ES2354096B1 - Procedimiento para la obtencion de un fotosensibilizante para ser empleado en terapia fotodinamica y fotosensibilizante. - Google Patents
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Abstract
Procedimiento para la obtención de un fotosensibilizante para ser empleado en terapia fotodinámica y fotosensibilizante.#La presente invención se refiere a un método para la preparación de un fotosensibilizante consistente en el tratamiento del alga Spirulina previamente secada para obtener la forma soluble en agua de clorina e{sub,6}, con elevado grado de pureza y un nuevo fotosensibilizante con valiosas propiedades terapéuticas, pues, la preparación de una forma de clorina e{sub,6} soluble en agua de elevada pureza y estable mediante su conservación con N-Metil-D-glucamina, principio activo, que se emplea como fotosensibilizante en el tratamiento mediante terapia fotodinámica de cáncer y otras neoplasias de diferente origen. Como resultado del procedimiento anteriormente descrito se obtiene una solución de clorina e{sub,6} prácticamente pura cuya estructura se muestra en la Figura 3.
Description
Procedimiento para la obtención de un fotosensibilizante para ser empleado en terapia fotodinámica y fotosensibilizante.
La presente invención se refiere a un método para la preparación de un fotosensibilizante consistente en el tratamiento del alga Spirulina previamente secada para obtener la forma soluble en agua de clorina e6, con elevado grado de pureza y un nuevo fotosensibilizante con valiosas propiedades terapéuticas. Este procedimiento permite el desarrollo de una nueva fórmula médica dotada de las más efectivas propiedades terapéuticas para el tratamiento de diferentes enfermedades oncológicas, empleando métodos de terapia fotodinámica basados en un contenido más elevado de clorina e6. Permite, pues, la preparación de una forma de clorina e6 soluble en agua de elevada pureza y estable mediante su conservación con N-Metil-D-glucamina, principio activo, que se emplea como fotosensibilizante en el tratamiento mediante terapia fotodinámica de cáncer y otras neoplasias de diferente origen. Igualmente, se mejora el método de preparación.
El cáncer es un crecimiento tisular producido por la proliferación continua de células anormales con capacidad de invasión y destrucción de otros tejidos. Puede originarse a partir de cualquier tipo de célula en cualquier tejido corporal. No es una enfermedad única sino un conjunto de enfermedades que se clasifican en función del tejido y célula de origen. Existen varios cientos de formas distintas, siendo tres los principales subtipos: los sarcomas, que proceden del tejido conectivo, los carcinomas que proceden de tejidos epiteliales y un tercer tipo en el que se encuentran las leucemias y los linfomas. Es, en muchos casos, incurable y toda investigación cuyo objetivo sea frenarlo o curarlo definitivamente debe de ser potenciada sin ningún tipo de obstáculos.
Se encuadra dentro de la industria de los productos fotosensibilizantes terapéuticos y, dentro de ésta, en productos terapéuticos para la medicina y farmacología.
Así, se conocen varios métodos de obtención de sales de clorina e6 solubles en agua. Un método para la obtención de sales solubles de clorina e6 consiste en la hidrólisis del correspondiente trimetril éster en THF, tetrahidrofurano, bajo atmósfera de nitrógeno, en presencia de NaOH, hidróxido de sodio, durante cuarenta y ocho horas a temperatura ambiente. La estructura química del trimetil éster se refleja en la figura 1.
