ES2354096A1 - Procedimiento para la obtencion de un fotosensibilizante para ser empleado en terapia fotodinamica y fotosensibilizante. - Google Patents
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Abstract
Procedimiento para la obtención de un fotosensibilizante para ser empleado en terapia fotodinámica y fotosensibilizante.La presente invención se refiere a un método para la preparación de un fotosensibilizante consistente en el tratamiento del alga Spirulina previamente secada para obtener la forma soluble en agua de clorina e6, con elevado grado de pureza y un nuevo fotosensibilizante con valiosas propiedades terapéuticas, pues, la preparación de una forma de clorina e6 soluble en agua de elevada pureza y estable mediante su conservación con N-Metil-D-glucamina, principio activo, que se emplea como fotosensibilizante en el tratamiento mediante terapia fotodinámica de cáncer y otras neoplasias de diferente origen. Como resultado del procedimiento anteriormente descrito se obtiene una solución de clorina e6 prácticamente pura cuya estructura se muestra en la Figura 3.
Description
Procedimiento para la obtención de un
fotosensibilizante para ser empleado en terapia fotodinámica y
fotosensibilizante.
La presente invención se refiere a un método
para la preparación de un fotosensibilizante consistente en el
tratamiento del alga Spirulina previamente secada para
obtener la forma soluble en agua de clorina e_{6}, con elevado
grado de pureza y un nuevo fotosensibilizante con valiosas
propiedades terapéuticas. Este procedimiento permite el desarrollo
de una nueva fórmula médica dotada de las más efectivas propiedades
terapéuticas para el tratamiento de diferentes enfermedades
oncológicas, empleando métodos de terapia fotodinámica basados en un
contenido más elevado de clorina e_{6}. Permite, pues, la
preparación de una forma de clorina e_{6} soluble en agua de
elevada pureza y estable mediante su conservación con
N-Metil-D-glucamina,
principio activo, que se emplea como fotosensibilizante en el
tratamiento mediante terapia fotodinámica de cáncer y otras
neoplasias de diferente origen. Igualmente, se mejora el método de
preparación.
El cáncer es un crecimiento tisular producido
por la proliferación continua de células anormales con capacidad de
invasión y destrucción de otros tejidos. Puede originarse a partir
de cualquier tipo de célula en cualquier tejido corporal. No es una
enfermedad única sino un conjunto de enfermedades que se clasifican
en función del tejido y célula de origen. Existen varios cientos de
formas distintas, siendo tres los principales subtipos: los
sarcomas, que proceden del tejido conectivo, los carcinomas que
proceden de tejidos epiteliales y un tercer tipo en el que se
encuentran las leucemias y los linfomas. Es, en muchos casos,
incurable y toda investigación cuyo objetivo sea frenarlo o curarlo
definitivamente debe de ser potenciada sin ningún tipo de
obstáculos.
Se encuadra dentro de la industria de los
productos fotosensibilizantes terapéuticos y, dentro de ésta, en
productos terapéuticos para la medicina y farmacología.
Así, se conocen varios métodos de obtención de
sales de clorina e_{6} solubles en agua. Un método para la
obtención de sales solubles de clorina e_{6} consiste en la
hidrólisis del correspondiente trimetril éster en THF,
tetrahidrofurano, bajo atmósfera de nitrógeno, en presencia de NaOH,
hidróxido de sodio, durante cuarenta y ocho horas a temperatura
ambiente. La estructura química del trimetil éster se refleja en la
figura 1.
El documento RU 2054476 describe un método de
obtención de las sales trisódica y tripotásica de clorina e_{6}.
