ES2351134B1 - Nueva cepa de lactobacilus plantarum para la producción de carotenoides. - Google Patents
Nueva cepa de lactobacilus plantarum para la producción de carotenoides. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2351134B1 ES2351134B1 ES200930276A ES200930276A ES2351134B1 ES 2351134 B1 ES2351134 B1 ES 2351134B1 ES 200930276 A ES200930276 A ES 200930276A ES 200930276 A ES200930276 A ES 200930276A ES 2351134 B1 ES2351134 B1 ES 2351134B1
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- strain
- carotenoids
- lactobacillus plantarum
- production
- food
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 235000021466 carotenoid Nutrition 0.000 title claims abstract description 77
- 150000001747 carotenoids Chemical class 0.000 title claims abstract description 74
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 50
- 240000006024 Lactobacillus plantarum Species 0.000 claims abstract description 45
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims abstract description 33
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 25
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 claims abstract description 24
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 claims abstract description 24
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 claims abstract description 23
- 235000013965 Lactobacillus plantarum Nutrition 0.000 claims abstract description 21
- 229940072205 lactobacillus plantarum Drugs 0.000 claims abstract description 21
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims abstract description 15
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 claims abstract description 15
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 claims abstract description 11
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 claims abstract description 11
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 claims abstract description 11
- 235000020786 mineral supplement Nutrition 0.000 claims abstract description 9
- 229940029985 mineral supplement Drugs 0.000 claims abstract description 9
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 claims abstract description 9
- 235000019195 vitamin supplement Nutrition 0.000 claims abstract description 9
- FPSYVUBUILNSRF-MQMKOTMBSA-N 4,4'-diaponeurosporene Chemical compound CC(C)=CCC\C(C)=C\C=C\C(\C)=C\C=C\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C=C(C)C FPSYVUBUILNSRF-MQMKOTMBSA-N 0.000 claims description 14
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 14
- XBZYWSMVVKYHQN-MYPRUECHSA-N (4as,6as,6br,8ar,9r,10s,12ar,12br,14bs)-10-hydroxy-2,2,6a,6b,9,12a-hexamethyl-9-[(sulfooxy)methyl]-1,2,3,4,4a,5,6,6a,6b,7,8,8a,9,10,11,12,12a,12b,13,14b-icosahydropicene-4a-carboxylic acid Chemical compound C1C[C@H](O)[C@@](C)(COS(O)(=O)=O)[C@@H]2CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@@]5(C(O)=O)CCC(C)(C)C[C@H]5C4=CC[C@@H]3[C@]21C XBZYWSMVVKYHQN-MYPRUECHSA-N 0.000 claims description 12
- -1 4,4'-diaponeurosporene compound Chemical class 0.000 claims description 12
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 10
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 9
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 8
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 8
- 241000207836 Olea <angiosperm> Species 0.000 claims description 6
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 claims description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 6
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 6
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 claims description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 5
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 4
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 4
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 4
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 3
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 3
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 claims description 3
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 claims description 3
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 3
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 3
- 239000011591 potassium Substances 0.000 claims description 3
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 claims description 3
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 claims description 3
- YWYZEGXAUVWDED-UHFFFAOYSA-N triammonium citrate Chemical group [NH4+].[NH4+].[NH4+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O YWYZEGXAUVWDED-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N Manganese Chemical compound [Mn] PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims description 2
- 229910052748 manganese Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000011572 manganese Substances 0.000 claims description 2