El documento RU 2054476 describe un método de obtención de las sales trisódica y tripotásica de clorina e6.El método de obtención del ácido 18-carboxi-20-carboximetil-8-etenil-13-etil-2,3-dihidro-,7,12,17-tetrametil-21H,23Hporfirin-2-propionico o de sus sales, consiste en el tratamiento de la biomasa de Spirulina con una solución hidroalcohólica básica, obtención del extracto de múltiples derivados de clorinas, hidrólisis en medio básico a vacío, neutralización, obtención del precipitado que contiene alguna cantidad de clorina e6, a partir de la cual, al añadir NaOH
o KOH, hidróxido de potásico, obtienen un producto soluble en agua. El documento RU 2144538 propone un método de obtención de clorinas solubles en agua en el cual las clorinas forman sales solubles en agua con un grupo amino primario o secundario lineal o cíclico o bien con un aminoácido básico. El documento RU 2183956 describe una mezcla de sales de K y Na, sales de potasio y sodio, de clorinas de contenido variable, que resulta del tratamiento consecutivo de la biomasa de Spirulina con acetona para la extracción de clorofila a, y a continuación, el tratamiento de dicho extracto en acetona con ácido clorhídrico para la transformación de clorofila a en feofitina a y su separación mediante centrifugación tras neutralización. A continuación, se procede a la hidrólisis del grupo éster en el sistema compuesto por ácido clorhídrico, acetona-hexano, después se purifica parcialmente mediante precipitación en la mezcla acetona-agua, se seca al aire, se realiza una hidrólisis básica primero en el sistema acetona-base en agua al 0,05-1%, y a continuación, se calienta hasta 40-60ºC con adición de una gran cantidad de base durante un intervalo de tiempo no determinado entre 20 y 90 minutos, se neutraliza el producto de reacción con ácido clorhídrico, se separa mediante centrifugación, se vuelve a suspender en acetona para realizar la separación de los productos de degradación y se seca en un alto intervalo de temperaturas de 40-100ºC durante una hora-30 días. En este documento se establece como objeto de invención un fotosensibilizante compuesto de, al menos, tres compuestos de la familia de las clorinas de contenido variable o inestable, en forma de sales de potasio y sodio solubles en agua.
Frente a la presente invención estos sistemas conocidos arrojan los siguientes inconvenientes:
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- Ninguno de los métodos de obtención de sales de clorina solubles en agua permite obtener el producto final con alto grado de pureza y, en concordancia, obtener una fórmula médica estándar con propiedades biológicas determinadas y que sea estable durante su periodo de conservación, lo que dificulta la creación de formas terapéuticas basadas en clorina e6.
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- El método de la hidrólisis del correspondiente trimetril éster en THF, en atmósfera de nitrógeno, presenta el inconveniente de la síntesis previa del éster trimetílico de clorina e6 porque durante el proceso de saponificación en medio básico de los tres grupos éster, cabe la posibilidad de que se generen varios productos no saponificados por completo, tales como ésteres mono-y dimetilo, mientras que para llevar a cabo la hidrólisis definitiva de los grupos ésteres es necesario un largo periodo de tiempo de reacción, lo que influye negativamente sobre la estabilidad de la clorina e6 en medio básico.
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- El documento RU 2054476 describe la obtención de sales trisódica y tripotásica pero en este método la cantidad de clorinas no se encuentra determinada, lo que dificulta la obtención de una fórmula médica para su utilización terapéutica. El principal inconveniente de éste método de obtención de sales de clorina e6 solubles en agua es el hecho de que el producto final no puede tener un contenido estable y como consecuencia, tener características espectrales iguales, es decir, espectros de absorción y fluorescencia.
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- El documento RU 2144538 propone un método según el cual las clorinas que contienen tres restos carboxílicos forman sales solubles en agua con un grupo amino primario o secundario lineal o cíclico o bien con un aminoácido básico. Las desventajas de este método se encuentran en que para obtener las soluciones de clorinas en agua se utiliza un producto que contiene una mezcla de diferentes clorinas, donde el contenido en clorina e6 varía ampliamente encontrándose entre el 80-90%. El contenido relativamente bajo de clorina e6 se debe principalmente a la dificultad de su obtención a partir de la biomasa de Spirulina.
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- El documento RU 2183956 describe una transformación compleja no singular de las microalgas de Spirulina pero el resultado es un producto de contenido no determinado cuyas características físico-químicas y fotofísicas, así como sus cualidades biológicas van a depender de muchos factores y, por tanto, su uso como preparado médico puede tener consecuencias impredecibles.
