ES2402142T3 - Biomarcadores para la enfermedad del hígado graso y métodos que utilizan los mismos - Google Patents

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Alvin Berger
Yunfu Hu
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Cleveland Clinic Foundation
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Abstract

Un método para diagnosticar si un sujeto tiene, o Un método para diagnosticar si un sujeto tiene, o está predispuesto a, esteatohepatitis, que comprenestá predispuesto a, esteatohepatitis, que comprende: analizar una muestra biológica de un sujeto pade: analizar una muestra biológica de un sujeto para determinar el nivel de glicocolato en la muestrra determinar el nivel de glicocolato en la muestra, y comparar el nivel de glicocolato en la muestra, y comparar el nivel de glicocolato en la muestra con niveles de referencia de glicocolato positiva con niveles de referencia de glicocolato positivos para esteatohepatitis y/o negativos para esteatos para esteatohepatitis y/o negativos para esteatohepatitis con el fin de diagnosticar si el sujetoohepatitis con el fin de diagnosticar si el sujeto tiene, o está predispuesto a, esteatohepatitis. tiene, o está predispuesto a, esteatohepatitis.

Description

Biomarcadores para la enfermedad del hígado graso y métodos que utilizan los mismos
Campo
La invención se refiere en general a biomarcadores para la enfermedad del hígado graso y a los métodos basados en los mismos biomarcadores.
Antecedentes
El cambio graso en el hígado es el resultado de la acumulación excesiva de lípidos en los hepatocitos. El hígado graso es la acumulación de triglicéridos y otras grasas en las células del hígado. La enfermedad del hígado graso puede variar de hígado graso solo (hígado graso simple, esteatosis) a hígado graso asociado con inflamación hepática (esteatohepatitis). Aunque tener grasa en el hígado no es normal, ésta, por sí sola, probablemente causa un pequeño perjuicio o un daño permanente. Se cree generalmente que la esteatosis es una afección benigna, con raro progreso a enfermedad hepática crónica. En contraste, la esteatohepatitis puede progresar a fibrosis y cirrosis hepática, puede estar asociada con el carcinoma hepatocelular y puede dar como resultado morbilidad y mortalidad relacionadas con el hígado.
La esteatosis se puede producir por el uso de alcohol (hígado graso relacionado con alcohol) o en ausencia de alcohol (enfermedad de hígado graso no alcohólico, EHGNA). La esteatohepatitis puede estar relacionada con el daño hepático inducido por el alcohol o puede no estar relacionada con el alcohol. Si está presente esteatohepatitis, pero no hay un historial de consumo de alcohol, la afección se denomina esteatohepatitis no alcohólica (EHNA).
En ausencia de alcohol, los principales factores de riesgo para el hígado graso simple (EHGNA) y EHNA son la obesidad, la diabetes y niveles altos de triglicéridos. En EHNA, la grasa se acumula en el hígado y por último produce tejido cicatrizal. Este tipo de hepatitis parece estar asociado con diabetes, desnutrición proteica, obesidad, enfermedad de las arterias coronarias y tratamiento de medicación con corticosteroides. La fibrosis o cirrosis en el hígado están presentes en 15-50% de los pacientes con EHNA. Aproximadamente 30% de los pacientes con fibrosis desarrolla cirrosis a los 10 años.
La enfermedad del hígado graso es actualmente la causa más común para las pruebas de función hepática elevada en los Estados Unidos. Ahora es probablemente la principal causa de elevaciones leves de las transaminasas. La esteatosis afecta aproximadamente a 25-35% de la población general. La EHGNA se encuentra en más de 80% de los pacientes que son obesos. La EHNA afecta del 2 al 5 por ciento de los norteamericanos y se ha detectado en 1,2-9% de los pacientes sometidos a biopsia hepática rutinaria. Más de 50% de los pacientes sometidos a cirugía bariátrica tienen EHNA. La enfermedad afecta a hombres y mujeres; los estudios tempranos indican que >70% de casos se presentaron en mujeres, pero estudios recientes indican que 50% de los pacientes son mujeres. El hígado graso se produce en todos los grupos de edad. En los Estados Unidos la EHNA es la enfermedad hepática más común entre los adolescentes y es la tercera causa más común de enfermedad hepática crónica en los adultos (después de la hepatitis C y el alcohol).
Tanto EHNA y EHGNA son cada vez más comunes, posiblemente debido al mayor número de Estadounidenses con obesidad. En los últimos 10 años, la tasa de obesidad se ha duplicado en adultos y se ha triplicado en niños. La obesidad también contribuye a la diabetes y al elevado colesterol en sangre, lo que puede complicar aún más la salud de alguien con EHNA. La diabetes y el colesterol elevado en sangre son también cada vez más comunes entre los estadounidenses.
La EHNA es por lo general una enfermedad silenciosa con pocos o ningún síntoma. Los pacientes generalmente se sienten bien en las primeras etapas y sólo comienzan a tener síntomas, como fatiga, pérdida de peso y debilidad, una vez que la enfermedad está más avanzada o se desarrolla cirrosis. La progresión de EHNA puede tardar años, incluso décadas. El proceso se puede detener y, en algunos casos, revertir por sí solo sin terapia específica. O la EHNA puede empeorar lentamente, causando cicatrices o "fibrosis" que aparecen y se acumulan en el hígado. A medida que empeora la fibrosis, se desarrolla cirrosis; el hígado llega a estar gravemente cicatrizado, endurecido, y a ser incapaz de funcionar con normalidad. No todas las personas con EHNA desarrollan cirrosis, pero una vez que está presente la grave cicatrización o la cirrosis, pocos tratamientos pueden detener el progreso. Una persona con cirrosis experimenta retención de líquidos, pérdida de masa muscular, hemorragia en los intestinos, e insuficiencia hepática. El trasplante de hígado es el único tratamiento para la cirrosis avanzada con insuficiencia hepática y el trasplante se realiza cada vez más en personas con EHNA. La EHNA se clasifica como una de las principales causas de cirrosis en los Estados Unidos, detrás de la hepatitis C y la hepatopatía alcohólica.
La EHNA es por lo general la primera sospecha en una persona que se encuentra que tiene elevaciones en las pruebas hepáticas que están incluidas en los paneles de pruebas sanguíneas rutinarias, tales como alanina aminotransferasa (ALT) o aspartato aminotransferasa (AST). Cuando la evaluación adicional no muestra una razón aparente para la enfermedad hepática (tal como medicaciones, hepatitis viral o uso excesivo de alcohol) y cuando las radiografías o estudios por imágenes del hígado graso muestran grasa, se sospecha de la EHNA. El único método de probar un diagnóstico de EHNA y separarlo de hígado graso simple es una biopsia de hígado. Una biopsia de hígado requiere la inserción de una aguja a través de la piel y la separación de una pequeña porción del hígado. Si el tejido muestra grasa sin inflamación y lesión se diagnostica hígado graso simple o EHGNA. La EHNA se diagnostica cuando el examen microscópico del tejido muestra grasa junto con inflamación y lesión de las células hepáticas. Se requiere una biopsia para determinar si se ha desarrollado tejido cicatricial en el hígado. Actualmente, ninguna de las pruebas o análisis de sangre puede proporcionar de manera fiable esta información. Por lo tanto existe la necesidad de un método diagnóstico menos invasivo (es decir, un método que no requiriera biopsia).
Compendio
En el sentido más amplio, la presente solicitud se define como sigue:
1. Un método para diagnosticar si un sujeto tiene, o está predispuesto a, esteatohepatitis, que comprende:
analizar una muestra biológica de un sujeto para determinar el nivel de glicocolato en la muestra, y
comparar el nivel de glicocolato en la muestra con niveles de glicocolato de referencia positivos para esteatohepatitis y/o negativos para esteatohepatitis con el fin de diagnosticar si el sujeto tiene, o está predispuesto a, esteatohepatitis.
2.
El método del apartado 1, que comprende adicionalmente analizar la muestra biológica para determinar el nivel o los niveles de uno o más biomarcadores adicionales para la esteatosis en la muestra, en donde los uno o más biomarcadores adicionales se seleccionan de las tablas 1, 3, 4B, 6B, 9, 10, 11, 12, 13, y/o la Figura 2 y/o 3, y
comparar el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores adicionales en la muestra con respecto a niveles de referencia positivos para esteatohepatitis y/o negativos para esteatohepatitis de los uno o más biomarcadores adicionales con el fin de diagnosticar si el sujeto tiene, o está predispuesto a, esteatohepatitis.
3.
El método del apartado 2, en donde el método es un método para diagnosticar si un sujeto tiene esteatohepatitis y en donde los uno o más biomarcadores adicionales se seleccionan de los biomarcadores de las tablas 1, 3, 4B, 6B, 9, 10, 11, 12, 13, y/o la Figura 2 y/o 3 que tienen valores de p de menos de 0,05 y/o los biomarcadores de las tablas 1, 3, 4B, 6B, 9, 10, 11, 12, 13, y/o la Figura 2 y/o 3 que tienen valores de q de menos de 0,10.
4.
El método del apartado 2, en donde el método es un método para diagnosticar si un sujeto tiene esteatohepatitis y en donde la muestra analizada es de un sujeto masculino y los biomarcadores se seleccionan de la Tabla 12.
5.
El método del apartado 2, en donde el método es un método para diagnosticar si un sujeto tiene esteatohepatitis y en donde la muestra analizada es de un sujeto femenino y los biomarcadores se seleccionan de la Tabla 13.
6.
El método de uno cualquiera de los apartados anteriores, en donde el método es un método para diagnosticar si un sujeto tiene esteatohepatitis y en donde la muestra se analiza utilizando una o más técnicas seleccionadas del grupo que consiste en espectrometría de masas, reacciones enzimáticas o bioquímicas, química clínica, ELISA, y unión de anticuerpos.
7.
Un método de acuerdo con el apartado 2, en donde el método es un método para determinar si un sujeto está predispuesto a desarrollar esteatohepatitis y
el nivel o los niveles de glicocolato y los uno o más biomarcadores adicionales de la muestra se comparan con los niveles de referencia de glicocolato y los uno o más biomarcadores adicionales positivos para esteatohepatitis y/o negativos para esteatohepatitis con el fin de determinar si el sujeto está predispuesto a desarrollar esteatohepatitis.
8.
Un método para verificar el progreso/regresión de la esteatohepatitis en un sujeto, que comprende:
analizar una primera muestra biológica de un sujeto para determinar el nivel o los niveles de glicocolato y opcionalmente uno o más biomarcadores adicionales para la esteatohepatitis en la muestra, en donde los uno o más biomarcadores se seleccionan de las tablas 1, 3, 4B, 6B, 9, 10, 11, 12, 13, y/o la Figura 2 y/o 3 y la primera muestra se obtiene del sujeto en un primer momento;
analizar una segunda muestra biológica de un sujeto para determinar el nivel o los niveles de glicocolato y opcionalmente los uno o más biomarcadores adicionales, en donde la segunda muestra se obtiene del sujeto en un segundo momento; y
comparar el nivel o los niveles de glicocolato y opcionalmente los uno o más biomarcadores adicionales en la primera muestra con el nivel o los niveles de glicocolato y opcionalmente los uno o más biomarcadores adicionales en la segunda muestra con el fin de verificar el progreso/regresión de la esteatohepatitis en el sujeto.
9. Un método para evaluar la eficacia de una composición para tratar la esteatohepatitis, que comprende:
analizar, a partir de un sujeto que tiene esteatohepatitis y que está siendo tratado actualmente o ha sido tratado previamente con una composición, una muestra biológica para determinar el nivel o los niveles de glicocolato y opcionalmente uno o más biomarcadores adicionales para la esteatohepatitis seleccionados de las tablas 1, 3, 4B, 6B, 9, 10, 11, 12, 13, y/o la Figura 2 y/o 3; y
comparar el nivel o los niveles de glicocolato y opcionalmente los uno o más biomarcadores adicionales en la muestra con a) los niveles de glicocolato y opcionalmente los uno o más biomarcadores adicionales en una muestra biológica tomada previamente del sujeto, en donde la muestra biológica tomada previamente se obtuvo del sujeto antes de ser tratado con la composición, b) los niveles de referencia de glicocolato y opcionalmente los uno o más biomarcadores adicionales positivos para esteatohepatitis, y/o c) los niveles de referencia de glicocolato y opcionalmente los uno o más biomarcadores adicionales negativos para esteatohepatitis.
10. Un método para evaluar la eficacia de una composición en el tratamiento de la esteatohepatitis, que comprende:
analizar una primera muestra biológica de un sujeto para determinar el nivel o los niveles de glicocolato y opcionalmente uno o más biomarcadores adicionales para la esteatohepatitis seleccionados de las tablas 1, 3, 4B, 6B, 9, 10, 11, 12, 13, y/o la Figura 2 y/o 3, la primera muestra obtenida del sujeto en un primer momento;
analizar una segunda muestra biológica del sujeto, al que se ha administrado la composición, para determinar el nivel o los niveles de glicocolato y opcionalmente los uno o más biomarcadores adicionales, la segunda muestra obtenida del sujeto en un segundo momento después de la administración de la composición;
comparar el nivel o los niveles de glicocolato y opcionalmente los uno o más biomarcadores adicionales en la primera muestra con el nivel o los niveles de glicocolato y opcionalmente los uno o más biomarcadores adicionales en la segunda muestra con el fin de evaluar la eficacia de la composición para tratar la esteatohepatitis.
11. Un método para escrutar una composición para determinar su actividad en la modulación del glicocolato y opcionalmente uno o más biomarcadores adicionales de la esteatohepatitis, que comprende:
poner en contacto una o más células con la composición;
analizar al menos una porción de las una o más células o de una muestra biológica asociada con las células para determinar el nivel o los niveles de glicocolato y opcionalmente uno o más biomarcadores adicionales de la esteatohepatitis seleccionados de las tablas 1, 3, 4B, 6B, 9, 10, 11, 12, 13, y/o la Figura 2 y/o 3; y
comparar el nivel o los niveles de glicocolato y opcionalmente los uno o más biomarcadores adicionales con niveles patrón predeterminados para el glicocolato y opcionalmente los uno o más biomarcadores adicionales para determinar si la composición modula el nivel o los niveles de glicocolato y opcionalmente los uno o más biomarcadores adicionales.
12.
El uso de un biomarcador, o una pluralidad de biomarcadores, en la diagnosis de la esteatohepatitis, en donde dicho biomarcador o pluralidad de biomarcadores comprenden glicocolato y opcionalmente los uno o más biomarcadores adicionales seleccionados de las tablas 1, 3, 4B, 6B, 9, 10, 11, 12, 13, y/o la Figura 2 y/o 3.
13.
Un método para distinguir la EHGNA de la EHNA en un sujeto que tiene una enfermedad o trastorno hepáticos, que comprende:
analizar una muestra biológica de un sujeto para determinar el nivel o los niveles de glicocolato y opcionalmente uno o más biomarcadores adicionales para la EHGAN y/o EHNA en la muestra, en donde los uno o más biomarcadores se seleccionan de las tablas 2, 3, 4B, 5B, 6B, 8, 9, 10, 11, 12, 13, y las Figuras 1, 2, 3
comparar el nivel o los niveles de glicocolato y opcionalmente los uno o más biomarcadores adicionales en la muestra con niveles de referencia positivos para EHGNA que la distinguen de EHNA y/o con niveles de referencia positivos para EHNA que la distinguen de EHGNA con el fin de determinar si el sujeto tiene EHNA.
14.
El método del apartado 1, que comprende adicionalmente analizar la muestra biológica del sujeto para determinar el nivel o los niveles de uno o más biomarcadores adicionales para la esteatohepatitis en la muestra, en donde los uno o más biomarcadores adicionales se seleccionan del grupo que consiste en glicoquenodesoxicolato, taurocolato, butirilcarnitina, gamma-glutamiltirosina, quinurenina, glutamilvalina, gamma-glutamilfenilalanina, gammaglutamil-leucina, glutamato, carnitina, propionilcarnitina, y combinaciones de los mismos, y
comparar el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores adicionales en la muestra con niveles de referencia positivos para esteatohepatitis y/o negativos para esteatohepatitis de los uno o más biomarcadores adicionales con el fin de diagnosticar si el sujeto tiene, o está predispuesto a, esteatohepatitis.
15.
El método del apartado 14, en donde la muestra biológica se analiza utilizando una o más técnicas seleccionadas del grupo que consiste en espectrometría de masas, reacciones enzimáticas o bioquímicas, química clínica, ELISA, y unión de anticuerpos.
16.
El método del apartado 14, en donde la muestra biológica es una muestra de plasma o una muestra de orina.
17.
El método del apartado 14, en donde los uno o más biomarcadores adicionales se seleccionan del grupo que consiste en glicoquenodesoxicolato, taurocolato, y combinaciones de los mismos.
Breve descripción de los dibujos
La Figura 1 proporciona una realización de compuestos biomarcadores que son importantes para distinguir sujetos con esteatosis y sujetos control.
La Figura 2 proporciona una realización de compuestos de biomarcadores que son importantes para distinguir sujetos con esteatohepatitis de sujetos de control.
La Figura 3 proporciona una realización de los compuestos de biomarcadores que son importantes para distinguir sujetos con esteatosis, con esteatohepatitis y de control.
La Figura 4 proporciona un ejemplo de los resultados de partición recursiva que muestran la clasificación de los sujetos de control y con esteatosis utilizando los biomarcadores identificados en la Tabla 8.
La Figura 5 proporciona un ejemplo de los resultados de partición recursiva que muestran la clasificación de esteatosis y esteatohepatitis (EHNA, EH) utilizando los biomarcadores enumerados en la Tabla 9.
La Figura 6 proporciona un ejemplo de los resultados de partición recursiva que muestran la clasificación de control y esteatohepatitis utilizando los biomarcadores enumerados en la Tabla 10.
La Figura 7 proporciona un ejemplo de los resultados de partición recursiva que muestran el uso de los biomarcadores para clasificar sujetos con esteatosis, esteatohepatitis y de control utilizando los biomarcadores enumerados en la Tabla 11.
Descripción detallada
La presente descripción se refiere a biomarcadores de la esteatosis y la esteatohepatitis, a métodos para el diagnóstico (o para ayudar al diagnóstico) de la esteatosis y/o la esteatohepatitis, a métodos para distinguir entre la esteatosis hepática y esteatohepatitis, a métodos de distinguir entre EHGNA y EHNA, a métodos para determinar la predisposición a la esteatohepatitis, fibrosis y cirrosis, a métodos para verificar el progreso/regresión de la esteatohepatitis, a métodos para la evaluación de la eficacia de las composiciones para el tratamiento de la esteatohepatitis, a métodos para escrutar composiciones para determinar su actividad en la modulación de biomarcadores de la esteatohepatitis, a métodos para el tratamiento de la esteatohepatitis, así como a otros métodos basados en biomarcadores de la esteatosis y la esteatohepatitis. Antes de describir esta invención con más detalle, sin embargo, se definirán primero los siguientes términos.
Definiciones:
"Biomarcador" significa un compuesto, preferiblemente un metabolito, que está presente diferencialmente (es decir, en aumento o disminución) en una muestra biológica de un sujeto o un grupo de sujetos que presentan un primer fenotipo (por ejemplo, que tienen una enfermedad) en comparación con una muestra biológica de un sujeto o grupo de sujetos que tienen un segundo fenotipo (por ejemplo, que no tienen la enfermedad). Un biomarcador puede estar presente diferencialmente a cualquier nivel, pero está generalmente presente a un nivel que se incrementa en al menos 5%, en al menos 10%, en al menos 15%, en al menos 20%, en al menos 25%, en al menos 30%, en al menos 35%, en al menos 40%, en al menos 45%, en al menos 50%, en al menos 55%, en al menos 60%, en al menos 65%, en al menos 70%, en al menos 75%, en al menos 80%, en al menos 85%, en al menos 90%, en al menos 95%, en al menos 100%, en al menos 110%, en al menos 120 %, en al menos 130%, en al menos 140%, en al menos 150%, o más; o está presente generalmente en un nivel que se reduce en al menos 5%, en al menos 10%, en al menos 15% , en al menos 20%, en al menos 25%, en al menos 30%, en al menos 35%, en al menos 40%, en al menos 45%, en al menos 50%, en al menos 55%, por al menos 60%, en al menos 65%, en al menos 70%, en al menos 75%, en al menos 80%, en al menos 85%, en al menos 90%, en al menos 95%, o en 100% (es decir, ausente). Un biomarcador está presente diferencialmente preferiblemente en un nivel que es estadísticamente significativo (es decir, un valor p inferior a 0,05 y/o un valor q de menos de 0,10 según se determina usando cualquiera de la prueba t de Welch o la prueba de suma de rangos de Wilcoxon).
El "nivel" de uno o más biomarcadores significa la cantidad o concentración absoluta o relativa del biomarcador en la muestra.
"Muestra" o "muestra biológica" significa el material biológico aislado de un sujeto. La muestra biológica puede contener cualquier material biológico adecuado para detectar los biomarcadores deseados, y puede comprender material celular y/o no celular del sujeto. La muestra se puede aislar de cualquier tejido o fluido biológico adecuado tal como, por ejemplo, tejido, sangre, plasma sanguíneo, orina o líquido cefalorraquídeo (LCR).
"Sujeto" significa cualquier animal, pero es preferiblemente un mamífero, tal como, por ejemplo, un ser humano, mono, primate no humano, ratón, o conejo.
Un "nivel de referencia" de un biomarcador significa un nivel del biomarcador que es indicativo de un estado de enfermedad concreto, fenotipo, o predisposición a desarrollar un estado de enfermedad concreto o fenotipo, o su carencia, así como combinaciones de estados de enfermedad, fenotipos, o predisposición a desarrollar un estado de enfermedad concretos o fenotipo, o su carencia. Un nivel de referencia "positivo" de un biomarcador significa un nivel que es indicativo de un estado de enfermedad concreto o fenotipo. Un nivel de referencia "negativo" de un biomarcador significa un nivel que es indicativo de una falta de un estado de enfermedad concreto o fenotipo. Por ejemplo, un "nivel de referencia positivo para EHNA" de un biomarcador significa un nivel de un biomarcador que es indicativo de un diagnóstico positivo de EHNA en un sujeto, y un "nivel de referencia negativo para EHNA" de un biomarcador significa un nivel de un biomarcador que es indicativo de un diagnóstico negativo de EHNA en un sujeto. Un "nivel de referencia" de un biomarcador puede ser una cantidad o concentración absoluta o relativa de los biomarcadores, una presencia o ausencia del biomarcador, un intervalo de cantidad o concentración del biomarcador, una cantidad o concentración mínima y/o máxima del biomarcador, una cantidad o concentración media del biomarcador, y/o una cantidad o concentración mediana del biomarcador; y, además, los "niveles de referencia" de combinaciones de biomarcadores también puede ser proporciones de cantidades o concentraciones absolutas o relativas de dos o más biomarcadores con respecto a cada una de las otras. Los niveles de referencia positivos y negativos apropiados de biomarcadores para un estado de enfermedad concreto, fenotipo o su carencia pueden ser determinados mediante la medición de los niveles de biomarcadores deseados en uno o más sujetos apropiados, y estos niveles de referencia pueden ser adaptados a poblaciones específicas de sujetos (por ejemplo, un nivel de referencia puede ser emparejado por edad o emparejado por sexo de manera que se puedan realizar comparaciones entre los niveles de biomarcadores en muestras de sujetos de una cierta edad o sexo y niveles de referencia para un estado de enfermedad concreto, fenotipo, o su carencia en un cierto grupo de edad o sexo). Estos niveles de referencia también pueden ser adaptados a las técnicas específicas que se utilizan para medir los niveles de biomarcadores en muestras biológicas (por ejemplo, LC-MS, GC-MS, etc.), donde los niveles de biomarcadores pueden diferir basándose en la técnica específica que se utiliza.
"Compuesto no biomarcador " significa un compuesto que no está presente diferencialmente en una muestra biológica de un sujeto o grupo de sujetos que presentan un primer fenotipo (por ejemplo, que tienen una primera enfermedad) en comparación con una muestra biológica de un sujeto o grupo de sujetos que tienen un segundo fenotipo (por ejemplo, que no tienen la primera enfermedad). Tales compuestos no biomarcadores pueden, sin embargo, ser biomarcadores en una muestra biológica de un sujeto o un grupo de sujetos que tienen un tercer fenotipo (por ejemplo, que tienen una segunda enfermedad) en comparación con el primer fenotipo (por ejemplo, que tiene la primera enfermedad) o el segundo fenotipo (por ejemplo, que no tiene la primera enfermedad).
"Metabolito", o "molécula pequeña", significa moléculas orgánicas e inorgánicas que están presentes en una célula. El término no incluye macromoléculas grandes, tales como proteínas de gran tamaño (por ejemplo, proteínas con pesos moleculares de más de 2.000, 3.000, 4.000, 5.000, 6.000, 7.000, 8.000, 9.000, o 10.000), ácidos nucleicos grandes (por ejemplo, los ácidos nucleicos con pesos moleculares de más de 2.000, 3.000, 4.000, 5.000, 6.000, 7.000, 8.000, 9.000, o 10.000), o polisacáridos grandes (por ejemplo, polisacáridos con pesos moleculares de más de 2.000, 3.000, 4.000, 5.000, 6.000, 7.000, 8.000, 9.000, o 10.000). Las moléculas pequeñas de la célula se encuentran generalmente libres en disolución en el citoplasma o en otros orgánulos tales como las mitocondrias, donde forman un grupo de compuestos intermedios que pueden metabolizarse adicionalmente o utilizarse para generar moléculas de gran tamaño, llamadas macromoléculas. El término "moléculas pequeñas" incluye moléculas de señalización e intermedios en las reacciones químicas que transforman la energía derivada de los alimentos en formas utilizables. Los ejemplos de las moléculas pequeñas incluyen azúcares, ácidos grasos, aminoácidos, nucleótidos, compuestos intermedios formados durante los procesos celulares, y otras moléculas pequeñas que se encuentran dentro de la célula.
