ES2562827T3

ES2562827T3 - Composición que comprende taurolidina y/o taurultam para el tratamiento del cáncer

Info

Publication number: ES2562827T3
Application number: ES10009649.4T
Authority: ES
Inventors: Paul H. Redmond; Ruediger Stendel; Hanns Moehler; Rolf W. Pfirrmann
Original assignee: Ed Geistlich Soehne AG fuer Chemische Industrie
Current assignee: Ed Geistlich Soehne AG fuer Chemische Industrie
Priority date: 2001-04-03
Filing date: 2002-04-03
Publication date: 2016-03-08
Anticipated expiration: 2022-04-03
Also published as: EP1247524A1; CA2379734A1; US20030027818A1; EP2258373B1; CA2379734C; JP2009138003A; CA2692295C; EP2258373A1; JP2002363102A; EP1247524B1; ES2542842T3; JP5232678B2; CA2692295A1

Abstract

El uso de un agente de transferencia de metilol en la fabricación de un medicamento para uso en la inducción de la muerte apoptótica de una célula neoplásica en un mamífero poniendo en contacto dicha célula con una cantidad inductora de apoptosis de dicho medicamento, en el que dicho medicamento es para ser administrado durante al menos dos ciclos de administración, incluyendo cada ciclo de administración (i) una fase de administración de 1 a 8 días durante la cual dicho medicamento se administra cada día a una dosis diaria total de 2 a 60 g de dicho agente de transferencia de metilol y (ii) una fase sin administración de 1 a 14 días, durante la cual no se administra agente de transferencia de metilol, en el que dicho medicamento se va a coadministrar con el ligando de Fas y en el que el agente de transferencia de metilol es taurolidina, taurultam o una mezcla de los mismos.

Description

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DESCRIPCION

Composicion que comprende taurolidina y/o taurultam para el tratamiento del cancer

La invention se refiere al uso de los compuestos que contienen metilol taurolidina y taurultam para la fabrication de medicamentos para el tratamiento del cancer.

Los agentes de transferencia de metilol, tales como el farmaco antibacteriano y anti-toxinas taurolidina y el producto relacionado taurultam, se ha demostrado que ejercen un efecto modificador sobre la toxicidad del factor de necrosis tumoral (TNF), el cual se utiliza, entre otras cosas, en el tratamiento de tumores. Ademas, la action de agentes de transferencia de metilol ha demostrado ser selectiva en el sentido de que no se inhibio significativamente el crecimiento de llneas celulares normales.

La taurolidina actua transfiriendo tres grupos metilol en el sitio de accion, siendo el taurultam un metabolito intermedio que a su vez transfiere un solo grupo metilol con la liberation del compuesto muy bien tolerado taurinamida. Asl, los dos compuestos actuan esencialmente mediante el mismo mecanismo. Cabe senalar que la transferencia de metilol ha de contrastarse con la transferencia de metilo que es caracterlstica de muchos farmacos antitumorales altamente toxicos. La taurolidina y el taurultam tienen baja toxicidad y no son citotoxicos contra las celulas normales.

El tratamiento de tumores con taurolidina y taurultam se divulga en los documentos WO 91/13628, WO 98/52572, WO 99/06114, EP 1 066 830 A2 y WO 01/39763.

La muerte celular programada es un principio biologico conservado a lo largo de la evolution destinado a la regulation del numero de celulas. Las celulas sensibles contienen receptores de muerte que se activan cuando se secretan los ligandos apropiados de las celulas vecinas. Un sistema principal en la muerte celular programada es la apoptosis mediada por el ligando de Fas, tambien conocido como CD 95/APO-1, que es un receptor de superficie celular y un miembro de la superfamilia del receptor de factor de necrosis tumoral que media la apoptosis en las celulas sensibles a la oligomerization por el ligando de Fas (FasL).

De acuerdo con la presente invencion, se proporciona un metodo de tratamiento del cancer, mediante el cual la muerte apoptotica de una celula neoplasica es inducida por contacto de dicha celula con una cantidad inductora de apoptosis de un compuesto que contiene metilol.

Una realization comprende el uso de un agente de transferencia de metilol en la fabricacion de un medicamento para uso en la induction de la muerte apoptotica de una celula neoplasica en un mamlfero poniendo en contacto dicha celula con una cantidad inductora de apoptosis de dicho medicamento, en el que dicho medicamento es para ser administrado durante al menos dos ciclos de administration, incluyendo cada ciclo de administration (i) una fase de administracion de 1 a 8 dlas durante la cual dicho medicamento se administra cada dla a una dosis diaria total de 2 a 60 g de dicho agente de transferencia de metilol y (ii) una fase sin administracion de 1 a 14 dlas, durante la cual no se administra agente de transferencia de metilol, en la que dicho medicamento se va a coadministrar con el ligando de Fas y en la que el agente de transferencia de metilol es taurolidina, taurultam o una mezcla de los mismos.

En otra realizacion, el cancer de hlgado es tratado por infusion intravenosa de soluciones que contienen un agente de transferencia de metilol, por administracion directa a traves de un cateter instalado en un vaso hepatico, tal como la arteria hepatica, la vena portal, o la arteria gastroduodenal.

En otra realizacion, se tratan tumores del sistema nervioso central, tales como el glioma/glioblastoma.

La presente invencion se refiere a la capacidad de los agentes de transferencia de metilol, tales como taurolidina, para inducir toxicidad celular y aumentar la apoptosis mediada por el ligando de Fas en una terapia de combination. Tanto la taurolidina como su congenere taurultam aumentan el efecto apoptotico del ligando de Fas en las celulas del cancer en las concentraciones de farmaco que per se no muestran practicamente ningun efecto sobre la viabilidad celular. En la llnea celular de glioma maligno humano LN-229, la viabilidad celular se redujo inmediatamente despues de la incubation con taurolidina o taurultam solo. Este efecto mejora la destruction de las celulas LN-229 por el ligando de Fas. Por lo tanto, el uso de agentes de transferencia de metilol para inducir la muerte celular por apoptosis proporciona un medio para tratar el cancer.

