ES2531285B1 - Composiciones y usos en la activación de la termogénesis - Google Patents

Composiciones y usos en la activación de la termogénesis Download PDF

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Abstract

Composiciones y usos en la activación de la termogénesis.#La presente invención se refiere al uso combinado de estilbenoide seleccionado de resveratrol, pterostilbeno y piceatannol y al menos un flavonol seleccionado de quercetina, quercetina 4’-O-glucósido, quercetina 3,4’ diglucósido, kaempferol, miricetina e isorhamnetina para la fabricación de una composición para el tratamiento y/o la prevención de sobrepeso/obesidad, desórdenes de temperatura corporal y/o patologías asociadas a ambas condiciones en mamíferos. Además la presente invención se refiere a composiciones farmacéuticas, complementos alimenticios y composiciones cosméticas que comprenden dicha composición.

Description

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DESCRIPCION
Composiciones y usos en la activacion de la termogenesis.
La presente invention se refiere al uso de composiciones que comprenden resveratrol y quercetina para la activacion (estimulacion, aumento, mayor eficiencia, mayor capacidad) de la termogenesis, y su utilization en el tratamiento y/o la prevention de sobrepeso, obesidad y/o patologlas o alteraciones o desordenes asociadas al sobrepeso en mamlferos, en el mantenimiento de la temperatura corporal y en las situaciones en las que se puede producir una hipofuncion termica o termogenica, asl como en los trastornos del ahorro o eficiencia energetica. Ademas la presente invencion se refiere a composiciones farmaceuticas, complementos alimenticios y composiciones cosmeticas que comprenden dicha composition. Por tanto, la invencion se podrla encuadrar en el campo de las industrias farmaceutica, alimenticia y cosmetica.
ESTADO DE LA TECNICA ANTERIOR
El tejido adiposo responsable del almacenamiento del excedente de energla como grasa es el tejido adiposo blanco. Este tejido esta formado por adipocitos blancos que almacenan la grasa en forma de una unica gota lipldica que ocupa casi todo el citoplasma (adipocitos uniloculares). Pero, ademas, existe otro tipo de tejido adiposo, el tejido adiposo marron, tambien conocido como tejido adiposo pardo, formado por adipocitos marrones, que esta especializado en el gasto energetico. Los adipocitos marrones almacenan la grasa en forma de multiples gotas lipldicas (adipocitos multiloculares) y actuan disipando el exceso de energla (grasa) como calor, en un proceso que se conoce como termogenesis, en respuesta a estlmulos como el frlo o una dieta hipercalorica y gracias a la action de la protelna desacoplante termogenica 1 o UCP1 (Cannon, B et al., J. Physiol. Rev. 84, 277-359, 2004; Palou, A et al., Int. J. Biochem. Cell. Biol. 30, 7-11, 1998).
Para que el peso corporal se mantenga estable es necesario que haya un equilibrio homeostatico entre la ingesta y el gasto energetico. De esta manera, la activacion de la termogenesis en el tejido adiposo marron contribuye a aumentar el gasto energetico y por tanto a prevenir el exceso de adiposidad corporal. De hecho, en roedores el tejido adiposo marron contribuye a mantener el peso corporal, y se ha descrito que su activacion promueve el gasto energetico, reduce la adiposidad y protege de la aparicion de obesidad inducida por la dieta (Ghorbani, M et al., Biochem. Pharmacol. 54: 121-131, 1997).
Sin embargo, no habla mucho interes por el tejido adiposo marron porque, a diferencia de lo que ocurre en roedores, durante anos se penso que los humanos adultos careclamos de este tejido y que por tanto no contribula al mantenimiento del peso corporal en nuestra especie. Pero hace unos anos se ha descrito que esto no es asl, sino que los humanos adultos mantenemos tejido adiposo marron activo en cantidades significativas y de modo disperso en areas discretas, localizadas principalmente en la region cervical, supraclavicular, axilar y paravertebral (Nedergaard, J et al., Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 293, 444-452, 2007). Es mas, este tejido adiposo marron puede ser activado en la mayorla de los humanos y su activacion se correlaciona inversamente con el Indice de masa corporal, el contenido de grasa total y la diabetes y otra alteraciones, ya que utiliza para su funcionamiento sobre todo grasa pero tambien glucosa (Celi, F. S. et al., N. Engl. J. Med. 360: 1553-1556, 2009).
Gracias a estos conocimientos, el tejido adiposo marron y su potencial termogenico es actualmente una diana reconocida a nivel internacional para combatir el sobrepeso, la obesidad y la diabetes tipo 2. Precisamente, el proyecto europeo DIABAT, en el que participan inventores de esta patente, tiene como objetivo la activacion de la termogenesis en el tejido adiposo marron para prevenir y tratar la diabetes tipo 2.
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A parte de los adipocitos marrones clasicos presentes en el tejido adiposo marron se ha descrito en modelos animales (principalmente roedores) que frente a determinados estlmulos pueden aparecer adipocitos con caracterlsticas similares a los marrones pero en depositos de tejido adiposo blanco, en un proceso que se ha denominado browning o marronizacion (Loncar, D. et al., Cell Tissue Res. 266: 149-161, 1991).
Tambien en humanos se han encontrado zonas o areas de tejido adiposo marron dentro de depositos de grasa blanca, y adipocitos con caracterlsticas de adipocitos marrones que expresan ARNm de UCP1 (Garruti, G, et al., J. Lipid. Res. 38: 2125-2133, 1997). Estas celulas han recibido el nombre de celulas o adipocitos brite (del ingles, brown-in-white, marron en blanco), tambien conocidas como celulas beige, que llegan a desarrollar una capacidad termogenica similar a la de los adipocitos marrones clasicos (Petrovic, N et al., J. Biol. Chem. 285: 7153-7164, 2010) por lo que podrlan contribuir al gasto energetico y al mantenimiento del peso corporal.
La posibilidad de aumentar la cantidad de adipocitos marrones funcionales, especialmente aquellos presentes en los abundantes depositos de grasa blanca (brite) aparece como una interesante herramienta o posibilidad terapeutica para combatir (prevenir o tratar) la obesidad y problemas relacionados. De hecho, se cree que la remodelacion del tejido adiposo blanco a marron puede conferir protection frente a la obesidad en numerosos modelos experimentales (Bonet, M.L et al., Biochim. Biophys. Acta 1831: 969-985, 2013).
El control farmacologico o nutricional de la termogenesis emerge en este contexto como una nueva estrategia terapeutica en el control de la termorregulacion, del peso corporal, la obesidad y sus complicaciones relacionadas, especialmente la resistencia a la insulina y la diabetes, la dislipemia y el hlgado graso. En concreto, la resistencia a la insulina es una de las alteraciones fisiopatologicas mas estrechamente relacionadas con la obesidad y el sobrepeso. El exceso de grasa corporal genera inflamacion del tejido adiposo y una lipotoxicidad sistemica que conduce a la resistencia a la insulina y eventualmente al fallo o disfuncion de las celulas pancreaticas productoras de insulina, lo que origina diabetes (Saltiel, A.R., Cell 104:517-529, 2001). En general, la obesidad se asocia a una serie de alteraciones y slntomas caracterlsticos que suelen ir ligados, como son resistencia a la insulina, hiperinsulinemia, intolerancia a la glucosa, dislipemia e hipertension, y que en su conjunto definen lo que se conoce como slndrome metabolico. Interesantemente tambien el correcto funcionamiento de la termogenesis se esta revelando como muy importante para combatir (prevenir o tratar) la diabetes tipo 2 (vease proyecto DIABAT).
