ES2388385T3 - Medio para detectar y diferenciar enterococos resistentes a la vancomicina - Google Patents
Medio para detectar y diferenciar enterococos resistentes a la vancomicina Download PDFInfo
- Publication number
- ES2388385T3 ES2388385T3 ES09175436T ES09175436T ES2388385T3 ES 2388385 T3 ES2388385 T3 ES 2388385T3 ES 09175436 T ES09175436 T ES 09175436T ES 09175436 T ES09175436 T ES 09175436T ES 2388385 T3 ES2388385 T3 ES 2388385T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- vancomycin
- medium
- indolyl
- species
- galactopyranoside
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N vancomycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C2C=C3C=C1OC1=CC=C(C=C1Cl)[C@@H](O)[C@H](C(N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H]3C(=O)N[C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](C3=CC(O)=CC(O)=C3C=3C(O)=CC=C1C=3)C(O)=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)O2)=O)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC)[C@H]1C[C@](C)(N)[C@H](O)[C@H](C)O1 MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N 0.000 title claims abstract description 78
- 108010059993 Vancomycin Proteins 0.000 title claims abstract description 69
- 229960003165 vancomycin Drugs 0.000 title claims abstract description 69
- MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N vancomycin Natural products O1C(C(=C2)Cl)=CC=C2C(O)C(C(NC(C2=CC(O)=CC(O)=C2C=2C(O)=CC=C3C=2)C(O)=O)=O)NC(=O)C3NC(=O)C2NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(CC(C)C)NC)C(O)C(C=C3Cl)=CC=C3OC3=CC2=CC1=C3OC1OC(CO)C(O)C(O)C1OC1CC(C)(N)C(O)C(C)O1 MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 69
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 claims abstract description 51
- 241000894007 species Species 0.000 claims abstract description 49
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 36
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 35
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 28
- 230000004102 tricarboxylic acid cycle Effects 0.000 claims abstract description 20
- 241000194033 Enterococcus Species 0.000 claims abstract description 19
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims abstract description 18
- KPGXRSRHYNQIFN-UHFFFAOYSA-N 2-oxoglutaric acid Chemical compound OC(=O)CCC(=O)C(O)=O KPGXRSRHYNQIFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 239000003910 polypeptide antibiotic agent Substances 0.000 claims abstract description 11
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 claims abstract description 9
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 claims abstract description 7
- 230000000050 nutritive effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- RZXMPPFPUUCRFN-UHFFFAOYSA-N p-toluidine Chemical compound CC1=CC=C(N)C=C1 RZXMPPFPUUCRFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 28
- 241000194032 Enterococcus faecalis Species 0.000 claims description 27
- 241000194031 Enterococcus faecium Species 0.000 claims description 27
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 20
- GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N Titan oxide Chemical compound O=[Ti]=O GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 15
- ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N Erythromycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]([C@@]([C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)C[C@@](C)(O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C)(C)O)CC)[C@H]1C[C@@](C)(OC)[C@@H](O)[C@H](C)O1 ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N 0.000 claims description 14
- AFBPFSWMIHJQDM-UHFFFAOYSA-N N-methyl-N-phenylamine Natural products CNC1=CC=CC=C1 AFBPFSWMIHJQDM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 12
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 12
- -1 6-Chloro-3-indolyl phosphate disodium Chemical compound 0.000 claims description 11
- 239000005995 Aluminium silicate Substances 0.000 claims description 9
- 235000012211 aluminium silicate Nutrition 0.000 claims description 9
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 claims description 9
- NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N kaolin Chemical compound O.O.O=[Al]O[Si](=O)O[Si](=O)O[Al]=O NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 claims description 8
- 239000004408 titanium dioxide Substances 0.000 claims description 8
- GNWUOVJNSFPWDD-XMZRARIVSA-M Cefoxitin sodium Chemical compound [Na+].N([C@]1(OC)C(N2C(=C(COC(N)=O)CS[C@@H]21)C([O-])=O)=O)C(=O)CC1=CC=CS1 GNWUOVJNSFPWDD-XMZRARIVSA-M 0.000 claims description 7
- 229960002682 cefoxitin Drugs 0.000 claims description 7
- 229960003276 erythromycin Drugs 0.000 claims description 7
- APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N Amphotericin-B Natural products O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1C=CC=CC=CC=CC=CC=CC=C[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N 0.000 claims description 6
- WZPBZJONDBGPKJ-UHFFFAOYSA-N Antibiotic SQ 26917 Natural products O=C1N(S(O)(=O)=O)C(C)C1NC(=O)C(=NOC(C)(C)C(O)=O)C1=CSC(N)=N1 WZPBZJONDBGPKJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 108010093965 Polymyxin B Proteins 0.000 claims description 6
- APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N amphotericin B Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N 0.000 claims description 6
- 229960003942 amphotericin b Drugs 0.000 claims description 6
- 229960003644 aztreonam Drugs 0.000 claims description 6
- WZPBZJONDBGPKJ-VEHQQRBSSA-N aztreonam Chemical compound O=C1N(S([O-])(=O)=O)[C@@H](C)[C@@H]1NC(=O)C(=N/OC(C)(C)C(O)=O)\C1=CSC([NH3+])=N1 WZPBZJONDBGPKJ-VEHQQRBSSA-N 0.000 claims description 6
- QXLPXWSKPNOQLE-UHFFFAOYSA-N methylpentynol Chemical compound CCC(C)(O)C#C QXLPXWSKPNOQLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N (+)-Galactose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N 0.000 claims description 5
- RUWXWYHCTTWNBF-UHFFFAOYSA-L disodium;(5-bromo-1h-indol-3-yl) phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].C1=C(Br)C=C2C(OP([O-])(=O)[O-])=CNC2=C1 RUWXWYHCTTWNBF-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 5
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims description 3
- 229920000024 polymyxin B Polymers 0.000 claims description 3
- 229960005266 polymyxin b Drugs 0.000 claims description 3
- BCHIXGBGRHLSBE-UHFFFAOYSA-N (4-methyl-2-oxochromen-7-yl) dihydrogen phosphate Chemical compound C1=C(OP(O)(O)=O)C=CC2=C1OC(=O)C=C2C BCHIXGBGRHLSBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- OAZUOCJOEUNDEK-UHFFFAOYSA-L disodium;(5-bromo-4-chloro-1h-indol-3-yl) phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].C1=C(Br)C(Cl)=C2C(OP([O-])(=O)[O-])=CNC2=C1 OAZUOCJOEUNDEK-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- YSYZSUYFGCLJJB-UHFFFAOYSA-L disodium;(5-bromo-6-chloro-1h-indol-3-yl) phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].ClC1=C(Br)C=C2C(OP([O-])(=O)[O-])=CNC2=C1 YSYZSUYFGCLJJB-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- WCSKWBKPKXJWEG-UHFFFAOYSA-L disodium;1h-indol-3-yl phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].C1=CC=C2C(OP([O-])(=O)[O-])=CNC2=C1 WCSKWBKPKXJWEG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 claims 3
- HWXBTNAVRSUOJR-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxyglutaric acid Natural products OC(=O)C(O)CCC(O)=O HWXBTNAVRSUOJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 229940009533 alpha-ketoglutaric acid Drugs 0.000 abstract 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 87
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 18
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 16
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 15
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 15
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 15
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 14
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 13
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 12
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 12
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 10
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 10
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 10
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 10
- 241000194030 Enterococcus gallinarum Species 0.000 description 9
- 241000501667 Etroplus Species 0.000 description 9
- 101150037181 vanB gene Proteins 0.000 description 9
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 8
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 8
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 7
- 241001522957 Enterococcus casseliflavus Species 0.000 description 6
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- KHPXUQMNIQBQEV-UHFFFAOYSA-N oxaloacetic acid Chemical compound OC(=O)CC(=O)C(O)=O KHPXUQMNIQBQEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 6
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 6
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 5
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010053950 Teicoplanin Proteins 0.000 description 4
- ZSLZBFCDCINBPY-ZSJPKINUSA-N acetyl-CoA Chemical compound O[C@@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(=O)NCCSC(=O)C)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 ZSLZBFCDCINBPY-ZSJPKINUSA-N 0.000 description 4
- DDTDNCYHLGRFBM-YZEKDTGTSA-N chembl2367892 Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]([C@H]1C(N[C@@H](C2=CC(O)=CC(O[C@@H]3[C@H]([C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)=C2C=2C(O)=CC=C(C=2)[C@@H](NC(=O)[C@@H]2NC(=O)[C@@H]3C=4C=C(O)C=C(C=4)OC=4C(O)=CC=C(C=4)[C@@H](N)C(=O)N[C@H](CC=4C=C(Cl)C(O5)=CC=4)C(=O)N3)C(=O)N1)C(O)=O)=O)C(C=C1Cl)=CC=C1OC1=C(O[C@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O3)NC(C)=O)C5=CC2=C1 DDTDNCYHLGRFBM-YZEKDTGTSA-N 0.000 description 4
- GTZCVFVGUGFEME-IWQZZHSRSA-N cis-aconitic acid Chemical compound OC(=O)C\C(C(O)=O)=C\C(O)=O GTZCVFVGUGFEME-IWQZZHSRSA-N 0.000 description 4
- 239000007952 growth promoter Substances 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N succinic acid Chemical compound OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960001608 teicoplanin Drugs 0.000 description 4
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 4
- PLXMOAALOJOTIY-FPTXNFDTSA-N Aesculin Natural products OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1Oc2cc3C=CC(=O)Oc3cc2O PLXMOAALOJOTIY-FPTXNFDTSA-N 0.000 description 3
- 229930186147 Cephalosporin Natural products 0.000 description 3
- WNBCMONIPIJTSB-BGNCJLHMSA-N Cichoriin Natural products O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1)c1c(O)cc2c(OC(=O)C=C2)c1 WNBCMONIPIJTSB-BGNCJLHMSA-N 0.000 description 3
- 108010078777 Colistin Proteins 0.000 description 3
- 101100102341 Enterococcus gallinarum vanC gene Proteins 0.000 description 3
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 3
- SBKRTALNRRAOJP-BWSIXKJUSA-N N-[(2S)-4-amino-1-[[(2S,3R)-1-[[(2S)-4-amino-1-oxo-1-[[(3S,6S,9S,12S,15R,18R,21S)-6,9,18-tris(2-aminoethyl)-15-benzyl-3-[(1R)-1-hydroxyethyl]-12-(2-methylpropyl)-2,5,8,11,14,17,20-heptaoxo-1,4,7,10,13,16,19-heptazacyclotricos-21-yl]amino]butan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxobutan-2-yl]amino]-1-oxobutan-2-yl]-6-methylheptanamide (6S)-N-[(2S)-4-amino-1-[[(2S,3R)-1-[[(2S)-4-amino-1-oxo-1-[[(3S,6S,9S,12S,15R,18R,21S)-6,9,18-tris(2-aminoethyl)-15-benzyl-3-[(1R)-1-hydroxyethyl]-12-(2-methylpropyl)-2,5,8,11,14,17,20-heptaoxo-1,4,7,10,13,16,19-heptazacyclotricos-21-yl]amino]butan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxobutan-2-yl]amino]-1-oxobutan-2-yl]-6-methyloctanamide sulfuric acid Polymers OS(O)(=O)=O.CC(C)CCCCC(=O)N[C@@H](CCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCN)C(=O)N[C@H]1CCNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCN)NC(=O)[C@H](CCN)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](Cc2ccccc2)NC(=O)[C@@H](CCN)NC1=O)[C@@H](C)O.CC[C@H](C)CCCCC(=O)N[C@@H](CCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCN)C(=O)N[C@H]1CCNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCN)NC(=O)[C@H](CCN)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](Cc2ccccc2)NC(=O)[C@@H](CCN)NC1=O)[C@@H](C)O SBKRTALNRRAOJP-BWSIXKJUSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 229940124587 cephalosporin Drugs 0.000 description 3
