ES2469990A1 - Compuestos de estructura híbrida piridazinona ditiocarbamato con actividad antineopl�sica - Google Patents

Abstract

Esta invención se refiere a nuevos compuestos de estructura híbrida piridazinona-ditiocarbamato de fórmula general I, que son inhibidores in vitro del crecimiento o proliferaci�n de células cancerosas de tumores sólidos, y a su uso para la inhibición o prevención del cáncer de pulmón, ovario y útero. Se trata de derivados de 3(2H)- piridazinona sustituidos en las posiciones 2, 4, 5 y 6, que presentan fragmentos de ditiocarbamato enlazados a la posición 6 a través de una cadena alqu�lica de longitud variable. Esta invención también se refiere a la preparación de dichos compuestos.

Description

Compuestos de estructura híbrida piridazinona ditiocarbamato con actividad antineopl�sica Sector de la técnica

5 Esta invención se refiere a nuevos compuestos de estructura híbrida piridazinonaditiocarbamato de fórmula general 1, que son inhibidores in vitro del crecimiento o proliferaci�n de células cancerosas de tumores sólidos, y a su uso para la inhibición o prevención del cáncer de pulmón, ovario y útero. Se trata de derivados de 3(2H)

10 piridazinona sustituidos en las posiciones 2, 4, 5 Y 6, que presentan fragmentos de ditiocarbamato enlazados a la posición 6 a través de una cadena alqu�lica de longitud variable. Esta invención también se refiere a la preparación de dichos compuestos.

o

R

Estado de la técnica

15 El cáncer se caracteriza por un crecimiento celular incontrolado que sobrepasa los límites normales. Estas células malignas, que se pueden desarrollar en cualquier tejido, invaden tejidos adyacentes y en ocasiones migran a través de la sangre o de la linfa a otras regiones del organismo originando metástasis (Harrison 's Principies of Internal

20 Medicine 17th ed. McGraw-Hill Medical Publishing Division: New York 2008, 551562). El cáncer es una de las principales causas de muerte en los países desarrollados y en muchos casos su tratamiento requiere combinar la cirugía con la radioterapia o la quimioterapia. La quimioterapia consiste en utilizar fármacos que puedan destruir las células malignas

25 impidiendo su crecimiento y reproducción (fármacos antineopl�sicos). La toxicidad y los efectos secundarios de los fármacos antineopl�sicos actuales obligan a una reducción de las dosis de fármaco y a interrupciones periódicas del tratamiento, lo que puede dar lugar a un mayor desarrollo del tumor primario o la aparición de metástasis (Mini Rev. Med. Chem. 10, 405-435, 2010) y que evidencia la necesidad de desarrollar

30 nuevos antineopl�sicos.

La piridazina es una diazina poco frecuente en productos naturales. Sin embargo, este heteron�cleo forma parte de un reducido grupo de estructuras reconocidas como privilegiadas, debido a su capacidad de generar compuestos activos frente a numerosas dianas, (Med. Chem. Comun. 2,935-941,2011). Los derivados de piridazina poseen un amplio espectro de actividad farmacol�gica (cardiot�nica, antihipertensiva, antiagregante plaquetaria, hipolipemiante, analgésica y antiinflamatoria, antidepresiva, ansiol�tica, antiparkinsoniana, antagonista del GABA, antiinfecciosa o antineopl�sica entre otras) y muchos de ellos son análogos con estructura de 3(2H)-piridazinona

(Progress in Medicinal Chemistry, Elsevier Science Publishers Biomedical Division: Amsterdam 1990, 1-49; Progress in Medicinal Chemistry, Elsevier Science Publishers Biomedical Division: Amsterdam 1992, 141-183). Un número elevado de piridazinonas con actividad biológica son 6-aril-3(2H) piridazinonas, un patrón estructural también frecuente en los derivados de piridazinona con actividad antineopl�sica. Sin embargo, las piridazinonas para las que se han descrito efectos antiproliferativos muestran gran diversidad estructural, que implica a las cuatro posiciones del anillo susceptibles de modificación, N2, C4, C5 y C6. Se han descrito diversas series de 3(2H)-piridazinonas modificadas en las posiciones 4, 5, sustituidas o no en N2, que inhiben la proliferaci�n de células malignas en leucemias

o en tumores sólidos. En algunas de estas series el rasgo estructural común es la presencia de una cadena alqu�lica o aralqu�lica en C5 unida a través de un resto sulfonilo (JP 52091883 Y JP 52003081) (compuestos 1, figura 1) o a través de un grupo heteroat�mico (NH, O, S) (EP 0521381, EP 0665223) (compuestos 2, figura 1). Otras presentan heterociclos fusionados a nivel de posiciones 4 y 5 generando sistemas bic�clicos (Chem. Pharm. Bull. 50, 754-759, 2002; Il Fármaco, 59, 457-462, 2004) o polic�clicos. (Chem.. Pharm. Bull .. 50, 754-759, 2002; Bioorg. Med. Chem. Lett. 20, 3387-3393, 2010), estos heterociclos adicionales también se han incorporado a las posiciones 5 y 6 (Eur. J Med. Chem. 45, 5724-5731, 2010) (compuestos 3, figura 1). Un buen número de piridazinonas anticancerosas son derivados disustituidos portadores de grupos arilo o heteroarilo en C6, una modificación estructural que se combina con la inclusión en N2 de grupos voluminosos susceptibles de ramificación (WO 2009129905, WO 2010078909, WO 2010072295), o con la inclusión en C4 de fragmentos de arilaminas o de heteroarilaminas (W02010056875, WO 2012030990) (compuestos 4, figura 1 ). También se han descrito efectos anticancerosos para piridazinonas derivatizadas en las posiciones 4, 5, 6 que adicionalmente pueden estar sustituidas en N2 (Caneer Res. 46, 1989-1893, 1986, US 20050020594, WO 2005077915, WO 20071383351, WO 2008080056, EP 1598348, WO 2007138351). Muchos de estos compuestos presentan en C6 cadenas alqu�licas de magnitud variable y mono sustituidas con distintos tipos de grupos funcionales, entre ellos sulfonamida, sulfonato, tio�ter o