- 241000238557 Decapoda Species 0.000 claims 3
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 claims 3
- 239000002699 waste material Substances 0.000 claims 3
- 102220547770 Inducible T-cell costimulator_A23L_mutation Human genes 0.000 claims 2
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 claims 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims 2
- 102220201851 rs143406017 Human genes 0.000 claims 2
- 235000013580 sausages Nutrition 0.000 claims 2
- JEBFVOLFMLUKLF-IFPLVEIFSA-N Astaxanthin Natural products CC(=C/C=C/C(=C/C=C/C1=C(C)C(=O)C(O)CC1(C)C)/C)C=CC=C(/C)C=CC=C(/C)C=CC2=C(C)C(=O)C(O)CC2(C)C JEBFVOLFMLUKLF-IFPLVEIFSA-N 0.000 claims 1
- 241000192131 Leuconostoc gelidum Species 0.000 claims 1
- MQZIGYBFDRPAKN-ZWAPEEGVSA-N astaxanthin Chemical compound C([C@H](O)C(=O)C=1C)C(C)(C)C=1/C=C/C(/C)=C/C=C/C(/C)=C/C=C/C=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)C(=O)[C@@H](O)CC1(C)C MQZIGYBFDRPAKN-ZWAPEEGVSA-N 0.000 claims 1
- 229940022405 astaxanthin Drugs 0.000 claims 1
- 235000013793 astaxanthin Nutrition 0.000 claims 1
- 239000001168 astaxanthin Substances 0.000 claims 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims 1
- 150000003648 triterpenes Chemical class 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 26
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 14
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 11
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 10
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 10
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 9
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 7
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 7
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 7
- 241000894007 species Species 0.000 description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 6
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 6
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 6
- OINNEUNVOZHBOX-QIRCYJPOSA-K 2-trans,6-trans,10-trans-geranylgeranyl diphosphate(3-) Chemical compound CC(C)=CCC\C(C)=C\CC\C(C)=C\CC\C(C)=C\COP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O OINNEUNVOZHBOX-QIRCYJPOSA-K 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- JJMKRPXUHIPSAW-ZOKJSSERSA-N all-trans-4,4'-diapo-zeta-carotene Chemical compound CC(C)=CCC\C(C)=C\C=C\C(\C)=C\C=C\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)CCC=C(C)C JJMKRPXUHIPSAW-ZOKJSSERSA-N 0.000 description 5
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 5
- 101150115340 crtN gene Proteins 0.000 description 5
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 5
- ATCICVFRSJQYDV-UHFFFAOYSA-N (6E,8E,10E,12E,14E,16E,18E,20E,22E,26E)-2,6,10,14,19,23,27,31-octamethyldotriaconta-2,6,8,10,12,14,16,18,20,22,26,30-dodecaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CC=CC(C)=CC=CC=C(C)C=CC=C(C)C=CC=C(C)CCC=C(C)C ATCICVFRSJQYDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 4
- 241000873224 Capparaceae Species 0.000 description 4
- 235000017336 Capparis spinosa Nutrition 0.000 description 4
- VWFJDQUYCIWHTN-UHFFFAOYSA-N Farnesyl pyrophosphate Natural products CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCOP(O)(=O)OP(O)(O)=O VWFJDQUYCIWHTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OINNEUNVOZHBOX-XBQSVVNOSA-N Geranylgeranyl diphosphate Natural products [P@](=O)(OP(=O)(O)O)(OC/C=C(\CC/C=C(\CC/C=C(\CC/C=C(\C)/C)/C)/C)/C)O OINNEUNVOZHBOX-XBQSVVNOSA-N 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 4
- ZJPGOXWRFNKIQL-JYJNAYRXSA-N Phe-Pro-Pro Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 ZJPGOXWRFNKIQL-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 4
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 4
- 235000010633 broth Nutrition 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 101150052745 crtM gene Proteins 0.000 description 4
- 235000021121 fermented vegetables Nutrition 0.000 description 4
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 4
- 230000000243 photosynthetic effect Effects 0.000 description 4
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 150000003505 terpenes Chemical class 0.000 description 4
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 3
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000006696 biosynthetic metabolic pathway Effects 0.000 description 3
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 3
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 3
- NXJJBCPAGHGVJC-IFDWNBOGSA-N cis-dehydrosqualene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CC=C/C=C(C)/CCC=C(/C)CCC=C(C)C)C)C)C NXJJBCPAGHGVJC-IFDWNBOGSA-N 0.000 description 3
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 3
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 3
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 3
