion suprarrenal del gen antiapoptotico Bcl2 (b) en grupos experimentales diferentes. Las razones entre la expresion renal del gen antiapoptotico Bcl2 y los genes apoptoticos Bak (c) y Bax (d) en grupos experimentales diferentes. *p<0,05 frente a rata Wistar Kyoto normal; #p<0,05 frente a rata tratada con vehfculo a la que se le administro cisplatino. Datos expresados como la media + EEM, n=5-7.
Figura 13A: Efecto citotoxico del cisplatino en celula renal normal (HEK293) y celulas cancerosas (Hela, U87, NCCIT).
Figura 13B: Efecto del analogo de EET, EET-A, sobre el crecimiento celular de HEK293, Hela, U87, NCCIT. EET-A no afecta al efecto quimioterapico del cisplatino en celulas cancerosas NCCIT. Datos expresados como la media + EEM, n=5-7.
Figura 14: Estructura de los analogos de EET, EET-A y EET-B.
Figura 15: Sfntesis de EET-B.
Figura 16A: Sfntesis de EET-A.
Figura 16B: Sfntesis alternativa de EET-A.
Descripcion detallada de la invencion
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I. En general
Antes de que se describan los presentes materiales y metodos, se entiende que esta invencion no se limita a la metodologfa, los protocolos, materiales y reactivos particulares descritos, ya que estos pueden variar. Se entiende tambien que la terminologfa usada en el presente documento es con el fin de describir realizaciones particulares unicamente, y no pretende limitar el alcance de la presente invencion.
Debe observarse que tal como se usa en el presente documento y en las reivindicaciones adjuntas, las formas en singular “un(o)”, “una” y “el/la” incluyen referencias en plural a menos que el contexto dicte claramente lo contrario. Ademas, los terminos “un(o)” (o “una”), “uno o mas” y “al menos uno” pueden usarse de manera intercambiable en el presente documento. Tambien se observa que los terminos “que comprende”, “que incluye” y “que tiene” pueden usarse de manera intercambiable.
A menos que se definan de otro modo, todos los terminos tecnicos y cientfficos usados en el presente documento tienen los mismos significados que los entendidos comunmente por un experto habitual en la tecnica a la que pertenece esta invencion. Aunque puede usarse cualquier metodo y material similar o equivalente a los descritos en el presente documento en la practica o las pruebas de la presente invencion, los metodos y materiales preferidos se describen a continuacion. Todas las referencias citadas en esta memoria descriptiva se consideraran indicativas del nivel de conocimientos de la tecnica.
II. LA INVENCION
Los inventores dan a conocer en el presente documento analogos de EET, agonistas de EET y otros compuestos lipfdicos relacionados novedosos, y composiciones que comprenden tales compuestos, asf como metodos de sfntesis de tales compuestos y el uso de tales composiciones en el tratamiento de hipertension y estados relacionados, en el tratamiento de los efectos perjudiciales de la nefrotoxicidad por cisplatino y estados relacionados. Los inventores han mostrado que varios de los compuestos muestran efectos antihipertensivos y se toleran bien en modelos de rata relevantes. Son posibles varias opciones de administracion diferentes, incluyendo inyecciones intraperitoneales, inyecciones en sangre o administracion oral. Pueden usarse liposomas, micelas y emulsionantes para hacer que estas preparaciones sean mas solubles.
Tal como se usa en el presente documento, “sujeto” significa animales mamfferos y no mamfferos. “Mamfferos” significa cualquier miembro de la clase Mammalia incluyendo, pero sin limitarse a, seres humanos, primates no humanos tales como chimpances y otras especies de simios y monos; animales de granja tales como ganado, caballos, ovejas, cabras y cerdos; animales domesticos tales como conejos, perros y gatos; animales de laboratorio incluyendo roedores, tales como ratas, ratones y cobayas; y similares. Los ejemplos de animales no incluidos, pero que no se limitan a los mismos, son aves y similares. El termino “sujeto” no indica una edad o un sexo particular.
Tal como se usa en el presente documento, “administrar” o “administracion” incluye cualquier medio para introducir un compuesto de la presente invencion en el organismo, preferiblemente en la circulacion sistemica. Los ejemplos incluyen, pero no se limitan a por via oral, bucal, sublingual, pulmonar, transdermica, transmucosa, asf como inyeccion subcutanea, intraperitoneal, intravenosa e intramuscular.
Una “cantidad terapeuticamente eficaz” significa una cantidad de un compuesto que, cuando se administra a un sujeto para tratar una enfermedad o un estado, es suficiente para que tal tratamiento tenga efecto sobre la enfermedad. La “cantidad terapeuticamente eficaz” variara dependiendo del compuesto, el estado patologico que este tratandose, la gravedad o la enfermedad tratada, la edad y la salud relativa del sujeto, la via y forma de administracion, el criterio del facultativo medico o veterinario y otros factores.
Para los fines de la presente invencion, “tratar” o “tratamiento” describen la atencion y el cuidado de un paciente con el fin de combatir la enfermedad, el estado o trastorno. Los terminos abarcan tanto tratamientos preventivos, es decir, profilacticos, como paliativos. Tratar incluye la administracion de un compuesto de la presente invencion para prevenir la aparicion de sfntomas o complicaciones, aliviar los sfntomas o las complicaciones, o eliminar la enfermedad, el estado o trastorno.
Se administra un compuesto a un paciente en una cantidad terapeuticamente eficaz. Un compuesto puede administrarse solo o como parte de una composicion farmaceuticamente aceptable. Ademas, un compuesto o una composicion pueden administrarse de una vez, como por ejemplo, mediante una inyeccion en bolo, varias veces, tal como mediante una serie de comprimidos, o administrarse de manera sustancialmente uniforme a lo largo de un periodo de tiempo, como por ejemplo, usando una administracion transdermica. Ademas, puede variarse la dosis del compuesto a lo largo del tiempo. Un compuesto puede administrase usando una formulacion de liberacion inmediata, una formulacion de liberacion controlada, o combinaciones de las mismas. El termino “liberacion controlada” incluye liberacion sostenida, liberacion retardada, y combinaciones de las mismas.
Puede prepararse, envasarse o venderse una composicion farmaceutica de la invencion a granel, como una dosis unitaria individual, o como una pluralidad de dosis unitarias individuales. Tal como se usa en el presente documento,
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una “dosis unitaria” es una cantidad discreta de la composicion farmaceutica que comprende una cantidad predeterminada del principio activo. La cantidad del principio activo es generalmente igual a la dosificacion del principio activo que se administrarfa al paciente o una fraccion conveniente de tal dosificacion tal como, por ejemplo, la mitad o una tercera parte de tal dosificacion.
Las cantidades relativas del principio activo, el portador farmaceuticamente aceptable y cualquier componente adicional en una composicion farmaceutica de la invencion variaran, dependiendo de la identidad, el tamano y estado del ser humano tratado y dependiendo ademas de la via por la que se administra la composicion. A modo de ejemplo, la composicion puede comprender entre el 0,1% y el 100% (p/p) de principio activo. Una dosis unitaria de una composicion farmaceutica de la invencion comprendera generalmente desde aproximadamente 100 miligramos hasta aproximadamente dos gramos del principio activo, y preferiblemente comprende desde aproximadamente 200 miligramos hasta aproximadamente 1,0 gramo del principio activo.
Una dosificacion preferida para seres humanos estarfa en el intervalo bajo de mg/kg por via oral una vez al dfa. Tambien serfa aceptable dos veces al dfa.
Para mejorar la solubilidad en agua, los compuestos preferidos pueden formularse con ciclodextrinas o productos derivados de ciclodextrina, derivatizados con sustituyentes tales como polietilenglicoles u otra funcionalidad polar, o incluirse en liposomas. Para la administracion oral, los compuestos pueden modificarse con una funcionalidad lipofila o conjugarse con moleculas absorbidas de manera activa. Se comentan otros enfoques en “Strategies to improve oral drug bioavailability”, Isabel Gomez-Orellana, Expert Opinion on Drug Delivery, mayo de 2005, vol. 2, n.° 3: paginas 419-433, que se incorpora como referencia al presente documento.
Otro aspecto de la divulgacion se refiere a un kit que comprende una composicion farmaceutica de la invencion y material de instrucciones. El material de instrucciones incluye una publicacion, una grabacion, un diagrama, o cualquier otro medio de expresion que se usa para comunicar la utilidad de la composicion farmaceutica de la invencion para uno de los fines expuestos en el presente documento en un ser humano. El material de instrucciones tambien puede describir, por ejemplo, una dosis apropiada de la composicion farmaceutica de la invencion. El material de instrucciones del kit de la invencion puede fijarse, por ejemplo, a un envase que contiene una composicion farmaceutica de la invencion o enviarse junto con un envase que contiene la composicion farmaceutica. Alternativamente, el material de instrucciones puede enviarse por separado del envase con la intencion de que el receptor use conjuntamente el material de instrucciones y la composicion farmaceutica.
La divulgacion tambien incluye un kit que comprende una composicion farmaceutica de la invencion y un dispositivo de administracion para administrar la composicion a un ser humano. A modo de ejemplo, el dispositivo de administracion puede ser una botella de pulverizacion flexible, una botella de pulverizacion dosificadora, un dispositivo de pulverizacion en aerosol, un atomizador, un dispositivo de administracion de polvo seco, un dispositivo de dispensacion de polvo/disolvente autopropulsado, una jeringa, una aguja, un tampon o un recipiente de medicion de la dosificacion. El kit puede comprender ademas un material de instrucciones tal como se describe en el presente documento. El kit tambien comprende un recipiente para las composiciones independientes, tal como una botella dividida o un paquete de aluminio dividido. Los ejemplos adicionales de recipientes incluyen jeringas, cajas, bolsas, y similares. Normalmente, un kit comprende indicaciones para la administracion de los componentes independientes. La forma del kit es particularmente ventajosa cuando los componentes independientes se administran preferiblemente en diferentes formas de dosificacion (por ejemplo, oral y parenteral), se administran en diferentes intervalos de dosificacion o cuando el medico prescriptor desea un ajuste de la dosis de los componentes individuales de la combinacion.
Puede ser deseable proporcionar un recordatorio en el kit, por ejemplo, en forma de numeros junto a los comprimidos o capsulas mediante lo cual los numeros se corresponden con los dfas del regimen en los que deben ingerirse los comprimidos o capsulas asf especificados. Otro ejemplo de un recordatorio de este tipo es un calendario impreso en la tarjeta, por ejemplo, tal como sigue “primera semana, lunes, martes, ..., etc. segunda semana, lunes, martes”, etc. Otras variaciones de recordatorios resultaran facilmente evidentes. Una “dosis diaria” puede ser un unico comprimido o capsula o varias pfldoras o capsulas que deben tomarse en un dfa dado.
En otro aspecto de la presente divulgacion, se proporciona un dispensador disenado para dispensar las dosis diarias de una en una en el orden de su uso previsto. Preferiblemente, el dispensador esta equipado con un recordatorio, de modo que se facilite adicionalmente el cumplimiento con el regimen de dosificacion. Un ejemplo de un recordatorio de este tipo es un contador mecanico, que indica el numero de dosis diarias que se han dispensado. Otro ejemplo de un recordatorio de este tipo es una memoria de microchip alimentada por pilas acompanada de una lectura en cristal lfquido, o una senal de recordatorio audible que, por ejemplo, lee la fecha en que se ha tomado la ultima dosis darfa y/o recuerda cuando ha de tomarse la siguiente dosis.
Los compuestos de la presente invencion, que comprenden opcionalmente otros compuestos farmaceuticamente activos, pueden administrarse a un paciente o bien por via oral, por via rectal, por via parenteral (por ejemplo, por via intravenosa, por via intramuscular o por via subcutanea), por via intracisternal, por via intravaginal, por via intraperitoneal, por via intravesical, localmente (por ejemplo, polvos, pomadas o gotas), o bien como pulverizacion
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bucal o nasal. Otras formulaciones contempladas incluyen nanopartfculas proyectadas, preparaciones liposomicas, eritrocitos resellados que contienen el principio activo, y formulaciones de base inmunologica.
La administracion parenteral de una composicion farmaceutica incluye cualquier via de administracion caracterizada por una brecha ffsica de un tejido de un ser humano y la administracion de la composicion farmaceutica a traves de la brecha en el tejido. Por tanto, la administracion parenteral incluye la administracion de una composicion farmaceutica mediante inyeccion de la composicion, mediante aplicacion de la composicion a traves de una incision quirurgica, mediante aplicacion de la composicion a traves de una herida no quirurgica penetrante en el tejido, y similares. En particular, la administracion parenteral incluye tecnicas de inyeccion subcutanea, intraperitoneal, intravenosa, intraarterial, intramuscular o intraesternal y de infusion intravenosa, intraarterial o de dialisis renal. Por ejemplo, las composiciones de la presente invencion pueden administrarse a un sujeto mediante inyecciones cerebrales (a traves de vPAG), inyecciones intratecales, inyecciones intraperitoneales o inyecciones en sangre.
Las composiciones adecuadas para la inyeccion parenteral comprenden el principio activo combinado con un portador farmaceuticamente aceptable tales como disoluciones, dispersiones, suspensiones o emulsiones acuosas o no acuosas esteriles fisiologicamente aceptables, o pueden comprender polvos esteriles para su reconstitucion en disoluciones o dispersiones inyectables esteriles. Los ejemplos de portadores, diluyentes, disolventes o vehfculos acuosos y no acuosos adecuados incluyen agua, solucion salina isotonica, etanol, polioles (propilenglicol, polietilenglicol, glicerol y similares), mezclas adecuadas de los mismos, trigliceridos, incluyendo aceites vegetales tales como aceite de oliva, o esteres organicos inyectables tales como oleato de etilo. La fluidez apropiada puede mantenerse, por ejemplo mediante el uso de un recubrimiento tal como lecitina, mediante el mantenimiento del tamano de partfcula requerido en el caso de dispersiones, y/o mediante el uso de surfactantes. Tales formulaciones pueden prepararse, envasarse o venderse en una forma adecuada para la administracion en bolo o para la administracion continua. Las formulaciones inyectables pueden prepararse, envasarse o venderse en forma de dosificacion unitaria tal como en ampollas, en envases de multiples dosis que contienen un conservante, o en dispositivos de un solo uso para inyeccion por el propio paciente o inyeccion por un profesional medico.
Las formulaciones para la administracion parenteral incluyen suspensiones, disoluciones, emulsiones en vehfculos oleosos o acuosos, pastas y formulaciones biodegradables o de liberacion sostenida implantables. Tales formulaciones pueden comprender ademas uno o mas componentes adicionales incluyendo agentes de suspension, estabilizantes o dispersantes. En una realizacion de una formulacion para administracion parenteral, el principio activo se proporciona en forma seca (es decir, en polvo o granular) para su reconstitucion con un vehfculo adecuado (por ejemplo agua esteril libre de pirogenos) antes de la administracion parenteral de la composicion reconstituida.
Las composiciones farmaceuticas pueden prepararse, envasarse o venderse en forma de una suspension o disolucion acuosa u oleosa inyectable esteril. Esta suspension o disolucion puede formularse segun la tecnica conocida, y puede comprender, ademas del principio activo, componentes adicionales tales como agentes dispersantes, agentes humectantes o agentes de suspension descritos en el presente documento. Tales formulaciones inyectables esteriles pueden prepararse usando diluyente o disolvente no toxico aceptable por via parenteral, tal como agua o 1,3-butanodiol, por ejemplo. Otros diluyentes y disolventes aceptables incluyen solucion de Ringer, disolucion isotonica de cloruro de sodio y aceites fijos tales como mono o digliceridos sinteticos. Otras formulaciones que pueden administrarse por via parenteral que son utiles incluyen las que comprenden el principio activo en forma microcristalina, en una preparacion liposomica o como componente de sistemas polimericos biodegradables. Las composiciones para liberacion sostenida o implantacion pueden comprender materiales hidrofobos o polimericos farmaceuticamente aceptables tales como una emulsion, una resina de intercambio ionico, un polfmero poco soluble o una sal poco soluble.
Los compuestos segun la presente invencion tambien pueden contener adyuvantes tales como agentes conservantes, humectantes, emulsionantes y/o dispersantes, por ejemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, acido sorbico, y similares. Tambien puede ser deseable incluir agentes isotonicos, por ejemplo, azucares, cloruro de sodio, y similares. Puede provocarse la absorcion prolongada de composiciones farmaceuticas inyectables mediante el uso de agentes que pueden retardar la absorcion, por ejemplo monoesterato de aluminio y/o gelatina. En particular, pueden usarse liposomas, miosomas y emulsionantes para hacer que los presentes compuestos sean mas solubles para su administracion.
Las formas de dosificacion pueden incluir depositos o implantes inyectables o solidos. En realizaciones preferidas, el implante comprende una cantidad eficaz de un agente activo y un polfmero biodegradable. En realizaciones preferidas, un polfmero biodegradable adecuado puede seleccionarse del grupo que consiste en un poliaspartato, poliglutamato, poli(L-lactida), una poli(D,L-lactida), una poli(lactida-co-glicolida), una poli(g-caprolactona), un polianhfdrido, un poli(beta-hidroxi-butirato), un poliortoester y un polifosfaceno. En otras realizaciones, el implante comprende una cantidad eficaz de agente activo y un polfmero Sylastic. El implante proporciona la liberacion de una cantidad eficaz de agente activo durante un periodo prolongado de aproximadamente una semana a varios anos.
Las formas de dosificacion solidas para administracion oral incluyen capsulas, comprimidos, polvos y granulos. En tales formas de dosificacion solidas, el compuesto activo se mezcla con al menos un excipiente (o portador) habitual inerte tal como citrato de sodio o fosfato de dicalcio o (a) cargas o expansores, como por ejemplo, almidones,
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lactosa, sacarosa, manitol o acido silfcico; (b) aglutinantes, como por ejemplo, carboximetilcelulosa, alginatos, gelatina, polivinilpirrolidona, sacarosa o goma arabiga; (c) humectantes, como por ejemplo, glicerol; (d) agentes disgregantes, como por ejemplo, agar-agar, carbonato de calcio, almidon de patata o tapioca, acido algfnico, determinados silicatos complejos o carbonato de sodio; (e) retardadores de la disolucion, como por ejemplo, parafina; (f) aceleradores de la absorcion, como por ejemplo, compuestos de amonio cuaternario; (g) agentes humectantes, como por ejemplo, alcohol cetflico o monoestearato de glicerol; (h) adsorbentes, como por ejemplo, caolfn o bentonita; y/o (i) lubricantes, como por ejemplo, talco, estearato de calcio, estearato de magnesio, polietilenglicoles solidos, laurilsulfato de sodio, o mezclas de los mismos. En el caso de capsulas y comprimidos, las formas de dosificacion tambien pueden comprender agentes tamponantes.
Puede prepararse un comprimido que comprende el principio activo, por ejemplo, mediante la compresion o el moldeo del principio activo, opcionalmente con uno o mas componentes adicionales. Los comprimidos sometidos a compresion pueden prepararse mediante compresion, en un dispositivo adecuado, del principio activo en forma de flujo libre tal como una preparacion granular o en polvo, mezclarse opcionalmente con uno o mas de un aglutinante, un lubricante, un excipiente, un agente tensioactivo y un agente dispersante. Pueden prepararse comprimidos moldeados mediante moldeo, en un dispositivo adecuado, de una mezcla del principio activo, un portador farmaceuticamente aceptable y al menos suficiente lfquido como para humedecer la mezcla.
Los excipientes farmaceuticamente aceptables usados en la fabricacion de comprimidos incluyen diluyentes inertes, agentes de granulacion y disgregantes, agente aglutinantes y agentes lubricantes. Los agentes dispersantes conocidos incluyen almidon de patata y glicolato sodico de almidon. Los agentes tensioactivos conocidos incluyen laurilsulfato de sodio. Los diluyentes conocidos incluyen carbonato de calcio, carbonato de sodio, lactosa, celulosa microcristalina, fosfato de calcio, hidrogenofosfato de sodio y fosfato de sodio. Los agentes de granulacion y disgregantes conocidos incluyen almidon de mafz y acido algfnico. Los agentes aglutinantes conocidos incluyen gelatina, goma arabiga, almidon de mafz pregelatinizado, polivinilpirrolidona e hidroxipropilmetilcelulosa. Los agentes lubricantes conocidos incluyen estearato de magnesio, acido estearico, sflice y talco.
Los comprimidos pueden estar no recubiertos o pueden recubrirse usando metodos conocidos para conseguir la disgregacion retardada en el tracto gastrointestinal de un ser humano, proporcionando de ese modo la liberacion y absorcion del principio activo. A modo de ejemplo, puede usarse un material tal como monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo para recubrir comprimidos. A modo de ejemplo adicional, pueden recubrirse comprimidos usando los metodos descritos en las patentes estadounidenses n.os 4.256.108; 4.160.452; y 4.265.874 para formar comprimidos de liberacion controlada de manera osmotica. Los comprimidos pueden comprender ademas un agente edulcorante, un agente aromatizante, un agente colorante, un conservante, o alguna combinacion de estos con el fin de proporcionar una preparacion farmaceuticamente elegante y agradable.
Pueden prepararse formas de dosificacion solidas tales como comprimidos, grageas, capsulas y granulos con recubrimientos o cubiertas, tales como recubrimientos entericos y otros bien conocidos en la tecnica. Tambien pueden contener agentes opacificantes y tambien pueden ser de una composicion tal que liberen el compuesto o compuestos activos de manera retardada. Ejemplos de composiciones de incrustacion que pueden usarse son sustancias polimericas y ceras. Los compuestos activos tambien pueden estar en forma microencapsulada, si resulta apropiado, con uno o mas de los excipientes mencionados anteriormente.
Tambien pueden usarse composiciones solidas de un tipo similar como cargas en capsulas de gelatina blanda o dura llenas usando excipientes tales como lactosa o azucar de la leche, asf como polietilenglicoles de alto peso molecular, y similares. Pueden prepararse capsulas duras que comprenden el principio activo usando una composicion fisiologicamente degradable, tal como gelatina. Tales capsulas duras comprenden el principio activo y pueden comprender ademas componentes adicionales incluyendo, por ejemplo, un diluyente solido inerte tal como carbonato de calcio, fosfato de calcio o caolfn. Pueden prepararse capsulas de gelatina blandas que comprenden el principio activo usando una composicion fisiologicamente degradable, tal como gelatina. Tales capsulas blandas comprenden el principio activo, que puede mezclarse con agua o un medio oleoso tal como aceite de cacahuete, parafina lfquida o aceite de oliva.
Pueden prepararse composiciones orales, usando tecnologfa conocida, que liberan especfficamente agentes administrados por via oral en el intestino delgado o grueso de un paciente humano. Por ejemplo, las formulaciones para la administracion en el sistema gastrointestinal, incluyendo el colon, incluyen sistemas con recubrimiento enterico, basados por ejemplo en copolfmeros de metacrilato tales como poli(acido metacrflico, metacrilato de metilo), que solo son solubles a pH 6 y superior, de modo que el polfmero solo comienza a disolverse cuando entra en el intestino delgado. El sitio en el que se disgregan tales formulaciones de polfmero depende de la tasa de transito intestinal y de la cantidad de polfmero presente. Por ejemplo, un recubrimiento de polfmero relativamente grueso que se usa para la administracion en la parte proximal del colon (Hardy et al., Aliment. Pharmacol. Therap. (1987) 1:273-280). Tambien pueden usarse polfmeros que pueden proporcionar administracion colonica especffica del sitio, en los que los polfmeros se basan en la flora bacteriana del intestino grueso para proporcionar la degradacion enzimatica del recubrimiento de polfmero y asf liberar el farmaco. Por ejemplo, pueden usarse azopolfmeros (patente estadounidense n.° 4.663.308), glicosidos (Friend et al., J. Med. Chem. (1984) 27:261-268) y una variedad de polisacaridos disponibles de manera natural y modificados (vease la solicitud PCT
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PCT/GB89/00581) en tales formulaciones.
Tambien puede usarse tecnologfa de liberacion pulsada tal como se describe en la patente estadounidense n.° 4.777.049 para administrar el agente activo en una ubicacion espedfica dentro del tracto intestinal. Tales sistemas permiten la administracion del farmaco en un momento predeterminado y pueden usarse para administrar el agente activo, opcionalmente junto con otros aditivos que pueden alterar el microentorno local para fomentar la estabilidad y la captacion del agente, directamente en el colon, sin basarse en condiciones externas distintas de la presencia de agua para proporcionar la liberacion in vivo.
Las formas de dosificacion lfquidas para administracion oral incluyen emulsiones, disoluciones, suspensiones, jarabes y elixires farmaceuticamente aceptables. Ademas de los compuestos activos, la forma de dosificacion lfquida puede contener diluyentes inertes usados comunmente en la tecnica, tales como agua u otros disolventes, solucion salina isotonica, agentes solubilizantes y emulsionantes, como por ejemplo, alcohol etflico, alcohol isopropflico, carbonato de etilo, acetato de etilo, alcohol bendlico, benzoato de bencilo, propilenglicol, 1,3-butilenglicol, dimetilformamida, aceites, en particular, aceite de almendras, aceite de mam, aceite de coco, aceite de semilla de algodon, aceite de cacahuete, aceite de germen de mafz, aceite de oliva, aceite de ricino, aceite de semilla de sesamo, MIGLYOL™, glicerol, aceites vegetales fraccionados, aceites minerales tales como parafina hquida, alcohol tetrahidrofurfunlico, polietilenglicoles, esteres de acidos grasos de sorbitano, o mezclas de estas sustancias, y similares.
Ademas de tales diluyentes inertes, los compuestos de la presente invencion tambien pueden incluir adyuvantes, tales como agentes humectantes, emulsionantes y agentes de suspension, demulcentes, conservantes, tampones, sales, agentes edulcorantes, aromatizantes, colorantes y perfumantes. Las suspensiones, ademas del compuesto activo, pueden contener agentes de suspension, como por ejemplo, alcoholes isoesteanlicos etoxilados, esteres de polioxietileno-sorbitol o sorbitano, celulosa microcristalina, grasas comestibles hidrogenadas, alginato de sodio, polivinilpirrolidona, goma tragacanto, goma arabiga, agar-agar, y derivados de celulosa tales como carboximetilcelulosa sodica, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, metahidroxido de aluminio, bentonita, o mezclas de estas sustancias, y similares. Pueden prepararse, envasarse y venderse formulaciones lfquidas de una composicion farmaceutica de la invencion que son adecuadas para administracion oral, o bien en forma lfquida o bien en forma de un producto seco destinado a su reconstitucion con agua u otro vehfculo adecuado antes de su uso.
Los agentes dispersantes o humectantes conocidos incluyen fosfatidos que se producen de manera natural tales como lecitina, productos de condensacion de un oxido de alquileno con un acido graso, con un alcohol alifatico de cadena larga, con un ester parcial derivado de un acido graso y un hexitol, o un ester parcial derivado de un acido graso y un anddrido de hexitol (por ejemplo estearato de polioxietileno, heptadecaetilenoxicetanol, monooleato de polioxietileno-sorbitol y monooleato de polioxoetileno-sorbitano, respectivamente). Los agentes emulsionantes conocidos incluyen lecitina y goma arabiga. Los conservantes conocidos incluyen para-hidroxibenzoatos de metilo, etilo o n-propilo, acido ascorbico y acido sorbico. Los agentes edulcorantes conocidos incluyen, por ejemplo, glicerol, propilenglicol, sorbitol, sacarosa y sacarina. Los agentes espesantes conocidos para suspensiones oleosas incluyen, por ejemplo, cera de abejas, parafina dura y alcohol cetflico.
Pueden prepararse disoluciones hquidas del principio activo en disolventes acuosos u oleosos sustancialmente de la misma manera que las suspensiones lfquidas, siendo la diferencia principal que el principio activo se disuelve, en lugar de suspenderse en el disolvente. Las disoluciones lfquidas de la composicion farmaceutica de la invencion puede comprender cada uno de los componentes descritos con respecto a las suspensiones lfquidas, entendiendose que los agentes de suspension no ayudaran necesariamente a la disolucion del principio activo en el disolvente. Los disolventes acuosos incluyen, por ejemplo, agua y solucion salina isotonica. Los disolventes oleosos incluyen, por ejemplo, aceite de almendras, esteres oleosos, alcohol etflico, aceites vegetales tales como aceite de mam, oliva, sesamo o coco, aceites vegetales fraccionados y aceites minerales tales como parafina lfquida.
Pueden prepararse composiciones para administracion rectal o vaginal mezclando un compuesto de la presente invencion y cualquier compuesto adicional con excipientes o portadores no irritantes adecuados tales como manteca de cacao, polietilenglicol o una cera para supositorios, que son solidos a la temperatura ambiente habitual, pero hquidos a la temperatura corporal, y por tanto, se funden en el recto o en la cavidad vaginal y liberan el principio activo. Una composicion de este tipo puede estar en forma de, por ejemplo, un supositorio, una preparacion de enema de retencion y una disolucion para irrigacion rectal o colonica. Las formulaciones de supositorio pueden comprender ademas diversos componentes adicionales incluyendo antioxidantes y conservantes. Pueden prepararse preparaciones o disoluciones de enema de retencion para irrigacion rectal o colonica combinando el principio activo con un portador lfquido farmaceuticamente aceptable. Tal como se conoce en la tecnica, las preparaciones de enema pueden administrarse usando, y pueden envasarse dentro de, un dispositivo de administracion adaptado a la anatoirna rectal de un ser humano. Las preparaciones de enema pueden comprender ademas diversos componentes adicionales incluyendo antioxidantes y conservantes.
Puede prepararse, envasarse o venderse una composicion farmaceutica de la invencion en una formulacion adecuada para la administracion vaginal. Una composicion de este tipo puede estar en forma de, por ejemplo, un
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supositorio, un material impregnado o recubierto que puede insertarse por via vaginal tal como un tampon, una preparacion de ducha o una disolucion para irrigacion vaginal.
Las formas de dosificacion para administracion topica de un compuesto segun la presente invencion incluyen pomadas, polvos, pulverizaciones e inhalantes. Los compuestos se mezclan en condiciones esteriles con un portador fisiologicamente aceptable, y cualquier conservante, tampon y/o propelente que pueda requerirse. Las formulaciones adecuadas para administracion topica incluyen preparaciones lfquidas o semilfquidas tales como linimentos, lociones, emulsiones de aceite en agua o de agua en aceite tales como cremas, pomadas o pastas, y disoluciones o suspensiones. Las formulaciones que pueden administrarse de manera topica pueden comprender, por ejemplo, de desde aproximadamente el 0,1% hasta aproximadamente el 10% (p/p) de principio activo, aunque la concentracion del principio activo puede ser tan alta como el lfmite de solubilidad del principio activo en el disolvente. Las formulaciones para administracion topica pueden comprender ademas uno o mas de los componentes adicionales descritos en el presente documento.
Tambien se contemplan que formulaciones oftalmicas, pomadas, polvos y disoluciones oculares estan dentro del alcance de esta invencion. Tales formulaciones pueden estar, por ejemplo, en forma de colirios incluyendo, por ejemplo, una disolucion o suspension al 0,1 -1,0% (p/p) del principio activo en un portador lfquido acuoso u oleoso. Tales colirios pueden comprender ademas agentes tamponantes, sales, o uno o mas de otros componentes adicionales descritos en el presente documento. En otras realizaciones, las formulaciones que pueden administrarse por via oftalmica comprenden el principio activo en forma microcristalina o en una preparacion liposomica.
Las composiciones farmaceuticas de la invencion formuladas para la administracion pulmonar pueden proporcionar el principio activo en forma de gotitas de una disolucion o suspension. Tales formulaciones pueden prepararse, envasarse o venderse como disoluciones o suspensiones acuosas o alcoholicas diluidas, opcionalmente esteriles, que comprenden el principio activo, y pueden administrarse convenientemente usando cualquier dispositivo de nebulizacion o atomizacion. Tales formulaciones pueden comprender ademas uno o mas componentes adicionales incluyendo un agente aromatizante tal como sacarina sodica, un aceite volatil, un agente tamponante, un agente tensioactivo o un conservante tal como hidroxibenzoato de metilo. Las gotitas proporcionadas por esta via de administracion tienen preferiblemente un diametro promedio en el intervalo de desde aproximadamente 0,1 hasta aproximadamente 200 nanometros.
Puede prepararse, envasarse o venderse una composicion farmaceutica de la invencion en una formulacion adecuada para administracion bucal. Tales formulaciones pueden estar, por ejemplo, en forma de comprimidos o pastillas para chupar preparados usando metodos convencionales, y pueden comprender, por ejemplo, del 0,1 al 20% (p/p) de principio activo, comprendiendo el resto una composicion que puede disolverse o degradarse por via oral y, opcionalmente, uno o mas de los componentes adicionales descritos en el presente documento. Alternativamente, las formulaciones adecuadas para administracion bucal pueden comprender un polvo o una disolucion o suspension aerosolizada o atomizada que comprende el principio activo. Tales formulaciones en polvo, aerosolizadas o atomizadas, cuando se dispersan, tienen preferiblemente un tamano de partfcula o gotita promedio en el intervalo de desde aproximadamente 0,1 hasta aproximadamente 200 nanometros, y pueden comprender ademas uno o mas de los componentes adicionales descritos en el presente documento.
Para la administracion parenteral en animales no humanos, los compuestos de la presente invencion pueden prepararse en forma de una pasta o un microgranulo y pueden administrarse como un implante, habitualmente bajo la piel de la cabeza o la oreja del animal. Pueden prepararse formulaciones en pasta mediante la dispersion de un compuesto o compuestos en un aceite farmaceuticamente aceptable tal como aceite de cacahuete, aceite de sesamo, aceite de mafz o similares. Pueden prepararse microgranulos que contienen una cantidad terapeuticamente eficaz de un compuesto o compuestos mezclando el compuesto con un diluyente tal como Carbowax, cera de carnauba, y similares y puede anadirse un lubricante, tal como estearato de magnesio o calcio para mejorar el proceso de microgranulacion. Por supuesto, se reconoce que pueden administrarse mas de un microgranulo a un animal para lograr el nivel de dosis deseado. Ademas, se ha encontrado que tales implantes tambien pueden administrarse periodicamente durante el periodo de tratamiento del animal con el fin de mantener el nivel de agente activo apropiado en el organismo del animal.