5 tioamida (EP 1598348) (compuestos 5, figura 1). El mecanismo a través del que los derivados de piridazinona ejercen el efecto antineopl�sico se asocia en la mayoría de los casos a la inhibición de cinasas (Caneer and Metast. Rev. 22, 435-449, 2003), polimerasas (Nature 434, 913-916, 2005), o a la interacción con la tubulina (Developments in Caneer Chemotherapy, CRC Press: Boca

10 RatonFL, 1984, 131-164). En la figura 1 se recogen algunos ejemplos de 3(2H)-piridazinonas con actividad antineopl�sica.

o

NR

I

NH

Figura 1

Los ditiocarbamatos también exhiben una amplia variedad de efectos biológicos. Poseen propiedades antif�ngicas (J Agrie. Food Chem. 44, 2856-2858, 1996; Areh. Pharm. Res. 28, 1213-1218, 2005), antibacterianas (Bioorg. Med Chem. Lett. 10, 109-113, 2000; 11 Farmaco 54, 826-831, 1999), actúan como eliminadores de especies reactivas o como complejantes de metales y por eso se utilizan como antídotos, por ejemplo en intoxicaciones por metales pesados (J 1norg. Biochem. 25, 35-42, 1990). También se han descrito diversas aplicaciones de los ditiocarbamatos para el tratamiento del cáncer. As�, se han utilizado ditiocarbamatos de fórmula R2NC(S)SR1 (R1 es H, un cati�n o un grupo l�bil in vivo y N forma parte de un heterociclo o est� unido a dos sustituyentes) con propiedades antioxidantes para potenciar la efectividad de agentes antineopl�sicos, como el 5-fluorouracilo, en distintos tipos de cáncer (WO 9901118). Se han utilizado derivados del ácido ditiocarb�mico de fórmula R1R2NC(S)SM (M es H, un cati�n o el grupo -S(S)CNR3R4) como coadyuvantes en quimioterapia para prevenir determinados efectos secundarios de los antineopl�sicos, como por ejemplo la toxicidad renal (US 4581224; US 5002755) o la mielo supresión (US 5294430). En estos derivados el N también puede formar parte de un heterociclo o estar sustituido con uno o dos grupos alquilo. Además, se ha demostrado que los ditiocarbamatos inhiben directamente la proliferaci�n de las células tumorales. Se han observado efectos antiproliferativos tanto en ditiocarbamatos con propiedades antioxidantes ligadas a la presencia de grupos sulfidrilo (SH) (Cancer Res. 58, 2323-2327, 1998) como en otras especies que no actúan como antioxidantes sino a través de diversos mecanismos. Los ésteres del ácido ditiocarb�mico de fórmula R2NC(S)SR1son inductores de enzimas metabólicas de la fase II, como la glutati�n S transferasa (GST) o la NAD(P)H quinona reductasa (QR), responsables de la inactivaci�n de carcinógenos (Carcinogenesis 16, 399-404, 1995; Cancer Res .. 57,. 272~278 1997;WO 0179164; Eur. J Med. Chem. 41, 121-124, 2006). Asimismo, la brasinina y en general los indolilditiocarbamatos relacionados con el tript�fano actúan además como inhibidores de la indo lamina 2,3dioxigenasa (IDO) (J Med. Chem. 40, 684-692, 2006; WO 2007050963), una enzima que interviene en la regulaci�n de la respuesta inmune al crecimiento tumoral (Expert Opino Ther. Targets 9, 831-849, 2005). Por otro lado, la combinación de los ésteres del ácido ditiocarb�mico de fórmula X(CH2)n-NHC(S)S-(CH2)m-y con otros agentes antineopl�sicos da lugar a un incremento de la citotoxicidad y la selectividad frente a las células modificadas (WO 0179164). Todo esto ha servido como base para incorporar el fragmento de ditiocarbamato sobre distintos patrones estructurales con propiedades antineopl�sicas: buten�lidos (Bioorg. Med. Chem. Lett. 21,3074-3077,2011), chalconas (Bioorg. Med. Chem. 18,4310-4316, 2010), cromonas (Eur. J Med. Chem. 44, 3687-3696, 2009), quinazolinonas y anilinoquinazolinas (Bioorg. Med. Chem. Lett. 15, 1915-1917, 2005; Bioorg. Med. Chem. Lett. 21, 3637-3640, 2011), o pirrolobenzodiazepinas (WO 2010058414) entre otros, con el fin de desarrollar antineopl�sicos más potentes y menos tóxicos. Sin embargo, no se han descrito estructuras híbridas piridazinona ditiocarbamato. Teniendo en cuenta la potente actividad antineopl�sica de las 3(2H)-piridazinonas y de los ésteres del ácido ditiocarb�mico se han combinado ambos fragmentos y se han diseñado y sintetizado los compuestos de estructura híbrida piridazinona-ditiocarbamato de fórmula general 1.

Se trata de nuevos derivados de 3(2H)-piridazinona sustituidos en las posiciones 2, 4, 5 Y 6, portadores de fragmentos de ditiocarbamato enlazados a la posición 6 a través de una cadena alqu�lica de longitud variable, que inhiben el crecimiento o la proliferaci�n de células cancerosas cuando se evalúa su bioactividad in vitro frente a distintas líneas celulares cancerosas humanas.

