ES2353868T3 - Composiciones de curcuminoides que presentan una inhibición sinérgica de la expresión y/o de la actividad de la ciclooxigenasa-2. - Google Patents

Abstract

Una composición que comprende una cantidad efectiva de un primer componente que comprende una especie curcuminoide y un segundo componente que comprende un miembro seleccionado del grupo que consiste de tetrahidroisohumulona y dihidroisohumulona.

Description

Antecedentes de la Invención

Campo de la Invención

La presente invención, se relaciona generalmente con una composición que muestra inhibición sinérgica de la expresión y/o actividad de la ciclooxigenasa-2 (COX-2) inducible. La composición puede actuar de forma sinérgica para inhibir la inducibilidad y/o actividad de la ciclooxigenasa (COX-2), inducible con poco o ningún efecto significante sobre la ciclooxigenasa (COX-1) constitutiva.

Descripción del Oficio Relacionado

Las enfermedades inflamatorias afectan a más de cincuenta millones de estadounidenses. Como resultado de la investigación básica en inmunología molecular y celular en los últimos diez a quince años, la metodología para diagnosticar, tratar y prevenir estas enfermedades basadas en el sistema inmunológico, ha sido alterada dramáticamente. Un ejemplo de ello es el descubrimiento de una forma inducible de la enzima ciclooxigenasa. La ciclooxigenasa (COX) constitutiva, en primer lugar se purificó en 1976 y se clonó en 1988, las funciones en la síntesis de las prostaglandinas (PGs) a partir del ácido araquidónico (AA). Tres años después de su purificación, una enzima inducible con la actividad de COX fue identificada y se le dio el nombre COX-2, mientras que la COX constitutiva se denominó COX-1.

La expresión del gen COX-2, está bajo el control de las citoquinas pro-inflamatorias y los factores de crecimiento. Por lo tanto, la inferencia es que las funciones de COX-2 en tanto la inflamación como el control del crecimiento celular. Mientras que COX-2 es inducible en muchos tejidos, está presente constitutivamente en el cerebro y la médula espinal, donde puede funcionar en la transmisión nerviosa del dolor y la fiebre. Las dos isoformas de COX, son casi idénticas en la estructura pero tienen diferencias importantes en la selectividad del sustrato y del inhibidor y en sus ubicaciones intracelulares. Las PGs protectoras, que preservan la integridad del revestimiento del estómago y mantienen la función normal renal en un riñón comprometido, se sintetizan por COX-1. Por otra parte, las PGs sintetizadas por COX-2 en células inmunes son centrales para el proceso inflamatorio.

Una formulación ideal para el tratamiento de la inflamación, debería inhibir la inducción y la actividad de COX-2 sin afectar la actividad de COX-1. Sin embargo, los fármacos anti-inflamatorios no-esteroidales y esteroidales convencionales, carecen de la especificidad para la inhibición de COX-2 sin afectar COX-1 y están en riesgo de causar daños en el sistema gastrointestinal cuando se utilizan durante periodos prolongados.

Numerosos estudios han mostrado, que la incidencia relativa de efectos secundarios gastroinstestinales (GI), se pueden correlacionar con la especificidad por COX-2 relativa de los agentes. Cuanto mayor sea la especificidad para COX-2 sobre COX-1, menor es la incidencia del malestar GI. Por lo tanto, la aspirina, con una especificidad por COX-2 de solo 0.6, produce una mayor incidencia de dolor GI, que los curcuminoides, con una especificidad por COX-2 reportada de cerca de 3.0. Sin embargo, la especificidad por COX-2 generalmente aceptada, necesaria para reducir significantemente la probabilidad del malestar GI es 5.0.

Por lo tanto, sería útil identificar una composición que debería inhibir o prevenir específicamente la expresión de la actividad enzimática de COX-2, mientras que tiene poco o ningún efecto sobre el metabolismo de COX-1 para que éstos pudieran ser utilizados en dosis suficientemente bajas o en dosis clínicas comunes, sin efectos adversos secundarios.

Los médicos generalmente utilizan fármacos anti-inflamatorios no-esteroidales y esteroidales para el tratamiento de la osteoartritis. Estos fármacos, sin embargo, no se adaptan bien para la terapia a largo plazo, porque no solo carecen de la capacidad para promover y proteger el cartílago; que en realidad puede conducir a la degeneración del cartílago o reducción de su síntesis. Además, la mayoría de los fármacos anti-inflamatorios, no esteroidales dañan el sistema gastrointestinal cuando se utilizan durante los periodos prolongados. Por lo tanto, nuevos tratamientos para la artritis se necesitan con urgencia.

Las propiedades de la protección conjunta de la glucosamina, debería hacerla un agente terapéutico atractivo para la osteoartritis excepto por dos inconvenientes: (i) la velocidad de respuesta al tratamiento con la glucosamina es más lenta que para el tratamiento con fármacos antiinflamatorios, y (ii) la glucosamina podría impedir la consecución de la expectativa de la remisión degenerativa. En estudios que comparan la glucosamina con agentes anti-inflamatorios noesteroidales, por ejemplo, un estudio doble ciego que compara 1500 mg de la glucosamina sulfato por día con 1200 mg de ibuprofeno, demostró que las puntuaciones de dolor disminuyen más rápidamente durante las dos primeras semanas en los pacientes tratados con ibuprofeno, que en los pacientes tratados con la glucosamina. Sin embargo, la reducción en puntuaciones de dolor, continuaron a lo largo del periodo de prueba en pacientes que recibieron la glucosamina y la diferencia entre los dos grupos cambiaron significantemente en favor de la glucosamina por la semana octava. Lopes Vaz, A., Double-blind clinical evaluation of the relative efficacy of ibuprofen and glucosamine sulphate in the management of osteoarthritis of the knee in outpatients, 8 Curr. Med Res Opin. 145-149 (1982). Por lo tanto, la glucosamina puede aliviar el dolor y la inflamación de la artritis, pero a una velocidad más lenta que los fármacos anti-inflamatorios disponibles.

Además, las formulaciones de la glucosamina disponibles en la actualidad, no han sido formuladas para atacar y aliviar de forma óptima las causas subyacentes de la osteoartritis y la artritis reumatoide. También, como con muchos suplementos herbales y alimenticios disponibles comercialmente, las formulaciones disponibles no tienen un historial de uso, ni ensayos clínicos controlados, que puedan asegurar su seguridad y eficacia.

Una formulación ideal para la normalización del metabolismo del cartílago o el tratamiento de la osteoartritis, debería proporcionar una adecuada condoprotección con una potente actividad antiinflamatoria. El suplemento de la dieta óptima para la osteoartritis debe mejorar las cualidades generales de reconstrucción conjunta ofrecidas por la glucosamina y atenuar la respuesta inflamatoria sin introducir ningún efecto secundario dañino. Debe ser fabricado a bajo costo y cumplir con todas las regulaciones gubernamentales.

Resumen de la Invención

Por lo tanto, sería útil identificar una formulación natural de los compuestos que debería inhibir o prevenir específicamente la síntesis de la prostaglandinas por COX-2 con poco o ningún efecto sobre COX-1. Esta formulación, que sería útil para conservar la salud de los tejidos de las articulaciones, para tratar la artritis u otras condiciones inflamatorias, no se ha descubierto previamente. El término "inhibidor de COX-2 específico o selectivo" abarca los compuestos o mezclas de compuestos que inhiben selectivamente COX-2 sobre COX-1. Preferiblemente, los compuestos tienen una concentración efectiva media para la inhibición de COX-2, que es como mínimo cinco veces mayor que la concentración efectiva media para la inhibición de COX-1. Por ejemplo, si la concentración inhibidora media para COX-2 de una formulación de prueba fue 0.2 µg/mL, la formulación no se debería considerar COX-2 específica a menos que la concentración inhibidora media para COX-1 fue igual a o mayor de 1 µg/mL.

La invención proporciona una composición que comprende, como un primer componente, una especie curcuminoide y un segundo compuesto que puede mejorar de forma sinérgica el efecto anti-inflamatorio del curcuminoide. Más específicamente, la composición comprende una cantidad efectiva de un primer componente que comprende una especie curcuminoide y un segundo componente que comprende un miembro seleccionado del grupo que consiste de tetrahidroisohumulona y dihidroisohumulona. En una modalidad, el curcuminoide es la curcumina.

En una cierta modalidad, la composición además comprende un miembro seleccionado del grupo que consiste de la glucosamina y el sulfato de condroitina.

La invención también se relaciona con un método para tratar la inflamación o enfermedades basadas en la inflamación en un animal, utilizando la composición de la invención.

La invención también se relaciona con un método de reducción de los síntomas de la osteoartritis en un animal, utilizando la composición de la invención.

Breve Descripción de los Dibujos

Las Figuras 1[A]-[F], ilustran la estructura química general de [A] el género curcuminoide y [B], [C], [D], [E] y [F], respectivamente, como curcumina, demetoxicurcumina, bisdemetoxicurcumina, el isómero cis-trans geométrico de la curcumina, y la ciclocurcumina como especie dentro del género.

Las Figuras 2[A] y [B], respectivamente, ilustran las estructuras químicas generales del género alfa-ácido y humulona como una especie dentro del género.

Las Figuras 3[A] y [B], respectivamente, ilustran las estructuras químicas generales del género beta-ácido y lupulona

Descripción Detallada de la Modalidad Preferida

Cabe señalar que, como se utiliza en esta especificación y las reivindicaciones anexas, las formas singulares "un," "una," y "el" incluyen los referentes plurales, a menos que el contexto indique claramente lo contrario.