- 150000001780 cephalosporins Chemical class 0.000 description 3
- MYPYJXKWCTUITO-KIIOPKALSA-N chembl3301825 Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C2C=C3C=C1OC1=CC=C(C=C1Cl)[C@@H](O)[C@H](C(N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H]3C(=O)N[C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C3=CC(O)=CC(O)=C3C=3C(O)=CC=C1C=3)C(O)=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)O2)=O)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC)[C@H]1C[C@](C)(N)C(O)[C@H](C)O1 MYPYJXKWCTUITO-KIIOPKALSA-N 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 229960003346 colistin Drugs 0.000 description 3
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 3
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 3
- XHCADAYNFIFUHF-TVKJYDDYSA-N esculin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC(C(=C1)O)=CC2=C1OC(=O)C=C2 XHCADAYNFIFUHF-TVKJYDDYSA-N 0.000 description 3
- 229940093496 esculin Drugs 0.000 description 3
- AWRMZKLXZLNBBK-UHFFFAOYSA-N esculin Natural products OC1OC(COc2cc3C=CC(=O)Oc3cc2O)C(O)C(O)C1O AWRMZKLXZLNBBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- JORAUNFTUVJTNG-BSTBCYLQSA-N n-[(2s)-4-amino-1-[[(2s,3r)-1-[[(2s)-4-amino-1-oxo-1-[[(3s,6s,9s,12s,15r,18s,21s)-6,9,18-tris(2-aminoethyl)-3-[(1r)-1-hydroxyethyl]-12,15-bis(2-methylpropyl)-2,5,8,11,14,17,20-heptaoxo-1,4,7,10,13,16,19-heptazacyclotricos-21-yl]amino]butan-2-yl]amino]-3-h Chemical compound CC(C)CCCCC(=O)N[C@@H](CCN)C(=O)N[C@H]([C@@H](C)O)CN[C@@H](CCN)C(=O)N[C@H]1CCNC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCN)NC(=O)[C@H](CCN)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCN)NC1=O.CCC(C)CCCCC(=O)N[C@@H](CCN)C(=O)N[C@H]([C@@H](C)O)CN[C@@H](CCN)C(=O)N[C@H]1CCNC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCN)NC(=O)[C@H](CCN)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCN)NC1=O JORAUNFTUVJTNG-BSTBCYLQSA-N 0.000 description 3
- UPSFMJHZUCSEHU-JYGUBCOQSA-N n-[(2s,3r,4r,5s,6r)-2-[(2r,3s,4r,5r,6s)-5-acetamido-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-(4-methyl-2-oxochromen-7-yl)oxyoxan-3-yl]oxy-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]acetamide Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](NC(C)=O)[C@H](OC=2C=C3OC(=O)C=C(C)C3=CC=2)O[C@@H]1CO UPSFMJHZUCSEHU-JYGUBCOQSA-N 0.000 description 3
- XDJYMJULXQKGMM-UHFFFAOYSA-N polymyxin E1 Natural products CCC(C)CCCCC(=O)NC(CCN)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)NC(CCN)C(=O)NC1CCNC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C(CCN)NC(=O)C(CCN)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CCN)NC1=O XDJYMJULXQKGMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KNIWPHSUTGNZST-UHFFFAOYSA-N polymyxin E2 Natural products CC(C)CCCCC(=O)NC(CCN)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)NC(CCN)C(=O)NC1CCNC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C(CCN)NC(=O)C(CCN)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CCN)NC1=O KNIWPHSUTGNZST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960003548 polymyxin b sulfate Drugs 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 3
- GTZCVFVGUGFEME-UHFFFAOYSA-N trans-aconitic acid Natural products OC(=O)CC(C(O)=O)=CC(O)=O GTZCVFVGUGFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FEJAVBVYHMPNES-UHFFFAOYSA-N (5-bromo-1h-indol-3-yl) dihydrogen phosphate Chemical compound C1=C(Br)C=C2C(OP(O)(=O)O)=CNC2=C1 FEJAVBVYHMPNES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 2
- ODBLHEXUDAPZAU-ZAFYKAAXSA-N D-threo-isocitric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](C(O)=O)CC(O)=O ODBLHEXUDAPZAU-ZAFYKAAXSA-N 0.000 description 2
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N Pyruvic acid Chemical compound CC(=O)C(O)=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000295644 Staphylococcaceae Species 0.000 description 2
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003782 beta lactam antibiotic agent Substances 0.000 description 2
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 description 2
- 229940093761 bile salts Drugs 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- GTZCVFVGUGFEME-HNQUOIGGSA-N cis-Aconitic acid Natural products OC(=O)C\C(C(O)=O)=C/C(O)=O GTZCVFVGUGFEME-HNQUOIGGSA-N 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 2
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- ODBLHEXUDAPZAU-UHFFFAOYSA-N isocitric acid Chemical compound OC(=O)C(O)C(C(O)=O)CC(O)=O ODBLHEXUDAPZAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 description 2
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 125000004929 pyrrolidonyl group Chemical group N1(C(CCC1)=O)* 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 230000000391 smoking effect Effects 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000001384 succinic acid Substances 0.000 description 2
- VNOYUJKHFWYWIR-ITIYDSSPSA-N succinyl-CoA Chemical compound O[C@@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(=O)NCCSC(=O)CCC(O)=O)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 VNOYUJKHFWYWIR-ITIYDSSPSA-N 0.000 description 2
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 2
- 239000010981 turquoise Substances 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- GZZOCPZTALAJHU-QEQWBAOXSA-N (2s,3r,4s,5r,6r)-6-(hydroxymethyl)oxane-2,3,4,5-tetrol;phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O.OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GZZOCPZTALAJHU-QEQWBAOXSA-N 0.000 description 1
- 239000001124 (E)-prop-1-ene-1,2,3-tricarboxylic acid Substances 0.000 description 1
- KPGXRSRHYNQIFN-UHFFFAOYSA-L 2-oxoglutarate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC(=O)C([O-])=O KPGXRSRHYNQIFN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- MKPCNMXYTMQZBE-UHFFFAOYSA-N 7h-purin-6-amine;sulfuric acid;dihydrate Chemical compound O.O.OS(O)(=O)=O.NC1=NC=NC2=C1NC=N2.NC1=NC=NC2=C1NC=N2 MKPCNMXYTMQZBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 241000588914 Enterobacter Species 0.000 description 1
- 206010014889 Enterococcal infections Diseases 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 description 1
- CWYNVVGOOAEACU-UHFFFAOYSA-N Fe2+ Chemical compound [Fe+2] CWYNVVGOOAEACU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 108010015899 Glycopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000002068 Glycopeptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 102000004157 Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- ODBLHEXUDAPZAU-FONMRSAGSA-N Isocitric acid Natural products OC(=O)[C@@H](O)[C@H](C(O)=O)CC(O)=O ODBLHEXUDAPZAU-FONMRSAGSA-N 0.000 description 1
- 241000588748 Klebsiella Species 0.000 description 1
- 241000186781 Listeria Species 0.000 description 1
- 229920002774 Maltodextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000005913 Maltodextrin Substances 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N N-Pteroyl-L-glutaminsaeure Natural products C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002944 PCR assay Methods 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M Pyruvate Chemical compound CC(=O)C([O-])=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101000718529 Saccharolobus solfataricus (strain ATCC 35092 / DSM 1617 / JCM 11322 / P2) Alpha-galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 206010040925 Skin striae Diseases 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- 208000031439 Striae Distensae Diseases 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N Titanium Chemical compound [Ti] RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 229940091181 aconitic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 244000000025 aggressive pathogen Species 0.000 description 1
- 125000005907 alkyl ester group Chemical group 0.000 description 1
- NNISLDGFPWIBDF-MPRBLYSKSA-N alpha-D-Gal-(1->3)-beta-D-Gal-(1->4)-D-GlcNAc Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](NC(=O)C)C(O)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 NNISLDGFPWIBDF-MPRBLYSKSA-N 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 229940126575 aminoglycoside Drugs 0.000 description 1
- 230000001716 anti-fugal effect Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N dimethyl 2-(3-ethyl-3-methylpentyl)propanedioate Chemical class CCC(C)(CC)CCC(C(=O)OC)C(=O)OC AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 229960002413 ferric citrate Drugs 0.000 description 1
- 229910001448 ferrous ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960000304 folic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 1
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- NPFOYSMITVOQOS-UHFFFAOYSA-K iron(III) citrate Chemical compound [Fe+3].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NPFOYSMITVOQOS-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 229940049920 malate Drugs 0.000 description 1
- 229940035034 maltodextrin Drugs 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000000465 moulding Methods 0.000 description 1
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 1
- 239000006225 natural substrate Substances 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 239000013610 patient sample Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 230000001175 peptic effect Effects 0.000 description 1
- 229940066779 peptones Drugs 0.000 description 1
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 1
- 229940085991 phosphate ion Drugs 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000000088 plastic resin Substances 0.000 description 1
- 239000002952 polymeric resin Substances 0.000 description 1
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 1
- LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N pyridoxine Chemical compound CC1=NC=C(CO)C(CO)=C1O LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019171 pyridoxine hydrochloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000011764 pyridoxine hydrochloride Substances 0.000 description 1
- 229940076788 pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 229940107700 pyruvic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229920003002 synthetic resin Polymers 0.000 description 1
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 description 1
- 229910052719 titanium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010936 titanium Substances 0.000 description 1
- OGIDPMRJRNCKJF-UHFFFAOYSA-N titanium oxide Inorganic materials [Ti]=O OGIDPMRJRNCKJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012549 training Methods 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 1
- 101150114434 vanA gene Proteins 0.000 description 1
- 101150090211 vanC gene Proteins 0.000 description 1
- 229940011671 vitamin b6 Drugs 0.000 description 1
- 239000012463 white pigment Substances 0.000 description 1
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
- C12Q1/045—Culture media therefor
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56911—Bacteria
- G01N33/56916—Enterobacteria, e.g. shigella, salmonella, klebsiella, serratia
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Medio para el cultivo de enterococos resistentes a la vancomicina que comprende: (i) un medio nutritivo con una fuente energética efectiva para sustentar el crecimiento y la reproducción de los enterococos resistentes a la vancomicina; (ii) una cantidad efectiva de uno o más agentes selectivos para inhibir el crecimiento de los microorganismos diferentes de los enterococos resistentes a la vancomicina, de manera que dichos agentes selectivos incluyen al menos un antibiótico glicopeptídico; (iii) un intermedio del ciclo de Krebs, de manera que incluya un ácido α-cetoglutárico y/o sales del mismo, que el medio contenga adicionalmente un primer substrato cromógeno con un grupo fosfato - como substrato para un enzima fosfatasa producido por una primera especie de enterococo resistente a la vancomicina - y que dicho primer substrato cromógeno produzca una primera señal detectable en presencia de dicha primera especie de enterococo resistente a la vancomicina.