Descripci�n de la invención

La presente invención se refire a nuevos compuestos de estructura híbrida piridazinonaditiocarbamato de fórmula general 1, que son inhibidores in vitro del crecimiento o proliferaci�n de células cancerosas de tumores sólidos humanos, y a su uso para la inhibición o prevención del cáncer de pulmón, ovario y útero. Se trata de derivados de 3(2H)-piridazinona sustituidos en las posiciones 2, 4, 5 Y 6, que contienen fragmentos de ditiocarbamato enlazados a la posición 6 a través de una cadena alqu�lica de longitud variable, y de fórmula general 1.

o

�

En donde, n es un número entero seleccionado de 1,2,3,4,5,6, 7, 8;

R es un grupo seleccionado de: un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo C�-C6, un grupo carboxialquilo C�-C6, un grupo haloalquilo C�-C6, un grupo arilo C6-C�2, un

grupo aralquilo C6-C�2, un grupo heteroarilo C4-C12; R� es un grupo seleccionado de: un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo C�-C6, un

�tomo de halógeno, R2

es un grupo seleccionado de: un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo C�-C6, un

�tomo de halógeno, R3, R4 idénticos o diferentes se seleccionan de: un átomo de hidrógeno, un grupo

alquilo C�-C6, grupo heterocicloalquilo saturado C�-C6, un grupo arilo C6-C12, un grupo aralquilo C6-C12, un grupo heteroarilo C4-C12,

O bien R3 y R4 forman un ciclo seleccionado de: un cicloalquilo Cs-Cs, un heterocicloalquilo Cs-Cs, un heterocicloalquilo Cs-Cs N-alquilo sustituido, un heterocicloalquilo Cs-Cs N-arilo sustituido, un heterocicloalquilo Cs-Cs N cicloalquilo sustituido, un heterocicloalquilo Cs-Cs N-aralquilo sustituido, un

heterocicloalquilo Cs-Cs N-acilo sustituido. y preferentemente

Res CH3, fenilo (Ph) o bencilo (Bn). R� es H, halogeno (CI, Br, I) o una cadena alqu�lica

R2 es hidrógeno (H) o metilo (CH3). n es opcionalmente 1,2 o 3. R3 Y R4 pueden ser hidrógeno, grupos alquilo idénticos o distintos como CH3 o etilo (CH2CH3) o junto con el átomo de nitrógeno (N) pueden constituir un anillo heteroc�clico de 5 o 6 miembros, que es alif�tico o que incorpora un átomo de oxígeno

(O) o un segundo átomo de N. Este segundo átomo de N puede estar sustituido con un grupo alquilo lineal (CH3, CH2CH3) o cíclico (ciclopropilo), o con un grupo arilo (Ph),

aralquilo (Bn) o aroilo (benzoilo, Bz). En un aspecto particular los compuestos de fórmula general I est�n representados por

las fórmulas Ial-a33 (tabla I), Ib1-b33 (tabla Il), 1CI-C33 (tabla IlI) y 1d1-d33 (tabla IV) en

donde R � es preferentemente H.

Tabla 1

la

-N(CH3l2

la! la)2 la23

-N(CH2CH3l2

la2 laJ3 la24

-{)

la3 la!4 la25

-/J

I~ la!5 la26

~ -N o 'LJ

la5 la!6 la27

~ -N N-CH3 'LJ

I~ la17 la28

~ -N N-C2H5 'LJ

la7 la!8 la29

f\ -N N-<J 'LJ

la8 la!9 la30

f\ -N N-Ph 'LJ

I~ la20 la3!

f\ -N N-Bn 'LJ

laJO la2) la32

~ -N N-Bz 'LJ

lau la22 la33

Tabla 11

R3

I

O~SnN'R4 N-N S

ptf

lb

-

N(CH3l2

Ibl

Ib23

Ibl2

-

N(CH2CH3l2

Ib2

Ib24

Ib13

Ib3

-

{)

Ib25

Ibl4

Ib4

Ib26

Ibl5

-

lJ

1\

-

N o

Ib5

Ib27

Ibl6

'--1

1\

-

N N-CH3

Ib6

Ib17

Ib28

'---1

1\

-

N N-C2Hs

Ib7

Ib29

Ibl8

'--1

1\

-

N N-<]

Ib8

Ib30

Ibl9

'--1

1\

-

N N-Ph

Ib9

Ib20

Ib31

'---1

1\

-

N N-Bn

IblO

Ib32

Ib21

'--1

1\

-

N N-Bz

Ibll

Ib33

Ib22

'---1

Tabla 111

R3

IF\ _./S"r<"'N ..... 4 O~ /~n 11 R N-N S

/

Bn

le

-

N(CH3l2

1e]2

ICI

IC23

-

N(CH2CH3)2

le2

leJ3

le24

IC3

IC25

-

NO

lel4

IC4

IC26

ICI5

-l2J

1\

-

N O

IC27

le5

lel6

'---1

1\

-

N N-CH3

IC6

IC28

leJ7

'---1

1\

-

N N-C2Hs

IC7

ICI8

le29

'---1

1\

-

N N--<]

IC8

IC30

lel9

'---1

1\

-

N N-Ph

IC9

IC20

le31

'-.1

1\

-

N N-Sn

IC2]

ICIO

IC32

'---1

1\

-

N N-Sz

ICll

IC22

le33

'---1

CH

r

s N

o&�) y"R

N-N S

/ Id R

-

N(CH312

Id\

Id23 -N(CH2 CH312

Id12

Id\3Id2

Id24

Id3 Id25

-

NO

Id14

-l:)

Id4 Id\5

Id26

�\

-

N o

Id5 Id\6 Id27

'--1 �\

-

N N-CH3

Id6 Id28Id17

'--1 �\

-

N N-C2Hs

Id7 Id\8 Id29

'--1 �\

-

N N-<J

Id8 Id\9 Id30

'--1 �\

-

N N-Ph

Id3\Id9 Id20

'--1

�\

-

N N-Bn

Id\O

Id32Id21

'--1

�\

-

N N-Bz

Id33

Idll

Id22

'--1

25 Síntesis La presente invención también se refiere al procedimiento de síntesis de los compuestos de estructura híbrida piridazinona ditiocarbamato representados por las fórmulas lal-a33, Ibl-b33, 1CI-C33 y Idl-d33. Los compuestos la-d se podrían obtener mediante cualquier proceso químico conocido aplicable a compuestos similares.