Los compuestos de la presente invencion y las sales farmaceuticamente aceptables de los mismos, pueden administrarse a un paciente a niveles de dosificacion en el intervalo de desde aproximadamente 0,01 hasta aproximadamente 1.000 mg al dfa. Para un ser humano adulto normal que tiene un peso corporal de aproximadamente 70 kg, normalmente es suficiente una dosificacion en el intervalo de desde aproximadamente 0,01 hasta aproximadamente 300 mg, siendo 1-10 mg una dosificacion preferida. Sin embargo, puede requerirse cierta variabilidad en el intervalo de dosificacion general dependiendo de la edad y el peso del sujeto que esta tratandose, de la via de administracion prevista, del compuesto particular que esta administrandose y similares. La determinacion de intervalos de dosificacion y dosificaciones optimas para un paciente particular esta completamente dentro de la capacidad de un experto habitual en la tecnica que tiene el beneficio de la presente divulgacion. Tambien se observa que los compuestos de la presente invencion pueden usarse en formulaciones de liberacion sostenida, liberacion controlada y liberacion retardada, formas que tambien conoce bien un experto habitual en la tecnica.
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No es crftico si los compuestos de la presente invencion se administran directamente a la celula, a un tejido que comprende la celula, a un lfquido corporal que esta en contacto con la celula, o a una ubicacion corporal desde la que el compuesto puede difundir o transportarse a la celula. Basta con que el compuesto se administre al paciente en una cantidad y por una via mediante las cuales llegue una cantidad del compuesto suficiente para movilizar lfpidos en la celula, directa o indirectamente a la celula. La cantidad minima varia con la identidad de los compuestos.
La dosificacion y el intervalo de dosificacion especificos que pueden usarse dependen de varios factores, incluyendo las necesidades del paciente, la gravedad del estado que esta tratandose y la actividad farmacologica del compuesto que esta administrandose. La determinacion de los intervalos de dosificacion y las dosificaciones optimas para un paciente particular esta completamente dentro de los conocimientos habituales de un experto en la tecnica en vista de esta divulgacion. Se entiende que el medico o veterinario experto habitual determinara y prescribira facilmente una cantidad eficaz del compuesto para movilizar reservas lipfdicas, inducir perdida de peso o inhibir el apetito en el paciente. Al proceder asi, el medico o veterinario puede prescribir, por ejemplo, una dosis relativamente baja en primer lugar, aumentando posteriormente la dosis hasta que se obtenga una respuesta apropiada. Sin embargo, se entiende ademas, que el nivel de dosis especifico para cualquier ser humano particular dependera de una variedad de factores incluyendo la actividad del compuesto especifico empleado, la edad, el peso corporal, la salud general, el sexo y la dieta del ser humano, el momento de administracion, la via de administracion, la tasa de excrecion, cualquier combinacion de farmacos y la gravedad de cualquier trastorno que este tratandose.
Se describen a continuacion diversas realizaciones a modo de ejemplo de composiciones y metodos segun esta invencion en los siguientes ejemplos. En estas realizaciones, los productos especificos identificados con numeros arabigos (por ejemplo, 1, 2, 3, etc.) se refieren a las estructuras especfficas asi identificadas en la siguiente descripcion, particularmente en la tabla 1 a continuacion y las reivindicaciones adjuntas.
III. Ejemplos
Ejemplo 1: Sintesis de 33 analogos de EET
En este ejemplo, los inventores notifican la sintesis de una biblioteca de analogos de EET. Las estructuras qufmicas de estos compuestos, designados como compuestos 1-33, se muestran en la tabla 1 a continuacion.
Procedimientos generales. A menos que se establezca lo contrario, los rendimientos se refieren a productos purificados y no estan optimizados. Se considero que los compuestos finales eran puros a >95% mediante HPLC usando un sistema Zorbax Eclipse C18 (250 x 4,6 mm; Agilent) conectado a un sistema de API/CL-EM Agilent 1200 con combinaciones de acetonitrilo/agua como disolvente. Todas las reacciones sensibles al oxfgeno y/o a la humedad se realizaron bajo una atmosfera de argon usando material de vidrio secado en horno y disolventes anhidros. Los disolventes anhidros se destilaron de manera reciente a partir de cetilbenzofenona de sodio, excepto para Ch^Ch, que se destilo a partir de CaH2. Los extractos se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se filtraron antes de la eliminacion de todos los compuestos volatiles a presion reducida. A menos que se indique lo contrario, se usaron materiales disponibles comercialmente sin purificacion. Se llevo a cabo cromatograffa ultrarrapida (FC) usando una columna de gel de sflice 60 (240-400 malla) de E Merck. Se llevo a cabo la cromatograffa en capa fina (CCF) usando el sistema adquirido de E. Merck (gel de sflice 60 PF254, 0,25 mm). Los espectros de la resonancia magnetica nuclear (RMN) se registraron en espectrofotometros Varian 300, 400 o 500 a frecuencias de funcionamiento de 300/400/500 MHz (1H) o 75/100/125 MHz (13C) en CDCh, a menos que se establezca lo contrario. Los patrones de desdoblamiento de resonancia magnetica nuclear (RMN) se describen como singlete (s), doblete (d), triplete (t), cuadruplete (q) y ancho (a); los valores de los desplazamientos qufmicos (8) se dan en ppm en relacion con el disolvente residual (cloroformo 8 = 7,27 para 1H-RMN o 8 = 77,23 para 13C-RMN de proton desacoplado), y las constantes de acoplamiento (J) se dan en hercios (Hz). Se determinaron los puntos de fusion usando un sistema OptiMelt (Stanford Research Systems) y no estan corregidos. La instalacion de espectrometrfa de masas de la Universidad de Notre Dame o el Prof. Kasem Nithipatikom (Medical College de Wisconsin) proporcionaron amablemente analisis espectrales de masas de alta resolucion.
Tabla 1: Los 33 analogos de EET y actividad de inhibicion de sEH y relajacion vascular medida
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terc-Butildifenil-[12-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)dodec-7-iniloxi)]silano. Se anadio N-butil-litio (12,0 ml de disolucion 2,5 M en hexanos, 30,0 mmol) gota a gota con agitacion a una disolucion a -78°C de 2-(hex-5-iniloxi)tetrahidro-2H- pirano (5,0 g, 27,43 mmol, G. F. Smith Chem. Co.) en THF/HMPA (4:1, 150 ml) bajo una atmosfera de argon. Tras 30 min, se calento la mezcla de reaccion hasta 0°C y se mantuvo a esta temperatura durante 2 h. Despues de volver a enfriar hasta -78°C, se anadio una disolucion de 1-terc-butildifenilsililoxi-6-bromohexano1 (11,50 g, 27,43 mmol) en THF (55 ml) y se aumento la temperatura hasta 23°C a lo largo de 3 h. Tras 12 h adicionales, se extinguio la mezcla de reaccion con una disolucion ac. saturada de NH4Cl (25 ml). Se extrajo la mezcla con EtOAc (2 x 100 ml) y se lavaron los extractos combinados con agua (2 x 150 ml), salmuera (50 ml), se secaron y se concentraron a presion reducida. Se purifico el residuo mediante cromatograffa en columna de SiO2 para dar el compuesto del tftulo (11,14 g, 78%), obtenido como un aceite incoloro, cuyos datos espectrales coincidfan con los valores de la bibliograffa. CCF: EtOAc al 15%/hexanos, Rf ~ 0,60; 1H-RMN (400 MHz) 8 7,64-7,68 (m, 4H), 7,34-7,42 (m, 6H), 4,57 (t, J = 4,3 Hz, 1H), 3,78-3,86 (m, 2H), 3,65 (t, J = 6,3 Hz, 2H), 3,32-3,54 (m, 2H), 2,10-2,22 (m, 4H), 1,24-1,84 (m, 18H), 1,04 (s, 9H); 13C-RMN (100 MHz) 8 130,61, 129,17, 124,54, 122,62, 93,82, 75,48, 74,89, 72,41, 72,10, 71,78, 62,11, 58,93, 57,32, 27,51, 25,79, 24,18, 23,99, 23,68, 21,96, 21,87, 21,0, 20,55, 20,40, 14,26, 13,77, 13,67.
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12-(terc-Butildifenilsililoxi)dodec-5-in-1-ol. Se agito una mezcla de terc-butildifenil-[12-(tetrahidro-2H-piran-2- iloxi)dodec-7-iniloxi)]silano (11,0 g, 21,14 mmol) y acido p-toluenosulfonico (165 mg) en MeOH (110 ml) a temperatura ambiente durante 10 h. Se extinguio la mezcla de reaccion con una disolucion ac. sat. de NaHCO3 (10 ml). Se evaporo el metanol, entonces se anadio mas agua (50 ml), y se extrajo la mezcla con EtOAc (3 x 75 ml). Se lavaron los extractos organicos combinados con agua (2x50 ml), salmuera (40 ml), se secaron y se concentraron a presion reducida. Se purifico el residuo mediante cromatograffa en SiO2 para dar el compuesto del tftulo (7 93 g, 86%), obtenido como un aceite incoloro, cuyos datos espectrales coincidfan con los valores de la bibliograffa. 1CCF: EtOAc/hexanos (3:7), Rf ~ 0,44; 1H-RMN (300 MHz) 8 7,64-7,68 (m, 4H), 7,34-7,42 (m, 6H), 3,62 (t, J= 6,3 Hz, 4H), 2,06-2,22 (m, 4H), 1,50-1,64 (m, 12H), 1,04 (s, 9H); 13C-RMN (100 MHz) 8 135,81, 134,36, 129,74, 127,82, 80,89, 80,01, 64,14, 62,71, 32,71, 32,10, 29,34, 28,86, 27,11, 25,59, 25,57, 19,46, 18,93, 18,77.
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12-(Terc-butildifenilsililoxi)dodec-5(Z)-en-1-ol. Se anadio NaBH4 (82 mg, 2,28 mmol) en porciones con agitacion vigorosa a una disolucion a temperatura ambiente de Ni(OAc)24H2O (567 mg, 2,28 mmol) en etanol absoluto (20 ml) bajo una atmosfera de hidrogeno (1 atm). Tras 15 min, se anadio etilendiamina recien destilada (0,30 ml, 4,56 mmol) a la suspension negra, seguido despues de 15 min adicionales por una disolucion de 12-(terc- butildifenilsililoxi)dodec-5-in-1-ol (4,0 g, 9,16 mmol) en EtOH absoluto (10 ml). Tras 1 h, se extinguio la mezcla de reaccion con Et2O (20 ml) y se hizo pasar a traves de un lecho pequeno de gel de sflice. Se enjuago el lecho con otra porcion de Et2O (5 ml). Se concentraron los filtrados etereos combinados a presion reducida para dar el compuesto del tftulo (3,85 g, 96%) como un aceite incoloro suficientemente puro como para usarse directamente en la siguiente etapa. CCF: EtOAc/hexanos (3:7), Rf ~ 0,46. 1H-RMN (300 MHz) 8 7,64-7,68 (m, 4H), 7,34-7,42 (m, 6H), 5,42-5,28 (m, 2H), 3,65-3,60 (t, J = 6,4 Hz, 4H), 2,08-1,96 (m, 4H), 1,50-1,60 (m, 4H), 1,40-1,24 (m, 10H), 1,04 (s, 9H); 13C-RMN (100 MHz) 8 135,81, 134,40, 130,61, 129,71, 129,60, 127,80, 64,21, 63,14, 32,78, 32,60, 29,98, 29,27, 27,42, 27,14, 27,10, 26,08, 25,92, 19,48. EMAR calc. para C2sH43O2Si [M+1]+ 439,3032, hallado 439,3027.
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1-terc-Butildifenilsililoxi-12-azidododec-7(Z)-eno. Se anadio azodicarboxilato de diisopropilo (DIAD; 1,46 ml, 7,35 mmol) gota a gota a una disolucion a -20°C de PPh3 (2,10 g, 8,0 mmol) en THF seco (45 ml) bajo una atmosfera de argon. Tras 10 min, se anadio gota a gota una disolucion de 12-(terc-butildifenilsililoxi)dodec-5(Z)-en-1-ol (3,20 g, 7,35 mmol) desde arriba en THF seco (10 ml). Tras 30 min, se calento la mezcla hasta 0°C y se anadio difenil- fosforil-azida (1,58 ml, 7,35 mmol) gota a gota. Tras agitar 4 h a t.a., se extinguio la mezcla de reaccion con agua (150 ml) y se extrajo con EtOAc (2 x 100 ml). Se lavaron los extractos organicos combinados con salmuera (100 ml), se secaron (Na2SO4) y se concentraron a presion reducida. Se purifico el residuo mediante cromatograffa en columna de SiO2 eluyendo con EtOAc al 4%/hexano para dar el compuesto del tftulo (2,45 g, 72%). CCF:
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EtOAc/hexanos (1:9), Rf ~ 0,55; 1H-RMN (400 MHz) 8 7,64-7,68 (m, 4H), 7,34-7,42 (m, 6H), 5,28-5,42 (m, 2H), 3,70 (t, J= 5,8 Hz, 2H), 3,27 (t, J= 6,3 Hz, 2H), 1,96-2,10 (m, 4H), 1,24-1,64 (m, 12H), 1,04 (s, 9H); 13C-RMN (100 MHz) 8 135,84, 134,41, 130,93, 129,75, 129,12, 127,83, 64,22, 51,62, 32,81, 29,93, 29,30, 28,68, 27,46, 27,14, 27,02, 26,90, 25,96, 19,49; IR (puro) 2930, 2783, 2331, 2097,1106 cm'1. EMAR calc. para C28H42NaOSi [M+1]+ 464,3097, hallado 464,3099.
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1-terc-Butildifenilsililoxi-12-aminododec-7(Z)-eno. Se anadio trifenilfosfina (1,18 g, 4,50 mmol) a una disolucion con agitacion de 1-terc-butildifenilsililoxi-12-azidododec-7(Z)-eno-azida (1,90 g, 4,10 mmol) en THF (12 ml) que contenfa 4 gotas de agua desionizada. Tras 12 h, se diluyo la mezcla de reaccion con CH2Ch (10 ml), se seco y se concentro a vacfo para dar el compuesto del tftulo (1,36 g, 76%) como un aceite incoloro, viscoso que se uso directamente en la siguiente reaccion sin purificacion adicional. CCF: MeOH/CH2Cl2 (1:4), Rf ~ 0,25; 1H-RMN (400 MHz) 8 7,62-7,68 (m, 4H), 7,32-7,40 (m, 6H), 5,30-5,40 (m, 2H), 3,63 (t, J= 5,2 Hz, 2H), 2,62 (t, J= 4,8 Hz, 2H), 1,92-2,06 (m, 4H), 1,40-1,58 (m, 4H), 1,20-1,40 (m, 8H), 1,03 (s, 9H); 13C-RMN (100 MHz) 8 135,79, 134,37, 130,42, 129,70, 127,78, 64,19, 42,28, 33,44, 32,77, 29,93, 29,28, 27,40, 27,21, 27,10, 25,92, 19,44. EMAR calc. para C2sH44NOSi [M + 1]+ 438,3192, hallado 438,3186.
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1-(12-(terc-Butildifenilsililoxi)dodec-5(Z)-enil)-3-n-pentilurea. Se anadio una disolucion de 1 -terc-butildifenilsililoxi-12- aminododec-7(Z)-eno (1,32 g, 3,0 mmol) en THF (5 ml) gota a gota a una disolucion con agitacion de isocianato de n-pentilo (0,386 ml, 3,0 mmol) en THF (10 ml). Tras 3 h agitando a temperatura ambiente, se eliminaron todos los compuestos volatiles a presion reducida y se purifico el residuo mediante cromatograffa en columna de SiO2 eluyendo con EtOAc al 20%/hexano para dar el compuesto del tftulo (1,26 g, 76%) como un aceite viscoso. CCF: EtOAc/hexanos (2:3), Rf ~ 0,40; 1H-RMN (300 MHz) 8 7,60-7,70 (m, 4H), 7,35-7,42 (m, 6H), 5,28-5,42 (m, 2H), 5,16 (s.a., -NH, 2H), 3,65 (t, J = 6,5 Hz, 2H), 3,08-3,20 (m, 4H), 1,96-2,08 (m, 4H), 1,22-1,60 (m, 18H), 1,02 (s, 9H), 0,89 (t, J = 7,3 Hz, 3H); 13C-RMN (100 MHz) 8 159,23, 135,80, 134,24, 130,52, 129,74, 129,49, 127,82, 64,22, 40,62, 40,54, 32,80, 30,33, 29,95, 29,37, 29,32, 27,46, 27,34, 27,18, 27,11, 25,97, 22,71, 19,46, 14,29. EMAR calc. para C34H55N2O2Si [M+1]+ 551,4033, hallado 551,4032.
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1-(12-Hidroxidodec-5(Z)-enil)-3-n-pentilurea. Se agito una mezcla de 1-(12-(terc-butildifenilsililoxi)dodec-5(Z)-enil)-3- n-pentilurea (1,12 g, 2,0 mmol) y fluoruro de tetra-n-butilamonio (2,20 ml de disolucion 1 M en THF, 2,2 mmol) en THF seco (10 ml) a temperatura ambiente bajo una atmosfera de argon durante 12 h, y entonces se evaporo hasta sequedad a vacfo. Se disolvio el residuo en EtOAc (50 ml) y se lavo con agua (30 ml), salmuera (30 ml), se seco y se evaporo a vacfo. La purificacion del residuo mediante cromatograffa en columna de SiO2 dio el compuesto del tftulo (0,56 g, 89%) como un solido incoloro, pf 63,7-63,8°C. CCF: EtOAc/hexanos (7:3), Rf~0,30; 1H-RMN (300 MHz) 8 5,25-5,42 (m, 2H), 4,40-4,56 (s.a., -NH, 2H), 3,60-3,68 (d, J = 6,5 Hz, 2H), 3,08-3,20 (m, 4H), 1,96-2,14 (m, 4H), 1,22-1,60 (m, 18H), 0,88 (t, J = 7,0 Hz, 3H); 13C-RMN (125 MHz) 8 159,26, 130,23, 129,62, 63,72, 40,33, 40,29, 32,92, 30,30, 30,26, 29,74, 29,35, 29,13, 27,26, 27,20, 27,13, 25,82, 22,69, 14,27. EMAR calc. para C18H37N2O2 [M+1]+ 313,2855, hallado 313,2857.
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1-(12-Bromododec-5(Z)-enil)-3-n-pentilurea. Se anadieron CBr4 (0,55 g, 1,66 mmol) y PPh3 (0,43 g, 1,66 mmol) a una disolucion a 0°C de 1-(12-hidroxidodec-5(Z)-enil)-3-n-pentilurea (0,43 g, 1,38 mmol) en C^Ch (20 ml). Tras 2 h a temperatura ambiente, se concentro la mezcla de reaccion a vacfo y se purifico el residuo mediante cromatograffa en columna de SiO2 para dar 1-(12-bromododec-5(Z)-enil)-3-n-pentilurea (0,43 g, 83%) como un aceite viscoso, pf
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46,7-46,8°C. CCF: EtOAc/hexanos (2:3), Rf ~ 0,60; 1H-RMN (300 MHz) 8 5,22-5,42 (m, 2H), 4,40 (s.a., 2H), 3,42 (t, J = 9,3 Hz, 2H), 3,10-3,20 (m, 4H), 1,98-2,10 (m, 4H), 1,80-1,90 (m, 2H), 1,25-1,55 (m, 16H), 0,92 (t, J= 7,2 Hz, 3H); 13C-RMN (100 MHz) 8 159,51, 130,14, 129,69, 40,48, 40,39, 34,20, 32,96, 30,34, 29,67, 29,36, 28,58, 28,25, 27,31, 27,27, 27,17, 22,68, 14,26. EMAR calc. para C1sH36BrN2O [M+1]+ 375,2011, hallado 375,2014.
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1-(12-Cianododec-5(Z)-enil)-3-n-pentilurea. Se agito una mezcla de cianuro de potasio (0,23 g, 3,54 mmol) y 1-(12- bromododec-5(Z)-enil)-3-n-pentilurea (0,90 g, 2,40 mmol) en DMSO (5 ml) a temperatura ambiente. Tras 12 h, se diluyo la mezcla de reaccion con agua (20 ml) y se extrajo con acetato de etilo (2 x 50 ml). Se lavaron los extractos organicos combinados con agua (2 x 25 ml), salmuera (25 ml), se secaron (Na2SO4) y se hicieron pasar a traves de una columna de gel de sflice para dar el compuesto del tftulo (0,62 g, 81%) como un solido incoloro, pf 56-57°C. CCF: EtOAc/hexanos (2:3), Rf ~ 0,45. 1H-RMN (300 MHz) 8 5,29-5,40 (m, 2H), 4,27 (s.a., -NH, 2H), 3,10-3,20 (m, 4H), 2,34 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 1,98-2,08 (m, 4H) 1,24-1,70 (m, 18H), 0,89 (t, J = 7,0 Hz, 3H); 13C-RMN (125 MHz) 8 159,41, 129,94, 129,86, 120,14, 40,45, 40,35, 30,30, 29,50, 29,33, 28,70, 28,51, 27,26, 27,16, 25,47, 22,66, 17,28,14,24; IR (puro) 2930, 2281, 2184, 2042, 1936, 1613, 1197, 1042 cm'1. EMAR calc. para C19H36N3O [M+1]+ 322,2858, hallado 322,2867.
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N'-Hidroxi-13-(3-n-pentilureido)tridec-8(Z)-enimidamida. A una suspension de 1-(12-cianododec-5(Z)-enil)-3-n- pentilurea (350 mg, 1,09 mmol) en MeOH/H2O (4:1; 12 ml) se le anadio ^NOH-HCl (228 mg, 3,28 mmol) y Na2CO3 (344 mg, 3,25 mmol). Se calento la mezcla de reaccion a 60°C durante 18 h, entonces se enfrio hasta temperatura ambiente y se eliminaron todos los compuestos volatiles a vacfo. Se diluyo el residuo con agua (30 ml) y se extrajo en acetato de etilo (2 x 25 ml). Se lavaron los extractos organicos combinados con agua (2 x 10 ml), salmuera (10 ml), se secaron y se purificaron mediante cromatograffa ultrarrapida en columna de gel de sflice usando MeOH al 5%/CH2Cl2 para dar el compuesto del tftulo (239 mg, 62%) como un solido incoloro, pf 94,6-94,7°C. CCF: MeOH/CH2Cl2 (1:4), Rf~0,20; 1H-RMN (CD3OD, 300 MHz) 8 5,34-5,42 (m, 2H), 3,33 (s, 2H), 3,08-3 16 (m, 3H), 2,022,10 (m, 6H), 1,52-1,60 (m, 2H), 1,44-1,52 (m, 5H), 1,30-1,44 (m, 10H), 0,92 (t, J= 7,2 Hz, 3H); 13C-RMN (CD3OD, 125 MHz) 8 160,14, 155,23, 129,95, 129,42, 39,86, 39,76, 30,70, 29,95, 29,89, 29,59, 29,06, 28,91, 27,18, 26,97, 26,95, 26,78, 22,39, 13,34. EMAR calc. para C19H39N4O2 [M+1]+ 355,3073, hallado 355,3078.
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Analogo 25. A una disolucion enfriada con hielo de N'-hidroxi-13-(3-n-pentilureido)tridec-8(Z)-enimidamida (100 mg, 0,28 mmol) y piridina (45 ml, 0,56 mmol) en THF (100 ml) se le anadio gota a gota una disolucion de cloruro de tionilo (20 pl, 0,28 mmol) en CH2Cl2 (2 ml). Tras 1 h, se concentro la mezcla de reaccion a vacfo, se diluyo con agua (25 ml) y se extrajo con CH2Ch (2 x 10 ml). Se lavaron los extractos organicos combinados con agua y se secaron. Se evaporo el disolvente a vacfo y se purifico el residuo mediante cromatograffa en columna de SiO2 usando MeOH/CH2Cl2 al 10% para dar 25 (80 mg, 72%) como un solido pegajoso. CCF: MeOH/CH2Ch (1:9), Rf ~ 0,60; 1H- RMN (CD3OD, 300 MHz) 8 5,33-5,36 (m, 2H), 3,04-3,13 (m, 4H), 2,57 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 2,00-2,10 (m, 4H), 1,621,74 (m, 2H), 1,25-1,54 (m, 16H), 0,92 (t, J= 7,2 Hz, 3H); 13C-RMN (CD3OD 125 MHz) 8 160,16, 153,94, 129,83, 129,47, 39,83, 39,71, 29,89, 29,82, 29,40, 29,01, 28,59, 28,52, 26,87, 26,85, 26,71, 26,30, 23,37, 22,33, 13,25. EMAR calc. para C20H38N4O2S [M+1]+ 398,2716, hallado 398,2720.
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Analogo 20. Se calento una mezcla de 1-(12-cianododec-5(Z)-enil)-3-n-pentilurea (500 mg, 1,55 mmol), azida de sodio (100 mg, 1,55 mmol) y bromuro de zinc (335 mg, 1,48 mmol) a 110°C en isopropanol/H2O (1:3, 8 ml) mientras se agitaba vigorosamente en un tubo sellado. Tras 18 h, se enfrio la mezcla hasta la temperatura ambiente y se ajusto el pH a 1 usando HCl ac. (3 N, 4 ml). Se anadio acetato de etilo (10 ml) y se continuo agitando hasta que no habfa solido presente. Se aislo la fase organica y se extrajo la fase acuosa con EtOAc (2 x 25 ml). Se lavaron las fracciones organicas combinadas con agua (3 x 25 ml), se secaron y se concentraron a vacfo. Se purifico el residuo mediante cromatograffa ultrarrapida en columna de gel de sflice para dar el analogo 20 (431 mg, 76%) como un solido incoloro, pf 205,6-205,8°C. CCF: MeOH al 10%/CH2Cl2, Rf ~ 0,30; 1H-RMN (CD3OD, 300 MHz) 8 5,40-5,30 (m, 2H), 3,06-3,11 (m, 4H), 2,93 (t, J = 8,0 Hz, 2H), 1,98-2,10 (m, 4H), 1,70-1,82 (m, 2H), 1,24-1,50 (m, 16H), 0,90 (t, J = 7,6 Hz, 3H); 13C-RMN (CD3OD, 75 MHz) 8 160,16, 156,81, 129,77, 129,47, 39,81, 39,68, 29,88, 29,80, 29,35, 28,99, 28,69, 28,55, 27,48, 26,85, 26,81, 26,68, 22,96, 22,31, 13,22. EMAR calc. para C19H37N6O [M+1]+ 365,3029, hallado 365,3030.
Sfntesis del analogo 29.
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Analogo 29. Se agito una mezcla de N'-hidroxi-13-(3-n-pentilureido)tridec-8(Z)-enimidamida (150 mg 0,42 mmol) y
1,1 '-tiocarbonildiimidazol (90%; 91 mg, 0,51 mmol) en tHf (5 ml) a temperatura ambiente. Tras 45 min, se diluyo la mezcla con agua (10 ml) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 5 ml). Se lavaron los extractos combinados con agua, se secaron y se concentraron a vacfo. Se disolvio el residuo en THF seco (5 ml) y se anadio dietileterato de trifluoruro de boro (103 pl, 0,84 mmol). Tras 1 h mas, se diluyo la mezcla de reaccion con agua (20 ml) y se extrajo con acetato de etilo (2 x 10 ml). Se lavaron los extractos combinados con agua, se secaron (Na2SO4), y se evaporo el disolvente a vacfo. Se purifico el residuo mediante cromatograffa en columna para dar 29 (104 mg, 63%) como un solido incoloro, pf 124,2-125,1°C. CCF: MeOH/CH2Cl2 (1:9), Rf~0,60; 1H-RMN (CD3OD, 300 MHz) 8 5,30-5,40 (m, 2H), 3,02-3,12 (m, 4H), 2,54 (t, J= 8,0 Hz, 2H), 1,98-2,10 (m, 4H), 1,62-1,74 (m, 2H), 1,24-1,52 (m, 16H), 0,90 (t, J = 7,0 Hz, 3H); 13C-RMN (CD3OD, 75 MHz) 8 181,12, 160,13, 159,12, 129,48, 128,84, 39,85, 39,73, 30,90, 29,91, 29,83, 29,41, 29,03, 28,69, 28,65, 26,89, 26,86, 26,73, 26,23, 22,35, 13,29; IR (puro) 2924, 1724, 1603, 1464, 1375 cm-1. EMAR calc. para C20H37N4O2S [M+1]+ 397,2637, hallado 397,2638.
Sfntesis del analogo 28.
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Analogo 28. Se agito una mezcla de N'-hidroxi-13-(3-n-pentilureido)tridec-8(Z)-enimidamida (150 mg 0,42 mmol) y
1,1 '-tiocarbonildiimidazol (90%; 91 mg, 0,51 mmol) en tHf (5 ml) a temperatura ambiente durante 45 min. Se diluyo la mezcla con agua (20 ml) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 10 ml). Se lavaron los extractos organicos combinados con agua, se secaron y se evaporo el disolvente a vacfo. Se disolvio el residuo en acetonitrilo (5 ml) al que entonces se le anadio DBU (147 mg, 0,96 mmol). Tras agitar a temperatura ambiente durante 1 h, se diluyo la mezcla con agua (10 ml), se ajusto a pH~4 con HCl 1 N, y se extrajo con acetato de etilo (3 x 10 ml). Se lavaron los extractos combinados con agua, se secaron sobre Na2SO4 y se evaporo el disolvente a vacfo. Se purifico el residuo mediante cromatograffa en columna de gel de sflice para dar 28 (101 mg, 61%) como un jarabe incoloro. CCF: MeOH/CH2Cl2 (1:9), Rf~ 0,55; 1H-RMN (CD3OD 300 MHz) 8 5,30-5,40 (m, 2H), 3,04-3,14 (m, 4H), 2,62 (t, J= 7,7 Hz, 2H), 2,00-2,10 (m, 4H), 1,62-1,74 (m, 2H), 1,22-1,54 (m, 16H), 0,91 (t, J = 6,7 Hz, 3H); 13C-RMN (CD3OD, 125 MHz)
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8 188,49, 161,91, 160,15, 129,82, 129,53, 39,88, 39,75, 29,92, 29,85, 29,37, 29,05, 28,63, 28,55, 26,90, 26,86, 26,75, 25,91, 23,67, 22,37, 13,31. EMAR calc. para C20H37N4O2S [M+1]+ 397,2637, hallado 397,2645.
Sfntesis del analogo 11.
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Analogo 11. Se sometio a reflujo durante la noche una disolucion de 1-(12-bromododec-5(Z)-enil)-3-n-pentilurea (300 mg, 0,79 mmol), sulfito de sodio (352 mg, 2,8 mmol) y ciclohexano (649 mg, 7,9 mmol) en etanol (5 ml). Se eliminaron los compuestos volatiles a presion reducida y se disolvio el residuo en agua desionizada. Se anadieron bioperlas SM-2 de BioRad (5 g; prelavadas con NH4oH 0,1 N y H2O), se agitaron suavemente durante 30 min, y entonces se recogieron en un embudo de vidrio sinterizado. Se lavaron las perlas con agua desionizada (2 x 10 ml) y despues EtOH (3 x 10 ml). La concentracion de los lavados etanolicos dio 11 (235 mg, 75%) como un solido incoloro, pf 133,6-133,8°C. 1H-RMN (CD3OD, 300 MHz) 8 5,30-5,40 (m, 2H), 3,02-3,14 (m, 4H), 2,78 (t, J = 8,0 Hz, 2H), 1,98-2,12 (m, 4H), 1,72-1,84 (m, 2H), 1,22-1,50 (m, 16H), 0,91 (t, J= 7,0 Hz, 3H); 13C-RMN (CD3OD 75 MHz) 8 160,12, 129,86, 129,49, 51,46, 39,01, 38,92, 29,92, 29,32, 29,02, 28,69, 28,42, 26,93, 26,62, 25,78, 24,78, 22,34, 12,02. EMAR calc. para C1sH35N2NaO4S [M]+ 398,2215, hallado 398,2220.
Sfntesis del analogo 10.
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(12-(3-n-Pentilureido)dodec-7(Z)-en-1-il)fosfonato de dimetilo. Se calento a reflujo una disolucion de 1-(12- bromododec-5(Z)-enil)-3-n-pentilurea (250 mg, 0,67 mmol) y fosfito de trimetilo (10 ml) en THF (10 ml). Tras 48 h, se eliminaron todos los compuestos volatiles a vacfo y se purifico el residuo mediante cromatograffa en columna de gel de sflice usando EtOAc al 60%/CH2Cl2 para dar (12-(3-n-pentilureido)dodec-7(Z)-en-1-il)fosfonato de dimetilo (160 mg, 59%) como un aceite viscoso. CCF: EtOAc, Rf~0,55; 1H-RMN (400 MHz) 8 5,30-5,40 (m, 2H), 5,10 (s.a., -NH, 1H), 5,02 (s.a., -NH, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,68 (s, 3H), 3,06-3,14 (m, 4H), 1,97-2,20 (m, 4H), 1,63-1,78 (m, 2H), 1,201,60 (m, 18H), 0,88 (t, J = 7,2 Hz, 3H); 13C-RMN (100 MHz) 8 159,11, 130,17, 129,93, 52,59, 52,56, 40,49, 30,49, 30,32, 30,28, 29,34, 29,33, 28,58, 27,21, 27,15, 27,11, 25,32, 23,93, 22,66, 22,35, 22,30, 14,24. EMAR calc. para C20H42N2O4P [M+1]+ 405,2882, hallado 405,2883.
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Analogo 10. Se anadio bromuro de trimetilsililo (37 pl) a una disolucion del diester de fosfanato anterior (100 mg, 0,25 mmol) en CHCh seco (4 ml). Tras 2 h a t.a., se concentro la disolucion y se suspendio el residuo en acetato de etilo (5 ml). Se recogio el precipitado resultante y se disolvio en agua desionizada. Se anadieron bioperlas SM-2 de BioRad (5 g; prelavadas con NH4OH 0,1 N y H2O), se agitaron suavemente durante 1 h y entonces se recogieron en un embudo de vidrio sinterizado. Se lavaron las perlas con agua desionizada (2 x 10 ml) y despues EtOH (3 x 10 ml). La concentracion de los lavados etanolicos dio fosfanato de disodio 10 (68 mg, 65%). 1H-RMN (CD3OD, 300 MHz) 8 5,30-5,42 (m, 2H), 3,18-3,24 (m, 4H), 1,97-2,20 (m, 4H), 1,50-1,78 (m, 8H), 1,20-1,60 (m, 12H), 0,92 (t, J =
7,2 Hz, 3H); 13C-RMN (CD3OD, 75 MHz) 8 159,48, 130,10, 129,25, 40,85, 40,76, 30,48, 30,25, 29,38, 29,13, 29,06, 28,81, 28,67, 27,62, 26,92, 26,70, 26,64, 25,80, 22,65, 22,58, 22,25, 13,02. EMAR calc. para C1sH35N2Na2O4P [M]+ 420,2130, hallado 420,2122.