Description
Medio para detectar y diferenciar enterococos resistentes a la vancomicina.
La presente invencion se refiere a un medio para el crecimiento y/o la identificacion de microorganismos y a un metodo de identificacion de microorganismos mediante el uso del mismo. Mas concretamente, la presente invencion se refiere a un medio para detectar y diferenciar cepas bacterianas distintas, que es particularmente aplicable - pero no esta de ningun modo limitado - a medios para detectar y diferenciar distintas cepas de enterococos resistentes a la vancomicina y a metodos para su diferenciacion e identificacion.
La deteccion e identificacion de microorganismos es muy importante en varios campos, tales como la diagnosis de enfermedades infecciosas, el rastreo de brotes de enfermedad o de contaminacion, y la deteccion y rastreo de la propagacion de la resistencia a los antibioticos, etc.
En los ultimos aros se han establecido muchos metodos de deteccion e identificacion de microorganismos, usando tecnicas sofisticadas tales como la PCR y analogas. Aunque estos metodos pueden ser muy rapidos y sensibles, todavia hay necesidad de metodos mas tradicionales que implican el cultivo de organismos en medios (solidos, especialmente). Estos metodos tradicionales tienen la gran ventaja de que aislan los organismos interesantes en forma viable y luego pueden subcultivarse en otros medios y/o analizarse.
En humanos y en muchos otros mamiferos suele haber enterococos en la cavidad oral y en el tracto gastrointestinal, aunque normalmente en concentraciones inferiores a las de la E. coli. Los enterococos crecen a menudo como pares de cadenas y en cultivo pueden prosperar en presencia de sales biliares o de azida sodica a concentraciones que inhiben las bacterias coliformes y muchas bacterias Gram-negativas. Los enterococos han presentado con frecuencia resistencia a ciertos antibioticos, incluyendo la penicilina y los aminoglicosidos, siendo la vancomicina, un antibiotico glicopeptidico, el antibiotico elegido para tratar pacientes con infecciones enterococicas.
En las dos ultimas decadas se ha incrementado la resistencia adquirida a los glicopeptidos en las poblaciones de enterococos. En particular los enterococos resistentes a la vancomicina (ERV) se han relacionado con elevadas tasas de mortalidad y son una forma comun de infeccion en las unidades hospitalarias de cuidados intensivos. En concreto, la resistencia adquirida, codificada por genes vanA o vanB, se considera una seria amenaza para la salud, ya que estos genes pueden transferirse mediante plasmidos y transposones a otras bacterias patogenas, incluyendo los estafilococos. La resistencia adquirida esta asociada con E. faecalis y E. faecium, mientras que E. casseliflavus y
E. gallinarum expresan en general un tipo de resistencia no transferible o intrinseca codificada por genes vanC. Por otra parte el E. faecalis y el E. faecium, ya sean sensibles o resistentes a la vancomicina, muestran diferencias de sensibilidad a otros antibioticos. Por consiguiente la deteccion de enterococos y la diferenciacion de especies es importante para determinar las terapias de tratamiento y control de infecciones con antibioticos.
Para detectar ERV se han desarrollado varios medios de cultivo. Uno de estos medios es agar bilis esculina con vancomicina (BEAv). Los enterococos hidrolizan el glicosido, esculina, formando dextrosa y esculitina. La esculitina reacciona en el medio con citrato ferrico o con otros iones ferrosos, formando un anillo marron oscuro o negro de compuestos fenolicos alrededor de cada colonia. Se araden sales biliares para inhibir el crecimiento de bacterias Gram-positivas (distintas de los estreptococos del grupo D) y se incluye azida sodica para inhibir el crecimiento de bacterias Gram-negativas. El BEAv permite detectar enterococos pero no diferenciar especies, ya que todos los enterococos son capaces de hidrolizar esculina.
Por tanto se conocen medios para cultivar y detectar enterococos en general y tambien para detectar enterococos resistentes a la vancomicina (ERV) en particular. No obstante los ERV suelen crecer poco en estos medios y las colonias resultantes son pequeras y pueden tardar 48 horas o mas en desarrollarse.
Ademas la mayoria de medios conocidos no distingue entre especies. Casi todo el estado tecnico anterior revela substratos que utilizan sustancialmente todas las especies de enterococos. La distincion de especies es importante por varias razones. En primer lugar el E. gallinarum y el E. casseliflavus tienen en general una forma no transmisible de resistencia a la vancomicina (codificada por el gen vanC) que es de poca importancia clinica, mientras que, en cambio, el E. faecium y el E. faecalis tienen en general una forma transmisible de resistencia que es capaz de pasar a otros patogenos mas agresivos, como los estafilococos. En segundo lugar el E. faecium y el E. faecalis difieren en su sensibilidad a otros antibioticos (cuando la vancomicina deja de ser una opcion debido a su resistencia) y por tanto, para tratar eficazmente un paciente y detener la propagacion de ERV es importante distinguir entre estas dos especies, a fin de determinar la terapia antibiotica apropiada.
La patente U.S. n° 5,620,865, de Chen y otros, revela un medio para cultivar y detectar enterococos en 24 horas. El medio esta basado en una formula que comprende un indicador de nutrientes, el cual libera un segmento de nutriente en presencia de enzima �-glucosidasa, que es universal para todas las especies de enterococos y por lo tanto no permite identificarlas.
La patente U.S. 6,355,449, de Chen y otros, revela un medio, calificado como mejorado, para detectar la presencia de ERV, que comprende vancomicina, uno o mas agentes selectivos para suprimir el crecimiento de hongos y bacterias no deseados, un primer indicador de nutrientes que proporciona una primera seral detectable cuando es partido por una -glucosidasa y un segundo indicador de nutrientes que produce una molecula intermedia cuando es partido por pirrolidonil arilamidasa, de modo que la molecula intermedia proporciona una segunda seral detectable al reaccionar con un agente revelador. Como alternativa el segundo indicador de nutrientes puede proporcionar una segunda seral detectable al ser partido por pirrolidonil arilamidasa. Como la -glucosidasa es comun a todas las especies de enterococos y por tanto tambien esta presente en otras varias bacterias, incluyendo Listeria, Klebsiella, y Enterobacter, se emplea un segundo enzima comun a los enterococos para aumentar la probabilidad de que todos los microorganismos identificados sean enterococos. Sin embargo el empleo de dos enzimas diferentes revelado por Chen y otros no distingue entre especies de ERV.
La patente US-5,536,645 revela un medio nutritivo esencialmente sintetico para microorganismos.
La patente US-5,786,167 revela un medio de cultivo y un metodo para distinguir bacterias de la especie Salmonella de otras bacterias gram-negativas.
El International Journal of Food Microbiology [Revista internacional de microbiologfa alimentaria] (volumen 88, n° 2-3, (2003) p. 147-164) revela metodos para aislar, contar, caracterizar e identificar especies de enterococos, incluyendo medios de separacion y recuento.
La revista Clinical infectious Diseases [Enfermedades infecciosas clfnicas] 2006:42 (suplemento 1) S25-S34 revela la resistencia a la vancomicina en cocos gram-positivos, incluyendo el mecanismo de resistencia.
Un producto comercial para cultivar ERV se suministra con la marca CHROMagar® medium VRE (de CHROMagar Microbiology, Paris, Francia). El medio emplea dos substratos cromogenos y es capaz de distinguir E. faecalis y E. faecium de E. gallinarum y E. casseliflavus, pero no E. faecalis de E. faecium.
Otro producto comercial, el chromlD® VRE (de bioMerieux, Francia), es un medio nutriente solido que comprende vancomicina (8 mg/l) y dos substratos cromogenos, uno hidrolizado por a-glucosidasa y otro por -galactosidasa, y es teoricamente capaz de distinguir entre E. faecalis y E. faecium. Sin embargo a las 24 horas la mayor parte de las colonias son pequeras y dificiles de observar visualmente, si la muestra original solo contenia un pequero numero de enterococos. Ademas el crecimiento de ERV a partir de genes vanB es escaso debido a la alta concentracion de (8 mg/l). Como el vanB produce una forma transmisible de resistencia a la vancomicina, es importante poder cultivar ERV vanB. Ademas el color de las colonias de E. faecalis cultivadas en este medio es con frecuencia inconsistente, lo cual aumenta el riesgo de falsa identificacion. Se supone que el E. faecalis produce un color verde azulado, pero en la practica no es constante. Asimismo se ha observado un incremento del crecimiento de ciertas levaduras, lo cual puede dar lugar a falsas interpretaciones positivas.
Para detectar genes de resistencia a la vancomicina se dispone de metodos moleculares tales como la reaccion en cadena de la polimerasa (PCR) y la tecnologia de sondas de ciclacion. Estos metodos proporcionan un alto nivel de sensibilidad y especificidad, y un menor tiempo de respuesta en comparacion con el cultivo rutinario. Sin embargo, a menudo solo detectan los genes van y no proporcionan una identificacion a nivel de especies. Ademas muchos laboratorios no tienen recursos, capacitacion o un volumen que justifique la realizacion de procedimientos tan caros y complejos. Por otra parte la PCR no seria aplicable directamente en el caso de una tipica muestra de paciente que contuviera una poblacion mixta de microorganismos, sobre todo si el microorganismo diana estuviera en pequeras cantidades. Por lo tanto puede ser necesario el cultivo previo de muestras para enriquecer y/o aislar determinados microorganismos, antes de emprender ensayos de PCR.