30 Los compuestos la-d de fórmula general 1 se obtuvieron mediante una reacción multicomponente entre las 6-bromoalquil-3(2H)-piridazinonas de fórmula II, una amina secundaria de fórmula In y disulfuro de carbono (CS2) en presencia de fosfato pot�sico anhidro (K3P04), en dimetilformamida (DMF) y a temperatura ambiente (t.a.), tal y como se muestra en el esquema 1.

Esquema 1

X,

2 R3

R'>=(' Br

-

s N/

K3PO• •

"R4

o==< ~CH( + cS2 + o Ii CH( y

DMF,t.a. N-N N-N S

III

I / I

II

R

En donde R, R1, R2, R3, R4 Y n son como se han descrito anteriormente para los compuestos de fórmula 1. El CS2 y las aminas de fórmula nI son compuestos comerciales, mientras que las 6bromoalquil-3(2H)-piridazinonas de fórmula n se pueden obtener a partir de las 6hidroxialquil-3(2H)-piridazinonas de fórmula IV, en donde R, R1, R2 Y n son como se han descrito anteriormente, por bromaci�n con tetrabromuro de carbono (CBr4) y trifenilfosfina (PPh3) o con N-bromosuccinimida (NBS) y PPh3, adecuando procedimientos estándar (J Heterocyclic Chem. 36, 985-990, 1999; Tetrahedron 50,

13575-13682, 1994). Los precursores de estructura IV se pueden preparar en dos etapas (esquema 2) a partir de las 5-(terc-butildifenilsililoxialquil)-5-hidroxi(metoxi)-5H-furan-2-onas de estructura V, en donde R1, R2 Y n son como se han descrito anteriormente, y de manera similar a la descrita en la bibliografía (Bioorg. Med. Chem. Lett. 20, 6624-6627, 2010; Magn. Reson. Chem., 49, 437-442, 2011). Una primera reacción de las furanonas V con metilhidrazina (CH3NHNH2), fenilhidrazina (PhNHNH2) o bencilhidrazina (BnNHNH2) en etanol (EtOH), proporciona las 6-(terc-butildifenilsililoxialquil)-3(2H)-piridazinonas de estructura VI, en donde R, R1, R2Y n son como se han descrito anteriormente, que se transforman en las 6-hidroxialquil-3(2H)-piridazinonas IV por reacción con fluoruro de tetrabutilamonio (TBAF) en tetrahidrofurano (THF). Esquema 2

R R' ' R2 OTBDPS

R'>=(2 OH

-

/

/OTBDPS TBAF

(CH')n RNHNH2 •

o �, CH2L •

o o EtOH, ooc, t. a. // n THF, t. a. o==< ~CH('M ~ R2

OH (OCH3) N-N N-N

/ VI / IV

v

R R

Las furanonas de estructura V se pueden preparar a partir de los correspondientes

alquilfuranos por oxidación con oxígeno singlete, de manera análoga a la descrita en la

bibliograf�a (Tetrahedron Lett. 45,5207-5209, 2004; Bioorg. Med Chem. Lett. 20,

6624-6627,2010; Magn. Reson. Chem., 49, 437-442, 2011).

Los compuestos de fórmula Ia-d han mostrado eficiente actividad antineopl�sica frente

a distintas líneas celulares cancerosas de tumores sólidos humanos y pueden ser

utilizados para la inhibición o prevención del cáncer de pulmón, ovario y útero

Algunos compuestos representativos de fórmula Ia-d a los que se refiere la presente

invenci�n son los siguientes, a) N,N -dietilditiocarbamato de 1 ,4-dimetil-6-oxo-1 , 6-dihidropiridazin-3 -ilmetilo (Id2). b) Pirrolidin-l-ilcarboditioato de 1 ,4-dimetil-6-oxo-l , 6-dihidropiridazin -3 -ilmetilo (Id3). c) Piperidin-l-ilcarboditioato de 1 ,4-dimetil-6-oxo-l ,6-dihidropiridazin-3-ilmetilo (Id4). d) Morfolin-4-ilcarboditioato de 1 ,4-dimetil-6-oxo-l ,6-dihidropiridazin-3-ilmetilo (Ids). e) 4-benzoilpiperazin-l-ilcarboditioato de 1 ,4-dimetil-6-oxo-l ,6-dihidropiridazin3-ilmetilo (Idll). t) Piperidin-l-ilcarboditioato de 2-(I-metil-6-oxo-l,6-dihidropiridazin-3-il)etilo (IaIS)' g) Piperidin-l-ilcarboditioato de 3 -( l-metil-6-oxo-l ,6-dihidropiridazin-3 -il)propilo (Ia26). Ejemplos Los ejemplos que se aportan a continuación deberán ser considerados para una mejor comprensión de la presente invención sin que supongan una limitación de la mIsma. Procedimientos generales Los espectros de resonancia magnética nuclear de protón eH RMN) son acordes en todos los casos con las estructuras propuestas. Los 1H RMN se registraron en los espectrofotómetros Bruker 400 DPX y Bruker ARX 400, utilizando como disolvente cloroformo deuterado (CDCh) o metanol deuterado (CD30D). Los desplazamientos