Las dos llneas celulares LN-18 y LN-229 representan sistemas modelo validados para la muerte celular apoptotica con diferentes sensibilidades frente al ligando de Fas. Por tanto, estas llneas celulares se utilizaron para comprobar el potencial de interaction de tales compuestos con la via apoptotica. La viabilidad de las celulas de glioma maligno humano LN-18 y LN-229 se ve afectada por taurultam y taurolidina de forma diferente. Las celulas LN-18, que son altamente sensibles a la apoptosis inducida por el ligando de Fas, no se vieron afectadas por taurultam a todas las concentraciones ensayadas (5, 20, 100 pg/ml) (Ejemplo 6). La taurolidina fue capaz de reducir solo ligeramente la viabilidad de las celulas LN-18 a la mayor concentration ensayada (100 pg/ml). Por lo tanto, se alcanza el umbral

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para la destruccion de las celulas LN-18 al 0,01 % de taurolidina. Por el contrario, las celulas LN-229 mostraron una sensibilidad mucho mayor a estos farmacos. En comparacion con las celulas LN-18, tanto taurultam como taurolidina por si mismos (100 gg/ml) redujeron fuertemente la viabilidad de las celulas LN-229. La taurolidina (100 gg/ml) causo una muerte dramatica de las celulas LN-229 (70 %) y taurultam (100 gg/ml) fue capaz de reducir la viabilidad de las celulas LN-229 en un 30 %. En la concentracion mas alta ensayada (100 gg/ml), la taurolidina sola fue casi tan efectiva como el ligando de Fas en la induccion de la muerte celular. Por lo tanto, la taurolidina y el taurultam tienen la capacidad de destruir celulas malignas humanas.

El metodo se lleva a cabo mediante la administracion a un mamlfero que padece cancer de las composiciones que contienen un compuesto que contiene metilol activo, en una dosis suficiente para inducir la muerte de las celulas neoplasicas por apoptosis. Por “compuesto que contiene metilol” o “agente de transferencia de metilol”, se entiende un compuesto que contiene o es capaz de producir una molecula de metilol en condiciones fisiologicas, especlficamente la taurolidina y el taurultam como se divulga en la patente US-5 210 083 y sus mezclas.

El tratamiento de un tumor autologo, por ejemplo, un tumor del sistema nervioso central (SNC), se lleva a cabo mediante la administracion a un mamlfero, por ejemplo, un paciente humano, de un compuesto que contiene metilol. El compuesto se administra sistemicamente, por ejemplo, por via oral o intravenosa, o es infundido directamente al sitio del tumor, por ejemplo, en el cerebro o en el llquido cefalorraquldeo. Una matriz solida erosionable o reabsorbible tal como una oblea o esponja se puede implantar directamente en el tejido cerebral.

Los canceres a los que la presente invencion puede ser aplicable incluyen glioma, neuroblastoma, astrocitoma, meningitis carcinomatosa, cancer de ovario, cancer de prostata, cancer del sistema nervioso central (SNC), cancer de pulmon, cancer gastrico, cancer de esofago, cancer de vejiga urinaria, leucemia, linfoma, melanoma, cancer de celulas renales y metastasis de los mismos. Otros tipos de cancer contra los cuales el metodo de la presente invencion es eficaz incluyen otros carcinomas, sarcomas o linfomas, canceres de cabeza y cuello, cancer de hlgado, cancer de mama y cancer de pancreas.

Las realizaciones particularmente preferidas implican el tratamiento de los canceres seleccionados del grupo que consiste en glioma, neuroblastoma, astrocitoma, cancer del sistema nervioso central (CNS), y cancer de hlgado, as! como la inhibicion de las metastasis tumorales de los mismos.

Es particularmente beneficioso utilizar taurolidina y/o taurultam, a concentraciones suficientes para inducir la apoptosis en celulas de cancer, para prevenir la propagacion de metastasis, especialmente despues de la extirpacion quirurgica de los tumores. Los sujetos mamlferos son tlpicamente seres humanos.

Las cantidades para la administracion eficaz de un agente de transferencia de metilol de acuerdo con la presente invencion pueden comprender unidades de dosis farmaceutica dentro del intervalo de 0,1-1.000 mg/kg, preferiblemente de 150-450 mg/kg por dla, y lo mas preferiblemente 300-450 mg/kg por dla. Alternativamente, las dosis pueden administrarse en una base de gramos/dla, 2-60 g/dla. Las dosis preferidas pueden estar en el intervalo de 2-30 o 2,5-30 g/dla de taurolidina, 4-60 g/dla de taurultam o una mezcla de los mismos. La mayorla de las dosis preferidas estan en el intervalo de 10-20 g/dla de taurolidina, 20-40 g/dla de taurultam o una mezcla de los mismos.

Las formulaciones adecuadas para inyeccion o infusion pueden comprender una solucion isotonica que contiene uno o mas agentes solubilizantes, por ejemplo, polioles tales como la glucosa, a fin de proporcionar soluciones de mayor concentracion de taurolidina o taurultam. Tales soluciones se describen en el documento EP 253 662 B1. La concentracion de taurolidina o taurultam en tales soluciones puede estar en el intervalo de 1-60 g/litro. Los agentes de transferencia de metilol son generalmente poco solubles en agua. Por lo tanto, se requiere a menudo administrar volumenes relativamente grandes de soluciones acuosas que contienen taurolidina o taurultam, por ejemplo, de 10 g a 30 g de taurolidina y/o taurultam. Soluciones preferidas para la administracion de acuerdo con la presente invencion contienen aproximadamente 0,5-2 % de taurolidina y/o taurultam. Puede ser conveniente administrar estos compuestos por infusion dados los volumenes relativamente grandes de que se trate, convenientemente a intervalos durante el dla.

La administracion, preferiblemente por infusion, de la dosis diaria total puede llevarse a cabo a una velocidad constante durante 24 horas, o de acuerdo a un programa de infusion mas rapida de la dosis en porciones, con pausas entre cada porcion de la dosis, por ejemplo, infusion de 250 ml de una solucion al 2 % de taurolidina (dosis 5 g) durante 2 horas, seguido de una breve pausa de 4 horas, que se repite a lo largo de un perlodo de infusion de 24 horas para lograr una dosis diaria total de 20 g. Alternativamente, se pueden infundir 250 ml de una solucion de taurolidina al 2 % durante mas de una hora, con una pausa de una hora entre las porciones de dosis, y se repiten hasta que se alcanza la dosis diaria, de tal modo que la dosis diaria total se proporciona en el transcurso de menos de 24 horas (es decir, aproximadamente la mitad del dla), no administrandose infusion durante el resto del dla.