La identificacion (ID) a nivel de especies se puede conseguir utilizando un sistema ID comercial automatizado o manual, aunque se ha observado que algunos de los sistemas comerciales no siempre son capaces de identificar con precision el E. faecium. Todos estos sistemas requieren un aislado puro y obtener una identificacion definitiva puede tardar hasta 24 horas.
Los metodos existentes de deteccion e identificacion de ERV a nivel de especies requieren un aislado puro y/o multiples ensayos. Por consiguiente es deseable un metodo para distinguir especies de enterococos, mas que una identificacion a nivel generico, a partir de la muestra original del paciente.
Por tanto hay la necesidad largamente percibida en la industria de proporcionar un medio capaz de distinguir entre especies de enterococos y dar resultados consistentes y faciles de interpretar en un plazo maximo de 24 horas.
Tradicionalmente la mayor parte de las formulaciones de medios de cultivo ha sido sustancialmente transparente debido a los ingredientes que las componen. Recientemente se ha hecho cada vez mas popular el uso de medios que contienen substratos cromogenos o fluorogenicos susceptibles de ser hidrolizados por determinados enzimas caracteristicos de ciertos microorganismos y que por tanto son utiles para identificar microorganismos, incluyendo bacterias, levaduras y hongos. Se describen ejemplos de tales medios en las patentes US 5,534,415, US 5,635,367, US 5,846,761, US 5,962,251, US 6,165,743, US 6,905,841, US 7,217,536 y US 7,351,548, cuyo texto se incorpora totalmente en la presente y se considera parte integrante de esta revelacion.
El uso de medios cromogenos (o fluorogenicos) requiere mayor contraste de color entre las colonias y el fondo del medio. Muchos fabricantes de medios de cultivo cromogenos (o fluorogenicos) han empezado a aradir agentes tales
como caolin o dioxido de titanio, para aumentar la opacidad de los medios y el contraste con las colonias de color, facilitando asi su deteccion. La mejor deteccion e identificacion de las colonias reduce el riesgo de falso diagnostico.
No obstante, aunque la adicion de agentes opacantes mejora la utilidad de los medios que contienen substratos cromogenos (o fluorogenicos), el uso de un medio opaco oculta la informacion escrita, impresa o aplicada de otro modo al fondo de la placa de cultivo. A menudo esta informacion es necesaria para la identificacion apropiada del cultivo y hay que mover la placa de cultivo a una posicion que permita leer o detectar de otro modo la informacion, pues la opacidad del medio impide la lectura exacta u otra deteccion optica a traves del mismo. La manipulacion extra de las placas de cultivo requiere tiempo y existe el riesgo de que el cultivo caiga o se altere. Es importante el acceso a la informacion porque, si se detecta mejor, disminuye el riesgo de identificacion erronea y de cualquier otra confusion.
Los terminos "substrato cromogeno" y "substrato fluorogenico" son bien conocidos de los expertos en la materia y se refieren a compuestos quimicos que son divididos por unos enzimas producidos por algunas bacterias y que como resultado de esta division dan color o fluorescencia a ciertas colonias bacterianas.
Segun un primer aspecto de la presente invencion se propone un medio para el cultivo de enterococos resistentes a la vancomicina que comprende:
- (i)
- un medio nutritivo con una fuente energetica efectiva para sustentar el crecimiento y la reproduccion de los enterococos resistentes a la vancomicina;
- (ii)
- una cantidad efectiva de uno o mas agentes selectivos para inhibir el crecimiento de los microorganismos diferentes de los enterococos resistentes a la vancomicina, de manera que dichos agentes selectivos incluyan al menos un antibiotico glicopeptidico;
(iii) un intermedio del ciclo de Krebs, de manera que incluya un acido a-cetoglutarico y/o sales del mismo, que el medio contenga adicionalmente un primer substrato cromogeno con un grupo fosfato - como substrato para un enzima fosfatasa producido por una primera especie de enterococo resistente a la vancomicina - y que dicho primer substrato cromogeno produzca una primera seral detectable en presencia de dicha primera especie de enterococo resistente a la vancomicina.
Tambien se describe aqui un medio para el cultivo de enterococos resistentes a la vancomicina que comprende:
- (i)
- un medio nutritivo con una fuente energetica efectiva para sustentar el crecimiento y la reproduccion de los enterococos resistentes a la vancomicina;
- (ii)
- una cantidad efectiva de uno o mas agentes selectivos para inhibir el crecimiento de los microorganismos diferentes de los enterococos resistentes a la vancomicina;
(iii) un intermedio del ciclo de Krebs.
La incorporacion de un intermedio del ciclo de Krebs estimula de tal modo el crecimiento de enterococos resistentes a la vancomicina, que en 24 horas o menos se pueden obtener resultados significativos. El medio comprende un intermedio del ciclo de Krebs que incluye un acido a-cetoglutarico y/o sales del mismo. Tambien se describen aqui intermedios del ciclo de Krebs seleccionados de uno o mas de los grupos formados por:
derivados de acido a-cetoglutarico;
acido D-isocitrico y sales y derivados del mismo;
acido citrico y sales y derivados del mismo;
acido oxalacetico y sales y derivados del mismo;
acido malico y sales y derivados del mismo;
acido fumarico y sales y derivados del mismo;
acido succinico y sales y derivados del mismo;
acido cis-aconitico y sales y derivados del mismo; y
succinil-CoA
En este contexto el termino derivado incluye cualquier compuesto quimico que comprenda los principales elementos estructurales del compuesto original y que se transforme en el deseado intermedio del ciclo de Krebs en el medio nutritivo o en presencia del microorganismo. Tales derivados incluyen, por ejemplo, esteres de alquilo inferiores que son desesterificados por esterasas presentes en el medio o en el microorganismo.
El medio contiene el intermedio del ciclo de Krebs acido a-cetoglutarico y/o sales del mismo. Tambien se describen aqui derivados y precursores de acido a-cetoglutarico. Los precursores de acido a-cetoglutarico incluyen el acido piruvico y sales y derivados del mismo, acetil-CoA, el acido cis-aconitico y sales y derivados del mismo, y el acido Disocitrico y sales y derivados del mismo. Se ha encontrado que el a-cetoglutarato es un intermedio particularmente efectivo para estimular el crecimiento de los enterococos resistentes a la vancomicina.
La inclusion de uno o mas intermedios del ciclo de Krebs, tales como el acido a-cetoglutarico y las sales o derivados del mismo, mejora la respuesta del cultivo, actuando como un promotor del crecimiento. Como resultado se forman colonias mas grandes a las 24 horas, lo cual mejora la identificacion de la presencia de colonias bacterianas. El uso de intermedios del ciclo de Krebs como promotores de crecimiento no ha sido revelado antes para microorganismos enterococicos. Al mejorar la deteccion de los enterococos, cualquier intervencion clinica necesaria se puede llevar a cabo mas rapidamente.
Ademas el medio incluye preferiblemente un agente opacante, que es preferentemente caolin o dioxido de titanio y esta presente en un intervalo de concentracion de 0,1 g - 5 g/l de medio.
El agente selectivo incluye al menos un antibiotico glicopeptidico. Los antibioticos glicopeptidicos comprenden la vancomicina y la teicoplanina.
Ademas el medio comprende preferiblemente un agente selectivo elegido de uno o mas de los grupos formados por:
un compuesto antifungico;
aztreonam;
eritromicina;
poliximina B y sales de la misma;
cefoxitina;
anfotericina B.
El uso de un antibiotico glicopeptidico evita el crecimiento de microorganismos distintos de los resistentes a dicho antibiotico y asegura que solo los microorganismos resistentes produzcan colonias. Asi, la presencia de una colonia indica que hay microorganismos resistentes a la vancomicina. Se pueden elegir agentes selectivos para inhibir el crecimiento de enterococos con una resistencia intrinseca, no transmisible, (vanC) a la vancomicina, tales como E. gallinarum, E. casseliflavus y E. arium, y tambien de levaduras, bacterias acido-lacticas y bacterias Gram-positivas y Gram-negativas no ERV.
La vancomicina se puede usar a un nivel que permita el crecimiento de organismos resistentes vanB, lo cual permite detectar la presencia de estos organismos clinicamente importantes. La vancomicina se usa preferiblemente a una concentracion inferior a 8 mg/l, con mayor preferencia de 3 a 7 mg/l, sobre todo de 5 a 6 mg/l.
El medio tambien puede incluir agentes selectivos adicionales, tales como compuestos antifungicos, para evitar el desarrollo excesivo de otros microorganismos en el medio. Los agentes selectivos adicionales se pueden escoger entre otros antibioticos, incluyendo por ejemplo los antibioticos de -lactama y las cefalosporinas. Como ejemplos de otros antibioticos y compuestos antifungicos apropiados que puedan servir de agentes selectivos en la presente invencion cabe citar aztreonam, eritromicina, sulfato de poliximina B, colistina, cefoxitina y anfotericina B.
Los substratos cromogenos o fluorogenos que llevan un grupo fosfato y/o un grupo galactopiranosilo se pueden aradir ventajosamente a este medio, tal como se describe abajo, a fin de poder usarlo para detectar y diferenciar entre distintas especies de enterococos resistentes a la vancomicina. Este aspecto de la presente invencion esta descrito abajo con mayor detalle.
Tambien se describe aqui un medio para detectar enterococos resistentes a la vancomicina, que comprende:
- (a)
- un medio nutritivo con una fuente energetica efectiva para sustentar el crecimiento y la reproduccion de los enterococos resistentes a la vancomicina;
- (b)
- una cantidad efectiva de uno o mas agentes selectivos para inhibir el crecimiento de los microorganismos diferentes de los enterococos resistentes a la vancomicina;
- (c)
- un primer substrato cromogeno con un grupo fosfato -como substrato para un enzima fosfatasa producido por una primera especie de enterococo resistente a la vancomicina -de manera que dicho primer substrato cromogeno produzca una primera seral detectable en presencia de dicha primera especie de enterococo resistente a la vancomicina; y
- (d)
- un segundo substrato cromogeno que lleva un grupo galactopiranosilo - como substrato para un enzima
galactopiranosido producido por una segunda especie de enterococo resistente a la vancomicina - de modo que dicho segundo substrato cromogeno produzca una segunda seral detectable en presencia de dicha segunda especie de enterococo resistente a la vancomicina.
