ES2378377T3 - Método para la producción de un hidrolizado de caseína - Google Patents
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Abstract
Metodo para la produccion de un hidrolizado de caseina, comprendiendo:a) adicion de una endopeptidasa con al menos un 50% de identidad con la SEC 10 n.D: 1 a una co mposicion comprendiendo caseina, eb) incubacion para hidrolizar la caseina.
Description
Metodo para la produccion de un hidrolizado de caseina Referencia a un listado de secuencias [0001] Esta solicitud contiene un listado de secuencias en formato legible por ordenador. El formato legible por ordenador se incorpora aqui por referencia. Campo tecnico [0002] La presente invencion se refiere a un m etodo para la produccion de un hi drolizado de caseina usando una endopeptidasa microbiana. Antecedentes de la invencion [0003] Los hidrolizados de caseina se usan para el enriquecimiento de las proteinas, por ejemplo, en bebidas para deportistas, y en otras bebidas dieteticas, bebidas en polvo, barritas nutritivas, formulas para lactantes, etc. Los hidrolizados de caseina en algunos casos han resultado ser menos alergenicos que los hidrolizados de proteina de suero, lo que los hace potencialmente mas utiles, por ejemplo, en formulas para lactantes. Los hidrolizados de caseina pueden ser fabricados usando enzimas proteoliticas para hidrolizar la caseina. En la fabricacion industrial de hidrolizados de caseina, la solubilidad alta o suspendibilidad de la proteina hidrolizada es importante, desde ambos, un punto de vista del proceso, desde un punto de vista puramente de rendimiento/economico y por una sensacion en la boca y propiedades sensoriales. Ha sido por lo tanto objeto de los presentes inventores identificar enzimas proteoliticas que son utiles para preparar hidrolizados de caseina con una alta solubilidad, tal como una alta solubilidad con pH bajo y/o una alta solubilidad con un grado de hidrolisis bajo o moderado. [0004] Las endopeptidasas que han resultado ser aplicables segun la presente invencion han sido descritas previamente. Por ejemplo, la endopeptidasa derivada de Nocardiopsis sp. NRRL 18262 se divulga en el documento W088/03947 (aqui se hace referencia a la cepa como cepa Nocardiopsis sp. 10R) y el documento W001/58276. 0tras endopeptidasas relacionadas que s on utiles segun la invencion se describen en l os documentos W088/03947, W004/111220, W004/111222, W004/111223, W005/123911 y W004/072279. [0005] El documento W0 03/007730 divulga un proceso comprendiendo proteina de caseina hidrolizada con una endoproteasa especifica de prolina. Resumen de la invencion [0006] Los presentes inventores han identificado endopeptidasas que han resultado ser aplicables en la produccion de hidrolizados de caseina con una alta solubilidad y que dan lugar a suspensiones uniformes. Tales endopeptidasas son funcionalmente mas eficaces que otras endopeptidasas usadas en la tecnica, cuando se comparan con una misma cantidad de proteinas enzimaticas, lo que resulta en una economia de producto mejor para los productores de hidrolizados de caseina. Consecuentemente, la presente invencion se refiere a un metodo para la produccion de un hidrolizado de caseina, comprendiendo: a) adicion de una endopeptidasa con al menos un 50% de identidad con la SEC 10 n.D: 1 a una composicion comprendiendo caseina y b) incubacion para hidrolizar la caseina. 0escripcion detallada de la invencion Endopeptidasa [0007] El termino endopeptidasa como se utiliza en este caso es una enzima que hidroliza enlaces peptidicos internos (tiene actividad de endopeptidasa). [0008] No hay limitaciones en el origen de la endopeptidasa para uso segun la invencion. Asi, el termino endopeptidasa incluye no solo endopeptidasas naturales o de tipo salvaje, sino tambien cualquier mutante, variantes, fragmentos, etc., de las mismas, que exhibe actividad de endopeptidasa, al igual que endopeptidasas sinteticas, tal como endopeptidasas redistribuidas. Variantes d e e ndopeptidasa geneticamente modificada se p ueden preparar como se co noce generalmente en la tecnica, por ejemplo, por mutagenesis dirigida, por PCR (usando un fragmento de PCR con la mutacion deseada como uno de los cebadores en las reacciones PCR), o por mutagenesis aleatoria. Ejemplos de variantes de endopeptidasa, como se usan en el presente contexto, son endopeptidasas en el que uno o mas aminoacidos han sido eliminados, insertados o sustituidos por otros aminoacidos. [0009] Ejemplos de endopeptidasas para uso segun la invencion son
(i) la endopeptidasa derivada de Nocardiopsis sp. NRRL 18262, divulgada en el documento W001/58276, cuya secuencia se muestra como SEC 10 n.D: 1 del presente documento;
(ii) en dopeptidasas con al menos 50, 55 , 60, 65, 70, 75, 80, 8 5, 9 0 o al m enos 95% de identidad d e aminoacido con la endopeptidasa de (i);
(iii) m utantes, va riantes o f ragmentos de l as endopeptidasas de ( i) o ( ii) ex hibiendo act ividad de endopeptidasa.