qu�micos se expresan en unidades a, en partes por millón (ppm), relativas al

tetrametilsilano (TMS), las constantes de acoplamiento (J) se indican en Hertzios (Hz), y la multiplicidad como sigue: s, singlete; d, doblete; t, triplete; m, multiplete. Los espectros de masas de alta resolución (EMAR) se realizaron en un espectrómetro Bruker Microtof Focus, utilizando ionizaci�n mediante electro spray (ESI) o ionizaci�n por impacto electrónico (El). Las reacciones que tienen lugar en atmósfera inerte se llevaron a cabo en atmósfera de argón (Ar). Todos los reactivos comerciales se cogieron directamente de los frascos proporcionados por el proveedor y se utilizaron sin purificar. Los disolventes orgánicos se secaron mediante procedimientos estándar (Vogel's Textbook of Practical Organic Chemistry 5th ed Longman Scientific and Technical: London 1989) y se destilaron inmediatamente antes de su uso. Se siguió la evolución de las reacciones mediante cromatograf�a en capa fina, utilizando para ello placas de gel de sílice (Merck 60F254), que se visualizaron mediante luz UV y se revelaron mediante una disolución que contenía 3 g de permanganato pot�sico (KMn04), 20 g de carbonato pot�sico (K2C03), 5 mL de una disolución de hidróxido sádico 5% (NaOH 5%) y 300 mL de agua (H20). Los productos se purificaron mediante cromatograf�a en columna a presión sobre gel de sílice Merck (230-400 mesh). Ejemplo 1

Preparaci�n de N,N-dietilditiocarbamato de 1,4-dimetil-6-oxo-l,6-dihidropiridazin3-ilmetilo (Id2). A una disolución .de 5-(terc-butildifenilsililoximetil)-5-hidroxi-4-metil-5H-furan-2ona Vd (212 mg, 0,554 rnmol) en EtOH absoluto (4 mL) se le adicion� a temperatura ambiente (t.a.) una disolución de CH3NHNH2 (0,06 mL, 1,108 rnmol) en EtOH absoluto (1 mL). La mezcla de reacción se mantuvo en agitaci�n a reflujo durante 18 horas. Finalizada la reacción, y una vez fría la disolución resultante, se elimin� el disolvente a vaCío y el residuo obtenido se purificó por cromatograf�a en columna sobre gel de sílice, utilizando como eluyente hexano/acetato de etilo (3: 1),

o bteni�ndose la 6-(terc-butildifenilsililoximetil)-2,5-dimetil-3 (2H)-piridazinona VId (313 mg, 52%). EMAR (ESI): miz calculado para C23H29N202Si [M+Ht, 393,19983; encontrado 393,19928. IH RMN (CDCl)) S: 7,68 (m, 4H,), 7,67 (m, 6H,), 6,70 (d, 1H, J=l,l Hz), 4,64 (s, 2H), 3,62 (s, 3H,), 2,34 (d, 3H, J=1.1 Hz), 1,01 (s,9H).

A una disolución del compuesto VId (74 mg, 0,188 mmol) en THF (4 mL) se le adicion�, a t.a. y bajo atmósfera de argón (Ar), una disolución 1M de TBAF en THF (0,2 mL, 0,188 mmol). La mezcla de reacción se mantuvo en agitaci�n, a t.a. y bajo atmósfera de Ar, durante 15 minutos. Finalizada la reacción, se le añadieron unas gotas de una disolución saturada de NaHC03, se mantuvo la agitaci�n durante 15 minutos más y a continuación se secó con Na2S04 anhidro. La suspensión resultante se filtr� y el filtrado se concentr� a sequedad a vacío. El residuo obtenido se purificó por cromatografia en columna sobre gel de sílice, utilizando como eluyente acetato de etilo/metanol (9,5:0,5), obteniéndose la 6-hidroximetil-2,5-dimetil-3(2H)piridazinona IVd (26 mg, 86%). EMAR (El): miz calculado para C7HION202 [Mt,

154,0742, encontrado 154,0735.

lH RMN (CDCh) �5: 6,70 (d, 1H, J=l,l Hz), 4,58 (s, 2H), 3,73 (s, 3H), 2,21 (d,3H, J=l,l Hz). A una disolución del compuesto IV d (48 mg, 0,311 mmol) en cloruro de metileno (8 mL) se le adicion� sucesivamente CBr4 (207 mg, 0,623 mmol) y PPh3 (163 mg 0,623 mmol). La mezcla de reacción se mantuvo en agitaci�n a reflujo bajo atmósfera de Ar durante 6 horas. Finalizada la reacción, y una vez fría la disolución resultante, se trat� con una disolución saturada de NaHC03 (2 mL), se extrajo con cloruro de metileno (3x5 mL) y el extracto orgánico se secó con Na2S04 anhidro. La suspensión resultante se filtr� y el filtrado se concentr� a vacío. El residuo obtenido se purificó por cromatografia en columna sobre gel de sílice, utilizando como eluyente acetato de etilo/metanol (8,5: 1 ,5), obteniéndose la 6-bromometil-2,5dimetil-3(2H)-piridazinona lId (65 mg, 96%). EMAR (ESI): miz calculado para C7HIOBrN20, 216,99710 [M+Ht, encontrado 216,99627.

lH RMN (CDCh) �5: 6,73 (m, 1H), 4,37 (s, 2H), 3,74 (s, 3H), 2,32 (d, 3H, J = 1,1 Hz). A una disolución de dietilamina (8 �..tL, 0,077 mmol) en DMF (1 mL) se le adicion�

CS2 (9 �..tL, 0,141 mmol) y K3P04 (16 mg, 0,077 mmol). La mezcla as� obtenida se agit� a t.a. y bajo atmósfera de Ar durante 30 minutos. A continuación se le adicion� una disolución del compuesto lId (11 mg, 0,051 mmol) en DMF (1 mL) y se mantuvo la agitaci�n en las mismas condiciones durante 22 horas. A continuación, la mezcla de reacción se trat� con H20 (0,5 mL) y se concentr� a sequedad a vacío. El residuo obtenido se purificó por cromatografia en columna sobre gel de sílice (eluyente hexano/acetato de etilo 3:1 y 1:3) obteniéndose el

compuesto Id2 (14 mg, 97%). EMAR (ESI): miz [M+Ht calculado para C12H20N30S2, 286,10423, encontrado 286,10546. lH RMN (CDCh) �: 6,69 (s, 1H), 4,52 (s, 2H), 4,03 (c, 2H, J = 7,0 Hz), 3,72 (s, 3H), 3,65 (t, 2H, J = 7,0 Hz), 2,26 (s, 3H), 1,28 (m, 6H).