De acuerdo con una realization, se administran por via intravenosa cuatro botellas (250 ml cada una) de una solucion de taurolidina al 2 % a pacientes con cancer, a un ritmo de 40 gotas por minuto, una botella cada seis horas. El ciclo de terapia consiste en una fase administracion de infusiones diarias durante una semana, seguido de una fase de reposo de dos semanas. El tratamiento total consiste en al menos dos de tales ciclos. La eficacia de la

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solucion al 2 % de taurolidina administrada por via intravenosa se ha visto que es particularmente buena cuando se instilan 25-28 botellas de 250 ml de solucion de taurolidina al 2 % por ciclo.

De acuerdo con una realizacion adicional de la invencion, la fase de administration comprende un regimen diario mediante el que se administran 250 ml de solucion de taurolidina al 2 % en el transcurso de 2 horas, seguido de un descanso de cuatro horas, repetido durante 24 horas para alcanzar la dosis diaria total.

De acuerdo con una realizacion adicional de la invencion, la fase de administracion comprende un regimen diario mediante el cual 250 ml de solucion de taurolidina al 2 % se infunden durante una hora, seguido de una pausa de una hora, y se repite hasta que se alcanza la dosis diaria. Si la dosis total es de 20 g (por ejemplo), este regimen proporcionarla la dosis diaria con cuatro infusiones de 250 ml de taurolidina al 2 % en un lapso de tiempo de 7 horas. No se produce infusion durante el resto del dla. Las tasas de infusion pueden prolongarse (por ejemplo, hasta 250 ml durante 90 o 120 minutos) si el paciente muestra parametros hepaticos elevados.

En una realizacion adicional, se lleva a cabo la administracion concomitante de anticonvulsivos y/o terapia antiedema y/o antibioticos y/o reemplazo de fluidos y electrolitos.

1. Anticonvulsivos

Preferiblemente, el paciente debe ser estabilizado con medicamentos anti-convulsivos antes del tratamiento, para evitar complicaciones durante el tratamiento. Estos se pueden administrar convenientemente en parte en un contexto ambulatorio, as! como para prevenir cualquier estabilizacion de emergencia con una medication no deseada. El acido valproinico es el agente de primera election; la dosis debe ser determinada de acuerdo con las anallticas sangulneas y administrarse en 2 dosis individuales. Normalmente, se requiere una dosis de 1.200 mg a 1.500 mg. Si no se suficiente un tratamiento con acido valproinico, es posible un tratamiento de combination con lamotrigina. En caso de alergias o si el acido valproinico no se tolera, la estabilizacion primaria se va a hacer con lamotrigina. La fenitolna y la carbamazepina estan contraindicadas.

2. Terapia anti-edema

Una terapia anti-edema tambien se puede administrar, pero solo si es absolutamente necesario, porque pueden producirse slntomas neurologicos focales o bien intensificarse o pueden desarrollarse slntomas de presion intracerebral. La dexametasona deberla administrarse antes o despues de la administracion de taurolidina. La terapia anti-edema se debe administrar con dexametasona, usando la menor dosis posible. Para proteger el estomago se puede administrar un tratamiento concomitante con ranitidina 1 x 150 mg/dla. Si se observan problemas estomacales con esta terapia, se debe administrar un tratamiento alternativo con otros 1,2 x 20 mg/dla.

En los casos de presion intracerebral masivamente elevada y eficacia insuficiente de dexametasona, es posible una terapia con manitol, en particular, a una dosis de hasta 4 x 250 ml/dla.

3. La terapia con antibioticos

Se puede administrar un tratamiento antibiotico calculado con uno de los antibioticos enumerados a continuation hasta la llegada de la prueba de sensibilidad.

* Infection del tracto urinario:

primaria: cotrimoxazol alternativa: doxiciclina

* Neumonla:

primaria: eritromicina alternativa: doxiciclina

Los siguientes antibioticos solo deben utilizarse si es absolutamente necesario (en las infecciones mas graves, potencialmente mortales) y si la situation de sensibilidad lo justifica: quinolona, penicilina, cefalosporina

4. Terapia con reemplazo de llquidos y electrolitos en relation con el tratamiento con taurolidina intravenosa al 2 %

Una cantidad de 250 ml de solucion completa de electrolitos se administra preferiblemente al mismo tiempo y con la misma velocidad de infusion paralela a la infusion con 250 ml de taurolidina al 2 %. Los electrolitos y el hemograma deben ser controlados dos veces al dla y la presion venosa central debe ser revisada una vez al dla.

Si se observa una hipernatremia, primero, debe determinarse si la deshidratacion es la causa. Los diureticos solo deben usarse si el llquido se sustituye al mismo tiempo y despues la deshidratacion es descartada como la razon.

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El compuesto que contiene metilol se administra solo o en combinacion con uno o mas agentes antineoplasicos adicionales. En una realizacion preferida, el agente suplementario destruye las celulas tumorales por un mecanismo distinto de la apoptosis. Por ejemplo, un antimetabolito, un analogo de purina o pirimidina, un agente alquilante, un agente de reticulacion (por ejemplo, un compuesto de platino) y un agente de intercalacion, y/o un antibiotico se administra en un regimen de terapia de combinacion. El farmaco suplementario se administra antes, despues o simultaneamente con el agente que contiene metilol. Por ejemplo, el agente de transferencia de metilol se puede coadministrar con una fluoro-pirimidina, tal como 5-fluoro-uracilo (5-FU). Las cantidades de administracion diaria eficaces de una fluoro-pirimidina pueden estar en el intervalo de aproximadamente 0,1-1.000 mg por unidad de administracion farmaceutica. Las cantidades de administracion eficaces de 5-FU tambien pueden estar en el intervalo de aproximadamente 100-5.000 mg/m2 de area superficial corporal, preferiblemente de aproximadamente 200-1.000 mg/m2 de area superficial corporal, mas preferiblemente de aproximadamente 500-600 mg/m2 de area superficial corporal. El 5-FU tlpicamente se proporciona en ampollas de 250 mg o 500 mg para inyeccion, o capsulas de 250 mg para la administracion oral.