[0010] P ara los fines de l a p resente i nvencion, el alineamiento de dos secuencias de am inoacidos puede ser determinado usando el programa Needle del paquete EMB0SS (http://emboss.org) version 2.8.0. El programa Needle implementa el algoritmo dealineacion globaldescrito en Needleman,S. B. and Wunsch, C. 0. (1970) J. Mol. Biol. 48, 443-453. La matriz de sustitucion usada es BL0SUM62, la penalizacion de abertura del espacio es 10, y la penalizacion de extension de espacio es 0.5.
[0011] El grado de identidad entre dos secuencias de aminoacidos se calcula como el numero de correspondencias exactas en una alineacion de las dos secuencias, dividido por la longitud de la mas corta de las dos secuencias. El resultado se expresa en porcentaje de identidad.
[0012] Una correspondencia exacta ocurre cuando las dos secuencias tienen residuos de aminoacidos identicos en las mismas posiciones de la coincidencia.La longitud de una secuencia es el numerode residuos de aminoacido en la secuencia (por ejemplo, la longitud de la SEC 10 n.D: 1 es 188).
[0013] Como ejemplos de endopeptidasas bacterianas aplicables para uso segun la invencion pueden ser mencionadas tambien la endopeptidasa de Nocardiopsis alba (previamente Nocardiopsis dassonvillei) NRRL 18133 descrita en el documento W088/03947, las endopeptidasas d e Nocardiopsis dassonvillei subsp. dassonvillei 0SM 4 3235, Nocardiopsis alba 0SM 15647, Nocardiopsis sp. 0SM 16424 y la proteasa sintetica 22, descritas las cuatro en el documento W004/111220, la endopeptidasa de Nocardiopsis prasina 0SM 15648 descrita en el documento W004/111222, la endopeptidasa de Nocardiopsis prasina 0SM 15649 descrita en el documento W004/111223, las endopeptidasas de Nocardiopsis prasina (previamente Nocardiopsis alba) 0SM 14010, Nocardiopsis alkaliphila 0SM 44657 y Nocardiopsis lucentensis 0SM 44048, descritas las tres en el documento W005/123911, las endopeptidasas de Brachysporiella gayana CGMCC 0865, Metarhizium anisopliae, Gliocladium sp. CBS 114001, Periconia sp. CBS 114002, Periconia sp. CBS 114000 y Curvularia lunata de CBS 114003, descritas las 6 en W004/072279, y mutantes, variantes o fragmentos de cualquiera de estas que muestren actividad de endopeptidasa.
[0014] Una endopeptidasa para uso segun la invencion es una endopeptidasa microbiana, preferiblemente una endopeptidasa bacteriana, indicando el termino bacteriano, que la endopeptidasa se derivada de, o tiene origen en, una bacteria, o es un analogo, un fragmento, una variante, un mutante, o una endopeptidasa sintetica derivada de una bacteria. Se puede producir o expresar en la cepa bacteriana de tipo salvaje original, en otra cepa microbiana, o en una planta; es decir, el termino abarca la expresion de endopeptidasas de tipo salvaje de origen natural, al igual que la expresion en cualquier huesped de endopeptidasas recombinantes, geneticamente modificadas o sinteticas.