El método de obtención del ácido
18-carboxi-20-carboximetil-8-etenil-13-etil-2,3-dihidro-,7,12,17-tetrametil-21H,23H-porfirin-2-propionico
o de sus sales, consiste en el tratamiento de la biomasa de
Spirulina con una solución hidroalcohólica básica, obtención
del extracto de múltiples derivados de clorinas, hidrólisis en medio
básico a vacío, neutralización, obtención del precipitado que
contiene alguna cantidad de clorina e_{6}, a partir de la cual, al
añadir NaOH o KOH, hidróxido de potásico, obtienen un producto
soluble en agua. El documento RU 2144538 propone un método de
obtención de clorinas solubles en agua en el cual las clorinas
forman sales solubles en agua con un grupo amino primario o
secundario lineal o cíclico o bien con un aminoácido básico. El
documento RU 2183956 describe una mezcla de sales de K y Na, sales
de potasio y sodio, de clorinas de contenido variable, que resulta
del tratamiento consecutivo de la biomasa de Spirulina con
acetona para la extracción de clorofila a, y a continuación,
el tratamiento de dicho extracto en acetona con ácido clorhídrico
para la transformación de clorofila a en feofitina a y
su separación mediante centrifugación tras neutralización. A
continuación, se procede a la hidrólisis del grupo éster en el
sistema compuesto por ácido clorhídrico,
acetona-hexano, después se purifica parcialmente
mediante precipitación en la mezcla acetona-agua, se
seca al aire, se realiza una hidrólisis básica primero en el sistema
acetona-base en agua al 0,05-1%, y a
continuación, se calienta hasta 40-60ºC con adición
de una gran cantidad de base durante un intervalo de tiempo no
determinado entre 20 y 90 minutos, se neutraliza el producto de
reacción con ácido clorhídrico, se separa mediante centrifugación,
se vuelve a suspender en acetona para realizar la separación de los
productos de degradación y se seca en un alto intervalo de
temperaturas de 40-100ºC durante una
hora-30 días. En este documento se establece como
objeto de invención un fotosensibilizante compuesto de, al menos,
tres compuestos de la familia de las clorinas de contenido variable
o inestable, en forma de sales de potasio y sodio solubles en
agua.
agua.
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Frente a la presente invención estos sistemas
conocidos arrojan los siguientes inconvenientes:
- -
- Ninguno de los métodos de obtención de sales de clorina solubles en agua permite obtener el producto final con alto grado de pureza y, en concordancia, obtener una fórmula médica estándar con propiedades biológicas determinadas y que sea estable durante su periodo de conservación, lo que dificulta la creación de formas terapéuticas basadas en clorina e_{6}.
- -
- El método de la hidrólisis del correspondiente trimetril éster en THF, en atmósfera de nitrógeno, presenta el inconveniente de la síntesis previa del éster trimetílico de clorina e_{6} porque durante el proceso de saponificación en medio básico de los tres grupos éster, cabe la posibilidad de que se generen varios productos no saponificados por completo, tales como ésteres mono- y dimetilo, mientras que para llevar a cabo la hidrólisis definitiva de los grupos ésteres es necesario un largo periodo de tiempo de reacción, lo que influye negativamente sobre la estabilidad de la clorina e_{6} en medio básico.
- -
- El documento RU 2054476 describe la obtención de sales trisódica y tripotásica pero en este método la cantidad de clorinas no se encuentra determinada, lo que dificulta la obtención de una fórmula médica para su utilización terapéutica. El principal inconveniente de éste método de obtención de sales de clorina e_{6} solubles en agua es el hecho de que el producto final no puede tener un contenido estable y como consecuencia, tener características espectrales iguales, es decir, espectros de absorción y fluorescencia.
- -
- El documento RU 2144538 propone un método según el cual las clorinas que contienen tres restos carboxílicos forman sales solubles en agua con un grupo amino primario o secundario lineal o cíclico o bien con un aminoácido básico. Las desventajas de este método se encuentran en que para obtener las soluciones de clorinas en agua se utiliza un producto que contiene una mezcla de diferentes clorinas, donde el contenido en clorina e_{6} varía ampliamente encontrándose entre el 80-90%. El contenido relativamente bajo de clorina e_{6} se debe principalmente a la dificultad de su obtención a partir de la biomasa de Spirulina.
- -
- El documento RU 2183956 describe una transformación compleja no singular de las microalgas de Spirulina pero el resultado es un producto de contenido no determinado cuyas características físico-químicas y fotofísicas, así como sus cualidades biológicas van a depender de muchos factores y, por tanto, su uso como preparado médico puede tener consecuencias impredecibles.
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Las ventajas que aporta la presente invención
sobre el estado de la técnica son las siguientes:
- -
- Se obtiene un fotosensibilizante soluble en agua que permanece estable durante su periodo de conservación y que tiene un contenido constante y elevado de la sustancia activa, clorina e_{6}.