En presencia de un enzima fosfatasa el substrato cromogeno que lleva un grupo fosfato se metaboliza produciendo la seral detectable. Las especies de enterococos difieren en su capacidad de metabolizar los compuestos de fosfato y, como la seral detectable solo se producira en presencia de una especie bacteriana capaz de metabolizar fosfato, el medio se puede emplear para distinguir especies de bacterias enterococicas.
Los enzimas fosfatasa eliminan grupos fosfato de un substrato, hidrolizando un monoester de acido fosforico a un ion fosfato y una molecula con un grupo hidroxilo libre.
La fosfatasa alcalina es un enzima hidrolasa responsable de eliminar grupos fosfato de muchos tipos de moleculas.
Los substratos cromogenos se emplean en cantidad suficiente para permitir que el crecimiento de la especie de enterococo especifica del substrato cromogeno produzca en el medio una seral caracteristica detectable.
El primer substrato cromogeno se usa preferiblemente a un intervalo de concentracion de 0,05 hasta 0,4 g/l, con mayor preferencia de 0,1 a 0,35 g/l. El primer substrato cromogeno se usa sobre todo a una concentracion de 0,3 g/l.
Como segundo substrato cromogeno se prefiere uno que lleva un grupo galactopiranosido. Estos substratos pueden ser metabolizados por enzimas galactopiranosidasa, produciendo un compuesto de color. Un ejemplo de substrato cromogeno apropiado es el 6-cloro-3-indolil-a-galactopiranosido. Este se emplea preferiblemente a un intervalo de concentracion de 0,05 hasta 0,4 g/l. Con mayor preferencia se usa a una concentracion de 0,1 a 0,3 g/l, sobre todo de 0,15 g/l.
Las serales detectables son preferiblemente serales visuales observables a simple vista.
Con mayor preferencia los substratos cromogenos reaccionan en presencia de una especie de enterococo para producir una seral detectable que comprende un compuesto de color, de manera que las colonias bacterianas aparezcan coloreadas. Por consiguiente la presencia de una especie de enterococo se puede confirmar por simple valoracion visual del medio.
Si se emplean dos substratos cromogenos que produzcan cada uno un color particular al ser metabolizados por una especie bacteriana concreta, el medio permite detectar la presencia de una especie bacteriana concreta y tambien diferenciar dos especies distintas.
La presente invencion es particularmente util para detectar e identificar diferencialmente las especies de enterococo de importancia clinica E. faecalis y E. faecium. El uso de un substrato cromogeno basado en fosfato da a la colonia un color fiable y consistente, minimizando la probabilidad de falsa identificacion debida a una produccion de color variable. El E. faecalis metaboliza el substrato cromogeno basado en fosfato produciendo una colonia bacteriana coloreada. El E. faecium metaboliza el segundo substrato cromogeno produciendo una colonia bacteriana de un color distinto. Cuando, por ejemplo, el primer substrato cromogeno es 5-bromo-3-indolil-fosfato disodico y el segundo es 6-cloro-3-indolil-a-galactopiranosido, el E. faecium da lugar a colonias de color purpura rosado (magenta) y el E. faecalis es indicado por la presencia de colonias azules.
Por tanto el medio de la presente invencion permite detectar y diferenciar E. faecium y E. faecalis de manera rapida y fiable.
El medio comprende ademas el intermedio del ciclo de Krebs a-cetoglutarato. La inclusion de un intermedio del ciclo de Krebs tal como el acido a-cetoglutarico mejora la respuesta del cultivo, actuando como promotor del crecimiento. Como resultado se forman colonias mas grandes a las 24 horas, mejorando asi la identificacion de la presencia de colonias bacterianas. El uso de intermedios del ciclo de Krebs como promotores de crecimiento no ha sido revelado anteriormente para microorganismos enterococicos. Al mejorar la deteccion de los enterococos se puede llevar mas rapidamente a cabo cualquier intervencion clinica necesaria.
El ciclo de Krebs (o ciclo de acido citrico o ciclo de acidos tricarboxilicos (TCA)) es una serie de reacciones quimicas catalizadas enzimaticamente de importancia capital para las celulas que respiran usando oxigeno. El piruvato (de laglicolisis) se convierte en acetil-CoA, que se alimenta al ciclo y reacciona con oxalacetato formando citrato. Este se transforma en cis-aconitato, luego en isocitrato, seguido de conversion en alfa-cetoglutarato, y luego seguidamente en succinil-CoA, succinato, fumarato y malato, antes de regenerar oxalacetato.
Aqui tambien se describen intermedios del ciclo de Krebs elegidos de uno o mas de los grupos que comprenden:
acido isocitrico y sales y derivados del mismo;
acido citrico y sales y derivados del mismo;
acido oxalacetico y sales y derivados del mismo; acido malico y sales y derivados del mismo;
acido fumarico y sales y derivados del mismo;
acido succinico y sales y derivados del mismo;
acido aconitico y sales y derivados del mismo. Opcionalmente, la visualizacion se facilita usando un medio de cultivo o una placa de cultivo que proporcione mayor contraste al emplear substratos cromogenos (o fluorogenicos), pero que permita la visualizacion, u otra deteccion optica a traves del medio, de la informacion aplicada al fondo de la placa de cultivo. Por ejemplo, el medio puede contener un agente opacante, que es preferiblemente caolin o dioxido de titanio, a una concentracion de 0,1 - 0,5 g/l de medio.
Como alternativa el medio puede estar contenido en una placa de cultivo cuya superficie de fondo haya sido alterada
quimica o fisicamente para hacerla semiopaca, sin ocultar la visualizacion del fondo de la placa.
El agente selectivo incluye al menos un antibiotico glicopeptidico. Los antibioticos glicopeptidicos comprenden la
teicoplanina y la vancomicina.
El medio comprende ademas, preferiblemente, un agente selectivo seleccionado de uno o mas de los grupos que
incluyen:
un antibiotico glicopeptidico, incluyendo teicoplanina o vancomicina;
un compuesto antifungico;
aztreonam;
eritromicina;
polimixina B y sales de la misma;
cefoxitina;
anfotericina B. El uso de un antibiotico glicopeptidico evita el crecimiento de microorganismos distintos de los resistentes a este antibiotico y asegura que solo los microorganismos resistentes produzcan colonias. De este modo la presencia de una colonia indica que hay microorganismos resistentes a la vancomicina. Los agentes selectivos se pueden elegir para inhibir el crecimiento de enterococos con resistencia intrinseca no transmisible (vanC) a la vancomicina, tales como E. gallinarum, E. casseliflavus y E. arium, y tambien de levaduras, bacterias acido-lacticas y bacterias Grampositivas y Gram-negativas no ERV.
La vancomicina se puede usar a un nivel que permita el crecimiento de organismos resistentes vanB, lo cual permite detectar la presencia de estos organismos clinicamente importantes. La vancomicina se usa preferiblemente a una concentracion inferior a 8 mg/l, con mayor preferencia de 3 a 7 mg/l, sobre todo de unos 5 mg/l.
El medio tambien puede incluir agentes selectivos adicionales, tales como compuestos antifungicos, para evitar el desarrollo excesivo de otros microorganismos en el medio. Los agentes selectivos adicionales se pueden escoger entre otros antibioticos, incluyendo por ejemplo los antibioticos de -lactama y las cefalosporinas. Como ejemplos de otros antibioticos y compuestos antifungicos apropiados que puedan servir de agentes selectivos en la presente invencion cabe citar aztreonam, eritromicina, sulfato de poliximina B, colistina, cefoxitina y anfotericina B.
Preferiblemente la primera especie de enterococo es el E. faecalis y la segunda especie de enterococo es el E. faecium. Estas especies de enterococos tienen la capacidad de adquirir resistencia a la vancomicina y como tales se han asociado a elevadas tasas de mortalidad. Por tanto estas especies son de especial importancia clinica.
Preferiblemente el primer substrato cromogeno se elige de la lista formada por:
5-bromo-3-indolil-fosfato disodico o de p-toluidina (azul);
5-bromo-4-cloro-3-indolil-fosfato disodico o de p-toluidina (azul verdoso);
5-bromo-6-cloro-3-indolil-fosfato disodico o de p-toluidina (magenta);
6-cloro-3-indolil-fosfato disodico o de p-toluidina (rosa);
3-indolil-fosfato disodico o de p-toluidina (azul); y
fluorogenos 6-fluoro-3-indolil-fosfato disodico o de p-toluidina; y
4-metilumbeliferil-fosfato disodico o de p-toluidina.
Se apreciara que tambien pueden usarse otras sales adecuadas de estos substratos cromogenos de fosfato.
En una forma de ejecucion particularmente preferida el primer substrato cromogeno es 5-bromo-3-indolil-fosfato disodico.
Preferiblemente el segundo substrato cromogeno se elige de la lista formada por:
5-bromo-3-indolil-a-galactopiranosido (azul);
5-bromo-4-cloro-3-indolil-a-galactopiranosido (azul verdoso);
5-bromo-6-cloro-3-indolil-a-galactopiranosido (magenta);
6-cloro-3-indolil-a-galactopiranosido (rosa);
3-indolil-a-galactopiranosido (azul); y
fluorogenos 6-fluoro-3-indolil-a-galactopiranosido; y
4-metilumbeliferil-a-galactopiranosido.
En una forma de ejecucion particularmente preferida el segundo substrato cromogeno es 6-cloro-3-indolil-a-galactopiranosido.
Los enterococos se pueden detectar en un medio liquido o gelatinoso. El medio tambien puede ser semisolido o solido. Los medios gelatinosos se pueden preparar aradiendo agar al medio, como es bien sabido de los expertos en la materia. Antes de que cuaje, el medio gelatinoso licuado se vierte en placas de cultivo. Una vez cuajado se inocula en las placas la muestra que interesa, la cual puede ser una muestra clinica, incluyendo sin limitacion una muestra de heces, un frotis rectal, un frotis perirrectal, orina o suero, una muestra del entorno, como por ejemplo de comida, o frotis de superficies de contacto de partes tales como pomos de puertas, paredes y encimeras.
La presente invencion tambien proporciona un metodo de deteccion y diferenciacion entre E. faecalis y E. faecium, que consiste en inocular una muestra biologica en un medio segun la presente invencion, incubar para lograr el crecimiento de enterococos y examinar en el medio la aparicion de la primera y la segunda seral detectable.