Las modalidades preferidas proporcionan composiciones que tienen un efecto inhibidor sinérgico sobre la expresión y/o la actividad de COX-2. Más particularmente, la composición comprende, como un primer componente, un curcuminoide y, como un segundo componente, un miembro seleccionado del grupo que consiste de tetrahidroisohumulona y dihidroisohumulona, como se describe más específicamente a continuación. La composición proporcionada por las modalidades preferidas, se puede formular como un suplemento dietético o una composición terapéutica. La composición puede actuar de forma sinérgica para inhibir la inducibilidad y/o actividad de COX-2 con ningún efecto significante sobre COX-1.

Como se utiliza en este documento, el término "suplemento dietético" se refiere a las composiciones consumidas para afectar los cambios estructurales o funcionales en fisiología. El término "composición terapéutica" se refiere a cualquier compuesto administrado para tratar o prevenir una enfermedad.

Como se utiliza en este documento, los términos "curcuminoide" y "curcuminoide activo" se refiere una especie dentro del género curcuminoide, que es capaz de inhibir la inducibilidad y/o actividad de COX-2 mientras que tiene poco o ningún efecto sobre COX-1 o es capaz de inhibir o reducir la severidad de una respuesta inflamatoria. El curcuminoide se puede extraer a partir de productos naturales o sintetizados químicamente.

Una fracción de color amarillo, pigmentada, aislada de los rizomas de Curcuma longa contiene los curcuminoides que pertenecen al grupo metano dicinnamoil. Los curcuminoides están presentes en la medida de 3 a 5 por ciento. Se consideran los ingredientes activos más importantes y se cree que son responsables de la actividad biológica de Curcuma longa. Aunque su principal actividad es anti-inflamatoria, se ha reportado que los curcuminoides poseen actividad antioxidante, anti-alérgica, cicatrización de heridas, antiespasmódicos, antibacteriana, antifúngica y antitumor también. La curcumina (Fig. 1B), fue aislada en 1815 y se definió estructuralmente en 1910. Otros curcuminoides aislados de Curcuma longa incluyen demetoxicurcumina (Fig. 1C), bisdemetoxicurcumina (Fig. 1D), un isómero cis-trans geométrico de la curcumina (Fig. 1E), y la ciclocurcumina (Fig 1F). Los curcuminoides se pueden encontrar en otros productos botánicos, además de la Curcuma longa, tal como Curcuma xanthorrhiza y Curcuma zedoaria.

Los curcuminoides son bien conocidos por su actividad anti-inflamatoria. La cúrcuma es uno de los fármacos anti-inflamatorios más antiguos utilizados en la medicina Ayurveda. La actividad anti-inflamatoria de los curcuminoides, se ha evaluado en modelos de reacción inflamatoria tales como irritantes químicos o físicos como la carragenina, pellets de algodón, formaldehido y el granuloma pouch. Los ensayos clínicos, doble ciego en humanos han demostrado la eficacia en la artritis reumatoide a una dosis de 1200 mg de curcuminoides/día durante cinco a seis semanas. A estas dosis, sin embargo, los signos de malestar gastrointestinal (GI) e irritación estomacal se reportan con frecuencia. El malestar GI y la irritación estomacal causada por altas dosis de curcuminoides se puede deber al hecho de que los curcuminoides actúan sobre la producción de la prostaglandina de una manera similar a aquella de la aspirina y de los agentes anti-inflamatorios similares a la aspirina.

Preferiblemente, el género curcuminoide, como se representa por la FIG.1 [A] y específicamente, ejemplificado por la curcumina en la FIG. 1[B], es un extracto botánico de grado farmacéutico, tal como se puede obtener comercialmente, por ejemplo, de Sabinsa (121 Ethel Road West, Piscataway, NJ). Otros curcuminoides que se pueden emplear incluyen la demetoxicurcumina (FIG 1[C]), bisdemetoxicurcumina (FIG. 1[D]), un curcumina cis-trans (Fig 1E), y la ciclocurcumina (FIG 1F). El curcuminoide utilizado, se puede obtener fácilmente a partir de Curcuma longa L. El extracto de curcuminoide grado farmacéutico se estandariza para tener un contenido de curcuminoide de más de un 70 por ciento. El extracto farmacéutico, grado botánico preferiblemente debería haber pasado extensos procedimientos de eficacia y seguridad. Como se emplea en las modalidades preferidas, el extracto tiene un contenido de curcuminoide de aproximadamente 1 a 99 por ciento en peso. Preferiblemente, el contenido mínimo de curcuminoide es cerca de 70 por ciento en peso. Por otra parte, el curcuminoide se puede sintetizar utilizando técnicas estándar conocidas en síntesis química.

Como se utiliza en éste documento, el término "extracto de lúpulo" se refiere al material sólido que resulta de (1) la exposición de un producto de la planta de lúpulo a un solvente, (2) la separación del solvente del producto de la planta de lúpulo, y (3) la eliminación del solvente.

Como se utiliza en este documento, el término "solvente" se refiere a un líquido de naturaleza acuosa u orgánica que posee las características necesarias para extraer el material sólido a partir del producto de la planta de lúpulo. Ejemplos de solventes incluirían, pero no se limitan a, agua, vapor, agua supercaliente, metanol, etanol, hexano, cloroformo, CO2 líquido, N2 líquido o cualquier combinación de dichos materiales.

5 Como se utiliza en este documento, el término "extracto en CO2" se refiere al material sólido que resulta de la exposición de un producto de la planta de lúpulo a una preparación con CO2 líquido o supercrítico, seguido por la eliminación del CO2. Como se utiliza en este documento, el término "alfa-ácidos" se refiere a los compuestos 5 aislados a partir de los productos de la planta de lúpulo incluyendo, pero no limitando a, humulona, cohumulona, isohumulona, isoprehumulona, hulupona, adhumulona, xantohumol A y xantohumol B. Como se utiliza en este documento, el término "beta-ácidos" se refiere a los compuestos conocidos colectivamente como lupulones incluyendo, pero no limitando a, lupulona, colupulona, adlupulona, tetrahidroisohumulona, y hexahidrocolupulona. 10 Como se utiliza en este documento, el término "fracción de aceite esencial" se refiere a una mezcla compleja de componentes que comprenden mirceno, humuleno, beta-cariofileno, undecano-2on, y 2-metil-but-3-en-ol. Como se utiliza en este documento, el término "grasas" se refiere a los ésteres del triacilgliceril de ácidos grasos. 15 Como se utiliza en este documento, el término "ceras" se refiere a éteres del triacilgliceril o ésteres de alcoholes grasos o ácidos de cadena extremadamente larga (>25 carbonos). La extracción del lúpulo de una forma u otra, se remonta más de 150 años a principios del siglo XIX, cuando la extracción en agua y etanol se intentó en primer lugar. Incluso hoy en día un extracto en etanol está disponible en Europa, pero, con mucho, los extractos predominantes son 20 extractos en solventes orgánicos (hexano) y extractos en CO2 (supercrítico y líquido). El CO2 (por lo general a 60 bares de presión y 5 a 10°C), se encuentra en estado líquido y es un solvente relativamente suave, no-polar altamente específico para aceites y resinas suaves de lúpulo. Más allá del punto crítico, por lo general a 300 bares de presión y 60°C, el CO2 tiene las propiedades de ambos un gas y un líquido y es un solvente mucho más fuerte. Los componentes aproximados de los 25 diferentes extractos se comparan en la Tabla 1. TABLA 1. Extractos de Lúpulo (Porcentaje Peso/Peso)

Componente

Lúpulo Extracto en Solvente Orgánico CO2 Super-Crítico CO2 Líquido

Resinas totales

12-20 15-60 75 -90 70 -95

Alfa-ácidos

2-12 8-45 27-55 30-60

Beta-ácidos

2-10 8-20 23-33 15-45

Aceites esenciales

0.5-1.5 0-5 1-5 2-10

Resinas Duras

2-4 2-10 5-11 Nada

Taninos

4-10 0.5-5 0.1-5 Nada

Ceras

1-5 1-20 4-13 0-10

Agua

8-12 1-15 1-7 1-5

En su forma más simple, la extracción del lúpulo involucra la molienda, pelletización y re-molienda del lúpulo para esparcir la lupulina, que pasa un solvente a través de una columna empacada 30 para recolectar los componentes de la resina y finalmente, la eliminación del solvente para producir un

extracto de resina completa o “pura”.

Los principales extractantes orgánicos son solventes fuertes y además de virtualmente todos los componentes de la lupulina, extraen los pigmentos de las plantas, ceras cuticulares, agua y materiales solubles en agua.

El CO2 supercrítico es más selectivo que los solventes orgánicos y extrae menos de los taninos y ceras y menos agua y por lo tanto componentes solubles en agua. Extrae algunos de los pigmentos de las plantas como la clorofila pero menos que los solventes orgánicos. El CO2 líquido, es el solvente más selectivo utilizado comercialmente para el lúpulo y por lo tanto produce la resina total más pura y el extracto oleoso. Este no extrae ninguna de las resinas duras o taninos, niveles más bajos de ceras de plantas, sin pigmentos de las plantas y menos agua y materiales solubles en agua.

Como consecuencia de esta selectividad y las propiedades del solvente más suave, el rendimiento absoluto del extracto en CO2 líquido por unidad de peso de lúpulo es menor que cuando se utilizan los otros solventes mencionados. Adicionalmente, el rendimiento de alfa ácidos con CO2 líquido (cerca de 89-93%) es inferior que aquel del CO2 supercrítico (cerca de 91-94%) o los solventes orgánicos (cerca de 93-96%). Después de la extracción existe el proceso de eliminación del solvente, que para los solventes orgánicos involucra, el calentamiento para causar la volatilización. A pesar de esto, cantidades trazas del solvente permanecen en el extracto. La eliminación del CO2, sin embargo, involucra simplemente una liberación de presión para volatilizar el CO2.