"Perfil metabólico" o "perfil de molécula pequeña", significa un inventario completo o parcial de las pequeñas moléculas dentro de una célula, tejido, órgano, organismo elegido como diana, o una fracción de los mismos (por ejemplo, compartimiento, celular). El inventario puede incluir la cantidad y/o tipo de moléculas pequeñas presentes. El "perfil de molécula pequeña" se puede determinar utilizando una técnica única o múltiples técnicas diferentes.
"Metaboloma" significa todas las moléculas pequeñas presentes en un organismo dado.
"Esteatosis" se refiere a la enfermedad del hígado graso sin presencia de inflamación. La afección se puede producir por el uso de alcohol o, en ausencia de uso de alcohol.
"Enfermedad del hígado graso no alcohólico" (EHGNA) se refiere a la enfermedad del hígado graso (esteatosis) que se produce en sujetos incluso en ausencia de consumo de alcohol en cantidades consideradas perjudiciales para el hígado.
"Esteatohepatitis" se refiere a la enfermedad de hígado graso que se asocia con inflamación. La esteatohepatitis puede progresar a cirrosis y puede estar asociada con el carcinoma hepatocelular. La afección puede producirse por el uso de alcohol o, en ausencia de uso de alcohol.
"Esteatohepatitis no alcohólica" (EHNA) se refiere a la esteatohepatitis que se produce en sujetos incluso en ausencia de consumo de alcohol en cantidades consideradas perjudiciales para el hígado. La EHNA puede progresar a cirrosis y puede estar asociada con el carcinoma hepatocelular.
I. Biomarcadores
Los biomarcadores de EHGNA y EHNA descritos en la presente memoria fueron descubiertos utilizando técnicas de perfilado metabolómico. Tales técnicas de perfilado metabolómico se describen con más detalle en los ejemplos mostrados más abajo, así como en la Patente de los Estados Unidos Núm. 7.005.255 y en las Solicitudes de Patente de los Estados Unidos Núms. 11/357.732, 10/695.265 (Núm. de Publicación 2005/0014132), 11/301.077 (Núm. de Publicación 2006/0134676), 11/301.078( Núm. de Publicación 2006/0134677), 11/301.079 (Núm. de Publicación 2006/0134678), y 11/405.033, cuyo contenido completo se incorpora a la presente como referencia.
Generalmente, los perfiles metabólicos se determinaron para muestras biológicas de sujetos humanos diagnosticados de esteatosis, así como de uno o más de otros grupos de sujetos humanos (por ejemplo, sujetos de control sanos no diagnosticados de esteatosis), así como de sujetos humanos diagnosticados de EHNA. El perfil metabólico para muestras biológicas de un sujeto que tiene esteatosis se comparó con el perfil metabólico de las muestras biológicas procedentes de los uno o más de otros grupos de sujetos. Esas moléculas presentes diferencialmente, incluyendo aquellas moléculas presentes diferencialmente a un nivel que es estadísticamente significativo, en el perfil metabólico de muestras de sujetos con esteatosis, comparado con otro grupo (por ejemplo, los sujetos de control sanos no diagnosticados de esteatosis) se identificaron como biomarcadores para distinguir dichos grupos. Además, las moléculas presentes diferencialmente, incluyendo aquellas moléculas presente diferencialmente a un nivel que es estadísticamente significativo, en el perfil metabólico de muestras de sujetos con esteatosis en comparación con EHNA también se identificaron como biomarcadores para distinguir dichos grupos.
Los biomarcadores se comentan en la presente memoria con más detalle. Los biomarcadores que fueron descubiertos corresponden al grupo o los grupos siguientes:
Biomarcadores para distinguir los sujetos que tienen esteatosis vs sujetos de control no diagnosticados de
enfermedad hepática (véanse las Tablas 2, 4B, 5B, 8, 11, 12, 13, la Figura 1 (gamma-glutamiltirosina, taurocolato, butirilcarnitina, Metabolito - 11235, Tirosina, uridina, glutamato, Metabolito - 11304, Metabolito - 4611, Metabolito 6488, 10c-undecenoato, Metabolito - 11431, Metabolito - 3107, Glutamilvalina, Metabolito -11230, Metabolito - 3083, Metabolito -11491, Metabolito - 10432, Metabolito - 11422, Metabolito - 11728, Metabolito - 10914, Metabolito 11432, Metabolito - 11314, Metabolito - 12035, Metabolito - 11242, Metabolito -11529, Metabolito - 11897, gammaglutamilfenilalanina, Metabolito -11628, Metabolito -3108, alanina, glicocolato, Isobar 47 (ácido tauroquenodesoxicólico, ácido taurodesoxicólico), Isobar 66 (ácido glicoquenodesoxicólico, ácido glicodesoxicólico), Lactato, manosa, Metabolito-10026, Metabolito-10951, Metabolito-2347, Metabolito-2821, Metabolito-3016, Metabolito-3019, Metabolito-3025, Metabolito-3026, Metabolito-3073, Metabolito-3077, Metabolito-3098, Metabolito3165, Metabolito-3330, Metabolito-4167, Metabolito-4361, Metabolito-4759, Metabolito-4806, Metabolito-5346, Metabolito-5769, Metabolito-8506, Tiroxina, urato), y la Figura 3 (gamma-glutamiltirosina, glutamato, Metabolito -11728, butirilcarnitina, taurocolato, glutamilvalina, tirosina, Metabolito - 11422, quinurenina, glicocolato, gammatocoferol, Metabolito -11431, creatina, Metabolito - 10914, Metabolito - 11235, hipurato, Metabolito -11529, Metabolito - 4611, Metabolito - 01911, Metabolito - 11491, glicerofosforilcolina (GPC), urato-, gammaglutamilfenilalanina-, Metabolito - 11230, 10c-undecenoato, Metabolito - 11315, histidina, Metabolito -11304, Metabolito - 11432, Metabolito - 11242, alanina, isocitrato, isoleucina, lactato, leucina, manosa, Metabolito - 10026, Metabolito -10812, Metabolito - 1496, Metabolito - 1911, Metabolito - 2395, Metabolito -3016, Metabolito -3026 , Metabolito - 3073, Metabolito - 3098, Metabolito - 3330, Metabolito - 4274, Metabolito - 5769, Metabolito - 7187, Metabolito - 8506, Metabolito -9855, teobromina, tiroxina, urato, valina, xantina));
Biomarcadores para distinguir sujetos que tienen EHNA vs sujetos de control no diagnosticados de
enfermedad hepática (véanse las Tablas 1, 6B, 10, 11, 12, 13, la Figura 2 (Metabolito -11728, quinurenina, glicocolato, butirilcarnitina, glutamato, gamma-glutamiltirosina, hipurato, Metabolito - 10914, Metabolito - 11422, gamma-tocoferol, Metabolito - 11564, Glutamilvalina, Metabolito - 11205, Metabolito - 11431, urato, Metabolito 02272, Tirosina, Metabolito -11231, gamma-glutamilfenilalanina, manosa, Metabolito - 03951, Metabolito -11315, Metabolito - 11529, Metabolito - 4611, 10c-undecenoato, Metabolito - 11432, Metabolito - 4147, Metabolito -11227, Taurocolato, Metabolito - 11380, ácido 3-metil-2-oxobutírico, Alanina, glutamina, isocitrato, isoleucina, leucina, mesoeritritol, Metabolito-10026, Metabolito-10812, Metabolito-1086, Metabolito-1110, Metabolito-1335, Metabolito-1496, Metabolito-2041, Metabolito-2272, Metabolito-2395, Metabolito-3073, Metabolito-3087 , Metabolito-3098, Metabolito4274, Metabolito-5769, Metabolito-7187, Valina, xantina));
Biomarcadores para distinguir sujetos que tienen esteatohepatitis (EHNA) vs sujetos que tienen esteatosis
(ver Tablas 3, 4B, 9, 11, 12, 13, y la Figura 3 (gamma-glutamiltirosina, glutamato, Metabolito - 11728, butirilcarnitina, taurocolato, glutamilvalina, tirosina, Metabolito -11422, quinurenina, glicocolato, gamma-tocoferol, Metabolito 11431, creatina, Metabolito - 10914, Metabolito - 11235, hipurato, Metabolito - 11529, Metabolito - 4611, Metabolito - 01911, Metabolito - 11491, glicerofosforilcolina (GPC), urato-, gamma-glutamilfenilalanina-, Metabolito - 11230, 10cundecenoato, Metabolito - 11315, histidina, Metabolito - 11304, Metabolito - 11432, Metabolito -11242, alanina, isocitrato, isoleucina, lactato, leucina, manosa, Metabolito -10026, Metabolito - 10812, Metabolito -1496, Metabolito – 1911, Metabolito - 2395, Metabolito - 3016, Metabolito - 3026, Metabolito - 3073, Metabolito - 3098, Metabolito 3330, Metabolito -4274, Metabolito - 5769, Metabolito - 7187, Metabolito - 8506 , Metabolito - 9855, teobromina, tiroxina, urato, valina, xantina));
Aunque las identidades de algunos de los compuestos biomarcadores no se conocen en este momento, las identidades no son necesarias para la identificación de los biomarcadores en muestras biológicas de sujetos, puesto que los compuestos "sin nombre" han sido suficientemente caracterizados mediante técnicas analíticas como para permitir dicha identificación. La caracterización analítica de todos estos compuestos "sin nombre" se enumera en los ejemplos. Dichos biomarcadores "sin nombre" se designan en la presente memoria usando la nomenclatura "metabolito" seguido de un número de metabolito específico.
Se puede utilizar cualquier número de biomarcadores en los métodos descritos en la presente memoria. Es decir, los métodos descritos pueden incluir la determinación del nivel o los niveles de un biomarcador, dos o más biomarcadores, tres o más biomarcadores, cuatro o más biomarcadores, cinco o más biomarcadores, seis o más biomarcadores, siete o más biomarcadores, ocho o más biomarcadores, nueve o más biomarcadores, diez o más biomarcadores, quince o más biomarcadores, etc., incluyendo una combinación de todos los biomarcadores en cada una o todas las Tablas 1, 2, 3, 4B, 5B, 6B, 8 , 9, 11, 12, 13, la Figura 1, la Figura 3, o cualquier fracción o combinación de los mismos. En otro aspecto, el número de biomarcadores para su uso en los métodos descritos incluye los niveles de aproximadamente treinta o menos biomarcadores, veinticinco o menos, veinte o menos, quince
o menos, diez o menos, nueve o menos, ocho o menos, siete o menos, seis o menos, cinco o menos biomarcadores. En otro aspecto, el número de biomarcadores para su uso en los métodos descritos incluyen los niveles de uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez, once, doce, trece, catorce, quince, veinte, veinticinco, o treinta biomarcadores.
Además, los métodos descritos en la presente memoria que utilizan los biomarcadores enumerados en las tablas se pueden utilizar combinados con medidas clínicas de diagnóstico de enfermedades del hígado graso. Las combinaciones con diagnósticos clínicos pueden facilitar los métodos descritos, o confirmar los resultados de los métodos descritos (por ejemplo, facilitar o confirmar el diagnóstico, verificar el progreso o regresión, y/o determinar la predisposición a enfermedades del hígado graso).
II. Diagnóstico de la esteatosis y/o la esteatohepatitis
La identificación de biomarcadores para la esteatosis permite el diagnóstico de (o ayuda en el diagnóstico de) la esteatosis en sujetos que presentan uno o más síntomas de disfunción hepática. Un método para diagnosticar (o ayudar a diagnosticar) si un sujeto tiene esteatosis comprende (1) analizar una muestra biológica de un sujeto para determinar el nivel o los niveles de uno o más biomarcadores de la esteatosis en la muestra y (2) comparar el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores en la muestra con niveles de referencia positivos para esteatosis y/o negativos para esteatosis de los uno o más biomarcadores en el fin de diagnosticar (o ayudar en el diagnóstico de) si el sujeto tiene esteatosis. Los uno o más biomarcadores que se utilizan se seleccionan de las tablas 2, 3, 4B, 5B, 8, 9, 11, 12, 13, la Figura 1, la Figura 3 y sus combinaciones. Cuando dicho método se utiliza para ayudar en el diagnóstico de la esteatosis, los resultados del método se pueden utilizar junto con otros métodos (o los resultados de los mismos) útiles en la determinación clínica de si un sujeto tiene esteatosis.
En una realización para el diagnóstico de (o para ayudar en el diagnóstico de) la esteatosis, el método comprende
(1) analizar una muestra biológica de un sujeto para determinar el nivel o los niveles de uno o más biomarcadores de la esteatosis en la muestra y (2) comparar el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores en la muestra con niveles de referencia positivos para esteatosis y/o negativos para esteatosis de los uno o más biomarcadores para diagnosticar (o ayudar en el diagnóstico de) si el sujeto tiene esteatosis, y los uno o más biomarcadores que se utilizan se seleccionan de las tablas 2, 3, 4B, 5B, 8, 9, 11, 12, 13, la Figura 1, la Figura 3 y sus combinaciones.
En una realización para el diagnóstico de (o para ayudar en el diagnóstico de) la esteatohepatitis, el método comprende (1) analizar una muestra biológica de un sujeto para determinar el nivel o los niveles de uno o más biomarcadores de la esteatohepatitis en la muestra y (2) comparar el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores en la muestra con niveles de referencia positivos para esteatohepatitiss y/o negativos para esteatohepatitis de los uno o más biomarcadores con el fin de diagnosticar (o ayudar en el diagnóstico de) si el sujeto tiene esteatohepatitis, y los uno o más biomarcadores que se utilizan se seleccionan de las Tablas 1, 3, 4B, 6B, 9, 10, 11, 12, 13, la Figura 2, la Figura 3 y sus combinaciones.
En una realización para el diagnóstico de (o para ayudar en el diagnóstico de) EHNA, el método comprende (1) analizar una muestra biológica de un sujeto para determinar el nivel o los niveles de uno o más biomarcadores de EHNA en la muestra y (2) comparar el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores en la muestra con niveles de referencia positivos para EHNA y/o negativos para EHNA de los uno o más biomarcadores con el fin de diagnosticar (o ayudar en el diagnóstico de) si el sujeto tiene EHNA, y los uno o más biomarcadores que se utilizan se seleccionan de las Tablas 1, 3, 4B, 6B, 9, 10, 11, 12, 13, Figura 2, Figura 3 y sus combinaciones.
Se puede utilizar cualquier método adecuado para analizar la muestra biológica con el fin de determinar el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores en la muestra. Los métodos adecuados incluyen cromatografía (por ejemplo, HPLC, cromatografía de gases, cromatografía líquida), espectrometría de masas (por ejemplo, MS, MS-MS), reacciones enzimáticas o bioquímicas, química clínica, análisis de inmunoabsorción ligado a enzima (ELISA), unión de anticuerpos, otras técnicas inmunoquímicas, y combinaciones de los mismos. Además, el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores se pueden medir indirectamente, por ejemplo, mediante el uso de un análisis que mide el nivel de un compuesto (o compuestos) que se corresponde con el nivel del biomarcador o los biomarcadores que se desea medir.
Los niveles de uno o más de los biomarcadores de las Tablas 1, 2, 3, 4B, 5B, 6B, 8, 9, 10, 11, 12, 13, la Figura 1, la Figura 2, la Figura 3 se pueden determinar en los métodos para diagnosticar y en los métodos para ayudar a diagnosticar si un sujeto tiene esteatosis o esteatohepatitis. Por ejemplo, el nivel o los niveles de un biomarcador, dos o más biomarcadores, tres o más biomarcadores, cuatro o más biomarcadores, cinco o más biomarcadores, seis o más biomarcadores, siete o más biomarcadores, ocho o más biomarcadores, nueve o más biomarcadores, diez o más biomarcadores, etc., incluyendo una combinación de todos los biomarcadores de las Tablas 1, 2, 3, 4B, 5B, 6B, 8, 9, 10, 11, 12, 13, la Figura 1, la Figura 2, la Figura 3 o cualquier fracción de los mismos, se pueden determinar y utilizar en dichos métodos. La determinación de los niveles de las combinaciones de biomarcadores puede permitir una mayor sensibilidad y especificidad en el diagnóstico de la esteatosis y ayudar en el diagnóstico de la esteatosis, y puede permitir una mejor diferenciación de la esteatosis de otros trastornos del hígado (por ejemplo, fibrosis, cirrosis, cáncer de hígado, etc.) que pueden tener biomarcadores similares o coincidentes con los de la esteatosis (en comparación con un sujeto que no tiene esteatosis). Por ejemplo, las proporciones de los niveles de ciertos biomarcadores (y compuestos no biomarcadores) en las muestras biológicas pueden permitir una mayor sensibilidad y especificidad en el diagnóstico de la esteatosis y ayudar en el diagnóstico de la esteatosis y pueden permitir una mejor diferenciación de esteatosis de otros trastornos hepáticos que pueden tener biomarcadores similares o coincidentes con los de la esteatosis (en comparación con un sujeto que no tiene esteatosis).
También se pueden utilizar uno o más biomarcadores que son específicos para diagnosticar la esteatosis o esteatohepatitis (o ayudar a diagnosticar la esteatosis o la esteatohepatitis) en un cierto tipo de muestra (por ejemplo, muestra de tejido de hígado, biopsia de hígado, muestra de orina, o muestra de plasma sanguíneo). Por ejemplo, cuando la muestra biológica es plasma, se pueden utilizar uno o más biomarcadores enumerados en las Tablas 2, 4B, 5B, 8, 11, 12, 13, la Figura 1, la Figura 3 para diagnosticar (o ayudar a diagnosticar) si un sujeto tiene esteatosis.
Después de que se han determinado el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores en la muestra, se comparan el nivel o los niveles con niveles de referencia positivos para esteatosis y/o negativos para esteatosis (o niveles de referencia positivos para esteatohepatitis y/o negativos para esteatohepatitis) para ayudar en el diagnóstico o para diagnosticar si el sujeto tiene esteatosis (o esteatohepatitis). Los niveles de los uno o más biomarcadores en una muestra que coinciden con los niveles de referencia positivos para esteatosis (por ejemplo, niveles que son los mismos que los niveles de referencia, sustancialmente los mismos que los niveles de referencia, por encima y/o por debajo del mínimo y/o máximo de los niveles de referencia, y/o dentro del intervalo de los niveles de referencia) son indicativos de un diagnóstico de esteatosis en el sujeto. Los niveles de los uno o más biomarcadores en una muestra que coinciden con niveles de referencia negativos para esteatosis (por ejemplo, niveles que son los mismos que los niveles de referencia, sustancialmente los mismos que los niveles de referencia, por encima y/o por debajo del mínimo y/o máximo de los niveles de referencia, y/o dentro del intervalo de los niveles de referencia) son indicativos de un diagnóstico de no esteatosis en el sujeto. Además, los niveles de los uno o más biomarcadores que están diferencialmente presentes (especialmente en un nivel que es estadísticamente significativo) en la muestra, en comparación con los niveles de referencia negativos para esteatosis son indicativos de un diagnóstico de esteatosis en el sujeto. Los niveles de los uno o más biomarcadores que están diferencialmente presentes (especialmente en un nivel que es estadísticamente significativo) en la muestra, en comparación con los niveles de referencia positivos para esteatosis son indicativos de un diagnóstico de no esteatosis en el sujeto.
El nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores se pueden comparar con los niveles de referencia positivos para esteatosis y/o negativos para esteatosis y/o positivos para esteatohepatitis y/o negativos para esteatohepatitis utilizando diversas técnicas, incluyendo una comparación simple (por ejemplo, una comparación manual) del nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores en la muestra biológica con niveles de referencia positivos para esteatosis y/o negativos para esteatosis y/o positivos para esteatohepatitis y/o negativos para esteatohepatitis. El nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores en la muestra biológica se pueden comparar también con los niveles de referencia positivos para esteatosis y/o negativos para esteatosis y/o positivos para esteatohepatitis y/o negativos para esteatohepatitis utilizando uno o más análisis estadísticos (por ejemplo, prueba t, prueba T de Welch, prueba de la suma de rangos de Wilcoxon, ANOVA, partición recursiva, bosque aleatorio).
Además, las muestras biológicas se pueden analizar para determinar el nivel o los niveles de uno o más compuestos no biomarcadores. El nivel o los niveles de tales compuestos no biomarcadores también pueden permitir la diferenciación de la esteatosis de otros trastornos del hígado que pueden tener biomarcadores similares o coincidentes con los de la esteatosis y/o la esteatohepatitis (en comparación con un sujeto que no tiene un trastorno del hígado). Por ejemplo, un compuesto no biomarcador conocido presente en muestras biológicas de sujetos que tienen esteatosis y sujetos no tienen esteatosis podría ser controlado para verificar un diagnóstico de esteatosis en comparación con un diagnóstico de otro trastorno del hígado cuando las muestras biológicas de sujetos que tienen el trastorno del hígado no tienen el compuesto no biomarcador.
Los métodos para diagnosticar (o para ayudar a diagnosticar) si un sujeto tiene esteatosis también se pueden llevar a cabo específicamente para diagnosticar (o ayudar diagnosticar) si un sujeto tiene EHGNA y/o esteatohepatitis (por ejemplo, EHNA). Tales métodos comprenden (1) analizar una muestra biológica de un sujeto para determinar el nivel
o los niveles de uno o más biomarcadores de EHGNA (y/o EHNA) en la muestra y (2) comparar el nivel o los niveles de los una o más biomarcadores en la muestra con niveles de referencia positivos para EHGNA y/o negativos para EHGNA (o niveles de referencia positivos para EHNA y/o negativos para EHNA) con el fin de diagnosticar (o ayudar en el diagnóstico de) si el sujeto tiene EHGNA (o EHNA). Los biomarcadores específicos para EHGNA se enumeran en las Tablas 2, 4B, 5B, 8, 11, 12, 13, la Figura 1, la Figura 3 y biomarcadores específicos para la EHNA se enumeran en las Tablas 1, 4B, 6B, 10,11,12,13, la Figura 2, la Figura 3.
III. Métodos para distinguir EHGNA de EHNA
La identificación de biomarcadores para distinguir EHGNA de EHNA permite distinguir EHGNA y EHNA en pacientes. Un método para distinguir EHGNA de EHNA en un sujeto que tiene esteatosis comprende (1) analizar una muestra biológica de un sujeto para determinar el nivel o los niveles en la muestra de uno o más biomarcadores de EHGNA que la distinguen de EHNA y/o uno o más biomarcadores de EHNA que la distinguen de EHGNA, y (2) comparar el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores en la muestra con niveles de referencia positivos para EHGNA que la distinguen de EHNA y/o niveles de referencia positivos para EHNA que la distinguen de EHGNA de los uno o más biomarcadores para determinar si el sujeto tiene EHGNA o EHNA. Los uno o más biomarcadores que se pueden utilizar incluyen aquellos biomarcadores seleccionados de las Tablas 1, 2, 3, 4B, 5B, 6B, 8, 9, 10, 11, 12, 13, la Figura 1, la Figura 2, la Figura 3 y sus combinaciones .
Se puede utilizar cualquier método adecuado para analizar la muestra biológica con el fin de determinar el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores en la muestra. Los métodos adecuados incluyen cromatografía (por ejemplo, HPLC, cromatografía de gases, cromatografía líquida), espectrometría de masas (por ejemplo, MS, MS-MS), reacciones enzimáticas o bioquímicas, química clínica, análisis de inmunoabsorción ligado a enzima (ELISA), unión de anticuerpos, otras técnicas inmunoquímica, y combinaciones de los mismos. Adicionalmente, el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores se pueden medir indirectamente, por ejemplo, mediante el uso de un análisis que mide el nivel de un compuesto (o compuestos) que se corresponde con el nivel del biomarcador o los biomarcadores que se desea a medir.
Los niveles de uno o más de los biomarcadores de las Tablas 1, 2, 3, 4B, 5B, 6B, 8, 9, 10, 11, 12, 13, la Figura 1, la Figura 2, la Figura 3 se pueden determinar en los métodos para diagnosticar y en los métodos para ayudar a diagnosticar si un sujeto tiene esteatohepatitis. Por ejemplo, el nivel o los niveles de un biomarcador, dos o más biomarcadores, tres o más biomarcadores, cuatro o más biomarcadores, cinco o más biomarcadores, seis o más biomarcadores, siete o más biomarcadores, ocho o más biomarcadores, nueve o más biomarcadores, diez o más biomarcadores, etc., incluyendo una combinación de todos los biomarcadores en las Tablas 1, 2, 3, 4B, 5B, 6B, 8, 9, 10, 11, 12, 13, la Figura 1, la Figura 2, la Figura 3 o cualquier fracción de la misma, se puede determinar y utilizar en dichos métodos. La determinación de los niveles de las combinaciones de los biomarcadores puede permitir una mayor sensibilidad y especificidad para distinguir entre EHGNA y EHNA.