Ejemplo 2

Preparaci�n de pirrolidin-1-ilcarboditioato de 1, 4-dimetil-6-oxo-1, 6dihidropiridazin-3 -ilmetilo (Id3). De acuerdo con el procedimiento descrito para la obtención del compuesto Id2, se trat� una disolución de pirrolidina (8 /lL, 0,096 mmol), CS2 (11 /lL, 0,175 mmol) y K3P04 (20 mg, 0,096 mmol) en DMF (1 mL) con una disolución del compuesto lId (10 mg, 0,046 mmol) en DMF (1 mL). El residuo obtenido se purificó por cromatografia en columna sobre gel de sílice (eluyente hexano/acetato de etilo 3: 1 y hexano/acetato de etilo 1 :3) obteniéndose el compuesto Id3 (13 mg, 100%). EMAR (ESI): miz calculado para C12HI8N30S2, 284,08858 [M+Ht, encontrado 284,08856. lH RMN (CDCh) �: 6,69 (m, lH), 4,55 (s, 2H), 3,94 (t, 2H, J = 7,1 Hz), 3.74 (c, 2H, J= 7,1 Hz), 3,72 (s, 3H), 2,26 (d, 3H, J= 1,0 Hz), 2.08 (m, 2H), 1.99 (m, 2H).

Ejemplo 3

Preparaci�n de piperidin-1-ilcarboditioato de 1, 4-dimetil-6-oxo-1, 6dihidropiridazin-3-ilmetilo (Id4). De acuerdo con el procedimiento descrito para la obtención del compuesto Id2, se trat� una disolución de piperidina (8 /lL, 0,081 mmol), CS2 (9 /lL, 0,147 mmo!) y K3P04 (17 mg, 0,081 mmol) en DMF (1 mL) con una disolución del compuesto lId (15 mg, 0,069 mmol) en DMF (1 mL). El residuo obtenido se purificó por cromatografia en columna sobre gel de sílice (eluyente hexano/acetato de etilo 3: 1, 1:1, 1:3 y 1:4) obteniéndose el compuesto Id4 (19 mg, 95%). EMAR (ESI): miz calculado para C13H20N30S2, 298,10423 [M+Ht, encontrado 298,10379. lH RMN (CDCh) �: 6,69 (m, lH), 4,53 (s, 2H), 4,28 (m, 2H), 3,88 (m, 2H), 3,72 (s, 3H), 2.26 (d, 3H, J= 1.0 Hz), 1,70 (m, 6H).

Ejemplo 4

Preparaci�n de morfolin-4-ilcarboditioato de 1, 4-dimetil-6-oxo-1, 6dihidropiridazin-3-ilmetilo (Ids).

De acuerdo con el procedimiento descrito para la obtención del compuesto Id2, se trat� una disolución de morfolina (8 �.tL, 0,091 mmol), CS2 (10 �.tL, 0,165 mmol) y K3P04 (19 mg, 0,091 mmol) en DMF (1 mL) con una disolución del compuesto lId (10 mg, 0,046 mmol) en DMF (1 mL). El residuo obtenido se purificó por cromatograf�a en columna sobre gel de sílice (eluyente hexano/acetato de etilo 3:1, 1 :2, y 1 :4) obteniéndose el compuesto Ids (13 mg, 94%). EMAR (ESI): miz calculado para C12HISN3�2S2, 300.08349 [M+Ht, encontrado 300.08357. IH RMN (CDCh) J: 6,70 (m, lH), 4,54 (s, 2H), 4,33 (m, 2H), 3,96 (m, 2H), 3,77 (m, 4H), 3,72 (s, 3H), 2,27 (d, 3H, J= 1,0 Hz).

Ejemplo 5

Preparaci�n de 4-benzoilpiperazin-1-ilcarboditioato de 1,4-dimetil-6-oxo-1, 6dihidropiridazin-3-ilmetilo (Idll). De acuerdo con el procedimiento descrito para la obtención del compuesto Id2, se trat� una disolución de l-benzoilpiperazina (13 mg, 0,068 mmol), CS2 (8 �.tL, 0,132 mmol) y K3P04 (14 mg, 0,068 mmol) en DMF (1 mL) con una disolución del compuesto lid (10 mg, 0,046 mmol) en DMF (1 mL). El residuo obtenido se purificó por cromatograf�a en columna sobre gel de sílice (eluyente hexano/acetato de etilo 1:1, 1:2 y 1:4) obteniéndose el compuesto Idll (18 mg, 97%). EMAR (ESI): miz calculado para C19H23N402S2, 403.12569 [M+Ht, encontrado 403.12569. IH RMN (CDCh) J: 7,43 (m, 5H), 6,71 (s, lH), 4,53 (s, 2H), 4,18 (m, 4H), 3,84 (m, 2H), 3,65 (m, 2H), 3,72 (s, 3H), 2,26 (s, 3H).

Ejemplo 6

Preparaci�n de piperidin-1-ilcarboditioato de 2-(l-metil-6-oxo-1,6dihidropiridazin-3-il)etilo (IalS). De acuerdo con el procedimiento descrito para lid, se trat� una disolución de 6-(2hidroxietil)-2-metil-3(2H)-piridazinona IVan (6 mg, 0,039 mmol) en cloruro de metileno (6 mL) con CBr4 (26 mg, 0,078 mmol) y PPh3 (20 mg 0,078 mmol). El residuo obtenido se purificó por cromatograf�a en columna sobre gel de sílice utilizando como eluyente cloruro de metileno/metanol (88:2) obteniéndose la 6-(2bromoetil)-2-metil-3(2H)-piridazinona lIan (7 mg,:83%).