Las ventajas que aporta la presente invención sobre el estado de la técnica son las siguientes:
- -
- Se obtiene un fotosensibilizante soluble en agua que permanece estable durante su periodo de conservación y que tiene un contenido constante y elevado de la sustancia activa, clorina e6.
- -
- Se utiliza un método de obtención del fotosensibilizante empleando como reactivo de partida estándar metilfeoforbida a, de alta pureza, no inferior al 99%, según HPLC, técnica utilizada para separar los componentes de una mezcla, así como sus características espectrales.
- -
- La utilización de metilfeoforbida a como material de partida facilita el seguimiento por HPLC del proceso de apertura del anillo exocíclico para originar la clorina e6.
La presente invención está constituida a partir de dos etapas con sus correspondientes subetapas:
A) Primera etapa.-Obtención del reactivo de partida metilfeoforbida a
1) Se procede al secado, mediante liofilización, de la microalga Spirulina Platensis, y a continuación, se suspenden veinte gramos de dicho alga en sesenta mililitros de metanol.
2) A continuación, se le añaden tres mililitros de ácido sulfúrico concentrado y se agita durante veinticuatro horas.
3) Se procede a la filtración y se reduce el volumen de metanol por medio de evaporación.
4) Al residuo aceitoso resultante se le añaden diez mililitros de hexano o bien éter etílico, se agita y se separa la capa de hexano, que se elimina.
5) Al citado residuo se le añaden diez mililitros de hexano repitiendo la operación descrita en el apartado cuatro dos veces.
6) A la capa inferior de dicho residuo se le añaden cincuenta mililitros de diclorometano y se diluye la mezcla con cien mililitros de agua fría.
7) Se procede a separar la capa orgánica, se lava con agua y se evapora el volumen al mínimo.
8) A continuación se procede a purificar el residuo obtenido mediante cromatografía de columna en silica gel empleando como eluyente cloroformo/éter etílico 95:5.
9) Se evaporan lo disolventes y la metilfeoforbida a obtenida se purifica mediante cristalización utilizando la mezcla cloroformo-metanol. La fórmula de la metilfeoforbida a se muestra en la figura 2.
B) Segunda etapa.-Síntesis del fotosensibilizante a partir de metilfeoforbida a
1) A una solución de 4 g de metilfeoforbida a en 750 mililitros de acetona a 35-40ºC se le añaden diez gramos de KOH, hidróxido de potásico, en cien mililitros de agua, dejando en reposo durante cinco minutos, borboteando argón intensamente.
2) A continuación y a una temperatura de 40-50ºC se le añaden 45 gramos de KOH en 450 mililitros de agua, manteniéndola a esa temperatura durante quince minutos.
3) Posteriormente se eleva la temperatura a 60ºC y se mantiene en esta temperatura durante 45 minutos, controlando el proceso de transformación de metilfeoforbida a en clorina e6, mediante cromatografía líquida de alta resolución.
4) Se procede enfriando la solución a 15-20ºC para neutralizarla con una solución de ácido clorhídrico, 126 mililitros de ácido clorhídrico al 35% más 250 mililitros de agua, hasta alcanzar un valor de pH de 4,5-5.
5) En ese momento se separa el precipitado resultante mediante centrifugación, se aclara dos veces con agua estéril apirógena, suspendiéndolo en agua estéril apirógena, se centrifuga dos o tres veces adicionales y se diluye el precipitado obtenido en una solución acuosa de 2,5 gramos de N-metil-D-glucamina en 500 mililitros de agua estéril apirógena.
6) A continuación, se eleva el pH hasta 7,75-8,20 añadiendo N-metil-D-glucamina y, después, se añade agua estéril apirógena hasta que la densidad óptica de la solución a 654 nanómetros y pH 9 sea de 400-420 unidades.
7) Por último, se filtra la solución a través de un filtro de 0,22 micras de tamaño de poro que permite obtener soluciones estériles sin que se produzca el deterioro de la estructura del fotosensibilizante, cuya fórmula estructural se muestra a en la figura 3.