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Analogo 16. Se anadio metoxido de sodio (180 pl, disolucion metanolica al 30%) a una disolucion de 1,2,4-triazol-3- tiol (101 mg, 0,99 mmol) en DMF seca (5 ml). Tras agitar durante 10 min, se anadio 1-(12-bromododec-5(Z)-enil)-3- n-pentilurea (250 mg, 0,66 mmol). Tras agitar durante la noche, se vertio la mezcla de reaccion en agua con hielo (100 ml) y se recogio el precipitado resultante mediante filtracion y se seco a vacfo. Se suspendio el solido bruto en diclorometano (100 ml), se agito durante 1 h y se filtro para dar 16 (222 mg, 85%) como un solido incoloro, pf 76,1- 76,2°C. CCF: EtOAc, Rf~0,30; 1H-RMN (CD3OD, 300 MHz) 8 8,26 (s.a., 1H), 5,29-5,40 (m, 2H), 3,04-3,14 (m, 6H), 1,98-2,10 (m, 4H), 1,62-1,72 (m, 2H), 1,22-1,50 (m, 16H), 0,90 (t, J = 7,2 Hz, 3H); 13C-RMN (CD3OD, 75 MHz) 8
160,15, 157,16, 146,90, 129,86, 129,44, 39,84, 39,73, 32,10, 29,91, 29,84, 29,65, 29,49, 29,02, 28,60, 28,30, 26,88, 26,73, 22,34, 13,28. EMAR calc. para C20H38N5OS [M+1]+ 396,2797, hallado 396,2805.
Sfntesis del analogo 17.
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Analogo 17. Se combinaron molibdato de amonio (160 mg, 0,13 mmol) y peroxido de hidrogeno (0,6 ml, disol. ac. al 30%) a 0°C y se agitaron durante 15 min. Se anadio una alfcuota de la disolucion amarilla brillante resultante (0,15 ml) gota a gota a una disolucion a 0°C, con agitacion de sulfuro 16 (77 mg, 0,2 mmol) en etanol (1,0 ml) dando como resultado un precipitado amarillo claro. A lo largo de los siguientes 15 min, se anadieron cada 5 min alfcuotas (0,15 ml) de la disolucion oxidante. Tras otros 10 min, se repartio la mezcla de reaccion entre H2O y diclorometano (10 ml). Se extrajo la fase acuosa con diclorometano (10 ml) y se lavaron los extractos organicos combinados con salmuera y se secaron (Na2SO4). Se purifico el residuo mediante cromatograffa ultrarrapida en SiO2 (EtOAc al 70%/hexanos) para proporcionar sulfoxido 17 (43 mg, 52%) como un solido incoloro, pf 88,2-88,4°C. CCF: MeOH/EtOAc (1:9), Rf~0,30; 1H-RMN (CD3OD 300 MHz) 8 8,38 (s.a., 1H), 5,26-5,36 (m, 2H), 5,18 (s.a., 2H), 3,04-3,26 (m, 6H), 1,922,08 (m, 2H), 1,70-1,84 (m, 2H), 1,20-1,50 (m, 18H), 0,86 (t, J= 7,2 Hz, 3H); 13C-RMN (CD3OD, 75 MHz) 8 163,82,
160,15, 146,98, 129,73, 129,54, 52,62, 39,81, 39,71, 29,90, 29,84, 29,25, 29,01, 28,57, 28,22, 26,88, 26,77, 26,73, 22,33, 21,92, 13,24. EMAR calc. para C20H38N5O2S [M+1]+ 412,2746, hallado 412,2741.
Sfntesis del analogo 18.
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Analogo 18. Se combinaron molibdato de amonio (960 mg, 0,77 mmol) y peroxido de hidrogeno (3,6 ml, disol. ac. al 30%) a 0°C y se agitaron durante 15 min. Se anadio una alfcuota de la disolucion amarilla brillante resultante (0,45 ml) gota a gota a una disolucion a 0°C de sulfuro 16 (154 mg, 0,39 mmol) en etanol (3,6 ml) dando como resultado un precipitado amarillo claro. A lo largo de los siguientes 90 min, se anadieron cada 15 min alfcuotas (0,5 ml) de la disolucion oxidante. Tras otros 15 min, se repartio la mezcla de reaccion entre H2O y diclorometano (10 ml). Se extrajo la fase acuosa con diclorometano (10 ml) y se lavaron las fases organicas combinadas con salmuera y se secaron (Na2SO4). Se purifico el residuo mediante cromatograffa ultrarrapida en SiO2 (EtOAc al 70%/hexanos) para proporcionar sulfona 18 (129 mg, 78%) como un solido blanco, pf 90,6-90,8°C. CCF: MeOH/EtOAc (1:9), Rf -0,50; 1H-RMN (CD3OD, 300 MHz) 8 8,44 (s.a., 1H), 5,25-5,30 (m, 2H), 5,02 (s.a., 1H), 4,90 (s.a., 1H), 3,35 (t, J = 7,9 Hz, 2H), 3,22-3,10 (m, 4H), 1,90-2,60 (m, 4H), 1,66-1,80 (m, 2H), 1,20-1,54 (m, 16H), 0,87 (t, J = 7,3 Hz, 3H); 13C-RMN (CD3OD, 75 MHz) 8 161,15, 160,13, 145,87, 129,73, 129,56, 54,26, 39,85, 39,74, 29,90, 29,83, 29,21, 29,02, 28,46, 27,80, 26,89, 26,79, 26,73, 22,34, 22,19, 13,30. EMAR calc. para C20H38N5O3S [M+1]+ 428,2695, hallado 428,2701.
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Sfntesis del analogo 23.
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Analogo 23. A una disolucion de N'-hidroxi-13-(3-n-pentilureido)tridec-8(Z)-enimidamida (50 mg, 0,14 mmol) en dioxano seco (3 ml) se le anadio 1,1-carbonildiimidazol (CDI; 27 mg, 0,16 mmol) seguido por 1,8-diazabicicloundec- 7-eno (DBU; 23 mg, 0,15 mmol). Tras agitar durante 15 min, se calento la mezcla de reaccion hasta 110°C durante 15 min, entonces se devolvio a temperatura ambiente. Se diluyo la mezcla de reaccion con agua (20 ml) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 5 ml). Se lavaron los extractos organicos combinados con agua, salmuera, se secaron (Na2SO4) y se concentraron a vacfo. Se purifico el residuo mediante cromatograffa en columna de SiO2 para dar 23 (36 mg, 67%) como un solido pegajoso. CCF: EtOAc/hexanos (4:1), Rf ~0,40; 1H-RMN (CD3OD, 300 MHz) 8 5,305,40 (m, 2H), 3,02-3,14 (m, 4H), 2,52 (t, J = 7,7 Hz, 2H), 2,00-2,10 (m, 4H), 1,60-1,70 (m, 2H), 1,24-1,50 (m, 16H), 0,90 (t, J= 6,7 Hz, 3H); 13C-RMN (CD3OD, 75 MHz) 8 158,30, 157,33, 126,98, 126,68, 37,02, 36,90, 26,97, 26,53, 26,19, 25,76, 25,72, 24,02, 23,89, 22,68, 21,84, 19,52, 10,43; IR (puro) 2929, 2854, 1809, 1776, 1738, 1620, 1580, 1467, 1257, 981 cm-1. EMAR (ESI-neg) calc. para C20H35N4O3 [M-1]- 379,2715, hallado 379,2731.
Sfntesis del analogo 27.
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N1-n-Butil-N2-(12-(terc-butildifenilsililoxi)dodec-5(Z)-enil)oxalamida. Se agito una mezcla de acido 2-(n-butilamino)-2- oxoacetico2 (0,40 g, 2,70 mmol), el 1-terc-butildifenilsililoxi-12-aminododec-7(Z)-eno anterior (1,20 g, 2,70 mmol), 1- hidroxibenzotriazol (HOBt; 0,44 g, 3,30 mmol) y [clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida] (0,63 g, 3,30 mmol) en DMF seca (5 ml) a temperatura ambiente durante la noche. Se extinguio la mezcla de reaccion con agua (30 ml) y se extrajo dentro de acetato de etilo (3 x 20 ml). Se lavaron los extractos organicos combinados con agua (2 x 10 ml), salmuera (10 ml), se secaron y se concentraron a vacfo. Se purifico el residuo mediante cromatograffa en columna de SiO2 para dar N1-n-butil-N2-(12-(terc-butildifenilsililoxi)dodec-5(Z)-enil)oxalamida (1,10 g, 73%). CCF: EtOAc/hexanos (2:3), Rf -0,55; 1H-RMN (400 MHz) 8 8,05 (s.a., -NH, 2H), 7,66-7,74 (m, 4H), 7,327,42 (m, 6H), 5,30-5,42 (m, 2H), 3,67 (t, J = 3,9 Hz, 2H), 3,31 (q, J = 5,2 Hz, 4H), 1,96-2,10 (m, 4H), 1,50-1,64 (m, 6H), 1,22-1,44 (m, 10H), 1,06 (s, 9H), 0,92 (t, J = 7,8 Hz, 3H); 13C-RMN (100 MHz) 8 160,33, 135,80, 134,35, 130,73, 129,74, 129,20, 127,83, 64,17, 39,89, 39,69, 32,79, 31,48, 29,94, 29,29, 29,07, 27,46, 27,23, 27,14, 27,0, 25,96, 20,29, 19,46, 13,96. EMAR calc. para C34H53N2O3Si [M+1]+ 565,3826, hallado 565,3824.
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N1-n-Butil-N2-(12-hidroxidodec-5(Z)-enil)oxalamida. Se desililo N1-n-butil-N2-(12-(terc-butildifenilsililoxi)dodec-5(Z)- enil)oxalamida (1,20 g, 2,12 mmol) tal como se describio anteriormente para dar N1-n-butil-N2-(12-hidroxidodec-5(Z)- enil)oxalamida (0,568 g, 82%) como un solido incoloro, pf 102,8-102,9°C. CCF: EtOAc/hexanos (7:3), Rf-0,55; 1H- RMN (400 MHz) 8 7,69 (s.a., 2H), 5,20-5,35 (m, 2H), 3,56 (t, J = 4,2 Hz, 2H), 3,26 (q, J = 5,6 Hz, 4H), 2,17 (s.a., -OH), 1,95-2,02 (m, 4H), 1,44-1,56 (m, 6H), 1,20-1,40 (m, 10H), 0,87 (t, J = 7,2 Hz, 3H); 13C-RMN (100 MHz) 8
160,15, 130,66, 129,21, 62,98, 39,80, 39,63, 32,93, 31,39, 29,77, 29,18, 28,95, 27,26, 27,0, 26,88, 25,80, 20,18, 13,85. EMAR calc. para C18H35N2O3 [M+1]+ 327,2648, hallado 327,2648.
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N1-(12-Bromododec-5(Z)-enil)-N2-n-butiloxalamida. Se bromo N1-n-butil-N2-(12-hidroxidodec-5(Z)-enil)oxalamida (330 mg, 1,0 mmol) tal como se describio anteriormente para dar N1-(12-bromododec-5(Z)-enil)-N2-n-butiloxalamida (330 mg, 84%) como un solido blanco, pf 46,0-46,3°C. CCF: EtOAc/hexanos (3:2), Rf -0,55; 1H-RMN (400 MHz) 8 7,79 (s.a., -NH, 1H), 7,77 (s.a., -NH, 1H), 5,20-5,32 (m, 2H), 3,32 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 3,22 (q, J = 7,2 Hz, 4H), 1,905 2,00 (m, 4H), 1,72-1,82 (m, 2H), 1,42-1,56 (m, 4H), 1,20-1,40 (m, 10H), 0,85 (t, J = 7,3 Hz, 3H); 13C-RMN (100 MHz)
8 160,17, 160,15, 130,40, 129,34, 39,77, 39,59, 34,12, 32,93, 31,40, 29,62, 29,0, 28,54, 27,25, 27,24, 27,0, 26,91, 20,18, 13,85. EMAR calc. para C^Hs4BrN2O2 [M+1]+ 389,1804, hallado 389,1809.
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N1-n-Butil-N2-(12-cianododec-5(Z)-enil)oxalamida. Se trato N1-(12-bromododec-5(Z)-enil)-N2-n-butiloxalamida
(250 mg, 0,642 mmol) tal como se describio anteriormente con cianuro de potasio para dar N1-n-butil-N2-(12- cianododec-5(Z)-enil)oxalamida (168 mg, 78%) como un solido incoloro, pf 83,0-83,3°C. CCF: EtOAc/hexanos (3:2), Rf - 035; 1H-RMN (400 MHz) 8 7,45 (s.a., -NH, 2H), 5,30-5,40 (m, 2H), 3,34 (q, J = 8,6 Hz, 4H), 2,32 (t, J = 7,6 Hz, 15 2H), 1,98-2,08 (m, 4H), 1,30-1,68 (m, 16H), 0,92 (t, J = 7,2 Hz, 3H); 13C-RMN (100 MHz) 8 160,03 (2C), 130,03,
129,08, 120,10, 39,88, 39,42, 31,22, 29,40, 28,82, 28,60, 28,42, 27,07, 27,06, 26,82, 25,54, 20,06, 17,01, 13,80. EMAR calc. para C19H34N3O2 [M+1] + 336,2651, hallado 336,2650.
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N1-(13-Amino-13-(hidroxiimino)tridec-5(Z)-enil)-N2-n-butiloxalamida. Siguiendo el procedimiento descrito
anteriormente, se convirtio una mezcla de N-n-butil-N2-(12-cianododec-5(Z)-enil)oxalamida, H2NOHHCl y Na2CO3 en N1-(13-amino-13-(hidroxiimino)tridec-5(Z)-enil)-N2-n-butiloxalamida (102 mg, 62%) como un solido incoloro, 116,3-116,4°C. CCF: MeOH/CH2Ch (1:4), Rf -0,20; 1H-RMN (CD3OD, 400 MHz) 8 5,28-5,40 (m, 2H), 3,24 (t, J= 6,4 25 Hz, 4H), 1,98-2,00 (m, 6H), 1,50-1,60 (m, 6H), 1,26-1,40 (m, 10H), 0,92 (t, J = 7,3 Hz, 3H); 13C-RMN (CD3OD, 100 MHz) 8 160,55 (2C), 156,31, 130,05, 129,18, 39,23, 39,09, 31,18, 30,63, 29,51, 28,83, 28,69, 27,10, 26,87, 26,59,19,88, 12,88. EMAR calc. para C19H37N4O3 [M+1]+ 369,2866, hallado 369,2864.
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Analogo 27. El tratamiento de N1-(13-amino-13-(hidroxiimino)tridec-5(Z)-enil)-N2-n-butiloxalamida (100 mg, 0,27 mmol) con 1,1 '-tiocarbonildiimidazol dio 27 (71 mg, 63%) como un solido blanco, pf 110,6-110,8°C. CCF: MeOH/CH2Cl2 (1:9), Rf -0,55; 1H-RMN (400 MHz) 8 8,90 (s.a., NH, 1H), 7,52 (s.a., NH, 2H), 5,28-5,40 (m, 2H), 3,203,40 (m, 4H), 2,59 (t, J = 7,5 Hz, 2H), 1,98-2,10 (m, 4H), 1,21-1,70 (m, 16H), 0,92 (t, J = 7,3 Hz, 3H); 13C-RMN (100 35 MHz) 8 160,12, 160,08, 153,31, 130,62, 129,46, 39,93, 39,85, 31,35, 29,33, 28,94, 28,89, 28,68, 27,02, 26,84, 26,69, 23,96, 20,23, 13,90. EMAR calc. para C19H35N4O4S [M+1]+ 415,2379, hallado 415,2372.
Sfntesis del analogo 21.
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Analogo 21. Siguiendo el procedimiento usado para preparar 22, se calento una mezcla de N1-n-butil-N2-(12- cianododec-5(Z)-enil)oxalamida (30 mg, 0,10 mmol), azida de sodio (11 mg, 0,20 mmol) y bromuro de zinc (40 mg, 0,20 mmol) en isopropanol/metanol/hhO (1:1:3, 4 ml) para dar tetrazol 21 (25 mg, 74%) como un solido incoloro, pf 5 113-114°C. CCF: MeOH al 10%/CH2Cl2, Rf~0,26; 1H-RMN (CD3OD, 400 MHz) 8 5,40-5,35 (m, 2H), 3,26 (t, J= 7,0
Hz, 4H), 2,44 (t, J= 7,0 Hz, 2H), 2,05-2,15 (m, 4H), 1,65-1,60 (m, 6H), 1,40-1,30 (m, 10H), 0,94 (t, J= 7,3 Hz, 3H); 13C-RMN (CD3OD, 100 MHz) 8 160,12, 160,05, 156,80, 130,35, 129,50, 39,20, 39,08, 31,15, 29,33, 28,66, 28,65,
28,53, 27,38, 26,83, 26,79, 26,55, 22,86, 19,85, 12,84. EMAR calc. para C19H35N6O2 [M+1]+ 379,2822, hallado 379,2814.
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Sfntesis del analogo 26.
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15 1-(terc-Butildifenilsililoxi-12-yodododec-7(Z)-eno. Se anadieron trifenilfosfina (504 mg, 1,14 mmol) e imidazol (156 mg, 2,30 mmol) a una disolucion a 0°C del 12-(terc-butildifenilsililoxi)dodec-5(Z)-en-1-ol anterior (500 mg, 1,14 mmol) en THF seco (25 ml) bajo una atmosfera de argon. Tras 10 min, se anadio yodo solido (252 mg, 1,2 equiv.) en porciones. Tras agitar a temperatura ambiente durante 3 h, se extinguio la mezcla de reaccion con disolucion ac. sat. de bisulfito de sodio (10 ml). Tras una 1 h adicional, se lavo la disolucion con agua (2 x 30 ml) y se concentro a 20 presion reducida. Se purifico el residuo mediante cromatograffa ultrarrapida en columna de SiO2 usando EtOAc al 10%/hexanos como eluyente para dar el compuesto del tftulo (474 mg, 76%) como un aceite incoloro. CCF: EtOAc/hexanos al 20%, Rf -0,65; 1H-RMN (300 MHz) 8 7,65-7,70 (m, 4H), 7,35-7,45 (m, 6H), 5,30-5,40 (m, 2H), 3,64 (t, J= 6,4 Hz, 2H), 3,18 (t, J = 5,5 Hz, 2H), 1,95-2,10 (m, 4H), 1,85-1,90 (m, 2H), 1,22-1,50 (m, 10H), 1,20 (s, 9H); 13C-RMN (75 MHz) 8 135,87, 130,42, 130,22, 130,20, 129,95, 127,89, 64,15, 38,35, 36,20, 32,50, 29,90, 28,62, 25 28,32, 27,25, 27,20, 27,18, 26,22, 19,12. EMAR calc. para C2sH42lOSi [M+1]+ 549,2050, hallado 549,2044.
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1-(terc-Butildifenilsililoxi-12-N-isopropilamino-dodec-7(Z)-eno. Se anadieron secuencialmente isopropilamina (464 pl, 30 5,45 mmol) y K2CO3 (373 mg, 2,73 mmol) a una disolucion a temperatura ambiente de 1 -(terc-butildifenilsililoxi-12-
yodododec-7(Z)-eno (500 mg, 0,91 mmol) en tetrahidrofurano seco (8 ml). Se calento la mezcla en un tubo sellado a 90°C durante 12 h, entonces se enfrio hasta t.a., se diluyo con agua (5 ml), se filtro y se extrajo el filtrado con acetato de etilo (3 x 10 ml). Se secaron los extractos organicos combinados, se concentraron a presion reducida y se purifico el residuo mediante cromatograffa en columna de SiO2 usando un gradiente de MeOH a desde el 2% hasta el 35 5%/CH2Cl2 como eluyente para dar la amina del tftulo (335 mg, 77%) como un aceite incoloro. CCF: MeOH al
5%/CH2Cl2, Rf -0,3; 1H-RMN (300 MHz) 8 7,62-7,70 (m, 4H), 7,34-7,44 (m, 6H), 5,30-5,40 (m, 2H), 3,64 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 2,72-2,84 (m, 1H), 2,58 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 1,94-2,08 (m, 4H), 1,20-1,60 (m, 12H), 1,05 (d, J = 7,2 Hz, 6H), 1,04 (s, 9H); 13C-RMN (75 MHz) 8 135,81, 134,40, 132,0, 129,72, 127,81, 64,21, 48,96, 47,75, 32,80, 30,33, 29,97, 29,31, 27,85, 27,44, 27,33, 27,11, 25,95, 23,27, 19,46. EMAR calc. para C31H50NOSi [M+1]+ 480,3662, hallado 40 480,3666.
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N-(12-(terc-butildifenilsililoxi)dodec-5(Z)-enil)-N-isopropil-n-heptanamida. Se anadio [clorhidrato de 1-(3- 45 dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida] solido (EDCI; 131 mg, 0,69 mmol) en porciones a una disolucion a temperatura ambiente de 1-(terc-butildifenilsililoxi-12-N-isopropilamino-dodec-7(Z)-eno (300 mg, 0,63 mmol), DMAP (84 mg, 0,69 mmol), N-hidroxibenzotriazol (HOBt; 93 mg, 0,69 mmol) y acido n-heptanoico (90 mg, 0,68 mmol) en DMF seca (5 ml). Tras 12 h, se diluyo la mezcla de reaccion con agua (10 ml) y se extrajo con eter (3 x 5 ml). Se lavaron los extractos etereos combinados con salmuera, se secaron y se evaporaron a vacfo. Se purifico el residuo 50 mediante cromatograffa en columna de SiO2 para dar el compuesto del tftulo (281 mg, 76%) como un aceite incoloro.
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CCF: EtOAc/hexanos (1:4), Rf ~ 0,65; 1H-RMN (300 MHz, mezcla 1:1 de rotameros) 8 7,62-7,70 (m, 4H), 7,34-7,44 (m, 6H), 5,30-5,40 (m, 2H), 4,60-4,70 y 4,00-4,05 (m, 1H para dos rotameros), 3,05 (t, J = 5,2 Hz, 2H), 3,02-3,19 (m, 2H), 2,20-2,40 (m, 2H), 1,95-2,10 (m, 4H), 1,20-1,60 (m, 20 H), 1,18 y 1,08 (d, J = 7,0 Hz, 6H para dos rotameros), 1,02 (s, 9H), 0,88 (t, J = 7,2 Hz, 3H); 13C-RMN (75 MHz) 8 177,24, 173,35, 172,25, 136,16, 135,80, 135,14, 134,37, 134,34, 130,97, 130,31, 129,74, 129,73, 129,54, 129,04, 127,82, 127,75, 64,21, 64,18, 48,42, 45,68, 43,62, 41,19, 34,46, 34,02, 32,81, 32,79, 31,95, 31,94, 31,75, 31,28, 30,0, 29,92, 29,55, 29,46, 29,31, 29,09, 27,87, 27,52, 27,49, 27,45, 27,21, 27,13, 26,94, 26,88, 25,97, 25,95, 25,79, 25,15, 22,81, 22,75, 21,63, 20,77, 19,46, 19,33, 14,34, 14,30. EMAR calc. para C3sH62NO2Si [M+1]+ 592,4550, hallado 592,4552.
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N-(12-Hidroxidodec-5(Z)-enil)-N-isopropil-n-heptanamida. Siguiendo el procedimiento de desililacion anterior, se convirtio N-(12-(terc-butildifenilsililoxi)dodec-5(Z)-enil)-N-isopropil-n-heptanamida (275 mg, 0,464 mmol) en el alcohol del tftulo (155 mg, 94%) como un jarabe. CcF: EtoAc al 40%/hexanos, Rf ~0,45; 1H-RMN (300 MHz, mezcla 45/55 de rotameros) 8 5,30-5,46 (m, 2H), 4,62-4,72 y 4,00-4,08 (m, 1H para dos rotameros), 3,63 (t, J = 5,4 Hz, 2H), 3,063,14 (m, 2H), 2,22-2,36 (m, 2H), 1,98-2,10 (m, 4H), 1,24-1,70 (m, 20 H), 1,17 y 1,10 (d, J = 6,8 Hz, 6H para dos rotameros), 0,88 (t, J = 7,2 Hz, 3H); 13C-RMN (75 MHz) 8 173,23, 172,67, 130,83, 130,12, 129,71, 128,96, 62,69, 62,64, 48,34, 45,56, 43,52, 41,07, 34,0, 33,91, 32,91, 32,88, 31,84, 31,81, 31,18, 29,82, 29,74, 29,46, 29,33, 29,11, 27,78, 27,37, 27,35, 27,16, 27,13, 26,84, 25,89, 25,81, 25,66, 22,69, 21,51, 20,65, 14,21. EMAR calc. para C22H44NO2 [M+1]+ 354,3372, hallado 354,3380.
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N-(12-Bromododec-5(Z)-enil)-N-isopropil-n-hexanamida. Siguiendo el procedimiento anterior, se convirtio N-(12- hidroxidodec-5(Z)-enil)-N-isopropil-n-heptanamida (150 mg, 0,43 mmol) tal como se describio anteriormente en el correspondiente bromuro (144 mg, 82%) como un jarabe. CCF: EtOAc al 30%/hexanos, Rf ~ 0,65; 1H-RMN (300 MHz, razon 45/55 de rotameros) 8 5,30-5,42 (m, 2H), 4,60-4,70 y 4,00-4,10 (m, 1H para dos rotameros), 3,42 (t, J = 5,3 Hz, 2H), 3,02-3,20 (m, 2H), 2,20-2,38 (m, 2H), 1,80-2,10 (m, 4H), 1,20-1,70 (m, 20H), 1,16 y 1,12 (d, J = 7,2 Hz, 6H para dos rotameros), 0,87 (t, J = 7,2 Hz, 3H); 13C-RMN (75 MHz) 8 173,20, 172,64, 130,61, 130,46, 129,96, 129,94, 129,24, 48,34, 45,56, 43,54, 41,09, 34,20, 34,16, 34,05, 33,97, 32,98, 32,93, 32,60, 31,90, 31,88, 31,26, 29,78, 29,68, 29,62, 29,51, 29,40, 28,94, 28,55, 28,25, 28,20, 27,81, 27,69, 27,45, 27,30, 27,25, 27,18, 26,92, 25,87, 25,20, 22,75, 21,59, 20,72, 14,72. EMAR calc. para C22H4aBrNO [M+1]+ 416,2528, hallado 416,2523.
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N-(12-Cianododec-5(Z)-enil)-N-isopropil-n-hexanamida. Siguiendo el procedimiento de desplazamiento de cianuro anterior, N-(12-bromododec-5(Z)-enil)-N-isopropil-n-hexanamida (500 mg, 1,20 mmol) dio el nitrilo del tftulo (339 mg, 78%) como un jarabe. CCF: EtOAc/hexanos (3:7), Rf~ 0,40; 1H-RMN (500 MHz, razon 45/55 de rotameros) 8 5,205,34 (m, 2H), 4,52-4,62 y 3,90-4,02 (m, 1H para dos rotameros), 3,00-3,10 (m, 2H), 2,16-2,30 (m, 4H), 1,90-2,05 (m, 4H), 1,60-1,70 (m, 8H), 1,22-1,50 (m, 12H), 1,18 y 1,11, (d, J = 6,8 Hz, 6H para dos rotameros), 0,88 (t, J= 7,2 Hz, 3H); 13C-RMN (75 MHz) 8 173,22, 172,66, 130,42, 130,04, 129,78, 129,35, 120,04, 119,99, 48,34, 45,58, 43,54, 41,07, 34,02, 33,95, 31,89, 31,86, 31,22, 29,53, 29,49, 29,37, 28,73, 28,70, 28,57, 28,53, 27,78, 27,39, 27,26, 27,18, 27,17, 26,91, 25,85, 25,70, 25,52, 25,49, 22,73, 21,56, 20,70, 17,26, 14,27. EMAR calc. para C23H43N2O [M+1]+ 363,3375, hallado 363,3375.
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N-(13-Amino-13-(hidroxiimino)tridec-5(Z)-enil)-N-isopropil-n-heptanamida. Siguiendo el procedimiento anterior, se transformo una mezcla de N-(12-cianododec-5(Z)-enil)-N-isopropil-n-hexanamida, ^NOH-HCl y Na2CO3 en el compuesto del tftulo (64%). CCF: MeOH/CH2Cl2 (3:7), Rf -0,30; 1H-RMN (500 MHz, relacion de rotameros 1:1) 8 5,24-5,40 (m, 2H), 4,62-4,68 (m, 0,5H), 4,50-4,60 (-NH, 2H), 3,96-4,40 (m, 0,5H), 3,02-3,14 (m, 2H), 2,18-2,28 (m, 2H), 1,90-2,16 (m, 6H), 1,46-1,64 (m, 8H), 1,20-1,36 (m, 12 H), 1,15 y 1,08 (d, J= 7,3 Hz, 6H para dos rotameros), 0,85 (t, J = 7,2 Hz, 3H); 13C-RMN (75 MHz) 8 173,22, 172,58, 154,26, 154,21, 130,82, 130,13, 129,79, 129,08, 48,32, 45,50, 43,52, 41,09, 36,03, 34,05, 33,97, 31,89, 31,86, 31,459, 31,25, 29,72, 29,67, 29,53, 29,39, 29,21, 29,19,
29,11, 29,03, 27,83, 27,41, 27,24, 27,17, 26,90, 26,84, 25,87, 25,70, 22,74, 21,58, 20,73, 14,26. EMAR calc. para C23H46N3O2 [M+1]+ 396,3590, hallado 396,3698.
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Analogo 26. Se trato N-(13-amino-13-(hidroxiimino)tridec-5(Z)-enil)-N-isopropil-n-heptanamida (150 mg, 0,38 mmol) con cloruro de tionilo a 0°C tal como se describio anteriormente para dar 26 (133 mg, 68%) como un jarabe. CCF: EtOAc/hexanos (1:1), Rf - 0,30; 1H-RMN (400 MHz, razon 35/65 de rotameros) 8 5,22-5,40 (m, 2H), 4,48-4,70 y 4,00-4,12 (m, 1H para dos rotameros), 3,04-3,20 (m, 2H), 2,50 y 2,64 (t, J = 6,9 Hz, 2H para dos rotameros), 2,22,2,38 (t, J = 8,0 Hz, 2H para dos rotameros), 1,90-2,10 (m, 4H), 1,50-1,78 (m, 8H), 1,20-1,40 (m, 12H), 1,22 y 1,12 (d, J = 6,7 Hz 6H para dos rotameros), 0,88 (t, J = 7,2 Hz, 3H); 13C-RMN (100 MHz) 8 173,82, 173,40, 153,39, 153,26, 131,03, 130,02, 129,97, 129,10, 48,85, 46,04, 43,82, 41,50, 34,13, 34,02, 31,85, 31,80, 31,23, 29,58, 29,32,
29,11, 29,09, 29,02, 28,80, 28,17, 27,96, 27,32, 27,24, 27,19, 26,03, 26,75, 26,64, 26,10, 24,02, 29,96, 22,75, 21,56,
21,53, 20,74, 20,72, 14,27, 14,25. EMAR calc. para C24H44N3O3S [M+1]+ 442,3103, hallado 442,3106.
Sfntesis del analogo 19.
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Analogo 19. Se trato N-(12-cianododec-5(Z)-onil)-N-isopropil-n-hexanamida (350 mg, 0,97 mmol) con azida de sodio tal como se describio anteriormente para dar tetrazol 19 (250 mg, 64%) como un solido pegajoso. CCF: EtOAc, Rf - 0,40; 1H-RMN (300 MHz, razon 35/65 de rotameros) 8 5,22-5,40 (m, 2H), 4,58-4,68 y 4,02-4,18 (m, 1H para dos rotameros), 3,10-3,24 (m, 2H), 2,98 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 2,44 y 2,30 (t, J = 7,3 Hz, 2H para dos rotameros), 1,94-2,10 (m, 4H), 1,72-1,84 (m, 2H), 1,50-1,70 (m, 4H), 1,18-1,40 (m, 14H), 1,21 y 1,10 (d, J = 7,2 Hz, 6H para dos rotameros), 0,82-0,87 (m, 3H); 13C-RMN (75 MHz) 8 174,06, 173,80, 130,85, 130,04, 129,79, 129,08, 48,94, 46,32, 43,97, 41,55, 34,11, 34,05, 31,79, 31,72, 31,12, 29,61, 29,61, 29,51, 29,25, 29,05, 28,85, 28,22, 27,98, 27,89, 27,32, 27,19, 26,92, 25,97, 23,70, 22,67, 21,51, 20,67, 14,02. EMAR calc. para C23H44N5O [M+1]+ 406,3546, hallado 406,3547.
Sfntesis del analogo 22
Br. ^ ^ ^ .OTBDPS
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1-terc-Butildifenilsililoxi-13-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)tridec-8-ino. Siguiendo el procedimiento aplicado en la sfntesis del analogo 25, se acoplo 2-(hex-5-iniloxi)tetrahidro-2H-pirano1 (5,0 g, 27,40 mmol) con 1 -terc-butildifenilsililoxi-7- bromoheptano (11,90 g, 27,40 mmol) para dar 1-terc-butildifenilsililoxi-13-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)tridec-8-ino3 (10,50 g, 72%) como un jarabe incoloro cuyos datos espectrales coincidfan con los valores de la bibliograffa.3 TLC: EtOAc/hexanos (1:4), Rf ~ 0,60; 1H-RMN (400 MHz) 8 7,64-7,68 (m, 4H), 7,34-7,42 (m, 6H), 4,57 (t, J = 4,3 Hz, 1H), 3,78-3,86 (m, 2H), 3,65 (t, J = 6,3 Hz, 2H), 3,32-3,54 (m, 2H), 2,10-2,22 (m, 4H), 1,24-1,84 (m, 20H), 1,04 (s, 9H); 13C-RMN (100 MHz) 8 135,80, 134,38, 129,72, 127,81, 99,0, 80,72, 80,10, 67,30, 64,17, 62,49, 32,77, 30,99, 29,34, 29,18, 29,13, 29,0, 27,11, 26,19, 25,91, 25,74, 19,87, 19,45, 19,0, 18,86.