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 235000021436 nutraceutical agent Nutrition 0.000 description 3
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 3
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 3
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 3
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 3
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 3
- 238000012552 review Methods 0.000 description 3
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 3
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 3
- YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YVLPJIGOMTXXLP-UHFFFAOYSA-N 15-cis-phytoene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CC=CC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YVLPJIGOMTXXLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000007124 Brassica oleracea Species 0.000 description 2
- 235000003899 Brassica oleracea var acephala Nutrition 0.000 description 2
- 235000011301 Brassica oleracea var capitata Nutrition 0.000 description 2
- 235000001169 Brassica oleracea var oleracea Nutrition 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 2
- 244000000626 Daucus carota Species 0.000 description 2
- 235000002767 Daucus carota Nutrition 0.000 description 2
- ZFIVKAOQEXOYFY-UHFFFAOYSA-N Diepoxybutane Chemical compound C1OC1C1OC1 ZFIVKAOQEXOYFY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PLUBXMRUUVWRLT-UHFFFAOYSA-N Ethyl methanesulfonate Chemical compound CCOS(C)(=O)=O PLUBXMRUUVWRLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 2
- 244000199866 Lactobacillus casei Species 0.000 description 2
- 241000186840 Lactobacillus fermentum Species 0.000 description 2
- 244000185256 Lactobacillus plantarum WCFS1 Species 0.000 description 2
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 2
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 2
- ATCICVFRSJQYDV-DDRHJXQASA-N Neurosporene Natural products C(=C\C=C\C(=C/C=C/C=C(\C=C\C=C(/CC/C=C(\CC/C=C(\C)/C)/C)\C)/C)\C)(\C=C\C=C(/CC/C=C(\C)/C)\C)/C ATCICVFRSJQYDV-DDRHJXQASA-N 0.000 description 2
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N acridine Chemical compound C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 2
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 2
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 2
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 2
- 235000015140 cultured milk Nutrition 0.000 description 2
- DENRZWYUOJLTMF-UHFFFAOYSA-N diethyl sulfate Chemical compound CCOS(=O)(=O)OCC DENRZWYUOJLTMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940008406 diethyl sulfate Drugs 0.000 description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 2
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000138 intercalating agent Substances 0.000 description 2
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 2
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 2
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- MBABOKRGFJTBAE-UHFFFAOYSA-N methyl methanesulfonate Chemical compound COS(C)(=O)=O MBABOKRGFJTBAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 2
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 2
- 235000008665 neurosporene Nutrition 0.000 description 2
- 239000002417 nutraceutical Substances 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 2
- 238000012803 optimization experiment Methods 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 235000021110 pickles Nutrition 0.000 description 2
- 230000019612 pigmentation Effects 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 2
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 235000019529 tetraterpenoid Nutrition 0.000 description 2
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 2
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 description 2
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YVLPJIGOMTXXLP-UUKUAVTLSA-N 15,15'-cis-Phytoene Natural products C(=C\C=C/C=C(\CC/C=C(\CC/C=C(\CC/C=C(\C)/C)/C)/C)/C)(\CC/C=C(\CC/C=C(\CC/C=C(\C)/C)/C)/C)/C YVLPJIGOMTXXLP-UUKUAVTLSA-N 0.000 description 1
- YVLPJIGOMTXXLP-BAHRDPFUSA-N 15Z-phytoene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC(=CC=C/C=C(C)/CCC=C(/C)CCC=C(/C)CCC=C(C)C)C)C)C)C YVLPJIGOMTXXLP-BAHRDPFUSA-N 0.000 description 1
- VWFJDQUYCIWHTN-YFVJMOTDSA-N 2-trans,6-trans-farnesyl diphosphate Chemical compound CC(C)=CCC\C(C)=C\CC\C(C)=C\CO[P@](O)(=O)OP(O)(O)=O VWFJDQUYCIWHTN-YFVJMOTDSA-N 0.000 description 1
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710140665 4,4'-diapophytoene desaturase (4,4'-diaponeurosporene-forming) Proteins 0.000 description 1
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 239000004254 Ammonium phosphate Substances 0.000 description 1
- 241000304886 Bacilli Species 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- 230000004543 DNA replication Effects 0.000 description 1