- -
- Se utiliza un método de obtención del fotosensibilizante empleando como reactivo de partida estándar metilfeoforbida a, de alta pureza, no inferior al 99%, según HPLC, técnica utilizada para separar los componentes de una mezcla, así como sus características espectrales.
- -
- La utilización de metilfeoforbida a como material de partida facilita el seguimiento por HPLC del proceso de apertura del anillo exocíclico para originar la clorina e_{6}.
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La presente invención está constituida a partir
de dos etapas con sus correspondientes subetapas:
A) Primera etapa.- Obtención del reactivo de
partida metilfeoforbida a
- 1)
- Se procede al secado, mediante liofilización, de la microalga Spirulina Platensis, y a continuación, se suspenden veinte gramos de dicho alga en sesenta mililitros de metanol.
- 2)
- A continuación, se le añaden tres mililitros de ácido sulfúrico concentrado y se agita durante veinticuatro horas.
- 3)
- Se procede a la filtración y se reduce el volumen de metanol por medio de evaporación.
- 4)
- Al residuo aceitoso resultante se le añaden diez mililitros de hexano o bien éter etílico, se agita y se separa la capa de hexano, que se elimina.
- 5)
- Al citado residuo se le añaden diez mililitros de hexano repitiendo la operación descrita en el apartado cuatro dos veces.
- 6)
- A la capa inferior de dicho residuo se le añaden cincuenta mililitros de diclorometano y se diluye la mezcla con cien mililitros de agua fría.
- 7)
- Se procede a separar la capa orgánica, se lava con agua y se evapora el volumen al mínimo.
- 8)
- A continuación se procede a purificar el residuo obtenido mediante cromatografía de columna en silica gel empleando como eluyente cloroformo/éter etílico 95:5.
- 9)
- Se evaporan lo disolventes y la metilfeoforbida a obtenida se purifica mediante cristalización utilizando la mezcla cloroformo-metanol. La fórmula de la metilfeoforbida a se muestra en la figura 2.
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B) Segunda etapa.- Síntesis del
fotosensibilizante a partir de metilfeoforbida a
- 1)
- A una solución de 4 g de metilfeoforbida a en 750 mililitros de acetona a 35-40ºC se le añaden diez gramos de KOH, hidróxido de potásico, en cien mililitros de agua, dejando en reposo durante cinco minutos, borboteando argón intensamente.
- 2)
- A continuación y a una temperatura de 40-50ºC se le añaden 45 gramos de KOH en 450 mililitros de agua, manteniéndola a esa temperatura durante quince minutos.
- 3)
- Posteriormente se eleva la temperatura a 60ºC y se mantiene en esta temperatura durante 45 minutos, controlando el proceso de transformación de metilfeoforbida a en clorina e_{6}, mediante cromatografía líquida de alta resolución.
- 4)
- Se procede enfriando la solución a 15-20ºC para neutralizarla con una solución de ácido clorhídrico, 126 mililitros de ácido clorhídrico al 35% más 250 mililitros de agua, hasta alcanzar un valor de pH de 4,5-5.
- 5)
- En ese momento se separa el precipitado resultante mediante centrifugación, se aclara dos veces con agua estéril apirógena, suspendiéndolo en agua estéril apirógena, se centrifuga dos o tres veces adicionales y se diluye el precipitado obtenido en una solución acuosa de 2,5 gramos de N-metil-D-glucamina en 500 mililitros de agua estéril apirógena.
- 6)
- A continuación, se eleva el pH hasta 7,75-8,20 añadiendo N-metil-D-glucamina y, después, se añade agua estéril apirógena hasta que la densidad óptica de la solución a 654 nanómetros y pH 9 sea de 400-420 unidades.
- 7)
- Por último, se filtra la solución a través de un filtro de 0,22 micras de tamaño de poro que permite obtener soluciones estériles sin que se produzca el deterioro de la estructura del fotosensibilizante, cuya fórmula estructural se muestra a en la figura 3.
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Como resultado del procedimiento anteriormente
descrito se obtiene una solución acuosa de clorina e_{6}
prácticamente pura, grado de pureza superior al 98,5%, estabilizada
con
N-metil-D-glucamina
tal y como se aprecia en el cromatograma de la figura 4.