En otra realizacion, el efecto apoptotico de agentes de transferencia de metilol puede aumentarse mediante la co- administracion con un ligando de Fas. Un polipeptido ligando de Fas se divulga en la patente US-5.858.990. Las cantidades terapeuticamente eficaces de ligando de Fas generalmente estaran dentro de un intervalo de aproximadamente 0,01-1.000 mg/kg de peso corporal del paciente, preferiblemente de aproximadamente 0,1200 mg/kg de peso corporal del paciente, lo mas preferible de aproximadamente 0,2-20 mg/kg de peso corporal del paciente. Las cantidades terapeuticamente eficaces se pueden administrar como dosis una vez al dla, o varias veces al dla como dos, tres, cuatro o mas veces al dla.

En las celulas LN-18 taurultam (100 g/ml) claramente mejoraba la apoptosis inducida por 0,4 o 2,0 % en volumen de ligando del Fas. Ejemplo 1. Esto es el mas sorprendente ya que taurultam por si solo no afectaba a la viabilidad celular a esta concentracion. Por lo tanto, taurultam es capaz de intensificar la via apoptotica inducida por el ligando de Fas. Lo mismo se puede aplicar a taurolidina (100 pg/ml), aunque taurolidina sola hizo reducir la viabilidad celular a esta concentracion. Ejemplo 1. Estos resultados apoyan la idea de que el efecto apoptotico de taurultam y taurolidina se ve reforzado por el ligando de Fas. Cuando taurultam o taurolidina a una concentracion de 100 pg/ml se combinan con el ligando de Fas, la perdida total de celulas se representa como la suma de la atribuida al ligando de Fas y a la taurolidina o taurultam solos. Por lo tanto, la citotoxicidad de taurultam y taurolidina a esta concentracion parece ser aditiva a la apoptosis mediada por Fas. A concentraciones mas bajas, el efecto apoptopico de taurolidina y taurultam se ve en gran medida aumentado, mas alla de un efecto aditivo, por la co-administracion con el ligando de Fas.

La invencion tambien incluye el tratamiento de un tumor resistente a farmacos, por ejemplo, un tumor resistente a multiples farmacos (MDR), en un mamlfero mediante la administracion al mamlfero de un compuesto que contiene metilol. El tumor a tratar es un carcinoma o sarcoma. El tumor resistente al farmaco se selecciona del grupo que consiste en un tumor solido, un tumor no solido y un linfoma. Por ejemplo, el tumor resistente a farmacos es un cancer de mama, cancer de ovario, cancer de colon, cancer de prostata, cancer pancreatico, cancer del SNC, cancer de hlgado, cancer de pulmon, cancer de vejiga urinaria, linfoma, leucemia o sarcoma.

Segun otra realizacion, una solucion que contiene taurolidina y/o taurultam contiene ademas taurina, en una cantidad dentro de un intervalo de aproximadamente 1-20 g/l, preferiblemente de aproximadamente 5 g/l.

Una realizacion adicional proporciona metodos para el tratamiento tanto de tumores de hlgado primarios como de sus metastasis, por administracion directa de una solucion que contiene un agente de transferencia de metilol en el hlgado a traves de un cateter instalado en un receptor hepatico. Mediante la administracion del agente de transferencia de metilol en una solucion que ayuda al mantenimiento de la funcion hepatica y condiciones no isquemicas, la terapia se dirige al organo afectado, sin someter al organo indebidamente a un estres no necesario.

Para el tratamiento de tumores de hlgado primarios, la solucion de agente de transferencia de metilol se puede administrar a traves de la arteria hepatica, de manera que el agente terapeutico se administra en el organo para un efecto maximo. Alternativamente, la solucion puede ser suministrada a traves de la arteria gastroduodenal, para su administracion al hlgado a traves de la arteria hepatica. La solucion preferida para uso en esta realizacion es aquella que ayuda al mantenimiento de la funcion hepatica y minimiza el estres al organo asociado con la infusion de grandes volumenes de solucion de agente de transferencia de metilol. Soluciones que se pueden usar en la presente invencion se exponen en los Ejemplos.

Ejemplo 1: Solucion isotonica de taurolidina al 2 %

Una composicion adecuada para infusion intravenosa por goteo se muestra a continuacion.

Solucion esteril isotonica, 100 ml:

2.0 g Taurolidina

5.0 g PVP 16 PF UP aqua dest. ad solut. 100 ml.

PH 7,2 a 7,3

Filtrada en condiciones esteriles y esterilizacion con vapor.

Ejemplo 2: Solucion isotonica de Taurolin®, taurolidina al 2 % con taurina y electrolitos 5 Otra composition adecuada para infusion intravenosa por goteo se muestra a continuation. Solucion esteril isotonica, 100 ml:

2,0 g: Taurolidina

5,0 g: PVP 17 PF UP

0,5 g: Taurina

0,3 g: Cloruro sodico

Filtrada en condiciones esteriles y esterilizacion con vapor

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Ejemplo 3: Solucion Ringer isotonica de Taurolin® taurolidina al 2 % con taurina y electrolitos Otra composicion adecuada para infusion intravenosa por goteo se muestra a continuacion. 15 Solucion esteril isotonica, 100 ml:

2,0 g: Taurolidina

5,0 g: PVP 17 PF UP

0,5 g: Taurina

0,26 g: Cloruro sodico

0,0033 g: Cloruro potasico

0,004 g: Cloruro de calcio 2H2O

0,003 g: Hidrogenocarbonato de sodio

Filtrada en condiciones esteriles y esterilizacion con vapor

20 Ejemplo 4: Taurolin® Ringer Lactato Taurolidina al 2 % con taurina y electrolitos

Otra composicion adecuada para infusion intravenosa por goteo se muestra a continuacion.