Aparte de contribuir a mantener el balance y la homeostasis energetica y el peso corporal, la termogenesis juega un papel importante en la termorregulacion, que consiste en la capacidad de mantener la temperatura corporal correcta bajo condiciones ambientales cambiantes. Un cuerpo sano mantiene su temperatura dentro de un estrecho margen (36-37,5°C) usando mecanismos de termorregulacion. El mantenimiento de una correcta temperatura corporal es crucial para poder mantener las funciones vitales (McCallum, M. y Higgins, D. Nurs Times. 108(45):20-2, 2012). Desde hace muchos anos se conoce la importancia de la termogenesis inducida por el frlo en el tejido adiposo marron para mantener la temperatura corporal en humanos recien nacidos (Nedergaard, J et al., Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 293, 444-452, 2007). A ralz de los datos mas recientes que indican que los humanos adultos siguen manteniendo cantidades considerables de este tejido, su papel termorregulador en la edad adulta se ha hecho tambien evidente (Nedergaard, J et al., Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 293, 444-452, 2007).
A la vista de lo anterior, proporcionar metodos y composiciones para el tratamiento, prevention o control de la termorregulacion (temperatura), del sobrepeso, as! como de algunas de sus
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complicaciones metabolicas, es un tema de enorme interes tanto terapeutico como nutricional, ademas del puramente estetico.
Una insuficiente production de calor (termogenesis) puede producirse en situaciones como exposition a ambientes frlos, dietas hipocaloricas para perdida de peso que bajan el metabolismo basal e ingesta disminuida de alimentos, entre otros.
El resveratrol es un polifenol que aparece de manera natural en uvas y en otros alimentos de origen vegetal y para el que se han descrito importantes efectos sobre el metabolismo energetico. En ratones alimentados con dietas hiperlipldicas la suplementacion con altas dosis de resveratrol (200-400 mg/kg/dla) protege del desarrollo de la obesidad y resistencia a la insulina, a la vez que aumenta el gasto energetico (Lagouge, M. et al., Cell 127:1109-1122, 2006). Ademas, tambien existen datos en humanos que muestran que la suplementacion con resveratrol durante 30 dlas tiene efectos sobre la salud comparables a los de la restriction calorica (Timmers, S. et al., Cell Metab. 14: 612-622, 2011).
La induction de la expresion de UCP1 se ha observado in vitro en adipocitos blancos en estado de diferenciacion tratados con resveratrol, pero no en adipocitos maduros (Picard, F. et al., Nature 429: 771-776, 2004). Por tanto, los efectos anti-obesidad del resveratrol pueden ser debidos, en parte, a los efectos sobre el metabolismo del tejido adiposo, pero no existen evidencias in vivo de que produzcan un efecto inductor de la remodelacion de tejido adiposo blanco en marron (termogenesis).
La quercetina es un flavonoide que aparece en alimentos de origen vegetal de la dieta y para el que se han descrito efectos beneficiosos en relacion a las enfermedades cardiovasculares (Arts, I. C. et al., Am. J. Clin. Nutr. 81:317S-325S, 2005). Al igual que el resveratrol, el tratamiento con altas dosis de quercetina (250 mg/kg/dla) en ratas es capaz de prevenir la ganancia de peso inducida por la ingesta de una dieta hiperlipldica (Jung, C.H., et al., Phytother Res. 27:139-43, 2013). No existe ninguna evidencia de los efectos de la quercetina sobre el tejido adiposo marron, la termogenesis, o sobre el proceso de marronizacion.
DESCRIPCION DE LA INVENCION
Esta invention se basa en el efecto potenciador de la capacidad termogenetica en el control de la temperatura corporal, asl como en el efecto anti-obesidad de la combination de resveratrol y quercetina que, en dosis bajas y por si solos no producen efecto, pero que en combinacion sorprendentemente muestran una sinergia que resulta en efectos claros de activation del sistema de gasto energetico, la capacidad de producir calor, la reduction de grasa y de peso corporal y de las complicaciones asociadas.
La presente invencion se refiere al uso combinado de resveratrol y quercetina para el tratamiento y/o prevention de una insuficiente termogenesis y asl de sus consecuencias (prevention del sobrepeso u obesidad y/o patologlas asociadas al sobrepeso en mamlferos, prevencion de una deficiente termorregulacion y prevencion de un excesivo ahorro energetico por bajada del metabolismo basal o asociado a circunstancias de baja termorregulacion).
Las ventajas que presenta la presente invencion son:
- Mantenimiento del peso corporal;
- Perdida de peso corporal en personas con sobrepeso/obesidad;
- Normalization de los parametros y funciones metabolicas alteradas relacionadas con una adiposidad incrementada: hiperglucemia, hipercolesterolemia, hipertrigliceridemia, hlgado graso e hipertension;
- Mantenimiento de una correcta temperatura corporal, especialmente en aquellas personas
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con factores de predisposition a la hipotermia;
- Mantenimiento de una tasa metabolica basal;
- Prevention de una excesiva eficiencia o aprovechamiento energetico en la utilization de distintos alimentos o nutrientes, como la que se da en reglmenes dieteticos bajos en calorlas;
- Prevencion de una bajada en la tasa metabolica debida a tratamientos farmacologicos, medicos o nutricionales.
Por tanto, un primer aspecto de la presente invention se refiere al uso combinado de al menos un estilbenoide seleccionado de resveratrol, pterostilbeno y piceatannol y al menos un flavonol seleccionado de quercetina, quercetina 4’-O-glucosido, quercetina 3,4’ diglucosido,
kaempferol, miricetina e isorhamnetina para la fabrication de una composition para el tratamiento y/o la prevencion de la hipofuncion termogenica y/o patologlas asociadas a la hipofuncion termogenica en mamlferos.
Un segundo aspecto de la presente invencion se refiere a una composicion que comprende al menos un estilbenoide seleccionado de resveratrol, pterostilbeno y piceatannol y al menos un flavonol seleccionado de quercetina, quercetina 4’-O-glucosido, quercetina 3,4’ diglucosido, kaempferol, miricetina e isorhamnetina, caracterizada porque la proportion de
estilbenoide:flavonol esta comprendida entre 1:0,05 y 1:10.
Un tercer aspecto de la presente invencion se refiere a una composicion farmaceutica que comprende la composicion tal y como se ha descrito anteriormente junto con un vehlculo farmaceuticamente aceptable.
Un cuarto aspecto de la presente invencion, se refiere a un complemento o suplemento alimenticio que comprende la composicion tal y como se ha descrito anteriormente.
Un quinto aspecto de la presente invencion se refiere a una composicion cosmetica que comprende la composicion tal y como se ha descrito anteriormente junto con un vehlculo cosmeticamente aceptable.
DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION
Por tanto, un primer aspecto de la presente invencion se refiere al uso combinado de al menos un estilbenoide seleccionado de resveratrol, pterostilbeno y piceatannol y al menos un flavonol seleccionado de quercetina, quercetina 4’-O-glucosido, quercetina 3,4’ diglucosido, kaempferol, miricetina e isorhamnetina para la fabricacion de una composicion para el tratamiento y/o la prevencion de la hipofuncion termogenica y/o patologlas asociadas a la hipofuncion termogenica en mamlferos.
Los estilbenoides son derivados hidroxilados de estilbeno. En el contexto de la invencion, el estilbenoide se selecciona de resveratrol, pterostilbeno y piceatannol.
Los flavonoles son una clase de
flavonoides que tienen como esqueleto
3-hidroxiflavona. En el contexto de la invencion, el flavonol se selecciona de quercetina, quercetina 4’-O-glucosido, quercetina 3,4’ diglucosido, kaempferol, miricetina e isorhamnetina.