En las modalidades preferidas, el alfa ácido, beta ácido, o el derivado de estos se pueden extraer a partir del lúpulo o sintetizar químicamente. Preferiblemente, el alfa ácido, beta ácido, o derivado de estos, se extrae a partir del lúpulo, más preferiblemente se extrae por CO2 supercrítico.

Preferiblemente, el género alfa-ácido, como se representa por la FIG. 2 [A] y específicamente ejemplificado por la humulona en la FIG. 2 [B], y el género beta-ácido, como se representa por la FIG. 3 [A] y específicamente ejemplificado por la lupulona (FIG. 3 [B]) es una preparación de grado farmacéutico tal como se puede obtener comercialmente, por ejemplo, de Hopunion. (Yakima, WA).

La identificación de humulona a partir del extracto de lúpulo como un inhibidor de resorción ósea se reporta en Tobe, H. et al. 1997. [Bone resorption inhibitors from hop extract. Biosci. Biotech. Biochem 61(1)158-159]. Estudios posteriores por el mismo grupo caracterizaron el mecanismo de acción de la humulona como la inhibición de la transcripción del gen de la COX-2, después de la estimulación con TNF-alfa de las células MC3T3 -E1 (Yamamoto, K. 2000. Suppression of cyclooxygenase-2 gene transcription by humulon of bee hop extract studied with reference to glucocorticoid. FEBS Letters 465:103-106]. Sin embargo, estas referencias revelan el uso de humulona solo para las aplicaciones de osteoporosis y la transcripción del gen de la COX-2.

Las modalidades preferidas proporcionan la modificación de la molécula del curcuminoide para lograr mayor eficacia y menor toxicidad y la adición de un segundo componente que actúa de una manera sinérgica. Por lo tanto, las modalidades preferidas se relacionan con un descubrimiento de que cuando la combinación de un curcuminoide con una segunda molécula seleccionada del grupo que consiste de un alfa-ácido, un beta-ácido, y derivados de estos, la combinación produce un efecto sinérgico en una célula diana. Una respuesta sinérgica sería la inhibición específica de COX-2 inducible.

Las especies representativas dentro de cada género se enumeran en la Tabla 2. De las especies que figuran para cada género en la Tabla 2, aquellas que contienen al menos un asterisco (*) se prefieren y se prefieren particularmente las que contienen dos asteriscos (**).

TABLA 2. Componentes de la Composición

CURCUMINOIDES

ALFA-ÁCIDOS BETA-ÁCIDOS

Curcumina**

Humulona** Lupulona**

Demetoxicurcumina**

Cohumulona* Colupulona**

Bisdemetoxicurcumina**

Isohumulona* Adlupulona*

Cis-trans curcumina*

Isoprehumulona* Tetrahidroisohumulona*

Ciclocurcumina*

Hulupona* Hexahidrocolupulona*

Adhumulona*

Dihidro-isohumulona*

Xantohumulona A*

Xantohumulona B*

Preferiblemente, las modalidades preferidas utilizan el curcuminoide activo y los ingredientes activos del extracto de lúpulo o derivados de estos. Como se utiliza en este documento, el término "curcuminoide activo", "ingrediente activo del extracto de lúpulo’ o derivados de estos, se refiere a

5 que ocurren naturalmente o son derivados sintéticos de las especies dentro del alcance de los géneros respectivos que son capaces de inhibir la inducibilidad y/o la actividad de COX-2, mientras que tienen poco o ningún efecto sobre la COX-1 o son capaces de inhibir o reducir la severidad de una respuesta inflamatoria.

Los "conjugados" de curcuminoides, alfa-y beta-ácidos o derivados de estos significan los

10 curcuminoides, alfa-ácidos, y beta-ácidos unidos covalentemente o conjugados con un miembro seleccionado del grupo que consiste de mono-o di-sacáridos, amino ácidos, sulfatos, succinato, acetato y glutatión. Preferiblemente, el mono-o di-sacárido es un miembro seleccionado del grupo que consiste de glucosa, manosa, ribosa, galactosa, ramnosa, arabinosa, maltosa, y fructosa. La inhibición de la actividad de la enzima COX-2, mediante los alfa-ácidos o beta-ácidos

15 puede proporcionar un efecto sinérgico, dual con los curcuminoides. Por lo tanto, el segundo compuesto de la composición de la invención puede incrementar la actividad anti-inflamatoria de los curcuminoides. El resultado de las composiciones de la invención es un efecto más selectivo sobre la actividad de COX-2, a dosis inferiores de los curcuminoides que normalmente se requiere. Al disminuir la dosis de los curcuminoides para lograr la inhibición deseada de COX-2, la probabilidad

20 de efectos secundarios a partir de este compuesto disminuye de forma casi exponencial. El segundo compuesto de la composición puede proporcionar beneficios, tales como, pero no limitando a, hepatoprotección, promoción antitumoral, antihiperlipidermia, antihiperglicermia y protección contra la formación de úlceras a partir de la inhibición de la COX-1 por los curcuminoides.

Preferiblemente, una dosis diaria (mg/kg-día) del suplemento dietético preferido sería 25 formulado para entregar, por cada kg del peso corporal del animal, cerca de 0.001 a cerca de 30.0 mg de curcuminoides, y cerca de 0.5 a cerca de 20.0 mg de alfa-ácidos o beta-ácidos.

La composición de las modalidades preferidas para la aplicación tópica contendría una de las siguientes: cerca de 0.001 a cerca del 1 % en peso, preferiblemente cerca de 0.01 a cerca del 1 % en peso de curcuminoides, y cerca de 0.025 a cerca del 1 % en peso, preferiblemente cerca de 0.05 a

30 cerca del 1% en peso de los alfa-ácidos o beta-ácidos. La composición de las modalidades preferidas produciría concentraciones en suero en el siguiente rango: cerca de 0.0001 a cerca de 10 µM de curcuminoides, y cerca de 0.001 a cerca de 10 µM de alfa-ácidos o beta-ácidos. En las modalidades preferidas, la composición además puede comprender glucosamina o

35 sulfato de condroitina. Generalmente se acepta que la glucosamina es eficaz y segura para tratar la osteoartritis. Por lo tanto, las composiciones que además comprenden glucosamina o sulfato de condroitina pueden ayudar en la formalización de la función articular o la reducción de los síntomas de la osteoartritis.

Además de la combinación de curcuminoides y alfa-ácidos tetrahidroisohumulona y derivados de la dihidroisohumulona, la presente composición para la aplicación de la dieta pueden incluir diferentes aditivos tales como, pero no limitando a, otros componentes naturales del metabolismo intermediario, antioxidantes, vitaminas, minerales, proteínas, grasas, carbohidratos, y aminoazúcares, así como ingredientes inertes tales como, pero no limitando a, talco y estearato de magnesio, que son excipientes estándar en la fabricación de comprimidos y cápsulas.

La composición de la invención, además puede comprender un portador farmacéuticamente aceptable. Como se utiliza en este documento, “portador farmacéuticamente aceptable" incluye cualquiera y todos los solventes, medios de dispersión, cubiertas, agentes isotónicos y retardantes de absorción, edulcorantes y similares. Estos portadores farmacéuticamente aceptables se pueden preparar a partir de un amplio rango de materiales incluyendo, pero no limitando a, diluentes, aglutinantes y adhesivos, lubricantes, desintegrantes, agentes de coloración, agentes espesantes, agentes aromatizantes, agentes edulcorantes y materiales diversos tales como soluciones reguladoras y absorbentes que pueden ser necesarios con el fin de preparar una composición terapéutica particular. El uso de tales medios y agentes para sustancias farmacéuticamente activas es bien conocido en el oficio. Excepto en la medida que cualquier agente o medio convencional sea incompatible con los ingredientes activos, su uso en las modalidades preferidas se contempla. En una modalidad, el talco y el estearato de magnesio se incluyen en la formulación. Los componentes preferidos son polvo de talco USP Astac Brand 400 y el grado verdadero del estearato de magnesio. Otros ingredientes conocidos por afectar la fabricación de esta composición como una barra dietética o alimento funcional pueden incluir aromas, azúcares, aminoazúcares, proteínas y/o almidones modificados, así como grasas y aceites.

Los suplementos dietéticos, lociones o composiciones terapéuticas de las modalidades preferidas se pueden formular de cualquier manera conocida por alguien de habilidad en el oficio. En una modalidad, la composición se fórmula en una cápsula o comprimido utilizando técnicas disponibles para alguien de habilidad en el oficio. En una forma de cápsula o comprimido, la dosis diaria recomendada para un adulto humano o animal preferiblemente debería contener de una a seis cápsulas o comprimidos. Sin embargo, las presentes composiciones también se pueden formular en otras formas convenientes, tales como una solución o suspensión inyectable, una solución o suspensión de pulverización, una loción, goma de mascar, pastilla, alimento o artículo de merienda. Los artículos de alimentos, merienda, goma de mascar o pastilla pueden incluir cualquier ingrediente digerible, incluyendo edulcorantes, aromas, aceites, almidones, proteínas, frutas o extractos de frutas, vegetales o extractos de vegetales, granos, grasas o proteínas de animales. Por lo tanto, las presentes composiciones se pueden formular en cereales, artículos de merienda tales como frituras, barras, pastillas de goma, caramelos masticables o pastillas que se disuelven lentamente. La invención contempla el tratamiento de todos los tipos de enfermedades basadas en la inflamación, tanto aguda como crónica. La presente formulación reduce la respuesta inflamatoria y por lo tanto promueve la curación, o previene mayores daños, al tejido afectado. Un portador farmacéuticamente aceptable también se puede utilizar en las presentes composiciones y formulaciones.

De acuerdo con las modalidades preferidas, El animal puede ser un miembro seleccionado del grupo que consiste de humanos, primates no-humanos, perros, gatos, aves, caballos, rumiantes u otros animales de sangre caliente. Las modalidades preferidas se dirigen en primer lugar al tratamiento de los seres humanos. La administración puede ser por cualquier método disponible para el experto, por ejemplo, por vía oral, tópica, transdérmica, transmucosa, o parenteral.