También se pueden utilizar uno o más biomarcadores que son específicos para distinguir entre EHGNA y EHNA en un cierto tipo de muestra (por ejemplo, muestra de tejido hepático, muestra de orina, o muestra de plasma sanguíneo). Por ejemplo, cuando la muestra biológica es plasma sanguíneo, se pueden utilizar uno o más biomarcadores enumerados en las Tablas 1, 2, 3, 4B, 5B, 6B, 8, 9, 10, 11, 12, 13, la Figura 1, la Figura 2, la Figura
3.
Una vez que se han determinado el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores en la muestra, se comparan el nivel o los niveles con niveles de referencia positivos para EHGNA que distinguen de niveles de referencia negativos para EHNA y/o positivos para EHNA que la distinguen de EHGNA de los uno o más biomarcadores con el fin de determinar si el sujeto tiene EHGNA o EHNA. Los niveles de los uno o más biomarcadores en una muestra que coinciden con los niveles de referencia positivos para EHGNA que la distinguen de EHNA (por ejemplo, niveles que son los mismos que los niveles de referencia, sustancialmente los mismos que los niveles de referencia, por encima y/o por debajo del mínimo y/o máximo de los niveles de referencia, y/o dentro del intervalo de los niveles de referencia) son indicativos de EHGNA en el sujeto. Los niveles de los uno o más biomarcadores en una muestra que coinciden con los niveles de referencia positivos para EHNA que la distinguen de EHGNA (por ejemplo, niveles que son los mismos que los niveles de referencia, sustancialmente los mismos que los niveles de referencia, por encima y/o por debajo del mínimo y/o máximo de los niveles de referencia, y/o dentro del intervalo de los niveles de referencia) son indicativos de EHNA en el sujeto. Si el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores son más similares a los niveles de referencia positivos para EHGNA que la distinguen de EHNA (o menos similares a los niveles de referencia positivos para EHNA), en ese caso los resultados son indicativos de EHGNA en el sujeto. Si el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores son más similares a los niveles de referencia positivos para EHNA que la distinguen de EHGNA (o menos similares a los niveles de referencia positivos para EHGNA), en ese caso los resultados son indicativos de la EHNA en el sujeto.
El nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores se pueden comparar con niveles de referencia positivos para EHGNA que la distinguen de EHNA y/o niveles de referencia positivos para EHNA que la distinguen de EHGNA utilizando diversas técnicas, incluyendo una comparación simple (por ejemplo, una comparación manual) del nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores en la muestra biológica con los niveles de referencia positivos para EHGNA y/o positivo para EHNA. El nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores en la muestra biológica también se pueden comparar con los niveles de referencia positivos para EHGNA que la distinguen de EHNA y/o niveles de referencia positivos para EHNA que la distinguen de EHGNA utilizando uno o más análisis estadísticos (por ejemplo, prueba t, prueba T de Welch, prueba de suma de rangos de Wilcoxon, ANOVA, partición recursiva, bosque aleatorio).
Además, las muestras biológicas se pueden analizados para determinar el nivel o los niveles de uno o más compuestos no biomarcadores. El nivel o los niveles de tales compuestos no biomarcadores también pueden permitir la diferenciación entre EHGNA y EHNA.
III. Métodos para determinar la predisposición a la esteatohepatitis y/o esteatosis
La identificación de biomarcadores para la esteatosis y la esteatohepatitis también permite la determinación de si un sujeto que no tiene síntomas de esteatohepatitis o esteatosis es predispuesto a desarrollar esteatohepatitis o esteatosis. Por ejemplo, un método para determinar si un sujeto que no tiene síntomas de esteatohepatitis está predispuesto a desarrollar esteatohepatitis comprende (1) analizar una muestra biológica de un sujeto para determinar el nivel o los niveles de uno o más biomarcadores enumerados en las Tablas 1, 3, 4B, 6B, 9, 10, 11, 12, 13, la Figura 2, la Figura 3 en la muestra y (2) comparar el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores en la muestra con niveles de referencia positivos para esteatohepatitis y/o negativos para esteatohepatitis de los uno o más biomarcadores, con el fin de determinar si el sujeto está predispuesto a desarrollar esteatohepatitis. Los resultados del método se pueden utilizar junto con otros métodos (o sus resultados) útiles en la determinación clínica de si un sujeto está predispuesto a desarrollar esteatohepatitis.
Como se ha descrito anteriormente en relación con los métodos de diagnóstico (o para ayudar en el diagnóstico de) la esteatohepatitis, se puede utilizar cualquier método adecuado para analizar la muestra biológica con el fin de determinar el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores en la muestra.
Al igual que con los métodos de diagnóstico (o para ayudar en el diagnóstico de) la esteatohepatitis o la esteatosis descritos anteriormente, el nivel o los niveles de un biomarcador, dos o más biomarcadores, tres o más biomarcadores, cuatro o más biomarcadores, cinco o más biomarcadores, seis o más biomarcadores, siete o más biomarcadores, ocho o más biomarcadores, nueve o más biomarcadores, diez o más biomarcadores, etc., incluyendo una combinación de todos los biomarcadores, por ejemplo, en las Tablas 1, 3, 4B, 6B, 9 , 10, 11, 12, 13, la Figura 2, la Figura 3 o cualquier fracción de la misma, se puede determinar y utilizar en los métodos para determinar si un sujeto que no tiene síntomas de esteatohepatitis está predispuesto a desarrollar esteatohepatitis.
Después de que se han determinado el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores en la muestra, se comparan el nivel o los niveles con, por ejemplo, los niveles de referencia positivas para esteatohepatitis y/o negativos para esteatohepatitis con el fin de pronosticar si el sujeto está predispuesto a desarrollar esteatohepatitis. Los niveles de los uno o más biomarcadores en una muestra que coinciden con los niveles de referencia positivos para esteatohepatitis (por ejemplo, niveles que son los mismos que los niveles de referencia, sustancialmente los misma que los niveles de referencia, por encima y/o por debajo del mínimo y/o máximo de los niveles de referencia, y/o dentro del intervalo de los niveles de referencia) son indicativos de que el sujeto está predispuesto a desarrollar esteatohepatitis. Los niveles de los uno o más biomarcadores en una muestra que coinciden con los niveles de referencia negativos para esteatohepatitis (por ejemplo, niveles que son los mismos que los niveles de referencia, sustancialmente los mismos que los niveles de referencia, por encima y/o por debajo del mínimo y/o máximo de los niveles de referencia, y/o dentro del intervalo de los niveles de referencia) son indicativos de que el sujeto no está predispuestos a desarrollar esteatohepatitis. Además, los niveles de los uno o más biomarcadores que están diferencialmente presentes (especialmente a un nivel que es estadísticamente significativo) en la muestra, en comparación con niveles de referencia negativos para esteatohepatitis son indicativos de que el sujeto está predispuesto a desarrollar esteatohepatitis. Los niveles de los uno o más biomarcadores que están diferencialmente presentes (especialmente a un nivel que es estadísticamente significativo) en la muestra, en comparación con los niveles de referencia positivos para la esteatohepatitis son indicativos de que el sujeto no está predispuesto a desarrollar esteatohepatitis.
Además, también puede ser posible determinar niveles de referencia específicos para evaluar si un sujeto que no tiene esteatohepatitis está predispuesto o no a desarrollar esteatohepatitis. Por ejemplo, puede ser posible determinar los niveles de referencia de los biomarcadores para evaluar diferentes grados de riesgo (por ejemplo, bajo, medio, alto) en un sujeto para el desarrollo de la esteatohepatitis. Estos niveles de referencia se podrían utilizar para la comparación con los niveles de los uno o más biomarcadores en una muestra biológica de un sujeto.
Al igual que con los métodos descritos anteriormente, el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores pueden ser comparados con los niveles de referencia positivos para esteatohepatitiss y/o negativos para esteatohepatitis utilizando diversas técnicas, incluyendo una comparación simple, uno o más análisis estadísticos, y combinaciones de los mismos.
Al igual que con los métodos para diagnosticar (o para ayudar a diagnosticar) si un sujeto tiene esteatohepatitis y/o esteatosis, los métodos para determinar si un sujeto que no tiene síntomas de esteatohepatitis o esteatosis está predispuesto a desarrollar esteatosis o esteatohepatitis pueden comprender adicionalmente el análisis de la muestra biológica para determinar el nivel o los niveles de uno o más compuestos no biomarcadores.
Los métodos para determinar si un sujeto que no tiene síntomas de esteatohepatitis está predispuesto a desarrollar esteatohepatitis también se pueden llevar a cabo específicamente para determinar si un sujeto que no tiene síntomas de esteatohepatitis está predispuesto a desarrollar EHGNA y/o EHNA. Los biomarcadores específicos para EHGNA se enumeran en las Tablas 2, 4B, 5B, 8, 11, 12, 13, la Figura 1, la Figura 3 y los biomarcadores específicos para EHNA se enumeran en las Tablas 1, 4B, 6B, 10, 11, 12, 13, la Figura 2, la Figura 3.
Además, los métodos para determinar si un sujeto que tiene EHGNA es predispuesto a desarrollar EHNA pueden llevarse a cabo utilizando uno o más biomarcadores seleccionados de las Tablas 1, 4B, 6B, 10,11,12,13, la Figura 2, la Figura 3.
IV. Métodos para verificar el progreso/regresión de la esteatosis y/o la esteatohepatitis
La identificación de biomarcadores para la esteatosis y la esteatohepatitis también permite controlar el progreso/regresión de la esteatosis y/o la esteatohepatitis en un sujeto. Por ejemplo, un método para verificar el progreso/regresión de la esteatosis en un sujeto comprende (1) analizar una primera muestra biológica de un sujeto para determinar el nivel o los niveles de uno o más biomarcadores para la esteatosis seleccionados de las Tablas 2, 3, 4B , 6B, 8, 9, 11, 12, 13, la Figura 1, la Figura 3, la primera muestra obtenida del sujeto en un primer momento, (2) analizar una segunda muestra biológica de un sujeto para determinar el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores, la segunda muestra obtenida del sujeto en un segundo momento, y (3) comparar el nivel o los niveles de uno o más biomarcadores en la primera muestra con el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores en la segunda muestra con el fin de verificar el progreso/regresión de la esteatosis en el sujeto. Los resultados del método son indicativos del curso de la esteatosis (es decir, el progreso o la regresión, si hubiera cualquier cambio) en el sujeto.
El cambio (si lo hubiera) en el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores a lo largo del tiempo puede ser indicativo de progreso o regresión de la esteatosis en el sujeto. Con el fin de caracterizar el curso de la esteatosis en el sujeto, se pueden comparar el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores en la primera muestra, el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores en la segunda muestra, y/o los resultados de la comparación de los niveles de los biomarcadores en la primera y segunda muestras con los niveles de referencia positivos para esteatosis, negativos para esteatosis, positivos para EHGNA, negativos para EHGNA, positivos para esteatosis de alto grado, y/o negativos para EHNA como así como niveles de referencia positivos para EHGNA que la distinguen de EHNA y/o niveles de referencia positivos para EHNA que la distinguen de EHGNA. Si las comparaciones indican que el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores se incrementan o disminuyen con el tiempo (por ejemplo, en la segunda muestra en comparación con la primera muestra) para volverse más similares a los niveles de referencia positivos para esteatosis (o menos similares a los niveles de referencia negativos para esteatosis), a los niveles de referencia de EHNA, o, cuando el sujeto tiene inicialmente EHGNA, a los niveles de referencia positivos para EHNA que la distinguen de EHGNA, en ese caso los resultados son indicativos de progreso de la esteatosis. Si las comparaciones indican que el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores se incrementan o disminuyen con el tiempo para volverse más similares a los niveles de referencia negativos para esteatosis (o menos similares a los niveles de referencia positivos para esteatosis), o, cuando el sujeto tiene inicialmente EHNA, a los niveles de referencia EHGNA y/o a los niveles de referencia positivos para EHGNA que la distinguen de EHNA, en ese caso los resultados son indicativos de regresión esteatosis.
Al igual que con los otros métodos descritos en la presente memoria, las comparaciones efectuadas en los métodos de verificación del progreso/regresión de la esteatosis en un sujeto se pueden llevar a cabo utilizando diversas técnicas, incluyendo comparaciones simples, uno o más análisis estadísticos, y combinaciones de los mismos.
Los resultados del método se puede usar junto con otros métodos (o los resultados de los mismos) útiles en la verificación clínica del progresión/regresión de la esteatosis en un sujeto.
Como se ha descrito anteriormente en relación con los métodos para diagnosticar (o para ayudar a diagnosticar) la esteatosis, se puede utilizar cualquier método adecuado para analizar las muestras biológicas con el fin de determinar el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores en las muestras. Además, el nivel o los niveles de uno o más biomarcadores, incluyendo una combinación de todos los biomarcadores de las Tablas 2, 4B, 5B, 8, 11, 12, 13, la Figura 1, la Figura 3, o cualquier fracción de la misma, se puede determinar y utilizar en los métodos de verificación del progreso/regresión de la esteatosis en un sujeto.
Tales métodos se podrían llevar a cabo para controlar el curso de la esteatosis en sujetos que tienen esteatosis o se podrían utilizar en sujetos que no tienen esteatosis (por ejemplo, sujetos que se sospecha que están predispuestos a desarrollar esteatosis) con el fin de verificar los niveles de predisposición a la esteatosis.
Tales métodos se podrían llevar a cabo para controlar el curso de la esteatohepatitis en sujetos que tienen esteatohepatitis o se podrían utilizar en sujetos que no tienen esteatohepatitis (por ejemplo, sujetos que se sospecha que están predispuestos a desarrollar esteatohepatitis) con el fin de verificar los niveles de predisposición a la esteatohepatitis. El nivel o los niveles de uno o más biomarcadores, incluyendo una combinación de todos los biomarcadores de las Tablas 1, 3, 4B, 6B, 9, 10, 11, 12, 13, la Figura 2 y/o la Figura 3, o cualquier fracción de la misma, se pueden determinar y utilizar en los métodos de verificación del progreso/regresión de la esteatohepatitis en un sujeto.
V. Métodos para evaluar la eficacia de las composiciones para el tratamiento de la esteatohepatitis y/o la esteatosis
La identificación de biomarcadores para esteatohepatitis y la esteatosis también permite la evaluación de la eficacia de una composición para el tratamiento de la esteatohepatitis y/o la esteatosis, así como la evaluación de la eficacia relativa de dos o más composiciones para el tratamiento de la esteatohepatitis y/o la esteatosis. Tales evaluaciones se pueden utilizar, por ejemplo, en estudios de eficacia así como en la selección de composiciones de partida para el tratamiento de la esteatohepatitis o esteatosis.
Por ejemplo, un método para evaluar la eficacia de una composición para el tratamiento de la esteatohepatitis comprende (1) analizar, a partir de un sujeto que tiene esteatohepatitis y tratado actualmente o previamente con una composición, una muestra biológica para determinar el nivel o los niveles de uno o más biomarcadores seleccionados de las Tablas 1, 3, 4B, 6B, 9, 10, 11, 12, 13, la Figura 2 y/o la Figura 3, y (2) comparar el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores en la muestra con (a) el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores en una muestra biológica tomada previamente del sujeto, en donde la muestra biológica tomada previamente se obtuvo del sujeto antes de ser tratada con la composición, (b) niveles de referencia positivos para esteatohepatitis (incluyendo niveles de referencia positivos para EHNA y/o positivos para EHGNA) de los uno o más biomarcadores,
(c)
niveles de referencia negativas para esteatohepatitis (incluyendo niveles de referencia negativos para EHNA y/o negativos para EHGNA) de los uno o más biomarcadores, (d) niveles de referencia positivos para EHNA que la distinguen de EHGNA, y/o (e) niveles de referencia positivos para EHNA que la distinguen de EHGNA. Los resultados de la comparación son indicativos de la eficacia de la composición para el tratamiento de la esteatohepatitis.
Por lo tanto, con el fin de caracterizar la eficacia de la composición para el tratamiento de la esteatohepatitis, el nivel
o los niveles de los uno o más biomarcadores en la muestra biológica se comparan con (1) los niveles de referencia positivos para esteatohepatitis, (2) los niveles de referencia negativos para esteatohepatitis, (3) los niveles previos
de los uno o más biomarcadores en el sujeto antes del tratamiento con la composición, (4) los niveles de referencia positivos para EHNA que la distinguen de EHGNA, y/o (5) los niveles de referencia positivos para EHGNA que la distinguen de EHNA.
Al comparar el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores en la muestra biológica (a partir de un sujeto que tiene esteatohepatitis y tratado actualmente o previamente con una composición) con los niveles de referencia positivos para esteatohepatitis y/o los niveles de referencia negativas para esteatohepatitis, el nivel o los niveles en la muestra que coinciden con los niveles de referencia negativos para esteatohepatitis (por ejemplo, niveles que son los mismos que los niveles de referencia, sustancialmente los mismos que los niveles de referencia, por encima y/o por debajo del mínimo y/o máximo de los niveles de referencia, y/o dentro del intervalo de los niveles de referencia) son indicativos de que la composición tiene eficacia para el tratamiento de la esteatohepatitis. Los niveles de los uno
o más biomarcadores en la muestra que coinciden con los niveles de referencia positivos para esteatohepatitis (por ejemplo, niveles que son los mismos que los niveles de referencia, sustancialmente los mismos que los niveles de referencia, por encima y/o por debajo del mínimo y/o máximo de los niveles de referencia, y/o dentro del intervalo de los niveles de referencia) son indicativos de que la composición no tiene eficacia para el tratamiento de la esteatohepatitis. Las comparaciones también pueden indicar grados de eficacia para el tratamiento de la esteatohepatitis basándose en el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores.
Al comparar el nivel o los niveles de uno o más biomarcadores en la muestra biológica (de un sujeto que tiene EHNA y tratado actualmente o previamente con una composición) los niveles de referencia positivos para EHNA que la distinguen de EHGNA y/o los niveles de referencia positivos para EHGNA que la distinguen de EHNA, el nivel o los niveles en la muestra que coinciden con los niveles de referencia positivos para EHNA que la distinguen de EHGNA (por ejemplo, niveles que son los mismos que los niveles de referencia, sustancialmente los mismos que los niveles de referencia, por encima y/o por debajo del mínimo y/o máximo de los niveles de referencia, y/o dentro del intervalo de los niveles de referencia) son indicativos de que la composición tiene eficacia para el tratamiento de la esteatohepatitis. Los niveles de los uno o más biomarcadores en la muestra que coinciden con los niveles de referencia positivos para EHNA que la distinguen de EHGNA (por ejemplo, niveles que son los mismos que los niveles de referencia, sustancialmente los mismos que los niveles de referencia, por encima y/o por debajo del mínimo y/o máximo de los niveles de referencia, y/o dentro del intervalo de los niveles de referencia) son indicativos de que la composición no tiene eficacia para el tratamiento de la esteatohepatitis.
Cuando el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores en la muestra biológica (de un sujeto que tiene esteatohepatitis y tratado actualmente o previamente con una composición) se comparan con el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores en una muestra biológica tomada previamente del sujeto antes del tratamiento con la composición, cualquier cambio en el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores es indicativo de la eficacia de la composición para el tratamiento de la esteatohepatitis. Es decir, si las comparaciones indican que el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores han aumentado o disminuido después del tratamiento con la composición para volverse más similares a los niveles de referencia negativos para esteatohepatitis (o menos similares a los niveles de referencia positivos para esteatohepatitis) o, cuando el sujeto inicialmente tiene EHGNA, el nivel o los niveles han aumentado o disminuido para volverse más similares a los niveles de referencia positivos para EHNA que la distinguen de EHGNA (o menos similares a los niveles de referencia positivos para EHGNA que la distinguen de EHNA), en ese caso, los resultados son indicativos de que la composición tiene eficacia para el tratamiento de la esteatohepatitis. Si las comparaciones indican que el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores no han aumentado o disminuido después del tratamiento con la composición para volverse más similares a los niveles de referencia negativos para esteatohepatitis (o menos similares a los niveles de referencia positivos para esteatohepatitis) o, cuando el sujeto tiene inicialmente EHNA, el nivel o los niveles no han aumentado o disminuido para ser más similares a los niveles de referencia positivos para EHGNA que la distinguen de EHNA (o menos similares a los niveles de referencia positivos para EHNA que la distinguen de EHGNA), en ese caso los resultados son indicativos de que la composición no tiene eficacia para el tratamiento de la esteatohepatitis. Las comparaciones también pueden indicar grados de eficacia para el tratamiento de la esteatohepatitis basándose en la cantidad de cambios observados en el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores después del tratamiento. Con el fin de ayudar a caracterizar dicha comparación, los cambios en el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores, el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores antes del tratamiento, y/o el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores en el sujeto tratado actualmente o previamente con la composición se pueden comparar con los niveles de referencia positivos para esteatohepatitis (incluyendo los niveles de referencia de bajo grado y positivos para NAHS), niveles de referencia negativos para esteatohepatitis (incluyendo niveles de referencia de bajo grado y negativos para EHNA), niveles de referencia positivos para EHGNA que la distinguen de EHNA, y/o niveles de referencia positivos para EHNA que la distinguen de EHGNA.
Otro método para evaluar la eficacia de una composición en el tratamiento de la esteatohepatitis comprende (1) analizar una primera muestra biológica de un sujeto para determinar el nivel o los niveles de uno o más biomarcadores seleccionados de las Tablas 1, 3, 4B, 6B, 9, 10 , 11, 12, 13, la Figura 2 y/o la Figura 3, la primera muestra obtenida del sujeto en un primer momento, (2) administrar la composición al sujeto, (3) analizar una segunda muestra biológica de un sujeto para determinar el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores, la segunda muestra obtenida del sujeto en un segundo momento después de la administración de la composición, y (4) comparar el nivel o los niveles de uno o más biomarcadores en la primera muestra con el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores en la segunda muestra con el fin de evaluar la eficacia de la composición para el tratamiento de la esteatohepatitis. Como se ha indicado anteriormente, si la comparación de las muestras indica que el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores han aumentado o disminuido después de la administración de la composición para volverse más similares a los niveles de referencia negativos para esteatohepatitis (o menos similares a los niveles de referencia positivos para esteatohepatitis) o, cuando el sujeto tiene inicialmente EHNA, si el nivel o los niveles han aumentado o disminuido para ser más similares a los niveles de referencia positivos para EHGNA que la distinguen de EHNA (o menos similares a los niveles de referencia positivos para EHNA que la distinguen de EHGNA), en ese caso los resultados son indicativos de la composición que tiene eficacia para el tratamiento de la esteatohepatitis. Si las comparaciones indican que el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores no han aumentado o disminuido después del tratamiento con la composición para volverse más similares a los niveles de referencia negativos para esteatohepatitis (o menos similares a los niveles de referencia positivos para esteatohepatitis) o, cuando el sujeto tiene inicialmente EHNA, el nivel o los niveles no han aumentado
o disminuido para volverse más similares a los niveles de referencia positivos para EHGNA que la distinguen de EHNA (o menos similares a los niveles de referencia positivos para EHNA que la distinguen de EHGNA), en ese caso los resultados son indicativos de que la composición no tiene eficacia para el tratamiento de la esteatohepatitis.
La comparación también puede indicar un grado de eficacia para el tratamiento de la esteatohepatitis basado en la cantidad de los cambios observados en el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores después de la administración de la composición como se discutió anteriormente.
Un método para evaluar la eficacia relativa de dos o más composiciones para el tratamiento de la esteatohepatitis comprende (1) analizar, a partir de un primer sujeto que tiene esteatohepatitis y tratado actualmente o previamente con una primera composición, una primera muestra biológica para determinar el nivel o los niveles de uno o más biomarcadores seleccionados de las Tablas 1, 3, 4B, 6B, 9, 10, 11, 12, 13, la Figura 2 y/o la Figura 3, (2) analizar, a partir de un segundo sujeto que tiene esteatohepatitis y tratado actualmente o previamente con una segunda composición, una segunda muestra biológica para determinar el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores, y (3) comparar el nivel o los niveles de uno o más biomarcadores en la primera muestra con el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores en la muestra de segundo con el fin de evaluar la eficacia relativa de la primera y segunda composiciones para el tratamiento de la esteatohepatitis. Los resultados son indicativos de la eficacia relativa de las dos composiciones, y los resultados (o los niveles de los uno o más biomarcadores en la primera muestra y/o el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores en la segunda muestra) se pueden comparar con los niveles de referencia positivos para esteatohepatitis (incluyendo niveles de referencia de bajo grado y positivos para EHNA), negativas niveles de referencia negativos para esteatohepatitis (incluyendo niveles de referencia de bajo grado y negativos para EHNA), niveles de referencia positivos para EHGNA que la distinguen de EHNA, y/o niveles de referencia positivos para EHNA que la distinguen de EHGNA para ayudar a caracterizar la eficacia relativa.
Cada uno de los métodos de evaluación de la eficacia puede llevarse a cabo en uno o más sujetos o uno o más grupos de sujetos (por ejemplo, siendo tratado un primer grupo con una primera composición y siendo tratado un segundo grupo con una segunda composición).