Por el termino “hipofuncion termogenica” se entiende a la actividad por debajo de lo normal de la funcion termogenica, es decir, a una insuficiente funcion termogenica.
Por “patologlas asociadas a la hipofuncion termogenica” se entiende cualquier patologia derivada de una insuficiente funcion termogenica, como pueden ser el sobrepeso (incluida la obesidad), patologlas asociadas al sobrepeso, incluida la obesidad y desordenes de la temperatura corporal.
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Por “sobrepeso” o exceso de peso en el contexto de la invencion se entiende la acumulacion excesiva de grasa corporal, que aparece cuando la ingesta sobrepasa al gasto energetico. Por sobrepeso en el contexto de la invencion se entiende todo el sobrepeso, desde el sobrepeso leve (Indice de masa corporal, IMC> 25) a la obesidad cllnicamente manifiesta (IMC>30).
Por “patologias asociadas al sobrepeso” se entiende cualquier patologia que pueda deberse a un estado de sobrepeso u obesidad. Ejemplos no limitantes de estas patologlas son: resistencia a la insulina, diabetes tipo 2, hipertrigliceridemia, hipercolesterolemia, hlgado graso, hipertension, enfermedad cardiovascular, apnea obstructiva del sueno, cancer, etc.
Por “desordenes de la temperatura corporal” se entiende cualquier alteracion de la temperatura por fuera de los margenes normales (36-37,5°C), incluyendo las hipotermias accidentales.
El termino “tratamiento” tal como se entiende en la presente invencion se refiere a combatir los efectos causados como consecuencia de una enfermedad o condition patologica o anomala de interes en un sujeto (preferiblemente mamlfero, y mas preferiblemente un humano) que incluye:
(i) inhibir la enfermedad o condicion patologica o anomala, es decir, detener su desarrollo;
(ii) aliviar la enfermedad o la condicion patologica o anomala, es decir, causar la regresion de la enfermedad o la condicion patologica o anomala o su sintomatologla;
(iii) estabilizar la enfermedad o la condicion patologica o anomala.
El termino “prevention” tal como se entiende en la presente invencion consiste en evitar la aparicion de la enfermedad, es decir, evitar que se produzca la enfermedad o la condicion patologica o anomala en un sujeto (preferiblemente mamlfero, y mas preferiblemente un humano), en particular, cuando dicho sujeto tiene predisposition por la condicion patologica o anomala.
En otras palabras, un primer aspecto de la presente invencion se refiere a una composition de al menos un estilbenoide seleccionado de resveratrol, pterostilbeno y piceatannol y al menos un flavonol seleccionado de quercetina, quercetina 4’-O-glucosido, quercetina 3,4’ diglucosido, kaempferol, miricetina e isorhamnetina para usar en el tratamiento y/o prevencion la hipofuncion termogenica y/o patologlas asociadas a la hipofuncion termogenica en mamlferos. Tambien se podrla decir que el primer aspecto de la presente invencion, esta dirigido a un procedimiento de tratar y/o prevenir la hipofuncion termogenica y/o patologlas asociadas a la hipofuncion termogenica, que comprende administrar al mamlfero en necesidad del mismo una cantidad eficaz de una composicion de al menos un estilbenoide seleccionado de resveratrol, pterostilbeno y piceatannol y al menos un flavonol seleccionado de quercetina, quercetina 4’-O- glucosido, quercetina 3,4’ diglucosido, kaempferol, miricetina e isorhamnetina. Preferiblemente el estilbenoide comprende resveratrol y el flavonol comprende quercetina, mas preferiblemente el estilbenoide es resveratrol y el flavonol es quercetina.
En una realization del primer aspecto de la presente invencion, las patologlas asociadas a la hipofuncion termogenica se seleccionan de sobrepeso, patologlas asociadas al sobrepeso y desordenes de la temperatura corporal.
En una realizacion del primer aspecto de la presente invencion, las patologlas asociadas a la hipofuncion termogenica se seleccionan de sobrepeso y patologlas asociadas al sobrepeso.
En otras palabras, una realizacion del primer aspecto de la presente invencion se refiere a una composicion de al menos un estilbenoide seleccionado de resveratrol, pterostilbeno y piceatannol y al menos un flavonol seleccionado de quercetina, quercetina 4’-O-glucosido, quercetina 3,4’ diglucosido, kaempferol, miricetina e isorhamnetina para usar en el tratamiento y/o prevencion de sobrepeso y/o patologlas asociadas al sobrepeso en mamlferos. Tambien se
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podrla decir que una realization del primer aspecto de la presente invention, esta dirigido a un procedimiento de tratar y/o prevenir sobrepeso y/o patologlas asociadas al sobrepeso en mamlferos, que comprende administrar al mamlfero en necesidad del mismo una cantidad eficaz de una composition de al menos un estilbenoide seleccionado de resveratrol, pterostilbeno y piceatannol y al menos un flavonol seleccionado de quercetina, quercetina 4’-O- glucosido, quercetina 3,4’ diglucosido, kaempferol, miricetina e isorhamnetina. Preferiblemente el estilbenoide comprende resveratrol y el flavonol comprende quercetina, mas preferiblemente el estilbenoide es resveratrol y el flavonol es quercetina.
En una realization del primer aspecto de la presente invention, las patologlas asociadas a la hipofuncion termogenica son desordenes de la temperatura corporal.
En otra realization del primer aspecto de la presente invention, las patologlas asociadas al sobrepeso se seleccionan de diabetes tipo 2, resistencia a la insulina, hlgado graso y dislipidemia.
Por "diabetes tipo 2” o "diabetes mellitus tipo 2” se entiende una enfermedad metabolica caracterizada por altos niveles de glucosa en la sangre con alteraciones del sistema insullnico.
Por "resistencia a la insulina”, tambien llamada insulinorresistencia, se entiende a una condicion fisiologica en la cual las celulas no responden a las acciones normales de la hormona insulina.
"Higado graso” o "esteatosis hepatica” es una condition en la que se produce una acumulacion excesiva de grasa en las celulas del hlgado (hepatocitos), lo cual puede llevar a inflamacion hepatica, con la posibilidad de desarrollar un dano hepatico cronico (cirrosis).
Por "dislipidemia” se entiende una serie de condiciones patologicas cuyo elemento en comun es una alteration del metabolismo de los llpidos, con su consecuente alteration de las condiciones de llpidos y lipoprotelnas en la sangre. Preferiblemente, por dislipidemia se entiende hipercolesterolemia e hipertrigliceridemia.
En otra realization del primer aspecto de la presente invention se refiere a una composition de al menos un estilbenoide seleccionado de resveratrol, pterostilbeno y piceatannol y al menos un flavonol seleccionado de quercetina, quercetina 4’-O-glucosido, quercetina 3,4’ diglucosido, kaempferol, miricetina e isorhamnetinapara la fabrication de una composition para el mantenimiento de la temperatura corporal (termorregulacion), de interes en cualquier individuo, pero especialmente en situaciones en las que se produzcan descensos de la temperatura por debajo de lo habitual, incluyendo hipotermias.
Por "termorregulacion” se entiende la capacidad de mantener la temperatura corporal adecuada (36-37,5°C) bajo condiciones ambientales cambiantes.