Como resultado del procedimiento anteriormente descrito se obtiene una solución acuosa de clorina e6 prácticamente pura, grado de pureza superior al 98,5%, estabilizada con N-metil-D-glucamina tal y como se aprecia en el cromatograma de la figura 4.
Las condiciones para la realización de la cromatografía líquida de alta resolución son:
- -
- Sistema de HPLC JASCO LC-2000 Plus; Bomba de gradiente cuaternario Mod. PU-2089, Detector UV-VIS Mod. UV-2070, Horno de columnas Mod. CO-2067, Muestreador automático Mod. AS-2055.
- -
- Columna de cromatografía PHENOMENEX, Luna 5 μm C18 100 ˚A 250x4,6 nm
- -
- Fase móvil: Gradiente Acetonitrilo -H2O-CF3COOH 0,1% v/v; desde 45% a 100% de acetonitrilo en 20 minutos.
- -
- Flujo: 1.0 ml/min.
- -
- Detección a 405 nm.
- -
- Volumen de inyección: 20 μL.
- -
- Temperatura de la columna: 25ºC.
Igualmente, en la figura 5 se muestra el cromatograma correspondiente a seguimiento de la reacción de transformación de metilfeoforbida a en clorina e6. Para ello se toma una muestra de la mezcla de reacción y se trata con la solución MeOH-H2O-CF3COOH con una concentración de 90:10:0,01 v/v, obteniéndose una solución ácida, lo que se detecta por el cambio de coloración de marrón oscuro a azul, debido a la aparición del dicatión clorina e6.
El espectro de absorción del fotosensibilizante en agua a un pH de 9.5 se muestra en la Figura 6. Los espectros de absorción han sido adquiridos en el espectrofotómetro modelo Jasco V-630 que tiene un ancho de banda de 1,5 mm. Las condiciones seleccionadas para llevar a cabo la reacción de transformación de metilfeoforbida a en clorina e6, previamente indicadas, son óptimas desde el punto de vista de la apertura del anillo exocíclico para originar la molécula de clorina e6.
Una realización preferida de la invención está constituida a partir de dos etapas con sus correspondientes subetapas:
A) Primera etapa.-Obtención del reactivo de partida metilfeoforbida a
1) Se procede al secado, mediante liofilización, de la microalga Spirulina Platensis, y a continuación, se suspenden veinte gramos de dicho alga en sesenta mililitros de metanol.
2) A continuación, se le añaden tres mililitros de ácido sulfúrico concentrado y se agita durante veinticuatro horas.
3) Se procede a la filtración y se reduce el volumen de metanol por medio de evaporación.
4) Al residuo aceitoso resultante se le añaden diez mililitros de hexano o bien éter etílico, se agita y se separa la capa de hexano, que se elimina.
5) Al citado residuo se le añaden diez mililitros de hexano repitiendo la operación descrita en el apartado cuatro dos veces.
6) A la capa inferior de dicho residuo se le añaden cincuenta mililitros de diclorometano y se diluye la mezcla con cien mililitros de agua fría.
7) Se procede a separar la capa orgánica, se lava con agua y se evapora el volumen al mínimo.
8) A continuación se procede a purificar el residuo obtenido mediante cromatografía de columna en silica gel empleando como eluyente cloroformo/éter etílico 95:5.
9) Se evaporan lo disolventes y la metilfeoforbida a obtenida se purifica mediante cristalización utilizando la mezcla cloroformo-metanol. La fórmula de la metilfeoforbida a se muestra en la figura 2.
B) Segunda etapa.-Síntesis del fotosensibilizante a partir de metilfeoforbida a
1) A una solución de 4 g de metilfeoforbida a en 750 mililitros de acetona a 35-40ºC se le añaden diez gramos de KOH, hidróxido de potásico, en cien mililitros de agua, dejando en reposo durante cinco minutos, borboteando argón intensamente.
2) A continuación y a una temperatura de 40-50ºC se le añaden 45 gramos de KOH en 450 mililitros de agua, manteniéndola a esa temperatura durante quince minutos.