9 La TABLA 3, a continuación proporciona una lista de enfermedades en las cuales la expresión y actividad de la enzima de COX-2, puede jugar un papel y por lo tanto son blancos apropiados para la normalización o tratamiento, mediante las composiciones de las modalidades preferidas. TABLA 3. Enfermedades Asociadas con COX-2

ENFERMEDAD

TEJIDO

Enfermedad de Addison

Adrenal

Alergias Inflamatorias

células

Alergias de Alzheimer

Células nerviosas

Artritis Inflamatoria

células

Aterosclerosis

Pared vascular

Cáncer de Colon

Intestino

Enfermedad de Crohn

Intestino

Diabetes (tipo I)/tipo II

Páncreas

Eczema

Células inflamatorias de la piel

Enfermedad de Graves

Tiroide

Síndrome de Guillain-Barre

Células nerviosas

Enfermedad Inflamatorio del Intestino

Intestino

Leucemia

Células inmunes

Linfomas

Células inmunes

Esclerosis Múltiple

Células nerviosas

Miastenia Gravis

Unión neuromuscular

Osteoartritis

Revestimiento articular

Psoriasis

Piel

Cirrosis biliar primaria

Hígado

Artritis Reumatoide

Revestimiento articular

Tumores sólidos

Varios

Lupus Eritematoso Sistémico

Tejidos múltiples

Uveítis

Ojos

El descubrimiento de COX-2, ha hecho posible el diseño de fármacos que reducen la inflamación sin retirar las PGs protectoras en el estómago y riñón realizadas por la COX-1. Las composiciones de la invención serían útiles para, pero no limitando a, el tratamiento de inflamación en

10 un sujeto, y para el tratamiento de otros trastornos asociados con la inflamación, tales como, un analgésico en el tratamiento del dolor y dolores de cabeza, o como un antipirético para el tratamiento de la fiebre. Las composiciones de la invención serían útiles en el tratamiento de la inflamación en tales enfermedades como enfermedades vasculares, dolores de cabeza por migraña, periarteritis nodosa, tiroiditis, anemia aplástica, enfermedad de Hodgkin, escleroderma, fiebre reumática, diabetes

15 tipo I, miastenia gravis, esclerosis múltiple, sacoidosis, síndrome nefrótico, síndrome de Behchet, polimiositis, gingivitis, hipersensibilidad, hinchazón que ocurre después de una lesión, isquemia miocardiaca y similares. Las composiciones de la invención son útiles como agentes antiinflamatorios con el beneficio adicional de tener significantemente menos efectos secundarios perjudiciales.

10 La composición de la invención también aumenta la velocidad, en la cual la función de la glucosamina o sulfato de condroitina para normalizar el movimiento articular o reducir los síntomas de osteoartritis. Por ejemplo, las composiciones de la invención están destinadas para tratar la artritis, incluyendo pero no limitando a artritis reumatoide, espondilo artropatías, artritis gotosa, osteoartritis, lupus eritematoso sistémico, y artritis juvenil. Tales composiciones de la invención también serían útiles en el tratamiento de asma, bronquitis, dolores menstruales, tendinitis, bursitis, y afecciones relacionadas con la piel tales como psoriasis, eczema, quemaduras y dermatitis. Las composiciones de la invención también serían útiles para tratar afecciones gastrointestinales tales como enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedad de Crohn, gastritis, síndrome de intestino irritable y colitis ulcerativa y para la prevención o tratamiento del cáncer, tal como cáncer colorectal. Las composiciones de la invención, también serían útiles en el tratamiento de enfermedades oftálmicas, tales como retinopatias, conjuntivitis, uveítis, fotofobia ocular, y de la lesión aguda del tejido ocular. Las composiciones también serían útiles en el tratamiento de inflamación pulmonar, tal como aquel asociado con las infecciones virales y fibrosis quística. Las composiciones también serían útiles para el tratamiento de ciertos trastornos del sistema nervioso tales como demencias corticales incluyendo enfermedad de Alzheimer. Como inhibidores de COX-2 mediados por la biosíntesis de PGE2, estas composiciones también serían útiles en el tratamiento de rinitis alérgica, síndrome de dificultad respiratoria, síndrome de choque por endotoxina, aterosclerosis, y daño del sistema nervioso central que resulta del accidente cerebrovascular, isquemia y trauma. Los siguientes ejemplos tienen la intención de ilustrar la invención: EJEMPLO 1 (comparativo) Inhibición Sinérgica de la Producción de la Prostaglandina E2 en Células B Murina mediante los Curcuminoides y un Extracto de Lúpulo Este ejemplo ilustra la superior potencia inhibidora y selectividad de COX-2 de la combinación de curcuminoides y el extracto de lúpulo de las modalidades preferidas en comparación con los curcuminoides solos. Inhibición de Producción de PGE2 Mediada por COX-2 en Células RAW 264.7 Equipo -balanza, analítica, Ohaus Explorer (Modelo Ohaus #EO1140, Suiza), cabina de bioseguridad (Modelo Forma #F1214, Marietta, Ohio), pipeteador, 100 a 1000 µL (Catálogo VWR #4000-208, Rochester, NY), contador celular de conteo manual (Catálogo VWR #23609-102, Rochester, NY), incubadora de CO2 (Modelo Forma #F3210, Marietta, Ohio), hemacitómetro (Modelo Hausser #1492, Horsham, PA), microscopio, invertido (Modelo Leica #DM IL, Wetzlar, Alemania), pipeteador multicanal, 12-Canales (Catálogo VWR #53501-662, Rochester, NY), Auxiliar de Pipetas (Catálogo VWR #53498-103, Rochester, NY), Pipeteador, 0.5 a 10 µL (Catálogo VWR #4000-200, Rochester, NY), pipeteador, 100 a 1000 µL (Catálogo VWR #4000-208, Rochester, NY), pipeteador, 2 a 20 µL (Catálogo VWR #4000-202, Rochester, NY), pipeteador, 20 a 200 µL (Catálogo VWR #4000-204, Rochester, NY), Sistema de Purificación de Agua PURELAB Plus (U.S. Filter, Lowell, MA), refrigerador, 4°C (Modelo Forma #F3775, Marietta, Ohio), mezclador vortex (Catálogo VWR #33994-306, Rochester, NY), baño de agua (Modelo Shel Lab #1203, Cornelius, OR). Células, Productos químicos, Reactivos y Soluciones reguladoras -Raspadores de células (Catálogo Coming #3008, Coming, NY), dimetilsulfóxido (DMSO) (Catálogo VWR #5507, Rochester, NY), Medio Eagle de Modificación de Dulbecco (DMEM) (Catálogo Mediatech #10-013CV, Hemdon, VA), suero fetal bovino, inactivado por el calor (FBS-HI) (Catálogo Mediatech #35011-CV, Hemdon, VA), lipopolisacarido (LPS)(Catálogo Sigma #L-2654, St. Louis, MO), tubos de

microcentrífuga, 1.7 mL (Catálogo VWR #20172-698, Rochester, NY), penicilina/estreptomicina (Catálogo Mediatech #30-001-Cl, Hemdon, VA), puntas de pipetas, para pipeteador de 0.5 a 10 µL (Catálogo VWR #53509-138, Rochester, NY), puntas de pipetas, para pipeteador de 100-1000 µL (Catálogo VWR #53512-294, Rochester, NY), puntas de pipetas, para pipeteadores de 2-20 µL y 20200 µL (Catálogo VWR #53512-260, Rochester, NY), pipetas, 10 mL (Catálogo Becton Dickinson #7551, Marietta, OH), pipetas, 2 mL (Catálogo Becton Dickinson #7507, Marietta, OH, pipetas, 5 mL (Catálogo Becton Dickinson #7543, Marietta, OH), Células RAW 264.7 (Catálogo American Type Culture Collection #TIB-71, Manassas, VA), compuestos de prueba (extracto de lúpulo en CO2 líquido de Hopunion, Yakima, WA), (curcumina de Sigma (St. Louis, MO) (Producto C 1386), 6570% de polvo de Curcuma longa), placas de cultivo de tejidos, 96-pozos (Catálogo Becton Dickinson #3075, Franklin Lanes, NJ), Agua ultra-pura (agua desionizada -Resistencia =18 mega Ohm-cm).

Procedimiento General – las células RAW 264.7, obtenidas de ATCC, fueron cultivadas en medio DMEM y se conservaron en crecimiento de fase log. El medio de crecimiento DMEM fue preparado de la siguiente manera: 50 mL de FBS inactivado por el calor y 5 mL de penicilina/estreptomicina fueron adicionados a una botella de 500 mL de DMEM y se almacenaron a 4°C. Esta se calentó a 37°C en un baño de agua antes de utilizar y para obtener mejores resultados, se debe utilizar dentro de tres meses

En el primer día del experimento, las células 264.7 de fase log, se sembraron a 8 x 104 células por pozo en 0.2 mL de medio de crecimiento por pozo en una placa de cultivo de tejidos de 96-pozos. Después de 6 a 8 horas luego de la siembra, se retiraron 100 µL de medio de crecimiento de cada pozo y se reemplazaron con 100 µL de medio fresco. Una solución de 1.0 mg/mL de LPS, la cual fue utilizada para inducir la expresión de COX-2, en las células RAW 264.7, se preparó disolviendo 1.0 mg de LPS en 1 mL DMSO. Se mezclo hasta que se disolvió y se almacenó a 4°C. Inmediatamente antes de su uso, se descongeló a temperatura ambiente o en un baño de agua a 37°C.