Las condiciones para la realización de la
cromatografía líquida de alta resolución son:
- -
- Sistema de HPLC JASCO LC-2000 Plus; Bomba de gradiente cuaternario Mod. PU-2089, Detector UV-VIS Mod. UV-2070, Horno de columnas Mod. CO-2067, Muestreador automático Mod. AS-2055.
- -
- Columna de cromatografía PHENOMENEX, Luna 5 \mum C18 100 \ring{A} 250x4,6 nm
- -
- Fase móvil: Gradiente Acetonitrilo - H_{2}O - CF_{3}COOH 0,1% v/v; desde 45% a 100% de acetonitrilo en 20 minutos.
- -
- Flujo: 1.0 ml/min.
- -
- Detección a 405 nm.
- -
- Volumen de inyección: 20 \muL.
- -
- Temperatura de la columna: 25ºC.
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Igualmente, en la figura 5 se muestra el
cromatograma correspondiente a seguimiento de la reacción de
transformación de metilfeoforbida a en clorina e_{6}. Para
ello se toma una muestra de la mezcla de reacción y se trata con la
solución MeOH-H_{2}O-CF_{3}COOH
con una concentración de 90:10:0,01 v/v, obteniéndose una solución
ácida, lo que se detecta por el cambio de coloración de marrón
oscuro a azul, debido a la aparición del dicatión clorina
e_{6}.
El espectro de absorción del fotosensibilizante
en agua a un pH de 9.5 se muestra en la Figura 6. Los espectros de
absorción han sido adquiridos en el espectrofotómetro modelo Jasco
V-630 que tiene un ancho de banda de 1,5 mm. Las
condiciones seleccionadas para llevar a cabo la reacción de
transformación de metilfeoforbida a en clorina e_{6},
previamente indicadas, son óptimas desde el punto de vista de la
apertura del anillo exocíclico para originar la molécula de clorina
e_{6}.
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Una realización preferida de la invención está
constituida a partir de dos etapas con sus correspondientes
subetapas:
A) Primera etapa.- Obtención del reactivo de
partida metilfeoforbida a
- 1)
- Se procede al secado, mediante liofilización, de la microalga Spirulina Platensis, y a continuación, se suspenden veinte gramos de dicho alga en sesenta mililitros de metanol.
- 2)
- A continuación, se le añaden tres mililitros de ácido sulfúrico concentrado y se agita durante veinticuatro horas.
- 3)
- Se procede a la filtración y se reduce el volumen de metanol por medio de evaporación.
- 4)
- Al residuo aceitoso resultante se le añaden diez mililitros de hexano o bien éter etílico, se agita y se separa la capa de hexano, que se elimina.
- 5)
- Al citado residuo se le añaden diez mililitros de hexano repitiendo la operación descrita en el apartado cuatro dos veces.
- 6)
- A la capa inferior de dicho residuo se le añaden cincuenta mililitros de diclorometano y se diluye la mezcla con cien mililitros de agua fría.
- 7)
- Se procede a separar la capa orgánica, se lava con agua y se evapora el volumen al mínimo.
- 8)
- A continuación se procede a purificar el residuo obtenido mediante cromatografía de columna en silica gel empleando como eluyente cloroformo/éter etílico 95:5.
- 9)
- Se evaporan lo disolventes y la metilfeoforbida a obtenida se purifica mediante cristalización utilizando la mezcla cloroformo-metanol. La fórmula de la metilfeoforbida a se muestra en la figura 2.
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B) Segunda etapa.- Síntesis del
fotosensibilizante a partir de metilfeoforbida a
- 1)
- A una solución de 4 g de metilfeoforbida a en 750 mililitros de acetona a 35-40ºC se le añaden diez gramos de KOH, hidróxido de potásico, en cien mililitros de agua, dejando en reposo durante cinco minutos, borboteando argón intensamente.
- 2)
- A continuación y a una temperatura de 40-50ºC se le añaden 45 gramos de KOH en 450 mililitros de agua, manteniéndola a esa temperatura durante quince minutos.
- 3)
- Posteriormente se eleva la temperatura a 60ºC y se mantiene en esta temperatura durante 45 minutos, controlando el proceso de transformación de metilfeoforbida a en clorina e_{6}, mediante cromatografía líquida de alta resolución.
- 4)
- Se procede enfriando la solución a 15-20ºC para neutralizarla con una solución de ácido clorhídrico, 126 mililitros de ácido clorhídrico al 35% más 250 mililitros de agua, hasta alcanzar un valor de pH de 4,5-5.