Por "hipotermia” se entiende un descenso involuntario de la temperatura corporal por debajo de los 35°C. Esta situation tiene diversos factores predisponentes: exposition al frlo, consumo de drogas o farmacos (barbituricos, tranquilizantes, antidepresivos, anestesicos, etanol...), procesos metabolicos (desnutricion/malnutricion, hipotiroidismo, hipopituitarismo, hipermagnesemia, hipoglucemia, acidosis lactica, cetoacidosis, hipoxemia, uremia, ...), disfuncion del sistema nervioso central, as! como otras causas (inmovilidad, edad avanzada, coma, psoriasis, quemaduras, lesiones medulares, transfusiones de sangre a baja temperatura..). De todas ellas, entre las causas mas frecuentes de hipotermia destacan la exposition al frlo, el uso de farmacos depresores del sistema nervioso central y la hipoglucemia.
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En una realization del primer aspecto de la presente invention, la proportion estilbenoide:flavonol esta comprendida entre 1:0,05 y 1:10, preferiblemente entre 1:1 y 1:5, y mas preferiblemente la proportion estilbenoide:flavonol es 1:2. Preferiblemente el estilbenoide comprende resveratrol y el flavonol comprende quercetina, mas preferiblemente el estilbenoide es resveratrol y el flavonol es quercetina.
En otra realizacion del primer aspecto de la presente invencion, la composicion se selecciona de entre un medicamento, una composition cosmetica, un complemento alimenticio.
El medicamento al que se refiere la presente invention puede ser de uso humano o veterinario. El “medicamento de uso humano” es toda sustancia o combination de sustancias que se presente como poseedora de propiedades para el tratamiento o prevencion de enfermedades en seres humanos o que pueda usarse en seres humanos o administrarse a seres humanos con el fin de restaurar, corregir o modificar las funciones fisiologicas ejerciendo una action farmacologica, inmunologica o metabolica, o de establecer un diagnostico medico. El “medicamento de uso veterinario” es toda sustancia o combination de sustancias que se presente como poseedora de propiedades curativas o preventivas con respecto a las enfermedades animales o que pueda administrarse al animal con el fin de restablecer, corregir o modificar sus funciones fisiologicas ejerciendo una action farmacologica, inmunologica o metabolica, o de establecer un diagnostico veterinario. Tambien se consideraran “medicamentos veterinarios” las “premezclas para piensos medicamentosos” elaboradas para ser incorporadas a un pienso.
En la presente invention se entiende como "cosmetico" a aquellas preparaciones constituidas por sustancias naturales o sinteticas o sus mezclas, de uso externo en las diversas partes del cuerpo humano: piel, sistema capilar, unas, labios, organos genitales externos, dientes y membranas mucosas de la cavidad oral, preferiblemente piel, con el objeto exclusivo o principal de higienizarlas, perfumarlas, cambiarles su apariencia, protegerlos o mantenerlos en buen estado y/o corregir olores corporales pero no para producir un efecto terapeutico. La composition cosmetica puede contener excipientes y/o vehlculos farmaceuticamente y farmacologicamente aceptables tal como se ha descrito en parrafos anteriores. Por otra parte la composition cosmetica puede presentarse en cualquier forma adaptada a la administration topica.
Por “complementos alimenticios”, tambien conocidos como “complementos dieteticos” o “suplementos dieteticos o alimenticios” se entienden los preparados que tienen como objetivo complementar la dieta y aportar nutrientes, como vitaminas, minerales, acidos grasos y aminoacidos. En el contexto de la invention, por “complementos alimenticios” tambien se entienden alimentos funcionales, que son alimentos que son elaborados no solo por sus caracterlsticas nutricionales sino tambien para cumplir una funcion especlfica como puede ser mejorar la salud y/o reducir el riesgo de contraer o desarrollar enfermedades. En los alimentos funcionales la composition se puede ver acompanada de otros componentes como por ejemplo pero no limitantemente leche, yogur, agua, harinas, chocolate, cereales y zumos de frutas.
En otra realizacion del primer aspecto de la presente invencion, el estilbenoide se administra en una dosis de entre 1 mg/kg/dla y 150 mg/kg/dla, preferiblemente entre 10mg/kg/dla y 20mg/kg/dla.
En otra realization del primer aspecto de la presente invention, la flavonol se administra en una dosis de entre 2 mg/kg/dla y 300 mg/kg/dla, preferiblemente de entre 25 mg/kg/dla y 35 mg/kg/dla.
En otra realization del primer aspecto de la presente invention, el estilbenoide se administra en una dosis de entre 1 mg/kg/dla y 150 mg/kg/dla y el flavonol se administra en una dosis de
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entre 2 mg/kg/dla y 300 mg/kg/dla, preferiblemente el estilbenoide se administra es una dosis de entre 10mg/kg/dla y 20mg/kg/dla y la flavonol se administra en una dosis de entre 25 mg/kg/dla y 35 mg/kg/dla. Preferiblemente el estilbenoide comprende resveratrol y el flavonol comprende quercetina, mas preferiblemente el estilbenoide es resveratrol y el flavonol es quercetina.
En otra realization del primer aspecto de la presente invention, la composition ademas comprende al menos un antioxidante seleccionado de vitamina C, vitamina D, vitamina E, carotenoides, polifenoles, acido lipoico.
En otra realizacion del primer aspecto de la presente invencion, la composicion se encuentra en una forma adecuada para su administration por via oral, por via topica o via inyectable, preferiblemente la composicion se encuentra en una forma adecuada para su administracion por via oral o por via topica.
En otra realizacion del primer aspecto de la presente invencion, la composicion se administra por via oral.
En otra realizacion del primer aspecto de la presente invencion, la composicion se administra por via oral y la composicion es un medicamento. Preferiblemente, la composicion se encuentra en una forma farmaceutica seleccionada de comprimidos, pastillas, capsulas, polvos, granulos, jarabes, suspensiones, soluciones y gotas.
En otra realizacion del primer aspecto de la presente invencion, la composicion es un complemento alimenticio.
En otra realizacion del primer aspecto de la presente invencion, la composicion se administra por via topica.
En otra realizacion del primer aspecto de la presente invencion, la composicion se administra por via topica y es una composicion cosmetica.
En otra realizacion del primer aspecto de la presente invencion, la composicion se administra como crema, locion, gel, unguento, pomada, linimento, solution o aerosol.
Un segundo aspecto de la presente invencion se refiere a una composicion que comprende al menos un estilbenoide seleccionado de resveratrol, pterostilbeno y piceatannol y al menos un flavonol seleccionado de quercetina, quercetina 4’-O-glucosido, quercetina 3,4’ diglucosido, kaempferol, miricetina e isorhamnetina,, caracterizada porque la proportion de
estilbenoide:flavonol esta comprendida entre 1:0,05 y 1:10. Preferiblemente el estilbenoide comprende resveratrol y el flavonol comprende quercetina, mas preferiblemente el estilbenoide es resveratrol y el flavonol es quercetina.
En una realizacion del segundo aspecto de la presente invencion, la proporcion estilbenoide:flavonol esta comprendida entre 1:1 y 1:5, preferiblemente la proporcion estilbenoide:flavonol es 1:2. Preferiblemente el estilbenoide comprende resveratrol y el flavonol comprende quercetina, mas preferiblemente el estilbenoide es resveratrol y el flavonol es quercetina.
En otra realizacion del segundo aspecto de la presente invencion, la composicion ademas comprende al menos un antioxidante seleccionado de vitamina C, vitamina D, vitamina E, carotenoides, polifenoles, acido lipoico.
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Por el termino “antioxidante” se entiende una composition capaz de retardar o prevenir la oxidation de otras moleculas. Las reacciones de oxidation pueden producir radicales libres que comienzan reacciones en cadena que danan celulas.
Un tercer aspecto de la presente invention se refiere a una composition farmaceutica que comprende la composition tal y como se ha descrito anteriormente junto con un vehlculo farmaceuticamente aceptable.