En el segundo día del experimento, los materiales de prueba fueron preparados como 1000X solución stock en DMSO. Por ejemplo, si la concentración final del material de prueba fue de 10 µg/ml, una solución stock de 10 mg/mL, se preparó disolviendo 10 mg del material de prueba en 1 mL de DMSO. Los materiales de prueba frescos fueron preparados en el día 2 del experimento. En tubos de microcentrífuga de 1.7 mL, 1 mL de DMEM sin FBS se adicionó para obtener las concentraciones de prueba de 0.05, 0.10, 0.5, y 1.0 µg/mL. Se adicionaron 2 µL de la solución stock 1000x DMSO del material de prueba a 1 mL de medio sin FBS. El tubo que contiene la concentración final del material de prueba, se concentró 2-veces. El tubo se colocó en la incubadora durante 10 minutos, para su equilibrio.

Cien mL del medio se retiraron de cada pozo de las placas de células preparadas el primer día. Cien mL de 2X concentración final equilibrada de los compuestos de prueba fueron adicionados a las células y se incubaron por 90 minutos. LPS en DMEM sin FBS se preparó por la adición de 44 µL de la solución stock DMSO de 1 mg/mL a 10 mL de medio. A cada pozo de las células que serán estimuladas, se le adicionaron 20 µL de LPS (concentración final de LPS es 0.4 µg/mL de LPS). La estimulación con LPS, se continuó por 24 horas, tras lo cual, el medio sobrenadante de cada pozo fue transferido a un tubo de microcentrífuga limpio para la determinación del contenido de PGE2 en el medio.

Determinación de la Inhibición de la Enzima de COX-1 por los Curcuminoides y el Extracto de Lúpulo

La capacidad de un material de prueba para inhibir la síntesis de COX-1 de PGE2 fue determinada esencialmente según lo descrito por Noreen, Y., et al. (J. Nat. Prod. 61, 2-7,1998).

Equipo -balanza (2400 g, Acculab VI-2400, Catálogo VWR #11237-300, Rochester, NY), balanza, analítica, Ohaus Explorer (Modelo Ohaus #EO1140, Suiza), cabina de bioseguridad (Modelo Forma #F1214, Marietta, Ohio), Congelador, -30°C (Modelo Forma #F3797), Congelador, -80°C Ultralow (Modelo Forma #F8516, Marietta, OH), placa de agitación con calentamiento (Catálogo VWR #33918-262, Rochester, NY), máquina de hielo (Modelo Scotsman #AFE400A-1A, Fairfax, SC), pipeteador multicanal, 12-Canal (Catálogo VWR #53501-662, Rochester, NY), Pipeteador Multicanal, 8-Canales (Catálogo VWR #53501-660, Rochester, NY), plataforma de vibración orbital (Scienceware #F37041-0000, Pequannock, NJ), medidor de pH (Catálogo VWR #33221-010, Rochester, NY), auxiliar de pipeta (Catálogo VWR #53498-103, Rochester, NY), pipeteador, 0.5 a 10 µL (Catálogo VWR #4000-200, Rochester, NY), pipeteador, 100 a 1000 µL (Catálogo VWR #4000208, Rochester, NY), pipeteador, 2 a 20 µL (Catálogo VWR #4000-202, Rochester, NY), pipeteador, 20 a 200 µL (Catálogo VWR #4000-204, Rochester, NY), Sistema de Purificación de Agua PURELAB Plus (U.S. Filter, Lowell, MA), refrigerador, 4°C (Modelo Forma #F3775, Marietta, Ohio), cámara de vacío (Catálogo Sigma #Z35, 407-4, St. Louis, MO), mezclador vortex (Catálogo VWR #33994-306, Rochester, NY)

Suministros y Reactivos -placa de fondo redondo de 96 pozos (Nalge Nunc #267245, Rochester, NY), ácido araquidónico (Catálogo Sigma #A-3925, St. Louis, MO), tubos de centrífuga, 15 mL, cónicos, estériles (Catálogo VWR #20171-008, Rochester, NY), enzima de COX-1 (ovino) 40,000 unidades/mg (Cayman Chemical Catálogo #60100, Ann Arbor, MI), dimetilsulfóxido (DMSO) (Catálogo VWR #5507, Rochester, NY), etanol 100% (Catálogo VWR #MK701908, Rochester, NY), epinefrina (Catálogo Sigma #E-4250, St. Louis, MO), glutatión (reducido) (Catálogo Sigma # G-6529, St. Louis, MO), probeta, 1000 mL (Catálogo VWR #24711-364, Rochester, NY), hematina (porcino) (Sigma catalog # H-3281, St. Louis, MO), ácido clorhídrico (HCl) (Catálogo VWR #VW3110-3, Rochester, NY), Toallitas limpiadoras (Catálogo Kimberly Clark #34256, Roswell, GA), tubos de microcentrífuga, 1.7 mL (Catálogo VWR #20172-698, Rochester, NY), NaOH (Catálogo Sigma #S5881, St. Louis, MO), puntas de pipetas, para pipeteador de 0.5 a 10 µL (Catálogo VWR #53509-138, Rochester, NY), puntas de pipetas, para pipeteador de 100-1000 µL (Catálogo VWR #53512-294, Rochester, NY), puntas de pipetas, para pipeteadores de 2-20 µL y 20-200 µL (Catálogo VWR #53512-260, Rochester, NY), prostaglandina E2 (Catálogo Sigma # P-5640, St. Louis, MO), prostaglandina F2 -alfa (Catálogo Sigma # P-0424, St. Louis, MO), barra de agitación, magnética (Catálogo VWR #58948-193, Rochester, NY), botella de almacenamiento, 1000 mL (Catálogo Coming #1395-1 L, Coming, NY), botella de almacenamiento, 100 mL (Catálogo Coming #1395-100, Coming, NY), extracto de lúpulo en CO2 (Hopunion, Yakima, WA), curcumina (Sigma, St. Louis, MO, (Producto C 1386), 65-70% polvo de Curcuma longa), Tris-HCl (Catálogo Sigma #T-5941, St. Louis, MO), agua ultra-pura (agua desionizada-Resistencia =18 mega Ohm-cm).

Procedimiento General – La solución reguladora Tris-HCl 1.0M libre de oxígeno (pH 8.0) se preparó de la siguiente manera. En un vaso de precipitados de 1000 mL, se disolvieron 12.11g de Trizma HCl en 900 mL de agua ultra-pura. El vaso de precipitados se colocó sobre la placa de agitación con una barra de agitación. Se adicionó NaOH hasta que el pH alcanza 8.0. El volumen se ajustó a un volumen final de 1000mL y se almacenó en una botella de almacenamiento de 1000 mL.

La solución reguladora Tris-HCl se colocó en una cámara de vacío con la tapa suelta y la bomba de aire se giró hasta que la solución reguladora dejo de burbujear. La cámara de vacío luego se apagó y la botella de almacenamiento se tapó bien. Esta etapa se repitió cada vez que la solución reguladora Tris-HCl libre de oxígeno se utilizó.

13 Un mL de la solución cofactor se preparó por la adición de 1.3 mg (-) de epinefrina, 0.3 mg de glutatión reducido y 1.3 mg de hematina de 1 mL de solución reguladora Tris-HCl libre de oxígeno. Las soluciones del material de prueba, se prepararon según sea necesario. i.e. se pesaron 10 mg de aspirina y se disolvieron en 1 mL de DMSO. Las enzimas, i.e. la prostaglandina E2 o prostaglandina F2-alfa, se disolvieron en solución reguladora Tris-HCl libre de oxígeno de la siguiente manera, i.e. sobre hielo, 6.5 µL de enzima a 40,000 unidades/mL fueron tomados y se adicionaron a 643.5 µL de solución reguladora Tris-HCl libre de oxígeno. Esta solución de la enzima es suficiente para 60 reacciones. La enzima de solución de COX-1 se preparó de la siguiente manera: En un tubo de centrífuga de 15 mL, 10 µL enzima de COX-1 a 40,000 unidades/mL se adicionaron a Tris-HCl libre de oxígeno con 50 µL de la solución cofactor por reacción. La mezcla se incubó sobre hielo por 5 minutos. Para 60 reacciones, 650 µL de la enzima se adicionaron en solución reguladora Tris-HCl libre de oxígeno con 3.25 mL de solución cofactor. Sesenta microlitros de la solución de la enzima se combinaron con 20 µL de la solución de prueba en cada pozo de una placa de 96 pozos. Las concentraciones finales de las soluciones de prueba fueron 100, 50, 25, 12.5, 6.25 y 3.12 µg/mL. Las placas fueron pre incubadas sobre hielo durante 10 minutos. Veinte µL del ácido araquidónico (30µM) se adicionaron y se incubaron por 15 minutos a 37°C. Se preparó HCl 2M, mediante la dilución del HCl 12.1 N en una botella de almacenamiento de 100 mL. Se adicionaron 83.5 mL de agua ultra-pura y luego 16.5 mL de HCl 12.1N. Se almacenó en una botella de almacenamiento de 100 mL y se colocó en la Cabina de bioseguridad. La reacción se terminó por la adición de 10 µL de HCl 2M. La solución final se utilizó como el sobrenadante para el ensayo de PGE2. Determinación de la Concentración de PGE2 en el Medio El procedimiento seguido fue, esencialmente, aquel descrito por Hamberg, M. and Samuelsson, B. (J. Biol. Chem. 1971. 246, 6713-6721); sin embargo un procedimiento no-radioactivo, comercial fue empleado. Equipo -congelador, -30°C (Modelo Forma #F3797), placa de agitación con calentamiento (Catálogo VWR #33918-262, Rochester, NY), pipeteador multicanal, 12-Canales (Catálogo VWR #53501-662, Rochester, NY), plataforma de vibración orbital (Scienceware #F37041-0000, Pequannock, NJ), Auxiliar de Pipetas (Catálogo VWR #53498-103, Rochester, NY), pipeteador, 0.5 a 10 µL (Catálogo VWR #4000-200, Rochester, NY), pipeteador, 100 a 1000 µL (Catálogo VWR #4000-208, Rochester, NY), pipeteador, 2 a 20 µL (Catálogo VWR #4000-202, Rochester, NY), pipeteador, 20 a 200 µL (Catálogo VWR #4000-204, Rochester, NY), lector de placa (Modelo Bio-tek Instruments #Elx800, Winooski, VT), Sistema de Purificación de Agua PURELAB Plus (U.S. Filter, Lowell, MA), refrigerador, 4°C (Modelo Forma #F3775, Marietta, Ohio). Productos químicos, Reactivos y Soluciones reguladoras – La prostaglandina E2 EIA Kit-Monoclonal 480-pozos (Cayman Chemical Catálogo # 514010, Ann Arbor, MI), tubo de centrífuga, 50 mL, cónicos, estériles (Catálogo VWR #20171-178, Rochester, NY), Medio Eagle de Modificación de Dulbecco (DMEM) (Catálogo Mediatech #10-013-CV, Hemdon, VA), probeta, 100 mL (Catálogo VWR #24711-310, Rochester, NY), Toallitas limpiadoras (Catálogo Kimberly Clark #34256, Roswell, GA), tubos de microcentrífuga, 1.7 mL (Catálogo VWR #20172-698, Rochester, NY), penicilina/estreptomicina (Catálogo Mediatech #30-001-Cl, Hemdon, VA), puntas de pipetas, para pipeteador de 0.5 a 10 µL (Catálogo VWR #53509-138, Rochester, NY), puntas de pipetas, para pipeteador de 100-1000 µL (Catálogo VWR #53512-294, Rochester, NY), puntas de pipetas, para