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13-(terc-Butildifenilsililoxi)tridec-5-in-1-ol. Siguiendo el procedimiento aplicado en la sfntesis del analogo 25, se desprotegio 1-terc-butildifenilsililoxi-13-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)tridec-8-ino (10,0 g, 18,70 mmol) con PPTS para dar 13-(terc-butildifenilsililoxi)tridec-5-in-1-ol (7,70 g, 91%) como un jarabe incoloro. CCF: EtOAc/hexanos (3:7), Rf ~ 0,43; 1H-RMN (300 MHz) 8 7,64-7,68 (m, 4H), 7,34-7,42 (m, 6H), 3,62 (t, J = 5,6 Hz, 4H), 2,06-2,22 (m, 4H), 1,501,64 (m, 14H), 1,04 (s, 9H); 13C-RMN (100 MHz) 8 135,82, 134,37, 129,76, 127,85, 80,93, 80,04, 64,21, 62,63, 32,77, 32,09, 29,33, 29,13, 29,10, 27,14, 25,92, 25,63, 19,47, 19,0, 18,81. EMAR calc. para C29H4aO2Si [M+1]+ 451,3032, hallado 451,3032.
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(Z)-13-(terc-butildifenilsililoxi)tridec-5-en-1-ol. Siguiendo el procedimiento aplicado en la sfntesis del analogo 25, se sometio 13-(terc-butildifenilsililoxi)tridec-5-in-1-ol (7,50 g, 16,60 mmol) a semihidrogenacion para dar 13-(terc- butildifenilsililoxi)tridec-5(Z)-en-1-ol (6,90 g, 92%) como un jarabe cuyos valores espectrales coincidfan con los datos de la bibliograffa.2 TLC: EtOAc/hexanos (3:7), Rf ~ 0,45; 1H-RMN (400 MHz) 8 7,64-7,68 (m, 4H), 7,42-7,34 (m, 6H),
5,28-5,42 (m, 2H), 3,68-3,67 (t, J = 6,4 Hz, 4H), 1,98-2,12 (m, 4H), 1,50-1,60 (m, 4H), 1,40-1,24 (m, 10H), 1,04 (s, 9H); 13C-RMN (100 MHz) 8 135,83, 134,40, 130,61, 129,74, 129,60, 127,83, 64,21, 63,08, 32,83, 32,60, 29,94,
29,54, 27,50, 27,18, 27,14, 26,12, 26,01, 19,48.
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1-terc-Butildifenilsililoxi-13-azidotridec-8(Z)-eno. Siguiendo el procedimiento aplicado en la sfntesis del analogo 25, se convirtio 13-(terc-butildifenilsililoxi)tridec-5(Z)-en-1-ol (7,0 g, 15,48 mmol) en 1 -terc-butildifenilsililoxi-13- azidotridec-8(Z)-eno (5,30 g, 72%) obtenido como un jarabe. CCF: EtOAc/hexanos (1:9), Rf ~ 0,55; 1H-RMN (400 MHz) 8 7,68-7,64 (m, 4H), 7,42-7,34 (m, 6H), 5,28-5,42 (m, 2H), 3,64 (t, J= 6,4 Hz, 2H), 3,26 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 1,962,10 (m, 4H), 1,64-1,24 (m, 14H), 1,04 (s, 9H); 13C-RMN (100 MHz) 8 135,86, 134,44, 131,0, 129,77, 129,12, 127,85, 64,27, 51,63, 32,87, 29,95, 29,56, 28,70, 27,54, 27,17, 27,05, 26,93, 26,05, 19,51. IR (puro) 2930, 2783, 2361, 2331, 2094, 1109 cm'1. EMAR calc. para C29H44NaOSi [M+1]+ 478,3254, hallado 478,3250.
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1-terc-Butildifenilsililoxi-13-aminotridec-8(Z)-eno. Siguiendo el procedimiento aplicado en la sfntesis del analogo 25, se redujo 1-terc-butildifenilsililoxi-13-azidotridec-8(Z)-eno (3,50 g, 7,32 mmol) con trifenilfosfina para dar 1-terc- butildifenilsililoxi-13-aminotridec-8(Z)-eno (2,44 g, 74%) como un aceite incoloro. CCF: MeOH/CH2Cl2 (1:4), Rf ~ 0,25; 1H-RMN (400 MHz) 8 7,62-7,68 (m, 4H), 7,32-7,40 (m, 6H), 5,30-5,40 (m, 2H), 3,63 (t, J = 5,2 Hz, 2H), 2,62 (s.a., 2H), 1,92-2,06 (m, 4H), 1,40-1,58 (m, 4H), 1,20-1,40 (m, 10H), 1,03 (s, 9H); 13C-RMN (100 MHz) 8 135,79, 134,39, 130,46, 129,70, 127,78, 64,22, 42,02, 32,80, 29,92, 29,52, 27,46, 27,23, 27,10, 25,98, 19,44. EMAR calc. para C29H46NOSi [M+1]+ 452,3349, hallado 452,3357.
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1-(13-(terc-Butildifenilsililoxi)tridec-5(Z)-enil)-3-n-pentilurea. Siguiendo el procedimiento aplicado en la sfntesis del analogo 25, se hizo reaccionar 1-terc-butildifenilsililoxi-13-aminotridec-8(Z)-eno (2,35 g, 5,20 mmol) con isocianato de n-pentilo para dar 1-(13-(terc-butildifenilsililoxi)tridec-5(Z)-enil)-3-n-pentilurea (2,23 g, 76%) como un jarabe. CCF: EtOAc/hexanos (1:4), Rf ~ 0,65; 1H-RMN (500 MHz) 8 7,62-7,70 (m, 4H), 7,32-7,44 (m, 6H), 5,28-5,44 (m, 2H), 4,37 (s.a., 2H), 3,66 (t, J = 4,2 Hz, 2H), 3,08-3,20 (m, 4H), 1,98-2,08 (m, 4H), 1,20-1,60 (m, 20H), 1,05 (s, 9H), 0,90 (t, J = 7,2 Hz, 3H); 13C-RMN (125 MHz) 8 159,22, 135,80, 134,12, 130,24, 129,88, 129,76, 127,81, 64,21, 40,62, 40,54,
32,82, 30,31, 29,95, 29,56, 29,39, 27,51, 27,35, 27,20, 27,13, 26,01, 22,72, 19,43, 14,30. EMAR calc. para C35H5/N2O2Si [M+1]+ 565,4189, hallado 565,4186.
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1-(13-Hidroxitridec-5(Z)-enil)-3-n-pentilurea. Siguiendo el procedimiento aplicado en la sfntesis del analogo 25, se desililo 1-(13-(terc-butildifenilsililoxi)tridec-5(Z)-enil)-3-n-pentilurea (2,30 g, 4,07 mmol) usando TBAF para dar 1-(13- hidroxitridec-5(Z)-enil)-3-n-pentilurea (1,22 g, 92%) como un solido blanco, pf 63,1-63,3°C. CCF: EtOAc/hexanos (7:3), Rf ~ 0,55; 1H-RMN (400 MHz) 8 5,24-5,38 (m, 2H), 4,74 (s.a., -NH, 2H), 3,62 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 3,06-3,18 (m, 4H), 1,98-2,06 (m, 4H), 1,20-1,60 (m, 20H), 0,86 (t, J = 7,3 Hz, 3H); 13C-RMN (100 MHz) 8 159,31, 130,38, 129,63, 62,90, 40,51, 40,46, 32,93, 30,30, 30,29, 29,79, 29,41, 29,34, 29,23, 27,30, 27,24, 27,15, 25,98, 22,67, 14,25. EMAR calc. para C19H39N2O2 [M+1]+ 327,3012, hallado 327,3011.
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1-(13-Bromotridec-5(Z)-enil)-3-n-pentilurea. Siguiendo el procedimiento aplicado en la sfntesis del analogo 25, se transformo 1-(13-hidroxitridec-5(Z)-enil)-3-n-pentilurea (1,20 g, 3,68 mmol) en 1-(13-bromotridec-5(Z)-enil)-3-n- pentilurea (1,17 g, 82%), obtenida como un solido pegajoso. CCF: EtOAc/hexanos (2:3), Rf ~ 0,60; 1H-RMN (500 MHz) 8 5,28-5,40 (m, 2H), 4,71 (s.a., -NH, 2H), 3,40 (t, J = 4,2 Hz, 2H), 3,10-3,20 (m, 4H), 1,98-2,06 (m, 4H), 1,821,88 (m, 2H), 1,26-1,50 (m, 18H), 0,87 (t, J = 7,2 Hz, 3H); 13C-RMN (125 MHz) 8 159,38, 130,34, 129,59, 40,55, 40,46, 34,29, 33,02, 30,34, 29,81, 29,38, 29,30, 28,89, 28,35, 27,39, 27,33, 27,18, 22,71, 14,29. EMAR calc. para C19H3/BrN2O [M]+ 388,2089, hallado 388,2090.
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1-(13-Cianotridec-5(Z)-enil)-3-n-pentilurea. Se hizo reaccionar 1-(13-bromotridec-5(Z)-enil)-3-n-pentilurea (1,10 g, 2,82 mmol) con cianuro de potasio tal como se describio anteriormente en la sfntesis del analogo 25 para dar 1-(13- cianotridec-5(Z)-enil)-3-n-pentilurea (0,69 g, 73%) como un solido incoloro, pf 44,3-44,4°C. CCF: EtOAc/hexanos (1:1), Rf ~ 0,32; 1H-RMN (500 MHz) 8 5,30-5,42 (m, 2H), 4,35 (s.a., 2H), 3,04-3,20 (m, 4H), 2,34 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 1,98-2,10 (m, 4H), 1,60-1,72 (m, 2H), 1,24-1,56 (m, 18H), 0,89 (t, J = 7,2 Hz, 3H); 13C-RMN (125 MHz) 8 159,24, 130,23, 129,68, 120,02, 40,24, 40,13, 30,27, 29,69, 29,32, 29,07, 28,82, 28,78, 27,29, 27,26, 27,13, 25,49, 22,64, 17,30, 14,24. EMAR calc. para C20H38N3O [M+1]+ 336,3015, hallado 336,3019.
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1-(13-(1H-tetrazol-5-il)tridec-5(Z)-enil)-3-n-pentilurea (22). Siguiendo el procedimiento descrito anteriormente en la sfntesis del analogo 20, se calento una mezcla de 1-(13-cianotridec-5(Z)-enil)-3-n-pentilurea, azida de sodio y bromuro de zinc a 110°C para dar el analogo 22 (66%) como un solido incoloro, pf 86,0-86,2°C. CCF: MeOH/CH2Ch (1:9), Rf ~ 0,30; 1H-RMN (CD3OD, 300 MHz) 8 5,30-5,40 (m, 2H), 3,06-3,11 (m, 4H), 2,93 (t, J = 8,0 Hz, 2H), 1,982,10 (m, 4H), 1,70-1,82 (m, 2H), 1,24-1,50 (m, 18H), 0,90 (t, J= 7,6 Hz, 3H); 13C-RMN (CD3OD, 100 MHz) 8 160,15, 156,21, 129,89, 129,39, 39,84, 39,71, 29,89, 29,82, 29,53, 29,01, 29,00, 28,81, 27,45, 26,90, 26,70, 22,89, 22,33, 13,25. EMAR calc. para C20H38N6O [M]+ 378,3107, hallado 378,3111.
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Sfntesis del analogo 13.
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1-(terc-Butildifenilsililoxi)-11-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)undec-6-ino. Siguiendo el procedimiento aplicado en la sfntesis del analogo 25, se trato 2-(hex-5-iniloxi)tetrahidro-2H-pirano1 con n-BuLi y 1 -(terc-butildifenilsililoxi-5- bromopentano4 para dar el compuesto del tftulo (73%) como un lfquido incoloro. CCF: EtOAc/hexanos (1:4), Rf ~ 0,60; 1H-RMN (400 MHz) 8 7,64-7,68 (m, 4H), 7,34-7,42 (m, 6H), 4,57 (t, J = 4,3 Hz, 1H), 3,78-3,86 (m, 2H), 3,65 (t, J = 6,3 Hz, 2H), 3,32-3,54 (m, 2H), 2,10-2,22 (m, 4H), 1,24-1,84 (m, 16H), 1,04 (s, 9H); 13C-RMN (125 MHz) 8 135,80,
134,32, 129,74, 127,84, 99,01, 80,54, 80,16, 67,30, 64,02, 62,50, 32,34, 30,98, 29,18, 29,12, 27,32, 27,10, 26,17, 25,73, 25,32, 19,87, 18,99, 18,86. EMAR calc. para Ca^OaSi [M+1]+ 493,3138, hallado 493,3144.
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11-(terc-Butildifenilsililoxi)undec-5-in-1-ol. Siguiendo el procedimiento notificado para preparar el analogo 25, se escindio 1-(terc-butildifenilsililoxi)-11-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)undec-6-ino con una cantidad catalftica de PPTS para dar el compuesto del tftulo (72%) como un lfquido incoloro. CCF: EtOAc/hexanos (3:7), Rf ~ 0,43; 1H-RMN (300 MHz) 8 7,64-7,68 (m, 4H), 7,34-7,42 (m, 6H), 3,62 (t, J = 5,6 Hz, 4H), 2,06-2,22 (m, 4H), 1,64-1,50 (m, 10H), 1,04 (s, 9H); 13C-RMN (100 MHz) 8 135,82, 134,33, 129,77, 127,84, 80,77, 80,11, 64,06, 62,69, 32,35, 32,10, 29,10, 27,12, 25,60, 25,33, 18,97, 18,78. EMAR calc. para C27H3gO2Si [M+1]+ 423,2719, hallado 423,2718.
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11-(terc-Butildifenilsililoxi)undec-5(Z)-en-1-ol. Se sometio 11-(terc-butildifenilsililoxi)undec-5-in-1-ol (6,50 g, 15,40 mmol) a semihidrogenacion tal como se describio anteriormente para dar la olefina del tftulo (6,07 g, 93%) como un aceite incoloro. CCF: EtOAc/hexanos (3:7), Rf ~ 0,45; 1H-RMN (300 MHz) 8 7,68-7,64 (m, 4H), 7,34-7,32 (m, 6H),
5,28-5,42 (m, 2H), 3,68-3,60 (t, J = 6,4 Hz, 4H), 2,08-1,96 (m, 4H), 1,60-1,50 (m, 4H), 1,40-1,24 (m, 6H), 1,04 (s, 9H); 13C-RMN (100 MHz) 8 135,79, 134,36, 130,45, 129,71, 129,63, 127,79, 64,16, 63,15, 32,69, 32,59, 29,94, 29,67, 27,43, 27,13, 27,08, 26,06, 25,68, 19,45. EMAR calc. para C27^^Si [M+1]+ 425,2876, hallado 425,2874.
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1-(terc-Butildifenilsililoxi-11-azidoundec-6(Z)-eno. Siguiendo el protocolo descrito anteriormente, se convirtio 11-(terc- butildifenilsililoxi)undec-5(Z)-en-1-ol (6,0 g, 14,24 mmol) en la azida del tftulo (4,60 g, 72%), un lfquido incoloro. CCF: EtOAc/hexanos (1:9), Rf ~ 0,55; 1H-RMN (300 MHz) 8 7,64-7,68 (m, 4H), 7,34-7,42 (m, 6H), 5,28-5,42 (m, 2H), 3,65 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 3,25 (t, J = 7,1 Hz, 2H), 1,96-2,10 (m, 4H), 1,24-1,64 (m, 10H), 1,04 (s, 9H); 13C-RMN (100 MHz) 8 136,63, 135,85, 134,41, 130,83, 129,79, 129,22, 127,88, 64,20, 51,62, 32,77, 29,73, 28,70, 27,53, 27,18, 27,05, 26,94, 25,77, 19,52; IR (puro) 2931, 2857, 2094, 1589, 1110 cm'1. EMAR calc. para C27H4oNaOSi [M+1]+ 450,2940, hallado 450,2941.
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1-Amino-11-(terc-butildifenilsililoxi)undec-5(Z)-eno. Se redujo 1-(terc-butildifenilsililoxi-11-azidoundec-6(Z)-eno (4,30 g, 9,57 mmol) con trifenilfosfina tal como se describio anteriormente para dar la amina del tftulo (2,96 g, 74%) como un aceite incoloro. CCF: MeOH/CH2Ch (1:4), Rf ~ 0,25; 1H-RMN (300 MHz) 8 7,64-7,68 (m, 4H), 7,34-7,42 (m, 6H),
5,28-5,42 (m, 2H), 3,64 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 2,82 (t, J = 4,8 Hz, 2H), 1,96-2,10 (m, 4H), 1,52-1,64 (m, 4H), 1,30-1,42 (m, 6H), 1,04 (s, 9H); 13C-RMN (100 MHz) 8 135,82, 134,37, 132,37, 132,27, 130,70, 129,78, 129,21, 128,93, 128,81, 127,86, 64,19, 40,88, 32,77, 29,89, 29,73, 27,52, 27,37, 27,17, 27,12, 27,03, 25,76, 19,47. EMAR calc. para C27H42NOSi [M+1]+ 420,3046, hallado 420,3050.
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1-(11-(terc-Butildifenilsililoxi)undec-5(Z)-enil)-3-n-pentilurea. 76% como un aceite incoloro. CCF: EtOAc/hexanos (2:3), Rf ~ 0,45; 1H-RMN (300 MHz) 8 7,64-7,68 (m, 4H), 7,34-7,42 (m, 6H), 5,28-5,42 (m, 2H), 4,13 (s.a., 2H), 3,65 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 3,02-3,20 (m, 4H), 1,96-2,08 (m, 4H), 1,20-1,60 (m, 16H), 1,04 (s, 9H), 0,89 (t, J = 7,2 Hz, 3H); 13C-RMN (100 MHz) 8 158,02, 135,79, 134,36, 130,06, 129,74, 127,90, 127,82, 64,17, 40,42, 40,32, 32,52, 30,28, 29,71, 29,35, 27,62, 27,54, 27,16, 27,11, 25,71, 22,69, 19,45, 14,28. EMAR calc. para C33H53^O2Si [M+1]+ 537,3876, hallado 537,3876.
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1-(11-Hidroxiundec-5(Z)-enil)-3-n-pentilurea. 94%, pf 62,2-62,5°C. CCF: EtOAc/hexanos (7:3), Rf ~ 0,55; 1H-RMN (300 MHz) 8 5,28-5,42 (m, 2H), 4,37 (s.a., 2H), 3,64 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 3,02-3,20 (m, 4H), 1,96-2,10 (m, 4H), 1,20
1,60 (m, 16H), 0,89 (t, J = 7,2 Hz, 3H); 13C-RMN (75 MHz) 8 159,41,130,30, 129,73, 62,77, 40,50, 40,34, 32,75, 30,27, 30,10, 29,56, 29,33, 27,23, 27,15, 27,04, 25,56, 22,66, 14,24. EMAR calc. para C17H35N2O2 [M+1]+ 299,2699, hallado 299,2705.
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1-(11-Bromoundec-5(Z)-enil)-3-n-pentilurea. 84%, aceite incoloro. CCF: EtOAc/hexanos (2:3), Rf ~ 0,60; 1H-RMN (300 MHz) 8 5,28-5,42 (m, 2H), 4,36 (s.a., 2H), 3,32 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 3,02-3,20 (m, 4H), 1,96-2,10 (m, 4H), 1,20
1,60 (m, 16H), 0,89 (t, J = 7,2 Hz, 3H); 13C-RMN (75 MHz) 8 159,20, 129,94, 40,60, 40,49, 34,19, 32,91, 30,29, 29,35, 29,02, 28,01,27,26, 27,16, 22,67, 14,26. EMAR calc. para C^H33BrN2O [M]+ 360,1776, hallado 360,1773.
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1-(11-(2-Hidroxifeniltio)undec-5(Z)-enil)-3-n-pentilurea (13). A una disolucion de 2-mercaptofenol (100 mg, 0,79 mmol) en DMF (3 ml) se le anadio K2CO3 (161 mg, 1,18 mmol) y 1-(11-bromoundec-5(Z)-enil)-3-n-pentilurea (0,29 g, 0,79 mmol). Tras 12 h a t.a., se diluyo la disolucion con agua (10 ml) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 5 ml). Se lavaron los extractos organicos combinados con agua, salmuera y se secaron (Na2SO4). Se purifico el residuo mediante cromatograffa en columna de SiO2 para dar el analogo 13 (230 mg, 69%) como un solido pegajoso. CCF: EtOAc/hexanos (1:1), Rf ~ 0,32; 1H-RMN (300 MHz) 8 7,45 (dd, J = 1,9, 7,6 Hz, 1H), 7,22-7,28 (m, 1H), 6,99 (dd, J = 1,2, 8,2 Hz, 1H), 6,88 (dt, J = 1,2, 7,6 Hz, 1H), 5,28-5,42 (m, 2H), 4,26 (s.a., 2H), 3,02-3,20 (m, 4H), 2,69 (t, J = 7,7 Hz, 2H), 1,94-2,08 (m, 4H), 1,20-1,60 (m, 16H), 0,89 (t, J = 7,2 Hz, 3H); 13C-RMN (75 MHz) 8 159,05, 157,10, 135,60, 130,76, 130,11, 129,82, 120,78, 119,74, 115,02, 40,70, 40,60, 36,50, 30,23, 29,68, 29,32, 28,38, 27,21,
27,11, 22,66,14,27. EMAR (ESI-neg) calc. para C23H37N2O2S [M-1]' 405,2576, hallado 405,2575.
Sfntesis del analogo 14.
imagen61
1-(11-(2-Hidroxifenilsulfonil)undec-5(Z)-enil)-3-n-pentilurea (14). Siguiendo el procedimiento utilizado para preparar el analogo 18, se oxido el analogo 13 para dar 14 (60 mg, 75%) como un lfquido incoloro. CCF: EtOAc/hexanos (2:3), Rf ~ 0,32; 1H-RMN (300 MHz) 8 9,08 (s.a., -OH), 7,72 (dd, J = 1,9, 7,4 Hz, 1H), 7,44 (dt, J = 1,2, 7,3 Hz, 1H), 7,10 (d, 5 J = 7,9 Hz, 1H), 7,12 (t, J = 6,4 Hz, 1H), 5,28-5,42 (m, 2H), 4,70-4,85 (m, 2H), 3,40-3,60 (t, J = 6,2 Hz, 2H), 3,20-3,40 (m, 4H), 1,90-2,10 (m, 4H), 1,70-1,80 (m, 2H), 1,20-1,50 (m, 14H), 0,85 (t, J = 7,2 Hz, 3H); 13C-RMN (75 MHz) 8 159,25, 156,66, 136,23, 130,22, 129,78, 129,52, 122,78, 120,22, 118,55, 55,97, 40,08, 40,62, 30,07, 30,02, 29,25,
28,82, 27,62, 27,15, 27,05, 26,62, 22,61, 22,20, 14,24. EMAR (ESI-neg) calc. para C23H37N2O4S [M-1]- 437,2474, hallado 437,2454.
10
Sfntesis del analogo 15.
imagen62
15 1-n-Pentil-3-(11-tiocianatoundec-5(Z)-enil)urea. Se agito una mezcla de 1-(11-bromoundec-5(Z)-enil)-3-n-pentilurea (191 mg, 0,53 mmol) y tiocianato de potasio (154 mg, 1,58 mmol) en DMSO seco (4 ml) a t.a. Tras 24 h, se diluyo la mezcla de reaccion con agua (10 ml) y se extrajo con acetato de etilo (33 x 5 ml). Se lavaron los extractos organicos combinados con agua, salmuera y se secaron (Na2SO4) y se concentraron a vacfo. Se purifico el residuo mediante cromatograffa en columna de SiO2 para dar la urea del tftulo (116 mg, 65%) como un jarabe incoloro. CCF: 20 EtOAc/hexanos (2:3), Rf ~ 0,32; 1H-RMN (300 MHz) 8 5,28-5,42 (m, 2H), 4,42 (s.a., 2H), 3,10-3,20 (m, 4H), 2,94 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 2,00-2,10 (m, 4H), 1,70-1,80 (m, 2H), 1,20-1,56 (m, 14H), 0,88 (t, J= 7,2 Hz, 3H); 13C-RMN (75 MHz) 8 158,92, 130,20, 129,68, 112,84, 40,67, 40,54, 34,23, 30,22, 30,03, 29,31, 29,08, 27,66, 27,19, 27,15, 27,04, 22,66, 14,27; IR (puro) 2929, 2856, 2153, 1630, 1573, 1456, 1256 cm-1. EMAR calc. para C18H34N3OS [M+1]+ 340,2423, hallado 340,2421.
25
imagen63
1-(11-(1H-Tetrazol-5-iltio)undec-5(Z)-enil)-3-pentilurea (15). Siguiendo el procedimiento utilizado para preparar el analogo 19, se trato 1-n-pentil-3-(11-tiocianatoundec-5(Z)-enil)urea (150 mg, 0,44 mmol) con azida de sodio para dar 30 el analogo 15 (104 mg, 62%) como un solido pegajoso. CCF: MeOH al 5%/CH2Ch, Rf ~ 0,40; 1H-RMN (300 MHz) 8
5,28-5,42 (m, 2H), 4,63 (s.a., 2H), 3,30 (t, J = 6,7 Hz, 2H), 3,17-3,23 (m, 4H), 1,95-2,04 (m, 4H), 1,44-1,80 (m, 6H), 1,24-1,42 (m, 10H), 0,89 (t, J = 7,2 Hz, 3H); 13C-RMN (CD3OD, 75 MHz) 8 160,17, 155,38, 129,65, 129,58, 39,81, 39,69, 32,38, 29,87, 29,79, 29,36, 28,99, 28,96, 27,84, 26,84, 26,72, 26,69, 22,31, 13,21. EMAR (ESI-neg) calc. para C18H33N6OS [M-1]- 381,2442, hallado 381,2348.
35
Sfntesis del analogo 12.
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40 N-(11-(3-n-pentilureido)undec-6(Z)-enil)bencenosulfonamida (12). A una disolucion de bencenosulfonamida (50 mg, 0,31 mmol) en THF/HMPA (4:1; 5 ml) se le anadio n-butil-litio (disol. 2,5 M en hexano, 125 pl, 0,31 mmol) a -78°C bajo una atmosfera de argon. Se anadio una disolucion de 1-(11-bromoundec-5(Z)-enil)-3-n-pentilurea (115 mg, 0,32 mmol) en THF (2 ml) gota a gota. Tras 2 h a la misma temperatura, se extinguio la reaccion con NH4Cl ac. sat. (5 ml). Se extrajo la mezcla con EtOAc (3 x 5 ml) y se lavaron los extractos combinados con agua, salmuera, se 45 secaron y se concentraron a presion reducida. Se purifico el residuo mediante cromatograffa en columna de SiO2 para dar el analogo 12 (44 mg, 32%) como un solido incoloro, pf 73,5-73,6°C. CCF: MeOH al 5%/CH2Ch, Rf ~ 0,40; 1H-RMN (300 MHz) 8 7,84-7,90 (m, 2H), 7,46-7,60 (m, 3H), 5,48 (s.a., -NH, 1H), 5,24-5,38 (m, 2H), 4,70 (s.a., -NH, 1H), 4,60 (s.a., - NH, 1H), 3,08-3,20 (m, 4H), 2,88-2,94 (q, J = 6,4 Hz, 2H), 1,94-2,40 (m, 4H), 1,20-1,58 (m, 16 H),
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0,88 (t, J = 6,8 Hz, 3H); 13C-RMN (75 MHz) 8 159,90, 140,06, 132,69, 130,03, 129,98, 129,27, 127,19, 43,26, 40,80, 40,52, 30,09, 29,99, 29,61, 29,28, 29,16, 27,02, 26,99, 26,96, 26,13, 22,63, 14,25. EMAR calc. para C23H40N3O3S [M + 1]+ 438,2790, hallado 438,2782.
Sfntesis del analogo 24.
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1-(11-(2,4-DioxotiazoNdin-5-N)undec-5(Z)-enN)-3-n-pentNurea (24). Se anadio n-butil-litio (1,10 ml, 2,76 mmol, disolucion 2,5 M en hexanos) gota a gota a una disolucion a -78°C de tiazolidin-2,4-diona (0,16 g, 1,38 mmol) en THF seco/HMPA (50 ml, 4:1) bajo una atmosfera de argon. Tras 30 min, se calento la mezcla de reaccion hasta 0°C a lo largo de 1 h, se mantuvo a esa temperatura durante 2 h y entonces volvio a enfriarse hasta -78°C. Tras la adicion de una disolucion de 1-(11-bromoundec-5(Z)-enil)-3-n-pentilurea (0,50 g, 1,38 mmol) en THF (15 ml), se aumento la temperatura de reaccion lentamente hasta t.a. a lo largo de 3 h y se agito adicionalmente durante 12 h. Se extinguio la mezcla de reaccion con NH4Cl ac. sat. (5 ml), se ajusto el pH a 4 usando acido oxalico 1 M y se extrajo la mezcla de reaccion con EtOAc (3 x 125 ml). Se lavaron los extractos combinados con agua (2 x 100 ml), salmuera (100 ml), se secaron (Na2SO4) y se concentraron a vacfo. Se purifico el residuo mediante cromatograffa en columna de SiO2 usando MeOH al 5%/CH2Ch para dar el analogo 24 (169 mg, 31%) como un solido incoloro, pf 92,8-93°C. CCF: MeOH al 10%/CH2Cl2, Rf ~ 0,20; 1H-RMN (CD3OD, 300 MHz) 8 5,30-5,40 (m, 2H), 4,42 (dd, J = 3,4, 4,2 Hz, 1H), 3,04-3,13 (m, 4H), 2,00-2,16 (m, 4H), 1,80-1,96 (m, 2H), 1,24-1,58 (m, 16H), 0,91 (t, J = 6,7 Hz, 3H); 13C-RMN (75 MHz) 8 177,09, 172,56, 160,15, 129,68, 129,60, 51,89, 39,69, 32,57, 29,90, 29,83, 29,23, 29,02, 28,43, 26,88, 26,73, 26,47, 22,35, 13,27. EMAR calc. para C20H36N3O3S [M+1]+ 398,2477, hallado 398,2477.
Sfntesis del analogo 7.
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2-(13-(3-N-pentilureido)tridec-8(Z)-enamido)succinato de (S)-dimetilo. Se anadieron clorhidrato de ester dimetflico del acido L-aspartico (38 mg, 0,19 mmol) y HATU (67 mg, 0,18 mmol) a una disolucion con agitacion de acido 13-(3- n-pentilureido)tridec-8(Z)-enoico2 (50 mg, 0,15 mmol) en DMF anhidra (20 ml) bajo una atmosfera de argon. Tras 5 min, se anadio clorhidrato de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (EDCI; 33 mg, 0,17 mmol) seguido de diisopropiletilamina (33 |il, 0,19 mmol). Tras 12 h, se diluyo la mezcla de reaccion con EtOAc (30 ml), se lavo con agua (30 ml), y salmuera (20 ml). Volvieron a extraerse las fases acuosas combinadas con EtOAc (3 x 30 ml). Se secaron los extractos organicos combinados sobre Na2SO4, se concentraron a presion reducida y se purifico el residuo mediante cromatograffa en columna de SiO2 usando EtOAc al 50%/hexanos como eluyente para dar el diester del tftulo (60 mg, 84%) como un aceite viscoso. CCF: EtOAc/hexanos (3:2), Rf ~ 0,30; 1H-RMN (300 MHz) 8 6,62 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 5,22-5,40 (m, 2H), 4,85-5,04 (m, 1H), 4,80-4,88 (m, 2H), 3,75 (s, 3H), 3,66 (s, 3H), 3,10-3,20 (m, 4H), 3,01 (dd, J = 4,3, 10 Hz, 1H), 2,82 (dd, J= 4,6, 10 Hz, 1H), 2,25 (t, J = 8,3 Hz, 2H), 1,98-2,07 (m, 4H), 1,601,68 (m, 4H), 1,20-1,50 (m, 14H), 0,88 (t, J = 6,7 Hz, 3H); 13C-RMN (75 MHz) 8 173,51, 171,81, 171,52, 159,02,
130,33, 129,76, 53,05, 52,30, 48,57, 40,61, 40,55, 36,61, 36,28, 30,24, 30,20, 29,51, 29,31, 29,10, 28,88, 27,20,
27,12, 25,72, 22,66, 14,26.
imagen67
Acido (S)-2-(13-(3-n-pentilureido)tridec-8(Z)-enamido)succfnico (7). Se anadio LiOH (2 ml, disolucion acuosa 2 M) a una disolucion a 0°C del 2-(13-(3-n-pentilureido)tridec-8(Z)-enamido)succinato de (S)-dimetilo anterior (60 mg,
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0,12 mmol) en THF (25 ml) y H2O desionizada (4 ml). Tras agitar a temperatura ambiente durante la noche, se enfrio la mezcla de reaccion hasta 0°C, se ajusto el pH a 4 con acido oxalico ac. 1 M y se extrajo la mezcla con EtOAc (3 x 15 ml). Se lavaron los extractos combinados con agua (30 ml), salmuera (25 ml), se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron a vacfo. Se purifico el residuo mediante cromatograffa en columna de SiO2 usando EtOAc al 25%/hexanos como eluyente para dar el analogo 7 (48 mg, 85%) como un aceite incoloro. CCF: MeOH al 5%/EtOAc (3:2), Rf ~ 0,30; 1H-RMN (CD3OD, 300 MHz) 8 5,30-5,38 (m, 2H), 4,72 (t, J = 4,2 Hz, 1H), 3,26-3,32 (m, 4H), 2,86 (dd, J = 4,3, 10 Hz, 1H), 2,77 (dd, J = 4,6, 10 Hz, 1H), 2,22 (t, J= 7,7 Hz, 2H), 1,98-2,10 (m, 4H), 1,54-1,64 (m, 4H), 1,20-1,52 (m, 14H), 0,89 (t, J = 6,7 Hz, 3H); 13C-RMN (CD3OD, 75 MHz) 8 174,93, 173,01, 172,83, 160,17, 129,94, 129,39, 49,0, 39,81, 39,73, 35,78, 35,60, 29,90, 29,82, 29,49, 29,02, 28,87, 26,90, 26,73, 25,70, 22,35, 13,29. EMAR calc. para C23H42N3O6 [M+1]+ 456,3074, hallado 456,3071.