[0015] En el proceso de la invencion, la endopeptidasa puede ser purificada. El termino "purificada" como se utiliza en este caso abarca preparaciones de proteina enzimatica en las que la preparacion ha sido enriquecida para la proteina enzimatica en cuestion. Tal enriquecimiento podria ser por ejemplo: la eliminacion de las celulas del organismo del cual se produjo una proteina enzimatica extracelular, la eliminacion de material no-proteinico por una precipitacion especifica de proteina o el uso de un procedimiento cromatografico en el que la proteina enzimatica en cuestion se adsorbe de forma selectiva y se eluye de una matriz cromatografica. La endopeptidasa puede haber sido purificada a una extension tal que s olo haya pr esentes cantidades menores de otras proteinas. La e xpresion " otras proteinas" se refiere en particular a otras enzimas. Una endopeptidasa para ser usada en el metodo de la invencion puede ser "sustancialmente pura", es decir, sustancialmente libre de otros componentes del organismo en el que fue producido, que puede ser, bien un microorganismo de origen natural o un microorganismo huesped geneticamente m odificado par a la produccion recombinante de la endopeptidasa.
[0016] No obstante, para los usos segun la invencion, la endopeptidasa no necesita tener tal grado de pureza. Puede, por ejemplo, incluir otras enzimas, incluso otras endopeptidasas.
[0017] En un aspecto preferido, la endopeptidasa para ser usada en el metodo de la invencion ha sido purificada para contener al menos un 20%, preferiblemente al menos un30%, al menos un40% o al menos un 50% (p/p) de la endopeptidasa en cuestion de un total de proteina.La cantidad de endopeptidasa se puede calcular a partirde una medicion de actividad de la preparacion dividida por la actividad especifica de la endopeptidasa (actividad/mg PE), o se puede cuantificar por S0S-PAGE o cualquier otro metodo conocido en la tecnica. La cantidad total de proteina puede ser medida, por ejemplo, por analisis de aminoacido.
[0018] El uso de la endopeptidasa segun la presente invencion se puede combinar con el uso de otras enzimas, por ejemplo, otras proteasas. En una forma de realizacion preferida, una endopeptidasa, por ejemplo, la que se deriva de Nocardiopsis sp. NRRL 18262, se combina con una exopeptidasa ouna preparacion de proteasa con actividadde exopeptidasa, por ejemplo, una preparacion de proteasa derivada de Aspergillus oryzae, como descrito en el documento W094/25580, tal como Flavourzyme® (Novozymes A/S, 0inamarca).
[0019] En una forma de realizacion particular, la endopeptidasa para uso segun la invencion tiene una actividad de pH optima cercana a la neutra, cuando se determina por hidrolisis de caseina y reaccion posterior de peptidos ATC-solubles con oftaldialdehido y 2-mercaptoetanol seguido de la medicion de la absorbencia del complejo resultante a 340 nm.
[0020] El termino actividad de pH optima cercana a la neutra puede significar que la endopeptidasa tiene un pH optimo en el intervalo de pH 5.5-11, preferiblemente pH 7-11, mas preferiblemente pH 8-11, incluso mas preferiblemente pH 9.5-10.5, y de la forma mas preferible alrededor de pH 10.
[0021] En otra forma de realizacion particular, la endopeptidasa para uso segun la invencion es termoestable.
[0022] El termino termoestable puede significar que la temperatura optima con pH 9 es al menos 50 °C o al menos 55 °C, preferiblemente al menos 60 °C, mas preferiblemente al menos 65 °C, e incluso mas preferiblemente al menos 67 °C, tal como aproximadamente 70 °C, cuando se determina por hidrolisis de caseina como se ha descrito anteriormente.
Hidrolizado de caseina
[0023] En el contexto de la presente invencion, la caseina es el grupo predominante de proteinas en la leche, que puede dar cuenta del 75-80% de todas las proteinas en la leche y el queso. La forma soluble de la caseina se puede coagular con acidos y/o con cuajo.