3) Posteriormente se eleva la temperatura a 60ºC y se mantiene en esta temperatura durante 45 minutos, controlando el proceso de transformación de metilfeoforbida a en clorina e6, mediante cromatografía líquida de alta resolución.
4) Se procede enfriando la solución a 15-20ºC para neutralizarla con una solución de ácido clorhídrico, 126 mililitros de ácido clorhídrico al 35% más 250 mililitros de agua, hasta alcanzar un valor de pH de 4,5-5.
5) En ese momento se separa el precipitado resultante mediante centrifugación, se aclara dos veces con agua estéril apirógena, suspendiéndolo en agua estéril apirógena, se centrifuga dos o tres veces adicionales y se diluye el precipitado obtenido en una solución acuosa de 2,5 gramos de N-metil-D-glucamina en 500 mililitros de agua estéril apirógena.
6) A continuación, se eleva el pH hasta 7,75-8,20 añadiendo N-metil-D-glucamina y, después, se añade agua estéril apirógena hasta que la densidad óptica de la solución a 654 nanómetros y pH 9 sea de 400-420 unidades.
7) Por último, se filtra la solución a través de un filtro de 0,22 micras de tamaño de poro que permite obtener soluciones estériles sin que se produzca el deterioro de la estructura del fotosensibilizante, cuya fórmula estructural se muestra en la figura 3.
Como resultado del procedimiento anteriormente descrito se obtiene una solución acuosa de clorina e6 prácticamente pura, grado de pureza superior al 98,5%.
Claims (19)
- REIVINDICACIONES
- 1.
- Procedimiento para la obtención de un fotosensibilizante para ser empleado en terapia fotodinámica, constituido por dos etapas con sus correspondientes subetapas, caracterizado por estar constituido a partir de dos etapas con sus correspondientes subetapas. La primera etapa consiste en la obtención del reactivo de partida metilfeoforbida a procediéndose al secado, mediante liofilización, de la microalga llamada Spirulina Platensis y posterior suspensión de veinte gramos de dicho alga en sesenta mililitros de metanol.
-
- 2.
- Procedimiento para la obtención de un fotosensibilizante para ser empleado en terapia fotodinámica, según reivindicación 1, caracterizado porque a continuación se le añaden tres mililitros de ácido sulfúrico concentrado y se agita durante veinticuatro horas.
-
- 3.
- Procedimiento para la obtención de un fotosensibilizante para ser empleado en terapia fotodinámica, según reivindicación 1 y 2, caracterizado porque se procede a la filtración y se reduce el volumen de metanol por medio de evaporación.
-
- 4.
- Procedimiento para la obtención de un fotosensibilizante para ser empleado en terapia fotodinámica, según reivindicación1a3, caracterizado porque al residuo aceitoso resultante se le añaden diez mililitros de hexano o bien éter etílico, se agita y se separa la capa de hexano, que se elimina.
-
- 5.
- Procedimiento para la obtención de un fotosensibilizante para ser empleado en terapia fotodinámica, según reivindicación 1 a 4, caracterizado porque al citado residuo se le añaden diez mililitros de hexano repitiendo la operación descrita en el apartado cuatro dos veces.
-
- 6.
- Procedimiento para la obtención de un fotosensibilizante para ser empleado en terapia fotodinámica, según reivindicación1a5, caracterizado porque a la capa inferior de dicho residuo se le añaden cincuenta mililitros de diclorometano y se diluye la mezcla con cien mililitros de agua fría.
-
- 7.
- Procedimiento para la obtención de un fotosensibilizante para ser empleado en terapia fotodinámica, según reivindicación 1 a 6, caracterizado porque se procede a separar la capa orgánica, se lava con agua y se evapora el volumen al mínimo.
-
- 8.
- Procedimiento para la obtención de un fotosensibilizante para ser empleado en terapia fotodinámica, según reivindicación 1 a 7, caracterizado porque a continuación se procede a purificar el residuo obtenido mediante cromatografía de columna en silica gel empleando como eluyente cloroformo/ éter etílico 95:5.