Como con los otros métodos descritos en la presente memoria, las comparaciones efectuadas en los métodos de evaluación de la eficacia (o eficacia relativa) de las composiciones para el tratamiento de la esteatohepatitis y/o esteatosis se pueden llevar a cabo mediante diversas técnicas, incluyendo las comparaciones simples, uno o más análisis estadísticos, y combinaciones de los mismos. Se puede utilizar cualquier método adecuado para analizar las muestras biológicas con el fin de determinar el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores en las muestras. Además, el nivel o los niveles de uno o más biomarcadores, incluyendo una combinación de todos los biomarcadores de las Tablas 1, 3, 4B, 6B, 9, 10, 11, 12, 13, la Figura 2 y/o la Figura 3 o cualquier fracción de la misma, puede determinarse y utilizarse en métodos de evaluación de la eficacia (o eficacia relativa) de las composiciones para el tratamiento de la esteatohepatitis.
Finalmente, los métodos de evaluación de la eficacia (o eficacia relativa) de una o más composiciones para el tratamiento de la esteatohepatitis pueden comprender adicionalmente el análisis de la muestra biológica para determinar el nivel o los niveles de uno o más compuestos no biomarcadores. Los compuestos no biomarcadores se pueden comparar después con los niveles de referencia de compuestos de biomarcadores no para sujetos que tienen (o no tienen) esteatohepatitis.
VI. Métodos de escrutinio de una composición para determinar su actividad en la modulación de biomarcadores asociados con esteatohepatitis y/o esteatosis
La identificación de biomarcadores para esteatohepatitis y esteatosis también permite el escrutinio de composiciones para determinar su actividad en la modulación de biomarcadores asociados con esteatohepatitis y/o esteatosis, que pueden ser útiles en el tratamiento de la esteatohepatitis y/o la esteatosis. Por ejemplo, los métodos de escrutinio de las composiciones útiles para el tratamiento de la esteatohepatitis comprenden analizar composiciones de ensayo para determinar su actividad en la modulación de los niveles de uno o más biomarcadores de las Tablas 1, 3, 4B, 6B, 9, 10, 11, 12, 13, la Figura 2 y/o la Figura 3. Tales análisis de escrutinio se pueden realizar in vitro y/o in vivo, y pueden estar en cualquier forma conocida en la técnica útil para analizar la modulación de tales biomarcadores en presencia de una composición de ensayo tal como, por ejemplo, análisis de cultivos celulares, análisis de cultivo de órganos, y análisis in vivo (por ejemplo, análisis que implican modelos animales).
En una realización, un método para escrutar una composición para determinar su actividad en la modulación de uno
o más biomarcadores de la esteatohepatitis comprende (1) poner en contacto una o más células con una composición, (2) analizar al menos una porción de las una o más células o una muestra biológica asociada con las células para determinar el nivel o los niveles de uno o más biomarcadores de la esteatohepatitis seleccionados de las Tablas 1, 3, 4B, 6B, 9, 10, 11, 12, 13, la Figura 2 y/o la Figura 3; y (3) comparar el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores con niveles patrón predeterminados para los uno o más biomarcadores para determinar si la composición modula el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores. Como se ha comentado anteriormente, las células se pueden poner en contacto con la composición in vitro y/o in vivo. Los niveles patrón predeterminados para los uno o más biomarcadores pueden ser los niveles de los uno o más biomarcadores en las una o más células en ausencia de la composición. Los niveles patrón predeterminados para los uno o más biomarcadores también pueden ser el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores en células de control que no están en contacto con la composición.
Además, los métodos pueden comprender adicionalmente el análisis de al menos una porción de las una o más células o una muestra biológica asociada con las células para determinar el nivel o los niveles de uno o más compuestos no biomarcadores de la esteatohepatitis y/o la esteatosis. Los niveles de los compuestos no biomarcadores se pueden comparar después con niveles patrón predeterminados de los uno o más compuestos no biomarcadores.
Se puede utilizar cualquier método adecuado para analizar al menos una porción de las una o más células o una muestra biológica asociada a las células con el fin de determinar el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores (o niveles de compuestos no biomarcadores). Los métodos adecuados incluyen cromatografía (por ejemplo, HPLC, cromatografía de gases, cromatografía líquida), espectrometría de masas (por ejemplo, MS, MS-MS), reacciones enzimáticas o bioquímicas, química clínica, ELISA, unión de anticuerpos, otras técnicas inmunoquímicas, y combinaciones de los mismos. Adicionalmente, el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores (o niveles de compuestos no biomarcadores) se pueden medir indirectamente, por ejemplo, mediante el uso de un análisis que mide el nivel de un compuesto (o compuestos) que se corresponde con el nivel del biomarcador o los biomarcadores (o compuestos no biomarcadores) que se desea medir.
VII. Método de identificación de posibles dianas farmacológicas
La identificación de biomarcadores para esteatohepatitis y esteatosis también permite la identificación de posibles dianas farmacológicas para la esteatohepatitis y/o la esteatosis. Por ejemplo, un método para la identificación de una posible diana farmacológica para la esteatohepatitis comprende (1) identificar una o más rutas bioquímicas asociadas con uno o más biomarcadores para la esteatohepatitis seleccionados de las Tablas 1, 3, 4B, 6B, 9, 10, 11, 12, 13, la Figura 2 y/o la Figura 3, y (2) identificar una proteína (por ejemplo, una enzima) que afecta a al menos una de las una o más rutas bioquímicas identificados, siendo la proteína una posible diana farmacológica para la esteatohepatitis.
Otro método para la identificación de una posible diana farmacológica para la esteatohepatitis comprende (1) identificar una o más rutas bioquímicas asociadas con uno o más biomarcadores para la esteatohepatitis seleccionados de las Tablas 1, 3, 4B, 6B, 9, 10, 11, 12, 13, la Figura 2 y/o la Figura 3, y uno o más compuestos no biomarcadores de la esteatohepatitis y (2) identificar una proteína que afecta a al menos una de las una o más rutas bioquímicas identificadas, siendo la proteína una posible diana farmacológica para la esteatohepatitis.
Se identifican una o más rutas bioquímicas (por ejemplo, ruta biosintética y/o metabólica (catabólica)) que están asociadas con uno o más biomarcadores (o compuestos no biomarcadores). Después de identificar las rutas bioquímicas, se identifican una o más proteínas que afectan a al menos una de las rutas. Preferiblemente, se identifican aquellas proteínas que afectan a más de una de las rutas.
Una acumulación de un metabolito (por ejemplo, un intermedio de la ruta) puede indicar la presencia de un "bloqueo" aguas abajo del metabolito y el bloqueo puede dar lugar a un nivel bajo/ausente de un metabolito aguas abajo (por ejemplo, el producto de una ruta biosintética). De una manera similar, la ausencia de un metabolito podría indicar la presencia de un "bloqueo" en la ruta aguas arriba del metabolito resultante de una o varias enzimas inactivas o no funcionales o de la falta de disponibilidad de intermedios bioquímicos que se son sustratos requeridos para producir el producto. Alternativamente, un aumento en el nivel de un metabolito podría indicar una mutación genética que produce una proteína aberrante que da como resultado la producción en exceso y/o acumulación de un metabolito que conduce después a una alteración de otras rutas bioquímicas relacionadas y da como resultado la desregulación del flujo normal a través de la ruta; adicionalmente, la acumulación del metabolito intermedio bioquímico puede ser tóxica o puede comprometer la producción de un intermedio necesario para una ruta relacionada. Es posible que la relación entre las rutas sea actualmente desconocida y estos datos podrían revelar tal relación.
Las proteínas identificadas como posibles dianas farmacológicas se puede utilizar después para identificar composiciones que pueden ser candidatos potenciales para el tratamiento de la esteatohepatitis, incluyendo composiciones para terapia génica.
VIII. Métodos de tratamiento de la esteatohepatitis y/o la esteatosis
La identificación de biomarcadores para la esteatohepatitis y la esteatosis también permite el tratamiento de la esteatohepatitis y/o la esteatosis. Por ejemplo, con el fin de tratar a un sujeto que tiene esteatohepatitis, se puede administrar al sujeto una cantidad eficaz de uno o más biomarcadores de esteatohepatitis que están reducidos en la esteatohepatitis en comparación con un sujeto sano no tiene esteatohepatitis. Los biomarcadores que se pueden administrar pueden comprender uno o más de los biomarcadores de las Tablas 1, 3, 4B, 6B, 9, 10, 11, 12, 13, la Figura 2, la Figura 3 que disminuyen en la esteatohepatitis. En algunas realizaciones, los biomarcadores que se administran son uno o más biomarcadores enumerados en las Tablas 1, 3, 4B, 6B, 9, 10, 11, 12, 13, la Figura 2, la Figura 3 que disminuyen en la esteatohepatitis y que tienen un valor p inferior a 0,10. En otras realizaciones, los biomarcadores que se administran son uno o biomarcadores enumerados en las Tablas 1, 3, 4B, 6B, 9, 10, 11, 12, 13, la Figura 2, la Figura 3 que disminuyen en la esteatohepatitis en al menos 5%, en al menos 10%, en al menos 15%, en al menos 20%, en al menos 25%, en al menos 30%, en al menos 35%, en al menos 40%, en al menos 45%, en al menos 50%, en al menos 55%, en al menos 60%, en al menos 65%, en al menos 70%, en al menos 75%, en al menos 80%, en al menos 85%, en al menos 90 %, en al menos 95%, o en 100% (es decir, ausente).
IX. Métodos de uso de los biomarcadores esteatohepatitis y esteatosis para otros trastornos del hígado
Se cree que algunos de los biomarcadores para la esteatosis y la esteatohepatitis descritos en la presente memoria también pueden ser biomarcadores de trastornos del hígado (por ejemplo, fibrosis hepática, cirrosis, cáncer de hígado, etc.) en general. Por lo tanto, se cree que al menos algunos de los biomarcadores de la esteatosis o de los biomarcadores de la esteatohepatitis se pueden usar en los métodos descritos en la presente memoria para trastornos del hígado en general. Es decir, los métodos descritos en la presente memoria con respecto a la esteatosis y/o la esteatohepatitis también se pueden utilizar para diagnosticar (o ayudar en el diagnóstico de) un trastorno del hígado, métodos de verificación progresión/regresión de un trastorno del hígado, métodos de evaluación de la eficacia de las composiciones para el tratamiento de un trastorno del hígado, métodos de escrutinio de una composición para determinar su actividad en la modulación de biomarcadores asociados con un trastorno del hígado, métodos de identificación de posibles dianas farmacológicas para un trastorno de hígado, y métodos de tratamiento de un trastorno del hígado. Tales métodos se podrían llevar a cabo como se describe en la presente memoria con respecto a la esteatosis.
X. Otros métodos
También se contemplan otros métodos de uso de los biomarcadores comentados en la presente memoria. Por ejemplo, los métodos descritos en la Patente de los Estados Unidos Núm. 7.005.255 y en la Solicitud de Patente de los Estados Unidos Núm. 10/695,265 se puede llevar a cabo utilizando un perfil de pequeña molécula que comprende uno o más de los biomarcadores descritos en la presente memoria.
En cualquiera de los métodos enumerados en la presente memoria, los biomarcadores que se utilizan se pueden seleccionar entre los biomarcadores de las Tablas 1, 2, 3, 4B, 5B, 6B, 8, 9, 10, 11, 12, 13, las Figuras 1, 2, y 3, que tienen valores de p de menos de 0,05 y/o aquellos biomarcadores de las Tablas 1, 2, 3, 4B, 5B, 6B, 8, 9, 10,11,12, 13, las Figuras 1, 2, y 3, que tiene valores de q de menos de 0,10. Los biomarcadores que se utilizan en cualquiera de los métodos descritos en la presente memoria también se pueden seleccionar entre aquellos biomarcadores de las Tablas 1, 2, 3, 4B, 5B, 6B, 8, 9, 10, 11, 12, 13, las Figuras 1, 2, y 3 que disminuyen en la esteatosis y/o la esteatohepatitis (en comparación con el control) o que disminuyen en remisión (en comparación con el control o esteatosis y/o esteatohepatitis) en al menos 5%, en al menos 10%, en al menos 15%, en al menos 20%, en al menos 25%, en al menos 30%, en al menos 35%, en al menos 40%, en al menos 45%, en al menos 50%, en al menos 55 %, en al menos 60%, en al menos 65%, en al menos 70%, en al menos 75%, en al menos 80%, en al menos 85%, en al menos 90%, en al menos 95%, o en 100% (es decir, ausente), y/o aquellos biomarcadores de las Tablas 1, 2, 3, 4B, 5B, 6B, 8, 9, 10, 11, 12, 13, la Figura 1, la Figura 2, la Figura 3 que aumentan en la esteatosis y/o la esteatohepatitis (en comparación con el control o remisión) o que aumentan en remisión (en comparación con el control o esteatosis o esteatohepatitis) en al menos 5%, en al menos 10%, en al menos 15 %, en al menos 20%, en al menos 25%, en al menos 30%, en al menos 35%, en al menos 40%, en al menos 45%, en al menos 50%, en al menos 55%, en al menos 60%, en al menos 65%, en al menos 70%, en al menos 75%, en al menos 80%, en al menos 85%, en al menos 90%, en al menos 95%, por menos al menos 100%, en al menos 110%, en al menos 120%, en al menos 130%, en al menos 140%, en al menos 150%, o más.
Ejemplos
La invención se explica adicionalmente mediante los siguientes ejemplos ilustrativos que se pretende que no sean limitantes.
I. Métodos generales
A. Identificación de los perfiles metabólicos de la esteatosis y la esteatohepatitis
Cada muestra se analizó para determinar la concentración de varios cientos de metabolitos. Se utilizaron técnicas analíticas tales como GC-MS (cromatografía de gases-espectrometría de masas) y LC-MS (cromatografía líquidaespectrometría de masas) para analizar los metabolitos. Se analizaron simultáneamente, y en paralelo, múltiples alícuotas, y, después de un control de calidad apropiado (QC), se combinó la información derivada de cada análisis. Cada muestra se caracterizó de acuerdo con varios miles de características, que en última instancia, ascendieron a varios cientos de especies químicas. Las técnicas utilizadas pudieron identificar nuevos compuestos y químicamente anónimos.
B. Análisis estadístico
Los datos se analizaron utilizando pruebas de significación estadística para identificar las moléculas (ya sean metabolitos conocidos, con nombre o metabolitos anónimos) presentes a niveles diferenciales en una población o subpoblación definible (p. ej., biomarcadores para muestras biológicas de esteatosis en comparación con muestras biológicas de control o en comparación con pacientes en remisión de esteatosis) útiles para distinguir entre las poblaciones definibles (p. ej., esteatosis (EHGNA) y su control, esteatohepatitis (EHNA) y su control, EHGNA y EHNA). También se identificaron otras moléculas (ya sean metabolitos conocidos, con nombre o metabolitos anónimos) en la población o subpoblación definible. Para las pruebas de significación, se utilizaron el Análisis de la varianza (ANOVA), el análisis de la covarianza (ANCOVA) y la prueba de los rangos con signo de Wilcoxon para analizar estadísticamente los datos. Para las pruebas de clasificación, se utilizaron el Bosque Aleatorio y la Partición Recursiva para analizar los datos.
C. Identificación de biomarcadores
Los diferentes picos identificados en los análisis (p. ej., GC-MS, LC-MS, MS-MS), incluyendo aquellos identificados como estadísticamente significativos, se sometieron a procesos de identificación química basados en espectrometría de masas.
Ejemplo 1
Los biomarcadores se descubrieron (1) analizando muestras de plasma sanguíneo de diferentes grupos de sujetos humanos para determinar los niveles de metabolitos en las muestras y después (2) analizando estadísticamente los resultados para determinar aquellos metabolitos que estaban presentes diferencialmente en los dos grupos.
Las muestras de plasma utilizadas para el análisis fueron 25 muestras de control que procedían de sujetos sanos, 11 muestras de pacientes con esteatosis y 24 muestras de pacientes con EHNA. Los sujetos de todos los grupos incluyeron hombres y mujeres. Una vez que se hubieron determinado los niveles de metabolitos, se analizaron los datos utilizando pruebas de significación (ANOVA, ANCOVA, Wilcoxon).
Se utilizó ANOVA para identificar las diferencias significativas en los niveles medio de metabolitos entre dos poblaciones (es decir, Esteatosis vs. Control, EHNA vs. Control, Esteatosis vs. EHNA).
Biomarcadores:
Como se enumera más abajo en las Tablas 1, 2 y 3, se descubrieron biomarcadores que estaban presentes diferencialmente entre las muestras de plasma de pacientes con esteatosis y sujetos de Control, biomarcadores que se descubrió que estaban presentes diferencialmente entre las muestras de plasma de pacientes con EHNA y de sujetos de Control y biomarcadores que se descubrió que estaban presentes diferencialmente entre las muestras de plasma de esteatohepatitis (EHNA) y muestras de plasma de sujetos con esteatosis.
Las Tablas 1, 2 y 3 incluyen, para cada biomarcador enumerado, el valor p y el valor q determinados en el análisis estadístico de los datos relativos a los biomarcadores en el nivel medio de esteatosis en comparación con el nivel medio de control, el nivel medio de EHNA en comparación con el nivel medio de control, y el nivel medio de esteatohepatitis (EHNA) en comparación con el nivel medio de esteatosis. Biblioteca indica la biblioteca química que se utilizó para identificar los compuestos. El número 50 hace referencia a la biblioteca GC y los números 61, 200 y 201 hacen referencia a la biblioteca LC. ID Comp hace referencia al número de identificación para el compuesto en la base de datos interna de compuestos químicos de los autores de la presente invención. Los datos se presentan como un cambio de porcentaje basado en la razón de las medias e indica los biomarcadores que aumentan o disminuyen en EHNA con respecto al control (Tabla 1), en la esteatosis con respecto al control (Tabla 2) y/o en EHNA con respecto a la esteatosis (Tabla 3).