[0024] En una forma de realizacion preferida, la caseina es de leche de vaca.
[0025] La caseina para ser usada en el metodo de la invencion puede, por ejemplo, estar en forma de caseinato sodico, caseinato de potasio o caseinato de calcio.
[0026] En el metodo de la invencion, el material de caseina es tipicamente mezclado o dispersado en agua para formar un compuesto acuoso comprendiendo alrededor de un 1% hasta aproximadamente un 25% en peso de proteina. En una forma de realizacion, el compuesto acuoso puede comprender de aproximadamente un 1% hasta aproximadamente un 5% en peso de proteina. En otra forma de realizacion, el compuesto acuoso puede comprender de aproximadamente un 6% hastaaproximadamente un 10% en peso de proteina.En otra forma de realizacion, el compuesto acuosopuede comprender de aproximadamente un11% hasta aproximadamente un15% en peso de proteina.En otra forma de realizacion, el compuesto acuoso puede comprender de aproximadamente un 16% hasta aproximadamente un 20% en peso de proteina. En otra forma de realizacion adicional, el compuesto acuoso puede comprender de aproximadamente un 21% hasta aproximadamente un 25% en peso de proteina. En una forma de realizacion preferida, el compuesto acuoso puede comprender de aproximadamente un 5% hasta aproximadamente un 25% en peso de proteina.
[0027] 0espuesde que el material de proteina se ha dispersado en agua, el pH y/o la temperatura del compuesto acuoso de proteina se puede ajustar para optimizar la reaccion de hidrolisis,y en particular, para asegurar que la endopeptidasa usada en la reaccion de hidrolisis funciona cerca de su nivel de actividad optimo. El pH del compuesto acuoso de proteina se puede ajustar y monitorizar segun los metodos generalmente conocidos en la tecnica. El pH del compuesto acuoso de proteina se puede ajustar a partir de aproximadamente 5 hasta aproximadamente 10. En una forma de r ealizacion, el pH del compuesto acu oso de pr oteina se puede a justar de apr oximadamente 6 ha sta aproximadamente 9. En una forma de realizacion preferida, el pH del compuesto acuoso de proteina se puede ajustar a partir de aproximadamente 6.5 hasta aproximadamente 8. El pH del compuesto acuoso de proteina se puede mantener a tal nivel durante la reaccion de hidrolisis ose lepuede permitir reducirse a medida que avanza lareaccionde hidrolisis. La t emperatura del compuesto acu oso de pr oteina se aj usta pr eferiblemente y se m antiene de aproximadamente 45 °C a aproximadamente 70 °C durante la reaccion de hidrolisis conforme a los metodos conocidos en la tecnica. En una forma de realizacion preferida, la temperatura del compuesto acuoso de proteina se puede ajustar y mantener de aproximadamente 63 °C hasta aproximadamente 70 °C durante la reaccion de hidrolisis. En general, las temperaturas superiores a este intervalo pueden inactivar la endopeptidasa, mientras que las temperaturas inferiores o superiores a este intervalo tienden a ralentizar la actividad de la endopeptidasa.
[0028] La reaccion de hidrolisis se inicia generalmente anadiendo la endopeptidasa al compuesto acuoso de material de proteina. Alternativamente, la enzima se puede dispersar en agua y el material de proteina se puede anadir lentamente mientras se remueve. Este ultimo metodo puede ser ventajoso al preparar un compuesto acuoso de proteina concentrado para evitar que la viscosidad se vuelva demasiado alta.
[0029] Preferiblemente, la cantidad de endopeptidasa usada en el metodo de la invencion es de aproximadamente 0.005 hasta aproximadamente 100 UA (como se def ine a co ntinuacion) p or kg d e ca seina, preferiblemente de aproximadamente 0.01 hasta aproximadamente 50 UA por kg de caseina, mas preferiblemente de aproximadamente
0.02 hasta aproximadamente 30 UA por kg de caseina.