- 5)
- En ese momento se separa el precipitado resultante mediante centrifugación, se aclara dos veces con agua estéril apirógena, suspendiéndolo en agua estéril apirógena, se centrifuga dos o tres veces adicionales y se diluye el precipitado obtenido en una solución acuosa de 2,5 gramos de N-metil-D-glucamina en 500 mililitros de agua estéril apirógena.
- 6)
- A continuación, se eleva el pH hasta 7,75-8,20 añadiendo N-metil-D-glucamina y, después, se añade agua estéril apirógena hasta que la densidad óptica de la solución a 654 nanómetros y pH 9 sea de 400-420 unidades.
- 7)
- Por último, se filtra la solución a través de un filtro de 0,22 micras de tamaño de poro que permite obtener soluciones estériles sin que se produzca el deterioro de la estructura del fotosensibilizante, cuya fórmula estructural se muestra en la figura 3.
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Como resultado del procedimiento anteriormente
descrito se obtiene una solución acuosa de clorina e_{6}
prácticamente pura, grado de pureza superior al 98,5%.
Claims (17)
1. Procedimiento para la obtención de un
fotosensibilizante para ser empleado en terapia fotodinámica,
constituido por dos etapas con sus correspondientes subetapas,
caracterizado por estar constituido a partir de dos etapas
con sus correspondientes subetapas. La primera etapa consiste en la
obtención del reactivo de partida metilfeoforbida a
procediéndose al secado, mediante liofilización, de la microalga
llamada Spirulina Platensis y posterior suspensión de veinte
gramos de dicho alga en sesenta mililitros de metanol.
2. Procedimiento para la obtención de un
fotosensibilizante para ser empleado en terapia fotodinámica, según
reivindicación 1, caracterizado porque a continuación se le
añaden tres mililitros de ácido sulfúrico concentrado y se agita
durante veinticuatro horas.
3. Procedimiento para la obtención de un
fotosensibilizante para ser empleado en terapia fotodinámica, según
reivindicación 1 y 2, caracterizado porque se procede a la
filtración y se reduce el volumen de metanol por medio de
evaporación.
4. Procedimiento para la obtención de un
fotosensibilizante para ser empleado en terapia fotodinámica, según
reivindicación 1 a 3, caracterizado porque al residuo
aceitoso resultante se le añaden diez mililitros de hexano o bien
éter etílico, se agita y se separa la capa de hexano, que se
elimina.
5. Procedimiento para la obtención de un
fotosensibilizante para ser empleado en terapia fotodinámica, según
reivindicación 1 a 4, caracterizado porque al citado residuo
se le añaden diez mililitros de hexano repitiendo la operación
descrita en el apartado cuatro dos veces.
6. Procedimiento para la obtención de un
fotosensibilizante para ser empleado en terapia fotodinámica, según
reivindicación 1 a 5, caracterizado porque a la capa inferior
de dicho residuo se le añaden cincuenta mililitros de diclorometano
y se diluye la mezcla con cien mililitros de agua fría.
7. Procedimiento para la obtención de un
fotosensibilizante para ser empleado en terapia fotodinámica, según
reivindicación 1 a 6, caracterizado porque se procede a
separar la capa orgánica, se lava con agua y se evapora el volumen
al mínimo.
8. Procedimiento para la obtención de un
fotosensibilizante para ser empleado en terapia fotodinámica, según
reivindicación 1 a 7, caracterizado porque a continuación se
procede a purificar el residuo obtenido mediante cromatografía de
columna en silica gel empleando como eluyente cloroformo/ éter
etílico 95:5.
9. Procedimiento para la obtención de un
fotosensibilizante para ser empleado en terapia fotodinámica, según
reivindicación 1 a 7, caracterizado porque se evaporan lo
disolventes y la metilfeoforbida a obtenida se purifica
mediante cristalización utilizando la mezcla
cloroformo-metanol. La fórmula de metilfeoforbida se
muestra en la
figura 2.
figura 2.