El medio inoculado se incuba normalmente a 33 -39°C, preferiblemente a 37°C, durante unas 22 a 26 horas, sobre todo durante 24 horas. Si los resultados son negativos tras esta primera incubacion, el medio se incuba durante un periodo adicional de 24 horas. La presencia de enterococos resistentes a la vancomicina se determina observando las serales detectables. Por ejemplo, la presencia de E. faecalis esta indicada por la aparicion de colonias azules, mientras que el E. faecium produce colonias de color purpura rosado (magenta), si el primer substrato cromogeno es 5-bromo-3-indolil-fosfato disodico y el segundo es 6-cloro-3-indolil-a-galactopiranosido.
Evidentemente, alli donde haya una especie enterococica que contenga un enzima fosfatasa y tambien un enzima galactopiranosidasa se produciran ambos cromoforos y las especies adquiriran un color que es una mezcla de los dos diferentes colores de los cromoforos. Asi, distintos enterococos produciran ciertas tonalidades diferentes. Esta gradacion de la respuesta de color proporciona tanto un modo de identificacion como de diferenciacion entre los distintos enterococos resistentes a la vancomicina.
Tambien se apreciara que no es esencial, aunque sea deseable, incluir tanto un primer como un segundo substrato cromogeno. En la siguiente tabla I se presentan varias posibles combinaciones.
TABLA I Aqui tambien se describe un medio para detectar enterococos resistentes a la vancomicina, que comprende:
- Combinaciones posibles de fosfato, galactopiranosido y agente(s) selectivo(s)
- Fosfato Vancomicina Sin alfagalactopiranosido
- Dos especies de ERV detectadas (faecium� faecalis), ninguna diferenciacion de especies El color de las colonias depende de los cromoforos de fosfato usados (p.ej. azul, rosa, magenta, turquesa)
- Alfa-galactopiranosido Vancomicina Sin fosfato
- Dos especies de ERV detectadas (faecium� faecalis), diferenciacion potencial de especies o solo deteccion de E. faecium (si se ajustan los antibioticos) Color de las colonias: E. faecalis incoloro, E. faecium -depende del alfa-gal usado (p.ej. azul, rosa, magenta, turquesa)
- Vancomicina Sin fosfato Sin alfagalactopiranosido
- Dos especies de ERV detectadas (faecium� faecalis), ninguna diferenciacion de especies Colonias incoloras
- Fosfato Alfa-galactopiranosido Sin vancomicina
- Medio para detectar enterococos resistentes y no resistentes (p.ej. �en agua�); se podria distinguir entre faecium y faecalis, pero es dificil predecir que otros enterococos podrian crecer en el mismo Color de las colonias en funcion de los cromogenos usados
- Fosfato Alfa-galactopiranosido Vancomicina Sin eritromicina
- Medio para ERV y bacterias acidolacticas (BAL) (requisito muy improbable) Las colonias de BAL pueden captar ambos cromogenos (predominantemente fosfato)
- Fosfato Alfa-galactopiranosido Vancomicina Sin cefoxitina
- Medio para ERV (incluyendo VanC como E. gallinarum� casseliflavus� dependiendo de la CIM real de vancomicina). VanC podrian distinguirse basandose en el tono de purpura. E. gallinarum� casseliflavus pueden captar ambos cromogenos
- Fosfato Alfa-galactopiranosido Vancomicina Sin ACG
- Dos especies de ERV detectadas (faecium� faecalis), colonias significativamente mas pequeras, absorcion mas lenta de cromogeno (especialmente rosa), mayor necesidad de cromogeno en la formulacion, crecimiento inhibido, necesidad de prolongar el tiempo de incubacion. Color de las colonias en funcion de los cromogenos usados (los colores pueden tardar hasta 48 h en revelarse)
(a) una cantidad efectiva de uno o mas agentes selectivos para inhibir el crecimiento de microorganismos distintos de los enterococos resistentes a la vancomicina; y
5 (b) dos o mas componentes elegidos del grupo formado por:
- (i)
- un substrato cromogeno que lleva un grupo fosfato
- (ii)
- un agente opacante
(iii)un compuesto intermedio del ciclo de Krebs
El uso de un substrato basado en fosfato produce una reaccion de color mas consistente. Por ejemplo, en presencia
10 de E. faecalis y 5-bromo-3-indolil fosfato se produce un color azul consistente. El empleo de agentes opacantes incrementa el contraste entre los cromogenos y el fondo, lo cual mejora la deteccion visual y permite obtener mas pronto los resultados. El empleo de un intermedio del ciclo de Krebs (tal como el acido a-cetoglutarico) como factor de crecimiento da lugar a colonias de mayor tamaro y mas faciles de ver a las 24 h.
Se seleccionan dos o mas de estos componentes para usar en el medio, lo cual permite adaptar las caracteristicas 15 del medio a requisitos particulares.
Aqui tambien se describe un medio semiopaco preparado en una placa de cultivo. Pero en otras formas de ejecucion la placa de cultivo puede ser semiopaca o bien puede serlo la pared del fondo de la placa que soporta el medio o al menos una o mas areas escogidas de dicha pared. Como alternativa la presente invencion es una combinacion de un medio de cultivo semiopaco contenido en una placa semiopaca. El medio o la placa de cultivo tambien se puede
20 utilizar para cultivar una o mas muestras de un paciente.
Por tanto aqui tambien se describe un medio de cultivo contenido en una placa que comprende un medio nutritivo para sustentar el crecimiento de uno o mas microorganismos y que contiene:
al menos un substrato cromogeno o un substrato fluorogeno y un agente opacante en cantidad suficiente para aumentar la opacidad del medio sin ocultar la visualizacion del fondo de la placa.
25 Aqui tambien se describe un medio de cultivo contenido en una placa que comprende: un medio nutritivo para sustentar el crecimiento de uno o mas microorganismos y
al menos un substrato cromogeno o un substrato fluorogeno,
de modo que dicha placa tiene una superficie de fondo que ha sido quimica o fisicamente alterada para hacerla semiopaca sin ocultar su visualizacion.
Pueden prepararse placas semiopacas de varios modos, incluyendo, sin limitacion, la adicion de un agente opacante tal como el dioxido de titanio u otro pigmento sustancialmente blanco a la resina plastica, antes de moldear la placa, en cantidad suficiente para alcanzar el nivel deseado de semiopacidad. La adicion de productos quimicos a resinas polimericas, designado a veces como "dopado", es una practica comun en la industria de los plasticos y los agentes opacantes pueden agregarse segun metodos conocidos del estado tecnico.
Como alternativa la superficie interior y/o exterior de la placa de cultivo se puede grabar mecanica o quimicamente, marcar, imprimar, hacerse rugosa o alterarse de cualquier otro modo conocido en la tecnica para hacer el fondo de la placa semiopaco o producir al menos una region semiopaca en el fondo de la placa. "En el fondo de la placa" se refiere a la superficie interior o exterior de la pared del fondo o a una combinacion de ambas.
Se puede preparar un medio semiopaco aradiendole un agente opacante como dioxido de titanio o caolin antes de dejarlo solidificar, en cantidad suficiente para aumentar la opacidad del medio, pero permitiendo aun la visualizacion de la informacion contenida en el fondo de una placa de cultivo que contenga el medio semiopaco. Por ejemplo se puede aradir dioxido de titanio o caolin, o combinaciones de ambos, a la mayoria de las formulaciones de medios de cultivo, sin efectos adversos, a una concentracion de 0,1 -20 g/l, preferiblemente 0,1 -5 g/l, con mayor preferencia 0,5 - 2 g/l. En concreto un intervalo de 0,5 - 2 g/l de dioxido de titanio o caolin es util para mejorar el contraste visual con muchos substratos cromogenos o fluorogenos.
Tambien se puede utilizar una combinacion de placa semiopaca y medio semiopaco. Una placa que tenga al menos una parte de la superficie del fondo, interior o exterior, tratada mecanica o quimicamente para aumentar su opacidad se puede usar para contener un medio que lleve una cantidad reducida de agente opacante. Por ejemplo, un medio que contenga 0,1 -1 g/l de dioxido de titanio o 0,1 -1 g/l de caolin es util contenido en una placa semiopaca o con al menos una area semiopaca.
El nivel optimo de semiopacidad depende del cromogeno o fluorogeno empleado y del microorganismo o de los microorganismos seleccionados. Como es conocido del estado tecnico, las colonias pueden aparecer en cualquier parte con colores palidos hasta oscuros, incluyendo varios tonos de rosa, azul, beige, amarillo, verde, rojo, magenta, violeta, purpura, etc.
El uso de un medio semiopaco y/o de una placa semiopaca permite dividir el area de cultivo dentro de la placa en multiples sitios de cultivo y a la vez el ensayo de multiples muestras de un paciente en la misma placa de cultivo. Las figuras 6A -6C muestran algunos ejemplos de las muchas posibilidades de division del area de cultivo para poder alojar multiples muestras. Las lineas se pueden dibujar, imprimir, grabar, entallar, resaltar o aplicar por cualquier otro metodo adecuado para usarlo con las placas de cultivo.
La presente invencion se ilustra seguidamente mediante ejemplos.
La figura 1A representa una placa de agar en que se visualizan colonias azules de E. faecalis;
La figura 1B representa una placa de agar en que se visualizan colonias rosa oscuro a violeta de E. faecium;
La figura 2 representa el crecimiento de E. faecium en placas de agar. En la figura 2A el medio es ChromID VRE (bioMerieux, Francia). En la figura 2B es un medio segun la presente invencion;
La figura 3 representa el crecimiento de una cepa vanB en placas de agar que contienen el medio ChromID VRE (fig. 3A) y un medio segun la presente invencion (fig. 3B);
La figura 4 representa el crecimiento de E. faecalis en placas de agar que contienen el medio ChromID VRE (fig. 4A) y un medio segun la presente invencion (fig. 4B);
La figura 5 representa el crecimiento de E. gallinarum en placas de agar que contienen el medio ChromID VRE (bioMerieux, Francia) (fig. 5A) y un medio segun la presente invencion (fig. 5B);
La figura 6 representa ejemplos de las multiples posibilidades de division del area de cultivo.
Tal como se emplea aqui, el termino "medio" (en plural "medios") se refiere a una mezcla solida, semisolida, en polvo
o liquida que contiene todos o practicamente todos los componentes necesarios para permitir el crecimiento y la reproduccion de un microbio. El medio puede ser esteril o no, tal como requiere la practica comunmente aceptada.
Tal como se emplea aqui, el termino "muestra biologica" se refiere a cualquier muestra tomada o procedente de una sustancia que supuestamente puede contener bacterias y/u otros microorganismos, e incluye, sin limitarse a ellas,
muestras del entorno (p.ej. de suelo o de agua) o muestras de humanos (p.ej. muestras clinicas como las de heces, frotis rectales, orina, sangre, heridas).