Tabla 1. Biomarcadores de sujetos con esteatohepatitis (EHNA) en comparación con sujetos de Control
ID
Biomarcador Biblioteca valor p valor q % Cambio
32868
glicocolato* 201 8,56E-06 0,0005 331%
12751
Metabolito-3073 50 1,36E-07 1,08E-05 129%
32322
glutamato 50 1,52E-07 3,11E-05 137%
1113
isocitrato 61 3,94E-07 0,000021 85%
1125
isoleucina 50 6,7E-07 2,27E-05 52%
18706
Metabolito-5769 61 7,12E-07 2,27E-05 64%
33073
Metabolito-11728 200 1,36E-06 0,0001 -57%
60
leucina 50 3,12E-06 0,0001 11%
16511
Metabolito-4274 50 3,22E-06 0,0001 61%
32393
glutamilvalina 200 8,94E-06 0,0005 33%
1126
alanina 50 0,000011 0,0002 40%
1299
tirosina 61 1,77E-05 0,0003 30%
24285
Metabolito-10026 61 2,22E-05 0,0003 52%
2734
gamma-glutamiltirosina 200 2,23E-05 0,0009 29%
15140
quinurenina 61 2,96E-05 0,0004 33%
31489
Metabolito-10914 50 4,45E-05 0,0014 -45%
1647
glutamina 50 0,0001 0,0007 37%
8509
Metabolito-2041 61 0,0001 0,0008 34%
12780
Metabolito-3098 50 0,0001 0,0007 40%
17068
Metabolito-4627 61 0,0001 0,0009 250%
20267
Metabolito-7187 61 0,0001 0,001 85%
32701
urato 200 0,0001 0,0023 22%
33362
gamma-glutamilfenilalanina 200 0,0001 0,0023 29%
33420
gamma-tocoferol 50 0,0001 0,0023 87%
ID
Biomarcador Biblioteca valor p valor q % Cambio
12774
Metabolito-3094 50 0,0001 0,0023 52%
16865
Metabolito-4522 50 0,0001 0,0011 30%
20699
eritritol 50 0,0001 0,0007 36%
30821
Metabolito-10812 50 0,0001 0,0007 21%
2761
tiroxina 61 0,0002 0,0013 46%
6847
Metabolito-1496 61 0,0002 0,0014 50%
13600
Metabolito-3330 61 0,0002 0,0014 362%
18882
Isobar-47-incluye-ácido tauroquenodesoxicólico-y-ácido taurodesoxicólico 61 0,0002 0,0014 268%
32497
10c-undecenoato 201 0,0002 0,003 -9%
32675
Metabolito-03951 200 0,0002 0,003 25%
32881
Metabolito-11564 201 0,0002 0,003 33%
584
manosa 50 0,0002 0,0012 29%
1336
palmitato (16:0) 50 0,0002 0,0012 10%
16650
Metabolito-4360 50 0,0002 0,0012 213%
5628
Metabolito-1086 61 0,0003 0,0016 105%
24233
Metabolito-9855 61 0,0003 0,0017 146%
18497
taurocolato 201 0,0003 0,0042 303%
22570
Metabolito-9033 50 0,0003 0,0017 1%
5687
Metabolito-1110 61 0,0004 0,0021 -71%
59
histidina 201 0,0004 0,0042 -14%
32863
Metabolito-11546 201 0,0004 0,0042 223%
33133
Metabolito-11788 200 0,0004 0,0042 20%
64
fenilalanina 61 0,0004 0,002 13%
31595
Metabolito-10951 61 0,0005 0,0022 60%
ID
Biomarcador Biblioteca valor p valor q % Cambio
12783
Metabolito-3101 50 0,0005 0,0042 61%
15990
glicerofosforilcolina (GPC) 200 0,0005 0,0042 -28%
17028
Metabolito-4611 50 0,0005 0,0046 35%
32632
Metabolito-11315 200 0,0005 0,0042 -32%
12767
Metabolito-3087 50 0,0006 0,0025 46%
12791
Metabolito-3109 50 0,0006 0,0025 -28%
32564
Metabolito-11247 201 0,0006 0,0048 -67%
32808
Metabolito-11491 201 0,0006 0,0048 130%
527
lactato 50 0,0006 0,0025 26%
21047
3-metil-2-oxobutirato 61 0,0006 0,0025 10%
7933
Metabolito-1911 61 0,0007 0,0027 112%
31510
Metabolito-10932 61 0,0007 0,0028 34%
32735
Metabolito-01911 200 0,0007 0,0052 99%
1358
estearato (18:0) 50 0,0008 0,0029 -1%
3147
xantina 61 0,0009 0,0031 91%
27801
Metabolito-10589 61 0,0009 0,0031 64%
1494
5-oxoprolina 50 0,0009 0,0031 0%
32552
Metabolito-11235 201 0,001 0,0065 90%
32739
Metabolito-11422 201 0,001 0,0066 31%
599
piruvato 50 0,001 0,0065 44%
25602
Metabolito-10432 50 0,001 0,0065 73%
10551
Metabolito-2347 61 0,0011 0,0036 214%
16016
Metabolito-3994 61 0,0011 0,0037 -45%
32846
Metabolito-11529 201 0,0011 0,0071 151%
13296
Metabolito-3230 61 0,0013 0,004 25%
ID
Biomarcador Biblioteca valor p valor q % Cambio
32519
Metabolito-11205 200 0,0013 0,0077 -28%
32549
Metabolito-02269 201 0,0014 0,0077 -67%
32550
Metabolito-02272 201 0,0014 0,0077 -28%
8210
Metabolito-1981 61 0,0015 0,0048 -41%
15753
hipurato 201 0,0016 0,0085 -32%
32656
Metabolito-11339 201 0,0017 0,0087 -10%
13214
Metabolito-3183 61 0,0018 0,0055 30%
32544
Metabolito-11227 201 0,0019 0,0096 13%
10286
Metabolito-2272 61 0,002 0,006 -26%
22803
Isobar-66-incluye-ácido glicoquenodesoxicólico-ácido glicodesoxicólico 61 0,002 0,006 195%
10245
Metabolito-2269 61 0,0021 0,006 -62%
32548
Metabolito-11231 201 0,0022 0,0108 82%
32559
Metabolito-11242 201 0,0022 0,0108 60%
1110
araquidonato-20-4-n-6 50 0,0023 0,0064 11%
32637
Metabolito-11320 201 0,0024 0,0115 -27%
10715
Metabolito-2395 61 0,0025 0,0068 107%
32813
Metabolito-11496 201 0,0027 0,0122 -18%
32412
butirilcarnitina 200 0,0029 0,0129 27%
10672
Metabolito-2390 61 0,0031 0,0084 35%
15529
Metabolito-3951 61 0,0034 0,009 27%
16308
Metabolito-4147 50 0,0034 0,015 43%
32641
Metabolito-11324 201 0,0037 0,0159 -25%
32786
Metabolito-11469 200 0,0039 0,0163 -68%
32346
glicoquenodesoxicolato 201 0,004 0,0165 102%
ID
Biomarcador Biblioteca valor p valor q % Cambio
20488
glucosa 50 0,004 0,0105 18%
607
urocanato 200 0,0041 0,0165 -20%
7941
Metabolito-1914 61 0,0043 0,0112 -69%
32748
Metabolito-11431 201 0,0045 0,0179 73%
21421
Metabolito-8214 50 0,0051 0,013 30%
15122
glicerol 50 0,0053 0,0131 18%
15996
aspartato 50 0,0055 0,021 40%
18657
Metabolito-5726 61 0,0057 0,0137 65%
32910
Metabolito-11593 201 0,0057 0,021 23%
33131
Metabolito-11786 200 0,0057 0,021 -34%
17627
Metabolito-4986 50 0,0057 0,0137 -26%
22600
Metabolito-9043 50 0,0057 0,0137 28%
30728
Metabolito-10797 61 0,0064 0,015 72%
32547
Metabolito-11230 201 0,0065 0,0232 70%
32854
Metabolito-11537 200 0,0066 0,0232 -47%
32752
Metabolito-11435 201 0,0067 0,0233 68%
12644
Metabolito-3016 50 0,0072 0,0164 14%
18118
Metabolito-5346 50 0,0072 0,0164 31%
27710
N-acetilglicina 50 0,0076 0,017 -32%
32749
Metabolito-11432 201 0,0079 0,027 71 %
18291
ácido 3-4-5-trimetoxicinámico 61 0,008 0,0178 -64%
19462
Metabolito-6446 50 0,0083 0,0181 24%
3141
Betaína 200 0,0084 0,0283 -16%
10414
Metabolito-2291 61 0,0086 0,0186 -79%
33386
Metabolito-12035 50 0,0086 0,0284 42%
ID
Biomarcador Biblioteca valor p valor q % Cambio
16496
Metabolito-4251 50 0,0087 0,0186 36%
1769
Cortisona 201 0,0089 0,0287 -22%
15500
carnitina 200 0,009 0,0287 10%
18369
gamma-glutamil leucina 200 0,0093 0,0294 19%
32848
Metabolito-11531 201 0,0095 0,0296 78%
16518
Metabolito-4276 50 0,0098 0,0205 79%
32545
Metabolito-11228 201 0,0099 0,0303 79%
19323
docosahexaenoato-DHA 50 0,0101 0,0209 -27%
19490
Metabolito-6488 50 0,0102 0,0308 54%
32684
Metabolito-11367 201 0,0105 0,0313 -37%
27738
treonato 50 0,0106 0,0216 -25%
1301
lisina 50 0,0107 0,0216 12%
33242
Metabolito-11897 201 0,011 0,0318 61%
9905
Metabolito-2231 61 0,0112 0,0223 17%
27288
Metabolito-10517 50 0,0114 0,0325 39%
1431
p-hidroxifenil lactato-HPLA 50 0,0115 0,0226 34%
25522
Metabolito-10407 50 0,0116 0,0226 25%
32515
valina* 200 0,0117 0,0327 10%
22154
bradiquinina 200 0,0118 0,0327 1226%
32751
Metabolito-11434 201 0,0125 0,0341 33%
10247
Metabolito-2270 61 0,0127 0,0244 -68%
19397
Metabolito-6326 50 0,0132 0,0251 24%
15958
fenilacetato 201 0,0134 0,0362 -23%
15506
colina 61 0,0138 0,026 -3%
10737
Isobar-1-incluye-manosa-fructosa-glucosa-galactosa-alfa-Lsorbopiranosa-Inositol-D-alosa-D-altrosa-D-psicona-L-gulosa-alo 61 0,014 0,026 9%
ID
Biomarcador Biblioteca valor p valor q % Cambio
inositol
587
gluconato 50 0,0142 0,0261 22%
33154
Metabolito-11809 200 0,0145 0,0387 -18%
12782
Metabolito-3100 50 0,0152 0,0276 64%
33227
Metabolito-11882 201 0,0154 0,0406 -41%
31787
ácido 3-carboxil-4-metil-5-propil-2-furanpropanoico 201 0,017 0,0436 -43%
32197
3-(4-hidroxifenil)lactato 201 0,0178 0,0449 25%
9130
Metabolito-2139 61 0,0198 0,0355 26%
33087
péptido-RPPGFSPF 200 0,0212 0,0516 818%
32682
Metabolito-11365 201 0,0216 0,0521 -17%
32746
Metabolito-11429 201 0,0221 0,0526 18%
16337
Metabolito-4167 61 0,0222 0,0394 32%
5689
Metabolito-1111 61 0,0225 0,0395 66%
27727
glutationa, oxidada (GSSG) 200 0,0228 0,0536 -69%
11923
Metabolito-2821 61 0,025 0,0432 21%
14837
Metabolito-3707 61 0,0251 0,0432 -39%
13142
Metabolito-3165 61 0,0263 0,0446 14%
32769
Metabolito-11452 201 0,0267 0,0622 51%
606
uridina 61 0,0274 0,0461 -8%
18591
Metabolito-5646 61 0,0278 0,0463 -34%
10087
Metabolito-2249 61 0,029 0,0477 34%
32551
Metabolito-11234 201 0,0302 0,069 26%
33228
Metabolito-11883 200 0,0303 0,069 -24%
12656
Metabolito-3025 50 0,0308 0,0502 13%
22261
Isobar-60-incluye-ácido s-2-hidroxibutírico-ácido 2hidroxiisobutírico 61 0,0312 0,0502 55%
ID
Biomarcador Biblioteca valor p valor q % Cambio
32405
3-indolpropionato 200 0,0313 0,0704 -36%
10156
Metabolito-2259 61 0,0314 0,0502 73%
7650
Metabolito-1834 61 0,0328 0,0518 47%
32741
Metabolito-11424 200 0,0329 0,0732 15%
32757
Metabolito-11440 201 0,0339 0,074 39%
33012
Metabolito-11674 200 0,0339 0,074 13%
12658
Metabolito-3026 50 0,0343 0,0537 15%
32110
Metabolito-11086 50 0,0344 0,0742 -14%
1284
treonina 50 0,0352 0,0546 -7%
32648
Metabolito-11331 201 0,0356 0,0758 -4%
32517
Metabolito-11203 200 0,0359 0,0758 -17%
10092
Metabolito-2250 61 0,0363 0,0557 55%
63
colesterol 50 0,0373 0,0561 12%
1507
palmitoleato 50 0,0376 0,0561 28%
12768
Metabolito-3088 50 0,0376 0,0561 -18%
32578
Metabolito-11261 200 0,0389 0,0806 26%
8796
Metabolito-2074 61 0,0391 0,0578 90%
33140
Metabolito-11795 200 0,04 0,082 24%
21127
1-palmitoilgiicerol-1-monopalmitina 50 0,0424 0,0621 13%
27256
Metabolito-10500 50 0,0432 0,0871 15%
13024
Metabolito-3139 61 0,0433 0,0628 33%
32599
Metabolito-11282 201 0,0434 0,0871 39%
30633
Metabolito-10785 61 0,044 0,0633 -22%
9491
Metabolito-2185 61 0,0445 0,0634 25%
32880
Metabolito-11563 201 0,0449 0,0893 -16%
ID
Biomarcador Biblioteca valor p valor q % Cambio
594
nicotinamida 61 0,045 0,0636 -13%
12663
Metabolito-3030 50 0,0457 0,0638 -11%
30281
Metabolito-10743 50 0,047 0,0644 -17%
17390
Metabolito-4806 50 0,0478 0,0644 21%
12790
Metabolito-3108 50 0,048 0,0946 24%
19370
Metabolito-6268 50 0,048 0,0644 4%
6413
Metabolito-1342 61 0,0481 0,0644 -13%
18015
Metabolito-3113 61 0,0487 0,0644 -15%
17033
Metabolito-4613 61 0,049 0,0644 53%
12645
Metabolito-3017 50 0,0499 0,0644 -13%
17304
Metabolito-4759 61 0,0502 0,0644 26%
22895
Metabolito-9299 50 0,0503 0,0644 -9%
12647
Metabolito-3019 50 0,0513 0,0646 12%
16045
Metabolito-4006 50 0,0513 0,0646 26%
24077
Metabolito-9727 50 0,0519 0,0647 19%
27275
Metabolito-10507 50 0,0527 0,0653 -11%
32315
serina 50 0,0532 0,1028 -15%
31401
Metabolito-10892 50 0,0543 0,1029 36%
32452
propionilcarnitina 200 0,055 0,1029 18%
21631
Metabolito-8403 50 0,0552 0,1029 19%
32348
2-aminobutirato 200 0,0561 0,1036 -13%
16019
Metabolito-3995 61 0,0584 0,0716 -24%
32776
Metabolito-11459 200 0,0584 0,1065 19%
10629
Metabolito-2386 61 0,0587 0,0716 26%
1572
Glicerato 50 0,0588 0,1065 -16%
ID
Biomarcador Biblioteca valor p valor q % Cambio
12035
pelargonato-9-0 50 0,0592 0,0716 -1%
31529
Metabolito-10941 61 0,0597 0,0717 18%
32762
Metabolito-11445 201 0,06 0,1078 -55%
32691
Metabolito-11374 200 0,0607 0,108 19%
528
alfa-ceto-glutarato 61 0,0625 0,0744 28%
32792
Metabolito-11475 201 0,0631 0,1115 54%
32572
Metabolito-11255 200 0,0644 0,112 -51%
6398
Metabolito-1335 61 0,0645 0,0763 41%
27718
creatina 200 0,0652 0,112 17%
16666
Metabolito-4365 50 0,0656 0,112 -22%
18335
quinato 50 0,0656 0,112 -52%
12666
Metabolito-3033 50 0,0683 0,08 -11%
1366
trans-4-hidroxiprolina 50 0,0699 0,0809 35%
32385
Metabolito-11180 50 0,0702 0,1172 -10%
18477
glicodesoxicolato 201 0,0704 0,1172 247%
10501
Metabolito-2321 61 0,0709 0,0815 -25%
32328
hexanoilcarnitina 200 0,0713 0,1177 17%
22133
DL-hexanoil-carnitina 61 0,0719 0,082 28%
32596
Metabolito-02250 200 0,0722 0,1178 36%
32740
Metabolito-11423 201 0,0725 0,1178 13%
12785
Metabolito-3103 50 0,0743 0,1195 42%
32697
Metabolito-11380 200 0,0747 0,1195 13%
13557
Metabolito-3323 61 0,0779 0,0883 71%
32761
Metabolito-11444 201 0,0805 0,1278 31%
32952
Metabolito-02277 201 0,0819 0,1286 -75%
ID
Biomarcador Biblioteca valor p valor q % Cambio
32945
Metabolito-11628 201 0,0822 0,1286 38%
32338
glicina 50 0,084 0,1292 -15%
1712
hidrocortisona 201 0,0854 0,1292 -19%
21418
Isobar-56-incluye-ácido DL-pipecólico-ácido 1-amino-1ciclopentanocarboxílico 61 0,0856 0,0958 -24%
1105
linoleato 50 0,0858 0,0958 11%
32638
Metabolito-11321 201 0,0867 0,1296 -12%
12919
Metabolito-3130 61 0,0889 0,0978 67%
33203
Metabolito-11858 201 0,0893 0,1321 -63%
33366
Metabolito-12020 200 0,0896 0,1321 -27%
22842
colato 201 0,0996 0,144 125%
32814
Metabolito-11497 201 0,1001 0,144 -7%
32743
bradiquinina, forma hidroxiprolina 200 0,1007 0,144 158%
32671
Metabolito-11354 200 0,1009 0,144 -13%
25459
Metabolito-10395 50 0,1012 0,144 -14%
12067
undecanoato 201 0,1035 0,1452 -5%
18868
Metabolito-5847 50 0,1035 0,1452 70%
21762
Metabolito-8506 61 0,1759 0,1569 -16%
Tabla 2. Biomarcadores de sujetos con Esteatosis (EHGNA) en comparación con sujetos de Control.
ID
Biomarcador Biblioteca valor p valor q % Cambio
18706
Metabolito-5769 61 2,09E-06 0,0004 80%
12644
Metabolito-3016 50 2,08E-05 0,0021 30%
12751
Metabolito-3073 50 0,0001 0,0043 102%
24285
Metabolito-10026 61 0,0001 0,0031 64%
1125
isoleucina 50 0,0002 0,0076 48%
ID
Biomarcador Biblioteca valor p valor q % Cambio
18882
Isobar-47-incluye-ácido tauroquenodesoxicólico-y-ácido taurodesoxicólico 61 0,0003 0,0076 309%
18476
glicocolato 61 0,0004 0,0092 248%
32322
glutamato 50 0,0005 0,0384 -91%
32497
10c-undecenoato 201 0,0005 0,0384 11%
31489
Metabolito-10914 50 0,0006 0,0384 47%
33073
Metabolito-11728 200 0,0006 0,0384 53%
12658
Metabolito-3026 50 0,0007 0,0136 30%
33386
Metabolito-12035 50 0,0007 0,0384 -80%
584
manosa 50 0,001 0,0177 -25%
1299
tirosina 200 0,0011 0,0499 -27%
17068
Metabolito-4627 61 0,0012 0,0203 263%
12780
Metabolito-3098 50 0,0015 0,0208 34%
60
leucina 50 0,0015 0,0208 -13%
18118
Metabolito-5346 50 0,0016 0,0208 42%
32393
glutamilvalina 200 0,0016 0,0577 -28%
2734
gamma-glutamiltirosina 200 0,0018 0,0577 -24%
11923
Metabolito-2821 61 0,0019 0,0227 38%
27801
Metabolito-10589 61 0,002 0,0231 80%
32846
Metabolito-11529 201 0,002 0,0577 -172%
32701
urato 200 0,0021 0,0577 -23%
10672
Metabolito-2390 61 0,0023 0,0245 57%
1649
valina 50 0,0024 0,0247 37%
32749
Metabolito-11432 201 0,003 0,0722 -106%
13142
Metabolito-3165 61 0,0031 0,029 25%
7650
Metabolito-1834 61 0,0035 0,029 144%
ID
Biomarcador Biblioteca valor p valor q % Cambio
10715
Metabolito-2395 61 0,0035 0,029 661%
10551
Metabolito-2347 61 0,0036 0,029 154%
22133
DL-hexanoil-carnitina 61 0,0036 0,029 317%
59
histidina 201 0,0036 0,0804 14%
16337
Metabolito-4167 61 0,0038 0,029 66%
22803
Isobar-66-incluye-ácido glicoquenodesoxicólico-ácido glicodesoxicólico 61 0,0039 0,029 194%
10737
lsobar-1-incluye-manosa-fructosa-glucosa-galactosaalfa-L-sorbopiranosa-Inositol-D-alosa-D-altrosa-D-psicona-L-gulosa-alo-inositol 61 0,004 0,029 13%
25602
Metabolito-10432 50 0,0044 0,0867 -62%
12770
Metabolito-3090 50 0,0045 0,0867 -67%
9491
Metabolito-2185 61 0,0048 0,0338 50%
606
uridina 201 0,0049 0,0882 22%
12656
Metabolito-3025 50 0,0052 0,0354 22%
32776
Metabolito-11459 200 0,006 0,0975 -40%
21047
ácido 3-metil-2-oxobutírico 61 0,0062 0,0409 20%
32748
Metabolito-11431 201 0,0062 0,0975 -82%
32641
Metabolito-11324 201 0,0065 0,0975 29%
18369
gamma-glutamil leucina 61 0,0065 0,0414 -18%
22600
Metabolito-9043 50 0,0068 0,0414 -51%
1126
alanina 50 0,0071 0,0414 26%
32412
butirilcarnitina 200 0,0073 0,1038 -38%
16511
Metabolito-4274 50 0,0089 0,0489 39%
17304
Metabolito-4759 61 0,0094 0,0503 48%
17028
Metabolito-4611 50 0,0095 0,1279 -31%
ID
Biomarcador Biblioteca valor p valor q % Cambio
32548
Metabolito-11231 201 0,0102 0,1281 -75%
13214
Metabolito-3183 61 0,0109 0,0524 28%
30821
Metabolito-10812 50 0,0112 0,0524 -20%
16016
Metabolito-3994 61 0,0113 0,0524 -45%
21762
Metabolito-8506 61 0,0118 0,0536 50%
33362
gamma-glutamilfenilalanina 200 0,0122 0,1281 -23%
9130
Metabolito-2139 61 0,0126 0,0557 40%
13600
Metabolito-3330 61 0,013 0,0557 139%
31401
Metabolito-10892 50 0,0132 0,1281 -64%
32552
Metabolito-11235 201 0,0134 0,1281 -53%
64
fenilalanina 61 0,0134 0,0557 -9%
32564
Metabolito-11247 201 0,0135 0,1281 62%
19490
Metabolito-6488 50 0,0139 0,1281 -47%
32578
Metabolito-11261 200 0,0144 0,1281 -54%
16308
Metabolito-4147 50 0,0145 0,1281 -48%
32754
Metabolito-11437 201 0,0148 0,1281 50%
32547
Metabolito-11230 201 0,0151 0,1281 -83%
32808
Metabolito-11491 201 0,0154 0,1281 -86%
12783
Metabolito-3101 50 0,0158 0,1281 -39%
1769
cortisona 201 0,0162 0,1281 28%
32945
Metabolito-11628 201 0,0179 0,1339 -68%
2761
tiroxina 61 0,018 0,0734 31%
12647
Metabolito-3019 50 0,0184 0,0734 17%
12763
Metabolito-3083 50 0,0186 0,1339 -36%
32881
Metabolito-11564 201 0,0186 0,1339 -26%
ID
Biomarcador Biblioteca valor p valor q % Cambio
15500
carnitina 200 0,0189 0,1339 -11%
16865
Metabolito-4522 50 0,0192 0,075 22%
1494
5-oxoprolina 50 0,0197 0,075 20%
30805
Metabolito-10810 50 0,0198 0,1349 -75%
32753
Metabolito-09789 201 0,0201 0,1349 51%
1642
caprato-10-0 201 0,0219 0,1425 7%
32854
Metabolito-11537 200 0,0223 0,1425 46%
32863
Metabolito-11546 201 0,0257 0,1608 -116%
9905
Metabolito-2231 61 0,0262 0,0921 18%
12790
Metabolito-3108 50 0,0276 0,1669 -26%
527
lactato 50 0,0276 0,0952 -20%
32926
Metabolito-11609 201 0,028 0,1669 -44%
8509
Metabolito-2041 61 0,0298 0,0996 22%
8210
Metabolito-1981 61 0,0309 0,1016 -35%
32519
Metabolito-11205 200 0,0312 0,1764 22%
32813
Metabolito-11496 201 0,0347 0,1875 16%
32698
Metabolito-11381_200 200 0,036 0,1875 -22%
32631
Metabolito-11314 200 0,0365 0,1875 -11%
32517
Metabolito-11203 200 0,037 0,1875 26%
32807
Metabolito-11490 201 0,04 0,1972 -125%
18497
taurocolato 201 0,0404 0,1972 -115%
15140
L-quinurenina 61 0,0407 0,1275 24%
12782
Metabolito-3100 50 0,0422 0,1978 -49%
27727
glutationa, oxidada (GSSG) 200 0,0426 0,1978 72%
32621
Metabolito-11304 200 0,0427 0,1978 -43%
ID
Biomarcador Biblioteca valor p valor q % Cambio
13557
Metabolito-3323 61 0,0447 0,135 68%
31595
Metabolito-10951 61 0,0451 0,135 27%
20699
eritritol 50 0,0452 0,2057 -23%
32878
Metabolito-11561 201 0,0477 0,2137 -32%
1113
isocitrato 61 0,0497 0,144 34%
32910
Metabolito-11593 201 0,0507 0,2233 -20%
17390
Metabolito-4806 50 0,0519 0,1462 27%
32752
Metabolito-11435 201 0,0533 0,2263 -41%
1647
glutamina 50 0,0534 0,147 21%
33242
Metabolito-11897 201 0,0544 0,2263 -38%
32452
propionilcarnitina 200 0,0545 0,2263 -27%
32978
Metabolito-11656 200 0,0547 0,2263 6%
27710
N-acetilglicina 50 0,0581 0,155 -29%
12785
Metabolito-3103 50 0,0581 0,2331 -48%
33228
Metabolito-11883 200 0,0581 0,2331 18%
1336
palmitato 50 0,0586 0,155 14%
594
nicotinamida 200 0,0598 0,2337 16%
15996
aspartato 50 0,0606 0,2337 -29%
10245
Metabolito-2269 61 0,0622 0,1602 -42%
33131
Metabolito-11786 200 0,0626 0,2367 33%
32559
Metabolito-11242 201 0,0641 0,2372 -27%
15529
Metabolito-3951 61 0,0658 0,1647 22%
5687
Metabolito-1110 61 0,0702 0,1672 -43%
19370
Metabolito-6268 50 0,0707 0,1672 25%
32549
Metabolito-02269 201 0,0733 0,2653 44%
ID
Biomarcador Biblioteca valor p valor q % Cambio
12789
Metabolito-3107 50 0,0741 0,2653 -59%
528
alfa-ceto-glutarato 61 0,0742 0,1717 -27%
31510
Metabolito-10932 61 0,0764 0,1746 21%
19985
Metabolito-6957 50 0,0799 0,2678 -20%
10247
Metabolito-2270 61 0,0802 0,1773 -64%
18868
Metabolito-5847 50 0,0804 0,2678 -67%
32675
Metabolito-03951_200 200 0,0812 0,2678 -15%
20488
glucosa 50 0,0819 0,1773 11%
18335
quinato 50 0,0822 0,2678 20%
15676
3-metil-2-oxovalerato 201 0,0827 0,2678 -17%
25601
Metabolito-10431 50 0,0828 0,2678 -41%
12593
Metabolito-2973 50 0,0852 0,2678 -22%
32838
Metabolito-11521 200 0,0856 0,2678 -35%
19397
Metabolito-6326 50 0,086 0,1815 19%
31787
ácido 3-carboxil-4-metil-5-propil-2-furanpropanoico 201 0,0861 0,2678 53%
12604
Metabolito-2981 50 0,0864 0,2678 -15%
21631
Metabolito-8403 50 0,0885 0,2678 -26%
1515
ácido salicílico 50 0,0887 0,2678 -140%
1301
lisina 200 0,09 0,2687 -14%
32511
EDTA* 201 0,0942 0,2759 -7%
32971
Metabolito-11654 200 0,0945 0,2759 -36%
12767
Metabolito-3087 50 0,096 0,1954 35%
32795
Metabolito-11478 201 0,0982 0,2796 -35%
32793
Metabolito-11476 200 0,0988 0,2796 6%
Tabla 3. Biomarcadores de sujetos con Esteatosis en comparación con sujetos con Esteatohepatitis.
ID
Biomarcador Biblioteca valor p valor q % Cambio
21762
Metabolito-8506 61 0,0006 0,1449 -44%
528
alfa-ceto-glutarato 61 0,0017 0,1921 75%
6847
Metabolito-1496 61 0,0025 0,1921 49%
16650
Metabolito-4360 50 0,0033 0,1921 -144%
18591
Metabolito-5646 61 0,0041 0,1921 -53%
27718
creatina 200 0,0071 1 -50%
599
piruvato 61 0,0087 0,253 -42%
32621
Metabolito-11304 200 0,0124 1 31%
1113
isocitrato 61 0,0151 0,3249 38%
15506
colina 61 0,0163 0,3249 -28%
32729
Metabolito-11412 200 0,0166 1 -14%
10501
Metabolito-2321 61 0,0183 0,3249 -40%
12644
Metabolito-3016 50 0,0186 0,3249 -13%
32735
Metabolito-01911 200 0,0199 1 -99%
15753
hipurato 201 0,0255 1 44%
30805
Metabolito-10810 50 0,0302 1 37%
12768
Metabolito-3088 50 0,0305 0,4178 -25%
10629
Metabolito-2386 61 0,0335 0,4178 25%
33209
Metabolito-11864 201 0,0376 1 45%
32855
Metabolito-11538 201 0,0429 1 34%
32416
alfa linolenato (18:3 (n- 3)) 201 0,0486 1 32%
16518
Metabolito-4276 50 0,0499 0,481 63%
20267
Metabolito-7187 61 0,0521 0,481 37%
19462
Metabolito-6446 50 0,0552 0,481 22%
33420
gamma-tocoferol 50 0,0556 1 -54%
ID
Biomarcador Biblioteca valor p valor q % Cambio
1515
ácido salicílico 50 0,0569 1 60%
32567
Metabolito-11250 200 0,0573 1 40%
32769
Metabolito-11452 201 0,0608 1 -79%
12774
Metabolito-3094 50 0,0625 1 -24%
32632
Metabolito-11315 200 0,0651 1 21%
32741
Metabolito-11424 200 0,0655 1 -13%
12658
Metabolito-3026 50 0,0658 0,525 -12%
32110
Metabolito-11086 50 0,0659 1 17%
30728
Metabolito-10797 61 0,0693 0,525 65%
32625
Metabolito-11308 201 0,0697 1 27%
15140
quinurenina 200 0,0702 1 -14%
12645
Metabolito-3017 50 0,0709 0,525 -22%
33154
Metabolito-11809 200 0,0711 1 19%
12067
undecanoato 201 0,072 1 6%
5628
Metabolito-1086 61 0,0723 0,525 45%
19402
Metabolito-6346 50 0,077 1 -20%
32631
Metabolito-11314 200 0,0779 1 8%
7933
Metabolito-1911 61 0,0792 0,5308 75%
32797
Metabolito-11480 201 0,0818 1 -213%
18254
paraxantina 200 0,0824 1 -69%
32912
Metabolito-11595 201 0,0834 1 25%
32717
Metabolito-11400 200 0,0855 1 39%
33133
Metabolito-11788 200 0,0862 1 -11%
22261
Isobar-60-incluye-ácido s-2-hidroxibutírico-ácido 2-hidroxiisobutírico 61 0,0869 0,5308 42%
19374
Metabolito-6270 50 0,09 1 27%
ID
Biomarcador Biblioteca valor p valor q % Cambio
6398
Metabolito-1335 61 0,0908 0,5308 28%
12770
Metabolito-3090 50 0,0919 1 28%
18392
teobromina 200 0,0956 1 -118%
32978
Metabolito-11656 200 0,0961 1 -6%
32761
Metabolito-11444 201 0,0962 1 -11%
31548
péptido- DSGEGDFXAEGGGVR 200 0,0981 1 -323%
3141
betaína 200 0,0986 1 14%
606
uridina 201 0,0987 1 -17%
24233
Metabolito-9855 61 0,0996 0,5308 99%
Ejemplo 2 Clasificación de Sujetos por Bosque Aleatorio
Se utilizaron análisis de bosque aleatorio para la clasificación de las muestras en grupos (p. ej. enfermo o sano, esteatosis o sano, esteatohepatitis o sano, esteatosis o EHNA). Los bosques aleatorios proporcionan una estimación
5 de cuán bien pueden los autores de la presente invención clasificar a los individuos en nuevos conjuntos de datos dentro de cada grupo, en contraste con una prueba t, que somete a ensayo si las medias desconocidas para dos poblaciones son diferentes o no. Los bosques aleatorios crean un conjunto de árboles de clasificación basados en el muestreo continuo de las unidades y compuestos experimentales. A continuación cada observación se clasifica basándose en los votos de la mayoría de todos los árboles de clasificación.