Solucion esteril isotonica, 100 ml:

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2,0 g: Taurolidina

5,0 g: PVP 17 PF UP

0,5 g: Taurina

0,20 g: Cloruro sodico

0,013 g: Cloruro potasico

0,009 g: Cloruro de calcio 2H2O

0,0033 g: Solucion de lactato de sodio al 50 % (Farmacopea Europea)

Filtrada en condiciones esteriles y esterilizacion con vapor

Ejemplo 5: Solucion de taurultam 30

Una solucion preferida comprende:

Acido lactobionico: 35,830 g

Adenosina: 1,340 g

Rafinosa pentahidratada: 17,830 g

Hidroxietil almidon (HES) PL 40/0,5: 50,000 g

Glutation: 0,929 g

Alopurinol: 0,136 g

Taurultam: 10,000 g

KCl: 5,200 g

MgSO47H2O NaOH 25 % GV a pH 7,8 Granulos de NaOH Merck 6482: 1,230 g

Agua destilada: 900 ml

La solucion se esterilizo durante 16 minutos a 121 °C. El pH despues de la esterilizacion fue de 7,2, y el pH de la 35 solucion lista para usar era 7,47.

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Ejemplo 6: Induccion de la apoptosis

La taurolidina y el taurultam se ensayaron para determinar su capacidad para potenciar la apoptosis o inducir la muerte celular, solos y en combinacion con el ligando de Fas, en llneas celulares de glioma maligno humano. Las dos llneas celulares LN-18 y LN-229 representan sistemas modelo validados para la muerte celular apoptotica con diferentes sensibilidades frente al ligando de Fas (Schlappbach y Fontana, 1997). Por tanto, estas llneas celulares se utilizaron para probar la interaccion potencial de taurultam o taurolidina con la via apoptotica.

1) Reactivos

Taurolidina (N° de lote 41692/7) y taurultam (Lote E/39024/4) fueron proporcionados por Geistlich Pharma AG, Wolhusen, Suiza. El medio de cultivo DME y el suero fetal bovino (FBS) se adquirieron de Gibco BRL, Basilea, Suiza. El ensayo de proliferacion celular WST-1 se adquirio de Roche Diagnostics, Rotkreuz, Suiza. El ligando de Fas (sobrenadante de un sistema de sobreexpresion) y las llneas celulares de glioma humano LN-18 y LN-229 fueron amablemente proporcionadas por el Prof. A. Fontana, Instituto de Inmunologla Cllnica del Hospital Universitario de Zurich, Suiza.

2) Llneas celulares

Las llneas celulares LN-18 y LN-229 se cultivaron a 37 °C y CO2 al 5 % en DMEM que contiene 5 % de SFB y glutamina 2 mM (placas de 10 cm NUNCLON 15.035). En los experimentos en los que ligando de Fas se probo por si solo, se sembraron aproximadamente 1x104 celulas por pocillo en placas de 96 pocillos (NUNCLON 167.008) dando como resultado una confluencia de aproximadamente 60 % al dla siguiente (17 h de incubacion). En todos los demas experimentos se sembraron en placa aproximadamente 1,5x104 celulas, lo que tuvo como resultado una confluencia de aproximadamente 90 % al dla siguiente (17 h de incubacion). Se anadio ligando de Fas como sobrenadante indicado como % en volumen (% en vol) del volumen total de cultivo.

3) Prueba de viabilidad celular

Las celulas LN-18 y LN-229 y se incubaron en 50 gl de medio en la ausencia o presencia de cualquiera de ligando de Fas, taurultam, taurolidina o respectivas combinaciones de los mismos. Despues de una incubacion de 17 h la viabilidad celular se determino mediante la adicion de 50 gl de medio que contiene un reactivo WST-1 concentrado doble. La coloracion resultante de la actividad de la succinato reductasa mitocondrial se midio en un lector de ELISA a 450 nm usando una longitud de onda de referencia de 690 nm.

Las llneas celulares de glioma maligno humano LN-18 y LN-229 se utilizaron para determinar la capacidad de taurolidina y taurultam para afectar a la viabilidad celular y/o para reforzar la apoptosis inducida por el ligando de Fas. Previamente se habla descrito que las dos llneas celulares de glioma maligno humano, LN-18 y LN-229 mostraban diferente sensibilidad al efecto apoptotico del ligando de Fas (Schlappbach y Fontana, 1997).

1) Sensibilidad de LN-18 y LN-229 al ligando de Fas

En una primera serie de experimentos se investigo si la diferente sensibilidad de LN-18 y LN-229 al ligando de Fas se reproducla en nuestras condiciones experimentales. Las dos llneas celulares se incubaron durante la noche (17 h) en placas de 96 pocillos que contenlan 1x104 celulas por pocillo con concentraciones crecientes de ligando de Fas (3,1, 6,25, 12,5, 25,0 y 50 % en vol). En ausencia de ligando de Fas las celulas alcanzaron aproximadamente 60 % de confluencia despues de la incubacion durante la noche. En presencia de ligando de Fas LN-18 era extremadamente sensible, mostrando mas del 90 % de la viabilidad celular en presencia de solo el 6,25 % en vol de ligando de Fas. Incluso al 3,1 %, se observo una reduction de aproximadamente 85 % en la viabilidad celular. Por el contrario, la viabilidad de las celulas LN-229 no se ve muy afectada por 6,25 % en vol de ligando de Fas (reduccion de aproximadamente el 10 %) y se redujo solo a concentraciones mas altas, con un maximo del 40 % de perdida de celulas en presencia de la mayor concentration de ligando de Fas examinado (50 % en vol).

2) Influencia de taurultam sobre la apoptosis inducida por el ligando de Fas en celulas LN-18.