-
- 9.
- Procedimiento para la obtención de un fotosensibilizante para ser empleado en terapia fotodinámica, según reivindicación 1 a 7, caracterizado porque se evaporan lo disolventes y la metilfeoforbida a obtenida se purifica mediante cristalización utilizando la mezcla cloroformo-metanol. La fórmula de metilfeoforbida se muestra en la figura 2.
-
- 10.
- Procedimiento para la obtención de un fotosensibilizante para ser empleado en terapia fotodinámica, según reivindicación 1 a 9, caracterizado porque la segunda etapa se constituye ser la síntesis del fotosensibilizante a partir de metilfeoforbida a consistiendo en la adición, a una solución de4gde metilfeoforbida a en 750 mililitros de acetona a 35-40ºC, de diez gramos de KOH, hidróxido de potásico, en cien mililitros de agua, dejando en reposo durante cinco minutos, borboteando argón intensamente.
-
- 11.
- Procedimiento para la obtención de un fotosensibilizante para ser empleado en terapia fotodinámica, según reivindicación 1 a 10, caracterizado porque a continuación y a una temperatura de 40-50ºC se le añaden 45 gramos de KOH en 450 mililitros de agua, manteniéndola a esa temperatura durante quince minutos.
-
- 12.
- Procedimiento para la obtención de un fotosensibilizante para ser empleado en terapia fotodinámica, según reivindicación1a11, caracterizado porque posteriormente se eleva la temperatura a 60ºC y se mantiene en esta temperatura durante 45 minutos, controlando el proceso de transformación de metilfeoforbida a en clorina e6, mediante cromatografía líquida de alta resolución.
-
- 13.
- Procedimiento para la obtención de un fotosensibilizante para ser empleado en terapia fotodinámica, según reivindicación1a12, caracterizado porque se procede enfriando la solución a 15-20ºC para neutralizarla con una solución de ácido clorhídrico, 126 mililitros de ácido clorhídrico al 35% más 250 mililitros de agua, hasta alcanzar un valor de pH de 4,5-5.
-
- 14.
- Procedimiento para la obtención de un fotosensibilizante para ser empleado en terapia fotodinámica, según reivindicación 1 a 13, caracterizado porque en ese momento se separa el precipitado resultante mediante centrifugación, se aclara dos veces con agua estéril, suspendiéndolo en agua apirógena, se centrifuga dos o tres veces adicionales y se diluye el precipitado obtenido en una solución acuosa de 2,5 gramos de N-metil-D-glucamina en 500 mililitros de agua estéril apirógena.
-
- 15.
- Procedimiento para la obtención de un fotosensibilizante para ser empleado en terapia fotodinámica, según reivindicación1a14, caracterizado porque a continuación se eleva el pH hasta 7,75-8,20 añadiendo N-metil-Dglucamina como estabilizador y, después, se añade agua estéril apirógena hasta que la densidad óptica de la solución a 654 nanómetros y pH 9 sea de 400-420 unidades.
-
- 16.
- Procedimiento para la obtención de un fotosensibilizante para ser empleado en terapia fotodinámica, según reivindicación1a15, caracterizado porque, por último, se filtra la solución a través de un filtro de 0,22 micras de tamaño de poro que permite obtener soluciones estériles sin que se produzca el deterioro de la estructura del fotosensibilizante.
-
- 17.
- Fotosensibilizante, obtenido por el procedimiento de las reivindicaciones 1 a 16, caracterizado porque consiste en una solución de clorina e6 prácticamente pura, grado de pureza superior al 98,5%, estabilizada con N-metil-Dglucamina. La fórmula estructural del fotosensibilizante descrito, Fotontcine, se muestra en la Figura 3.