IH RMN (CDCh) b: 7,14 (d, 1H, J= 9,4 Hz), 6,90 (d, 1H, J= 9,4 Hz), 3,76 (s, 3H),

3.64 (t, 2H, J= 7,0 Hz), 3,14 (t, 2H, J= 7,0 Hz). De acuerdo con el procedimiento descrito para la obtención del compuesto ld2, se trat� una disolución de piperidina (8 IlL, 0,081 mmol), CSz (9 IlL, 0,147 mmol) y K3P04 (17 mg, 0,081 mmol) en DMF (1 mL) con una disolución del compuesto IIan (10 mg, 0,046 mmol) en DMF (1 mL). El residuo obtenido se purificó por cromatograf�a en columna sobre gel de sílice (eluyente hexano/acetato de etilo 3: 1,

1:1 y 1:3) obteniéndose el compuesto Ials (8,5 mg, 89%). EMAR (ESI): miz calculado para C13HzON30SZ, 298.10423 [M+Ht, encontrado 298.10432. IH RMN (CDCh) b: 7,25 (d, 1H, J = 9,5 Hz), 6,89 (d, 1H, J = 9,5 Hz), 4,29 (m, 2H), 3,86 (m, 2H), 3,75 (s, 3H), 3.59 (t, 2H, J = 7,4 Hz), 3,00 (t, 2H, J = 7,4 Hz),

1.70 (m, 6H).

Ejemplo 7

Preparaci�n de piperidin-l-ilcarboditioato de 2-(1-metil-6-oxo-l,6dihidropiridazin-3-il)propilo (Ia26). De acuerdo con el procedimiento descrito para lId, se trat� una disolución de 6-(2hidroxipropil)-2-metil-3(2H)-piridazinona IVam (6 mg, 0, 036 mmol) en cloruro de metileno (6 mL) con CBr4 (30 mg, 0,096 mmol) y PPh3 (30 mg 0,114 mmol). El residuo obtenido se purificó por cromatograf�a en columna sobre gel de sílice utilizando como eluyente cloruro de metileno/metanol (88:2) obteniéndose la 6-(2bromopropil)-2-metil-3(2H)-piridazinona IIam (7 mg, 84%). EMAR (El): miz calculado para CSHllBrNzO, 230.0055 [Mt; encontrado 230.0057. IH RMN (CDCb) b: 7,11 (d, 1H, J= 9,6 Hz), 6,89 (d, 1H, J= 9,6 Hz), 3,75 (s, 3H), 3,47 (t, 2H, J= 6,4 Hz), 2,76 (t, 2H, J= 7,4 Hz), 2,22 (m, 2H). De acuerdo con el procedimiento descrito para la obtención del compuesto Id2, se trat� una disolución de piperidina (8 IlL, 0,081 mmol), CSz (9 IlL, 0,147 mmol) y K3P04 (17 mg, 0,081 mmol) en DMF (1 mL) con una disolución del compuesto IIam (10 mg, 0,043 mmol) en, DMF (1 mL). El residuo obtenido se purificó por cromatograf�a en columna sobre gel de sílice (eluyente hexano/acetato de etilo 1: 1, 1 :2) obteniéndose el compuesto Ia26 (9 mg, 67%). EMAR (ESI): miz calculado para CI4HzzN30SZ, 312.11988 [M+Ht; encontrado 312.12097

lH RMN (CDCi)) t5: 7,13 (d, 1H, J = 9,5 Hz), 6,87 (d, 1H, J = 9,5 Hz), 4,29 (m, 2H), 3,89 (m, 2H), 3,75 (s, 3H), 3,37 (t, 2H, J = 7,3 Hz), 2,71 (t, 2H, J = 7,7 Hz), 2,07 (m, 2H), 1,69 (m, 6H).

Actividad antineopl�sica: Se determin� el efecto sobre la proliferaci�n celular de diversos compuestos de estructura híbrida piridazinona ditiocarbamato (Ia-d). Se realizaron estudios in vitro frente a cinco líneas celulares cancerosas humanas: cáncer de pulmón (NCI-H460), cáncer de cervix (Hela 229), cáncer de ovario (A 2789), cáncer de mama (MCF-7) y leucemia promieloc�tica (HL-60), utilizando un método colorim�trico de microcultivo, el ensayo del bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5difeniltetrazolio (MTT). El ensayo colorim�trico del MTT se basa en la capacidad que tienen las células metab�licamente activas de transformar el MTT en un producto de color azul, el formaz�n, que se determina espectro fotom�tricamente (Eur. J Med Chem. 45,6114-6119,2010). De manera resumida, se sembraron las células en una placa estéril de 96 pocillos (15 x 103 células por pocillo para la línea celular NCI-H 460, 4 x 103 para las líneas celulares Hela y A2780, y 104 para las líneas celulares MCF-7 y HL-60), se incubaron 24 h en medio de crecimiento y se trataron a 37�C durante 48 horas (NCI-H460, Hela), 96 horas (A2780, MCF-7) y 24 horas (HL-60) con distintas dosis de los compuestos evaluados y del fármaco de referencia, el cisplatino, disueltos en dimetilsulf�xido (DMSO). Se utilizaron 3 pocillos para cada una de las dosis de compuesto evaluado. A cada pocillo se le añadieron 10 J.tL de una disolución de MTT en tampón salino fosfato (PBS) con una concentración de 5 mg/mL y se incub� durante 4 horas. Se realizó el mismo protocolo. con células control tratadas con distintas dosis de DMSO y todos los experimentos se realizaron por triplicado. Se cuantific� el color formado mediante una lectura de la absorbancia de las placas a una longitud de onda de 595 nm en un lector Tecan Ultra Evolution. Se calcul� el porcentaje de viabilidad celular dividiendo la absorbancia media de las células tratadas con un compuesto entre la del control. Cuando los porcentajes de inhibición de la proliferaci�n celular resultaron superiores al 50% se determinaron las concentraciones inhibitorias 50 (C1so). La CIso es la concentración necesaria para inhibir el crecimiento celular en un 50%. Las C1so se calcularon a partir de las curvas dosis-respuesta utilizando el software GraphPad Prism, versión 2.01. Para

todos los compuestos ensayados los coeficientes de correlación (~) resultaron mayores de 0,998. En la tabla V se muestran los valores de CIso en micromoleslL (/lM), o los porcentajes de inhibición del crecimiento celular de los compuestos Id2, Id3, Id4,

5 Ids, Idn , IalS y Ia26.

Tabla V. Valores de CIso o porcentajes de inhibición del crecimiento celular en las seis líneas celulares estudiadas (NCIH460, Hela-229, A-2789, MCF-7 y HL-60) de los compuestos Id2, 1d3, Id4, Id5, Idll, la15 y la26 incluyendo el 10 cisplatino (inhibidor de referencia).