Sfntesis del analogo 3.
imagen68
13-(2-(n-Butilamino)-2-oxoacetamido)tridec-8(Z)-enoato de 2-(2-(2-Hidroxietoxi)etoxi)etilo (3). Se anadio trietilenglicol (0,12 g, 0,8 mmol; secado sobre tamices moleculares) a una disolucion de acido 13-(2-(n-butilamino)-2- oxoacetamido)tridec-8(Z)-enoico2 (30 mg, 0,08 mmol) y N,N-dimetilaminopiridina (DMAP, 11 mg, 0,09 mmol) en diclorometano anhidro (10 ml) bajo una atmosfera de argon a temperatura ambiente. Tras 3 min, se anadio EDCI solido (18 mg, 0,09 mmol). Tras 12 h, se diluyo la mezcla de reaccion con EtOAc (10 ml), se lavo con agua (5 ml) y se concentro a vacfo. Se purifico el residuo mediante cromatograffa en columna de SiO2 usando EtOAc para dar el analogo 3 (33 mg, 82%) como un solido incoloro, pf 71,7-71,9°C. CCF: EtOAc/hexanos (4:1), Rf ~ 0,30; 1H-RMN (300 MHz) 8 7,46 (s.a., 2H), 5,24-5,40 (m, 2H), 4,23 (t, J = 4,6 Hz, 2H), 3,58-3,78 (m, 10H), 3,27 (q aparente, J = 6,7 Hz, 4H), 2,32 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 1,50-1,66 (m, 6H), 1,24-1,44 (m, 14H), 0,92 (t, J = 6,7 Hz, 3H); 13C-RMN (100 MHz) 8 174,10, 160,09, 130,66, 129,24, 72,70, 70,76, 70,55, 69,42, 39,80, 39,61, 34,35, 31,45, 29,69, 29,21, 29,12, 29,02, 27,36, 27,07, 26,92, 25,04, 20,21, 13,90. EMAR calc. para C25H47N2O7 [M+1]+ 487,3383, hallado 487,3379.
Sfntesis del analogo 2.
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13-(3-n-Pentilureido)tridec-8(Z)-enoato de 2-(2-(2-hidroxietoxi)etoxi)etilo (2). Se condenso acido 13-(3-n- pentilureido)tridec-8(z)-enoico2 (80 mg, 0,20 mmol) con trietilenglicol tal como se describio anteriormente para dar el analogo 2 (86 mg, 78%) como un solido incoloro, pf 42,4-42,6°C. CCF: EtOAc, Rf ~ 0,20; 1H-RMN (300 MHz) 8 5,245,40 (m, 2H), 4,28 (s.a., 2H), 4,23 (dd, J= 4,9, 1,0 Hz, 2H), 3,58-3,68 (m, 10H), 3,10-3,20 (m, 4H), 2,52 (s.a., -OH, 1H), 2,33 (t, J= 7,6 Hz, 2H), 1,90-2,10 (m, 4H), 1,44-1,64 (m, 4H), 1,22-1,40 (m, 14), 0,88 (t, J= 7,3 Hz, 3H); 13C- RMN (75 MHz) 8 174,22, 158,50, 130,41, 129,62, 72,76, 70,75, 70,51, 69,38, 63,47, 61,94, 40,78, 40,71, 34,33,
30,13, 30,08, 29,57, 29,25, 29,09, 28,94, 27,23, 27,15, 27,06, 25,03, 22,61, 14,24. EMAR calc. para C25H49N2O6 [M+1]+ 473,3591, hallado 473,3588.
Sfntesis del analogo 1.
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13-(N-isopropilheptanamido)tridec-8(Z)-enoato de 2-(2-(2-hidroxietoxi)etoxi)etilo (1). Se condenso acido 13-(N- isopropilheptanamido)tridec-8(Z)-enoico2 (60 mg, 0,16 mmol) con trietilenglicol tal como se describio anteriormente para dar el analogo 1 (58 mg, 73%) como un aceite incoloro, viscoso. CCF: EtOAc (4:1), Rf ~ 0,40; 1H-RMN (300 MHz, 65/35 mezcla de rotameros) 8 5,26-5,40 (m, 2H), 4,62-4,70 (m, 0,5H), 4,20-4,26 (m, 2H), 3,98-4,08 (m, 0,5H),
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3,58-3,76 (m, 10H), 3,04-3,16 (m, 2H), 2,20-2,36 (m, 4H para los dos rotameros), 1,98-2,10 (m, 4H), 1,46-1,66 (m, 6H), 1,24-1,38 (m, 14H), 1,18 y 1,10 (d, J = 7,3 Hz, 6H para dos rotameros), 0,87 (t, J = 7,2 Hz, 3H); 13C-RMN (75 MHz) 8 174,05, 174,01, 173,10, 172,55, 130,75, 130,11, 129,85, 129,15, 72,70, 70,76, 70,55, 69,40, 63,43, 61,94,
48,30, 45,52, 43,53, 41,09, 34,36, 34,32, 34,10, 34,0, 31,93, 31,89, 31,28, 29,90, 29,75, 29,69, 29,56, 29,43, 29,23, 29,12, 27,84, 27,48, 27,42, 27,35, 27,18, 26,93, 25,88, 25,70, 25,05, 25,02, 22,76, 21,60, 20,75, 14,28. EMAR calc. para C29H56NO6 [M+1]+ 514,4108, hallado 514,4111.
Sfntesis del analogo 8.
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13-(3-n-Pentilureido)tridec-8(Z)-enoato de N-hidroxisuccinimidilo. Se seco azeotropicamente una mezcla de acido 13-(3-n-pentilureido)tridec-8(Z)-enoico2 (100 mg, 0,29 mmol) y N-hidroxisuccinimida (37 mg, 0,31 mmol) usando benceno anhidro (2 * 5 ml), entonces se disolvio en CH2Cl2 seco (5 ml). A esto se le anadio EDCI (67 mg, 0,35 mmol) y DMAP (38 mg, 0,31 mmol) bajo una atmosfera de argon. Tras 12 h a t.a., se diluyo la mezcla de reaccion con mas CH2Ch (20 ml), se lavo con agua, salmuera, se seco (Na2SO4) y se concentro a vacfo. Se purifico el residuo mediante cromatograffa en columna de SO2 para dar el ester de NHS del tftulo (110 mg, 86%) como un solido pegajoso que se uso inmediatamente sin purificacion adicional. CCF: EtOAc/hexanos (7:3), Rf ~ 0,40; 1H- RMN (400 MHz) 8 5,27-5,36 (m, 2H), 4,48 (s.a., 2H), 3,09-3,15 (m, 4H), 2,81 (s.a., 4H), 2,58 (t, J = 7,8 Hz, 2H), 1,942,06 (m, 4H), 1,68-1,74 (m, 2H), 1,20-1,50 (m, 16 H), 0,86 (t, J = 7,2 Hz, 3H); 13C-RMN (100 MHz) 8 169,40, 168,96,
158.62, 130,29, 129,71, 40,75, 40,68, 31,12, 30,18, 30,14, 29,51, 29,28, 28,80, 27,21, 27,19, 27,10, 25,81, 24,72,
22.62, 14,24.
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13-(3-n-Pentilureido)-N-(fenilsulfonil)tridec-8(Z)-enamida (8). Se calento una mezcla de 13-(3-n-pentilureido)tridec- 8(Z)-enoato de N-hidroxisuccinimidilo (150 mg, 0,34 mmol) a partir de lo anterior, bencenosulfonamida (78 mg, 0,49 mmol) y 4-dimetilaminopiridina (DMAP; 50 mg, 0,40 mmol) en hexametilfosforamida seca (HMPA; 3 ml) a 80°C durante 24 h. Tras enfriar hasta t.a., se diluyo la mezcla de reaccion con agua y se extrajo en EtOAc (3 * 10 ml). Se lavaron los extractos combinados con agua, salmuera, se secaron (Na2SO4) y se concentraron a vacfo. Se purifico el residuo mediante cromatograffa en columna de SiO2 para dar el analogo 8 (105 mg, 65%) como un solido incoloro, pf 91,4-91,6°C. CCF: EtOAc/hexanos (3:2), Rf ~ 0,30; 1H-RMN (300 MHz) 8 8,00-8,10 (dd, J = 0,9, 7,3 Hz, 2H), 7,44
7,60 (m, 3H), 5,28-5,42 (m, 2H), 5,03 (s.a., - NH, 1H), 4,57 (s.a., -NH, 1H), 3,21 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 3,12 (t, J = 6,5 Hz, 2H), 2,29 (t, J = 7,9 Hz, 2H), 1,98-2,10 (m, 4H), 1,18-1,60 (m, 18H), 0,90 (t, J = 7,2 Hz, 3H); 13C-RMN (75 MHz) 8 172,66, 159,28, 139,67, 133,57, 130,69, 129,65, 128,93, 128,40, 41,41, 40,53, 36,22, 29,89, 29,61, 29,24, 28,87,
28,33, 27,69, 26,91, 26,69, 26,47, 24,70, 22,588, 14,22. EMAR calc. para C25H42N3O4S [M+1]+ 480,2896, hallado 480,2899.
Sfntesis del analogo 9.
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N-(Metilsulfonil)-13-(3-n-pentilureido)tridec-8(Z)-enamida (9). Se hizo reaccionar 13-(3-n-pentilureido)tridec-8(Z)- enoato de N-hidroxisuccinimidilo a partir de lo anterior (150 mg, 0,34 mmol) con metanosulfonamida (48 mg, 0,50 mmol) tal como se describio anteriormente para dar el analogo 8 (102 mg, 72%) como un solido incoloro, pf 113,5- 113,6°C. CCF: EtOAc/hexanos (1:1), Rf ~ 0,30; 1H-RMN (300 MHz) 8 5,30-5,40 (m, 2H), 3,21 (s, 3H), 3,04-3,12 (m, 4H), 2,29 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 2,00-2,10 (m, 4H), 1,22-1,66 (m, 18H), 0,90 (t, J = 7,0 Hz, 3H); 13C-RMN (75 MHz) 8 175,14, 161,50, 131,17, 130,78, 41,44, 41,10, 41,02, 37,13, 31,22, 31,15, 30,73, 30,34, 30,07, 30,05, 28,19, 28,17, 28,03, 25,80, 23,66, 14,56. EMAR calc. para C20H40N3O4S [M+1]+ 418,2740, hallado 418,2739.
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Sfntesis del analogo 6.
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2-(13-(1,3-Dimetil-3-n-pentilureido)tridec-8(Z)-enamido)acetato de metilo. Se anadieron clorhidrato de glicina (32 mg, 0,29 mmol) y 1-hidroxibenzotriazol (32 mg, 0,23 mmol; HOBt) a una disolucion de acido 13-(1,3-dimetil-3-n- pentilureido)tridec-8(Z)-enoico2 (70 mg, 0,19 mmol) y diisopropiletilamina (50 pl, 0,29 mmol) en DMF anhidra (20 ml) bajo una atmosfera de argon. Tras 5 min, se anadio clorhidrato de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (45 mg, 0,23 mmol; EDCI) como un solido. Tras agitar durante 12 h a temperatura ambiente, se diluyo la mezcla de reaccion con agua (30 ml) y se extrajo con EtOAc (3 * 30 ml). Se secaron los extractos organicos combinados sobre Na2SO4, se concentraron a presion reducida y se purifico el residuo mediante cromatograffa en columna de SiO2 usando EtOAc al 30%/hexanos como eluyente para dar el ester metflico del tftulo (65 mg, 79%) como un aceite viscoso. CCF: EtOAc/hexanos (7:3), Rf ~ 0,40; 1H-RMN (300 MHz) 8 6,18 (s.a., -NH, 1H), 5,26-5,40 (m, 2H), 4,04 (d, J = 5,2 Hz, 2H), 3,75 (s, 3H), 3,11 (q aparente, J = 7,6 Hz, 4H), 2,77 (s, 3H), 2,76 (s, 3H), 2,24 (t, J= 7,6 Hz, 2H), 1,96-2,08 (m, 4H), 1,46-1,70 (m, 6H), 1,20-1,38 (m, 12H), 0,88 (t, J = 7,2 Hz, 3H); 13C-RMN (100 MHz) 8 170,69, 170,07, 165,65, 130,36, 129,38, 52,45, 50,43, 50,42, 41,23, 35,86, 30,09, 29,62, 29,26, 29,22, 29,05, 27,32, 27,15, 26,67, 25,74, 25,38, 21,65, 14,48. EMAR calc. para C24H46N3O4 [M+1]+ 440,3488, hallado 440,3485.
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Acido 2-(13-(1,3-dimetil-3-n-pentilureido)tridec-8(Z)-enamido)acetico (6). Siguiendo las condiciones de hidrolisis del ester descritas anteriormente, se convirtio 2-(13-(1,3-dimetil-3-n-pentilureido)tridec-8(Z)-enamido)acetato de metilo en el analogo 6 (87%), obtenido como un lfquido incoloro. CCF: EtOAc/hexanos (4:1), Rf ~ 0,40; 1H-RMN (300 MHz) 8 6,39 (s.a., -NH, 1H), 5,24-5,40 (m, 2H), 4,03 (d, J = 4,5 Hz, 2H), 3,16 (q aparente, J = 5,8 Hz, 4H), 2,79 (s, 3H), 2,77 (s, 3H), 2,25 (t, J= 7,0 Hz, 2H), 1,90-2,10 (m, 4H), 1,48-1,70 (m, 6H), 1,20-1,40 (m, 12H), 0,88 (t, J= 7,2 Hz, 3H); 13C-RMN (100 MHz) 8 174,31, 171,97, 166,01, 130,44, 129,51, 50,79, 50,61, 41,72, 36,86, 36,72, 36,42, 29,64, 29,18, 29,05, 27,36, 27,26, 27,09, 27,04, 25,76, 22,63, 14,24. EMAR calc. para C23H44N3O4 [M+1]+ 426,3332, hallado 426,3315.
Sfntesis del analogo 5.
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2-(13-(N-Isopropilheptanamido)tridec-8(Z)-enamido)acetato de metilo. Se condenso acido 13-(N- isopropilheptanamido)tridec-8(Z)-enoico2 (100 mg, 0,26 mmol) con ester metflico de glicina tal como se describio anteriormente para dar la correspondiente amida (97 mg, 82%) como un jarabe incoloro que se uso directamente en la siguiente etapa. CCF: EtOAc (2:1), Rf ~ 0,45; 1H-RMN (300 MHz, mezcla 1:1 de rotameros) 8 6,25 (s.a., -NH, 0,5 H), 6,08 (s.a., -NH, 0,5 H), 5,24-5,42 (m, 2H), 4,60-4,72 (m, 1H), 4,05 (d, J = 2,4 Hz, 2H), 3,76 (s, 1,5 H), 3,75 (s, 1,5 H), 3,06-3,15 (m, 2H), 2,20-2,38 (m, 4H), 1,90-2,10 (m, 4H), 1,40-1,68 (m, 6 H), 1,24-1,38 (m, 14 H), 1,19 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,10 (d, J = 6,7 Hz, 3 H), 0,88 (t, J = 7,1 Hz, 3H); 13C-RMN (100 MHz) 8 173,60, 173,46, 173,16, 172,60,
170,82, 130,84, 130,12, 129,88, 129,16, 53,66, 52,58, 52,53, 48,35, 45,52, 43,55, 41,38, 41,15, 36,57, 34,11, 34,02,
31.95, 31,92, 31,32, 29,92, 29,72, 29,63, 29,60, 29,45, 29,40, 29,26, 29,21, 28,97, 27,94, 27,45, 27,41, 27,26, 27,16,
26.96, 25,91, 25,80, 25,75, 22,79, 21,62, 20,78, 14,31.
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Acido 2-(13-(N-isopropilheptanamido)tridec-8(Z)-enamido)acetico (5). Siguiendo las condiciones de hidrolisis del ester descritas anteriormente, se hidrolizo 2-(13-(N-isopropilheptanamido)tridec-8(Z)-enamido)acetato de metilo (50 mg, 0,10 mmol) para dar el analogo 5 (44 mg, 91%) obtenido como un lfquido incoloro. CCF: EtOAc (4:1), Rf ~ 0,20; 1H-RMN (300 MHz, mezcla 65/35 de rotameros) 8 6,47 y 6,35 (s.a., -NH, 1H para los dos rotameros), 5,24-5,42 (m, 2H), 4,60-4,70 (m, 1H), 4,05 y 4,06 (d, J = 2,8 Hz, 2H para los dos rotameros), 3,06-3,18 (m, 2H), 2,20-2,38 (m, 4H), 1,90-2,10 (m, 4H), 1,50-1,68 (m, 6H), 1,24-1,38 (m, 14H), 1,20 y 1,10 (d, J = 7,3 Hz, 6H para los dos rotameros), 0,87 (t, J = 7,2 Hz, 3H); 13C-RMN (75 MHz) 8 174,35, 174,23, 174,18, 173,64, 172,0, 171,93, 130,98, 130,25, 129,75, 129,0, 48,86, 45,99, 43,77, 41,79, 41,62, 41,48, 34,05, 33,95, 31,85, 31,79, 31,13, 29,62, 29,51, 29,35, 29,31, 29,23, 28,85, 28,81, 27,83, 27,44, 27,34, 27,21, 27,02, 26,90, 26,03, 25,87, 25,80, 25,75, 22,75, 21,54, 20,70, 14,29. EMAR calc. para C25H47N2O4 [M+1] + 439,3536, hallado 439,3531.
Sfntesis del analogo 31.
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1-(5-(terc-Butildifenilsililoxi)pentil)-3-n-pentilurea. Se hizo reaccionar 5-(terc-butildifenilsililoxi)pentan-1-amina5 (3,0 g, 8,78 mmol) con isocianato de n-pentilo (995 mg, 8,78 mmol) tal como se describio anteriormente para dar la urea del tftulo (85%) como un aceite incoloro. CCF: EtOAc/hexanos (2:3), Rf ~ 0,40; 1H-RMN (300 MHz) 8 7,60-7,70 (m, 4H), 7,30-7,40 (m, 6H), 4,24 (s.a., -NH, 2H), 3,64 (t, J = 7,9 Hz, 2H), 3,06-3,20 (m, 4H), 1,20-1,60 (m, 12 H), 1,03 (s, 9H), 0,89 (t, J = 7,2 Hz, 3H); 13C-RMN (75 MHz) 8 159,7, 134,90, 132,47, 132,40, 129,70, 128,81, 128,71, 127,92, 63,2, 40,91, 40,81, 32,42, 29,60, 29,28, 27,11, 23,30, 22,35, 19,38. EMAR calc. para C2/H4aN2O2Si [M+1]+ 455,3094, hallado 455,3093.
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1-(5-Hidroxipentil)-3-n-pentilurea. Se desililo 1-(5-(terc-butildifenilsililoxi)pentil)-3-n-pentilurea (3,0 g, 6,60 mmol) tal como se describio anteriormente para dar el alcohol del tftulo (1,31 g, 92%) como un solido incoloro, pf 81,4-81,8°C. CCF: EtOAc/hexanos (7:3), Rf ~ 0,40; 1H-RMN (CD3OD, 300 MHz) 8 3,54 (t, J = 5,8 Hz, 2H), 3,06 (q, J = 6,4 Hz, 4H), 1,22-1,60 (m, 12H), 0,89 (t, J = 7,3 Hz, 3H); 13C-RMN (CD3OD, 100 MHz) 8 160,17, 61,67, 39,82, 39,77, 32,17, 30,02, 29,91, 29,03, 23,04, 22,34, 13,25. EMAR calc. para C11H25N2O2 [M+1]+ 217,1916, hallado 217,1916.
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1-(5-Bromopentil)-3-n-pentilurea. Siguiendo el protocolo descrito anteriormente, se convirtio 1-(5-hidroxipentil)-3-n- pentilurea (1,30 g, 6,02 mmol) en el correspondiente bromuro (1,45 g, 87%), obtenido como un aceite incoloro. CCF: EtOAc/hexanos (2:3), Rf ~ 0,40; 1H-RMN (300 MHz) 8 4,44 (s.a., -NH, 2H), 3,40 (t, J = 6,7 Hz, 2H), 3,10-3,20 (m, 4H), 1,82-1,92 (m, 2H), 1,40-1,58 (m, 6H), 1,24-1,38 (m, 4H), 0,89 (t, J = 7,3 Hz, 3H); 13C-RMN (100 MHz) 8 159,46, 40,02, 33,88, 33,02, 30,29, 29,92, 29,36, 25,83, 22,12, 14,02. EMAR calc. para CnH24BrN2O [M+1]+ 279,1072, hallado 279,1073.
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N-(4-(5-(3-n-pentilureido)pentiloxi)benzo[d]tiazol-2-il)acetamida (31). Se calento una mezcla de 1-(5-bromopentil)-3- n-pentilurea (100 mg, 0,37 mmol), N-(4-hidroxibenzo[d]tiazol-2-il)acetamida comercial (100 mg, 0,48 mmol) y K2CO3 (67 mg, 0,48 mmol) en DMF (5 ml) a 60°C. Tras 6 h, se enfrio la mezcla de reaccion hasta t.a., se diluyo con agua (25 ml) y se extrajo en EtOAc (3 x 10 ml). Se lavaron los extractos organicos combinados con agua (2 x 5 ml), salmuera (10 ml), se secaron (Na2SO4) y se concentraron a vacfo. Se purifico el residuo asf obtenido mediante cromatograffa en columna de gel de sflice para dar 31 (61 mg, 40%), pf 61,6-61,8°C. CCF: EtOAc/hexano (3:2), Rf ~ 0,40; 1H-RMN (300 MHz) 8 7,39 (dd, J = 0,9, 7,3 Hz, 1H), 7,20 (dd, J = 7,8, 7,3 Hz, 1H), 6,86 (dd, J = 0,9, 7,8 Hz, 1H), 4,42 (s.a., -NH, 2H), 4,17 (t, J= 5,4 Hz, 2H), 3,19-3,30 (m, 4H), 2,33 (s, 3H), 1,82-1,98 (m, 2H), 1,64-1,80 (m, 4H), 1,42-1,60 (m, 2H), 1,24-1,40 (m, 4H), 0,88 (t, J = 7,3 Hz, 3H); 13C-RMN (75 MHz) 8 170,16, 159,91, 158,94, 151,37, 139,10, 133,67, 124,40, 113,94, 108,68, 68,21, 40,64, 39,98, 30,27, 29,30, 28,33, 26,54, 23,25, 22,64,
22,33, 14,26. EMAR (ESI-neg) calc. para C20H29N4O3S [M-1]- 405,1960, hallado 405,1938.
Sfntesis del analogo 32.
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N1-n-Butil-N2-(5-(terc-butildifenilsililoxi)pentil)oxalamida. Se agito una mezcla de acido 2-(n-butilamino)-2-oxoacetico (22 mg, 0,15), 5-(terc-butildifenilsililoxi)pentan-1 -amina5 (50 mg, 0,15 mmol), N,N-diisopropiletilamina (40 mg, 0,30 mmol) y hexafluorofosfato de 2-(1H-7-azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio-metanaminio (HATU, 72 mg, 0,19 mmol) en DMF seca (5 ml) a t.a. durante la noche bajo una atmosfera de argon, entonces se extinguio con agua (2 ml). Se extrajo la mezcla de reaccion con EtOAc (3 x 5 ml). Se lavaron los extractos organicos combinados con agua, se secaron y se concentraron a vacfo. Se purifico el residuo mediante cromatograffa ultrarrapida en columna de SiO2 usando EtOAc/hexanos (1:3) como eluyente para dar la oxamida del tftulo (65 mg, 91%) como un aceite incoloro. CCF: EtOAc al 50%/hexano, Rf ~ 0,56; 1H-RMN (400 MHz) 8 7,55-7,70 (m, 4H), 7,60 (s.a., -NH, 2H), 7,35-7,40 (m, 6H), 3,65 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 3,35-3,25 (m, 4H), 1,55-1,35 (m, 10H), 1,05 (s, 9H), 0,92 (t, J = 7,3 Hz, 3H); 13C-RMN (100 MHz) 8 160,28, 160,25, 135,80, 134,20, 129,85, 127,90, 63,80, 40,0, 39,70, 32,40, 31,50, 29,20, 27,10, 27,05, 23,40, 20,30, 19,45, 14,0. EMAR calc. para C2/H41N2OaSi [M+1]+ 469,2886, hallado 469,2892.
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N1-n-Butil-N2-(5-hidroxipentil)oxalamida. Se agito una mezcla de N1-n-butil-N2-(5-(terc-butildifenilsililoxi)
pentil)oxalamida (65 mg, 0,14 mmol) y fluoruro de n-tetrabutilamonio (0,41 ml, disol. 1 M, 0,42 mmol) en disolucion de THF seco a temperatura ambiente bajo una atmosfera de argon durante 12 h. Se evaporaron todos los compuestos volatiles a vacfo, se disolvio el residuo en EtOAc (30 ml) y se lavo la fase organica con agua (10 ml), salmuera (15 ml), se seco y se evaporo. La purificacion del residuo mediante cromatograffa en columna de SiO2 usando EtOAc/hexanos (1:2) como eluyente dio el compuesto del tftulo (30 mg, 92%) como un solido incoloro, pf 136-137°C. CCF: EtOAc al 50%/hexano, Rf ~ 0,28; 1H-RMN (300 MHz) 8 7,65 (s.a., NH, 1H), 7,60 (s.a., -NH, 1H), 3,65 (t, J= 6,0 Hz, 2H), 3,35-3,25 (m, 4H), 1,90 (s.a. -OH, 1H), 1,60-1,50 (m, 6H), 1,40-1,35 (m, 4H), 0,92 (t, J = 7,3 Hz, 3H); 13C-RMN (100 MHz) 8 160,25, 160,10, 62,70, 39,80, 39,65, 32,40, 31,45, 29,20, 23,25, 20,20, 13,85. EMAR calc. para C11H23N2O3 [M+1]+ 231,1709, hallado 231,1701.
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N1-(5-Bromopentil)-N2-n-butiloxalamida. Se agito una disolucion de tetrabromuro de carbono (51 mg, 0,15 mmol) en CH2CI2 (5 ml) en una disolucion a 0°C de trifenilfosfina (48 mg, 0,18 mmol) y N1-n-butil-N2-(5-hidroxipentil)oxalamida (30 mg, 0,130 mmol) en CH2Ch seco (5 ml) bajo una atmosfera de argon. Tras 2 h, se lavo la mezcla de reaccion con agua (5 ml), salmuera (10 ml), se seco sobre Na2SO4 anhidro, y se eliminaron todos los compuestos volatiles a presion reducida. Se purifico el residuo mediante cromatograffa en columna de SO2 usando EtOAc/hexano (1:4) para dar compuesto el compuesto del tftulo (32 mg, 84%) como un solido incoloro, pf 109-110°C. CCF: EtOAc al 50%/hexanos, Rf ~ 0,50; 1H-RMN (300 MHz) 8 7,55 (s.a., NH, 1H), 7,50 (s.a., -NH, 1H), 3,40 (t, J= 6,0 Hz, 2H), 3,253,35 (m, 4H), 1,80-1,85 (m, 2H), 1,40-1,60 (m, 6H), 1,25-1,35 (m, 2H), 0,92 (t, J = 7,3 Hz, 3H); 13C-RMN (100 MHz) 8
160,30, 160,15, 39,65, 33,65, 32,45, 31,40, 28,60, 25,60, 20,20, 13,90. EMAR calc. para CnH22BrN2O2 [M+1]+ 293,0865, hallado 293,0870.
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N1-(5-(2-Acetamidobenzo[d]tiazol-4-iloxi)pentil)-N2-n-butiloxalamida. Se calento una mezcla de N1-(5-bromopentil)- N2-n-butiloxalamida (32 mg, 0,11 mmol), N-(4-hidroxibenzo[d]tiazol-2-il)acetamida comercial (22 mg, 0,11 mmol) y K2CO3 (45 mg, 0,32 mmol) en DMF (3 ml) a 80°C durante 3 h, entonces se enfrio hasta temperatura ambiente, se diluyo con agua (15 ml) y se extrajo en EtOAc (3 x 10 ml). Se lavaron los extractos organicos combinados con agua (2 x 5 ml), salmuera (10 ml), se secaron (Na2SO4) y se concentraron a vacfo. Se purifico el residuo mediante cromatograffa en columna de gel de sflice usando EtOAc/hexanos (1:2) como eluyente para dar el analogo 32 (35 mg, 76%) como un solido incoloro, pf 154-155°C. CCF: EtOAc al 70%/hexanos, Rf ~ 0,35; 1H-RMN (300 MHz) 8 11,05 (s.a., NH, 1H), 8,30 (s.a., NH, 1H), 7,70 (s.a., NH, 1H), 7,40 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 7,25 (dd, J = 7,4, 7,8 Hz, 1H), 6,85 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 4,20 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 3,50 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 3,35 (q, J = 7,0 Hz, 2H), 2,35 (s, 3H), 1,951,90 (m, 2H), 1,85-1,80 (m, 2H), 1,70-1,65 (m, 2H), 160-1,55 (m, 2H), 1,40-1,35 (m, 2H), 0,95 (t, J = 7,3 Hz, 3H); 13C- RMN (75 MHz) 8 169,40, 160,55, 159,90, 157,85, 151,50, 139,10, 134,00, 124,75, 113,75, 108,10, 68,90, 39,80,
39,30, 31,35, 28,20, 27,40, 23,70, 23,45, 20,25, 13,90. EMAR calc. para C20H29N4O4S [M+1]+ 421,1910, hallado 421,1906.
Sfntesis del analogo 30.
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5-(terc-Butildifenilsililoxi)-N-isopropilpentan-1 -amina. Siguiendo la bibliograffa precedente,2 se hizo reaccionar una mezcla de 1-(terc-butildifenilsililoxi)-5-yodopentano6 (1,50 g, 3,32 mmol), isopropilamina (1,70 ml, 19,92 mmol) y K2CO3 (1,37 g, 10,03 mmol) para dar la amina del tftulo (0,92 g, 72%) como un lfquido incoloro. CCF: MeOH/CH2Ch (1:4), Rf ~ 0,30; 1H-RMN (300 MHz) 8 7,65-7,67 (m, 4H), 7,30-7,40 (m, 6H), 3,65 (t, J= 6,4 Hz, 2H), 2,70-2,82 (m, 1H), 2,55 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 1,50-1,64 (m, 2H), 1,32-1,48 (m, 4H), 1,05 (d, J= 5,8 Hz, 3H), 1,04 (s, 9H); 13C-RMN (100 MHz) 8 135,68, 134,21, 129,63, 127,70, 63,95, 48,81, 47,64, 32,60, 30,27, 27,0, 23,76, 23,15, 19,34. EMAR calc. para C24H3sNOSi [M+1]+ 384,2723, hallado 384,2724.
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N-(5-(terc-Butildifenilsililoxi)pentil)-N-isopropilheptanamida. Siguiendo la bibliograffa precedente,2 se condenso 5- (terc-butildifenilsililoxi)-N-isopropilpentan-1 -amina (0,90 g, 2,30 mmol) con acido heptanoico (0,26 g, 2,0 mmol) para
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dar la amida del tftulo (0,90 g, 79%) como un aceite viscoso. CCF: EtOAc/hexanos (3:8), Rf ~ 0,60; 1H-RMN (300 MHz, mezcla 1:1 de rotameros) 8 7,65-7,67 (m, 4H), 7,30-7,40 (m, 6H), 4,62-4,72 (m, 0,5 H), 4,00-4,80 (m, 0,5H), 3,62 (t, J = 4,8 Hz, 1H), 3,68 (t, J = 4,8 Hz, 1H), 3,02 (t, J = 5,2 Hz, 1H), 3,16 (t, J = 5,2 Hz, 1H), 2,38 (t, J= 5,3 Hz, 1H), 2,24 (t, J = 5,3 Hz, 1H), 1,50-1,68 (m, 6H), 1,26-1,44 (m, 8H), 1,18 (d, J = 7,3 Hz 3H), 1,12, (d, J = 7,3 Hz 3H), 1,03 (s, 4,5 H), 1,04 (s, 4,5H), 0,88 (t, J = 7,3 Hz, 3H); 13C-RMN (125 MHz) 8 173,38, 172,76, 135,80, 135,78,
134.36, 134,12, 129,85, 129,73, 127,88, 127,82, 64,22, 63,68, 48,43, 45,62, 43,64, 41,27, 34,13, 34,05, 32,61,
32.36, 31,96, 31,93, 31,51, 29,63, 29,47, 27,10, 27,03, 25,94, 25,78, 24,03, 23,77, 22,81, 21,63, 20,78, 19,47, 14,33, 14,28. EMAR calc. para C31H50NO2Si [M+1]+ 496,3611, hallado 496,3615.
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N-(5-hidroxipentil)-N-isopropilheptanamida. Se desililo N-(5-(terc-butildifenilsililoxi)pentil)-N-isopropilheptanamida (0,70 g, 1,37 mmol) tal como se describio anteriormente para dar el alcohol del tftulo (0,34 g, 96%) como un solido incoloro. CCF: EtOAc/hexanos (2:3), Rf ~ 0,30; 1H-RMN (300 MHz, mezcla 53/47 de rotameros) 8 4,58-4,66 y 3,964,08 (m, 1H para los dos rotameros), 3,56 y 3,70 (t, J = 5,4 Hz, 2H para los dos rotameros), 3,02-3,16 (m, 2H), 2,30 y 2,26 (t, J = 6,3 Hz, 2H para los dos rotameros), 1,50-1,64 (m, 6H), 1,22-1,40 (m, 8H), 1,13 y 1,09 (d, J = 7,5 Hz, 6H para los dos rotameros), 0,84 (t, J = 7,3 Hz, 3H); 13C-RMN (100 MHz) 8 172,81 62,66, 62,60, 48,41, 45,55, 43,56, 41,04, 34,08, 34,0, 32,46, 32,43, 31,86, 31,57, 29,40, 25,87, 25,70, 23,77, 23,73, 22,75, 21,57, 20,72, 14,26. EMAR calc. para C15H32NO2 [M+1]+ 258,2433, hallado 258,2436.
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N-(5-bromopentil)-N-isopropilheptanamida. Se transformo N-(5-hidroxipentil)-N-isopropilheptanamida (0,25 g, 0,97 mmol) en el correspondiente bromuro tal como se describio anteriormente para dar el compuesto del tftulo (0,25 g. 82%) como un aceite incoloro. CCF: EtOAc/hexanos (3:7), Rf ~ 0,40; 1H-RMN (300 MHz, mezcla 55/45 de rotameros) 8 4,60-4,70 y 3,96-4,10 (m, 1H para dos rotameros), 3,46 y 3,36 (t, J = 5,8 Hz 2H para dos rotameros), 3,02-3,10 (m, 2H), 2,30 y 2,22 (t, J = 7,9 Hz, 2H para dos rotameros), 1,80-1,97 (m, 2H), 1,40-1,70 (m, 6H), 1,201,40 (m, 6H), 1,16 y 1,10, (d, J = 7,3 Hz, 6H para dos rotameros), 0,86 (t, J = 7,3 Hz, 3H); 13C-RMN (75 MHz) 8
172,79, 172,39, 48,17, 45,47, 43,32, 40,70, 33,89, 33,87, 33,49, 32,48, 32,30, 31,81, 31,78, 30,78, 29,27, 28,74, 26,05, 25,84, 25,69, 25,54, 22,64, 21,47, 20,62, 14,17. EMAR calc. para C^^rNO [M+1]+ 320,1589, hallado 320,1588.