- 241000194031 Enterococcus faecium Species 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N Hydroxylamine Chemical compound ON AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- RRHGJUQNOFWUDK-UHFFFAOYSA-N Isoprene Chemical group CC(=C)C=C RRHGJUQNOFWUDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000001046 Lactobacillus acidophilus Species 0.000 description 1
- 235000013956 Lactobacillus acidophilus Nutrition 0.000 description 1
- 244000199885 Lactobacillus bulgaricus Species 0.000 description 1
- 241000218492 Lactobacillus crispatus Species 0.000 description 1
- 241001134659 Lactobacillus curvatus Species 0.000 description 1
- 241000186606 Lactobacillus gasseri Species 0.000 description 1
- 241000186604 Lactobacillus reuteri Species 0.000 description 1
- 241000218588 Lactobacillus rhamnosus Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 244000172809 Leuconostoc cremoris Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 240000002129 Malva sylvestris Species 0.000 description 1
- 235000006770 Malva sylvestris Nutrition 0.000 description 1
- 241001148218 Methylobacterium rhodinum Species 0.000 description 1
- ZOKXTWBITQBERF-UHFFFAOYSA-N Molybdenum Chemical compound [Mo] ZOKXTWBITQBERF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZRKWMRDKSOPRRS-UHFFFAOYSA-N N-Methyl-N-nitrosourea Chemical compound O=NN(C)C(N)=O ZRKWMRDKSOPRRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine Chemical compound O=NN(C)C(=N)N[N+]([O-])=O VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007832 Na2SO4 Substances 0.000 description 1
- IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-N Nitrous acid Chemical compound ON=O IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000007817 Olea europaea Species 0.000 description 1
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002944 PCR assay Methods 0.000 description 1
- 102000019337 Prenyltransferases Human genes 0.000 description 1
- 108050006837 Prenyltransferases Proteins 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 244000057717 Streptococcus lactis Species 0.000 description 1
- 235000014897 Streptococcus lactis Nutrition 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 1
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 description 1
- 229940100198 alkylating agent Drugs 0.000 description 1
- OENHQHLEOONYIE-UKMVMLAPSA-N all-trans beta-carotene Natural products CC=1CCCC(C)(C)C=1/C=C/C(/C)=C/C=C/C(/C)=C/C=C/C=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C OENHQHLEOONYIE-UKMVMLAPSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- 229910000148 ammonium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019289 ammonium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000004873 anchoring Methods 0.000 description 1
- 230000006851 antioxidant defense Effects 0.000 description 1
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 235000013734 beta-carotene Nutrition 0.000 description 1
- TUPZEYHYWIEDIH-WAIFQNFQSA-N beta-carotene Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2=CCCCC2(C)C TUPZEYHYWIEDIH-WAIFQNFQSA-N 0.000 description 1
- 239000011648 beta-carotene Substances 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 229960002747 betacarotene Drugs 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013452 biotechnological production Methods 0.000 description 1
- QKSKPIVNLNLAAV-UHFFFAOYSA-N bis(2-chloroethyl) sulfide Chemical compound ClCCSCCCl QKSKPIVNLNLAAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007705 chemical test Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 235000015142 cultured sour cream Nutrition 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N diammonium hydrogen phosphate Chemical compound [NH4+].[NH4+].OP([O-])([O-])=O MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N dimethyl 2-(3-ethyl-3-methylpentyl)propanedioate Chemical compound CCC(C)(CC)CCC(C(=O)OC)C(=O)OC AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 235000021107 fermented food Nutrition 0.000 description 1
- 235000002864 food coloring agent Nutrition 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 235000021474 generally recognized As safe (food) Nutrition 0.000 description 1
- 235000021473 generally recognized as safe (food ingredients) Nutrition 0.000 description 1
- 238000012252 genetic analysis Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000007407 health benefit Effects 0.000 description 1
- 235000015092 herbal tea Nutrition 0.000 description 1
- 244000059217 heterotrophic organism Species 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 230000005865 ionizing radiation Effects 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NUHSROFQTUXZQQ-UHFFFAOYSA-N isopentenyl diphosphate Chemical compound CC(=C)CCO[P@](O)(=O)OP(O)(O)=O NUHSROFQTUXZQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000015141 kefir Nutrition 0.000 description 1