Tal como se emplea aqui, el termino "microorganismo" se refiere a organismos microscopicos e incluye, sin limitarse a ellos, bacterias, hongos, levaduras, mohos y virus.
Tal como se emplea aqui, el termino "substrato cromogeno" o "cromogeno" se refiere a un substrato conjugado con un cromoforo. El cromoforo produce un color visible a disociarlo del substrato. Analogamente substrato fluorogeno o fluorogeno se refiere a un substrato acoplado a un fluoroforo. Un fluoroforo produce una seral fluorescente.
Los substratos cromogenos reaccionan con un enzima, dando un compuesto coloreado. Los substratos cromogenos pueden sintetizarse y diserarse de manera que posean una selectividad para el enzima similar a la del substrato natural. Se produce un compuesto coloreado cuando el substrato cromogeno es disociado por el enzima. De modo analogo los substratos fluorogenos reaccionan produciendo un compuesto fluorescente.
La figura 1 muestra colonias de E. faecalis (fig. 1A, azul) y colonias de E. faecium (fig. 1B, rosa oscuro a violeta) creciendo en placas de agar que contienen el medio de la presente invencion.
Los substratos cromogenos son 5-bromo-3-indolil fosfato y 6-cloro-3-indolil-a-galactopiranosido.
Las colonias estan bien formadas tras 24 horas de incubacion y el medio produce colonias coloreadas consistentes, facilmente identificables, que permiten detectar la presencia de E. faecalis y E. faecium.
La figura 2 representa E. faecium creciendo en medio ChromID VRE (fig. 2A) y en el medio de la presente invencion (fig. 2B). Las colonias de E. faecium que crecen en el medio de la presente invencion son considerablemente mas grandes a las 24 horas. Esto ilustra una ventaja de la presente invencion - es decir, que las colonias son mas grandes y por tanto mas facilmente identificables al cabo de 24 horas de incubacion.
La figura 3 representa una cepa vanB de E. faecium creciendo en medio ChromID VRE (fig. 3A) y en un medio segun la presente invencion (fig. 3B). Estas cepas vanB estan mucho mas inhibidas en el medio ChromID VRE que en el medio segun la presente invencion. Esto ilustra otra ventaja de la presente invencion - es decir, que los organismos resistentes se detectan empleando el medio de la presente invencion.
El medio de la presente invencion tambien produce colonias de E. faecalis mas grandes al cabo de 24 horas, si se compara con los medios existentes, tal como ilustran las figs. 4A y 4B. La figura 4A representa E. faecalis creciendo en medio ChromID VRE y la figura 4B colonias mas grandes en un medio de la presente invencion.
El E. casseliflavus y el E. arium estan totalmente inhibidos en el medio segun la presente invencion. El E. gallinarum no esta totalmente inhibido en medio ChromID VRE (vease fig. 5A), pero en el medio de la presente invencion solo pueden observarse colonias individuales despues de 48 horas (fig. 5B).
La adicion de un agente opacante al medio y/o el uso de una placa semiopaca permite dividir el area de cultivo en multiples sitios y a la vez ensayar varias muestras de un paciente en la misma placa de cultivo. En las figuras 6A -6C se ven algunos ejemplos de las muchas posibilidades de division del area de cultivo para poder alojar multiples muestras. Las lineas se pueden dibujar, imprimir, grabar, entallar, resaltar o aplicar de cualquier otro modo adecuado para usarlo con las placas de cultivo.
Ejemplo 1: medio ERV
BASE ERV:
- Componente
- g/l Intervalo potencial g/l Intervalo potencial g/l Sustitutos
- Dextrina
- 0,86 0 - 5 0,5 - 1 maltodextrina
- 0,09
- 0 - 10 0,05 - 1
- NaOH
- 0,083 0,01 -0,5 0,05 - 0,1 KOH
- Sal microfina
- 5,43 5 - 25 5 - 7,5 NaCl
- Mezcla de estreptococos�
- 4 1 - 10 2 - 6
- Peptona micoproteica
- 0,4 0 - 5 0,2 - 0,5 otras peptonas
- Sulfato magnesico
- 0,1 0,1 - 2 0,1 - 0,2
- L-treonina
- 0,2 0 - 5 0,1 - 0,2 otros aminoacidos
- Caseina, digesto peptico
- 8,17 5 - 30 5 - 15
- Triptona de yogur
- 8,42 1 - 30 5 - 15 triptona
- Extracto de levadura en polvo
- 8,17 0 - 10 5 - 9
- Agar
- 12,50 10 - 16 12 - 15
- Acido cetoglutarico
- 1 0 - 10 0,5 - 2
- Caolin
- 10 0,5 -20 5 - 15 oxido de titanio IV
- �MEZCLA DE ESTREPTOCOCOS (para aproximadamente 100 kg de mezcla estandar): Extracto de levadura en polvo 64 kg Piruvato sodico 32 kg Uracilo 0,64 kg Sulfato de adenina 0,64 kg Piridoxina HCl 0,64 kg Acido folico 0,064 kg
MEZCLA DE ANTIBIOTICOS/ANTIFUNGICOS:
- Componente
- mgtl Intervalo�potencial�mgtl Sustitutos
- vancomicina
- 6 5 - 6 teicoplanina
- aztreonam
- 18 4 - 30
- eritromicina
- 0,5 0,5 - 30
- poliximina B sulfato
- 12,06 colistina
- cefoxitina
- 20 0,5 - 60 cefalosporinas
- anfotericina B
- 5 0,5 - 30 otros antifungicos
SUBSTRATOS CROMOGENOS:
5 1. Substratos cromogenos basados en galactopiranosido, en un intervalo de concentraciones de 0,05 g/l hasta 0,4 g/l, ejemplo: 6-cloro-3-indolil-a-galactopiranosido, 0,15 g/l
2. Substratos cromogenos basados en fosfato, en un intervalo de concentraciones de 0,05 g/l hasta 0,4 g/l, ejemplo: 5-bromo-3-indolil fosfato disodico, 0,3 g/l
Ejemplo del metodo de preparacion del medio:
- 10 1. Aradir base ERV, 6-cloro-3-indolil-a-galactopiranosido (0,15 g/l) y polisorbato 80 (0,2 ml) a 1 l de agua destilada y mezclar suavemente (la mezcla se puede calentar durante la homogeneizacion, pero sin llegar a hervir)
- 2.
- Esterilizar en autoclave (por ejemplo: a 121°C durante 15 minutos)
- 3.
- Enfriar hasta aproximadamente 50°C
- 15 4. Suplementar con mezcla antibiotica/antifungica y 5-bromo-3-indolil fosfato disodico (0,3 g/l) disuelta en una pequera cantidad de un disolvente adecuado, tal como es sabido del estado tecnico, y filtrar en condiciones esteriles antes de agregarla al medio ERV enfriado
- 5.
- Verter en placas o recipientes esteriles de cultivo apropiados
- 6.
- Dejar gelificar y secar del modo conocido en el estado tecnico.
Ejemplo del metodo de uso del medio:
1. Inocular la muestra en las placas (puede ser una muestra clinica, incluyendo sin limitacion una muestra de heces, un frotis rectal, un frotis perirrectal, orina o suero, o una muestra del entorno, incluyendo sin limitacion muestras de comida o frotis de superficies de contacto de partes tales como pomos de puertas, paredes,
5 encimeras, etc.). La muestra se puede inocular por estrias sobre la superficie de una placa de agar, arrastrando un instrumento adecuado (por ejemplo un asa de siembra) a traves de la placa de agar.
- 2.
- Incubar a 33 - 39°C durante aproximadamente 24 horas (22 - 26 horas); si los resultados son negativos incubar 24 horas mas.
- 3.
- Determinar la presencia de E. faecalis resistente a la vancomicina por la aparicion de colonias azules y la
10 presencia de E. faecium resistente a la vancomicina por la aparicion de colonias purpura rosado (magenta) a purpura.
Claims (10)
- REIvINDICaCIoNES1. Medio para el cultivo de enterococos resistentes a la vancomicina que comprende:
- (i)
- un medio nutritivo con una fuente energetica efectiva para sustentar el crecimiento y la reproduccion de los enterococos resistentes a la vancomicina;
- (ii)
- una cantidad efectiva de uno o mas agentes selectivos para inhibir el crecimiento de los microorganismos diferentes de los enterococos resistentes a la vancomicina, de manera que dichos agentes selectivos incluyen al menos un antibiotico glicopeptidico;
(iii) un intermedio del ciclo de Krebs, de manera que incluya un acido a-cetoglutarico y/o sales del mismo, que el medio contenga adicionalmente un primer substrato cromogeno con un grupo fosfato - como substrato para un enzima fosfatasa producido por una primera especie de enterococo resistente a la vancomicina - y que dicho primer substrato cromogeno produzca una primera seral detectable en presencia de dicha primera especie de enterococo resistente a la vancomicina. -
- 2.
- Medio segun la reivindicacion 1, que comprende ademas un agente opacante, el cual es caolin o dioxido de titanio y esta presente a una concentracion de 0,1 - 5 g/l de medio.
-
- 3.
- Medio segun cualquier reivindicacion precedente que comprende ademas un agente selectivo escogido de uno o mas de los grupos formados por: un compuesto antifungico; aztreonam; eritromicina; poliximina B y sales de la misma;
cefoxitina; anfotericina B. -
- 4.
- Medio segun cualquier reivindicacion precedente que comprende ademas un segundo substrato cromogeno que lleva un grupo galactopiranosilo -como substrato para un enzima galactopiranosido producido por una segunda especie de enterococo resistente a la vancomicina -de modo que dicho segundo substrato cromogeno produce una segunda seral detectable en presencia de dicha segunda especie de enterococo resistente a la vancomicina.
-
- 5.
- Medio segun cualquier reivindicacion precedente, cuyo primer substrato cromogeno se selecciona de la lista formada por: 5-bromo-3-indolil-fosfato disodico o de p-toluidina (azul); 5-bromo-4-cloro-3-indolil-fosfato disodico o de p-toluidina (azul verdoso); 5-bromo-6-cloro-3-indolil-fosfato disodico o de p-toluidina (magenta); 6-cloro-3-indolil-fosfato disodico o de p-toluidina (rosa); 3-indolil-fosfato disodico o de p-toluidina (azul); y
fluorogenos 6-fluoro-3-indolil-fosfato disodico o de p-toluidina; y 4-metilumbeliferil-fosfato disodico o de p-toluidina. -
- 6.
- Medio segun la reivindicacion 5, en que el primer substrato cromogeno es 5-bromo-3-indolil-fosfato disodico.
-
- 7.