pipeteadores de 2-20 µL y 20-200 µL (Catálogo VWR #53512-260, Rochester, NY), pipetas, 25 mL (Catálogo Becton Dickinson #7551, Marietta, OH), botella de almacenamiento, 100 mL (Catálogo Coming #1395-100, Coming, NY), botella de almacenamiento, 1000 mL (Catálogo Coming #13951L, Coming, NY), agua ultra-pura (agua desionizada -Resistencia =18 mega Ohm-cm).

Procedimiento General – La solución reguladora EIA se preparó por dilución de los contenidos de la Solución reguladora EIA Concentrada (vial #4) con 90ml de Agua ultra-pura. Vial #4, se aclaró muchas veces para asegurar que todos los cristales se han eliminado y luego se colocó en una botella de almacenamiento de 100 mL y se almacenó a 4°C.

La Solución reguladora de lavado se preparó por dilución de la Solución reguladora de lavado Concentrada (vial #5) 1:400 con Agua ultra-pura. Luego se adicionaron 0.5 ml/litro de Tween 20 (vial #5a) (utilizando una jeringa para una medida exacta). Para preparar un litro de Solución reguladora de lavado, adicionar 2.5ml de Solución reguladora de lavado Concentrada, 0.5ml de Tween-20, y 997ml de Agua ultra-pura. La solución se almacenó en una botella de almacenamiento de 1 litro a 4°C.

El estándar de la prostaglandina E2, fue reconstituido de la siguiente manera. Una punta de la pipeta de 200 µL, fue equilibrada por el llenado y expulsión repetidamente de la punta muchas veces en etanol. La punta se utilizó para transferir 100 µL del Estándar de PGE2 (vial #3) en un tubo de microcentrífuga de 1.7 mL. 900 µl de Agua ultra-pura se adicionaron al tubo y se almacenaron a 4°C, que fue estable por -6 semanas. El trazador acetilcolinesterasa de la prostaglandina E2 fue reconstituido de la siguiente manera. 100 µL de trazador de PGE2 (vial #2) se mezcló con 30 mL de la Solución reguladora EIA en un tubo de centrífuga de 50 mL y se almacenó a 4°C.

El anticuerpo monoclonal de la prostaglandina fue reconstituido de la siguiente manera. 100 µL del Anticuerpo de PGE2 (vial #1) se mezcló con 30 mL de la solución reguladora EIA, en un tubo de centrífuga de 50 mL y se almacenó a 4°C.

DMEM con penicilina/estreptomicina se preparó, mediante la adición de 5 mL de penicilina/estreptomicina en 500 mL de DMEM y se almacenó a 4°C

Las placas fueron establecidas de la siguiente manera: Cada placa que contiene un mínimo de dos blancos (B), dos pozos de enlace no-específico (NSB), dos pozos de enlace máximo (B0), y una curva estándar de ocho puntos corrida por duplicado (S1-S8). Cada muestra fue analizada a un mínimo de dos diluciones y cada dilución fue corrida por duplicado.

El estándar se preparó de la siguiente manera: Ocho tubos de microcentrífuga de 1.7 mL fueron marcados como tubos 1-8. Se adicionaron 900 µL de DMEM dentro de un tubo 1 y 500 µL de DMEM a los tubos 2-8. Se adicionaron 100 µL del estándar de PGE2 al tubo 1 y se mezclaron. Quinientos mL de solución fueron tomados del tubo 1 y se pusieron en el tubo 2, y este proceso se repitió hasta el tubo 8.

Cincuenta mL de Solución reguladora EIA y 50 µl de DMEM se adicionaron en los pozos NSB. Cincuenta µl de DMEM se adicionaron en los pozos B0. Cincuenta mL de solución fueron tomados del tubo #8 y se adicionaron a ambos los pozos de estándar más bajos (S8). Cincuenta mL fueron tomados del tubo #7 y se adicionaron a cada uno de los siguientes dos pozos. Esto se continúo hasta el tubo #1. (la misma punta de la pipeta se utilizó para todos los 8 estándares, haciendo seguro que se equilibre la punta en cada nuevo estándar, pipeteando arriba y abajo en dicho estándar. Utilizando un P200, 50µl de cada muestra en cada dilución se adicionaron a los pozos de la muestra.

Utilizando un pipeteador de 12 canales, 50 µl del trazador de acetilcolinesterasa de la Prostaglandina E2, se adicionaron a cada pozo excepto al de Actividad Total (TA) y a los pozos Blanco (B). Utilizando el pipeteador de 12 canales, 50 µl del anticuerpo monoclonal de la prostaglandina se adicionaron a cada pozo excepto al de Actividad Total (TA), a los pozos (NSB), y a los pozos Blanco (B). La placa se cubrió con una película plástica (artículo #7) y se incubaron por 18 horas a 4°C.

Las placas fueron desarrolladas de la siguiente manera: un vial de 100 µL de Reactivo de Ellman (vial #8) fue reconstituido con 50 ml de Agua ultra-pura en un tubo de centrífuga de 50 mL. Fue protegido de la luz y se utilizó el mismo día. Los pozos se lavaron y enjuagaron cinco veces con Solución reguladora de lavado utilizando un pipeteador de 12 canales. Doscientos mL del Reactivo de Ellman se adicionaron a cada pozo utilizando un pipeteador de 12 canales y 5 µl del Trazador a los pozos de la actividad total (TA) luego se adicionaron a cada pozo utilizando una pipeta P10. La placa se cubrió con una película plástica y se colocó en un vibrador orbital en la oscuridad durante 60-90 minutos.

La placa se leyó en el lector de placa Bio-tek a una sola longitud de onda entre 405 y 420 nm. Antes de la lectura cada placa, el fondo se limpio con una toallita limpiadora. La placa se debe leer cuando la absorbancia de los pozos está en el rango de 0.3-0.8 A.U. Si la absorbancia de los pozos supera 1.5, se lava y se le adiciona Reactivo de Ellmans fresco y luego se vuelve a desarrollar.

Cálculo del índice de la sinergia y la combinación

La sinergia entre los curcuminoides y andrografolido se evaluó utilizando CalcuSyn (BIOSOFT, biosoft. com). Este paquete estadístico realiza múltiples cálculos de dosis-efecto del fármaco, utilizando los métodos de Efecto Medio descritos por T-C Chou and P. Talaly (Trends Pharmacol. Sci. 4:450-454), por lo cual, se incorpora como referencia.

En resumen, se correlacionan la "Dosis" y el "Efecto" en la forma más sencilla posible: fa/fu = (C/Cm)m, donde C es la concentración o la dosis del compuesto y Cm es la dosis efectiva-media, que significa la potencia. Cm se determina a partir del intercepto de x del registro del efecto medio. La fracción afectada por la concentración del material de prueba es fa y la fracción no-afectada por la concentración es fu (fu = 1 -fa). El exponente m es el parámetro que indica la sigmoidicidad o la forma de la curva dosis-efecto. Se estima por la pendiente del registro del efecto medio.

El registro del efecto medio es un registro de x= log(C) vs y = log(fa/fu) y se basa en la forma logarítmica de la ecuación de efecto medio de Chou. La bondad del ajuste para los datos para la ecuación del efecto medio se representa por el coeficiente de correlación lineal r del registro del efecto medio. Por lo general, los datos experimentales de la enzima o los sistemas del receptor tienen un r > 0.96, del cultivo de tejido un r > 0.90 y a partir de los sistemas de animales un r > 0.85.

La sinergia de los componentes de prueba se cuantifica utilizando el parámetro del índice de combinación (CI). El CI de Chou-Talaly se basa en el efecto del fármaco múltiple y se deriva de los modelos cinéticos de la enzima (Chou, T.-C. and Talalay, P. (1977) A simple generalized equation for the analysis of multiple inhibitions of Michaelis-Menten kinetic systems. J. Biol. Chem. 252:64386442). La ecuación determina solamente el efecto aditivo más bien que el sinergismo o antagonismo. Sin embargo, definimos el sinergismo como un efecto aditivo más que el esperado, y antagonismo como un efecto aditivo menor que el esperado según lo propuesto por Cho and Talalay en 1983 (Trends Pharmacol. Sci. (1983) 4:450-454). El uso de la designación de Cl = 1 como el efecto aditivo, se obtiene de los compuestos mutuamente excluyentes, que tienen el mismo modo de acción o para los fármacos no-excluyentes mutuamente, que tienen modos de acción totalmente independientes de las siguientes relaciones: Cl < 1, = 1, y > 1 indicando un sinergismo, aditividad y antagonismo, respectivamente.