Las celulas LN-18 se incubaron durante 17 h con concentraciones crecientes de taurultam (5, 20, 100 gg/ml) en ausencia y presencia de dos concentraciones de ligando de Fas (0,4 % en vol y 2,0 % en vol). Taurultam por si solo, incluso a la concentracion mas alta ensayada (100 gg/ml), no afecto a la viabilidad celular (se observo una reduccion de aproximadamente 5 % con 5 y 20 gg/ml, y la viabilidad realmente parecio aumentar con 100 gg/ml). En presencia de 0,4 % en vol de ligando de Fas solo, la viabilidad celular se redujo aproximadamente solo un 10 %, un efecto que se mantuvo sin cambios en presencia de 5 o 20 gg/ml de taurultam. Sin embargo la viabilidad celular se redujo drasticamente cuando se incubaba simultaneamente 0,4 % en vol de ligando de Fas con 100 gg/ml de taurultam. Cuando se anadla el ligando de Fas a una concentracion mas alta (2,0 % en vol.), el ligando de Fas solo inducla apoptosis en el 60 % de las celulas. Este efecto tambien se incremento con taurultam a 100 gg/ml, pero no con 5 o 20 gg/ml. Por lo tanto, taurultam es capaz de potenciar el efecto apoptotico del ligando de Fas en celulas LN-18 a una concentracion (100 gg/ml), el cual por si solo no afectaba a la viabilidad celular.

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3) Influencia de la taurolidina sobre la apoptosis inducida por el ligando de Fas en celulas LN-18

Se incubaron celulas LN-18 durante 17 horas con 0,4 o 2,0 % en vol de ligando de Fas en ausencia y presencia de concentraciones crecientes de taurolidina (5, 20, 100 gg/ml). La taurolidina por si misma no afectaba apreciablemente a la viabilidad celular produciendo una reduccion de solo el 10 % en la concentracion mas alta ensayada (100 gg/ml). En la presencia de solo ligando de Fas (0,4 % o 2,0 %) la viabilidad celular se vela afectada de la misma manera que la descrita anteriormente. La viabilidad celular se redujo aun mas por la taurolidina pero solo a la concentracion mas alta ensayada (100 gg/ml). Por lo tanto, la taurolidina fue capaz de mejorar el efecto del ligando de Fas en celulas LN-18 a una concentracion (100 gg/ml), la cual no afectaba apreciablemente a la viabilidad celular per se.

4) Influencia de taurultam sobre la apoptosis inducida por el ligando de Fas en celulas LN-229

La incubacion de las celulas LN-229 durante 17 h con taurultam solo no tuvo ningun efecto con 5 y 20 gg/ml, pero redujo la viabilidad celular en un 35 % a 100 gg/ml. Cuando las celulas LN-229 se incubaban solo con ligando de Fas (10 % o 50 %) la viabilidad celular se redujo aproximadamente en solo el 20 % en presencia de una alta concentracion de ligando de Fas (50 % en vol). Cuando taurultam se anadio a concentraciones que eran inactivas per se (5 y 20 gg/ml) no se observo ningun cambio en la eficacia del ligando de Fas (10 o 50 % en vol). Solo era con la mayor concentracion de taurultam (100 gg/ml) cuando aumentaba mas la perdida celular inducida por el ligando de Fas. Por lo tanto, los resultados con LN-229 demuestran la capacidad de taurultam para mejorar la destruccion de las celulas en presencia de ligando de Fas.

5) Influencia de taurolidina sobre la apoptosis inducida por el ligando de Fas en celulas LN-229

La exposition de las celulas LN-229 a taurolidina solo durante 17 h causo una fuerte perdida de la viabilidad celular de aproximadamente un 70 % a la concentracion mas alta ensayada (100 gg/ml). Por lo tanto, las celulas LN-229 eran mas sensibles a la taurolidina que las celulas LN-18. Cuando se incubaba simultaneamente con ligando de Fas (10 % en vol), la destruccion celular se vela reforzada por la taurolidina a 100 gg/ml. Con 50 % en vol de ligando de Fas el efecto fue mas pronunciado y evidente incluso para taurolidina 20 gg/ml.

Ejemplo 7: Uso y aplicacion de taurolidina y/o taurultam para el tratamiento y/o profilaxis de tumores del sistema nervioso central

1. Celulas tumorales utilizadas para los experimentos

Para los experimentos, se utilizaron celulas tumorales gliales C6, celulas tumorales neuronales HT22, celulas tumorales de glioma/glioblastoma humano U373 y celulas derivadas de pacientes con glioblastoma.

2. Preparation de las celulas tumorales obtenidas del paciente

Las celulas tumorales obtenidas de pacientes con glioblastoma se obtuvieron intraoperatoriamente. El tejido tumoral se conservo en medio RPMI 1640 sin FCS. El tejido se subcultivo a continuation en matraces Falcon de 15 ml; se anadio tripsina 0,025 % con PBS, seguido de incubacion a 37 °C. Despues de esto, se anadio medio RPMI 1640 con FCS y se centrifugo. El siguiente paso fue la incubacion con ADNasa, la resuspension y la disociacion, seguido por la etapa de lavado en medio para eliminar la ADNsa. Las celulas fueron cultivadas a continuacion en matraces Falcon.

3. Metodo de action anti-neoplasica de la taurolidina y/o sus metabolitos

Ultraestructuralmente se pudo observar la contraction del citoplasma, la condensation y la marginacion de la cromatina. Estos cambios fueron evidentes ya a los 30 minutos de incubacion con 0,1 gg/ml de taurina y aumentaron notablemente con el tiempo y con la concentracion de taurolidina. Las mitocondrias no se vieron afectadas ultraestructuralmente. La citometrla de flujo mostro un aumento inicial en el pico G0/G1 y en la fase S que se inicia a los 30 minutos. Estos cambios iniciales fueron seguidos por una disminucion de la luz frontal y la dispersion lateral. Ademas, la fragmentation dependiente de la concentracion de ADN comenzo a los 60 minutos. Despues de 24 horas, la fragmentacion del ADN era casi completa. A concentraciones de 2,0 gg/ml de taurolidina y mas, los cambios en el tamano celular eran solo mlnimos.

Los resultados descritos en combination con los resultados de los metodos de tenido especiales (preparacion Leucostat) sugieren un mecanismo apoptotico de muerte de celulas tumorales. Las celulas cerebrales normales no se vieron afectadas por la incubacion con taurolidina o taurultam en concentraciones de hasta 4 gg/ml durante un maximo de 5 dlas.