- 235000015138 kumis Nutrition 0.000 description 1
- 229940039695 lactobacillus acidophilus Drugs 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L manganese(2+);methyl n-[[2-(methoxycarbonylcarbamothioylamino)phenyl]carbamothioyl]carbamate;n-[2-(sulfidocarbothioylamino)ethyl]carbamodithioate Chemical compound [Mn+2].[S-]C(=S)NCCNC([S-])=S.COC(=O)NC(=S)NC1=CC=CC=C1NC(=S)NC(=O)OC WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000357 manganese(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012269 metabolic engineering Methods 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 235000020166 milkshake Nutrition 0.000 description 1
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 1
- 229910052750 molybdenum Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011733 molybdenum Substances 0.000 description 1
- 239000006872 mrs medium Substances 0.000 description 1
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 description 1
- 235000011765 phytoene Nutrition 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- OVARTBFNCCXQKS-UHFFFAOYSA-N propan-2-one;hydrate Chemical compound O.CC(C)=O OVARTBFNCCXQKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108010009004 proteose-peptone Proteins 0.000 description 1
- 239000011535 reaction buffer Substances 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000004460 silage Substances 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 description 1
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- PDOUICUKTQRPHO-MENSNCDRSA-N staphyloxanthin Chemical compound CCC(C)CCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H]1O[C@@H](OC(=O)C(\C)=C\C=C\C(\C)=C\C=C\C(\C)=C\C=C\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)CCC=C(C)C)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O PDOUICUKTQRPHO-MENSNCDRSA-N 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 235000013616 tea Nutrition 0.000 description 1
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 description 1
- 125000002264 triphosphate group Chemical class [H]OP(=O)(O[H])OP(=O)(O[H])OP(=O)(O[H])O* 0.000 description 1
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 1
- 238000002371 ultraviolet--visible spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- OENHQHLEOONYIE-JLTXGRSLSA-N β-Carotene Chemical compound CC=1CCCC(C)(C)C=1\C=C\C(\C)=C\C=C\C(\C)=C\C=C\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C OENHQHLEOONYIE-JLTXGRSLSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
-
- A23L1/3014—
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L5/00—Preparation or treatment of foods or foodstuffs, in general; Food or foodstuffs obtained thereby; Materials therefor
- A23L5/40—Colouring or decolouring of foods
- A23L5/42—Addition of dyes or pigments, e.g. in combination with optical brighteners
- A23L5/43—Addition of dyes or pigments, e.g. in combination with optical brighteners using naturally occurring organic dyes or pigments, their artificial duplicates or their derivatives
- A23L5/44—Addition of dyes or pigments, e.g. in combination with optical brighteners using naturally occurring organic dyes or pigments, their artificial duplicates or their derivatives using carotenoids or xanthophylls
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P23/00—Preparation of compounds containing a cyclohexene ring having an unsaturated side chain containing at least ten carbon atoms bound by conjugated double bonds, e.g. carotenes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/225—Lactobacillus
- C12R2001/25—Lactobacillus plantarum
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Mycology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Nueva cepa de Lactobacillus plantarum para la producción de carotenoides.#La presente invención se refiere a una nueva cepa bacteriana, CECT 7531, que pertenece a la especie Lactobacillus plantarum, o cualquier cepa mutante que proceda de la misma. La presente invención se refiere también al uso de dicha cepa para la producción de carotenoides, para la fabricación de un alimento probiótico, de un complemento nutricional, vitamínico o mineral, así como un método para la producción de carotenoides mediante dicha cepa.
Description
Nueva cepa de Lactobacillus plantarum para la producción de carotenoides.
La presente invención se refiere a una nueva cepa bacteriana, CECT 7531, que pertenece a la especie Lactobacillus plantarum, o cualquier cepa mutante que proceda de la misma. La presente invención se refiere también al uso de dicha cepa para la producción de carotenoides, para la fabricación de un alimento probiótico, de un complemento nutricional, vitamínico o mineral, así como un método para la producción de carotenoides mediante dicha cepa.