La composition farmaceutica puede comprender un “vehiculo” o portador, que es preferiblemente una sustancia inerte. La funcion del vehlculo es facilitar la incorporation de otros compuestos, permitir una mejor dosificacion y administration o dar consistencia y forma a la composition farmaceutica. Por tanto, el vehlculo es una sustancia que se emplea para diluir cualquiera de los componentes de la composition farmaceutica de la presente invention hasta un volumen o peso determinado; o bien que aun sin diluir dichos componentes es capaz de permitir una mejor dosificacion y administration o dar consistencia y forma al medicamento. Ademas, el excipiente y el vehlculo deben ser farmacologicamente aceptables, es decir, que el excipiente y el vehlculo este permitido y evaluado de modo que no cause dano a los organismos a los que se administra.
En una primera realization del tercer aspecto de la presente invention, la composition farmaceutica se encuentra en una forma farmaceutica seleccionada de comprimidos, pastillas, capsulas, polvos, granulos, jarabes, suspensiones, soluciones y gotas.
Un cuarto aspecto de la presente invention, se refiere a un complemento alimenticio que comprende la composicion tal y como se ha descrito anteriormente.
En una realization del cuarto aspecto de la presente invention, el complemento alimenticio se encuentra en una forma seleccionada de comprimidos, pastillas, capsulas, polvos, granulos, jarabes, suspensiones, soluciones, gotas y alimento funcional.
Un quinto aspecto de la presente invention se refiere a una composition cosmetica que comprende la composition tal y como se ha descrito anteriormente vehlculo cosmeticamente aceptable.
A lo largo de la description y las reivindicaciones la palabra "comprende" y sus variantes no pretenden excluir otras caracterlsticas tecnicas, aditivos, componentes o pasos. Para los expertos en la materia, otros objetos, ventajas y caracterlsticas de la invention se desprenderan en parte de la description y en parte de la practica de la invention. Los siguientes ejemplos y figuras se proporcionan a modo de ilustracion, y no se pretende que sean limitativos de la presente invention.
DESCRIPCION DE LAS FIGURAS
Fig. 1. Incremento de peso por grupo. I(g): Incremento de peso en gramos; Control: grupo control; RSV: grupo tratado con resveratrol (15 mg/kg/dla); Q: grupo tratado con quercetina (30 mg/kg/dla); RSV+Q: grupo tratado con 15 mg/kg/dla de resveratrol y 30 mg/kg/dla de quercetina. Los datos con letras diferentes (a, b) son estadlsticamente distintos (test de Newman-Keuls, P<0,05).
Fig. 2. Peso de tejido adiposo por deposito por grupo. PTA (g): Peso de tejido adiposo en gramos; I: tejido adiposo inguinal; Pr: tejido adiposo perirrenal; M: tejido adiposo mesenterico; E: tejido adiposo epididimal. Control: grupo control; RSV: grupo tratado con resveratrol (15 mg/kg/dla); Q: grupo tratado con quercetina (30 mg/kg/dla); RSV+Q: grupo tratado con 15 mg/kg/dla de resveratrol y 30 mg/kg/dla de quercetina. Los datos con letras diferentes (a, b)
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son estadisticamente distintos (test de Newman-Keuls, P<0,05).
Figs. 3A y 3B. Diametro de los adipocitos por deposito por grupo. DPr: diametro de los adipocitos del tejido perirrenal; DI: diametro de los adipocitos del tejido inguinal. Control: grupo control; RSV: grupo tratado con resveratrol (15 mg/kg/dla); Q: grupo tratado con quercetina (30 mg/kg/dla); RSV+Q: grupo tratado con 15 mg/kg/dla de resveratrol y 30 mg/kg/dla de
quercetina. Los datos con letras diferentes (a, b) son estadisticamente distintos (test de
Newman-Keuls, P<0,05).
Figs. 4A y 4B. Numero de adipocitos por deposito por grupo. A Pr (%): numero de adipocitos por grupo en el tejido perirrenal en %; A I (%): numero de adipocitos por grupo en el tejido inguinal en %. Control: grupo control; RSV: grupo tratado con resveratrol (15 mg/kg/dla); Q: grupo tratado con quercetina (30 mg/kg/dla); RSV+Q: grupo tratado con 15 mg/kg/dla de resveratrol y 30 mg/kg/dla de quercetina.
Fig. 5. Micrograflas de secciones de tejido adiposo perirrenal. Las secciones estan tenidas con hematoxilina/eosina. *: adipocitos blancos uniloculares; ^: adipocitos multiloculares “brite”. Control: grupo control; RSV: grupo tratado con resveratrol (15 mg/kg/dla); Q: grupo tratado con
quercetina (30 mg/kg/dla); RSV+Q: grupo tratado con 15 mg/kg/dla de resveratrol y 30
mg/kg/dla de quercetina.
Fig. 6. Micrograflas de tinciones inmunohistoqulmica para la UCP1 en el tejido adiposo retroperitoneal. *: adipocitos blancos uniloculares, UCP1 negativos; ^ (flecha continua): adipocitos multiloculares “brite”, UCP1 positivos (proteha tenida); ^ (flecha discontinua): adipocitos multiloculares “brite”, UCP1 negativos. Control: grupo control; RSV: grupo tratado con resveratrol (15 mg/kg/dla); Q: grupo tratado con quercetina (30 mg/kg/dla); RSV+Q: grupo tratado con 15 mg/kg/dla de resveratrol y 30 mg/kg/dla de quercetina.
Fig. 7A y 7B. Niveles de expresion de los ARNm para Cidea y Hoxc9 (marcadores de marronizacion) en el deposito de tejido adiposo blanco perirrenal usando ARNm para beta- actina como control interno, en unidades arbitrarias, dando valor 1 al grupo control. ARNm Hoxc9: niveles de expresion para Hoxc9; ARNm Cidea: niveles de expresion para Cidea. Los datos con letras diferentes (a, b) son estadisticamente distintos (test de Newman-Keuls, P<0,05). *; P<0,01 RSV+Q vs Control, t-test.
Figs. 8A, 8B y 8C. Parametros relacionados con la sensibilidad a la insulina en ratas. G (mM): glucosa en mM; Ins (mU/I): insulina en mU/l; HOMA-IR: Indice HOMA-IR. Control: grupo control; RSV: grupo tratado con resveratrol (15 mg/kg/dla); Q: grupo tratado con quercetina (30 mg/kg/dla); RSV+Q: grupo tratado con 15 mg/kg/dla de resveratrol y 30 mg/kg/dla de quercetina. Los datos con letras diferentes (a, b) son estadisticamente distintos (test de Newman-Keuls, P<0,05).
Fig. 9. Concentration de triacilgliceridos circulantes. T(mg/dl): triacilgliceridos en mg/dl; Control: grupo control; RSV: grupo tratado con resveratrol (15 mg/kg/dla); Q: grupo tratado con quercetina (30 mg/kg/dla); RSV+Q: grupo tratado con 15 mg/kg/dla de resveratrol y 30 mg/kg/dla de quercetina. Los datos con letras diferentes (a, b) son estadisticamente distintos (test de Newman-Keuls, P<0,05).
EJEMPLOS
Ejemplo 1. Eficacia de una composition de la invention sobre la reduction del sobrepeso en ratas alimentadas con dieta obesogenica.
Las dietas obesogenicas consisten normalmente en dietas hipercaloricas e hiperlipldicas, que
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administradas a animales de experimentation son capaces de inducir un incremento de peso y la aparicion de obesidad.