Las medias de las concentraciones inhibidoras esperadas de las combinaciones de dos-componentes, fueron estimadas utilizando la relación:

imagen1

donde A = fracción molar del componente A en la combinación y B = la fracción molar del componente B en la combinación. La TABLA 4, ilustra las medias de la concentración inhibidora observada y esperada para la

5 curcumina y el extracto de lúpulo por la producción de PGE2 mediante COX-2, en el ensayo de células RAW 264.7. Mientras que el IC50 esperado para la combinación 10:1 de curcumina y extracto de lúpulo fue 1.6 µg/mL, el valor observado fue 0.77 µg/mL o 2-veces más. Este nivel de diferencia fue inesperado y constituye un novedoso hallazgo para la actividad inhibidora de COX-2 combinada de la combinación 1:10 de curcumina y extracto de lúpulo.

10 TABLA 4. Medias de las Concentraciones Inhibidoras observadas y esperadas para una Formulación (10:1) de Curcumina y Extracto de Lúpulo

Composición

Relación IC50 (µg/ml)

Extracto de Lúpulo

0.216

Curcumina Combinada

4.5

Contribución Extracto de Lúpulo

1 0.071

Contribución Curcumina

10 0.715

Observada

0.786

Calculada

1.605

Los análisis estadísticos de la inhibición de la producción de COX-2 de PGE2 en el modelo de células RAW 264.7 para la combinación 1:10 de curcumina y extracto de lúpulo se presentan en la

15 TABLA 5. El Cl para esta combinación fue 0.490, 0.472 y 0.454, respectivamente, para el IC50, IC75 e IC90. Estos valores de Cl indican la fuerte sinergia entre la curcumina y el extracto de lúpulo en la curva de respuesta-dosis completa. TABLA 5. Índice de Combinación para una Formulación 1:10 de Curcumina y Extracto de Lúpulo

Índice de Combinación

CI media

IC50

IC75 IC90

0.490

0.472 0.454 0.472

20 La concentración inhibidora media de COX-2 por la curcumina sola en el modelo de células RAW 264.7 fue 4.01 µg/mL (TABLA 6). La inhibición de la actividad de la enzima de COX-1 por la curcumina fue algo mayor con un IC50 de 10.0 µg/mL. El extracto de lúpulo mostro un IC50 de inhibición de PGE2 por COX-2 de 0.21 µg/mL y un IC50 para la inhibición de la enzima de COX-1

25 estimada a 6.25 µg/mL; la especificidad para COX-2 de la curcumina sola fue 2.5 y para el extracto de lúpulo, fue 29.5. Once formulaciones de curcumina y extracto de lúpulo mostraron especificidad por COX-2, que oscilan de 48.6 a 11.2, con una especificidad media por COX-2 de 17.4. Todas las combinaciones de curcumina y extracto de lúpulo inesperadamente mostraron especificidad por COX2, mayor que el 5.0 nominal sugerido como el mínimo para los productos farmacéuticos designados

30 para limitar la producción de PGE2 específicamente a través de la inhibición de COX-2. Este hallazgo indica que las combinaciones de curcumina y un extracto de lúpulo podrían funcionar como potentes formulaciones anti-inflamatorias, sin los efectos secundarios GI, vistos con la inhibición de la COX

1.

17 TABLA 6. Especificidad de la COX-2 para la Curcumina, Extracto de Lúpulo y Once Formulaciones de Curcumina y Extracto de Lúpulo

Extracto de Lúpulo Curcumina [x:y]

Extracto de Lúpulo [%] Curcumina [%] COX-1 IC50 [µg/ml] COX-2 IC50 [µg/ml] COX-11 COX-2

100

0 6.25 0.212 29.5

[10:1]

91 9 6.471 0.186 34.8

[8:1]

89 11 6.522 0.426 15.3

[6:1]

86 14 6.604 0.590 11.2

[4:1]

80 20 6.757 0.389 17.4

[2:1]

67 33 7.143 0.147 48.6

[1:1]

50 50 7.692 0.452 17.0

[1:2]

33 67 8.333 0.332 25.1

[1:4]

20 80 8.929 0.377 23.7

[1:6]

14 86 9.211 0.449 20.5

[1:8]

11 89 9.375 0.563 16.7

[1:10]

9 91 9.483 0.786 12.1

0

100 10.0 4.01 2.5

EJEMPLO 2 5 Normalización de Funcionamiento de la Articulación Después del Trauma Una composición representativa de la presente Invención como un suplemento dietético sería en una formulación oral, i.e. comprimidos, que proporcionarían una de las siguientes combinaciones:

(a) 15 mg de curcuminoide/kg por día y 6.0 mg de humulona/kg por día; (b) 15 mg de curcuminoide/kg por día y 6.0 mg de lupulona /kg por día; (c) 15 mg de curcuminoide/kg por día y 6.0

10 mg dihidroisohumulonas/kg por día. La normalización de movimiento articular después del trauma físico debido al ejercicio o estrés por movimiento repetitivo se espera que ocurra después de dos a diez dosis. Este resultado sería esperado en todos los animales. EJEMPLO 3 (comparativo) Efectividad Clínica de las Formulaciones de Loción en el Tratamiento de Acné Rosácea

15 Una loción designada para contener uno de los siguientes: (a) 0.1% en peso de curcuminoides y 0.5% de humulona; o (b) 0.1% en peso de curcuminoides y 0.5% de lumulona se aplica a las zonas afectadas de pacientes que han mostrado acné rosáceo como se diagnóstica por su profesional de la salud y se confirma por un dermatólogo independiente certificado por el consejo. Las pruebas de auto-evaluación y se administran una semana antes del estudio, para cuantificar la zona superficial afectada

20 y el enrojecimiento. Además, las variables similares se registran por el personal clínico profesional no consciente del estado de tratamiento de los pacientes. Estas evaluaciones se repiten en los Días 0, 7,14 y 21. Los pacientes se asignan al azar para la formulación de prueba o placebo en el inicio del estudio. La formulación de prueba y placebo se aplican en la zona afectada, una o dos veces por día.

25 El tratamiento para las afecciones de la salud tales como diabetes, hipertensión, etc. se permite durante el estudio. Las puntuaciones se comparan estadísticamente entre la formulación de prueba y el placebo para cada uno de los cuatro períodos de observación. Los pacientes tratados con la composición de la presente invención en una formulación de loción se consideran mejorados, si las puntuaciones del paciente mejoran por más del 20% a partir de las puntuaciones pre-prueba dentro de cada categoría evaluada. El porcentaje de personas que muestran mejora se comparan entre las formulaciones de combinación y el placebo control. La diferencia entre los dos grupos, se considera estadísticamente significante si la probabilidad de rechazar la hipótesis nula cuando la verdad es menor del cinco por ciento.

EJEMPLO 4 (comparativo)

Efectividad Clínica de la Formulación de la Loción en el Tratamiento de Psoriasis

Este ejemplo se realiza de la misma manera como se describe en el Ejemplo 3, excepto que la composición, se aplica para las zonas afectadas de pacientes que han mostrado psoriasis, según se diagnóstica por su propio médico y se confirma por un dermatólogo independiente certificado por el consejo. Las pruebas de auto-evaluación se administran una semana antes del estudio para cuantificar la zona superficial afectada y el estado de la piel. Además, las variables similares se registran por el personal clínico profesional no consciente del estado de tratamiento de los pacientes. Estas evaluaciones se repiten en los Días 0, 7, 30 y 60.

Los pacientes se asignan al azar, para la formulación de prueba o placebo en el inicio del estudio. La formulación de prueba y placebo se aplican a la zona afectada una o dos veces por día. El tratamiento para las afecciones de la salud tales como diabetes, hipertensión, etc. se permite, durante el estudio. Las puntuaciones se comparan estadísticamente entre la formulación de prueba y el placebo para cada uno de los cuatro períodos de observación. Los pacientes tratados con la composición de la presente invención como la formulación de loción de prueba se considera mejorada, si las puntuaciones del paciente mejoran por más del 20% a partir de las puntuaciones pre-prueba dentro de cada categoría evaluada. El porcentaje de personas que muestran mejora, se compara entre la formulación de prueba y el placebo control. La diferencia entre los dos grupos se considera estadísticamente significante, si la probabilidad de rechazar la hipótesis nula cuando la verdad es menor del cinco por ciento.

EJEMPLO 5

Efectividad Clínica de una Formulación en el Tratamiento de la Enfermedad de Alzheimer

Una formulación oral como se describe en el Ejemplo 2, se administra a pacientes que han manifestado un estado temprano de la Enfermedad de Alzheimer (AD), como se diagnóstica por su médico y se confirma por un neurólogo independiente certificado por el consejo. Dos semanas antes del ensayo clínico, los pacientes experimentan pruebas psiconeurológicas apropiadas tales como el Examen del Estado Mini Mental (MMSE), la Escala de Evaluación de la Enfermedad de Alzheimer (ADAS), la prueba Boston Naming Test (BNT), y la Prueba de Token (TT). Las pruebas neuropsicológicas se repiten en el Día 0, 6 semanas y 3 meses del tribal clínico. Las pruebas se llevan a cabo por neuropsicólogos que no son consientes del régimen de tratamiento del paciente.