CIso (J-lM)"

Compuesto NCI-H460 Hela-229 A-2789 MCF-7 HL-60

Id2 243�28O 2179�136 23�2 32% 30% Id3 38% 35% 48�6D 29% 8% Id4 66�6 5259�444 42�4 34% 30% Ids 26% 31% 104�12 21% 6% Id11 23�1 41% 45�3 39% 24% la15 36�2 39% 262�23 29% 26% la26 6,41�0,22 158�29 16�1 35�8 31%

Cisplatino 7,08�0,23 0,86�0,02 0,88�0,02 1l�1 8,2�0,5

a Los resultados son media � la desviación estándar de tres experimentos.

Los siete compuestos presentaron significativa actividad antineopl�sica frente a diversas líneas celulares correspondientes a tumores sólidos humanos (pulmón, 15 cervix, ovario y mama), con valores de CIso en el rango micromolar y ninguno de ellos result� activo frente a la leucemia promieloc�tica humana (HL-60). Esta selectividad es notoria en el compuesto Ia26, que result� activo en las 4 líneas celulares de tumores sólidos, humanos utilizadas en el estudio. El compuesto Ia26 result� más activo que el compuesto de referencia (cisplatino) como inhibidor

20 de la proliferaci�n celular de la línea NCI-H460 correspondiente a cáncer de pulmón humano con una CI50 de 6,41 /lM. Finalmente, todos los compuestos resultaron activos frente a línea celular A-2789 correspondiente al cáncer de ovario.

Claims (11)

1. REIVINDICACIONES

   1. Molécula de fórmula (1):

   o N-N

   R/

   En donde: n es un número entero seleccionado de 1,2,3,4,5,6, 7, 8; R es un grupo seleccionado de: un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo CI-C6, un grupo carboxialquilo CI-C6, un grupo haloalquilo CI-C6, un grupo arilo C6-C12, un grupo aralquilo C6-C12, un grupo heteroarilo C4-C12; R1 es un grupo seleccionado de: un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo C1-C6, un átomo de halógeno, R2 es un grupo seleccionado de: un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo C1-C6, un átomo de halógeno, R3, R4 idénticos o diferentes se seleccionan de: un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo C1-C6, grupo heterocicloalquilo saturado CI-C6, un grupo arilo C6-C12, un grupo aralquilo C6-C12, un grupo heteroarilo C4-C12,

   R4

   O bien R3 y forman un ciclo seleccionado de: un ciclo alquilo Cs-Cs, un heterocicloalquilo Cs-Cs, un heterocicloalquilo Cs-Cs N-alquilo sustituido, un heterocicloalquilo Cs-Cs N-arilo sustituido, un heterocicloalquilo Cs-Cs N cicloalquilo sustituido, un heterocicloalquilo Cs-Cs N-aralquilo sustituido, un heterocicloalquilo Cs-Cs N-acilo sustituido; y sus sales farmac�uticamente aceptables.

2. 2.

   Una molécula según la reivindicación 1, donde n es un número entero seleccionado de 1, 2, 3.

3. 3.

   Una molécula según la reivindicación 1 o la reivindicación 2, donde R es un grupo seleccionado de: metilo, fenilo o bencilo.

4. 4.

   Una molécula según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, donde R1 es un átomo de hidrógeno.

5. 5.

   Una molécula según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, donde R2 es un átomo de hidrógeno o un grupo metilo.

6. 6.

   Una molécula según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, donde R3 y R4 forman un grupo seleccionado de la siguiente lista:

7. 7.

   Una molécula según la reivindicación 1, la cual se incluye en la siguiente lista:

   o~,Y o

   / Ial ,
8. 8. Un medicamento que comprende una molécula de fórmula (I) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 o una sal de ésta en un soporte farmac�uticamente aceptable, con uno o más excipientes farmacéuticos aceptables.

   5 9. Un medicamento que comprende una molécula de fórmula (I) según la reivindicación 8 que incluya uno o más agentes terapéuticos adicionales.
9. 10. Uso de una molécula de fórmula (I), según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, para la preparación de un medicamento para prevenir y/o tratar un tumor o un cáncer.

   10 11. Uso según la reivindicación 10, para la prevención y/o tratamiento de un cáncer seleccionado de: cáncer de pulmón, cáncer de ovario, cáncer de c�rvix o cáncer de mama.
10. 12. Un método para la síntesis de una molécula de fórmula (1) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 caracterizado por que comprende al menos una etapa

    15 como se describe en el esquema 1, en donde la 6-bromoalquil-3(2H)-piridazinona de fórmula II, una amina secundaria de fórmula III y di sulfuro de carbono (CS2) reaccionan en presencia de base en un disolvente a temperatura ambiente.

    ' R2 R

    RV2 Br

    -

    /

    Condiciones básicas s N

    ..

    � j CH( y "R4

    o==< ~CH( +

    disolvente

    ~

    N-N S II lIT / 1

    � N-N R Esquema 1
11. 13. Un método según la reivindicación 12, en donde el disolvente es 5 dimetilformamida (DMF) y la base K3P04.