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N-(5-(2-acetamidobenzo[d]tiazol-4-iloxi)pentil)-N-isopropilheptanamida (30). Se alquilo N-(5-bromopentil)-N- isopropilheptanamida (75 mg, 0,23 mmol) con N-(4-hidroxibenzo[d]tiazol-2-il)acetamida comercial (54 mg, 0,26 mmol) tal como se describio anteriormente para dar el analogo 30 (43 mg, 42%) como un solido pegajoso. CCF: EtOAc/hexanos (1:4), Rf ~ 0,30; 1H-RMN (300 MHz, mezcla 45/55 de rotameros) 8 11,50 (s.a., -NH, 1H), 7,37-7,42 (m, 1H), 7,18-7,26 (m, 1H), 6,84-6,88 (m, 1H), 4,58-4,78 y 4,00-4,10 (m, 1H para dos rotameros), 4,02 (t, J = 6,3 Hz, 2H), 3,12 (t, J= 7,3 Hz, 2H), 2,22-2,45 (m, 5H), 1,82-1,92 (m, 2H), 1,44-1,70 (m, 4H), 1,20-1,40 (m, 8H), 1,11-1,19 (m, 6H), 0,82-0,95 (m, 3H); 13C-RMN (75 MHz) 8 173,94, 172,78, 169,40, 169,36, 157,89, 151,62, 138,43, 138,32, 133,91, 133,87, 124,92, 124,85, 114,02, 113,87, 109,66, 108,35, 69,46, 69,08, 48,53, 48,33, 45,94, 43,61, 41,20, 34,26, 34,09, 31,91, 31,88, 31,39, 29,55, 29,45, 29,37, 29,30, 25,88, 25,77, 25,71, 24,43, 24,16, 23,55, 22,77, 21,59, 20,80, 14,28. EMAR (ESI-neg) calc. para C24H36N3O3S [M-1]- 446,2477, hallado 446,2434.
Sfntesis del analogo 33.
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= //X'OTBDPS ---------------------► THP0\/\/-----~ ^'OTBDPS
1-(terc-Butildifenilsililoxi)-8-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)oct-3-ino. Se acoplo 4-(terc-butildifenilsililoxi)-1-butino7 (5,0 g, 16,23 mmol) con 2-(4-bromobutoxi)tetrahidro-2H-pirano8 (4,59 g, 19,48 mmol) tal como se describio anteriormente para dar el acetileno del tftulo (5,57 g, 74%) como un aceite incoloro. CCF: EtOAc/hexanos (1:9), Rf ~ 0,40; 1H-RMN (300 MHz) 8 7,66-7,69 (m, 4H), 7,34-7,42 (m, 6H), 4,57 (t, J= 4,3 Hz, 1H), 3,78-3,86 (m, 2H), 3,73-3,90 (m, 3H), 3,323,40 (m, 3H), 2,40-2,45 (m, 2H), 2,06-2,10 (m, 2H), 1,93-2,02 (m, 2H), 1,40-1,80 (m, 6H), 1,02 (s, 9H); 13C-RMN (100 MHz) 8 137,87, 133,96, 129,70, 128,0, 99,0, 81,0, 77,41, 67,32, 63,15, 62,51, 30,97, 29,20, 27,0, 26,98, 26,0, 25,74, 23,18, 19,83, 19,44, 18,88. EMAR calc. para C2gH41O3Si [M+1]+ 465,2825, hallado 465,2829.
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8-(terc-Butildifenilsililoxi)oct-5-in-1-ol. Se desililo 1-(terc-butildifenilsililoxi-8-(tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)oct-3-ino (5,50 g, 11,84 mmol) tal como se describio anteriormente para dar el compuesto del tftulo (3,87 g, 86%) como un aceite incoloro. CCF: EtOAc/hexanos (2:3), Rf ~ 0,40; 1H-RMN (300 MHz) 8 7,60-7,68 (m, 4H), 7,30-7,40 (m, 6H), 3,77 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 3,60-3,72 (m, 2H), 2,40-2,48 (m, 2H), 2,22-2,40 (m, 2H), 1,50-1,70 (m, 4H), 1,03 (s, 9H); 13C- RMN (100 MHz) 8 135,83, 133,96, 129,90, 127,92, 81,31, 63,16, 62,60, 32,0, 27,0, 25,43, 23,17, 19,43, 18,78. EMAR calc. para C24H33O2Si [M+1]+ 381,2250, hallado 381,2256.
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8-(terc-Butildifenilsililoxi)oct-5(Z)-en-1-ol. Se semihidrogeno 8-(terc-butildifenilsililoxi)oct-5-in-1-ol (5,32 g, 14,0 mmol) tal como se describio anteriormente para dar 8-(terc-butildifenilsililoxi)oct-5(Z)-en-1-ol (5,18 g, 97%) como un aceite incoloro cuyos valores espectrales estaban de acuerdo con los datos de la bibliograffa.9 CCF: EtOAc/hexanos (2:3), Rf ~ 0,45; 1H-RMN (300 MHz) 8 7,60-7,70 (m, 4H), 7,30-7,40 (m, 6H), 5,34-5,44 (m, 2H), 3,65 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 3,58-3,64 (m, 2H), 2,23 (q, J = 4,2 Hz, 2H), 1,98-2,20 (m, 2H), 1,30-1,60 (m, 4H), 1,03 (s, 9H); 13C-RMN (100 MHz) 8 135,84, 134,21, 131,64, 129,82, 127,87, 126,28, 63,94, 63,12, 32,54, 31,12, 27,23, 27,11, 26,02.
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1-(terc-Butildifenilsililoxi-8-azido-oct-3(Z)-en. Siguiendo el procedimiento descrito anteriormente, se transformo 8- (terc-butildifenilsililoxi)-oct-5(Z)-en-1 -ol (5,20 g, 13,61 mmol) en la azida del tftulo (3,98 g, 72%), obtenida como un aceite incoloro. CCF: EtOAc/hexanos (1:9), Rf ~ 0,60; 1H-RMN (300 MHz) 8 7,60-7,70 (m, 4H), 7,30-7,40 (m, 6H), 5,34-5,44 (m, 2H), 3,63 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 3,22 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 2,31 (q, J = 3,6 Hz, 2H), 1,95-2,05 (m, 2H), 1,501,60 (m, 2H), 1,30-1,40 (m, 2H), 1,03 (s, 9H); 13C-RMN (100 MHz) 8 135,98, 135,90, 134,28, 131,24, 130,05, 129,79, 128,10, 127,87, 126,76, 63,98, 51,64, 31,24, 28,74, 27,29, 27,16, 27,07, 27,0, 19,55; IR (puro) 2931, 2858, 2095, 1111 cm'1. EMAR calc. para C24H34N3OSi [M+1]+ 408,2471, hallado 408,2470.
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1-(8-(terc-Butildifenilsililoxi)oct-5(Z)-enil)-3-n-pentilurea. Se redujo 1-(terc-butildifenilsililoxi-8-azido-oct-3(Z)-en a la correspondiente amina usando trifenilfosfina tal como se describio anteriormente. Se hizo reaccionar la amina bruta con isocianato de n-pentilo en THF tal como se indico anteriormente y se purifico el producto mediante cromatograffa en columna de SiO2 eluyendo con EtOAc al 20%/hexano para dar el compuesto del tftulo (1,94 g, 84%) como un aceite viscoso. CCF: EtOAc/hexanos (2:3), Rf ~ 0,45; 1H-RMN (300 MHz) 8 7,60-7,70 (m, 4H), 7,30-7,40 (m, 6H), 5,35-5,42 (m, 2H), 4,65 (s.a., -NH, 2H), 3,64 (t, J = 5,5 Hz, 2H), 3,06-3,18 (m, 4H), 2,24-2,34 (q, J = 3,9 Hz, 2H), 1,94-2,02 (q, J = 3,6 Hz, 2H), 1,20-1,50 (m, 10H), 1,03 (s, 9H), 0,83 (t, J = 7,3 Hz, 3H); 13C-RMN (100 MHz) 8 159,52, 135,85, 134,21, 131,53, 129,85, 127,90, 126,28, 63,93, 40,58, 40,50, 31,13, 30,43, 30,41, 29,45, 27,35, 22,77, 19,47, 14,36. EMAR calc. para C3QH47N2O2Si [M+1]+ 495,3407, hallado 495,3406.
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1-(8-Hidroxioct-5(Z)-enil)-3-n-pentilurea. Se desililo 1-(8-(terc-butildifenilsililoxi)oct-5(Z)-enil)-3-n-pentilurea (3,0 g, 6,07 mmol) tal como se describio anteriormente para dar el alcohol del tttulo (1,44 g, 93%) como un solido incoloro, pf 57,8-57,9°C. CCF: EtOAc/hexanos (1:4), Rf ~ 0,30; 1H-RMN (300 MHz) 8 5,30-5,60 (m, 2H), 4,40 (s.a., -NH, 2H), 3,63 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 3,08-3,22 (m, 4H), 2,29 (q, J = 5,3 Hz, 2H), 2,09 (q, J = 5,2 Hz, 2H), 1,20-1,58 (m, 10H), 0,88 (t, J = 7,3 Hz, 3H); 13C-RMN (100 MHz) 8 159,48, 132,35, 126,21, 62,28, 40,54, 40,15, 31,12, 30,28, 29,96, 29,35, 27,02, 26,98, 22,68, 14,27. EMAR calc. para C14H29N2O2 [M+1]+ 257,2229, hallado 257,2236.
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1-(8-Bromooct-5(Z)-enil)-3-n-pentilurea. Se obtuvo con un rendimiento del 82% como un aceite incoloro. CCF: EtOAc/hexanos (2:3), Rf ~ 0,60; 1H-RMN (300 MHz) 8 5,30-5,58 (m, 2H), 4,70 (s.a., 2H), 3,35 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 3,08-3,19 (m, 4H), 2,60 (q, J = 5,6 Hz, 2H), 2,05 (q, J = 5,4 Hz, 2H), 1,24-1,54 (m, 10H), 0,88 (t, J = 7,3 Hz, 3H); 13C- RMN (100 MHz) 8 159,54, 132,73, 126,45, 40,53, 40,33, 32,85, 30,98, 30,33, 30,30, 29,36, 27,36, 27,0, 22,69, 14,28. EMAR calc. para C^aBr^O [M+1]+ 319,1385, hallado 319,1392.
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N-(4-(8-(3-n-Pentilureido)oct-3(Z)-eniloxi)benzo[d]tiazol-2-il)acetamida (33). Se obtuvo con un rendimiento del 40% como un solido incoloro, pf 113,7-113,8°C. CCF: EtOAc/hexano (3:2), Rf ~ 0,40; 1H-RMN (300 MHz) 8 12,10 (s.a., -NH, 1H), 7,40 (dd, J = 0,8, 7,8 Hz, 1H), 7,22 (dt, J = 0,6, 8,9 Hz, 1H), 6,90 (dd, J = 0,5, 6,9 Hz, 1H), 5,40-5,50 (m, 2H), 4,60 (s.a., -NH, 2H), 4,20 (t, J = 5,3 Hz, 2H), 3,05-3,20 (m, 4H), 2,65 (q, J = 3,9 Hz, 2H), 2,29 (s, 3H), 2,15 (q, J = 3,9 Hz, 2H), 1,40-1,70 (m, 10 H), 0,87 (t, J = 7,3 Hz, 3H); 13C-RMN (100 MHz) 8 170,07, 159,21, 158,52, 151,46, 138,41, 133,84, 132,26, 126,13, 124,81, 113,81, 108,29, 68,46, 40,75, 40,64, 30,20, 29,30, 27,78, 26,84, 26,47, 23,42, 22,62, 14,24. EMAR calc. para C23H35N4O3S [M+1]+ 447,2430, hallado 447,2431.
Smtesis del analogo 4.
Br^/°™P+ -^^OTBDPS __ THPO^^^^OTBDPS
1-(Tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)-10-(terc-butildifenilsililoxi)dec-5-ino. Se obtuvo con un rendimiento del 73% como un aceite incoloro. CCF: EtOAc al 15%/hexanos, Rf ~ 0,50; 1H-RMN (500 MHz) 8 7,64-7,68 (m, 4H), 7,34-7,42 (m, 6H), 4,62 (t, J = 4,3 Hz, 1H), 3,78-3,92 (m, 2H), 3,68 (t, J = 6,3 Hz, 2H), 3,40-3,56 (m, 2H), 2,14-2,26 (m, 4H), 1,42-1,90 (m, 14H), 1,04 (s, 9H); 13C-RMN (75 MHz) 8 135,83, 132,02, 129,80, 127,88, 99,0, 80,52, 80,30, 67,31, 63,74, 62,49, 32,0, 31,06, 29,21, 27,14, 26,21, 25,82, 25,78, 19,89, 18,90, 18,81. EMAR calc. para C31H4aO3Si [M+1]+ 493,3138, hallado 493,3140.
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10-(terc-Butildifenilsililoxi)dec-5-in-1-ol. Se obtuvo con un rendimiento del 88% como un aceite incoloro cuyos valores espectrales estaban de acuerdo con los datos de la bibliograffa.10 CCF: EtOAc/hexanos (3:7), Rf ~ 0,40; 1H-RMN (300 MHz) 8 7,64-7,68 (m, 4H), 7,34-7,42 (m, 6H), 3,67 (t, J = 5,3 Hz, 4H), 2,06-2,22 (m, 4H), 1,50-1,64 (m, 8H), 1,04 (s, 9H); 13C-RMN (75 MHz) 8 135,82, 135,08, 134,27, 129,80, 127,87, 80,74, 80,60, 63,67, 62,69, 32,09, 31,99, 27,12, 26,83, 25,78, 25,58, 25,48, 19,49, 18,79, 18,76.
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10-(terc-Butildifenilsililoxi)dec-5(Z)-en-1-ol. Se obtuvo con un rendimiento del 92% como un aceite incoloro cuyos valores espectrales estaban de acuerdo con los datos de la bibliograffa.10 CCF: EtOAc/hexanos (3:7), Rf ~ 0,45; 1H- RMN (300 MHz) 8 7,64-7,68 (m, 4H), 7,42-7,25 (m, 6H), 5,30-5,40 (m, 2H), 3,67 (t, J = 5,3 Hz, 4H), 2,06-2,22 (m, 4H), 1,40-1,64 (m, 8H), 1,04 (s, 9H); 13C-RMN (75 MHz) 8 135,90, 135,81, 134,37, 129,92, 129,87, 129,84, 127,98,
127,80, 64,09, 63,05, 32,47, 27,24, 27,22, 27,13, 26,21, 26,14, 19,51.
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1-(10-Azidodec-5(Z)-eniloxi)terc-butildifenilsilano. Se obtuvo con un rendimiento del 71% como un aceite incoloro. CCF: EtOAc/hexanos (1:9), Rf ~ 0,60; 1H-RMN (300 MHz) 8 7,64-7,68 (m, 4H), 7,25-7,42 (m, 6H), 5,30-5,40 (m, 2H), 3,65 (t, J = 5,3 Hz, 2H), 3,24 (t, J = 4,9 Hz, 2H), 2,06-2,22 (m, 4H), 1,40-1,64 (m, 8H), 1,04 (s, 9H); 13C-RMN (75 MHz) 8 137,87, 134,35, 130,69, 129,74, 127,91, 64,02, 51,62, 32,44, 28,67, 27,21, 27,16, 27,08, 26,91, 26,16, 19,48; IR (puro) 2930, 2861, 2331, 2324, 2096, 1106 cm'1. EMAR calc. para C26H38NaOSi [M+1]+ 436,2784, hallado 436,2784.
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1-(10-(terc-Butildifenilsililoxi)dec-5(Z)-enil)-3-n-pentilurea. Se obtuvo con un rendimiento del 78% como un aceite incoloro. CCF: EtOAc/hexanos (2:3), Rf ~ 0,60; 1H-RMN (300 MHz) 8 7,64-7,68 (m, 4H), 7,34-7,42 (m, 6H), 5,22-5,43 (m, 2H), 4,50 (s.a., -NH, 2H), 3,65 (t, J = 6,2 Hz, 2H), 3,10-3,40 (m, 4H), 1,96-2,06 (m, 4H), 1,20-1,60 (m, 14H), 1,03 (s, 9H), 0,88 (t, J = 7,3 Hz, 3H); 13C-RMN (75 MHz) 8 159,08, 136,03, 134,02, 130,03, 128,26, 126,82, 63,28, 40,67, 40,47, 32,91, 30,48, 29,28, 27,26, 27,22, 26,93, 26,02, 22,64, 19,39, 14,26. EMAR calc. para Ca2Ha1N2O2Si [M+1]+ 523,3720, hallado 523,3724.
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1-(10-Hidroxidec-5(Z)-enil)-3-n-pentilurea. Se obtuvo con un rendimiento del 94% como un aceite incoloro. CCF: EtOAc/hexanos (7:3), Rf ~ 0,30; 1H-RMN (400 MHz) 8 5,30-5,43 (m, 2H), 4,28 (s.a., 2H), 3,63 (q, J = 4,6 Hz, 2H), 3,10-3,20 (m, 4H), 2,00-2,10 (m, 4H), 1,24-1,64 (m, 14H), 0,88 (t, J = 7,3 Hz, 3H); 13C-RMN (75 MHz) 8 158,67, 130,17, 129,88, 62,71, 40,59, 40,34, 32,52, 30,23, 30,0, 29,32, 27,09, 26,96, 25,99, 22,52, 14,25. EMAR calc. para C16H33N2O2 [M+1]+ 285,2542, hallado 285,2545.
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Acido 2-(10-(3-n-pentilureido)dec-5(Z)-eniloxi)acetico (4). Se agito a 10°C una disolucion de 1-(10-hidroxidec-5(Z)- enil)-3-n-pentilurea (66 mg, 0,23 mmol) y sulfato de tetra-n-butilamonio (39 mg, 0,12 mmol) en benceno/KOH ac. al 50% (4 ml, 1:1). Tras 15 min, se anadio 2-bromoacetato de terc-butilo (136 mg, 0,70 mmol) a la mezcla de reaccion y se agito a la misma temperatura durante 1 h adicional. Entonces se diluyo la mezcla de reaccion con agua (10 ml) y se extrajo en EtOAc (2 x 10 ml). Se lavaron los extractos organicos combinados con agua, salmuera y se secaron (Na2SO4) y se concentraron a vacfo. Se disolvio el residuo en CH2Ch (4 ml), se enfrio hasta 0°C, y se anadio acido trifluoroacetico (1 ml) gota a gota. Se diluyo la mezcla de reaccion con mas CH2Cl2 (5 ml), se lavo con agua, salmuera y se seco (Na2SO4). Se purifico el residuo mediante cromatograffa en columna de SiO2 para dar el analogo 4 (37 mg, 47%) como un solido pegajoso. CCF: EtOAc, Rf ~ 0,30; 1H-RMN (400 MHz) 8 5,30-5,42 (m, 2H), 4,06 (s,
2H), 3,54 (t, J = 6,6 Hz, 2H), 3,07-3,15 (m, 4H), 2,00-2,12 (m, 4H), 1,21-1,66 (m, 14H), 0,88 (t, J =7,3 Hz, 3H); 13C- RMN (75 MHz) 8 174,32, 160,08, 130,33, 129,71, 71,60, 68,12, 41,11, 41,02, 29,68, 29,40, 29,17, 28,96, 27,20, 27,07, 26,64, 25,96, 22,55, 14,20. EMAR calc. para C18H35N2O4 [M+1]+ 343,2597, hallado 343,2594.
5 Ejemplo 2: Sintesis de (S)-2-(13-(3-pentilureido)tridec-8(Z)-enamido)succinato de sodio (NIH-F=EET A o JLJ)
Tal como se expone en las figuras 16A y 16B, la sintesis de EET A es tal como sigue:
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7-Bromoheptano-1-ol1 (2): Se calentaron heptano-1,7-diol (36,0 g, 272 mmol; Alfa Aesar) y HBr ac. al 48% (38 ml, 0,9 equiv.) a reflujo en benceno (400 ml) con eliminacion de agua usando un aparato de Dean-Stark. Tras 16 h, se eliminaron todos los compuestos volatiles a vacio y se purifico el residuo mediante cromatografia en columna de SiO2 usando un gradiente de EtOAc al 10-30%/hexanos como eluyente para dar 7-bromoheptan-1-ol (26,22 g, 62%) 15 como un aceite incoloro. CCF: EtOAc al 50%/hexanos, Rf « 0,40; 1H-RMN (400 MHz, CDCla) 8 3,61 (t, 2H, J = 7,1 Hz), 3,39 (t, 2H, J = 6,8 Hz), 1,80-1,88 (m, 2H), 1,52-1,58 (m, 2H), 1,30-1,46 (m, 6H).
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20 2-(7-Bromoheptiloxi)tetrahidro-2H-pirano2 (3): Se anadio dihidropirano (5,20 g, 6,11 mmol) a una disolucion a 0°C con agitacion de 7-bromoheptan-1-ol (2) (11,0 g, 56,7 mmol) y una cantidad catalitica de PTSA en CH2Cl2. Tras agitar a t.a. durante 12 h, se diluyo la mezcla de reaccion con CH2Cl2 (200 ml), se lavo con agua (100 ml x 2), salmuera (100 ml x 3), se seco sobre sulfato de sodio anhidro y se evaporo. Se purifico el residuo mediante cromatografia en columna de gel de sflice usando un gradiente de acetato de etilo al 10-20%/hexano como eluyente 25 para dar 2-(7-bromoheptiloxi)tetrahidro-2H-pirano (3) (14,50 g, 92%) como un aceite incoloro. CCF: EtOAc al 10%/hexanos, Rf « 0,55; 1H-RMN (400 MHz, CDCla) 8 4,58-4,56 (m, 1H), 3,84-3,88 (m, 1H), 3,68-3,77 (m, 1H), 3,463,51 (m, 1H), 3,33-3,43 (m, 3H), 1,80-1,81 (m, 2H), 1,30-1,62 (m, 14 H).
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terc-Butil(hex-5-in-1-iloxi)difenilsilano3 (5): Se anadio terc-butildifenilclorosilano (3,2 ml, 12,4 mmol) gota a gota a una
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disolucion a 0°C, con agitacion de 5-hexin-1-ol (4, 1,07 g, 10,9 mmol) e imidazol anhidro (1,84 g, 27,1 mmol) en CH2CI2 anhidro (20 ml) bajo una atmosfera de argon. Tras completar la adicion, se agito la mezcla de reaccion a temperatura ambiente durante 12 horas, entonces se extinguio con una disolucion ac. saturada de NH4Cl (50 ml) y se extrajo con Et2O (3 x 50 ml). Se lavaron los extractos etereos combinados con disolucion ac. saturada de NaCl (25 ml), se secaron sobre NaSO4 y se elimino el disolvente a vacfo. Se purifico el residuo mediante cromatograffa ultrarrapida (acetato de etilo al 5%/hexano) para dar 1-terc-butildifenilsililoxi-hex-5-ino (5) (3,54 g, 10,5 mmol, 96%) como un aceite incoloro. CCF: EtOAc al 5%/hexanos, Rf “ 0,65; 1H-RMN (400 MHz, CDCl3) 8 7,77-7,65 (m, 4H), 7,40-7,30 (m, 6H), 3,70 (t, 2H, J = 5,6 Hz), 2,40-2,25 (m, 2H), 2,05 (t, 1H, J = 2,8 Hz), 1,90-1,70 (m, 4H), 1,18 (s, 9H).
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terc-Butildifenil((tetrahidro-2H-piran-2-iloxi)tridec-5-in-1-il)oxi)silano (6): Se anadio n-butil-litio (14,3 ml, 35,9 mmol, disolucion 2,5 M en hexanos) gota a gota a una disolucion a -78°C de terc-butil(hex-5-iniloxi)difenilsilano (10 g, 29,76 mmol) en THF y HMPA seca (4:1, 200 ml) bajo una atmosfera de argon. Tras 30 min, se calento la mezcla de reaccion hasta 0°C a lo largo de un periodo de 1 h y se mantuvo ahf durante 2 h. Volvio a enfriarse la mezcla de reaccion hasta -78°C y se anadio una disolucion en THF (50 ml) de bromuro 3 (8,20 g, 29,3 mmol). Se dejo calentar la temperatura de reaccion hasta t.a. a lo largo de 3 h y se mantuvo a esta temperatura durante 12 h antes de extinguirse por la adicion de disolucion ac. saturada de NH4Cl (5 ml). Se ajusto el pH de la mezcla de reaccion a ~ 4 usando acido oxalico 1 M y se extrajo con EtOAc (2 x 250 ml). Se lavaron secuencialmente los extractos organicos combinados con agua (2 x 100 ml) y salmuera (100 ml), se seco la fase organica usando Na2SO4 anhidro y se concentro a vacfo. Se purifico el residuo mediante cromatograffa en columna de gel de sflice usando EtOAc al 10%/hexanos para dar 6 (12,4 g, 78%) como un aceite espeso incoloro. 1H-RMN (CDCl3, 400 MHz) 8 7,68-7,64 (m, 4H), 7,42-7,34 (m, 6H), 4,57 (t, J = 4,3 Hz, 1H), 3,86-3,78 (m, 1H), 3,65 (t, J = 6,3 Hz, 3H), 3,54-3,32 (m, 4H), 2,222,10 (m, 4H), 1,84-1,24 (m, 18H), 1,04 (s, 9H); 13C-RMN (CDCl3, 100 MHz) 8 135,82, 135,77, 134,25, 129,72, 127,85, 127,80, 127,77, 99,09, 99,05, 80,59, 80,22, 67,84, 67,74, 63,70, 62,58, 62,54, 31,00, 25,73, 19,92, 19,44, 18,97, 18,77.
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13-(terc-Butildifenilsililoxi)tridec-8-in-1-ol (7): Se agito una disolucion de 6 (15,0 g, 0,59 mmol) y una cantidad catalftica de PPTS (10 mg) en MeOH (20 ml) a 0°C durante 10 h, entonces se extinguio con una disolucion ac. saturada de NaHCO3. Se evaporo la mayor parte del metanol a vacfo. Se diluyo el residuo con agua (100 ml) y se extrajo con acetato de etilo (100 ml x 3). Se concentraron los extractos organicos combinados a presion reducida y se purifico el residuo mediante cromatograffa en columna de gel de sflice usando acetato de etilo al 20-30%/hexano como eluyente para dar 7 como un aceite incoloro (8,80 g, 78,7%). CCF: EtOAc/hexanos al 20%, Rf “ 0,36; 1H-RMN (CDCla, 400 MHz) 8 7,68-7,65 (m, 4H), 7,41-7,35 (m, 6H), 3,66-3,62 (m, 4H), 2,10-1,95 (m, 4H), 1,64-1,50 (m, 2H), 1,48-1,20 (m, 10H), 1,04 (s, 9H); 13C-RMN (CDCl3, 100 MHz) 8 135,79, 135,77, 134,26, 129,73, 127,84, 127,83,
127,80, 127,78, 80,56, 80,28, 63,72, 63,22, 32,96, 31,90, 29,01, 25,78, 19,45, 18,95, 18,77.
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OTBDPS
OTBDPS
Ni 0Ac 2-4H20
Etilendiamina
NaBH
13-(terc-Butildifenilsililoxi)tridec-8(Z)-en-1-ol (8): En una matraz redondo de dos bocas, se anadio NaBH4 (176 mg, 4,65 mmol) en pequenas proporciones a una disolucion de Ni(OAc)2'4H2O (1,16 g, 9,3 mmol) en etanol absoluto (10 ml) bajo una atmosfera de hidrogeno (1 atm). Tras 15 min, se anadio etilendiamina seca (0,56 g, 9,3 mmol)
seguido despues de 15 min adicionales de una disolucion de alcohol 7 (8,0 g, 18,7 mmol) en etanol absoluto (25 ml). Se monitorizo la reduccion mediante CCF hasta que se completo y entonces se diluyo con eter (50 ml), se hizo pasar a traves de un lecho pequeno de gel de sflice para eliminar las impurezas organicas. Se concentro el filtrado a presion reducida para dar 8 como un aceite incoloro, viscoso (7,60 g, 95%). CCF: EtOAc al 50%/hexano, Rf “ 0,42;
5 1H-RMN (CDCla, 400 MHz) 8 7,68-7,65 (m, 4H), 7,41-7,35 (m, 6H), 5,40-5,30 (m, 2H), 3,58-3,65 m, 4H), 1,88-2,10
(m, 4H), 1,50-1,61 (m, 4H), 1,25-1,45 (m, 10H), 1,04 (s, 9H); 13C-RMN (CDCh, 100 MHz) 8 135,83, 134,36, 130,30, 129,98, 129,77, 127,85, 64,09, 63,17, 32,48, 29,96, 29,53, 27,49, 27,37, 27,21, 27,16, 26,23, 26,01, 19,50.
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Acido 13-(terc-butildifenilsililoxi)tridec-8(Z)-enoico (9): Se anadio reactivo de Jones (5,8 ml de una disolucion 10 N en agua) en acetona (25 ml) a una disolucion a -40°C, con agitacion de alcohol 8 (5,0 g, 11,8 mmol) en acetona (75 ml). Tras 1 h, se calento la mezcla de reaccion hasta -10°C y se mantuvo durante otras 2 h, entonces se extinguio con un exceso de isopropanol (5,0 equiv.). Se eliminaron las sales de cromo verdes mediante filtracion y se lavo la torta de 15 filtro con acetona. Se concentraron los lavados y filtrados combinados a vacfo y se disolvio el residuo resultante en EtOAc (100 ml), se lavo con agua (50 ml), se seco sobre sulfato de sodio anhidro y se concentro a vacfo. Se purifico el residuo mediante cromatograffa en columna de SiO2 usando EtOAc al 15%/hexanos como eluyente para dar 9 (3,84 g, 74,20%) como un lfquido. CCF: EtOAc al 40%/hexanos, Rf « 0,40. 1H-RMN (CDCla, 400 MHz) 8 7,68-7,64 (m, 4H), 7,43-7,34 (m, 6H), 5,40-5,26 (m, 2H), 3,66 (t, J = 6,6 Hz, 2H), 2,35 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 2,10-1,90 (m, 4H) 20 1,64-1,50 (m, 2H), 1,48-1,20 (m, 10H), 1,04 (s, 9H); 13C-RMN (CDCh, 100 MHz) 8 180,62, 135,81, 134,34, 130,10,
130,07, 129,73, 127,82, 127,80, 127,79, 64,06, 32,44, 29,12, 27,38, 27,18, 27,12, 26,19, 24,87, 19,47.
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25 13-Hidroxitridec-8(Z)-enoato de metilo4 (10): Se agito una disolucion de 9 (7,60 g, 3,49 mmol) y acido p- toluenosulfonico (50 mg; PTSA) en MeOH (50 ml) a temperatura ambiente durante 4 h y entonces se concentro a vacfo. Se purifico el residuo mediante cromatograffa en columna de SiO2 usando EtOAc al 25%/hexanos como eluyente para dar 10 (3,41 g, 87%) como un aceite incoloro. CCF: EtOAc al 40%/hexanos, Rf “ 0,35; 1H-RMN (CDCfa, 400 MHz) 8 5,40-5,36 (m, 2H), 3,60-3,66 (m, 5H), 2,30 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 2,10-1,90 (m, 4H) 1,64-1,50 (m, 30 2H), 1,48-1,20 (m, 10H).
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13-Azidotridec-8(Z)-enoato de metilo5 (11): Se anadio azodicarboxilato de diisopropilo (DIAD; 3,0 g, 14,8 mmol) gota 35 a gota a una disolucion a -20°C de trifenilfosfina (3,9 g, 14,8 mmol) en THF seco (100 ml) bajo una atmosfera de argon. Tras agitar durante 10 min, se anadio una disolucion de 10 (3,0 g, 4,75 mmol) en THF anhidro (5 ml) gota a gota. Tras 30 min a -20°C, se calento la mezcla de reaccion hasta 0°C y se anadio difenilfosforilazida (DPPA, 4,0 g, 14,5 mmol) gota a gota. Tras agitar a temperatura ambiente durante 6 h, se extinguio la reaccion con agua (3 ml), se diluyo con eter (100 ml) y se lavo con salmuera (40 ml). Se extrajo de nuevo la fase acuosa con eter (2 x 150 ml). Se 40 secaron los extractos organicos combinados sobre Na2SO4 y se concentraron a presion reducida. Se purifico el
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residuo mediante cromatograffa en columna de SiO2 usando EtOAc al 5%/hexanos como eluyente para dar 11 (2,72 g, 82%) como un aceite amarillo claro. CCF: EtOAc al 10%/hexanos, Rf “ 0,45; 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz) 8 5,405,34 (m, 2H), 3,64 (s, 3H), 3,26 (t, J = 6,7 Hz, 2H), 2,30 (t, J = 7,7 Hz, 2H) 2,10-1,98 (m, 4 H) 1,66-1,54 (m, 2H), 1,481,24 (m, 10H).
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13-(3-Pentilureido)tridec-8(Z)-enoato de metilo6 (12): Se anadio trifenilfosfina (2,7 g, 11,0 mmol) a una disolucion a temperatura ambiente de 11 (1,4 g, 5,24 mmol) en THF seco (25 ml). Tras 2 h, se anadio agua (200 ml) y se continuo agitando durante otras 8 h. Entonces se diluyo la mezcla de reaccion con EtOAc (100 ml), se lavo con agua (20 ml) y salmuera (25 ml). Se extrajeron de nuevo las fases acuosas con EtOAc (2 x 30 ml). Se secaron los extractos organicos combinados sobre Na2SO4, se concentraron a presion reducida y se secaron adicionalmente a alto vacfo durante 4 h. Se uso la amina bruta en la siguiente etapa sin purificacion adicional. Ref. de procedimiento: S. Chandrasekhar; S. S. Sultana; N. Kiranmai; Ch. Narsihmulu Tetrahedron Lett. 2007: 48, 2373.