Se utilizaron ratas Wistar (Harlan Laboratories) de 5 semanas de edad al inicio del 5 experimento. Fueron estabuladas a 22°C con un periodo de luz/oscuridad de 12 horas. Los animales se alimentaron ad libitum con una dieta hipergrasa (OpenSource Diets Inc., Ref. D12451M) que contenla 4,73 kcal/g de dieta, y con un 45% de las calorlas procedentes de la grasa. Los animales se dividieron en cuatro grupos (Tabla 1).
10 Tabla 1. Grupos del ejempto 1._____________________________________
Grupo
Tamano grupo (n) Composition
Control
6 Vehlculo
Resveratrol (RSV)
6 15 mg/kg/dla resveratrol
Quercetina (Q)
6 30 mg/kg/dla quercetina
Resveratrol + Quercetina (RSV+Q)
9 15 mg/kg/dla resveratrol + 30 mg/kg/dla quercetina
Cada grupo recibio diariamente por via oral y durante 6 semanas las composiciones indicadas en la tabla.
15 Los polifenoles fueron anadidos diariamente en la superficie de la dieta calculando la cantidad necesaria para conseguir las dosis indicadas, en funcion del peso de cada rata. El grupo control recibio una cantidad equivalente de etanol. Se hizo un seguimiento del peso corporal y la ingesta de los animales durante todo el tratamiento. Al final del periodo experimental los animales fueron sacrificados por exanguinacion mediante puncion cardiaca tras anestesia con
20 hidrato de cloral (1 ml al 4%/g peso corporal), procediendose a la recogida de sangre y tejidos, y al peso de los tejidos adiposos. La significancia estadlstica de los efectos observados fue analizada mediante el test de Newman-Keuls. El umbral de significancia se establecio a P<0,05.
25 El incremento de peso de los grupos esta representado en la tabla 2 y en la figura 1.
Tabla 2. Incremento de peso por grupo.
Incremento de peso (g) Error estandar de la media
Control
179,8 7,4
RSV
169,2 6,3
Q
162,2 6,9
RSV+Q
149,3 9,3
Tal y como se puede apreciar tanto en la tabla como en la figura, el incremento de peso 30 corporal de los animales tratados con la composicion de la invencion tuvieron un incremento de peso un 7% menor que los controles. Se puede ver que el tratamiento con unicamente resveratrol o unicamente quercetina produce una tendencia a un menor incremento, pero que no resulto estadlsticamente diferente respecto a los animales control.
35 Todos los depositos adiposos seleccionados, tanto subcutaneo (inguinal, (I)) como viscerales (perirrenal(Pr), mesenterico(M) y epididimal (E)) fueron significativamente menores en los animales tratados con la composition de la invention (Tabla 3).
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Tabla 3. Peso de tejido adiposo por deposito por grupo.
Tejido Peso de tejido adiposo (g)
adiposo
Control Error estandar de la media RSV Error estandar de la media Q Error estandar de la media RSV+Q Error estandar de la media
I
13,0 0,8 12,4 1,3 11,7 1,1 10,8 0,8
Pr
12,8 1,1 11,9 0,2 11,8 0,9 9,8 0,9
M
4,3 0,2 4,4 0,1 4,0 0,5 3,6 0,3
E
10,2 0,4 8,9 0,8 8,6 0,7 8,8 0,5
Los datos estan tambien representados en la figura 2.
Estos resultados indican que la composition de la invention reduce la ganancia de peso corporal en animales alimentados con una dieta obesogenica y reduce la adiposidad corporal, con un efecto sinergico que excede a la suma de los efectos de los componentes individuales de la combination por separado.
Ejemplo 2. Eficacia de una composicion de la presente invencion sobre la reduction del tamano de adipocitos blancos en ratas
Se emplearon los mismos grupos experimentales del ejemplo 1. El tamano (diametro) de los adipocitos blancos uniloculares y su distribution por tamano se determino en los depositos de tejido adiposos blanco perirrenal e inguinal seleccionados como representativos de la grasa visceral y subcutanea, respectivamente. Para ello se fijaron secciones de ambos tejidos en paraformaldehldo al 4% en tampon fosfato salino (PBS) durante una noche a 4°C. Los tejidos fijados se deshidrataron con alcoholes (etanol) de graduation creciente, se aclararon en xileno y se incluyeron en parafina. Se cortaron secciones de 5 pm de grosor que se montaron en portaobjetos y se tineron con hematoxilina y eosina. Para medir el tamano de los adipocitos blancos uniloculares en las secciones tenidas se tomaron imagenes con microscopla optica que fueron digitalizadas, para lo cual se utilizo un microscopio Zeizz Axioscop 2 acoplado a una camara digital AxioCam ICc3 (Carl Zeiss, Espana) Los analisis morfologicos se realizaron en 69 animales por grupo. En concreto, se midio el diametro de un total de aproximadamente 1000 adipocitos por grupo experimental mediante el programa informatico Axio Vision (Carl Zeiss, Espana). Posteriormente se representaron los adipocitos distribuidos segun su tamano a partir de los tamanos de los adipocitos individuales. La significancia estadlstica de los efectos observados fue analizada mediante el test de Newman-Kels. El umbral de significancia se establecio a P<0,05.
El tratamiento con una composicion de resveratrol resulto en un menor tamano de los adipocitos blancos del deposito perirrenal, y el tratamiento con quercetina, en un menor tamano de los adipocitos en el tejido inguinal. Sin embargo, los animales tratados con una composicion de la invencion (RSV+Q) presentaron adipocitos blancos mas pequenos en los dos depositos de tejido adiposo analizados, tanto en el visceral (perirrenal) como en el subcutaneo (inguinal). Los datos se presentan en la tabla 4 y en las figuras 3A y 3B.
Tabla 4. Diametro de los adipocitos por tejido por grupo.
Diametro de los adipocitos en tejido perirrenal Error estandar de la media Diametro de los adipocitos en tejido inguinal Error estandar de la media
Control
83,14 2,65 64,50 1,29
RSV
69,92 3,50 55,67 3,10
Q
74,53 3,38 52,34 3,46
RSV+Q
73,46 2,72 51,78 3,71
Ademas, si se observa la distribution de los adipocitos uniloculares por tamano, se puede ver 5 como, en ambos depositos grasos, los animales tratados con una composition de la invention tienen una menor poblacion de adipocitos de mayor tamano en comparacion con los animales del grupo control. Los datos se presentan en las tablas 5 y 6 y en las figuras 4A y 4B.
Tabla 5. Diametro de los adipocitos por grupo en el tejido perirrenal.
Diametro
0-30 pm
31-60 pm 61-90 pm 91-120 pm 121-150 pm >150 pm
Control
3,2 20 36,2 33,8 6,7 0,14
RSV
8 30,6 39,6 19,5 1,87 0,11
Q
8,7 23,8 38,4 26,5 2,69 0
RSV+Q
6,12 26,9 43 21,8 2,13 0,18
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Tabla 6. Diametro de los adipocitos por grupo en el tejido inguinal.
Diametro
0-25 pm
26-50 pm 51-75 pm 76-100 pm 101-125 pm
Control
0,2 23,4 50,2 23,1 2,1
RSV
5,5 38,4 44,9 10,4 0,9
Q
7,7 47,1 35,4 8,2 1,5
RSV+Q
5,7 50,1 36,6 7,7 0
15 El tratamiento produjo un descenso en la poblacion de adipocitos mayores de 90 y 50 pm, en los depositos grasos perirrenal e inguinal, respectivamente. Por tanto, podemos decir que el efecto reductor de la adiposidad observado en el Ejemplo 1 va asociado a una disminucion del tamano de los adipocitos blancos y, en consecuencia a una reduccion del contenido de grasa en estos adipocitos.