Ejemplo 8: Pauta posologica de dos ciclos para el tratamiento de pacientes con cancer usando taurolidina intravenosa al 2 %.

Se administraron por via intravenosa cuatro botellas (250 ml cada una) de una solution de taurolidina al 2 % a pacientes con cancer, a un ritmo de 40 gotas por minuto, una botella cada seis horas. El ciclo de administration consiste en una fase administracion de infusiones diarias durante una semana, seguido de una fase sin administracion de dos semanas, y seguido de otra fase de administracion de cuatro botellas por dla como se indico

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anteriormente. Se ha observado que la eficacia de la solucion de taurolidina al 2 % administrada por via intravenosa es particularmente buena cuando se instilan por ciclo 25-28 botellas de 250 ml de solucion de taurolidina al 2 %.

Ejemplo 9: Pauta posologica de cuatro ciclos para el tratamiento de pacientes con gliomas malignos usando taurolidina intravenosa al 2 %

El tratamiento comprende un mlnimo de 4 ciclos. Cada ciclo tiene una duracion de 7 dlas y esta comprendido por lo siguiente:

1. Primer Ciclo

a. Infusion intravenosa de 250 ml de taurolidina al 2 % y 250 ml de solucion completa de electrolitos a traves del cateter de la vena central con un tiempo de infusion de 60 minutos.

b. Si esta terapia provoca elevacion de los parametros hepaticos, es necesario aumentar el tiempo de infusion a 90 o 120 minutos.

c. Descanso de 60 minutos

d. Repetir las terapias de los apartados a o b y c durante un total de 6 veces al dla.

e. Para un tiempo de infusion de 60 minutos la duracion del programa de infusion diaria por 250 ml de taurolidina es de 11 horas, para 90 minutos de tiempo de infusion es de 14 horas y para 120 minutos de tiempo de infusion es de 17 horas. Durante el resto del tiempo no se administra ningun farmaco

f. Fase de reposo

2. Ciclos posteriores

c. Descanso de 60 minutos

d. Repetir las terapias de los apartados a o b y c durante un total de 4 veces al dla.

e. Para un tiempo de infusion de 60 minutos la duracion del programa de infusion diaria por 250 ml de taurolidina es de 7 horas, para 90 minutos de tiempo de infusion es de 9 horas y para 120 minutos de tiempo de infusion es de 11 horas. Durante el resto del tiempo no se administra ningun farmaco.

Ejemplo 10: Terapia del glioblastoma con taurolidina (observacion de un caso)

El siguiente es un caso relacionado con el tratamiento de un solo individuo con un solo ciclo de tratamiento.

Paciente: “F.D.”, varon, 59 anos

Diagnostico: glioma bifrontal maligno de gran tamano (8 x 8 x 8 cm) con afectacion del cuerpo calloso (“glioma en mari posa”).

Procedimiento antes del tratamiento con taurolidina: El paciente fue remitido a los departamentos de neurocirugla en Heidelberg y Wurzburg, la operation fue denegada, la radioterapia y la quimioterapia fueron rechazadas por el paciente.

Tratamiento previo: corticosteroides orales.

Tratamiento planificado: taurolidina via intravenosa

Principales molestias al ingreso: cefalea difusa, incontinencia urinaria, vision borrosa, afasia motora, trastornos de la marcha, problemas de memoria.

Exploration neurologica al ingreso: despierto con somnolencia, alerta, problemas de vision, afasia motora casi completa, apraxia, alteraciones de la marcha, incontinencia urinaria, deterioro mnesico grave y deficit de concentration

Indice de Karnofsky al ingreso: 20-30

RM en el dla 1 del tratamiento (tratamiento previo): lesion que ocupa el espacio bifrontal (aproximadamente 8 x 8 x 8 cm) con forma irregular y potenciada con contraste de tipo anular y afectacion destructiva del cuerpo calloso. El marcado efecto ocupante del espacio conduce a la desaparicion de casi todos los espacios de reserva.

Tratamiento

Dla 1: Consentimiento informado; Muestras de sangre; RM.

Dla 2: Insertion de un cateter venoso central; Radiografla de torax.

Dias 3-8: Administration intravenosa de 4 x 250 ml de taurolidina al 2 %/dla en 2 horas, seguido por un intervalo de 4 horas; muestras de sangre dos veces al dla; sustitucion de electrolitos.

Dla 9: La administracion intravenosa de 1 x 250 ml de taurolidina al 2 % en 2 horas; Alta.

Resumen del tratamiento:

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En total, se administraron 25 x 250 ml de taurolidina al 2 % (125 g de taurolidina) sin efectos secundarios. Los electrolitos y los fluidos fueron sustituidos de acuerdo con los resultados de las muestras de sangre.

Principales molestias al alta: Dolor de cabeza mejorado, sin incontinencia urinaria, vision mejorada, marcha alterada mejorada, afasia motora ligeramente mejorada, deterioro de la memoria.

Exploration neurologica al alta: Despierto, alerta, vision mejorada, afasia motora ligeramente mejorada, marcha alterada mejorada, apraxia ligeramente mejorada, sin incontinencia urinaria, graves deficits mnesicos y deficits de concentration.

Indice de Karnofsky al alta: 40-50

En vista de la drastica mejora observada en el estado del paciente despues de un solo ciclo de tratamiento, se espera que un regimen de infusion de al menos dos ciclos proporcionara el efecto terapeutico deseado.

Ejemplo 11: Tratamiento de un glioblastoma multiforme grave de grado IV

Antes del tratamiento el paciente presentaba glioblastoma multiforme grave de grado IV con lobulo temporal izquierdo afectado. Antes del tratamiento, el tumor era prominente en las imagenes de tomografla computerizada del craneo del paciente. Se obtuvieron imagenes del craneo del paciente en una secuencia de imagenes ponderadas en T2 en los planos de orientation axial, sagital y coronal, as! como en una secuencia de imagenes ponderadas en T1 los planos de orientacion axial de forma nativa y axial, coronal y sagital despues de la aplicacion de medio de contraste, as! como mediante espectroscopia de RM.