Estado de la técnica anterior
Los carotenoides son un grupo de compuestos terpenoides coloreados y con propiedades antioxidantes que están muy extendidos en los reinos vegetal y animal, así como en hongos y en microorganismos fotosintéticos y no fotosintéticos. En estos últimos, aunque no son esenciales para su crecimiento como organismos heterótrofos, desempeñan importantes funciones biológicas. Así, en bacterias Gram positivas, los carotenoides juegan un papel importante protegiendo del estrés oxidativo al capturar radicales libres con sus dobles enlaces conjugados (Clauditz et al., 2006, Infection and Immunity, 74: 4950-4953). También ha sido demostrada una correlación entre la producción de carotenoides y una disminución de la fluidez de la membrana plasmática, lo que proporciona, por ejemplo, resistencia al ácido oléico en Staphylococcus aureus. Además, los carotenoides son usados comercialmente como colorantes alimentarios, suplementos de comida de animales y, más recientemente, como parte de nutracéuticos, alimentos funcionales, cosméticos y productos farmacéuticos (Lee y Schmidt-Dannert, 2002. Applied Microbiology and Biotechnology, 60: 1-11).
En la actualidad, la ingeniería metabólica de diversos microorganismos, incluyendo los no carotenogénicos, está siendo explotada para la producción biotecnológica de grandes cantidades de carotenoides razonablemente puros así como para sintetizar estructuras carotenoides novedosas usando estrategias combinatorias y de evolución in vitro (Lee y Schmidt-Dannert, 2002. Applied Microbiology and Biotechnology, 60: 1-11; Umeno et al., 2005. Journal of Bacteriology 184: 6690-6699).
Las bacterias del ácido láctico (BAL) son bacilos o cocos Gram positivos, de bajo contenido GC, microaerófilos, no esporulados, que fermentan azúcares para producir principalmente ácido láctico, y que están asociados por características fisiológicas comunes. Estas bacterias han sido históricamente asociadas con las fermentaciones de alimentos, y su importancia industrial está además evidenciada por su consideración de microorganismos generalmente seguros (Generally Regarded As Safe, GRAS, en inglés) (Holzapfel et al., 1995. International Journal of Food Microbiology, 24: 343-362). Entre las BAL, las especies seleccionadas del género Lactobacillus son ampliamente usadas como probióticos, especialmente en productos lácteos y suplementos dietéticos (Klaenhammer et al., 2005. FEMS Microbiology Reviews, 29: 393-409). Una de estas especies, Lactobacillus plantarum, es importante industrialmente, estando implicada en muchas fermentaciones de vegetales, al tiempo que es habitante natural del tracto intestinal humano (Johansson et al., 1993. Applied and Environmental Microbiology, 59: 15-20).
El uso de una cepa bacteriana que tenga la capacidad de producir cantidades de carotenoides superiores a las que son obtenidas por cepas silvestres conocidas es de especial interés para su aplicación biotecnológica.
Explicación de la invención
La presente invención se refiere a una nueva cepa bacteriana, la cepa CECT 7531, que pertenece a la especie Lactobacillus plantarum, o cualquier cepa mutante que proceda de la misma. La presente invención se refiere también al uso de dicha cepa para la producción de carotenoides, para la fabricación de un alimento probiótico, de un complemento nutricional, vitamínico o mineral, así como un método para la producción de carotenoides mediante dicha cepa.
En la presente invención se demuestra la presencia de biosíntesis de carotenoides C30 en varias de las cepas de Lactobacillus plantarum (L. plantarum) estudiadas, especialmente en aquellas aisladas de fermentaciones de aceitunas. Una de estas cepas, la cepa CECT 7531, aislada de una fermentación de aceitunas de mesa, produjo una cantidad de carotenoides muy superior a la media (46,03 mg/kg peso seco), siendo esta producción unas dos veces y media superior a la segunda cepa mayor productora encontrada (LPT49/6, 19,18 mg/kg peso seco), lo cual supone un efecto inesperado. Además, los genes crtM y crtN, implicados en la biosíntesis del carotenoide C30 4,4’-diaponeurosporeno, están presentes en todas las cepas ensayadas.