Los pacientes se asignan al azar para la formulación de prueba o placebo en el inicio del estudio. La formulación de prueba y placebo se toma por vía oral una o dos veces por día. El tratamiento para las afecciones tales como diabetes, hipertensión, etc. se permite durante el estudio. Las puntuaciones se comparan estadísticamente entre la formulación de prueba y el placebo para cada uno de los tres períodos de observación. Sin el tratamiento, el curso natural de AD es deterioro significante en las puntuaciones de la prueba durante el curso de la prueba clínica. Los pacientes tratados con la composición de la presente invención como la formulación de prueba, se consideran mejorados si las puntuaciones del paciente permanecen iguales o mejoran durante el curso de la prueba clínica.

EJEMPLO 6

Formulación Oral en el Tratamiento y Prevención del Cáncer de Colon

19 Una formulación oral como se describe en el Ejemplo 2, se administra a pacientes que han manifestado un estado temprano de cáncer de colon como se diagnóstica por su propio médico y se confirma por un oncólogo independiente certificado por el consejo. Los pacientes se asignan al azar, para la formulación de prueba o un placebo en el inicio del estudio. La formulación de prueba y placebo se toma vía oral una o dos veces por día. El tratamiento de afecciones tales como diabetes, hipertensión, etc. se permite durante el estudio. Las evaluaciones endoscópicas se hacen a uno, dos, seis y doce meses. Evidencia de la reaparición del tumor durante cualquiera de las cuatro visitas de seguimiento clínico se considera un fracaso del tratamiento. El porcentaje de fracasos del tratamiento se compara entre la formulación de prueba y el placebo control. Bajo las condiciones experimentales descritas, el material de prueba se espera que disminuya la incidencia del tumor en relación con el grupo control. La diferencia entre los dos grupos se considera estadísticamente significante, si la probabilidad de rechazar la hipótesis nula cuando la verdad es menor del cinco por ciento. EJEMPLO 7 Formulación Oral para el tratamiento de Síndrome del intestino irritable Una formulación oral como se describe en el Ejemplo 2, se administra a pacientes que han manifestado el síndrome de intestino irritable, según se diagnóstica por su médico. El funcionamiento normal del intestino se restablece en 24 horas. EXAMPLO 8 Normalización del Funcionamiento de la Articulación en la Osteoartritis Utilizando las composiciones descritas en el Ejemplo 2, la normalización de la rigidez de la articulación debido a la osteoartritis, se produce después de cinco a veinte dosis, en la presencia o ausencia de glucosamina o sulfato de condroitina. Además, la composición no interfiere con los efectos normales de reconstrucción de la articulación de estos dos constituyentes proteoglicanos, a diferencia de los tradicionales agentes anti-inflamatorios no-esteroidales. En resumen, la invención se refiere a una composición para la inhibición de la actividad inducible de COX-2 y que tiene mínimo efecto sobre la actividad de COX-1, dicha composición que comprende, como un primer componente una cantidad efectiva de una especie curcuminoide y una cantidad efectiva de un segundo componente seleccionado del grupo que consiste de tetrahidroisohumulona y dihidroisohumulona. La especie curcuminoide es preferiblemente la curcumina, demetoxicurcurmina, o bisdemetoxicurcumina. La especie alfa-ácido incluye humulona, cohumulona, isohumulona, isoprehumulona, hulupona, adhumulona, xantohumol A, o xantohumol B. La especie beta-ácido incluyen lupulona, colupulona, adlupulona, tetrahidroisohumulona, hexahidrocolupulona o dihidro-isohumulona. El primer o el segundo componente de la presente composición pueden ser de grado farmacéutico o derivado de planta(s) o extracto(s) de planta(s). El primer o el segundo componente, también se pueden conjugar con un compuesto tal como mono-o disacáridos, aminoácidos, sulfatos, succinatos, acetatos o glutatión. Las composiciones de la invención se pueden formular en un portador farmacéuticamente aceptable y contienen aditivos, tales como antioxidantes, vitaminas, minerales, proteínas, grasas, carbohidratos, glucosamina, sulfato de condroitina o aminoazúcares. La invención, además se refiere al uso de la composición para reducir los síntomas en animales que sufren de los síntomas de la inflamación. La composición se fórmula en una forma de dosificación de tal manera que dicha administración proporciona de aproximadamente 0.001 a cerca de 30.0 mg de peso corporal por día, de cada especie curcuminoide, y de aproximadamente 0.5 a cerca de 20.0 mg/kg de peso corporal por día de especie alfa-ácido o especie beta-ácido. La composición se

administra en una cantidad suficiente para mantener una concentración en suero de cerca de 0.1 a cerca de 50 µM de cada especie de curcuminoide, y de aproximadamente 0.001 a cerca de 50 µM de cada especie alfa-ácido o especie beta-ácido. El animal puede ser humanos, primates no-humanos, perros, gatos, aves, reptiles, anfibios, caballos o rumiantes. La administración puede ser un sistema de entrega oral, parenteral, tópica, transdérmica o transmucosa.

Las combinaciones de los componentes de la composición, pueden proporcionar un efecto sinérgico anti-inflamatorio en respuesta a una lesión física o química o la estimulación inmune anormal debido a un agente biológico o una etiología desconocida.

REFERENCIAS CITADAS EN LA DESCRIPCION

Esta lista de referencias citada por el aspirante es solamente para conveniencia del lector. No forma parte del documento de la patente Europea. Aún cuando se ha tenido gran cuidado en 5 recopilar las referencias, los errores u omisiones no se pueden excluir y la EPO desconoce toda

responsabilidad a este respecto.

Literatura no-patente citada en la descripción

• Lopes Vaz, A. Double-blind clinical evaluation of the relative efficacy of ibuprofen and

glucosamine sulphate in the management of osteoarthritis of the knee in outpatients. 8 Curr. Med Res 10 Opin, 1982, 145-149 [0008]

• Tobe, H. et al. Bone resorption inhibitors from hop extract. Biosci. Biotech. Biochem, 1997, vol. 61 (1), 158-159 [0039]

• Yamamoto, K. Suppression of cyclooxygenase-2 gene transcription by humulon of bee hop

extract studied with reference to glucocorticoid. FEBS Letters, 2000, vol. 465, 103-106 [0039] 15 • Noreen, Y. et al. J. Nat. Prod., 1998, vol. 61, 2-7 [0066]

•

Hamberg, M. ; Samuelsson, B. J. Biol. Chem., 1971, vol. 246, 6713-6721 [0075]

•

T-C Chou ; P. Talaly. Trends Pharmacol. Sci., vol. 4, 450-454 [0089]

•

Chou, T.-C. ; Talalay, P. A simple generalized equation for the analysis of multiple

inhibitions of Michaelis-Menten kinetic systems. J. Biol. Chem., 1977, vol. 252, 6438-6442 [0092] 20 • Cho; Talalay. Trends Pharmacol. Sci., 1983, vol. 4, 450-454 [0092]

Claims (21)

1.

Una composición que comprende una cantidad efectiva de un primer componente que comprende una especie curcuminoide y un segundo componente que comprende un miembro seleccionado del grupo que consiste de tetrahidroisohumulona y dihidroisohumulona.

2.

La composición de la Reivindicación 1, en donde el segundo componente se extrae a partir del lúpulo.

3.

La composición de la Reivindicación 2, en donde la extracción se lleva a cabo por CO2 supercrítico.

4.

La composición de la Reivindicación 1, en donde el curcuminoide se selecciona del grupo que consiste de la curcumina, demetoxicurcumina, bisdemetoxicurcumina, cis-trans-curcumina, y ciclocurcumina.

5. La composición de la Reivindicación 4, en donde el curcuminoide es la curcumina.

6.

La composición de la Reivindicación 1, en donde el primer componente es un compuesto sintético.

7.

La composición de la Reivindicación 1, en donde el segundo componente es un compuesto sintético.

8.

La composición de la Reivindicación 1, en donde la composición se fórmula con un portador farmacéuticamente aceptable.

9.

La composición de la Reivindicación 1, que además comprende un miembro seleccionado del grupo que consiste de glucosamina y sulfato de condroitina.

10.

La composición de la Reivindicación 1, que además comprende un miembro seleccionado del grupo que consiste de antioxidantes, vitaminas, minerales, proteínas, grasas, carbohidratos, y aminoazúcares.

11.

La composición de la Reivindicación 1, para utilizar en el tratamiento de la inflamación o enfermedades basadas en la inflamación en un animal.

12.

La composición de la Reivindicación 1, para utilizar en la reducción de los síntomas de osteoartritis en un animal.

13.

Uso de la composición de la Reivindicación 1, para la preparación de un medicamento para tratar la inflamación o las enfermedades basadas en la inflamación en un animal.

14.

El uso de la Reivindicación 13, en donde la composición se fórmula en una forma de dosificación de tal manera que la administración de dicha forma de dosificación proporciona cerca de

0.001 a cerca de 30 mg por kg de peso corporal del animal por día del primer componente y cerca de

0.5 a cerca de 20 mg por kg de peso corporal del animal por día del segundo componente.

15.

El uso de la Reivindicación 13, en donde dicho medicamento es para la administración por un medio seleccionado del grupo que consiste de la administración por vía oral, parenteral, tópica, transdérmica, y transmucosa.

16.

El uso de la Reivindicación 15, en donde la fórmula de aplicación tópica proporciona cerca de 0.001 a cerca de 1 % en peso del primer componente y cerca de 0.025 a cerca del 1 % en peso del segundo componente.

17.

El uso de la Reivindicación 16, en donde la fórmula de aplicación tópica proporciona cerca de 0.01 a cerca del 1 % en peso del primer componente y cerca del 0.05 a cerca del 1 % en peso del segundo componente.

18.

Uso de la composición de la Reivindicación 1, para la preparación de un medicamento para reducir los síntomas de osteoartritis en un animal.

19.

El uso de la Reivindicación 18, en donde la composición además comprende un miembro seleccionado del grupo que consiste de glucosamina y sulfato de condroitina.