10 Los resultados de los bosques aleatorios demuestran que las muestras se pueden clasificar correctamente con grados variables de exactitud utilizando los biomarcadores enumerados en las Tablas 1, 2, y/o 3. Las matrices de confusión demuestran que utilizando muestras de plasma se pueden distinguir sujetos con esteatosis, sujetos con esteatohepatitis y sujetos de control (Tabla 4), se pueden distinguir sujetos con esteatosis de sujetos de control (Tabla 5), se pueden distinguir sujetos con esteatohepatitis de sujetos de control (Tabla 6) y se pueden distinguir
15 sujetos con esteatosis de sujetos con esteatohepatitis (Tabla 7). La tase de error "Out-of-Bag" (OOB) proporciona una estimación de cuán exactamente se pueden pronosticar nuevas observaciones utilizando el modelo de bosque aleatorio (p. ej., ya sea la muestra de un sujeto que tiene esteatosis o de un sujeto de control).
Tabla 4. La Matriz de Confusión que muestra sujetos de Control, sujetos con Esteatosis y sujetos con EHNA puede distinguirlos entre sí.
Matriz de Confusión: Control vs. Esteatosis vs. EHNA
Control_ Pronosticado
Esteatosis_ Pronosticado EHNA_ Pronosticado Error
Control
23 0 2 8%
Esteatosis
3 9 12 63%
EHNA
2 4 5 55%
Error Out_of_bag
38%
Basándose en la tasa de error OOB de 38%, se pudo utilizar el modelo de Bosque Aleatorio que se había creado para pronosticar si un sujeto tiene esteatosis, esteatohepatitis, o ninguna enfermedad de hígado graso con una exactitud de aproximadamente 62% a partir del análisis de los niveles de los biomarcadores en las muestras del sujeto. Los biomarcadores que son los biomarcadores más importantes para distinguir los grupos se enumeran en la Tabla 4B y se presentan en la Figura 3.
Tabla 4B. Los biomarcadores más importantes para distinguir sujetos de control, con esteatosis y con esteatohepatitis a partir del Gráfico de Importancia del Bosque Aleatorio se muestran en la Figura 3.
ID
Biomarcador
2734
gamma-glutamiltirosina
32322
glutamato
33073
Metabolito - 11728
32412
butirilcarnitina
18497
taurocolato
32393
glutamilvalina
1299
tirosina
32739
Metabolito - 11422
15140
quinurenina
32868
glicocolato*
33420
gamma-tocoferol
32748
Metabolito - 11431
27718
creatina
31489
Metabolito - 10914
32552
Metabolito - 11235
15753
hipurato
32846
Metabolito - 11529
17028
Metabolito-4611
32735
Metabolito - 01911_200
32808
Metabolito-11491
15990
glicerofosforilcolina (GPC)
32701
urato
ID
Biomarcador
33362
gamma-glutamilfenilalanina
32547
Metabolito - 11230
32497
10c-undecenoato
32632
Metabolito - 11315
59
histidina
32621
Metabolito - 11304
32749
Metabolito - 11432
32559
Metabolito - 11242
1126
alanina
1113
isocitrato
1125
isoleucina
527
lactato
60
leucina
584
manosa
24285
Metabolito - 10026
30821
Metabolito - 10812
6847
Metabolito - 1496
7933
Metabolito - 1911
10715
Metabolito - 2395
12644
Metabolito - 3016
12658
Metabolito - 3026
12751
Metabolito - 3073
12780
Metabolito - 3098
13600
Metabolito - 3330
16511
Metabolito - 4274
ID
Biomarcador
18706
Metabolito - 5769
20267
Metabolito - 7187
21762
Metabolito - 8506
24233
Metabolito - 9855
18392
teobromina
2761
tiroxina
1604
urato
1649
valina
3147
xantina
Tabla 5. Matriz de Confusión que muestra que los sujetos de Control se pueden distinguir de los sujetos con Esteatosis.
Matriz de Confusión: Control vs. Esteatosis
Control_ Pronosticado
Esteatosis_ Pronosticado Error
Control
22 3 12%
Esteatosis
1 10 9%
Error Out_of_bag
11%
5 Basándose en la tasa de Error OOB del 11%, se pudo utilizar el modelo de Bosque Aleatorio que se había creado para pronosticar si un sujeto tiene esteatosis o no tiene enfermedad de hígado graso con una exactitud de aproximadamente 89% a partir del análisis de los niveles de los biomarcadores en las muestras del sujeto. Los biomarcadores que son los biomarcadores más importantes para distinguir los grupos se enumeran en la Tabla 5B y se presentan en la Figura 1.
10 Tabla 5B. Biomarcadores más importantes del Gráfico de Importancia del Bosque Aleatorio mostrado en la Figura 1.
ID
Biomarcador
2734
gamma-glutamiltirosina
18497
taurocolato
32412
butirilcarnitina
32552
Metabolito - 11235
ID
Biomarcador
1299
tirosina
606
uridina
32322
glutamato
32621
Metabolito - 11304
17028
Metabolito - 4611
19490
Metabolito - 6488
32497
10c-undecenoato
32748
Metabolito - 11431
12789
Metabolito - 3107
32393
glutamilvalina
32547
Metabolito - 11230
12763
Metabolito-3083
32808
Metabolito-11491
25602
Metabolito-10432
32739
Metabolito - 11422
33073
Metabolito - 11728
31489
Metabolito - 10914
32749
Metabolito - 11432
32631
Metabolito - 11314
33386
Metabolito - 12035
32559
Metabolito - 11242
32846
Metabolito - 11529
33242
Metabolito - 11897
33362
gamma-glutamilfenilalanina
32945
Metabolito - 11628
ID
Biomarcador
12790
Metabolito - 3108
1126
alanina
18476
glicocolato
Isobar 47 (ácido tauroquenodesoxicólico, ácido taurodesoxicólico)
Isobar 66 (ácido glicoquenodesoxicólico, ácido glicodesoxicólico)
57
lactato
584
manosa
24285
Metabolito-10026
31595
Metabolito-10951
10551
Metabolito-2347
11923
Metabolito-2821
12644
Metabolito-3016
12647
Metabolito-3019
12656
Metabolito-3025
12658
Metabolito-3026
12751
Metabolito-3073
Metabolito-3077
12780
Metabolito-3098
13142
Metabolito-3165
13600
Metabolito-3330
16337
Metabolito-4167
Metabolito-4361
17304
Metabolito-4759
17390
Metabolito-4806
18118
Metabolito-5346
ID
Biomarcador
18706
Metabolito-5769
21762
Metabolito-8506
2761
tiroxina
1604
urato
Tabla 6. Matriz de Confusión que muestra que los sujetos de Control se pueden distinguir de los sujetos con EHNA.
Matriz de Confusión: Control vs. EHNA
Control_ Pronosticado
EHNA_ Pronosticado Error
Control
23 2 8%
EHNA
2 22 8%
Error Out_of_bag
8%
Basándose en la tasa de Error OOB del 8%, se pudo utilizar el modelo de Bosque Aleatorio que se había creado para pronosticar si un sujeto tiene esteatohepatitis o no tiene enfermedad de hígado graso con una exactitud de aproximadamente 92% a partir del análisis de los niveles de los biomarcadores en las muestras del sujeto. Los biomarcadores que son los biomarcadores más importantes para distinguir los grupos se enumeran en la Tabla 6B y se presentan en el gráfico de importancia en la Figura 2.
Tabla 6B. Biomarcadores más importantes del Gráfico de Importancia del Bosque Aleatorio mostrado en la Figura 2.
ID
Biomarcador
33073
Metabolito - 11728
15140
quinurenina
32868
glicocolato*
32412
butirilcarnitina
32322
glutamato
2734
gamma-glutamiltirosina
15753
hipurato
31489
Metabolito - 10914
32739
Metabolito - 11422
33420
gamma-tocoferol
ID
Biomarcador
32881
Metabolito - 11564
32393
glutamilvalina
32519
Metabolito - 11205
32748
Metabolito - 11431
32701
urato
32550
Metabolito - 02272_201
1299
tirosina
32548
Metabolito - 11231
33362
gamma-glutamilfenilalanina
584
manosa
32675
Metabolito - 03951_200
32632
Metabolito - 11315
32846
Metabolito - 11529
17028
Metabolito-4611
32497
10c-undecenoato
32749
Metabolito - 11432
16308
Metabolito - 4147
32544
Metabolito - 11227
18497
taurocolato
32697
Metabolito - 11380
21047
ácido 3-metil-2-oxobutírico
1126
alanina
1647
glutamina
1113
isocitrato
1125
isoleucina
ID
Biomarcador
60
leucina
20699
meso-eritritol
24285
Metabolito-10026
30821
Metabolito-10812
5628
Metabolito-1086
5687
Metabolito-1110
6398
Metabolito-1335
6847
Metabolito-1496
8509
Metabolito-2041
10286
Metabolito-2272
10715
Metabolito-2395
12751
Metabolito-3073
12767
Metabolito-3087
12780
Metabolito-3098
16511
Metabolito-4274
18706
Metabolito-5769
20267
Metabolito-7187
1649
valina
3147
xantina
Tabla 7. Matriz de Confusión que muestra que los sujetos con Esteatosis se pueden distinguir de los sujetos con esteatohepatitis (EHNA).
Matriz de Confusión: Esteatosis vs. EHNA
Esteatosis_ Pronosticado
EHNA_ Pronosticado Error
Esteatosis
10 14 58%
EHNA
5 6 45%
Matriz de Confusión: Esteatosis vs. EHNA
Esteatosis_ Pronosticado
EHNA_ Pronosticado Error
Error Out_of_bag
54%
Basándose en la tasa de Error OOB de 54%, se pudo utilizar el modelo de Bosque Aleatorio que se había creado para pronosticar si un sujeto tiene esteatosis o esteatohepatitis con una exactitud de aproximadamente 46% a partir del análisis de los niveles de los biomarcadores en las muestras del sujeto.
Los compuestos que son los biomarcadores más importantes para distinguir los grupos se muestran en los gráficos de importancia en las Figuras 1, 2, 3. La Figura 1 enumera los compuestos biomarcadores que son más importantes al distinguir los sujetos con esteatosis y los sujetos de Control. En la Figura 2 se enumeran los compuestos biomarcadores que son más importantes al distinguir los sujetos con esteatohepatitis de los sujetos de control. En la Figura 3 se enumeran los compuestos biomarcadores que son más importantes al distinguir los sujetos con esteatosis, con esteatohepatitis y de control.
Ejemplo 3 Clasificación por partición Recursiva y Curvas Receptor-Operador (ROC)
Se realizó la partición recursiva para revelar los biomarcadores que pueden diferenciar mejor los dos grupos desujetos. Ésta relaciona una variable 'dependiente' (p. ej. Grupo o Y) con una colección de variables independientes ('indicador') (p. ej. metabolitos o X) con el fin de revelar -- o simplemente comprender – la relación elusiva, Y=f(X). Esto se realizó con un programa JMP (SAS) para generar un árbol de decisión. El nivel de significación de cada "división" de datos en los nodos o ramas del árbol se computó como valores p, que disciernen la cualidad de la división con respecto a un evento al azar. Se proporcionó como LogWorth, que es el log10 negativo de un valor p bruto.
Los resultados de la partición recursiva que muestran la clasificación de los sujetos de Control y con esteatosis se muestran en la Figura 4. Los biomarcadores que contribuyen a la clasificación se enumeran en la Tabla 8. Los resultados de la partición recursiva que muestran la clasificación de la esteatosis y esteatohepatitis (EHNA, EH) se muestran en la Figura 5 y los biomarcadores utilizados en la clasificación se enumeran en la Tabla 9. Los resultados de la partición recursiva que muestran la clasificación de control y de esteatohepatitis se muestran en la Figura 6 y los biomarcadores se enumeran en la Tabla 10. Los resultados de la partición recursiva que muestran en uso de los biomarcadores para clasificar a los sujetos cono esteatosis, esteatohepatitis y de control se muestran en la Figura 7 y los biomarcadores se enumeran en la Tabla 11.
La sensibilidad y especificidad de un biomarcador dado fueron determinadas mediante la curva de Características Operativas del receptor (o curva ROC), que traza la tasa de verdaderos positivos frente a la tasa de falsos positivos para los diferentes puntos de corte posibles del biomarcador específico. El área bajo la curva es una medida de la exactitud del ensayo. Un área de 1 representa un ensayo perfecto mientras que un área de 0,5 representa una prueba sin valor. Una guía aproximada para clasificar la exactitud de un ensayo diagnóstico es el tradicional sistema de puntuación académica:
0,90-1 = sobresaliente
0,80-0,90 = notable
0,70-0,80 = aprobado
0,60-0,70 = insuficiente
0,50-0,60 = muy deficiente
Las curvas ROC se muestran en las Figuras 4, 5, 6 y 7. Los sujetos de control se separan de los sujetos con esteatosis con una exactitud >90 (Figura 4). Los sujetos con esteatosis y esteatohepatitis se pueden distinguir con una exactitud >82% (Figura 5). Los sujetos de Control y con esteatohepatitis se clasifican con una exactitud >87% (Figura 6). Los tres grupos se pueden clasificar utilizando los biomarcadores con una exactitud >70% (EHNA), >77% (Esteatosis), >86% (control) (Figura 7).
Tabla 8. Biomarcadores de Partición Recursiva, Esteatosis vs control. Tabla 9. Candidatos Biomarcadores PR, esteatosis vs. esteatohepatitis.
ID
COMPUESTO Biblioteca LogWorth Candidato G^2
2734
gamma glutamiltirosina 200 7,2110 29,7676
18497
taurocolato 201 4,5487 20,2589
32599
Metabolito - 11282 201 3,4916 17,2822
20699
eritritol 50 3,4916 17,2822
32552
Metabolito - 11235 201 3,3649 16,7903
32322
glutamato 50 3,3649 16,7903
32393
glutamilvalina 200 3,0618 15,2513
12763
Metabolito - 3083 50 3,0147 15,2513
32497
10c undecenoato 201 2,9895 15,3210
19490
Metabolito - 6488 50 2,9743 15,2513
1299
tirosina 200 2,9718 15,2513
33242
Metabolito - 11897 201 2,9718 15,2513
32748
Metabolito - 11431 201 2,9601 15,2052
32621
Metabolito - 11304 200 2,8266 14,6774
606
uridina 201 2,8266 14,6774
17028
Metabolito - 4611 50 2,8266 14,6774
12789
Metabolito - 3107 50 2,4680 12,6627
32808
Metabolito - 11491 201 2,3944 12,6627
32412
butirilcarnitina 200 2,3372 12,6627
32547
Metabolito - 11230 201 2,3242 12,6627
12790
Metabolito - 3108 50 2,2779 12,4746
33073
Metabolito - 11728 200 2,2201 12,1291
32739
Metabolito - 11422 201 2,1932 12,1291
30805
Metabolito - 10810 50 2,1932 12,1291
32776
Metabolito - 11459 200 2,1488 11,9121
ID
COMPUESTO Biblioteca LogWorth Candidato G^2
32697
Metabolito - 11380 200 2,1443 11,9121
32701
urato 200 2,1403 11,9121
32559
Metabolito - 11242 201 2,1279 11,8611
32631
Metabolito - 11314 200 2,1279 11,8611
32945
Metabolito - 11628 201 2,1279 11,8611
33386
Metabolito - 12035 50 2,0266 11,2117
ID
COMPUESTO Biblioteca LogWorth Candidato G^2
27718
creatina 200 2,8020 14,5688
12067
undecanoato 201 2,7871 14,5095
32729
Metabolito - 11412 200 2,5472 13,5499
32855
Metabolito - 11538 201 2,5472 13,5499
32735
Metabolito - 01911_200 200 2,4708 13,0756
32621
Metabolito - 11304 200 2,1940 12,1162
27275
Metabolito - 10507 50 2,0579 11,5561

Tabla 10. Biomarcadores PR de esteatohepatitis (EHNA) vs Control.
ID
COMPUESTO Biblioteca LogWorth Candidato G^2
33073
Metabolito - 11728 200 7,3726 31,8519
32868
glicocolato 201 6,5169 28,4230
15140
quinurenina 200 6,4082 27,7714
2734
gamma glutamiltirosina 200 5,5940 24,5076
32412
butirilcarnitina 200 5,4888 24,6395
15753
hipurato 201 5,2301 23,5921
32322
glutamato 50 4,5652 21,1976
ID
COMPUESTO Biblioteca LogWorth Candidato G^2
33420
gamma tocoferol 50 4,5330 21,1976
32748
Metabolito - 11431 201 4,3254 20,3263
32739
Metabolito - 11422 201 4,2214 19,9467
32393
glutamilvalina 200 3,9888 19,1924
32550
Metabolito - 02272 201 3,9860 19,0839
31489
Metabolito - 10914 50 3,8423 18,5637
32519
Metabolito - 11205 200 3,8117 18,4417
33133
Metabolito - 11788 200 3,6919 17,9988
32632
Metabolito - 11315 200 3,6913 17,9988
32548
Metabolito - 11231 201 3,6260 17,7540
16308
Metabolito - 4147 50 3,6255 17,7540
32881
Metabolito - 11564 201 3,5761 17,5685
32675
Metabolito - 03951 200 3,5752 17,5685
32697
Metabolito-11380 200 3,4581 17,1290
32863
Metabolito - 11546 201 3,4182 16,9876
17028
Metabolito - 4611 50 3,3802 16,8375
584
manosa 50 3,3005 16,5389
33362
gamma glutamilfenilalanina 200 3,1967 16,1427
32749
Metabolito - 11432 201 3,1952 16,1427
32701
urato 200 3,1486 15,9669
32846
Metabolito - 11529 201 3,1224 15,8433
1299
tirosina 200 3,1159 15,8433
32544
Metabolito - 11227 201 3,1019 15,7905
32564
Metabolito - 11247 201 2,9040 15,0281
32517
Metabolito-11203 200 2,9012 15,0281
ID
COMPUESTO Biblioteca LogWorth Candidato G^2
32808
Metabolito - 11491 201 2,8993 14,9830
33012
Metabolito - 11674 200 2,8909 14,9830
31787
ácido 3-carboxil-4-metil-5-propil-2-furanpropanoico 201 2,8894 14,9830
20699
eritritol 50 2,8894 14,9830
32110
Metabolito-11086 50 2,8894 14,9830
12783
Metabolito - 3101 50 2,8894 14,9830
19402
Metabolito - 6346 50 2,8894 14,9830
18497
taurocolato 201 2,6891 13,9546
59
histidina 201 2,6508 14,0671
12774
Metabolito - 3094 50 2,6508 14,0671
32682
Metabolito - 11365 201 2,6217 13,9546
33227
Metabolito - 11882 201 2,5727 13,7651
15990
glicerofosforilcolina (GPC) 200 2,5636 13,7298
32547
Metabolito - 11230 201 2,5131 13,5334
32497
X10c undecanoato 201 2,4846 13,4226
32549
Metabolito - 02269 201 2,4738 13,3217
32552
Metabolito - 11235 201 2,4690 13,3619
32385
Metabolito - 11180 50 2,4078 13,0513
32621
Metabolito - 11304 200 2,3922 13,0617
20488
glucosa 50 2,3922 13,0617
16865
Metabolito - 4522 50 2,3036 12,7022
64
fenilalanina 200 2,2026 12,3145
32637
Metabolito-11320 201 2,1916 12,2709
32813
Metabolito - 11496 201 2,1916 12,2709
32854
Metabolito - 11537 200 2,1916 12,2709
ID
COMPUESTO Biblioteca LogWorth Candidato G^2
27256
Metabolito - 10500 50 2,1916 12,2709
32346
glicoquenodesoxicolato 201 2,1443 11,9681
32656
Metabolito - 11339 201 2,0482 11,6993
16650
Metabolito - 4360 50 2,0204 11,5103
607
urocanato 200 2,0135 10,2237
32559
Metabolito-11242 201 2,0012 11,5103

Tabla 11. Biomarcadores PR de Esteatosis vs Esteatohepatitis (EHNA) vs Control.
ID
COMPUESTO Biblioteca LogWorth Candidato G^2
2734
gamma glutamiltirosina 200 8,7610 39,6669
33073
Metabolito - 11728 200 6,9137 33,1250
32868
glicocolato 201 5,6594 28,4476
32412
butirilcarnitina 200 5,5221 27,9670
15140
quinurenina 200 5,4648 27,7794
32322
glutamato 50 5,4202 27,6254
18497
taurocolato 201 4,8465 25,6695
32748
Metabolito - 11431 201 4,5458 24,5681
32393
glutamilvalina 200 4,4325 24,1102
1299
tirosina 200 4,4170 24,1102
15753
hipurato 201 4,2727 23,5947
32739
Metabolito - 11422 201 3,9941 22,5914
17028
Metabolito-4611 50 3,7736 21,7885
33420
gamma tocoferol 50 3,6961 21,4058
20699
eritritol 50 3,4424 20,5670
31489
Metabolito - 10914 50 3,4147 20,4362
32552
Metabolito - 11235 201 3,4135 20,4592
ID
COMPUESTO Biblioteca LogWorth Candidato G^2
32697
Metabolito - 11380 200 3,2207 19,7221
32519
Metabolito - 11205 200 3,2148 19,7148
32749
Metabolito - 11432 201 3,1735 19,5592
33362
gamma glutamilfenilalanina 200 3,1317 19,2619
32846
Metabolito - 11529 201 3,1175 19,1830
32550
Metabolito - 02272_201 201 3,0781 19,1976
32808
Metabolito - 11491 201 2,9873 18,6852
32547
Metabolito - 11230 201 2,9438 18,6852
16308
Metabolito - 4147 50 2,8966 18,4875
32548
Metabolito - 11231 201 2,8923 18,4875
33133
Metabolito - 11788 200 2,8602 18,3636
32735
Metabolito - 01911_200 200 2,8564 18,1394
32863
Metabolito-11546 201 2,8379 18,1709
32881
Metabolito - 11564 201 2,8103 18,1709
33242
Metabolito - 11897 201 2,8094 18,1676
32675
Metabolito - 03951_200 200 2,7808 18,0072
59
histidina 201 2,7802 18,0542
32632
Metabolito - 11315 200 2,7704 17,9993
27718
creatina 200 2,6480 17,5391
32701
urato 200 2,6462 17,5321
584
manosa 50 2,6462 17,5321
32599
Metabolito - 11282 201 2,5826 17,2822
32559
Metabolito - 11242 201 2,5799 17,2717
32497
10c undecenoato 201 2,5001 16,9560
606
uridina 201 2,4079 16,5890
ID
COMPUESTO Biblioteca LogWorth Candidato G^2
32621
Metabolito - 11304 200 2,4027 16,5683
12783
Metabolito - 3101 50 2,4027 16,5683
32564
Metabolito - 11247 201 2,3935 16,4772
32517
Metabolito - 11203 200 2,3800 16,4772
12763
Metabolito - 3083 50 2,3715 16,2338
32544
Metabolito - 11227 201 2,3539 16,3727
19490
Metabolito - 6488 50 2,3240 16,2338
12067
undecanoato 201 2,3176 16,2264
32854
Metabolito - 11537 200 2,2206 15,7775
32813
Metabolito - 11496 201 2,2068 15,7775
32945
Metabolito - 11628 201 2,1937 15,7238
32110
Metabolito-11086 50 2,1659 15,6103
19402
Metabolito - 6346 50 2,1659 15,6103
31787
ácido 3-carboxil-4-metil-5-propil-2-furanpropanoico 201 2,1292 15,4023
32729
Metabolito - 11412 200 2,1279 15,4545
32549
Metabolito - 02269 201 2,0837 15,0750
15990
glicerofosforilcolina GPC 200 2,0516 15,1396
33012
Metabolito - 11674 200 2,0280 14,9832
32385
Metabolito - 11180 50 2,0268 14,8693
Ejemplo 4 Biomarcadores y sexo
Los biomarcadores se descubrieron (1) analizando muestras de plasma sanguíneo de diferentes grupos de sujetos humanos femeninos y de diferentes grupos de sujetos humanos masculinos para determinar los niveles de 5 metabolitos en las muestras y a continuación (2) analizando estadísticamente los resultados para determinar
aquellos metabolitos que estaban presentes diferencialmente en los dos grupos.