La cepa CECT 7531 de L. plantarum de la presente invención puede ser usada para fermentar alimentos o piensos para animales. El uso de cepas seleccionadas super-productoras de carotenoides, como es el caso de la cepa de la presente invención, mejora su rendimiento en estas fermentaciones a través de un incremento de su resistencia a diferentes condiciones de estrés. Además, todo ello contribuye a incrementar la cantidad total de antioxidantes aportados en la dieta, tanto humana como animal. Debido a que L. plantarum es un reconocido habitante del tracto gastrointestinal, su uso en la dieta es de extraordinario interés ya que el microorganismo aporta una cantidad continua de moléculas antioxidantes en un lugar donde su acción protectora es muy bien recibida.
En este sentido, un aspecto de la presente invención es una cepa bacteriana, la cepa CECT 7531, que pertenece a la especie Lactobacillus plantarum, de acuerdo con los criterios moleculares definidos por Torriani et al., (2001). Applied
and Environmental Microbiology, 67: 3450-3454. La cepa CECT 7531 puede ser cultivada, pero sin limitarse, en medio MRS (de Man, Rogosa y Sharpe, (1960). Appl. Bact., 23: 130-135), a una temperatura de 30ºC en condiciones aerobias. Las condiciones de mantenimiento de dicha cepa son, pero sin limitarse, mediante cultivos saturados añadiendo 20% glicerol y congelando a -80ºC, o mediante liofilización.
La cepa CECT 7531 de Lactobacillus plantarum procede de fermentaciones de aceitunas de mesa. Dicha cepa es capaz de producir una pigmentación amarilla de sus colonias aisladas cuando son crecidas en un medio sólido, semisólido o líquido. La pigmentación amarilla en medio líquido se demuestra al centrifugar estos cultivos y recoger los pellets de células correspondientes. Además, dicha cepa contiene los genes crtM y crtN, genes que codifican para las enzimas dehidroescualeno sintasa y dehidroescualeno desaturasa respectivamente, dos enzimas implicadas en la ruta de biosíntesis de carotenoides triperpenoides (con 30 átomos de carbono).
La cepa CECT 7531 puede ser utilizada para generar una cepa mutante (cepa mutante derivada). Dicha mutación puede ser espontánea o inducida. La mutación puede llevarse a cabo por medio de la aplicación de uno o varios métodos de mutagénesis. El método se selecciona, pero sin limitarse, de la lista que comprende mutagénesis química, mutagénesis por radiaciones o mutagénesis por elementos transponibles.
Las mutaciones espontáneas pueden ocurrir debido a la acción de las radiaciones naturales e incluso durante la replicación del ADN debido a errores en la lectura de las bases. La frecuencia de mutación (la proporción de mutantes en la población) puede aumentarse significativamente con el uso de métodos de mutación inducida.
Tanto las mutaciones espontáneas como las inducidas se producen como resultado de cambios estructurales en el genoma como por ejemplo, pero sin limitarse, cambio en el número de cromosomas, cambio en el orden de uno
o varios genes dentro del cromosoma o cambio en la secuencia de bases dentro de un gen (mutación puntual). La mutación puntual puede provocar la sustitución de un nucleótido por otro nucleótido o el desplazamiento de la pauta abierta de lectura (inserción o delección de uno o más nucleótidos).
El agente que provoca mutagénesis química se selecciona de la lista que comprende, pero sin limitarse, agentes que reaccionan con el ADN, agentes intercalantes o análogos de bases. El agente que reacciona con el ADN es capaz de reaccionar directamente con éste, aunque no se esté replicando, ocasionando cambios químicos en las bases que provocan un apareamiento incorrecto. El agente que reacciona con el ADN se selecciona de la lista que comprende, pero sin limitarse, ácido nitroso, hidroxilamina, agente alquilante (etil metano sulfonato [EMS], metil metano sulfonato [MMS], dietil sulfato [DES], diepoxi butano [DEB], N-metil-N-nitro-N-nitrosoguanidina [NTG], N-metil-N-nitroso urea (gas mostaza), agente intercalante (acridina, bromuro de etidio o dihidroetidio).
La mutagénesis por radiaciones puede ser producida, pero sin limitarse, a radiaciones ultravioleta o radiaciones ionizantes como los rayos X o los rayos gamma.