- Medio segun la reivindicacion 4 o las reivindicaciones 5 y 6, en tanto que dependientes de la reivindicacion 4, en que el segundo substrato cromogeno se selecciona de la lista formada por: 5-bromo-3-indolil-a-galactopiranosido (azul); 5-bromo-4-cloro-3-indolil-a-galactopiranosido (azul verdoso); 5-bromo-6-cloro-3-indolil-a-galactopiranosido (magenta);
6-cloro-3-indolil-a-galactopiranosido (rosa); 3-indolil-a-galactopiranosido (azul); yfluorogenos 6-fluoro-3-indolil-a-galactopiranosido; y 4-metilumbeliferil-a-galactopiranosido. - 8. Medio segun la reivindicacion 7, en el cual el segundo substrato cromogeno es 6-cloro-3-indolil-a-galactopiranosido.5 9. Medio segun cualquier reivindicacion precedente, en que la primera especie enterococica es E. faecalis.
-
- 10.
- Medio segun la reivindicacion 4, las reivindicaciones 5 y 6, en tanto que dependientes de la reivindicacion 4, o las reivindicaciones 7, 8 y 9, en que la segunda especie enterococica es E. faecium.
-
- 11.
- Metodo para detectar E. faecalis y E. faecium y distinguirlos, que consiste en inocular una muestra biologica en un medio segun cualquiera de las reivindicaciones 4, 5 y 6, en tanto que dependientes de la reivindicacion 4, o de
10 las reivindicaciones 7, 8 y 9, incubarla para lograr el crecimiento de enterococos y examinar en el medio la aparicion de la primera y segunda serales detectables.
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GBGB0820398.6A GB0820398D0 (en) | 2008-11-07 | 2008-11-07 | Semi-opaque medium for culture of microorganisms |
| GB0820398 | 2008-11-07 | ||
| GB0822764 | 2008-12-15 | ||
| GBGB0822764.7A GB0822764D0 (en) | 2008-11-07 | 2008-12-15 | Medium for detecting and differentiating vancomycin-resistant enterococci |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2388385T3 true ES2388385T3 (es) | 2012-10-15 |
Family
ID=40139551
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES09175436T Active ES2388385T3 (es) | 2008-11-07 | 2009-11-09 | Medio para detectar y diferenciar enterococos resistentes a la vancomicina |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US9090929B2 (es) |
| EP (1) | EP2186906B1 (es) |
| AU (1) | AU2009235988B2 (es) |
| CA (1) | CA2684809C (es) |
| ES (1) | ES2388385T3 (es) |
| GB (3) | GB0820398D0 (es) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP7176833B2 (ja) * | 2015-11-19 | 2022-11-22 | 栄研化学株式会社 | インフルエンザ菌のスクリーニング方法およびスクリーニング用培地 |
Family Cites Families (24)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5534415A (en) * | 1991-11-25 | 1996-07-09 | Bio Merieux | Selective and differential medium for the growth and detection of Candida albicans |
| US5846761A (en) * | 1992-10-07 | 1998-12-08 | Rambach; Alain | Culture medium for the detection of E. coli and process for its use |
| FR2708286B1 (fr) * | 1993-07-28 | 1995-10-20 | Rambach Alain | Procédé d'identification de microorganismes avec au moins deux chromogènes. |
| FR2713240B1 (fr) * | 1993-12-02 | 1996-03-01 | Bio Merieux | Milieu nutritif pour la culture de microorganismes. |
| US5443963A (en) | 1994-01-31 | 1995-08-22 | Minnesota Mining And Manufacturing Company | Method for detecting staphylococci |
| US5464755A (en) * | 1994-04-29 | 1995-11-07 | Biolog, Inc. | Microbiological medium and method of assay |
| US5620865A (en) * | 1994-11-04 | 1997-04-15 | Idexx Laboratories, Inc. | Medium for detecting Enterococci in a sample |
| FI98379C (fi) * | 1995-03-24 | 1997-06-10 | Orion Yhtymae Oy | Elatusaine ja menetelmä salmonellojen tunnistamiseksi |
| US6387650B1 (en) * | 1995-06-07 | 2002-05-14 | Biocontrol Systems, Inc. | Method and composition for detecting bacterial contamination in food products |
| FR2747394B1 (fr) * | 1996-04-15 | 1998-07-03 | Rambach Alain | Milieu de culture pour la mise en evidence des bacteries e. coli enterohemorragiques, et procede pour sa mise en evidence |
| WO1998004674A1 (en) * | 1996-07-26 | 1998-02-05 | Idexx Laboratories, Inc. | METHOD AND MEDIUM FOR DETECTING VANCOMYCIN-RESISTANT $i(ENTEROCOCCUS) |
| FR2790765B1 (fr) | 1999-03-11 | 2003-01-31 | Alain Rambach | Milieu chromogene de detection de staphylococcus aureus. |
| CA2376053A1 (en) * | 1999-06-03 | 2000-12-14 | The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agricul Ture | Selective media for recovery and enumeration of campylobacters |
| FR2801903B1 (fr) * | 1999-12-06 | 2004-01-30 | Biomerieux Sa | Nouveaux substrats enzymatiques pour la detection de pseudomonas aeruginosa, compositions les contenant et procede de detection de cette espece |
| FR2816956B1 (fr) * | 2000-11-17 | 2004-08-20 | Bio Merieux | Procede et milieu de detection/identification de bacteries a activite esterasique |
| FR2819266B1 (fr) * | 2001-01-05 | 2004-01-16 | Alain Rambach | Milieu de culture pour la detection et/ou la discrimination des bacteries du genre listeria et procede de mise en oeuvre |
| FR2826019B1 (fr) * | 2001-06-13 | 2003-09-26 | Alain Rambach | Milieu de culture pour la detection et/ou la discrimination des enterocoques et procede de mise en oeuvre |
| GB0200865D0 (en) * | 2002-01-16 | 2002-03-06 | Univ Bristol | Method |
| FR2834998B1 (fr) * | 2002-01-18 | 2004-04-02 | Millipore Sas | Procede de controle de la presence de micro-organismes dans un milieu gazeux comprenant du peroxyde d'hydrogene |
| JP2005130768A (ja) | 2003-10-30 | 2005-05-26 | Kanto Chem Co Inc | 腸球菌検出用培地 |
| FR2881755B1 (fr) | 2005-02-10 | 2012-11-30 | Biomerieux Sa | Milieux pour la detection specifique de micro-organismes resistants |
| WO2006130927A1 (en) * | 2005-06-09 | 2006-12-14 | South Australian Water Corporation | Detection of micro-organisms |
| FR2903421B1 (fr) | 2006-07-10 | 2008-10-03 | Alain Rambach | Milieu de culture solide pour la detection et/ou la discrimination au niveau de l'espece des enterocoques resistants aux glycopeptides |
| WO2008076452A1 (en) | 2006-12-19 | 2008-06-26 | Becton, Dickinson And Company | Chromogenic medium for the detection and identification of vancomycin resistant enterococci and method therfor |
-
2008
- 2008-11-07 GB GBGB0820398.6A patent/GB0820398D0/en not_active Ceased
- 2008-12-15 GB GBGB0822764.7A patent/GB0822764D0/en not_active Ceased
-
2009
- 2009-11-06 US US12/613,834 patent/US9090929B2/en active Active
- 2009-11-06 CA CA2684809A patent/CA2684809C/en active Active
- 2009-11-09 EP EP09175436A patent/EP2186906B1/en active Active
- 2009-11-09 GB GB0919567A patent/GB2465081B/en active Active
- 2009-11-09 ES ES09175436T patent/ES2388385T3/es active Active
- 2009-11-09 AU AU2009235988A patent/AU2009235988B2/en active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP2186906A2 (en) | 2010-05-19 |
| AU2009235988B2 (en) | 2015-02-05 |
| EP2186906A3 (en) | 2010-06-02 |
| GB0820398D0 (en) | 2008-12-17 |
| GB0919567D0 (en) | 2009-12-23 |
| US9090929B2 (en) | 2015-07-28 |
| EP2186906B1 (en) | 2012-07-25 |
| CA2684809A1 (en) | 2010-05-07 |
| CA2684809C (en) | 2017-05-16 |
| GB2465081B (en) | 2011-04-06 |
| GB0822764D0 (en) | 2009-01-21 |
| AU2009235988A1 (en) | 2010-05-27 |
| GB2465081A (en) | 2010-05-12 |
| US20100120086A1 (en) | 2010-05-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5786167A (en) | Method and culture medium for identification of salmonellae | |
| JPH09512438A (ja) | 微生物学的培地 | |
| JP5826031B2 (ja) | 黄色ブドウ球菌バクテリア用の反応培地 | |
| US8404460B2 (en) | Method for detecting and/or identifying Clostridium difficile | |
| RU2342435C2 (ru) | Селективная культуральная среда для выделения и выявления видов рода streptococcus | |
| CN106434843A (zh) | 一种选择性分离培养b群链球菌的培养基及其制备方法 | |
| US20200371098A1 (en) | Chromogenic medium for the detection and identification of vancomycin resistant enterococci and method therefor | |
| ES2388385T3 (es) | Medio para detectar y diferenciar enterococos resistentes a la vancomicina | |
| JP5769174B2 (ja) | レジオネラ属バクテリアを検出および／または同定するための反応培地 | |
| JP2001161396A (ja) | 試料中の微生物の識別方法 | |
| ES2356397T3 (es) | Medio de cultivo sólido para la detección y/o la discriminación a nivel de la especie de los enterococos resistentes a los glicopéptidos. | |
| JP2001128666A (ja) | 血液またはヘミンを含む色素原指示培地 | |
| CN112831539A (zh) | 一种需氧微生物的体外检测试剂盒 | |
| RU2715329C1 (ru) | Питательная среда для выделения и идентификации неферментирующих бактерий | |
| JP7503384B2 (ja) | レジオネラ属菌鑑別用発色培地 | |
| WO2018092331A1 (ja) | インフルエンザ菌のスクリーニング方法およびスクリーニング用培地 | |
| RU2323969C1 (ru) | Питательная среда для выделения стрептококков | |
| RU2387714C2 (ru) | Способ приготовления питательной среды для выявления синегнойной палочки | |
| US5380652A (en) | Device and procedure for identifying pathogenic microorganisms | |
| SU1751199A1 (ru) | Питательна среда дл выделени патогенных стафилококков | |
| JP6124912B2 (ja) | 病原性エルシニア・エンテロコリチカ細菌を検出するための培地および方法 | |
| Nahar et al. | Chromogenic Agar Medium: A Versatile Tool for the Diagnosis of UTI | |
| JP2005511091A (ja) | 微生物を検出する方法 |