Para los hombres, las muestras de plasma utilizadas para el análisis 7 muestras de control que procedían de sujetos sanos, 6 muestras de pacientes con esteatosis y 8 muestras de pacientes con esteatohepatitis. Para las mujeres, las muestras de plasma utilizadas para el análisis fueron 18 muestras de control que procedían de sujetos sanos, 5
10 muestras de pacientes con esteatosis y 16 muestras de pacientes con esteatohepatitis. Tanto en los estudios con hombres como con mujeres, una vez que se determinaron los niveles de metabolitos, se analizaron los datos utilizando pruebas de significación (ANOVA, ANCOVA, Wilcoxon).
El ANOVA se utilizó para identificar diferencias significativas en los niveles medios de metabolitos entre dos poblaciones (esto es, Esteatosis vs. Control, Esteatohepatitis vs. Control, Esteatosis vs. Esteatohepatitis).
Biomarcadores:
Según se enumera en las Tablas 12 (sujetos masculinos) y 13 (sujetos femeninos), se descubrieron biomarcadores
5 que estaban presentes diferencialmente entre las muestras de plasma de pacientes con esteatosis y de sujetos de Control, se descubrieron biomarcadores que estaban presentes diferencialmente entre las muestras de plasma de pacientes con esteatohepatitis y de sujetos de Control y se descubrieron biomarcadores que estaban presentes diferencialmente entre las muestras y plasma de sujetos con esteatosis y las muestras de plasma de sujetos con esteatohepatitis (esto es, EHNA).
10 Las Tablas 12 y 13 incluyen, para cada biomarcador enumerado, el valor p y el valor q determinados en los análisis estadísticos de los datos relativos a los biomarcadores en el nivel medio de esteatosis en comparación con el nivel medio de control, el nivel medio de EHNA en comparación con el nivel medio de control, y el nivel medio de esteatosis en comparación con el nivel medio de EHNA. Biblioteca indica la biblioteca química que se utilizó para identificar los compuestos. El número 50 hace referencia a la biblioteca GC y el número 61 se refiere a la biblioteca
15 LC. ID Comp se refiere al número de identificación para el compuesto en la base de datos interna de compuestos químicos de los autores de la presente invención.
La Tabla 12 enumera los biomarcadores para hombre, incluyendo, para cada biomarcador, el valor p y el valor q para las comparaciones especificadas de grupos como se ha descrito anteriormente.
20 esteatohepatitis (EHNA) en comparación con el Control y sujetos con Esteatosis en comparación con esteatohepatitis (EHNA).

Tabla 12. Biomarcadores de sujetos masculinos con Esteatosis en comparación con sujetos de Control, sujetos con
COMPUESTO
COMP_ID BIBLIOTECA Control vs. EHNA Control vs. ESTEATOSIS EHNA vs. ESTEATOSIS
valor p
valor q valor p valor q valor p valor q
estearato
1358 50 4,00E-04 0,0633 0,0128 0,2286 0,3457 0,7893
palmitato
1336 50 9,00E-04 0,0633 0,0091 0,1836 0,5612 0,8289
isoleucina
1125 50 0,0011 0,0633 0,0025 0,1264 0,9729 0,8893
glutamato
57 50 0,0011 0,0633 0,0305 0,2368 0,3124 0,7803
Metabolito-9033
22570 50 0,0021 0,0872 0,2901 0,66 0,0507 0,6206
Metabolito-3087
12767 50 0,0031 0,0872 0,1491 0,4771 0,1507 0,7628
valina
1649 50 0,0034 0,0872 0,0243 0,2368 0,5868 0,832
isoleucina
18118 50 0,0036 0,0872 0,0019 0,1264 0,6472 0,8475
glutamato
12751 50 0,0036 0,0872 0,0472 0,2804 0,4112 0,8022
Metabolito-4274
16511 50 0,0038 0,0872 0,106 0,3961 0,2349 0,7803
linoleato
1105 50 0,0049 0,0872 0,051 0,2862 0,4508 0,8145
leucina
60 50 0,0054 0,0872 0,0175 0,2368 0,8025 0,8527
Metabolito-5769
18706 61 0,0054 0,0872 0,0025 0,1264 0,626 0,8421
isocitrato
1113 61 0,0055 0,0872 0,094 0,3845 0,3151 0,7803
COMPUESTO
COMP_ID BIBLIOTECA Control vs. EHNA Control vs. ESTEATOSIS EHNA vs. ESTEATOSIS
valor p
valor q valor p valor q valor p valor q
Metabolito-2041
8509 61 0,0059 0,0872 0,0536 0,2922 0,4791 0,8182
Metabolito-2270
10247 61 0,0061 0,0872 0,0206 0,2368 0,7827 0,8519
Metabolito- 10932
31510 61 0,007 0,0872 0,0338 0,2455 0,6578 0,8475
alanina
1126 50 0,0072 0,0872 0,0298 0,2368 0,7063 0,8475
tirosina
12780 50 0,0073 0,0872 0,0272 0,2368 0,7393 0,8519
Metabolito-8214
21421 50 0,0085 0,0948 0,0925 0,3845 0,398 0,8022
glucosa
20488 50 0,0095 0,0948 0,0911 0,3845 0,4236 0,8022
Metabolito-10439
25609 50 0,0098 0,0948 0,0341 0,2455 0,7445 0,8519
Metabolito-1496
6847 61 0,0098 0,0948 0,9827 0,8655 0,0124 0,348
colina
15506 61 0,01 0,0948 0,6398 0,7767, 0,0429 0,6206
glutamina
1647 50 0,0116 0,1058 0,1325 0,4409 0,3566 0,7893
Metabolito-9855
24233 61 0,0121 0,1061 0,8754 0,8551 0,0105 0,3457
Metabolito-7187
20267 61 0,0145 0,1218 0,4129 0,698 0,1218 0,7385
Metabolito-5646
18591 61 0,1272 0,4187 0,0021 0,2874
ácido 3-metil-2oxobutírico
21047 61 0,0164 0,1281 0,1039 0,3961 0,5063 0,8289
Metabolito-4096
16186 61 0,0169 0,1281 0,1525 0,4771 0,3895 0,8005
Metabolito-9727
24077 50 0,0185 0,1342 0,0298 0,2368 0,9767 0,8893
Metabolito-1911
7933 61 0,0189 0,1342 0,6182 0,7691 0,0064 0,2874
La Tabla 13 enumera los biomarcadores para mujeres, incluyendo, para cada biomarcador, el valor p y el valor q para las comparaciones especificada de grupos como se ha descrito anteriormente.

Tabla 13. Biomarcadores de sujetos femeninos con Esteatosis en comparación con sujetos de Control, sujetos con esteatohepatitis (EHNA) en comparación con el Control y sujetos con Esteatosis en comparación con esteatohepatitis (EHNA).
COMPUESTO
COMP _ID LIB _ID Control vs. EHNA Control vs. ESTEATOSIS EHNA vs. ESTEATOSIS
valor p
valor q valor p valor q valor p valor q
glutamato
57 50 1,73E-08 3,22E-06 0,0023 0,0904 0,2067 0,6864
urato
1604 50 3,32E-07 3,08E-05 0,0278 0,2958 0,1005 0,6474
glutamato
12751 50 8,91E-07 1,00E-04 0,0036 0,0977 0,4745 0,6864
Metabolito-5769
18706 61 4,24E-06 2,00E-04 8,00E04 0,0661 0,9332 0,7199
isocitrato
1113 61 8,14E-06 3,00E-04 0,255 0,4932 0,0342 0,4905
Metabolito-10026
24285 61 1,94E-05 6,00E-04 0,0231 0,2804 0,4083 0,6864
glicocolato
18476 61 2,91E-05 8,00E-04 0,0172 0,2557 0,5271 0,6864
L-quinurenina
15140 61 1,00E-04 0,0013 0,9893 0,73 0,0051 0,432
Metabolito-3330
13600 61 1,00E-04 0,0016 0,1335 0,3923 0,1878 0,6864
leucina
60 50 1,00E-04 0,0016 0,104 0,3726 0,241 0,6864
valina
1649 50 1,00E-04 0,0019 0,0938 0,3726 0,288 0,6864
isoleucina
1125 50 1,00E-04 0,0013 0,0574 0,3465 0,3262 0,6864
Metabolito-1110
5687 61 1,00E-04 0,0016 0,0032 0,0977 0,8124 0,6937
Metabolito-10951
31595 61 2,00E-04 0,0026 0,2368 0,4917 0,1503 0,6474
Metabolito-4522
16865 50 2,00E-04 0,0021 0,0689 0,359 0,3877 0,6864
Metabolito-4274
16511 50 2,00E-04 0,0021 0,0431 0,3397 0,516 0,6864
Isobar-47-incluye-ácido tauroquenodesoxicólico-y-ácido taurodesoxicólico
18882 61 2,00E-04 0,0021 0,032 0,3148 0,5941 0,6868
tirosina
1299 61 3,00E-04 0,0026 0,0548 0,3465 0,492 0,6864
alanina
1126 50 4,00E-04 0,0036 0,1507 0,414 0,2717 0,6864
tiroxina
2761 61 5,00E-04 0,0043 0,2645 0,5014 0,1712 0,6644
Metabolito-2347
10551 61 5,00E-04 0,0048 0,0022 0,0904 0,4853 0,6864
COMPUESTO
COMP _ID LIB _ID Control vs. EHNA Control vs. ESTEATOSIS EHNA vs. ESTEATOSIS
valor p
valor q valor p valor q valor p valor q
Metabolito-10812
30821 50 7,00E-04 0,0058 0,1583 0,421 0,3247 0,6864
Metabolito-2269
10245 61 7,00E-04 0,0056 0,0025 0,0904 0,4809 0,6864
glutamina
1647 50 9,00E-04 0,0067 0,1091 0,3726 0,458 0,6864
meso-eritritol
20699 50 0,001 0,0067 0,1995 0,463 0,2975 0,6864
Metabolito-3183
13214 61 0,001 0,0067 0,106 0,3726 0,4805 0,6864
docosahexaenoato-DHA
19323 50 0,001 0,0067 0,0405 0,3397 0,7884 0,6896
Metabolito-4627
17068 61 0,001 0,0067 0,0268 0,2958 0,9307 0,7199
Isobar-66-incluye-ácido glicoquenodesoxicólico-ácido glicodesoxicólico
22803 61 0,0011 0,0067 0,0519 0,3465 0,7198 0,6896
5-oxoprolina
1494 50 0,0012 0,0076 0,1022 0,3726 0,5195 0,6864
Metabolito-10589
27801 61 0,0013 0,0078 0,2598 0,4988 0,2575 0,6864
manosa
584 50 0,0013 0,0078 0,0435 0,3397 0,8177 0,6937
Metabolito-4360
16650 50 0,0015 0,0083 0,6433 0,6655 0,0796 0,5826
gamma-L-glutamil-L-tirosina
2734 61 0,0016 0,009 0,3615 0,5823 0,1942 0,6864
Metabolito-1086
5628 61 0,0017 0,0092 0,6934 0,6655 0,0743 0,5826
fenilalanina
64 61 0,0019 0,0095 0,1746 0,4408 0,4085 0,6864
lactato
527 50 0,0019 0,0095 0,1018 0,3726 0,586 0,6868
araquidonato
1110 50 0,002 0,0098 0,8148 0,6934 0,0194 0,4834
Metabolito-7187
20267 61 0,0021 0,0098 0,747 0,6811 0,0705 0,5824
Metabolito-1914
7941 61 0,0021 0,0098 0,0075 0,1505 0,5693 0,6868
Metabolito-3109
12791 50 0,0024 0,0109 0,783 0,6934 0,0195 0,4834
tirosina
12780 50 0,0031 0,0138 0,0321 0,3148 0,9228 0,7184
xantina
3147 61 0,0032 0,0138 0,2695 0,5014 0,3371 0,6864
Metabolito-1496
6847 61 0,0035 0,0149 0,3752 0,5823 0,005 0,432
COMPUESTO
COMP _ID LIB _ID Control vs. EHNA Control vs. ESTEATOSIS EHNA vs. ESTEATOSIS
valor p
valor q valor p valor q valor p valor q
Metabolito-2041
8509 61 0,0037 0,0154 0,3041 0,5383 0,3177 0,6864
ácido 3-4-5-trimetoxicinámico
18291 61 0,0045 0,0183 0,0182 0,2557 0,6793 0,6896
Metabolito-3951
15529 61 0,0049 0,0192 0,0586 0,3465 0,9515 0,7253
Metabolito-3994
16016 61 0,005 0,0192 0,0249 0,2887 0,7558 0,6896
Metabolito-3094
12774 50 0,0055 0,0209 0,6697 0,6655 0,0218 0,4834
Metabolito-9855
24233 61 0,0058 0,0216 0,124 0,3816 0,7024 0,6896
Metabolito-5726
18657 61 0,006 0,022 0,7399 0,6781 0,1182 0,6474
glicerol
15122 50 0,0065 0,0229 0,0928 0,3726 0,8347 0,6975
Metabolito-2395
10715 61 0,0066 0,0229 0,0016 0,0904 0,1741 0,6654
Metabolito-4986
17627 50 0,0067 0,0229 0,1963 0,4608 0,5502 0,6868
ácido 3-metil-2-oxobutírico
21047 61 0,0069 0,0234 0,0928 0,3726 0,8462 0,6991
Metabolito-2259
10156 61 0,0071 0,0235 0,6427 0,6655 0,1628 0,6474
Metabolito-3230
13296 61 0,0072 0,0235 0,6656 0,6655 0,1545 0,6474
palmitato
1336 50 0,0075 0,0237 0,3757 0,5823 0,3312 0,6864
Metabolito-1911
7933 61 0,0075 0,0237 0,1736 0,4408 0,6183 0,6868
Metabolito-2291
10414 61 0,0079 0,0245 0,0098 0,1787 0,4316 0,6864
piruvato
599 61 0,0118 0,0359 0,9667 0,7259 0,0792 0,5826
Isobar-1-incluye-manosa-fructosaglucosa-galactosa-alfa-Lsorbopiranosa-Inositol-D-alosa-D- altrosa-D-psicona-L-gulosa-alo-inositol
10737 61 0,0126 0,0375 0,055 0,3465 0,8389 0,6975
Metabolito-2272
10286 61 0,0128 0,0375 0,0731 0,359 0,94 0,7208
lisina
1301 50 0,0132 0,0384 0,271 0,5014 0,5375 0,6864
uridina
606 61 0,0139 0,0397 0,1016 0,3726 0,9509 0,7253
Metabolito-2390
10672 61 0,0143 0,0402 0,0557 0,3465 0,8179 0,6937
Metabolito-9043
22600 50 0,0154 0,0427 0,0118 0,2006 0,375 0,6864
COMPUESTO
COMP _ID LIB _ID Control vs. EHNA Control vs. ESTEATOSIS EHNA vs. ESTEATOSIS
valor p
valor q valor p valor q valor p valor q
Metabolito-2329
10544 61 0,0157 0,0429 0,3917 0,5823 0,4157 0,6864
Metabolito-9033
22570 50 0,0163 0,0437 0,0719 0,359 0,883 0,7052
Metabolito-4251
16496 50 0,018 0,0478 0,7335 0,6781 0,1998 0,6864
Metabolito-4276
16518 50 0,0183 0,0479 0,3795 0,5823 0,4523 0,6864
Metabolito-10932
31510 61 0,02 0,0515 0,6694 0,6655 0,2414 0,6864
Metabolito-3323
13557 61 0,0221 0,0561 0,4812 0,657 0,3823 0,6864
Metabolito-3016
12644 50 0,0229 0,0575 0,0038 0,0977 0,1636 0,6474
Metabolito-1981
8210 61 0,0248 0,0613 0,2371 0,4917 0,7138 0,6896
Metabolito-3088
12768 50 0,0272 0,0663 0,8115 0,6934 0,0842 0,5956
Metabolito-3087
12767 50 0,0295 0,0712 0,2356 0,4917 0,7535 0,6896
Metabolito-10797
30728 61 0,0309 0,0735 0,7815 0,6934 0,2311 0,6864
Metabolito-3100
12782 50 0,0316 0,0742 0,0624 0,3465 0,6928 0,6896
2-amino butirato
12645 50 0,033 0,0756 0,3666 0,5823 0,5717 0,6868
treonina
1284 50 0,033 0,0756 0,1048 0,3726 0,8734 0,7052
Metabolito-3707
14837 61 0,0338 0,0761 0,019 0,2557 0,3591 0,6864
Metabolito-1834
7650 61 0,0343 0,0761 4,00E04 0,0646 0,0289 0,4905
Metabolito-10785
30633 61 0,0344 0,0761 0,0612 0,3465 0,6678 0,6896
Metabolito-2139
9130 61 0,0349 0,0762 0,4999 0,6647 0,4382 0,6864
Metabolito-4613
17033 61 0,0375 0,0808 0,4934 0,663 0,4563 0,6864
gluconato
587 50 0,039 0,083 0,9105 0,7087 0,1966 0,6864
N-acetilglicina
27710 50 0,0396 0,083 0,1303 0,3923 0,9192 0,7177
Metabolito-10507
27275 50 0,0398 0,083 0,8432 0,6996 0,1135 0,6474
treonato
27738 50 0,0404 0,0834 0,5847 0,6655 0,3906 0,6864
p-hidroxifenil lactato-HPLA
1431 50 0,0411 0,0837 0,7669 0,6934 0,0954 0,6428
COMPUESTO
COMP _ID LIB _ID Control vs. EHNA Control vs. ESTEATOSIS EHNA vs. ESTEATOSIS
valor p
valor q valor p valor q valor p valor q
palmitoleato
1507 50 0,0427 0,0854 0,6825 0,6655 0,3285 0,6864
Metabolito-3995
16019 61 0,0428 0,0854 0,6036 0,6655 0,3849 0,6864
Metabolito-2231
9905 61 0,0463 0,0913 0,3818 0,5823 0,6207 0,6868
Metabolito-3165
13142 61 0,0481 0,0939 0,0439 0,3397 0,4996 0,6864
estearato
1358 50 0,0486 0,0939 0,7225 0,6781 0,3214 0,6864
Metabolito-9726
24076 50 0,0504 0,0954 0,6042 0,6655 0,0688 0,5824
serina
12663 50 0,0504 0,0954 0,578 0,6655 0,4331 0,6864
Metabolito-5774
18723 61 0,0514 0,0964 0,8537 0,6996 0,254 0,6864
Metabolito-10933
31518 50 0,0578 0,1062 0,2685 0,5014 0,0197 0,4834
Metabolito-2321
10501 61 0,0918 0,1468 0,3393 0,5814 0,0402 0,4905
Isobar-60-incluye-ácido s-2-hidroxibutírico-ácido 2-hidroxiisobutírico
22261 61 0,1198 0,1696 0,2887 0,5228 0,0389 0,4905
treonina
12666 50 0,131 0,18 0,3057 0,5383 0,0454 0,5204
Metabolito-2821
11923 61 0,1533 0,1987 5,00E04 0,0646 0,0098 0,4834
creatina
27718 61 0,1942 0,2211 0,1218 0,3816 0,0183 0,4834
paraxantina
18254 61 0,2253 0,247 0,0823 0,3726 0,013 0,4834
Metabolito-3443
14125 61 0,2434 0,258 0,1778 0,4408 0,0371 0,4905
fructosa
577 50 0,2708 0,2732 0,2032 0,4674 0,0487 0,5204
teofilina
18394 61 0,3262 0,301 0,15 0,414 0,0399 0,4905
alfa-ceto-glutarato
528 61 0,364 0,3232 0,0187 0,2557 0,004 0,432
Metabolito-6346
19402 50 0,4153 0,3451 0,0919 0,3726 0,029 0,4905
Metabolito-8506
21762 61 0,4328 0,3491 0,0711 0,359 0,0227 0,4834
Metabolito-1667
7132 61 0,4557 0,3628 0,1102 0,3726 0,0398 0,4905
cafeína
569 61 0,462 0,3658 0,036 0,3397 0,0114 0,4834
COMPUESTO
COMP _ID LIB _ID Control vs. EHNA Control vs. ESTEATOSIS EHNA vs. ESTEATOSIS
valor p
valor q valor p valor q valor p valor q
Metabolito-4238
16471 61 0,9278 0,51 0,0226 0,2804 0,0282 0,4905
Ejemplo 5 Características analíticas
Caracterización analítica de compuestos biomarcadores anónimos:
La Tabla 14 de más abajo incluye características analíticas de cada una de las isobaras y los metabolitos anónimos
5 enumerados en las Tablas 1-3 y 8-13 anteriores. La tabla incluye, para cada Metabolito enumerado, el ID del Metabolito (ID), el tiempo de retención (TR), el índice de retención (IR), la masa, la biblioteca, y la polaridad obtenida utilizando los métodos analíticos descritos anteriormente. "ID del Metabolito" se refiere al identificador único para ese compuesto en la base de datos interna de la biblioteca química de los autores de la presente invención. "Masa" se refiere a la masa del isótopo C12 del ión parental utilizado en la cuantificación del compuesto. Los valores para la
10 "Biblioteca" proporcionan una indicación del método analítico utilizado para la cuantificación: "50" indica GC-MS y "61", "200" y "201" indica LC-MS. "Polaridad" indica la polaridad del ión cuantitativo que es positiva (+) o negativa (-).

Tabla 14. Características Analíticas de los Metabolitos Anónimos.