El paciente fue tratado con cuatro ciclos de tratamiento cada uno consistentes en una fase de infusion de siete dlas de una dosis diaria de 20 g de taurolidina (solution de taurolidina al 2 % 4 x 250 ml) y una fase de descanso de dos dlas. Despues de los cuatro ciclos, el paciente se sometio a una fase adicional de infusion de dos dlas. Durante el tratamiento se obtuvieron imagenes de tomografla computerizada regulares del craneo del paciente.

Al final del segundo ciclo de tratamiento (200 g de taurolidina administrados), el edema cerebral se habla reducido notablemente. Al final del tercer ciclo de tratamiento (300 g de taurolidina administrados), el crecimiento del tumor se habla detenido. Despues de la finalization de todo el ciclo de tratamiento (600 g de taurolidina administrados), se observo por tomografla computerizada que el tumor se habla desintegrado casi en su totalidad. Se observo poca o ninguna necrosis durante el ciclo del tratamiento, lo que indica que la reduction del tumor fue el resultado de la apoptosis.

Ejemplo 12: Tratamiento de tumores cerebrales con aplicacion directa de taurolidina/taurultam

El agente de transferencia de metilol se aplica directamente a la cavidad del tumor utilizando tubos que contienen taurolidina/taurultam consistentes en varios segmentos con membrana semipermeable.

Despues de la elimination total o parcial del tumor, se implanto un tubo especial en la cavidad del tumor, de modo que el extremo de este tubo se encuentra subgaleal. El tubo incluye varios segmentos de material semipermeable, que contiene taurolidina/taurultam y se puede rellenar a traves de un puerto subgaleal.

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REIVINDICACIONES

1. El uso de un agente de transferencia de metilol en la fabricacion de un medicamento para uso en la induccion de la muerte apoptotica de una celula neoplasica en un mamlfero poniendo en contacto dicha celula con una cantidad inductora de apoptosis de dicho medicamento, en el que dicho medicamento es para ser administrado durante al menos dos ciclos de administracion, incluyendo cada ciclo de administracion (i) una fase de administracion de 1 a 8 dlas durante la cual dicho medicamento se administra cada dla a una dosis diaria total de 2 a 60 g de dicho agente de transferencia de metilol y (ii) una fase sin administracion de 1 a 14 dlas, durante la cual no se administra agente de transferencia de metilol, en el que dicho medicamento se va a coadministrar con el ligando de Fas y en el que el agente de transferencia de metilol es taurolidina, taurultam o una mezcla de los mismos.
2. Uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que el agente de transferencia de metilol es taurolidina y el medicamento se va a administrar durante cada fase de administracion a una dosis diaria total de 2 a 30 g de taurolidina.
3. Uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que el agente de transferencia de metilol es taurultam y el medicamento se va a administrar durante cada fase de administracion a una dosis diaria total de 4 a 60 g de taurultam.
4. Uso de acuerdo con cualquier reivindicacion precedente, en el que el medicamento se va a coadministrar con un otro agente antineoplasico.
5. Uso de acuerdo con cualquier reivindicacion precedente, en el que el medicamento comprende una solucion del agente de transferencia de metilol, conteniendo dicha solucion ademas taurina.
6. Uso de acuerdo con cualquier reivindicacion precedente, en el que el medicamento es para uso en el tratamiento o la profilaxis del cancer de hlgado.
7. Uso de acuerdo con la reivindicacion 6, en el que el medicamento se va a administrar a traves de una vena portal en el tratamiento de cancer de hlgado metastasico.
8. Uso de acuerdo con cualquier reivindicacion precedente, en el que el medicamento se va a administrar durante cada fase de la administracion por infusion continua de tal manera que la dosis diaria del agente de transferencia de metilol se infunde durante 24 horas.
9. El uso como se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que el medicamento se va a administrar durante cada fase de la administracion por infusion de tal manera que la dosis diaria del agente de transferencia de metilol se infunde como una serie de dosis parciales, estando cada infusion de dosis parcial seguida por un descanso durante el cual no se produce la infusion.
10. Uso de acuerdo con la reivindicacion 9, en el que las dosis parciales se van a infundir de tal forma que la dosis diaria total del agente de transferencia de metilol se administrara durante un ciclo de 24 horas.
11. Uso de acuerdo con la reivindicacion 10, en el que cada dosis parcial se va a infundir durante el transcurso de dos horas, seguido de un descanso de cuatro horas.
12. Uso de acuerdo con la reivindicacion 11, en el que las dosis parciales se van a infundir de tal forma que la dosis diaria total del agente de transferencia de metilol se administrara durante un ciclo de menos de 24 horas.
13. Uso de acuerdo con la reivindicacion 12, en el que cada dosis parcial se va a infundir durante el transcurso de una hora, seguido por un descanso de una hora.
14. Uso de acuerdo con cualquier reivindicacion precedente, en el que el medicamento se va a administrar en dos ciclos de administracion.
15. Uso de acuerdo con la reivindicacion 14, en el que cada ciclo de administracion comprende (i) una fase de administracion de siete dlas durante la cual se administran cuatro porciones de 250 ml de solucion de taurolidina al 2 % como una infusion continua durante cada uno de los siete dlas y (ii) una fase sin administracion de siete dlas.
16. El uso como se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, en el que el medicamento se va a administrar en cuatro ciclos de administracion.
17. Uso de acuerdo con la reivindicacion 16, en el que cada ciclo de administracion incluye una fase de administracion de siete dlas durante cada dla de los cuales se administran cuatro porciones de 250 ml de solucion de taurolidina al 2 %, de tal manera que cada porcion de dosis se infunde en el transcurso de una a dos horas, seguido de un descanso sin administracion de una hora.
18. Uso de acuerdo con cualquier reivindicacion precedente, en el que dicho medicamento se va a coadministrar con 0,01-1000 mg/kg de peso corporal del paciente de dicho ligando de Fas.
19. Uso de acuerdo con la reivindicacion 18, en el que dicho medicamento se va a coadministrar con 0,1-200 mg/kg 5 de peso corporal del paciente de dicho ligando de Fas.
20. Uso de acuerdo con la reivindicacion 19, en el que dicho medicamento se va a coadministrar con 0,2-20 mg/kg de peso corporal del paciente de dicho ligando de Fas.