7 8 9 10OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS N.º solicitud: 200901660 ESPAÑAFecha de presentación de la solicitud: 27.07.2009- INFORME SOBRE EL ESTADO DE LA TECNICA
- Fecha de prioridad:
- 51 Int. Cl. :
- A61K 31/409 (2006.01)
- A61P 35/00 (2006.01)
DOCUMENTOS RELEVANTES- Categoría
- 56 Documentos citados Reivindicaciones afectadas
- X
- RU 2330037 C1 (PONOMAREV GELIJ VASIL'EVICH, IPATOVA OL'GA 1-13
- MIKHAJLOVNA) 27.07.2008, resumen.
- X
- RU 2276976 C2 (OTKRYTOE AKTSIONERNOE OBSHCHESTVO "GRUPPA 1,14-17
- KOMPANIJ GRAND") 27.05.2006, resumen.
- X
- EP 1404678 B1 (CERAMOPTEC GMBH; CERAMOPTEC INDUSTRIES, INC) 1-17
-
- 16.08.2006, [0008]-[0009], ejemplos 1,8-9.
- A
- EP 1380295 A1 (OBSCHESTVO S OGRANICHENNOY OTVETSTVENNOSTJU 1-17
- RADAFARMA) 14.01.2004, resumen; reivindicaciones 1-4; ejemplo 2.
- Categoría de los documentos citados X: de particular relevancia Y: de particular relevancia combinado con otro/s de la misma categoría A: refleja el estado de la técnica O: referido a divulgación no escrita P: publicado entre la fecha de prioridad y la de presentación de la solicitud E: documento anterior, pero publicado después de la fecha de presentación de la solicitud
- El presente informe ha sido realizado • para todas las reivindicaciones • para las reivindicaciones nº:
- Fecha de realización del informe 26.07.2010
- Examinador A. Amaro Roldán Página 1/4
Nº de solicitud: 200901660INFORME SOBRE EL ESTADO DE LA TÉCNICADocumentación mínima buscada (sistema de clasificación seguido de los símbolos de clasificación) A61K, A61P Bases de datos electrónicas consultadas durante la búsqueda (nombre de la base de datos y, si es posible, términos de búsquedautilizados) INVENES, EPODOC, WPI, EMBASEOPINIÓN ESCRITANº de solicitud: 200901660Fecha de Realización de la Opinión Escrita: 26.07.2010- Declaración
- Novedad (Art. 6.1 LP 11/1986)
- Reivindicaciones 1-17 Reivindicaciones _____________________________________ SÍ NO
- Actividad inventiva
- Reivindicaciones _____________________________________ SÍ
- (Art. 8.1 LP11/1986)
- Reivindicaciones 1-17 NO
Se considera que la solicitud cumple con el requisito de aplicación industrial. Este requisito fue evaluado durante la fase de examen formal y técnico de la solicitud (Artículo 31.2 Ley 11/1986).Base de la Opinión.-La presente opinión se ha realizado sobre la base de la solicitud de patente tal y como ha sido publicada.OPINIÓN ESCRITANº de solicitud: 2009016601. Documentos considerados.-A continuación se relacionan los documentos pertenecientes al estado de la técnica tomados en consideración para la realización de esta opinión.- Documento
- Número Publicación o Identificación Fecha Publicación
- D01
- RU 2330037 C1 27.07.2008
- D02
- RU 2276976 C2 27.05.2006
- D03
- EP 1404678 B1 16.08.2006
- D04
- EP 1380295 A1 14.01.2004
- 2. Declaración motivada según los artículos 29.6 y 29.7 del Reglamento de ejecución de la Ley 11/1986, de 20 de marzo, de Patentes sobre la novedad y la actividad inventiva; citas y explicaciones en apoyo de esta declaraciónLa presente invención se refiere al procedimiento de obtención del fotosensibilizante formado por la chlorina e6 con una pureza superior al 98,5%, estabilizada en los tres grupos ácidos con N-metil-D-glucamina. El procedimiento de obtención comprende dos etapas, la primera de las cuales consiste en la obtención de la metilfeoforbida a partir de la Spirulina Platensis, una vez seca mediante liofilización, suspensión en metanol y tratamiento con ácido sulfúrico y posteriores tratamientos de extracción con hexano o éter etílico repetidas veces, separación, concentración de la capa orgánica y posterior tratamiento del residuo purificándolo en columna con sílica gel y eluyendo con cloroformo/éter etílico 