ID
Biomarcador Biblioteca TR IR MASA Polaridad
1882
Isobar 47 incluye ácido tauroquenodesoxicólico y ácido taurodesoxicólico 61 15,51 15700,0 498,4 -
5628
Metabolito - 1086 61 4,56 4811,0 294,1 +
6398
Metabolito - 1335 61 8,74 9162,2 367,2 +
6847
Metabolito-1496 61 1,53 1562,0 133,0 -
7933
Metabolito-1911 61 11,42 11799,6 464,1 +
10501
Metabolito- 2321 61 13,44 12940,0 314,3 +
10629
Metabolito- 2386 61 11,94 12150,0 539,2 -
10737
Isobar 1 incluye manosa, fructosa, glucosa, galactosa, alfa-L-sorbopiranosa, Inositol, D-alosa, D-(+)-altrosa, D-psicona, L-(+)-gulosa, alo-inositol 61 1,45 1481,0 215,0 -
11923
Metabolito - 2821 61 6,80 7980,0 119,1 +
12593
Metabolito-2973 50 4,74 1213,4 281 +
12604
Metabolito-2981 50 5,21 1265,2 210,9 +
12626
Metabolito-3003 50 6,79 1446,6 218,1 +
12754
Metabolito-3075 50 10,36 1857,9 204 +
12757
Metabolito-3078 50 10,65 1887 203,1 +
ID
Biomarcador Biblioteca TR IR MASA Polaridad
12761
Metabolito-3081 50 10,89 1911,5 204 +
12763
Metabolito-3083 50 10,94 1916,1 204 +
12769
Metabolito-3089 50 11,28 1951,5 116,9 +
12770
Metabolito-3090 50 11,31 1955 243,1 +
12771
Metabolito-3091 50 11,41 1966,2 232,1 +
12774
Metabolito-3094 50 11,55 1980,6 299 +
12781
Metabolito-3099 50 11,77 2005,2 204 +
12782
Metabolito-3100 50 11,85 2013,2 204 +
12783
Metabolito-3101 50 11,93 2022,2 290 +
12785
Metabolito-3103 50 12,09 2039,8 290,1 +
12789
Metabolito-3107 50 12,21 2053,2 204,1 +
12790
Metabolito-3108 50 12,24 2056,5 246 +
13142
Metabolito-3165 61 8,38 8472,2 265,0 +
13214
Metabolito - 3183 61 9,37 9441,0 295,2 +
13296
Metabolito - 3230 61 3,10 3043,2 245,0 +
13557
Metabolito - 3323 61 14,47 14696,5 624,4 -
13600
Metabolito - 3330 61 14,06 14292,2 514,3 -
15529
Metabolito-3951 61 8,41 8705,4 367,1 +
16016
Metabolito- 3994 61 1,63 1640,4 427,0 +
16019
Metabolito- 3995 61 2,19 2230,0 207,7 -
16138
Metabolito-4080 50 14,02 2270,2 299 +
16308
Metabolito-4147 50 10,07 1767,1 290,2 +
16337
Metabolito-4167 61 11,03 10920,4 286,2 +
16650
Metabolito-4360 50 9,15 1678,2 347,2 +
16665
Metabolito-4364 50 10,66 1852,4 232 +
ID
Biomarcador Biblioteca TR IR MASA Polaridad
16666
Metabolito-4365 50 11,05 1892,9 204 +
16819
Metabolito-4496 50 6,76 1398,2 204 +
16829
Metabolito-4503 50 8,39 1589 227,2 +
16865
Metabolito-4522 50 12,26 2025,4 217,1 +
16959
Metabolito-4595 50 5,65 1274,4 130 +
17028
Metabolito-4611 50 8,07 1546,6 292,1 +
17033
Metabolito-4613 61 12,73 12778,0 541,4 -
17068
Metabolito - 4627 61 10,84 11034,9 591,3 +
17304
Metabolito-4759 61 11,80 11906,0 310,2 +
17627
Metabolito-4986 50 11,56 1956,4 204,1 +
18232
Metabolito-5403 50 5,92 1300,2 319 +
18591
Metabolito- 5646 61 8,96 8750,0 228,0 -
18657
Metabolito- 5726 61 14,05 13757,0 417,3 -
18706
Metabolito - 5769 61 11,12 10753,2 485,2 -
18868
Metabolito-5847 50 12,35 2040 288,2 +
18929
Metabolito-5907 50 8,69 1643,2 229,1 +
19363
Metabolito-6227 50 5 1210,5 196,1 +
19368
Metabolito-6267 50 9,32 1704,5 257,1 +
19370
Metabolito-6268 50 9,91 1773,8 271,1 +
19374
Metabolito-6270 50 11,35 1929,6 320,2 +
19402
Metabolito-6346 50 8 1550,8 263,2 +
19490
Metabolito-6488 50 12,25 2021,7 204,1 +
19985
Metabolito-6957 50 11,71 1966 290,1 +
20267
Metabolito - 7187 61 8,38 8500,0 328,0 +
20950
Metabolito-7846 50 5,1 1208,1 145,1 +
ID
Biomarcador Biblioteca TR IR MASA Polaridad
21418
Isobar 56 - pipecolato; ácido aminociclopentanocarboxílico 61 2,45 2850,0 130,1 +
21762
Metabolito - 8506 61 8,92 8811,0 475,1 +
22261
Isobar 60 incluye ácido (s)-2-hidroxibutírico, ácido 2-hidroxiisobutírico 61 4,26 4725,0 148,9 -
24233
Metabolito - 9855 61 11,85 11605,3 462,2 -
24285
Metabolito - 10026 61 9,47 9300,3 259,1 -
27801
Metabolito - 10589 61 15,43 17536,8 619,3 -
30633
Metabolito - 10785 61 11,49 12073,4 363,0 +
30728
Metabolito - 10797 61 10,92 11563,3 352,2 -
31510
Metabolito -10932 61 11,54 11928,0 190,0 +
31529
Metabolito-10941 61 3,60 4101,0 191,8 +
32514
Metabolito-11200 200 5,62 5637 496,4 +
32516
Metabolito-11202 200 5,8 5823 524,4 +
32517
Metabolito-11203 200 5,65 5665 522,4 +
32518
Metabolito-11204 200 5,26 5263 229,2 +
32519
Metabolito-11205 200 5,55 5558 520,4 +
32520
Metabolito-11206 200 0,59 575 138,8 +
32545
Metabolito-11228 201 1,15 1136 278,1 -
32547
Metabolito-11230 201 1,44 1438 278,1 -
32548
Metabolito-11231 201 1,47 1471 330 -
32549
Metabolito-02269 201 1,55 1551 255,1 -
32550
Metabolito-02272 201 1,97 1958 189 -
32551
Metabolito-11234 201 2,01 2001 334,1 -
32552
Metabolito-11235 201 2,04 2033 326,1 -
32553
Metabolito-03832 201 2,2 2199 173,1 -
ID
Biomarcador Biblioteca TR IR MASA Polaridad
32557
Metabolito-06126 201 2,69 2684 203,1 -
32559
Metabolito-11242 201 2,96 2958 360 -
32560
Metabolito-07765 201 3,71 3705 245,1 -
32561
Metabolito-11244 201 3,78 3771 224,2 -
32562
Metabolito-11245 201 3,91 3902 238,3 -
32563
Metabolito-11246 201 3,94 3930 143,2 -
32564
Metabolito-11247 201 3,94 3932 213,1 -
32566
Metabolito-11249 200 1,24 1271 280,1 +
32567
Metabolito-11250 200 1,3 1339 150,2 +
32571
Metabolito-11254 200 2,05 2095 328,1 +
32572
Metabolito-11255 200 2,38 2442 247,1 +
32575
Metabolito-11258 200 2,89 2941 362 +
32578
Metabolito-11261 200 3,69 3732 286,2 +
32587
Metabolito-02249 201 4,03 4025 267,2 -
32588
Metabolito-01327 201 4,25 4242 583,2 -
32590
Metabolito-11273 201 4,56 4552 369,2 -
32593
Metabolito-02036 200 4,94 4985 616,2 +
32596
Metabolito-02250 200 5,14 5158 286,2 +
32599
Metabolito-11282 201 4,77 4763 254,8 -
32602
Metabolito-11285 200 5,28 5260 288,1 +
32609
Metabolito-01345 201 4,9 4887 369,2 -
32616
Metabolito-11299 201 4,9 4893 507,2 -
32619
Metabolito-11302 201 5,01 4998 397,3 -
32620
Metabolito-11303 201 5,02 5015 512,3 -
32621
Metabolito-11304 200 0,8 801 217,1 +
ID
Biomarcador Biblioteca TR IR MASA Polaridad
32625
Metabolito-11308 201 5,15 5133 365,3 -
32631
Metabolito-11314 200 0,64 634 243 +
32632
Metabolito-11315 200 1,19 1210 130,2 +
32634
Metabolito-11317 201 5,81 5703 219,3 -
32635
Metabolito-11318 201 5,81 5699 476,3 -
32636
Metabolito-11319 201 5,81 5700 269,4 -
32637
Metabolito-11320 201 5,85 5740 593,9 -
32638
Metabolito-11321 201 6,15 5997 569,9 -
32641
Metabolito-11324 201 6,24 6075 596 -
32643
Metabolito-11326 201 6,35 6160 213,2 -
32644
Metabolito-11327 200 5,16 5176 269,2 +
32648
Metabolito-11331 201 0,69 686 164,2 -
32651
Metabolito-11334 200 0,96 982 259,1 +
32652
Metabolito-11335 200 0,97 991 229,2 +
32654
Metabolito-11337 200 1 1020 160,2 +
32656
Metabolito-11339 201 0,69 689 156,2 -
32670
Metabolito-11353 200 0,8 811 203,2 +
32671
Metabolito-11354 200 0,76 770 146,2 +
32672
Metabolito-02546 200 0,75 764 129,2 +
32675
Metabolito-03951 200 1,87 1912 367,1 +
32682
Metabolito-11365 201 5,61 5527 303,3 -
32689
Metabolito-11372 201 5,35 5303 467,4 -
32691
Metabolito-11374 200 0,69 690 370,9 +
32692
Metabolito-11375 200 0,73 732 309,1 +
32694
Metabolito-11377 200 0,77 770 249,2 +
ID
Biomarcador Biblioteca TR IR MASA Polaridad
32696
Metabolito-11379 201 5,65 5566 267,3 -
32697
Metabolito-11380 200 1,04 1053 339,8 +
32698
Metabolito-11381 200 1,11 1126 186,2 +
32699
Metabolito-11382 200 1,16 1180 250,8 +
32702
Metabolito-11385 200 1,38 1430 312,1 +
32703
Metabolito-11386 200 1,47 1525 344,1 +
32704
Metabolito-11387 200 1,65 1699 294,1 +
32707
Metabolito-11390 200 2 2041 100,2 +
32709
Metabolito-03056 200 2,21 2264 185,2 +
32710
Metabolito-11393 200 2,34 2403 367,1 +
32717
Metabolito-11400 200 2,81 2855 710,1 +
32718
Metabolito-01342 200 2,8 2848 265,1 +
32722
Metabolito-11405 200 3,02 3075 264,8 +
32729
Metabolito-11412 200 3,78 3836 204,2 +
32732
Metabolito-11415 201 0,69 692 313,1 -
32734
Metabolito-10954 200 4,14 4229 288,2 +
32735
Metabolito-01911 200 4,26 4354 464,1 +
32738
Metabolito-11421 200 4,54 4634 314,2 +
32739
Metabolito-11422 201 0,89 884 151,1 -
32740
Metabolito-11423 201 1,05 1038 260,1 -
32741
Metabolito-11424 200 4,58 4664 227,1 +
32744
Metabolito-11427 201 1,16 1145 181,1 -
32746
Metabolito-11429 201 1,16 1151 245,1 -
32747
Metabolito-01142 201 1,19 1176 117,2 -
32748
Metabolito-11431 201 1,58 1575 330 -
ID
Biomarcador Biblioteca TR IR MASA Polaridad
32749
Metabolito-11432 201 1,89 1886 292,1 -
32751
Metabolito-11434 201 2,11 2107 370,1 -
32752
Metabolito-11435 201 2,14 2131 365,1 -
32753
Metabolito-09789 201 2,62 2613 153,1 -
32754
Metabolito-11437 201 2,89 2888 231 -
32755
Metabolito-11438 201 3,1 3092 241,2 -
32756
Metabolito-02276 201 3,35 3339 199,1 -
32757
Metabolito-11440 201 3,58 3571 246,3 -
32758
Metabolito-11441 201 3,78 3773 331,1 -
32759
Metabolito-11442 201 3,91 3902 331,1 -
32760
Metabolito-11443 201 3,92 3910 225,3 -
32761
Metabolito-11444 201 3,99 3983 541,2 -
32762
Metabolito-11445 201 4,01 3995 239,3 -
32764
Metabolito-11447 200 0,98 989 278,1 +
32767
Metabolito-11450 201 4,11 4103 224,2 -
32769
Metabolito-11452 201 4,12 4109 352,1 -
32776
Metabolito-11459 200 2,49 2545 246,2 +
32786
Metabolito-11469 200 3,82 3874 239,1 +
32787
Metabolito-11470 201 4,16 4151 525,2 -
32792
Metabolito-11475 201 4,25 4240 383,2 -
32793
Metabolito-11476 200 4,52 4616 189,1 +
32795
Metabolito-11478 201 4,3 4286 165,2 -
32797
Metabolito-11480 201 4,42 4406 229 -
32800
Metabolito-11483 201 4,45 4443 505,2 -
32802
Metabolito-11485 201 4,49 4478 378,2 -
ID
Biomarcador Biblioteca TR IR MASA Polaridad
32807
Metabolito-11490 201 4,77 4762 279,8 -
32808
Metabolito-11491 201 4,85 4846 567,3 -
32813
Metabolito-11496 201 5,58 5508 271,3 -
32814
Metabolito-11497 201 5,37 5324 233,3 -
32815
Metabolito-11498 201 5,78 5674 500,3 -
32822
Metabolito-11505 201 1,61 1614 101,2 -
32825
Metabolito-11508 201 2,97 2987 173,2 -
32827
Metabolito-11510 201 3,92 3925 385,2 -
32829
Metabolito-03653 200 0,82 826 144,2 +
32838
Metabolito-11521 200 3,71 3755 286,2 +
32839
Metabolito-11522 201 4,76 4754 313,2 -
32845
Metabolito-11528 200 4,74 4832 316,3 +
32846
Metabolito-11529 201 4,85 4845 624,3 -
32847
Metabolito-11530 201 4,87 4866 313,2 -
32848
Metabolito-11531 201 4,86 4850 391,3 -
32854
Metabolito-11537 200 5,14 5160 366,3 +
32855
Metabolito-11538 201 4,93 4920 311,3 -
32858
Metabolito-11541 201 4,99 4984 399 -
32863
Metabolito-11546 201 5,02 5015 448,4 -
32865
Metabolito-11548 201 5,09 5081 391,3 -
32866
Metabolito-11549 201 5,11 5093 339,3 -
32878
Metabolito-11561 201 1,26 1252 267,1 -
32879
Metabolito-11562 201 0,98 972 197,1 -
32880
Metabolito-11563 201 0,98 971 115,2 -
32881
Metabolito-11564 201 1,2 1188 177,1 -
ID
Biomarcador Biblioteca TR IR MASA Polaridad
32910
Metabolito-11593 201 0,79 790 189,2 -
32912
Metabolito-11595 201 0,92 919 665 -
32914
Metabolito-11597 201 1 991 665 -
32926
Metabolito-11609 201 1,48 1490 310,1 -
32945
Metabolito-11628 201 3,14 3133 360,1 -
32952
Metabolito-02277 201 3,61 3604 201,1 -
32954
Metabolito-06132 201 3,66 3655 321,1 -
32965
Metabolito-11648 201 4,84 4819 534,3 -
32970
Metabolito-11653 201 5,82 5686 331,3 -
32971
Metabolito-11654 200 2,53 2500 246,2 +
32978
Metabolito-11656 200 0,6 612 227 +
33012
Metabolito-11674 200 1,14 1151 189,1 +
33072
Metabolito-11727 200 0,71 709 241 +
33073
Metabolito-11728 200 0,8 804 427 +
33084
Metabolito-11739 200 3,15 3239 769 +
33131
Metabolito-11786 200 0,87 864 136 +
33132
Metabolito-11787 200 1,13 1126 148,1 +
33133
Metabolito-11788 200 1,17 1161 245 +
33138
Metabolito-11793 200 3,57 3634 601,1 +
33140
Metabolito-11795 200 1,46 1457 148,1 +
33154
Metabolito-11809 200 5,23 5248 381,5 +
33159
Metabolito-11814 200 2,39 2372 152,1 +
33163
Metabolito-11818 200 2,56 2535 146,1 +
33169
Metabolito-11824 201 1,4 1402 326,1 -
33171
Metabolito-11826 201 1,48 1489 194,1 -
ID
Biomarcador Biblioteca TR IR MASA Polaridad
33173
Metabolito-11828 201 1,69 1703 246,1 -
33174
Metabolito-11829 201 1,8 1813 230 -
33178
Metabolito-11833 201 1,97 1977 260,1 -
33183
Metabolito-11838 201 2,3 2314 276 -
33188
Metabolito-11843 201 2,69 2710 230,1 -
33190
Metabolito-11845 201 2,87 2891 615 -
33192
Metabolito-11847 201 3,05 3074 259,2 -
33194
Metabolito-11849 201 3,2 3229 266,2 -
33198
Metabolito-11853 201 3,59 3602 187,1 -
33203
Metabolito-11858 201 4,42 4400 437,1 -
33206
Metabolito-11861 201 4,63 4617 229,2 -
33209
Metabolito-11864 201 5,02 5012 280,9 -
33216
Metabolito-11871 200 5,25 5249 370,3 +
33219
Metabolito-11874 201 5,23 5199 197,3 -
33225
Metabolito-11880 201 5,44 5378 537,4 -
33227
Metabolito-11882 201 5,52 5445 301,3 -
33228
Metabolito-11883 200 5,54 5524 544,3 +
33232
Metabolito-11887 201 5,85 5736 307,4 -
33237
Metabolito-11892 201 0,71 710 367,1 -
33242
Metabolito-11897 201 1,69 1664 292,1 -
33248
Metabolito-11903 201 2,53 2484 283,1 -
33250
Metabolito-11905 201 4,44 4401 283,2 -
33252
Metabolito-11907 201 5,06 5036 313,3 -
33254
Metabolito-11909 201 5,3 5272 297,3 -
33258
Metabolito-11913 201 5,43 5402 275,3 -
ID
Biomarcador Biblioteca TR IR MASA Polaridad
33265
Metabolito-11920 200 0,68 686 268,1 +
33323
Metabolito-11977 200 3,21 3287 270,1 +
33366
Metabolito-12020 200 5,15 5178 424,4 +
33380
Metabolito-12029 201 0,68 683 329,1 -
Si bien la invención se ha descrito en detalle y con referencia a realizaciones específicas de la misma, resultará evidente para un experto en la técnica que se pueden realizar diversos cambios y modificaciones sin apartarse del alcance de la invención.

Claims (17)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Un método para diagnosticar si un sujeto tiene, o está predispuesto a, esteatohepatitis, que comprende:
    analizar una muestra biológica de un sujeto para determinar el nivel de glicocolato en la muestra, y
    comparar el nivel de glicocolato en la muestra con niveles de referencia de glicocolato positivos para esteatohepatitis y/o negativos para esteatohepatitis con el fin de diagnosticar si el sujeto tiene, o está predispuesto a, esteatohepatitis.
  2. 2. El método de la reivindicación 1, que comprende adicionalmente analizar la muestra biológica para determinar el nivel o los niveles de uno o más biomarcadores adicionales para la esteatohepatitis en la muestra, en donde los uno
    o más biomarcadores adicionales se seleccionan de las Tablas 1, 3, 4B, 6B, 9, 10, 11, 12, 13, y/o la Figura 2 y/o 3, y
    comparar el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores adicionales en la muestra con niveles de referencia de los uno o más biomarcadores adicionales positivos para esteatohepatitis y/o negativos para esteatohepatitis con el fin de diagnosticar si el sujeto tiene, o está predispuesto a, esteatohepatitis.
  3. 3.
    El método de la reivindicación 2, en donde el método es un método para diagnosticar si un sujeto tiene esteatohepatitis y en donde los uno o más biomarcadores adicionales se seleccionan entre los biomarcadores de las Tablas 1, 3, 4B, 6B, 9, 10, 11, 12, 13, y/o la Figura 2 y/o 3 que tienen valores p de menos de 0,05 y/o los biomarcadores de las Tablas 1, 3, 4B, 6B, 9, 10, 11, 12, 13, y/o la Figura 2 y/o 3 que tienen valores q de menos de 0,10.
  4. 4.
    El método de la reivindicación 2, en donde el método es un método para diagnosticar si un sujeto tiene esteatohepatitis y en donde la muestra analizada es de un sujeto masculino y los biomarcadores se seleccionan de la Tabla 12.
  5. 5.
    El método de la reivindicación 2, en donde el método es un método para diagnosticar si un sujeto tiene esteatohepatitis y en donde la muestra analizada es de un sujeto femenino y los biomarcadores se seleccionan de la Tabla 13.
  6. 6.
    El método de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el método es un método para diagnosticar si un sujeto tiene esteatohepatitis y en donde la muestra se analiza utilizando una o más técnicas seleccionadas del grupo que consiste de espectrometría de masas, reacciones enzimáticas o bioquímicas, química clínica, ELISA, y unión de anticuerpos.
  7. 7.
    Un método de acuerdo con la reivindicación 2, en donde el método es un método para determinar si un sujeto está predispuesto a desarrollar esteatohepatitis y
    el nivel o los niveles de glicocolato y los uno o más biomarcadores adicionales en la muestra se comparan con niveles de referencia de glicocolato y los uno o más biomarcadores adicionales positivos para esteatohepatitis y/o negativos para esteatohepatitis con el fin de determinar si el sujeto está predispuesto a desarrollar esteatohepatitis.
  8. 8.
    Un método para verificar el progreso/regresión de la esteatohepatitis en un sujeto que comprende:
    analizar una primera muestra biológica de un sujeto para determinar el nivel o los niveles de glicocolato y opcionalmente uno o más biomarcadores adicionales para la esteatohepatitis en la muestra, en donde los uno o más biomarcadores se seleccionan de las Tablas 1, 3, 4B, 6B, 9, 10, 11, 12, 13, y/o la Figura 2 y/o 3 y la primera muestra se obtiene del sujeto en un primer momento;
    analizar una segunda muestra biológica de un sujeto para determinar el nivel o los niveles de glicocolato y opcionalmente los uno o más biomarcadores adicionales, en donde la segunda muestra se obtiene del sujeto en un segundo momento; y
    comparar el nivel o los niveles de glicocolato y opcionalmente los uno o más biomarcadores adicionales en la primera muestra con el nivel o los niveles de glicocolato y opcionalmente los uno o más biomarcadores adicionales en la segunda muestra con el fin de verificar el progreso/regresión de la esteatohepatitis en el sujeto.
  9. 9. Un método para evaluar la eficacia de una composición para el tratamiento de la esteatohepatitis que comprende:
    analizar, a partir de un sujeto que tiene esteatohepatitis y tratado actualmente o previamente con una composición, una muestra biológica para determinar el nivel o los niveles de glicocolato y opcionalmente uno o más biomarcadores adicionales para la esteatohepatitis seleccionados de las Tablas 1, 3, 4B, 6B, 9, 10, 11, 12, 13, y/o la Figura 2 y/o 3; y
    comparar el o los niveles de glicocolato y opcionalmente los uno o más biomarcadores adicionales en la muestra con
    (a) niveles de glicocolato y opcionalmente los uno o más biomarcadores adicionales en una muestra biológica tomada previamente del sujeto, en donde la muestra biológica tomada previamente se obtuvo del sujeto antes de ser tratado con la composición, (b) niveles de referencia de glicocolato y opcionalmente los uno o más biomarcadores adicionales positivos para esteatohepatitis, y/o (c) niveles de referencia de glicocolato y opcionalmente los uno o más biomarcadores adicionales negativos para esteatohepatitis.
  10. 10. Un método para evaluar la eficacia de una composición en el tratamiento de la esteatohepatitis, que comprende:
    analizar una primera muestra biológica de un sujeto para determinar el nivel o los niveles de glicocolato y opcionalmente uno o más biomarcadores adicionales para la esteatohepatitis seleccionados de las Tablas 1, 3, 4B, 6B, 9, 10, 11, 12, 13, y/o la Figura 2 y/o 3, la primera muestra obtenida del sujeto en un primer momento;
    analizar una segunda muestra biológica del sujeto al que se ha administrado la composición para determinar el nivel
    o los niveles de glicocolato y opcionalmente los uno o más biomarcadores adicionales, la segunda muestra obtenida del sujeto en un segundo momento después de la administración de la composición; y
    comparar el nivel o los niveles de glicocolato y, opcionalmente, los uno o más biomarcadores adicionales en la primera muestra con el nivel o los niveles de glicocolato y opcionalmente los uno o más biomarcadores adicionales en la segunda muestra con el fin de evaluar la eficacia de la composición para el tratamiento de la esteatohepatitis.
  11. 11. Un método para escrutar una composición para determinar su actividad en la modulación del glicocolato y opcionalmente uno o más biomarcadores adicionales de la esteatohepatitis, que comprende:
    poner en contacto una o más células con una composición;
    analizar al menos una porción de las una o más células o una muestra biológica asociada a las células para determinar el nivel o los niveles de glicocolato y opcionalmente uno o más biomarcadores adicionales de la esteatohepatitis seleccionados de las Tablas 1, 3, 4B, 6B, 9 , 10, 11, 12, 13, y/o la Figura 2 y/o 3; y
    comparar el nivel o los niveles de glicocolato y opcionalmente los uno o más biomarcadores adicionales con niveles patrón predeterminados para el glicocolato y opcionalmente los uno o más biomarcadores adicionales para determinar si la composición modula el nivel o los niveles de glicocolato y opcionalmente los uno o más biomarcadores adicionales.
  12. 12.
    El uso in vitro de un biomarcador, o una pluralidad de biomarcadores, en el diagnóstico de la esteatohepatitis, en donde dicho biomarcador o pluralidad de biomarcadores comprenden glicocolato y opcionalmente uno o más biomarcadores adicionales seleccionados de las Tablas 1, 3, 4B, 6B, 9, 10, 11, 12, 13, y/o la Figura 2 y/o 3.
  13. 13.
    Un método para distinguir la enfermedad del hígado graso no alcohólico (EHGNA) de la esteatohepatitis no alcohólica (EHNA) en un sujeto que tiene una enfermedad o trastorno del hígado, que comprende:
    analizar una muestra biológica de un sujeto para determinar el nivel o los niveles de glicocolato y opcionalmente uno
    o más biomarcadores adicionales para EHGNA y/o EHNA en la muestra, en donde los uno o más biomarcadores se seleccionan de las Tablas 1, 2, 3, 4b, 5b, 6B, 8, 9, 10, 11, 12, 13, y las Figuras 1,2,3
    comparar el nivel o los niveles de glicocolato y opcionalmente los uno o más biomarcadores adicionales en la muestra con niveles de referencia positivos para EHGNA que la distinguen de EHNA y/o niveles de referencia positivos para EHNA que la distinguen de EHGNA con el fin de determinar si el sujeto tiene EHNA.
  14. 14.
    El método de la reivindicación 1, que comprende adicionalmente analizar la muestra biológica del sujeto para determinar el nivel o los niveles de uno o más biomarcadores adicionales para la esteatohepatitis en la muestra, en donde los uno o más biomarcadores adicionales se seleccionan del grupo que consiste de glicoquenodesoxicolato, taurocolato, butirilcarnitina, gamma-glutamiltirosina, quinurenina, glutamilvalina, gamma-glutamilfenilalanina, gammaglutamil leucina, glutamato, carnitina, propionilcarnitina, y combinaciones de los mismos, y
    comparar el nivel o los niveles de los uno o más biomarcadores adicionales en la muestra con niveles de referencia de los uno o más biomarcadores adicionales positivos para esteatohepatitis y/o negativos para esteatohepatitis con el fin de diagnosticar si el sujeto tiene, o está predispuesto a, esteatohepatitis.
  15. 15.
    El método de la reivindicación 14, en donde la muestra biológica se analiza utilizando una o más técnicas seleccionadas del grupo que consiste de espectrometría de masas, reacciones enzimáticas o bioquímicas, química clínica, ELISA, y unión de anticuerpos.
  16. 16.
    El método de la reivindicación 15, en donde la muestra biológica es una muestra de plasma o una muestra de orina.
  17. 17.
    El método de la reivindicación 14, en donde los uno o más biomarcadores adicionales se seleccionan del grupo que consiste en glicoquenodesoxicolato, taurocolato, y combinaciones de los mismos.
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