Se anadio isocianato de n-pentilo (0,78 g, 6,9 mmol) a una disolucion a temperatura ambiente de la amina bruta anterior (1,4 g, 5,8 mmol) en THF seco (25 ml). Tras 6 h, se concentro la mezcla de reaccion a presion reducida y se purifico el residuo mediante cromatograffa en columna de SiO2 usando EtOAc al 30%/hexanos como eluyente para dar 12 (1,70 g, 85%) como un aceite viscoso, incoloro. CCF: EtOAc al 50%/hexanos, Rf “ 0,40; 1H-RMN (CdCI3, 400 MHz) 8 5,40-5,26 (m, 2H), 4,46-4,32 (m, NH, 2H), 3,66 (s, 3H), 3,18-3,10 (m, 4H), 2,34 (t, J = 7,7 Hz 4H), 2,06-1,94 (m, 4H), 1,66-1,56 (m, 2H), 1,54-1,42 (m, 14 H), 0,88 (t, J = 7,0 Hz, 3H).
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Acido metil-13-(3-pentilureido)tridec-8(Z)-enoico7 (13): Se anadio LiOH (6,2 ml, disolucion acuosa 2,0 M, 3,0 equiv.) a una disolucion a 0°C de 12 (1,80 g, 5,8 mmol) en THF (25 ml) y H2O desionizada (4 ml). Tras agitar a temperatura ambiente durante la noche, se enfrio la mezcla de reaccion hasta 0°C, se ajusto el pH a 4,0 con acido oxalico ac. 1 M, y se extrajo con acetato de etilo (2 x 20 ml). Se lavaron los extractos combinados con agua (30 ml), salmuera (25 ml), se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se concentraron a vacfo. Se purifico el residuo mediante cromatograffa en columna de SiO2 usando EtOAc al 25%/hexanos como eluyente para dar 13 (1,48 g, 86%) como un solido blanco, p.f. = 67,1°C. CCF: EtOAc al 80%/hexanos, Rf « 0,30; 1H-RMN (CDCI3, 400 MHz) 8 5,40-5,26 (m, 2H), 3,17-3,10 (m, 4H), 2,32 (t, J = 6,7 Hz, 2H), 2,09-1,95 (m, 4H), 1,65-1,48 (m, 6H), 1,44-1,22 (m, 12H), 0,89 (t, J = 7,1 Hz, 3H); 13C- RMN (CDCI3, 75 MHz) 8 178,5, 159,6, 130,5, 129,5, 40,9, 40,8, 34,4, 29,9, 29,8, 29,2, 28,7, 28,5, 27,2, 26,7, 24,9, 22,6, 14,2.
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(S)-2-(13-(3-Pentilureido)tridec-8(Z)-enamido)succinato (14): Se anadieron ester dimetflico del acido L-aspartico (38 mg, 0,191 mmol) y HATU (67 mg, 0,176 mmol) a una disolucion con agitacion de 13 (50 mg, 0,147 mmol) y DIPEA (74 mg, 0,573 mmol) en DMF anhidra (2 ml) bajo una atmosfera de argon. Tras 5 min, se anadio 1-etil-3-(3-
dimetilaminopropil)carbodiimida (33,8 mg, 0,176 mmol; EDCI) como un solido. Tras agitar durante 12 h a temperatura ambiente, se diluyo la mezcla de reaccion con EtOAc (15 ml), se lavo con agua (5 ml) y salmuera (10 ml). Volvieron a extraerse las fases acuosas combinadas con EtOAc (3 x 10 ml). Se secaron los extractos organicos combinados sobre Na2SO4, se concentraron a presion reducida y se purifico el residuo mediante cromatograffa en 5 columna de SiO2 usando EtOAc al 50%/hexanos como eluyente para dar 14 (60 mg, 84%) como un aceite viscoso. CCF: EtOAc al 60%/hexanos, Rf « 0,35; 1H-RMN (CDCh, 400 MHz) 8 6,64 (d, J= 7,9 Hz, 1H), 5,38-5,30 (m, 2H), 4,90-4,82(m, 1H), 4,58-4,44 (m, 2H), 3,75 (s, 3H), 3,66 (s, 3H), 3,20-3,10 (m, 4H), 3,04 (dd, J1 = 4,3 Hz, J2 = 13,1 Hz, 1H), 2,84 (dd, J1 = 4,6 Hz, J2 = 12,8 Hz, 1H), 2,22 (t, J = 6,3 Hz, 2H), 2,05-1,98 (m, 4H), 1,70-1,60 (m, 2H), 1,501,20 (m, 16H), 0,88 (t, J = 6,7 Hz, 3H).
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Acido (S)-2-(13-(3-pentilureido)tridec-8(Z)-enamido)succfnico (15): Se anadio una disolucion acuosa de LiOH (2 ml, disolucion 2 M, 6,0 equiv.) a una disolucion a 0°C de 14 (60 mg, 0,124 mmol) en THF (8 ml) y H2O desionizada 15 (2 ml). Tras agitar a temperatura ambiente durante la noche, se enfrio la mezcla de reaccion hasta 0°C, se ajusto el
pH a 4,0 con acido oxalico ac. 1 M y se extrajo con acetato de etilo (2 x 10 ml). Se lavaron los extractos combinados con agua (5 ml), salmuera (5 ml), se secaron sobre Na2SO4 anhidro, y se concentraron a vacfo. Se purifico el residuo mediante cromatograffa en columna de SiO2 usando EtOAc al 70-90%/hexanos como eluyente para dar 15 (48 mg, 85%) como un aceite incoloro, viscoso. CCF: MeOH al 5%/EtOAc, Rf “ 0,20; 1H-RMN (CD3OD, 400 MHz) 8 5,38-5,30 20 (m, 2H), 4,72 (t, J = 4,3 Hz, 1H), 3,12-3,05 (m, 4H), 2,90-2,72 (m, 2H), 2,22 (t, J = 7,7 Hz, 2H), 2,10-1,98 (m, 4H),
1,60-1,22 (m, 18H), 1,20 (t, J = 7,1 Hz, 3H); 13C-RMN (CDCla, 75 MHz) 8 174,9, 173,0, 172,8, 160,1, 129,9, 129,3, 51,8, 49,8, 39,8, 39,7, 35,7, 35,6, 29,9, 29,8, 29,5, 29,0, 28,8, 26,9, 26,7, 25,7, 22,3, 13,2.
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(S)-2-(13-(3-Pentilureido)tridec-8(Z)-enamido)succinato de disodio (16): Se anadio bicarbonato de sodio (93 mg, 1,1 mmol) a una disolucion con agitacion de 15 (100 mg, 0,22 mmol) en THF/H2O (4:1, 5 ml) a t.a. Tras 2 h, se elimino el THF a vacfo y se agito la fase acuosa restante con bioperlas SM-2 de BioRad (Bio-Rad, malla de 20-50; 2 g). Tras 1 h, se recogieron las bioperlas mediante filtracion en un embudo de vidrio sinterizado, se lavaron con agua 30 (5 ml x 2) y finalmente con etanol al 95% (20 ml x 3). La evaporacion de los lavados con etanol a vacfo dio 16 (72
mg, 84%) como un solido blanco, p.f. = 258,5°C. CCF: MeOH al 10%/CH2Cl2, Rf ~ 0,15; 1H-RMN (CD3OD, 500 MHz) 8 5,25-5,23 (m, 2H), 4,40 (t, 1H, J = 4,0), 3,01-2,97 (m, 4H), 2,58-2,56 (m, 2H), 2,13 (t, 2H, J = 7,0), 1,96-1,94 (m, 4H), 1,51-1,47 (m, 2H), 1,30-1,19 (m, 16H), 0,83 (t, 3H, J = 7,0); 13C-RMN (75 MHz, CDCla) 8 178,52, 178,38, 173,99, 160,21, 129,93, 129,37, 52,66, 39,81, 39,74, 36,27, 29,50, 28,93, 26,76, 22,34, 13,26.
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Ejemplo 3: Sfntesis de N-isopropil-N-(5-(2-pivalamidobenzofd1tiazol-4-iloxi)pentil)heptanamida (MV=EET-B o SRD-2)
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Tal como se expone en la figura 15, la sfntesis de EET B es tal como sigue:
5-(terc-Butildifenilsililoxi)pentan-1-ol (2): Se anadio imidazol (0,65 g, 9,60 mmol) a una disolucion con agitacion de pentan-1,5-diol (1,00 g, 9,60 mmol) en diclorometano seco (10 ml) a 0°C bajo una atmosfera de argon, seguido de la adicion gota a gota de terc-butilclorodifenilsilano (3,85 ml, 9,60 mmol) en ChhCh (2 ml). Se dejo que la reaccion alcanzara lentamente la temperatura ambiente. Tras 12 horas, se lavo la mezcla de reaccion con agua (2 x 30 ml), salmuera (20 ml), se seco sobre Na2SO4 y se concentro a presion reducida. Se purifico el residuo mediante cromatograffa ultrarrapida en SiO2 usando acetato de etilo al 30%/hexano como eluyente para dar 2 (1,35 g, 46%), SM recuperadas y compuesto diprotegido. CCF: EtOAc al 30%/hexanos, Rf ~ 0,38; 1H-RMN (CDCl3, 400 MHz) 8 7,67-7,62 (m, 4H), 7,45-7,35 (m, 6H), 3,67 (t, 2H, J = 6,0 Hz), 3,52 (t, 2H, J = 6,7 Hz), 2,03-1,93 (m, 2H), 1,72-1,64 (m, 4H), 1,04 (s, 9H).
I2 TPP, Imidazol
HO'^s^V'v-X^OTBDPS -------:----------------------------*- 1 OTBDPS
DCM
terc-Butil(5-yodopentiloxi)difenilsilano (3): Se anadieron imidazol (310 mg, 4,40 mmol), yodo (440 mg, 3,5 mmol) y una disolucion de 2 (1 g, 2,98 mmol) en CH2Cl2 (2 ml) secuencialmente a una disolucion a 0°C de PPh3 (450 mg, 3,5 mmol) en CH2Cl2 (15 ml) y se mantuvo en la oscuridad. Tras 2 h, se extinguio la mezcla de reaccion mediante la adicion de Na2S2O3 ac. (5 ml) al 20%. Se extrajo la fase acuosa con CH2Ch (2 x 50 ml). Se lavaron los extractos organicos combinados con salmuera (30 ml), se secaron sobre Na2SO4 anhidro y se elimino el disolvente a vacfo. Se purifico el residuo mediante cromatograffa de columna cuidadosa usando EtOAC al 5%/hexano para dar yoduro 3 (1,25 mg, 92%). CCF: EtOAc al 10%/hexano, Rf ~ 0,85; 1H-RMN (CDCl3, 400 MHz) 8 7,67-7,62 (m, 4H), 7,45-7,35 (m, 6H), 3,67 (t, 2H, J = 6,0 Hz), 3,41 (t, 2H, J = 6,7 Hz), 2,03-1,93 (m, 2H), 1,72-1,64 (m, 4H), 1,04 (s, 9H).
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5-(terc-Butildifenilsililoxi)-N-isopropilpentan-1-amina (4): Se calentaron K2CO3 (1,50 g, 11,05 mmol), isopropilamina (0,65 ml, 11,05 mmol) y yoduro 3 (2,50 g, 5,83 mmol) en THF seco (15 ml) a 66°C en un tubo sellado bajo una atmosfera de argon. Tras 12 h, se anadio agua (5 ml) a la mezcla de reaccion que se extrajo entonces con EtOAc (3 x 50 ml). Se secaron los extractos organicos combinados sobre MgSO4 y se concentraron a presion reducida para dar 4 como un lfquido incoloro (1,90 g, 92%) suficientemente puro como para usarse sin purificacion adicional. CCF: MeOH/CH2Cl2 (1:4), Rf ~ 0,30; 1H-RMN (400 MHz) 8 7,65-7,67 (m, 4H), 7,30-7,40 (m, 6H), 3,65 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 2,70-2,82 (m, 1H), 2,55 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 1,50-1,64 (m, 2H), 1,32-1,50 (m, 4H), 1,05 (d, J = 5,8 Hz, 3H), 1,04 (s, 9H); 13C-RMN (100 MHz) 8 135,68, 134,21, 129,63, 127,70, 63,95, 48,81, 47,64, 32,60, 30,27, 27,0, 23,76, 23,15, 19,34.
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N-(5-(terc-Butildifenilsililoxi)pentil)-N-isopropilheptanamida (5): Se anadieron acido heptanoico (2,06 g, 15,86 mmol) y diisopropiletilamina (2,72 ml, 21,14 mmol; DlPEA) a una disolucion con agitacion de la amina 4 (4,00 g, 10,57 mmol) en DMF anhidra (20 ml) bajo una atmosfera de argon. Tras 5 min, se anadio 1-etil-3-(3- dimetilaminopropil)carbodiimida (3,04 g, 15,86 mmol; EDCI) como un solido. Tras agitar durante 12 h a temperatura ambiente, se diluyo la mezcla de reaccion con EtOAc (100 ml), se lavo con agua (2 x 30 ml) y salmuera (20 ml).
Volvieron a extraerse las fases acuosas combinadas con EtOAc (3 x 30 ml). Se secaron los extractos organicos combinados sobre Na2SO4, se concentraron a presion reducida y se purifico el residuo mediante cromatograffa en columna de SiO2 usando EtOAc al 30%/hexanos como eluyente para dar amida 5 (4,75 g, 91%) como un aceite viscoso. CCF: EtOAc/hexanos (3:7), Rf ~ 0,60; 1H-RMN (400 MHz, mezcla 1:1 de rotameros) 8 7,65-7,67 (m, 4H), 5 7,30-7,40 (m, 6H), 4,62-4,72 y 3,96-4,80 (m, 1H, rotameros), 3,62 y 3,68 (t, J = 4,8 Hz, 2H, rotameros), 3,02 y 3,16 (t,
J = 5,2 Hz, 2H, rotameros), 2,38 y 2,24 (t, J = 5,3 Hz, 2H, rotameros), 1,50-1,68 (m, 6H), 1,26-1,44 (m, 8H), 1,18 y 1,12, (d, J = 7,3 Hz, 6H, rotameros), 1,03 y 1,04 (s, 9H, rotameros), 0,88 (t, J = 7,3 Hz, 3H); 13C-RMN (100 MHz, mezcla 1:1 de rotameros) 8 173,38, 172,76, 135,80, 135,78, 134,36, 134,12, 129,85, 129,73, 127,88, 127,82, 64,22, 63,68, 48,43, 45,62, 43,64, 41,27, 34,13, 34,05, 32,61, 32,36, 31,96, 31,93, 31,51, 29,63, 29,47, 27,10, 27,03, 25,94, 10 25,78, 24,03, 23,77, 22,81, 21,63,20,78, 19,47, 14,33, 14,28.
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N-(5-Hidroxipentil)-N-isopropilheptanamida (6): Se agito una disolucion de 5 (4,75 g, 9,02 mmol) y acido p15 toluenosulfonico en MeOH (50 ml) a t.a. durante 12 h, entonces se extinguio con NaHCO3 solido y se filtro. Se evaporo el filtrado a vacfo y se disolvio el residuo en acetato de etilo (50 ml). Se lavo la fase de acetato de etilo con agua (2 x 50 ml), salmuera (50 ml), se seco sobre Na2SO4 anhidro y se concentro a presion reducida. Se purifico el residuo mediante cromatograffa ultrarrapida en columna de gel de sflice usando acetato de etilo al 50-60%/hexano como eluyente para dar alcohol 6 (2,35 g, 93%) como un lfquido viscoso, incoloro. CCF: EtOAc/hexanos (1:1), Rf ~ 20 0,30; 1H-RMN (400 MHz, mezcla 55/45 de rotameros) 8 4,58-4,66 y 3,96-4,08 (m, 1H, rotameros), 3,56 y 3,70 (t, J =
5,4 Hz, 2H, rotameros), 3,02 y 3,16 (t, J = 5,2 Hz, 2H, rotameros), 2,38 y 2,26 (t, J = 6,3 Hz, 2H, rotameros), 1,501,64 (m, 6H), 1,22-1,40 (m, 8H), 1,13 y 1,09 (d, J = 7,5 Hz, 6H, rotameros), 0,84 (t, J = 7,3 Hz, 3H); 13C-RMN (100 MHz, mezcla 55/45 de rotameros) 8 172,81, 62,66, 62,60, 48,41, 45,55, 43,56, 41,04, 34,08, 34,0, 32,46, 32,43, 31,86, 31,57, 29,40, 25,87, 25,70, 23,77, 23,73, 22,75, 21,57, 20,72, 14,26.
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N-(5-Bromopentil)-N-isopropilheptanamida (7): Se anadio TPP (4,45 g, 9,34 mmol) a una disolucion a 0°C de alcohol 6 (2,00 g, 7,78 mmol) en C^Ch seco (50 ml). Tras 10 min, se anadio CBr4 (3,10 g, 9,34 mmol) y se continuo 30 agitando a 0°C. Tras 2 h, se anadio agua (20 ml) y se extrajo la mezcla de reaccion con EtOAc (33 x 50 ml). Se
lavaron los extractos combinados con agua (2 x 20 ml), salmuera (20 ml), se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron a presion reducida. Se purifico el residuo mediante cromatograffa en columna de SiO2 usando acetato de etilo al 30-35%/hexano para dar 7 (2,20 g, 91%). CCF: EtOAc/hexanos (3:7), Rf ~ 0,40; 1H-RMN (400 MHz, mezcla 45/55 de rotameros) 8 4,60-4,70 y 3,96-4,10 (m, 1H, rotameros), 3,46 y 3,36 (t, J = 5,8 Hz, rotameros), 3,0235 3,10 (m, 2H), 2,30 y 2,22 (t, J = 7,9 Hz, 2H), 1,80-1,97 (m, 2H), 1,40-1,70 (m, 6H), 1,20-1,40 (m, 6H), 1,16 y 1,10, (d,
J = 7,3 Hz, 6H, rotameros), 0,86 (t, J = 7,3 Hz, 3H); 13C-RMN (100 MHz, rotameros) 8 172,79, 172,39, 48,17, 45,47, 43,32, 40,70, 33,89, 33,87, 33,49, 32,48, 32,30, 31,81, 31,78, 30,78, 29,27, 28,74, 26,05, 25,84, 25,69, 25,54, 22,64, 21,47, 20,62, 14,17.
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Isopropil-N-(5-(2-pivalamidobenzo[d]tiazol-4-iloxi)pentil)heptanamida (11): Se calento una disolucion de bromuro 7 (0,35 g, 1,09 mmol), N-(4-hidroxibenzo[d]tiazol-2-il)pivalamida (10) (0,27 g, 1,09 mmol) y K2CO3 (0,30 g, 2,18 mmol) en DMF (10 ml) a 80°C. Tras 4 h, se enfrio la mezcla de reaccion hasta t.a., se anadio agua (5 ml) y se extrajo la 45 mezcla usando acetato de etilo (3 x 30 ml). Se lavaron los extractos organicos combinados con H2O (2 x 20 ml), salmuera (20 ml), se secaron sobre Na2SO4 y se filtraron. Se evaporo el filtrado a presion reducida y se purifico el residuo mediante cromatograffa en columna de gel de sflice (EtOAc al 50-70%/hexanos) para dar 11 (0,39 g, 72%)
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como un liquido viscoso. CCF: EtOAc/hexanos (7:3), Rf ~ 0,26; 1H-RMN (400 MHz, mezcla 45/55 de rotameros) 8 7,24 y 7,20 (d, J = 7,4 Hz, 1H, rotameros), 7,16 y 7,14 (dd, J = 7,4 Hz, J = 7,4 Hz, 1H, rotameros), 6,90 y 6,80 (d, J = 7,4 Hz, 1H, rotameros), 4,58-4,78 y 3,96-4,10 (m, 1H, rotameros), 4,02 (t, J = 6,3 Hz, 2H), 3,12 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 2,30 y 2,27 (t, J = 5,6 Hz, 2H, rotameros), 1,82-1,92 (m, 2H), 1,44-1,70 (m, 4H), 1,38-1,32 (m, 8H), 1,20 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 1,13 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 1,11 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 0,88-085 (m, 6H); 13C-RMN (100 MHz, mezcla 45/55 de rotameros) 8 189,64, 189,62, 173,04, 172,57, 172,55, 167,16, 167,09, 167,06, 146,85, 146,77, 146,67, 128,90, 128,87, 125,90, 125,79, 124,24, 124,13, 115,32, 115,06, 111,00, 110,09, 110,05, 68,97, 68,74, 58,50, 48,34, 45,62, 41,24, 41,10, 40,95, 34,10, 29,52, 29,15, 25,72, 24,28, 21,66, 20,76, 14,30.
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N-(4-Hidroxibenzo[d]tiazol-2-il)pivalamida (10). A una suspension de 2-aminobenzo[d]tiazol-4-ol (0,50 g, 3,01 mmol) en tolueno (10 ml) se le anadio cloruro de trimetilacetilo (3,60 ml, 30,10 mmol) a temperatura ambiente. Se agito la mezcla de reaccion a 115°C durante 22 h. Se evaporaron los disolventes y se sometio el residuo a destilacion azeotropica con EtOAc para dar 9 (0,78 g, 78%) como un solido tostado. Se trato la suspension del solido anterior (0,78 g) en MeOH (15 ml) con K2CO3 (0,20 g, 3,50 mmol) y se agito a temperatura ambiente durante 6 h. Se evaporo MeOH y se diluyo el residuo con H2O. Se neutralizo la mezcla resultante con HCl conc. hasta pH = 7 y se extrajo con EtOAc (3 x 30 ml). Se secaron las fases organicas combinadas sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron a vacfo para proporcionar 10 (0,48 g, 82%) como un solido tostado. CCF: EtOAc/hexanos (7:3), Rf ~ 0,32; 1H-RMN (400 MHz, CDCla) 8 10,25 (s.a., 1 H), 9,66 (s.a., 1 H), 7,33 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 7,09 (dd, J = 7,4, 7,4, Hz, 1H), 6,82 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 1,45 (s, 9H). 13C-RMN (100 MHz, CDCla) 8 177,15, 159,12, 148,10, 136,55, 133,00, 125,55, 113,40, 111,50, 39,70, 27,38.
Ejemplo 4: Examen in vitro de biblioteca de analogos de EET
En este ejemplo, los inventores llevaron a cabo tanto ensayos de relajacion vascular como un ensayo de inhibicion de la epoxido hidrolasa soluble usando los compuestos recien sintetizados. Se registraron los resultados de estos ensayos en las ultimas tres columnas de la tabla 1 anterior y la figura 14. Como resultado de estos ensayos, se seleccionaron cuatro compuestos, los compuestos 26, 20, 7 y 30 para pruebas in vivo adicionales, tal como se explica de manera resumida en los ejemplos posteriores.
Inhibicion de la epoxido hidrolasa soluble. Se sometieron a prueba compuestos para determinar su capacidad para inhibir la protefna epoxido hidrolasa soluble (sEH) recombinante. El ensayo utiliza ester ciano-(6-metoxi-naftalen-2- il)-metflico del acido (3-fenil-oxiranil)-acetico (PHOME), como sustrato sensible para sEH que puede usarse para monitorizar la actividad de enzimas tanto humanas como murinas. La hidrolisis del epoxido sustrato proporciona un producto altamente fluorescente, 6-metoxi-2-naftaldehfdo, que puede monitorizarse a longitudes de onda de excitacion y emision de 330 y 465 nm, respectivamente. Vease Wolf et al., Anal Biochem 355:71-80, 2006 PMID: 16729954. Se incubo sEH recombinante humana con sustrato y compuestos oscilando la concentracion entre 0,1 y 1000 nM. Se represento graficamente el porcentaje de actividad restante a cada concentracion y se determino una CI 50 (concentracion a la que existe una inhibicion del 50%) usando un software estadfstico.
Actividad vasodilatadora. Se midio la actividad vasorrelajante en arteria coronaria bovina. Se obtuvieron corazones bovinos y se disecciono la arteria coronaria descendente anterior izquierda y se limpio de tejido conjuntivo. Se cortaron vasos de 1 mm de diametro en anillos de 3 mm de anchura tal como se describio anteriormente (3, 27, 39). Se almacenaron los vasos en tampon de Krebs que consistfa (en mM) en NaCl 119, KCl 4,8, NaHCO3 24, KH2PO4 1,2, MgSO4 1,2, glucosa 11, EDTA 0,02 y CaCl2 3,2. Se suspendieron los vasos de un par de ganchos de acero inoxidable en una camara para organos con camisa de agua de 6 ml. Se lleno la camara para organos con tampon de Krebs y se burbujeo con el 95% de O2-el 5 % de CO2 a 37°C. Se anclo un gancho a una varilla de acero y el otro gancho a un transductor de fuerza (modelo FT-03C; Grass Instruments, West Warwick, RI). Se midio la tension del vaso mediante un amplificador en puente ET-400 y se adquirieron los datos con un convertidor analogico-digital MacLab 8e y software MacLab version 3.5.6 (AD Instruments, Milford, MA) y se almacenaron en un ordenador Macintosh para el analisis de datos posterior.
Se fijo la tension basal a un maximo de longitud-tension de 3,5 g y se equilibro durante 1,5 h. Se anadio KCl (40 mM) a la camara hasta que se mantuvieron contracciones maximas reproducibles. Se uso U-46619 (10-20 nM), un agonista del receptor de tromboxano, para contraer previamente los vasos desde la tension basal hasta entre el 50% y el 90% de la contraccion por KCl maxima. Se anadieron adiciones acumulativas de compuestos a la camara. Entre las curvas de concentracion-respuesta, se enjuagaron las camaras con tampon de Krebs nuevo, se administro KCl 40 mM para determinar la contraccion maxima y se enjuagaron los vasos. Se realizaron curvas de concentracion-
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respuesta consecutivas con 14,15-EET seguido por una curva de concentracion-respuesta a un compuesto. Siempre se repitio el experimento con el orden inverso de agonistas. En los experimentos de control con curvas de concentracion-respuesta consecutivas a 14,15-EET, la segunda curva de concentracion-respuesta con compuesto fue identica a la primera. Se represento la tension como un porcentaje de relajacion en el que el 100% de relajacion era la tension basal antes de administrar U-46619. Se represento graficamente la relajacion frente a la concentration de compuesto y se determino la CE50 usando software estadistico.
Resultados de ensayos de actividad inhibidora de sEH y vasodilatadora. Los resultados de las actividades inhibidoras de sEH y vasorrelajantes de los compuestos sintetizados 33 se resumen en la tabla 1. Usando la fraction farmacoforica de EET, se disenaron varios analogos de EET con resistencia a la autooxidacion, eterificacion y metabolismo de epoxido hidrolasa soluble (sEH) y solubilidad mejoradas. Se observo que estos compuestos presentan una actividad analoga a EET tal como resulta evidente a partir de su actividad vasorrelajante en arteria coronaria bovina y la actividad inhibidora de sEH (sEHi). Entre estos, se estudiaron cuatro compuestos entre aquellos que se disenaron reemplazando el grupo COOH del farmacoforo de EET por reemplazo isosterico o un sustituto heterociclico para determinar el posible efecto antihipertensivo. Los resultados de las actividades inhibidoras de sEH y vasorrelajantes de estos compuestos se resumen en la tabla 2 a continuation.
Tabla 2: Caracteristicas de los compuestos seleccionados para las pruebas en los modelos in vivo.
Compuesto
Estructura Relajacion vascular Actividad SEHi
% de relacion (10 pM)
CE50 (pM) CI50 (nM)
SRD-I-71-9
N^°\ L / A 109 0,32 >500
LGK-I-119-15
N---- H 119 0,18 11
JLJ-I-94-6
0 /=\ / \/\A COOH / 'Z 0 NHiuimiiA \ /\ A ^—cooh N—7 V “ H 91 1,6 392
MV-IV-110-20
N11 Ac sAn < "A N /Pr 96 1,3 >500
Ejemplo 5: Pruebas in vitro de cuatro compuestos usando modelos de hipertension en rata.
Medicion de tension arterial mediante telemetria. Para detectar de manera precisa cambios en la tension arterial y la frecuencia cardiaca, se implantaron transmisores de telemetria (Data Sciences Inc., St. Paul, MN) en ratas una semana antes del periodo experimental segun las especificaciones del fabricante mientras estaban bajo anestesia con pentobarbital. En resumen, se realizo una incision para dejar al descubierto la arteria femoral que se ocluyo para permitir la insertion del cateter del transmisor. Se fijo el cateter en su sitio con adhesivo tisular y se suturo el cuerpo de transmisor en su sitio y se cerro la linea de incision. Se permitio que se recuperasen las ratas de la cirugia y se devolvieron a su alojamiento individual. Se registro una tension arterial de nivel inicial antes del periodo experimental. Se registro de manera continua la tension arterial media durante todo el periodo experimental.
Hipertension por angiotensina. Se implantaron transmisores de telemetria en ratas Sprague-Dawley macho (225-275 g) tal como se ha descrito. Tras registrar la tension arterial basal, se implantaron bombas osmoticas (s.c.) para
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administrar angiotensina a una dosis de 60 ng/min. Se administraron analogos de EET mediante una bomba osmotica (2 mg/d, i.p.) y se monitorizo la tension arterial de manera continua.
Ratas espontaneamente hipertensas (SHR). Se implantaron transmisores de telemetrfa en SHR macho tal como se ha descrito. Tras el periodo de recuperacion de la cirugia, se registro la tension arterial media de nivel inicial. En esta serie de experimentos, se administraron analogos de EET mediante una bomba osmotica (2 mg/d, i.p.) y se monitorizo la tension arterial de manera continua.
Mediciones de excrecion de proteinas. Se colocaron los animales en una jaula metabolica y se recogio la orina en un tubo conico. Se almacenaron las muestras a -80°C hasta que sometieron a ensayo. Se evaluo la excrecion de proteinas en orina como un indice de lesion renal. Se determino la proteina mediante el metodo colorimetrico de Bradford y se determino la creatinina mediante el metodo colorimetrico con acido picrico.
En las siguientes publicaciones se explican adicionalmente de manera resumida metodos de analisis de orina y telemetrfa: Imig JD, Zhao X, Zaharis CZ, Olearczyk JJ, Pollock DM, Newman JW, Kim IH, Hammock BD. An orally active epoxide hydrolase inhibitor lowers blood pressure and provides renal protection in salt-sensitive hypertension. Hypertension 46:975-981, 2005. PMID: 1615779; Elmarakby AA, Quigley JE, Olearczyk JJ, Srindhar A, Cook AK, Inscho EW, Pollock DM, Imig JD. Chemokine receptor 2b blockade inhibition provides renal protection in angiotensin Il-salt hypertension. Hypertension 50:1069-1076, 2007. PMID: 17938380; and Olearczyk JJ, Quigley JE, Mitchell B, Yamamoto T, Kim IH, Newman JW, Lauria A, Hammock BD, Imig JD. Inhibition of the soluble epoxide hydrolase protects the kidney from damage in hypertensive Goto-Kakizaki rats. Clinical Science 116:61-70, 2009. PMID: 18459944. Estas publicaciones se incorporan como referencia al presente documento.
Analisis estadistico. Se presentan todos los datos como la media + EEM. Se analizaron los datos de tension arterial media usando el analisis de la varianza (ANOVA) para mediciones repetidas. Se consideraron las diferencias estadisticamente significativas con p< 0,05 en comparacion con el control. Se realizaron analisis usando el software GraphPad Prism version 4.0 (GraphPad Software Inc, La Jolla, CA).
Resultados - Efectos sobre la tension arterial y la frecuencia cardiaca. Rata espontaneamente hipertensa (SHR). En este modelo de hipertension, se estudiaron las capacidades hipotensoras de los cuatro compuestos seleccionados. Se observo que dos de esos cuatro compuestos tenian efectos hipotensores. SRD (estructura quimica mostrada en la figura 1A) y LGK (estructura quimica mostrada en la figura 2A) carecieron de acciones hipotensoras en SHR. En el grupo de SHR tratado con SRD, tras dos semanas de tratamiento, la tension arterial fue similar a la del grupo de SHR tratado con vehfculo (150 + 5,0 frente a 141 + 3,0 mmHg) (veanse las figuras 1B-C). Tras dos semanas de tratamiento, LGK no cambio la tension arterial (137 + 1,0 frente a 141 + 3,0 mmHg) en comparacion con el vehfculo en SHR (figuras 2C-D). De manera similar a sus efectos sobre la tension arterial, ni SRD ni LGK afectaron a la frecuencia cardiaca (SRD, 344 + 23,0 frente a 331 + 17,0 l.p.m.; LGK, 325 + 11,0 frente a 331+17,0 l.p.m.) en comparacion con SHR con vehfculo.
Dos semanas de tratamiento con JLJ (estructura quimica mostrada en la figura 3A) provocaron una disminucion moderada de la tension arterial en SHR en comparacion con el grupo tratado con vehfculo (131 + 2,0 frente a 141 +
3.0 mmHg) y se ha observado su efecto hipotensor desde la primera semana del tratamiento (figuras 3B-C). El compuesto Mv (estructura quimica mostrada en la figura 4A) tambien demuestra un efecto hipotensor similar en SHR y provoco una disminucion de 12 mmHg de la tension arterial en comparacion con el vehfculo (129 + 2,0 frente a 141 + 3,0 mmHg). Ademas, de manera similar a JLJ, se observo que MV empezo a disminuir la tension arterial en el plazo de cuatro dfas desde el tratamiento en SHR y se mantuvo este efecto hasta el final del periodo de tratamiento de dos semanas (veanse las figuras 4B-C). A diferencia de su efecto hipotensor, se observo ademas que ni JLJ ni MV tuvieron ningun efecto sobre la frecuencia cardiaca (JLJ, 316 + 23,0 frente a 331 + 17,0 l.p.m.; MV, 318 + 24,0 frente a 331 + 17,0 l.p.m.) en comparacion con SHR con vehfculo. Considerando que son prometedores los efectos hipotensores de JLJ y MV en el modelo de SHR, se han sometido a prueba estos compuestos en otro modelo de hipertension, hipertension por angiotensina II (Ang II).
Ratas con hipertension por Ang II. El compuesto JLJ demuestra un efecto atenuante sobre la elevacion inducida por Ang II de la tension arterial desde el principio del tratamiento y esto se mantuvo durante todo el periodo de tratamiento. Se observo que al final del periodo de tratamiento de dos semanas, JLJ atenuo notablemente la hipertension inducida por Ang II en comparacion con el vehfculo (135 + 5,0 frente a 150 + 3,2 mmHg) (figura 5A-B). De manera similar a JLJ, el compuesto MV tambien demostro un efecto atenuado notable sobre la hipertension por Ang II (107 + 2,0 frente a 150 + 3,2 mmHg) y se observo este efecto atenuante durante todo el periodo de tratamiento (figura 6A-B). De manera similar a la SHR, en la hipertension por Ang II ni JLJ (410 + 25,0 frente a 396 +
25.0 l.p.m.) ni MV (385 + 16,0 frente a 396 + 25,0 l.p.m.) demostraron ningun efecto sobre la frecuencia cardiaca en comparacion con el vehfculo tras dos semanas de tratamiento.