[0030] Una Unidad Anson (UA) se define como la cantidad de enzima que en condiciones estandar (es decir 25 °C, pH
7.5 y10 minutos de tiempo de reaccion) digiere hemoglobina a una velocidad inicial tal que por minuto se libera una cantidad de producto soluble ATC que da el mismo color conreactivo de fenol como un miliequivalente de tirosina. Cuando se determina la actividad de UA, la concentracion de hemoglobina puede estar preferiblemente alrededor de
1.3%.
[0031] La cantidad de endopeptidasa anadida al material de proteina puede variar y variara dependiendo de la fuente del material de proteina, el grado de hidrolisis deseado y la duracion de la reaccion de hidrolisis. La cantidad de endopeptidasa puede variar desde aproximadamente 1 mg de proteina enzimatica hasta aproximadamente 5000 mg de proteina enzimatica por kilogramo de caseina. En una forma de realizacion preferida, la cantidad puede variar de 1 mg de proteinaenzimatica hastaaproximadamente 1000 mg de proteina enzimatica por kilogramo de caseina.En otra forma de realizacion preferida, la cantidad puede variar desdeaproximadamente 5 mg de proteina enzimatica hasta aproximadamente 500 mg de proteina enzimatica por kilogramo de caseina.
[0032] Como sera apreciado por el experto en la materia, la duracion de la reaccion de hidrolisis puede variar y variara. En terminos generales, la duracion de la reaccion de hidrolisis puede variar desde unos pocos minutos a varias horas, tal como, desde aproximadamente 30 minutos hasta aproximadamente 48 horas.
[0033] Preferiblemente, el tratamiento con endopeptidasa da como resultado un hidrolizado de caseina con un grado de hidrolisis (GH) de sde apr oximadamente 0.1% hast a aproximadamente 20%, mas preferiblemente d esde aproximadamente 0.5% hasta aproximadamente 10% o de sde aproximadamente 0.5% hasta aproximadamente 8%, incluso mas preferiblemente desde aproximadamente 2% hasta aproximadamente 8%.
[0034] El grado de hidrolisis (GH) expresa la extension de la hidrolisis de proteina obtenida por el metodo.Enel contexto de la invencion, el grado de hidrolisis (GH) se define de la siguiente manera:
GH = (Numero de enlaces de peptidos divididos / Numero total de enlaces de peptidos) x 100%
[0035]El experto enlatecnica sabracomo medir el GH.Puede, por ejemplo, hacerse usando un metodocomo se describe en Adler-Nissen, J., 1986, Enzymatic Hydrolysis of Food Proteins, capitulo 5, pags. 122-124.
[0036] 0espues de haber completado el paso b), se puede inactivar la endopeptidasa. Tal inactivacion se puede realizar mediante cualquier metodo conocido en la tecnica, por ejemplo, por calentamiento hasta al menos 75 °C, asi como por ejemplo hasta al menos 80 °C o al menos 85 °C.
[0037] En una forma de realizacion, el metodo de la invencion comprende ademas el tratamiento de la composicion de caseina con una o mas enzimas adicionales con actividad de proteasa. Tal enzima proteolitica adicional puede ser una
o mas endopeptidasas y/o una o mas exopeptidasas. La una o mas exopeptidasas pueden ser, por ejemplo, una o mas aminopeptidasas y/o una o mas carboxipeptidasas.
[0038] La incubacion con la endopeptidasa con al menos un 50% de identidad con la SEC 10 n.D: 1 y la incubacion con la una o mas enzimas adicionales con actividad de proteasa no pueden ser realizadas simultaneamente. Es decir, si las enzimas proteoliticas noactuan con el mismo pH y/o lamisma temperatura, la composicion de caseina se puede incubar con una (o mas) enzima(s) proteolitica(s) primeramente, seguido de un ajuste opcional de pH y/o temperatura e incubacion posterior con la(s) otra(s) enzima(s) proteolitica(s).
[0039] Cuando se usan una o mas enzimas adicionales con actividad de proteasa, el hidrolizado de caseina resultante puede tener un grado mas alto de hidrolisis (GH) que el indicado anteriormente. Puede tener por ejemplo, un grado de hidrolisis de aproximadamente 5-25%.