95:5. La metilfeoforbida se purifica por cristalización. La segunda etapa consiste en disolver la metilfeoforbida en acetona a 35-40ºC, añadir hidóxido sódico, elevar la temperatura hasta 60ºC, después de añadir ácido clorhídrico, precipitar y separar, añadir en solución N-metil-D-glucamina hasta pH = 7,758,20 para estabilizar la chlorina e6, que se aísla con pureza de al menos 98,5%, la cual es el principio activo que forma el fotosensibilizante de la invención que se usa en el tratamiento del cáncer y otras neoplasias.D01 se refiere a la producción de compuestos biológicamente activos tal como la chlorina e6, para utilizarla como fotosensibilizante en la terapia contra el cáncer. El método de obtención consiste en añadir ácido sulfúrico concentrado a una suspensión de Spirulina en metanol seguido de filtración, dilución con agua, neutralización con base, filtración, lavado del filtrado a través de silica gel y obtención de la alquil-feoforbida. En la segunda etapa, la alquil-feoforbida se diluye con acetona, se procesa añadiendo una base y neutralizando con ácido clorhídrico, y después de varias etapas de filtrado, lavado, centrifugación y liofilización se obtiene la chlorina e6.D02 se refiere a la producción de compuestos biológicamente activos. El método para obtener un fotosensibilizante implica el tratamiento de la Spirulina, previamente secada, con metanol para preparar un precipitado que contiene la chlorina e6 seguido de lavado, suspensión y centrifugación, repetidas veces. El precipitado se disuelve en una solución acuosa de N-metil-D-glucamina y el pH se sube a 7,75-820, entonces se añaden 510-520 ml de agua apirogénica para obtener una densidad óptica de 200-210 U a 654 nm y pH = 9, seguido de filtración de la solución a través de un filtro de 0,22 micras de tamaño de poro y se añade polivinilpirrolidona de peso molecular entre 9600 y 11500 Da. El fotosensibilizante para dinámica fotodinámica preparado contiene chlorina e6 en al menos 98%, N-metil-D-glucamina en la proporción de 1:2 y polivinilpirrolidona. La fórmula de la chlorina e6 mostrada es similar a la fórmula de la Figura 3 de la presente solicitud excepto que tiene solo dos grupos ácido unido cada uno a una molécula de N-metil-glucamina, a diferencia de la presente invención que tiene los tres.D03 se refiere a un método de preparación con alta pureza de derivados de porfirina solubles en agua. El ejemplo 1 describe la obtención de la metil-feoforbida a partir de la Spirulina platensis disuelta en metanol y tratada con ácido sulfúrico y posteriormente se trata con hexano, con cloroformo,etc por tres métodos (A, B y C) con ligeras variaciones hasta obtener la metil-feoforbida. El ejemplo 8 describe la obtención de la chlorina e6 a partir de la metil-feoforbida y el ejemplo 9 la preparación de la chlorina e6 unida a la N-Me-Glucamina.D04 se refiere a un método de obtención de un fotosensibilizante para curar el cáncer, el cual comprende 80-90% de chlorina e6, 5-20% de purpurina 5 y el resto de purpurina 18.NOVEDAD Y ACTIVIDAD INVENTIVAEn vista de que el objeto de la invención, tal como se recoge en las reivindicaciones 1 -17 no ha sido divulgado idénticamente en ninguno de los documentos citados, dichas reivindicaciones 1-17 se consideran nuevas según el Art.6 de la LP 11/86.Sin embargo, considerando que D01 le quita la actividad inventiva a las reivindicaciones 1-14, D02 a la 1 y 14-17 y D03 a la 1-17 independientemente, se concluye que ninguna de las reivindicaciones de la presente invención posee actividad inventiva según el Art.8 de LP 11/86.Informe sobre el Estado de la Técnica (Opinión escrita) Página 4/4
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-
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