10. Procedimiento para la obtención de un
fotosensibilizante para ser empleado en terapia fotodinámica, según
reivindicación 1 a 9, caracterizado porque la segunda etapa
se constituye ser la síntesis del fotosensibilizante a partir de
metilfeoforbida a consistiendo en la adición, a una solución
de 4 g de metilfeoforbida a en 750 mililitros de acetona a
35-40ºC, de diez gramos de KOH, hidróxido de
potásico, en cien mililitros de agua, dejando en reposo durante
cinco minutos, borboteando argón intensamente.
11. Procedimiento para la obtención de un
fotosensibilizante para ser empleado en terapia fotodinámica, según
reivindicación 1 a 10, caracterizado porque a continuación y
a una temperatura de 40-50ºC se le añaden 45 gramos
de KOH en 450 mililitros de agua, manteniéndola a esa temperatura
durante quince minutos.
12. Procedimiento para la obtención de un
fotosensibilizante para ser empleado en terapia fotodinámica, según
reivindicación 1 a 11, caracterizado porque posteriormente se
eleva la temperatura a 60ºC y se mantiene en esta temperatura
durante 45 minutos, controlando el proceso de transformación de
metilfeoforbida a en clorina e_{6}, mediante cromatografía
líquida de alta resolución.
13. Procedimiento para la obtención de un
fotosensibilizante para ser empleado en terapia fotodinámica, según
reivindicación 1 a 12, caracterizado porque se procede
enfriando la solución a 15-20ºC para neutralizarla
con una solución de ácido clorhídrico, 126 mililitros de ácido
clorhídrico al 35% más 250 mililitros de agua, hasta alcanzar un
valor de pH de 4,5-5.
14. Procedimiento para la obtención de un
fotosensibilizante para ser empleado en terapia fotodinámica, según
reivindicación 1 a 13, caracterizado porque en ese momento se
separa el precipitado resultante mediante centrifugación, se aclara
dos veces con agua estéril, suspendiéndolo en agua apirógena, se
centrifuga dos o tres veces adicionales y se diluye el precipitado
obtenido en una solución acuosa de 2,5 gramos de
N-metil-D-glucamina
en 500 mililitros de agua estéril apirógena.
15. Procedimiento para la obtención de un
fotosensibilizante para ser empleado en terapia fotodinámica, según
reivindicación 1 a 14, caracterizado porque a continuación se
eleva el pH hasta 7,75-8,20 añadiendo
N-metil-D-glucamina
como estabilizador y, después, se añade agua estéril apirógena hasta
que la densidad óptica de la solución a 654 nanómetros y pH 9 sea de
400-420 unidades.
16. Procedimiento para la obtención de un
fotosensibilizante para ser empleado en terapia fotodinámica, según
reivindicación 1 a 15, caracterizado porque, por último, se
filtra la solución a través de un filtro de 0,22 micras de tamaño de
poro que permite obtener soluciones estériles sin que se produzca el
deterioro de la estructura del fotosensibilizante.
17. Fotosensibilizante, obtenido por el
procedimiento de las reivindicaciones 1 a 16, caracterizado
porque consiste en una solución de clorina e_{6} prácticamente
pura, grado de pureza superior al 98,5%, estabilizada con
N-metil-D-glucamina.
La fórmula estructural del fotosensibilizante descrito, Fotontcine,
se muestra en la Figura 3.
Priority Applications (1)
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---|---|---|---|
ES200901660A ES2354096B1 (es) | 2009-07-27 | 2009-07-27 | Procedimiento para la obtencion de un fotosensibilizante para ser empleado en terapia fotodinamica y fotosensibilizante. |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
ES200901660A ES2354096B1 (es) | 2009-07-27 | 2009-07-27 | Procedimiento para la obtencion de un fotosensibilizante para ser empleado en terapia fotodinamica y fotosensibilizante. |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
ES2354096A1 true ES2354096A1 (es) | 2011-03-10 |
ES2354096B1 ES2354096B1 (es) | 2012-02-23 |
Family
ID=43617136
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
ES200901660A Active ES2354096B1 (es) | 2009-07-27 | 2009-07-27 | Procedimiento para la obtencion de un fotosensibilizante para ser empleado en terapia fotodinamica y fotosensibilizante. |
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Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN116162092A (zh) * | 2023-03-03 | 2023-05-26 | 康俄(上海)医疗科技有限公司 | 二氢卟吩e6三葡甲胺盐的制备方法 |
Citations (4)
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2009
- 2009-07-27 ES ES200901660A patent/ES2354096B1/es active Active
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