[0040] Un hidrolizado de caseina obtenido por el metodo de la invencion se puede utilizar en un producto alimenticio, por ejemplo, en una bebida. Un producto alimenticio segun la presente invencion puede ser cualquier producto destinado para consumo humano. Ejemplos no limitativos de tales productos alimenticios incluyen barritas nutritivas, bebidas en polvo, bebidas para deportistas, bebidas energeticas y formulas para lactantes. Un hidrolizado de caseina obtenido por el metodo de la invencion puede ser usado tambien en nutricion clinica, por ejemplo, en hospitales.
Comparación de hidrólisis de caseinato sódico con endopeptidasa de Nocardiopsis sp.
NRRL 18262 con la secuencia mostrada en la SEC ID n.º: 1 y Alcalase® 2.4L (Novozymes A/S, Dinamarca)
Hidrolisis con proteasa:
Preparación de proteína:
[0041] Caseinato sodico, Miprodan 30 de Arla Foods, 0inamarca, 88% de proteina: 15 g + 285 g de agua. El producto de caseinato se suspendio en una suspension de 5% p/v con agua desmineralizada (Milli Q). El agua se calento a 60 °C, y la proteina se anadio al agua Milli Q mientras se removia en un mezclador, 1-2 minutos o hasta que la proteina quedo suspendida/solubilizada.
Ajuste de pH:
[0042] El pH se ajusto a 8.0 con 4 N Na0H y se mantuvo durante la reaccion de hidrolisis. 5 Dosificación enzimática: [0043] La proteasa de Nocardiopsis y Alcalase 2.4L se dosificaron en 10, 50 y 100 mg de proteina enzimatica (pe)/kg de proteina. La enzima se almaceno en hielo durante la manipulacion. 10 Tratamiento enzimático: [0044] Temperatura: 60 °C +/- 1 °C 15 Tiempo: 120 min. [0045] La enzima se anadio a la suspension de proteina en un agitador magnetico en un bano de agua. La enzima se anadio cuando la temperatura en la solucion de proteina alcanzo 60 °C. 20 Inactivación térmica / almacenamiento: [0046] 1nmediatamente despues del tratamiento enzimatico, las muestras se trataron termicamente durante 15 min. a 85 °C en un bano de agua con agitacion. Las muestras se enfriaron en hielo y se refrigeraron a 4 °C durante la noche.
25 [0047] Tras la incubacion a 4°C durante la noche, se evaluaron la solubilidad y el grado de hidrolisis. Solubilidad: [0048] La solubilidad se midiocon pH 4.0 y 6.5usando un analizador de proteina/nitrogeno Leco FP 528midiendo el
30 contenido de proteina y nitrogeno por un metodo de combustion.El contenido de nitrogeno se midio en la fraccion soluble y la solubilidad se calculo como el contenido de nitrogeno en porcentaje del contenido total de materia seca. Grado de hidrolisis: 35 [0049] El grado de hidrolisis de la suspension se midio por estadistica pH como se describe en Adler-Nissen, J., 1986, Enzymatic Hydrolysis of Food Proteins, capitulo 5, pags. 122-124. Resultados: 40 [0050] Grado de hidrolisis:
- Proteasa konc (mg/kg material de caseinato)
- Alcalase Endopeptidasa de Nocardiopsis
- 0 (Referencia)
- 0.62
- 10
- 2.87 2.42
- 50
- 7.17 5.61
- 100
- 10.92 7.30
Solubilidad pH 6.5: 45 [0051]
- Proteasa konc (mg/kg material de caseina)
- Solubilidad Solubilidad / GH
- Alcalase
- Endopeptidasa de Nocardiopsis Alcalase Endopeptidasa de Nocardiopsis
- 0 (Referencia)
- 98.7 -
- 10
- 76.5 92.1 26.7 38.1
- 50
- 79.0 90.3 11.0 16.1
- 100
- 86.9 95.2 8.0 13.0
Solubilidad pH 4.0: [0052]
- Proteasa konc (mg/kg material de caseina)
- Solubilidad Solubilidad / GH
- Alcalase
- Endopeptidasa de Nocardiopsis Alcalase Endopeptidasa de Nocardiopsis
- 0 (Referencia)
- 5,4 -
- 10
- 29.3 42.0 10.2 17.4
- 50
- 73.3 70.4 10.2 12.6
- 100
- 84.5 73.9 7.7 10.1
5
Conclusion:
[0053] Se puede observar que con una concentracion de proteasa dada, la endopeptidasa de Nocardiopsis dio un grado similar o moderadamente inferior de hidrolisis que Alcalase. No obstante, con pH 6.5 se observo que la solubilidad fue 10 generalmente mas alta co n endopeptidasa de Nocardiopsis que co n A lcalase, am bas con una c oncentracion de proteasa dada y con un grado de hidrolisis dado. Tambien con pH 4.0, la solubilidad / GH fue claramente mas alta para el hidrolizado obtenido con la endopeptidasa de Nocardiopsis que para el hidrolizado obtenido con Alcalase. Con pH 6.5, la solubilidad del control no hidrolizado fue superior que la de los productos hidrolizados. Pero desde un punto de vista funcional, es decir, en cuanto a la capacidad emulsionante y alergenicidad, es deseable frecuentemente tener una
15 cierta hidrolisisdeproteina (aumento en GH). Mientrasque desde un punto de vista sensorial, elGH nodeberia ser demasiado alto, yaqueun GH aumentado frecuentemente da lugar a un amargor aumentado de los hidrolizados de caseina.
[0054] Ademas,una inspeccion visual revelo una suspension uniforme con el uso de endopeptidasa de Nocardiopsis 20 como el catalizador, mientras que Alcalase en las condiciones dadas no era uniforme (formacion de grumos).
Listado de secuencias
[0055] 25
<110> Novozymes A/S
<120> Metodo para la produccion de un hidrolizado de caseina
30 <130> 11466.204-W0
<160> 1
<170> Version de patent1n 3.5 35
<210> 1
<211> 188
<212> PRT
<213> Nocardiopsis sp. 40
<400> 1
Claims (14)
- REIVINDICACIONES
- 1.
- Metodo para la produccion de un hidrolizado de caseina, comprendiendo:
a) adicion de una endopeptidasa con al menos un 50% de identidad con la SEC 10 n.D: 1 a una co mposicion comprendiendo caseina, e b) incubacion para hidrolizar la caseina. -
- 2.
- Metodo segun la reivindicacion 1, en el que la endopeptidasa tiene al menos un 60% de identidad con la SEC 10 n.D:
1. - 3. Metodo segun la reivindicacion 1, en el que la endopeptidasa tiene al menos un 80% de identidad con la SEC 10 n.D:1.
-
- 4.
- Metodo segun cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el pH optimo de la endopeptidasa esta entre pH 9.5 y pH 10.5.
-
- 5.
- Metodo segun cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que la temperatura optima de la endopeptidasa con pH 9 es de al menos 60 °C.
-
- 6.
- Metodo segun cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que la endopeptidasa es de Nocardiopsis.
-
- 7.
- M etodo segun cualquiera de l as reivindicaciones precedentes, en e l q ue la endopeptidasa s e an ade con una concentracion de entre 1 y 1000 mg de proteina enzimatica por kg de caseina.
-
- 8.
- Metodo segun cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que la endopeptidasa se anade con una actividad de entre 0.01 y 50 UA por kg de caseina.
-
- 9.
- Metodo segun cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que la composicion comprende desde aproximadamente 5% hasta aproximadamente 25% de caseina.
-
- 10.
- Metodo segun cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el hidrolizado de caseina tiene un grado de hidrolisis de al menos 2%.
-
- 11.
- Metodo segun cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que comprende ademas el tratamiento de la composicion de caseina con una o mas enzimas adicionales con actividad de proteasa.
-
- 12.
- Metodo segun cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que comprende ademas el tratamiento de la composicion de caseina con una o mas exopeptidasas.
-
- 13.
- Hidrolizado de caseina producido por el metodo segun cualquiera de las reivindicaciones precedentes.
-
- 14.
- Uso de un hidrolizado de caseina producido segun el metodo de cualquiera de las reivindicaciones 1-12 en un producto alimenticio.
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