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Ejemplo 3. Efecto de la suplementacion con una composicion de la presente invencion sobre la remodelacion del tejido adiposo blanco a marron y la capacidad termogenica en ratas.
25 Se empleo una composicion que contenla una mezcla de resveratrol y quercetina en una dosificacion de 15 mg/kg/dla para el RSV y de 30 mg/kg/dla para la Q.
Se emplearon animales tratados diariamente con una composicion conteniendo resveratrol y quercetina tal cual esta explicado en el ejemplo1 . Diferentes depositos de tejido adiposo
30 blanco visceral (perirrenal, mesenterico y epididimal) y el deposito subcutaneo (inguinal) fueron fijados en paraformaldehldo, deshidratados e incluidos en parafina. Se cortaron secciones de 5 pm de grosor que se montaron en portaobjetos. Secciones de los diferentes tejidos, tenidas con hematoxilina y eosina fueron observadas al microscopio optico para visualizar la morfologla e
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identificar la presencia de adipocitos marrones/brite multiloculares.
En aquellas muestras en las que se identifico la presencia de adipocitos marrones/brite se determino tambien la presencia de UCP1 (responsable molecular de la termogenesis) mediante inmunohistoqulmica mediante la tecnica de avidina-biotina (Hsu, S.M. et al., J. Histochem. Cytochem. 29: 577-80, 1981). De manera sintetica, las secciones de tejido incluidas en parafina se incubaron durante una noche a 4°C con un anticuerpo policlonal primario anti-UCP1 de conejo (GeneTex, Inc) diluido 1:150 en PBS. Posteriormente las secciones se incubaron con el correspondiente anticuerpo secundario biotinilado anti-IgG de rata (Vector Laboratories, USA) diluido 1:200 y, posteriormente, con el complejo ABC (Vectastain ABC kit, Vector). La actividad peroxidasa se revelo utilizando 3,3’-diaminobencidina hidrocloruro como cromogeno (Sigma, Espana) en agua. Las secciones fueron tenidas tambien con hematoxilina y montadas en Eukitt (Kindler, Alemania). Se realizaron controles negativos por omision del anticuerpo primario. Las imagenes se adquirieron con un microscopio Zeiss Axioskop 2 equipado con una camara digital (Carl Zeiss, Espana).
Para los analisis morfologicos se utilizaron 6-9 animales por grupo experimental.
El tratamiento durante 6 semanas con una composicion de la invention, conteniendo 15 mg/kg/dla de resveratrol y 30 mg/kg/dla de quercetina produjo una remodelacion del tejido adiposo perirrenal de rata, con la aparicion de abundantes adipocitos marrones/brite multiloculares. En la figura 5 puede observarse la presencia de adipocitos blancos uniloculares intercalados con numerosos adipocitos multiloculares. En el tejido adiposo perirrenal de animales tratados con 15 mg/kg/dla de resveratrol, o en los animales tratados con 30 mg/kg/dla de quercetina no se encontraron adipocitos multiloculares o bien fueron escasos.
Cuando se analizo la presencia de UCP1 en las muestras de tejido adiposo perirrenal se pudo observar que los adipocitos multiloculares expresaban dicha protelna desacoplante, que es la responsable molecular de la termogenesis (figura 6).
Por tanto, una combination de resveratrol y quercetina dentro del rango de concentration que se propone en la presente invencion, es capaz de promover la remodelacion de parte del tejido adiposo blanco a marron, induciendo la aparicion de adipocitos multiloculares que expresan UCP1 y de aumentar la capacidad termogenica del animal. Esta marronizacion del tejido adiposo blanco explica los efectos reductores de adiposidad promovida por la mezcla de resveratrol y quercetina. Los resultados permiten afirmar que las composiciones de la presente invencion aumentan la capacidad termogenica del tejido adiposo y el gasto energetico.
Ejemplo 4. Eficacia de una composicion de la presente invencion sobre la induccion de la expresion de marcadores moleculares de adipocitos marrones/”brite” en tejido adiposos blanco en ratones
Se estudio la induccion de la expresion genica de un marcador espedfico de adipocitos "brite”, el Hoxc9 ("homeobox C92), y de un marcador selectivo de adipocitos marrones, el Cidea (del ingles,” Cell death-inducing DNA fragmentation factor-alpha-like effector A”) (Walden, T.B., et al., Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 302: E19-E31, 2012).
Se emplearon los mismos grupos experimentales del ejemplo 1. Se analizo la expresion de ARNm de Hoxc9 y Cidea, genes relacionados con la marca molecular de adipocitos "brite” y de adipocitos marrones, respectivamente, en el tejido adiposo blanco perirrenal. Los niveles de ARNm se determinaron por PCR (polymerase chain reaction) a tiempo real, a partir de ARN total extraldo de los tejidos con reactivo Trizol y retrotranscrito con transcriptasa inversa, utilizando ARNm de beta-actina como control interno. Las parejas de primers especlficas de cada gen se sintetizaron comercialmente por Integrated Technologies ADN (Belgica). El
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analisis de expresion genica se realizo usando el metodo comparativo del numero de ciclos de amplification (Ct). La amplification de la secuencia de beta-actina se realizo en paralelo y se utilizo para normalizar los valores obtenidos para los genes estudiados. Los resultados se expresaron utilizando el metodo de Livak y Schmittgen (Livak, K.J.; Schmittgen, T.D., Methods 25:402-408, 2001). La significancia estadlstica de los efectos observados fue analizada mediante el test de Newman-Keuls. El umbral de significancia se establecio a P<0,05.
El tratamiento durante 6 semanas con una composition de la invention produjo un aumento en la expresion de los marcadores de adipocitos marrones y “brite”, Cidea y Hoxc9, respectivamente en el tejido adiposo perirrenal, tal y como se puede ver en la tabla 7 y en las figuras 7A y 7B.
Tabla 7. Niveles de expresion de los ARNm (ARNmensajeros) para Hoxc9 y Cidea en el deposito de tejido adiposo blanco perirrenal. Los niveles de ARNm para beta-actina se utilizaron como control interno. Los resultados estan expresados en unidades arbitrarias, dando valor 1 al grupo control.______________________________
Hoxc9 Error estandar de la media Cidea Error estandar de la media
Control
1,00 0,09 1,00 0,80
RSV
1,17 0,26 1,50 0,31
q
1,67 0,39 2,23 0,43
rsv+q
1,81 0,24 3,73 0,33
Ejemplo 5. Efecto de la suplementacion con una composicion de la presente invencion sobre parametros relacionados con la sensibilidad a la insulina en ratas.
Se emplearon animales estabulados y alimentados en las mismas condiciones que en el ejemplo 1. En este caso se utilizaron animales de dos grupos experimentales, que recibieron diariamente por via oral y durante 6 semanas: vehlculo (grupo control, n=6 animales) o una composicion de la presente invencion (15 mg/kg/dla de resveratrol y 30 mg/kg/dla de quercetina) (grupo rSv+Q, n=9 animales).
A los animales se les extrajo sangre tras un ayuno de 12 h, para la determination de los niveles circulantes de glucosa en suero (utilizando un kit de Biosystems) e insulina (mediante un kit de ELISA, distribuido por Mercodia). Para cada animal se calculo el Indice HOMA-IR (del ingles, homeostatic model assessment for insulin resistance), que es un Indice bien aceptado indicativo de la sensibilidad relativa a la insulina, utilizando la formula de Matthews (Matthews et al., Diabetologia 28: 412-419, 1985):
HOMA-IR = glucosa en ayunas (mM) x insulina en ayunas (mU/l) / 22,5
Cuanto menor el Indice HOMA-IR, menor es la resistencia a la insulina y por tanto mayor la sensibilidad a esta hormona. La significancia estadlstica de los efectos observados fue analizada mediante el test de la t de Student. El umbral de significancia se establecio a P<0,05.