Efectos de MV sobre la excrecion de sodio y la excrecion de proteinas en la hipertension por Ang II. En el presente estudio se ha observado que el tratamiento durante dos semanas con el compuesto MV (estructura quimica mostrada en la figura 4A) produjo natriuresis en comparacion con el vehfculo (2,7 + 0,3 frente a 1,9 + 0,7 mmol/d) en
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la hipertension por Ang II. Tambien se observo que el compuesto MV disminuyo la razon de protefnas con respecto a creatinina en orina (1,5 + 0,2 frente a 2,8 + 0,7), un indicador de lesion renal, en la hipertension por Ang II.
Ejemplo 6: Efecto de los analogos de EET en el tratamiento de nefrotoxicidad por cisplatino
En este ejemplo, los inventores investigaron efecto protector renal de dos analogos de EET activos por via oral recien desarrollados en nefrotoxicidad inducida por cisplatino. Se demostro que los analogos de EET ofrecfan una nefroproteccion notable durante la administracion de cisplatino y se relaciono este efecto con sus actividades antioxidativas, antiinflamatorias, contra el estres del RE y antiapoptoticas. Se demostro ademas que aunque protegfan el rinon frente a los efectos nefrotoxicos perjudiciales del cisplatino, estos analogos de EET no comprometfan el efecto quimioterapico del cisplatino.
La nefrotoxicidad limita gravemente el uso del farmaco anticancerfgeno, cisplatino. El estres oxidativo, la inflamacion y el estres del retfculo endoplasmatico (RE) contribuyen a la nefrotoxicidad inducida por cisplatino. Se han desarrollado ahora analogos de EET activos por via oral (incluyendo sin limitacion los compuestos EET-A y EET-B) mediante la modificacion de los restos carboxilato, olefinas y epoxido del farmacoforo de EET. Se determino si la administracion de los analogos de EET reivindicados disminuirfa la nefrotoxicidad, incluyendo la nefrotoxicidad inducida por cisplatino. Se administro cisplatino (7 mg/kg, i.p.) en ratas pretratadas durante 7 dfas con analogos de EET (10 mg/kg/d, v.o., n=5) o vehfculo (n=7). El dfa 5 tras la inyeccion de cisplatino, se recogieron orina, plasma y los rinones. Se manifesto nefrotoxicidad inducida por cisplatino en un aumento de 3-5 veces de BUN, creatinina en plasma (PCr), actividad N-acetil-(D)-glucosaminidasa (NAG) en orina, molecula-1 de lesion renal (KIM-1) y formacion de cilindros tubulares renales. Los analogos de EET atenuaron los aumentos inducidos por cisplatino de BUN (vehfculo: 241 + 51 frente a EET-A: 108 + 30 y EET-B: 120 + 33 mg/dl), PCr (3,1 + 0,2 frente a 2,0 + 0,2 y 1,4 + 0,2 mg/dl), KIM-1 (296 + 94 frente a 85 + 29 y 57 + 13 ng/d) y NAG (3,0 + 0,6 frente a 0,5 + 0,1 y 0,6 + 0,2 U/d) (P<0,05). Se redujo un 50% la formacion de cilindros tubulares renales inducida por cisplatino mediante el tratamiento con analogos de EET. Los analogos de EET atenuaron la formacion de TBARS en el rinon inducida por cisplatino (vehfculo: 16 + 2 frente a EET-A: 7 + 1; EET-B: 8 + 1 pmol/g) y provoco una disminucion de 2-3 veces de la expresion renal de ARNm de gp91phox y NOX1 (P<0,05). La nefrotoxicidad inducida por cisplatino estuvo acompanada por inflamacion renal y un estres del RE elevados, lo que dio como resultado un aumento de la expresion de ARNm renal y de genes inflamatorios (TNF-a, IL-6, IL-1P) y de estres del RE (caspasa-12, GRP78). Los analogos de EET provocaron reducciones del 30-70% de la expresion de estos genes inflamatorios y de estres del RE (P<0,05). El cisplatino provoco la senalizacion apoptotica en el rinon con razones de expresion de ARNm Bak/Bcl2 y BaxlBcl2 y actividad caspasa-3 cortical renal elevadas. Los analogos de EET provocaron reducciones de 2-14 veces de las razones de expresion de ARNm de Bak/Bcl2 y BaxlBcl2 asf como una reduccion del 50% de la actividad caspasa-3 renal (P<0,05). En un estudio in vitro con diversas lfneas de celulas cancerosas, se demostro que los efectos protectores renales de los analogos de EET no comprometieron las propiedades anticancerfgenas del cisplatino. Conjuntamente, estos datos demostraron que los analogos de EET activos por via oral protegen frente a la nefrotoxicidad, incluyendo la nefrotoxicidad inducida por cisplatino, reduciendo el estres oxidativo, la inflamacion y el estres del RE, sin afectar a los efectos quimioterapicos del cisplatino. Ademas, los analogos de EET tambien protegeran frente a otros efectos secundarios del cisplatino, incluyendo la perdida de audicion.
Experimentos con animales in vivo. Se aprobaron los experimentos y se llevaron a cabo segun las directrices del Comite Institucional de Uso y Cuidado de Animales, Facultad de Medicina de Wisconsin, Milwaukee, EE.UU. Ratas Wistar-Kyoto (WKY) macho que pesaban 180-200 g (Charles River, MA, EE.UU.). Se mantuvieron todos los animales en un entorno de temperatura controlada con un ciclo de luz/oscuridad de 12 h y se les permitio libre acceso a agua y alimentos en todo momento. Antes de la experimentacion se dejo a las ratas un periodo de aclimatacion de 6 dfas. Se asignaron las ratas a cuatro grupos. Grupo 1 (WKY, n=5-7): Las ratas recibieron agua potable a voluntad durante siete dfas y el dfa 7 se les administro DMSO (Sigma Aldrich, St. Louis, MO, EE.UU.) (300-500 pl, i.p.). Se uso DMSO para preparar la disolucion de cisplatino (CP) (Sigma Aldrich, St. Louis, MO, EE.UU.) usada en este estudio y se fijo el volumen maximo de la inyeccion en 500 pl. Grupo 2 (CP+vehfculo, n=5-7): Se pretrataron las ratas con vehfculo (etanol al 0,05% y PEG-400 al 0,1% v/v) en agua potable durante siete dfas y entonces el dfa 7 se administro CP (7 mg/kg i.p.) seguido por otro tratamiento durante cinco dfas con vehfculo. Grupo 3 (CP+EET-A, n=5-7): Se pretrataron estas ratas con el analogo de EET, EET-A (10 mg/kg/dfa, v.o.) durante siete dfas en agua potable y entonces el dfa 7 se administro CP como una inyeccion unica (7 mg/kg, i.p.) seguido por otro tratamiento durante cinco dfas con EET-A. Grupo 4 (CP+EETB, n=5-7): Se pretrataron las ratas de este grupo con otro analogo de EET, EET-B (10 mg/kg/dfa) durante 7 dfas en agua potable y entonces el dfa 7 se administro CP como una inyeccion unica (7 mg/kg, i.p.) seguido por otro tratamiento durante cinco dfas con EET-B. Las ratas de los grupos 2, 3 y 4 tuvieron libre acceso al vehfculo, EET-A y -B en agua potable, respectivamente. Un dfa antes de que se sacrificasen las ratas, se recogio orina de cada rata a lo largo de un periodo de 24 h y se midio el volumen. Cinco dfas despues de la administracion de CP o DMSO, se anestesiaron las ratas para la extraccion de muestras de sangre, seguido por su sacrificio y la recogida de tejido. Se mantuvieron congeladas muestras de orina y plasma a -80°C hasta que se analizaron. Se extirparon los rinones, se lavaron con solucion salina fisiologica y se almacenaron a -80°C hasta que se usaron para el analisis de RT-PCR, la medicion de sustancias reactivas con acido tiobarbiturico (TBARS) y el ensayo de la actividad caspasa-3. Tambien se conservo una parte del rinon en formalina tamponada al 10% para el examen histologico.
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Analisis bioauimico. Se midieron de manera espectrofotometrica los niveles de nitrogeno ureico en sangre (BUN) (BioAssay Systems, Hayward, CA, EE.UU.) y creatinina en suero (Cayman Chemical Company, Ann Arbor, MI, EE.UU.) usando kits comerciales. Se midio el contenido en orina de protefnas y creatinina usando kits comerciales (Cayman Chemical Company, Ann Arbor, MI, EE.UU.) y se midio en la orina la actividad N-acetil-b-glucosaminidasa (NAG) en orina mediante un kit de Diazyme (Diazyme Laboratories, Poway, CA, EE.UU.). Mientras que el contenido en orina de la molecula-1 de lesion renal (KIM-1) se midio usando ELISA (R&D Systems, Inc. Mineapolis, MN, EE.UU.).
Determinacion de malondialdehido en el rinon. El malondialdehfdo (MDA) es una sustancia reactiva con acido tiobarbiturico (TBARS) que se forma como producto final de la peroxidacion lipfdica y sirve como importante fndice de estres oxidativo. Para determinar el nivel de MDA en rinon, se homogeneizo el rinon de rata con un tampon que contenfa cloruro de potasio al 1,5% para obtener homogeneizado de rinon completo 1:10 (p/v). Usando un kit disponible comercialmente (Cayman Chemical Company, Ann Arbor, MI, EE.UU.), se midio de manera espectrofotometrica MDA tras la reaccion con acido tiobarbiturico.
Determinacion de la actividad caspasa-3. Se determino la actividad caspasa-3 en el homogeneizado de rinon usando kit de ensayo fluorimetrico comercial (Sigma Aldrich, St. Louis, MO, EE.UU.). Se preparo el homogeneizado de rinon con tampon de lisis (HEPES 50 mM, pH 7,4, con CHAPS 5 mM y DTT 5 mM). Se centrifugo el homogeneizado de rinon a 10.000 g durante 10 min y se uso el sobrenadante resultante para el ensayo. El ensayo fluorimetrico de caspasa-3 se basa en la hidrolisis del sustrato peptfdico acetil-Asp-Glu-ValAsp-7-amido-4- metilcumarina (Ac-DEVD-AMC) por caspasa-3, dando como resultado la liberacion del resto fluorescente 7-amino-4- metilcumarina (AMC). Se expreso la actividad caspasa-3 en nmol de AMC/min/pl.
Analisis por PCR en tiempo real. Se llevaron a cabo analisis en tiempo real para evaluar la expresion de los genes oxidativos (gp91phox, NOX1, SOD1, SOD2, SOD3), inflamatorios (TNF-a, IL-6, IL-10), apoptoticos (Bax, Bak, Bcl-2) y relacionados con estres del retfculo endoplasmatico (GRP78, caspasa-12) en el rinon. Se aislo el ARN total del homogeneizado de rinon usando reactivos TRIzol LS (Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA, EE.UU.) segun las instrucciones del fabricante. Se trato el ARN aislado con ADNasa libre de ARNasa (Invitrogen, Carlsbad, CA, EE.UU.) para eliminar las trazas de contaminacion con ADN genomico. Se cuantificaron muestras de ARNm mediante espectrofotometrfa a 260 nm y se sometio a transcripcion inversa 1 pg de ARN total para dar ADNc usando el kit de smtesis de ADnc iScript™ Select (Bio-Rad, Hercules, CA, EE.UU.).
Se cuantifico la expresion del gen diana mediante el kit de RT-PCR en una sola etapa iScript con verde SYBR usando el sistema de deteccion por PCR en tiempo real monocolor MyiQ™ (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, EE.UU.). Se analizo cada muestra amplificada en todos los pocillos para su homogeneidad usando analisis de la curva de disociacion usando el software iQ5 Optical System, version 2.1 (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, EE.UU.). Tras desnaturalizacion a 95°C durante 2 min, se realizaron 40 ciclos a 95°C durante 10 s y a 60°C durante 30 s. Se hizo correr cada muestra por triplicado, y se uso el metodo de ciclo umbral comparativo (Ct) para cuantificar las veces de aumento (2-AACt) de la expresion de los genes diana en comparacion con los controles. Al analizar la expresion relativa de los genes diana, se normalizaron los valores de Ct con respecto a un gen de mantenimiento (pgkl). Se llevaron a cabo analisis estadfsticos para al menos 5-7 muestras experimentales en cada grupo experimental. Se disenaron los cebadores usados en este estudio basandose en varios informes previos. Tras la fijacion de los rinones con formalina tamponada al 10%, se seccionaron los tejidos renales y se tineron con reactivos de acido peryodico-reactivo de Schiff (PAS) para el examen histologico. Se determinaron los numeros de tubulos que contenfan cilindros proteicos a un aumento X200 para evaluar el dano tubular usando un software de analisis de imagenes NIS Elements AR version 3.0 (Nikon instruments inc., Melville, NY, EE.UU.). Se calculo el porcentaje de area positiva para cilindros a partir de la media de ocho campos corticales y cinco medulares (X200) para cada muestra de rinon. Para minimizar el sesgo del observador, se realizo el calculo del area de cilindro de modo ciego sin conocimiento de grupo de tratamiento a partir del que se originan los tejidos.
Actividad antitumoral in vitro de cisplatino en presencia y ausencia de analogo de EET. En este estudio, se obtuvieron las lfneas celulares HEK293, U87MG, Hela de la ATCC (Manassas, VA, EE.UU.) Se recogieron NCCIT y (HEK293, U87MG, Hela) del Departamento de Pediatrfa, Centro Medico del Sudoeste de la UT en Dallas, TX, EE.UU. Se mantuvieron todas las lfneas celulares en DMEM o RPIM con suero bovino fetal al 10% y penicilina/estreptomicina adquiridos de Life Technologies (Grand Island, NY, EE.UU.). Se adquirio cisplatino o bien de Sigma (St. Louis, MO, EE.UU.) o bien de CalBiochem/EMD Biosciences (Billerica, MA, EE.UU.). Se sembraron las celulas en placas de 96 pocillos a de 500 a 4.000 celulas por pocillo dependiendo del tipo celular. Veinticuatro horas despues, se trataron las celulas con cisplatino o vehfculo y/o el analogo de EET, EET-A, a diversas concentraciones durante 72 h. Se midio la viabilidad celular mediante el ensayo con Alamar usando resazurina (Sigma Aldrich) segun las directrices del fabricante. Se midieron los resultados de viabilidad mediante fluorescencia/absorbancia en un lector de placas de 96 pocillos de BMG Labtech (Cary, NC, EE.UU.) y se calculo la CI50 mediante el software GraphPad Prism5 (GraphPad Software Inc, La Jolla, CA, EE.UU.).
Analisis estadfstico. Se notifican los resultados como la media + E.E.M. Se determino la significacion estadfstica
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entre dos mediciones mediante la prueba de la t de Student de dos colas para datos independiente (y entre grupos se determino mediante analisis de la variancia de un factor de medidas repetidas seguido por la prueba de Tukey post-hoc) usando el software GraphPad Prism® version 4.0 (GraphPad Software Inc, La Jolla, CA, EE.UU.). los valores de probabilidad de P <0,05 se consideraron significativos cuando el valor crftico de P era bilateral.
Resultados. El tratamiento con analogos de EET atenua la disfuncion y lesion renal en ratas a las que se les administro cisplatino. Para investigar los efectos de analogos de EET en disfuncion renal inducida por cisplatino (CP), se midieron los niveles de urea (nitrogeno ureico en sangre o BUN) y creatinina en el suero de ratas tanto tratadas con analogos de EET como no tratadas despues de cinco dfas desde la administracion de CP. Tal como se muestra en la figura 8, la administracion de CP provoco aumentos de 3 y 9 veces de los niveles en suero de creatinina y BUN (figuras 7a y 7b), respectivamente (P<0,05). El tratamiento con analogos de EET (EET-A y -B) dio como resultado reducciones del 30-50% de los niveles elevados de creatinina y BUN en suero en ratas a las que se les administro CP en comparacion con aquellas a las que se les dio vehfculo (DMSO) (P<0,05). Para determinar los efectos de analogos de EET en disfuncion renal inducida por cisplatino (CP), se estudio ademas la excrecion en orina de KIM-1, NAG y protefnas despues de cinco dfas desde la administracion de CP (figuras 7c y 7d). Hubo aumentos de 5 y 10 veces de la excrecion en orina de NAG y KIM-1 en las ratas a las que se les administro CP en comparacion con los controles a los que se les administro vehfculo (P<0,05). Ademas, tambien se demostro que la administracion de cisplatino provoco una proteinuria notable en comparacion con la administracion de vehfculo (vehfculo frente a cisplatino, 25,7 + 1 frente a 53 + 5,1 mg/d, P<0,05). Ambos analogos de EET, EET-A y EET-B dieron como resultado una reduccion del 30-50% de la excrecion en orina de NAG y KIM-1 en comparacion con las ratas a las que se les administro CP tratadas con vehfculo (P<0,05) (figuras 7c-d).
Tambien se observo una reduccion de al menos el 40% de la proteinuria inducida por cisplatino mediante ambos analogos de EET (vehfculo frente a EET-A y -B; 53 + 5 frente a 33 + 8 y 32 + 3 mg/d, P<0,05). En el presente estudio, se evaluo adicionalmente la disfuncion renal inducida por CP usando el examen histologico del rinon. La administracion de CP dio como resultado lesion tubular manifestada por una vacuolacion y descamacion de las celulas epiteliales renales junto con una intensa formacion de cilindros proteicos intratubulares en las regiones tanto cortical como medular del rinon en comparacion con las ratas a las que se les administro vehfculo. Ambos analogos de EET protegieron el rinon en las ratas a las que se les administro CP con una reduccion de > 50% del area de cilindros tubulares en la corteza y la medula en comparacion con las ratas a las que se les administro CP tratadas con vehfculo (P<0,05) (figuras 8a-b).
El tratamiento con analogos de EET atenua el estres oxidativo renal, la respuesta inflamatoria y el estres oxidativo del retfculo endoplasmatico inducidos por cisplatino. El analisis por PCR en tiempo real de las expresiones de ARNm de las subunidades de NADPH oxidasa NOX1 y gp91phox (figura 9) demostraron un aumento de la expresion de estos genes marcadores oxidativos en ratas a las que se les administro cisplatino (CP) (P<0,05). Hubo una atenuacion de 2-3 veces en el aumento inducido por cisplatino de la expresion renal de ARNm de NOX1 y gp91phox que se redujeron por los analogos de EET A y B (P<0,05) (figura 9a-b). La administracion de CP tambien dio como resultado una elevacion notable del contenido renal de malondialdehfdo (MDA), que es uno de los indicadores importantes de estres oxidativo. El tratamiento con analogos de EET provoco una reduccion del 50% del nivel de MDA en el rinon de las ratas a las que se les administro CP (P<0,05) (figura 9c). Se observo ademas que la administracion de CP dio como resultado reducciones de 2-5 veces de la expresion de ARNm de superoxido dismutasa (SOD) 1 y SOD3 (P<0,05) mientras que permanecio inalterada la expresion de SOD2. El tratamiento con analogos de EET provoco un aumento de 2-3 veces de la expresion de SOD1 en las ratas a las que se les administro CP (P<0,05) mientras que permanecio inalterada la expresion de SOD3 a lo largo de los grupos experimentales (figuras 9d-f).
Para investigar el efecto de analogos de EET sobre la inflamacion inducida por CP que se asocia con disfuncion renal, se estudio la expresion renal de ARNm que codifica para factor de necrosis tumoral-a (TNF-a), interleucina-6 (IL-6) e interleucina-1p. Estas variables demostraron un aumento de 2-50 veces de su expresion en las ratas a las que se les administro CP tratadas con vehfculo en comparacion con las ratas a las que se les administro vehfculo (P<0,05) (figuras 10a-c). El tratamiento con ambos analogos de EET (EET-A y B) dio como resultado reducciones del 40-60% de las expresiones de ARNm renal de todos los marcadores inflamatorios en las ratas a las que se les administro CP (todos P<0,05).
Tambien se ha observado un aumento de 4 veces de las expresiones de ARNm de los marcadores de estres del RE GRP78/BiP y caspasa 12 en las ratas tratadas con vehfculo a las que se les administro CP en comparacion con las ratas a las que se les administro vehfculo (P<0,05) (figuras 11a-b). En las ratas a las que se les administro CP, el tratamiento con ambos analogos de EET (EET-A y B) provoco una reduccion de 2-4 veces de las expresiones renales elevadas de ARNm de GRP78 y caspasa 12 en comparacion con el tratamiento con vehfculo (P<0,05) (figuras 11a-b).
El tratamiento con analogos de EET atenua la apoptosis renal inducida por cisplatino. Hubo una reduccion del 70% de la expresion renal de ARNm de Bcl-2 en las ratas tratadas con vehfculo a las que se les administro CP en comparacion con las ratas a las que se les administro vehfculo (P<0,05) (figura 12a). El tratamiento con analogos de
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EET provoco un aumento de 2-10 veces de la expresion el Bcl-2 antiapoptotico en las ratas a las que se les administro CP en comparacion con las ratas a las que se les administro CP tratadas con vehmulo (P<0,05) (figura 12a). Ademas, la administracion de CP dio como resultado una elevacion de 4-20 veces de las razones Bax/Bcl-2 y Bak/Bcl-2, y por tanto indico una senalizacion apoptotica elevada en las ratas a las que se les administro CP (figuras 12b-c) (P<0,05). El tratamiento con analogos de EET provoco una reduccion de 2-3 veces de las razones Bax/Bcl-2 y Bak/Bcl-2 en comparacion con las ratas a las que se les administro CP tratadas con vehmulo (P<0,05) (figuras 12c- d). La senalizacion apoptotica elevada inducida por CP se caracterizo adicionalmente por una mayor actividad caspasa 3 (figura 12d) en las ratas a las que se les administro CP en comparacion con las ratas a las que se les administro vehmulo (P<0,05). El tratamiento con analogos de EET atenuo tal actividad caspasa 3 inducida por CP en un 50% en comparacion con las ratas a las que se les administro CP tratadas con vehmulo (P<0,05) (figura 12d). Estos resultados demuestran claramente la atenuacion de la senalizacion apoptotica inducida por CP en presencia del tratamiento con analogos de EET.
El tratamiento con analogos de EET no compromete el efecto quimioterapico del cisplatino. Se demuestra que en tres lmeas de celulas cancerosas diferentes, Hela, NCCIT y U87, el cisplatino inhibio notablemente el crecimiento celular con CI50 que oscilaba entre 1,1 - 9,24 pM (figura 13a). En un enfoque similar con estas lmeas celulares, EET- A no tuvo efectos observables sobre el numero de celulas (figura 13b). Ademas, la aplicacion concurrente de EET-A y cisplatino no influyo en el efecto quimioterapico del cisplatino ni en las celulas renales normales (datos no mostrados) ni en la lmea de celulas cancerosas NCCIT (figura 13c). Se demuestra que cuando se usaron de manera concurrente cisplatino y EET-A, la CI50 para cisplatino fue de 2,60, 2,55 y 2,44 pM con EET 0, 1 y 10 ng/ml en celulas NCCIT.
Discusion. Una limitacion cntica de la quimioterapia con cisplatino es la induccion de inflamacion tubulointestinal, renal estres oxidativo, estres del RE y apoptosis de celulas tubulares que conducen a lesion renal aguda. Se notifica que el 40% de los pacientes con cancer que se trataron con cisplatino desarrollan lesion renal aguda. Desafortunadamente, no estan disponibles farmacoterapias eficaces para atenuar esta complicacion debilitante de una quimioterapia ampliamente usada como cisplatino. En un intento por contribuir a esta area, el estudio actual investigo el efecto protector renal del tratamiento prolongado con analogos del acido epoxieicosatrienoico (EET) sobre la nefrotoxicidad inducida por cisplatino.
Existen evidencias claras de que los analogos de EET tienen capacidad para proteger organos mediante mecanismos que implican sus actividades antiinflamatorias, antiapoptoticas y antioxidativas. Con estos antecedentes, en el presente estudio se planteo la hipotesis de que con su fuerte capacidad de proteccion de organos, EET protegera el rinon frente a la nefrotoxicidad por cisplatino. En este intento, se han sintetizado dos analogos de eEt novedosos y se han investigado sus efectos protectores renales en la nefrotoxicidad inducida por cisplatino usando un enfoque clmicamente relevante con la administracion prolongada de analogos de EET en agua potable a la rata. Se demuestra que una unica administracion de cisplatino provoco una lesion renal notable evidente a partir del aumento de PCr, BUN, excrecion en orina de marcadores de lesion tubular renal como NAG y KIM-1 junto con notable proteinuria y formacion de cilindros tubulares. Estos resultados respaldan varios estudios previos que notificaron nefrotoxicidad inducida por cisplatino en modelos preclmicos con animales. De manera interesante, tambien se demuestra que el tratamiento prolongado con analogos de EET en agua potable protegio notablemente el rinon frente a la lesion nefrotoxica inducida por cisplatino con reducciones en todos los marcadores de lesion renal estudiados en este estudio. En relacion con este enfoque del presente estudio, un estudio reciente demostro que la administracion de corta duracion de inhibidor de sEH podfa reducir la disfuncion renal inducida por cisplatino en ratones. Sin embargo, se sabe que los inhibidores de sEH son limitados en cuanto a efectos ya que experimentan metabolismo e incorporacion en la membrana,36 lo que indica por tanto una limitacion de este hallazgo en una implicacion de aplicabilidad clmica. Ademas, el estudio llevado a cabo por Parrish et a/.35 no proporciono evidencias sobre el posible mecanismo mediante el cual EET o un inhibidor de sEH reduce la disfuncion renal en la nefrotoxicidad inducida por cisplatino.
Actualmente, se demuestra una notable sobreexpresion de ARNm para los principales componentes de NADPH oxidasa (NOX1 y gp91phox) en nefrotoxicidad inducida por cisplatino. La sobreexpresion de estos genes marcadores oxidativos vino acompanada ademas por un aumento de la generacion de ROS evidente a partir de la peroxidacion lipfdica renal elevada en la rata a la que se le administro cisplatino. Tambien se demuestran expresiones de SOD1 y SOD3 renales reducidas, y sugieren que tal reduccion contribuye al estres oxidativo en la rata a la que se le administro cisplatino. Se notifican observaciones similares en estudios previos en los que la nefropatfa inducida por cisplatino esta acompanada por un aumento del nivel de MDA y una elevacion de la expresion y actividad NADPh oxidasa. De manera interesante, este estudio tambien demuestra que analogos de EET redujeron notablemente el estres oxidativo renal al reducir la peroxidacion lipfdica renal, reducciones notables de la expresion de las principales subunidades de NADPH oxidasa, y tambien por el aumento de la expresion de SOD1. En efecto, en un estudio reciente se notifica que EET regula por incremento la expresion y actividad SOD durante una agresion toxica, potencia por tanto la eliminacion ROS y reduce el estres oxidativo. De manera similar a estos hallazgos, en otro modelo patologico caracterizado por lesion renal, se ha notificado una reduccion mediada por EET del estres oxidativo y la lesion renal. Aparte del estres oxidativo, tambien se demuestra que la nefrotoxicidad inducida por cisplatino esta acompanada ademas por una elevacion de la respuesta inflamatoria renal y respalda evidencias previas sobre un papel importante para los mecanismos inflamatorios en la patogenia de la
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nefrotoxicidad inducida por cisplatino. En efecto, el cisplatino induce un aumento de la expresion renal de una variedad de quimiocinas y citocinas inflamatorias, tales como TNF-a y IL-ip.
Se investigo ademas que el tratamiento con analogos de EET redujo la expresion renal de estos marcadores inflamatorios en la nefrotoxicidad inducida por cisplatino. Estos datos respaldan informes previos de actividad antiinflamatoria de EET que se ha implicado en la proteccion de organos mediada por EET en varias patologfas caracterizadas por lesion de organos. Por ejemplo, un aumento de la biodisponibilidad de EET mediante la inhibicion de sEH proporciona proteccion renal en diabetes inducida por estreptozotocina. Ademas, la sobreexpresion de la enzima productora de EET CYP2J2 protegio notablemente el rinon en un modelo de insuficiencia renal cronica de nefrectomfa 5/6. Por tanto, estos datos indican claramente que junto con la reduccion notable del estres oxidativo, la atenuacion de las respuestas inflamatorias inducidas por cisplatino es otro mecanismo mediante el cual el analogo de EET protegio el rinon frente a la nefrotoxicidad inducida por cisplatino.
Se ha investigado ademas el efecto del analogo de EET sobre el estres del retfculo endoplasmatico (RE) inducido por cisplatino. Existen evidencias de que el RE es una de las dianas subcelulares de las toxinas y desempena un papel importante en la nefrotoxicidad inducida por xenobioticos. En el presente estudio, se examino la expresion renal de ARNm de caspasa 12 y GRP78 (protefna 78 regulada por glucosa) para investigar la implicacion del estres del RE en la nefrotoxicidad inducida por cisplatino. GRP78 se considera uno de los distintivos del estres del RE, mientras que la caspasa 12 es una caspasa especffica de RE que se activa por el estres del RE y participa especfficamente en la apoptosis inducida por estres del RE. Se observa una notable regulacion por incremento de la expresion renal de estos marcadores de estres del RE que se atenua mediante el tratamiento con analogos de EET. Este estudio respalda observaciones previas de que la nefrotoxicidad inducida por cisplatino se asocia con estres del RE. De la manera mas importante, el presente estudio tambien proporciono un hallazgo interesante y novedoso referente a las acciones biologicas de EET, y demuestra un aspecto importante sobre el potencial terapeutico de este mediador lipfdico para tratar nefrotoxicidad inducida por cisplatino.
La nefrotoxicidad relacionada con cisplatino y otros farmacos se asocia con apoptosis 10 que esta provocada por una elevacion de estres oxidativo, inflamacion y estres del RE. Se notifica que durante la nefrotoxicidad inducida por cisplatino, el estres celular provocado por estres oxidativo, inflamacion y estres del RE conduce a una reduccion de Bcl2 antiapoptotico y la activacion de las protefnas de la familia de Bcl2 proapoptotico como la protefna X asociada con Bcl-2 (Bax) y la protefna antagonista/destructora de Bcl-2 (Bak) en el rinon. Esta senalizacion proapoptotica potenciada conduce a la activacion de caspasa 3 seguido por apoptosis de las celulas renales. En el presente documento, se demuestra que el tratamiento con analogos de EeT protege el rinon frente a la muerte celular inducida por cisplatino aumentando la expresion de Bcl2 antiapoptotico y reduciendo las razones de Bak/Bcl2 y Bax/Bcl2 proapoptoticos junto con una notable reduccion de la actividad caspasa 3.
Tambien se demuestra una atenuacion mediada por analogos de EET de la expresion renal de caspasa 12 que desempena un papel esencial en la apoptosis mediante por estres del RE. En efecto, se notifico anteriormente que EET atenua varios acontecimientos apoptoticos principales incluyendo la senalizacion proapoptotica mediada por la elevacion de la protefna Bcl2 y actividad caspasa 3. Estas observaciones respaldan esta opinion de la capacidad de los analogos de EET para reducir la muerte de celulas renales en la nefrotoxicidad inducida por cisplatino a traves de su efecto sobre las protefnas Bcl2, caspasa 12 especffica de estres del RE y sobre la caspasa ejecutora de la apoptosis, caspasa 3.
Se ha demostrado claramente que el tratamiento con analogos de EET proporciona proteccion frente a la nefrotoxicidad inducida por cisplatino a traves de multiples mecanismos, e indica enormemente una posible alternativa terapeutica prometedora. Sin embargo, es importante que antes del uso clfnico de nuevos agentes citoprotectores, se demuestre no solo la proteccion frente a la toxicidad, sino tambien la ausencia de interferencia del agente con la actividad anticancerfgena de los agentes citotoxicos usados. Para ello, en un enfoque in vitro se ha investigado si la exposicion in vitro de celulas renales normales (HEK293) o varias lfneas de celulas cancerosas humanas (Hela, NCCIT, U87) a diversas concentraciones de un analogo de EET (EET-A) influye en el crecimiento celular o el efecto citotoxico del cisplatino. Considerando los efectos protectores renales comparables de los dos analogos de EET usados en este estudio, se ha elegido un analogo de EET para este experimento particular. Se demostro que en presencia y ausencia de analogo de EET (EET-A), el cisplatino es igualmente potente al ejercer su efecto quimioterapico. Ademas, tambien se ha investigado si EET-A influye en el crecimiento de cualquiera de las lfneas de celulas cancerosas usadas en este estudio, y se demostro claramente que EET-A no tenia ningun efecto sobre el crecimiento de ninguna de estas lfneas de celulas cancerosas.
En conclusion, se han proporcionado evidencias claras del efecto protector renal de los analogos de EET identificados anteriormente en la nefrotoxicidad inducida por farmacos, incluyendo nefrotoxicidad inducida por cisplatino. Se ha demostrado que estos analogos de EET ofrecfan proteccion renal mediante la inhibicion de multiples rutas de senalizacion que estan implicadas de manera crftica en la fisiopatologfa de nefrotoxicidad inducida por cisplatino. Este estudio destaco varias acciones biologicas importantes de los analogos de EET novedosos en cuanto a sus actividades antioxidativas, antiinflamatorias, contra el estres del RE y antiapoptoticas. Los resultados del estudio actual refuerzan esta opinion sobre el terapeutico
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Claims (7)

1.
imagen1
CCM"
,w
Kp &MAc
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W«w
Compuesto seleccionado del grupo que consiste en
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5
3.
10
4.
15 5.
6.
20
7.
8. 25
9.
imagen2
Compuesto segun la reivindicacion 1, en el que la estructura es
imagen3
Compuesto segun la reivindicacion 1, en el que la estructura es
imagen4
Compuesto segun la reivindicacion 1, en el que la estructura se selecciona de:
imagen5
Composicion que comprende un compuesto segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 y un portador farmaceuticamente aceptable.
Compuesto segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, para su uso en el tratamiento de hipertension en un sujeto.
Compuesto segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, para su uso en el tratamiento de nefrotoxicidad en un sujeto.
Compuesto segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, para su uso en el tratamiento de nefrotoxicidad inducida por farmacos en un sujeto.
Compuesto segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 para su uso en el tratamiento de nefrotoxicidad por cisplatino en un sujeto.
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