Los resultados obtenidos se muestran en la tabla 8 y en las figuras 8A, 8B, 8C.
Tabla 8. Niveles circulantes de glucosa en mM (G) e insulina en mU/l (Ins) e Indice HOMA-IR.
G (mM) Error estandar de la media Ins (mU/l) Error estandar de la media HOMA-IR Error estandar de la media
Control
6,6 0,2 45,8 8,8 13,5 2,6
RSV+Q
6 0,3 24,8 3 6,4 1,3
Ejemplo 6. Efecto de la suplementacion por via oral con una composicion de la presente invencion sobre los niveles de triacilgliceroles en ratas
5
Se utilizaron los mismos grupos experimentales del ejemplo 5. Se determinaron los niveles de trigliceridos circulantes en suero de ratas ayunadas preparado a partir de sangre extralda por puncion cardlaca, mediante un ensayo enzimatico colorimetrico comercial (Sigma). La significancia estadlstica de los efectos observados fue analizada mediante el test de la t de 10 Student. El umbral de significancia se establecio a P<0,05.
Los resultados obtenidos se muestran en la tabla 9 y en la figura 9.
Tabla 9. Niveles circulantes de triacilgliceroles en mg/dl.
15
triacilgliceroles (mg/dL) Error estandar de la media
Control
53,4 1,5
RSV
35,8 0,7
Q
42,7 2,5
RSV+Q
30,6 3
Como se puede ver en la tabla 9 y figura 9, los animales suplementados con la composicion de la invencion presentaron menor trigliceridemia que los controles. En consecuencia, las composiciones de la presente invencion pueden ser de gran utilidad en el tratamiento o 20 prevencion de la dislipidemia y en reducir la concentration de trigliceridos en sangre.

Claims (31)

  1. 5
    10
    15
    20
    25
    30
    35
    40
    45
    50
    REIVINDICACIONES
    1. Uso combinado de al menos un estilbenoide seleccionado de resveratrol, pterostilbeno y piceatannol y al menos un flavonol seleccionado de quercetina, quercetina 4’-O-glucosido, quercetina 3,4’ diglucosido, kaempferol, miricetina e isorhamnetina para la fabrication de una composition para el tratamiento y/o la prevention de la hipofuncion termogenica y/o patologlas asociadas a la hipofuncion termogenica en mamlferos.
  2. 2. Uso segun la reivindicacion anterior, donde las patologlas de la hipofuncion termogenica se seleccionan de sobrepeso, incluida la obesidad, patologlas asociadas al sobrepeso y desordenes de la temperatura corporal.
  3. 3. Uso segun la reivindicacion anterior, donde las patologlas asociadas al sobrepeso se seleccionan de diabetes tipo 2, resistencia a la insulina, hlgado graso y dislipidemia.
  4. 4. Uso segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde la proportion estilbenoide:flavonol esta comprendida entre 1:0,05 y 1:10.
  5. 5. Uso segun la reivindicacion anterior, donde la proporcion estilbenoide:flavonol esta comprendida entre 1:1 y 1:5.
  6. 6. Uso segun la reivindicacion anterior, donde la proporcion estilbenoide:flavonol es 1:2.
  7. 7. - Uso segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores donde la composicion se selecciona de entre un medicamento, una composicion cosmetica, un complemento alimenticio.
  8. 8. Uso segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores donde el estilbenoide se administra en una dosis de entre 1 mg/kg/dla y 150 mg/kg/dla.
  9. 9. Uso segun la reivindicacion anterior, donde el estilbenoide se administra en una dosis de entre 10mg/kg/dla y 20mg/kg/dla.
  10. 10. Uso segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde la flavonol se administra en una dosis de entre 2 mg/kg/dla y 300 mg/kg/dla.
  11. 11. Uso segun la reivindicacion anterior, donde la flavonol se administra en una dosis de entre 25 mg/kg/dla y 35 mg/kg/dla.
  12. 12. Uso segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde el estilbenoide es resveratrol y el flavonol es quercetina.
  13. 13. Uso segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde la composicion ademas comprende al menos un antioxidante seleccionado de vitamina C, vitamina D, vitamina E, carotenoides, polifenoles, acido lipoico.
  14. 14. Uso segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde la composicion se encuentra en una forma adecuada para su administration por via oral o por via topica.
  15. 15. Uso segun la reivindicacion anterior donde la composicion se administra por via oral.
  16. 16. Uso segun la reivindicacion anterior donde la composicion es un medicamento.
    5
    10
    15
    20
    25
    30
    35
    40
    45
  17. 17. Uso segun la reivindicacion anterior, donde la composition se encuentra en una forma farmaceutica seleccionada de comprimidos, pastillas, capsulas, polvos, granulos, jarabes, suspensiones, soluciones y gotas.
  18. 18. Uso segun la reivindicacion 15, donde la composicion es un complemento alimenticio.
  19. 19. Uso segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, donde la composicion se administra por via topica.
  20. 20. Uso segun la reivindicacion anterior, donde la composicion es una composicion cosmetica.
  21. 21. Uso segun cualquiera de las reivindicaciones 19 o 20, donde la composicion se administra como crema, locion, gel, unguento, pomada, linimento, solution o aerosol.
  22. 22. Composicion que comprende al menos un estilbenoide seleccionado de resveratrol, pterostilbeno y piceatannol y al menos un flavonol seleccionado de quercetina, quercetina 4’-O- glucosido, quercetina 3,4’ diglucosido, kaempferol, miricetina e isorhamnetina, caracterizada porque la proportion de estilbenoide:flavonol esta comprendida entre 1:0,05 y 1:10.
  23. 23. Composicion segun la reivindicacion anterior, donde la proporcion estilbenoide:flavonol esta comprendida entre 1:1 y 1:5.
  24. 24. Composicion segun la reivindicacion anterior, donde la proporcion estilbenoide:flavonol es 1:2.
  25. 25. Composicion cualquiera de las reivindicaciones 22 a 24, donde el estilbenoide es resveratrol y el flavonol es quercetina.
  26. 26. Composicion segun cualquiera de las reivindicaciones 22 a 25 que ademas comprende al menos un antioxidante seleccionado de vitamina C, vitamina D, vitamina E, carotenoides, polifenoles, acido lipoico.
  27. 27. Composicion farmaceutica que comprende la composicion segun cualquiera de las reivindicaciones 22 a 26 junto con un vehlculo farmaceuticamente aceptable.
  28. 28. Composicion farmaceutica segun la reivindicacion anterior donde la composicion farmaceutica se encuentra en una forma farmaceutica seleccionada de comprimidos, pastillas, capsulas, polvos, granulos, jarabes, suspensiones, soluciones y gotas.
  29. 29. Complemento alimenticio que comprende la composicion segun cualquiera de las reivindicaciones 22 a 26.
  30. 30. Complemento alimenticio segun la reivindicacion anterior, donde el complemento alimenticio se encuentra en una forma seleccionada de comprimidos, pastillas, capsulas, polvos, granulos, jarabes, suspensiones, soluciones, gotas y alimento funcional.
  31. 31. Composicion cosmetica que comprende la composicion segun cualquiera de las reivindicaciones 22 a 26 junto con un vehlculo cosmeticamente aceptable.
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