La mutagénesis por elementos transponibles puede ser producida, pero sin limitarse, a la inserción de una secuencia de inserción o de un transposón en una secuencia de uno o varios genes de la cepa bacteriana de la presente invención.
La cepa CECT 7531 puede ser utilizada para generar una cepa recombinante (cepa recombinante derivada) mediante la introducción de genes que codifican para enzimas que puedan alterar y/o ampliar el rango de producción de compuestos carotenoides de la cepa parental, o bien de secuencias de ADN específicas que puedan ejercer esta función. Estos genes o secuencias de ADN pueden ser introducidos en la cepa parental mediante diversas técnicas como por ejemplo, pero sin limitarse, vectores de expresión basados en plásmidos adecuados, vectores suicidas, plásmidos conjugativos, transposones o fagos.
En adelante se podrá hacer referencia a la cepa CECT 7531 o a cualquier cepa mutante o recombinante derivada con el término “cepa/s de la presente invención” o “cepa/s de la invención”.
Otro aspecto de la presente invención se refiere a una población celular que comprende células de la cepa de la invención. La población celular es un conjunto de células que proceden de una o más células que pertenecen a la cepa de la presente invención. La población celular puede constituir una colonia. Una colonia es una población celular que procede de una sola célula.
En adelante se podrá hacer referencia a la población celular descrita en el párrafo anterior con el término “población celular de la presente invención” o “población celular de la invención”.
Un aspecto más de la invención se refiere al uso de la cepa de la presente invención o de la población celular para la producción de carotenoides. Una realización preferida se refiere al uso de dicha cepa o de dicha población celular donde el carotenoide es un triterpenoide.
Un triterpenoide es un terpenoide de 30 átomos de carbono (C30). El término isoprenoide se puede utilizar como sinónimo de terpenoide. Un terpenoide es una molécula lipídica formada por unidades de isopreno.
Otra realización preferida se refiere al uso de la cepa de la invención o de la población celular, donde el triterpenoide es un diapocaroteno. El diapocaroteno se selecciona de la lista que comprende, pero sin limitarse, 4,4’
diapofitoeno, 4,4’-diapofitoflueno, 4,4’-diapo-zeta-caroteno, diapo-7,8,11,12-tetrahidrolicopeno, 4,4’-diaponeurosporeno, 4,4’-diapo-7,8,11,12-tetrahidrolicopeno, 4,4’-diaponeurosporeno o 4-hidroxi-4,4’-diapo-neurosporeno. En una realización más preferida, el diapocaroteno es 4,4’-diaponeusporeno.
Otro aspecto de la presente invención es el uso de la cepa o de la población celular de la invención para la fabricación de un alimento probiótico.
El término “probiótico” tal como se entiende en la presente invención hace referencia a microorganismos vivos que cuando son suministrados en cantidades adecuadas promueven beneficios en la salud del organismo huésped. El organismo huésped puede ser un animal o un humano.
El término “alimento probiótico” tal como se entiende en la presente invención hace referencia a un alimento al que se adicionan células de la cepa de la presente invención. El alimento probiótico de la presente invención contribuye al equilibrio de la flora bacteriana intestinal del huésped y, al constituir una fuente importante de carotenoides, aumenta las defensas antioxidantes del organismo huésped. El alimento probiótico de la presente invención es, pero sin limitarse, un producto lácteo como leche, batido, yogur o kéfir. El alimento probiótico puede ser un producto vegetal fermentado, como por ejemplo, pero sin limitarse, aceitunas, col, pepinillos, alcaparras, alcaparrones, zanahorias o jugos vegetales fermentados. Por otra parte, la cepa de la presente invención también puede ser utilizada para producir los citados alimentos fermentados al ser inoculada como cultivo activo en el material fermentable de partida.
Otra realización preferida de la presente invención se refiere al uso de la cepa o de la población celular de la invención para la fabricación de un complemento nutricional. Una realización más preferida se refiere al uso de la cepa o la población celular de la invención para la fabricación de un complemento vitamínico y/o mineral.
Un “complemento nutricional (o nutritivo)” o un “complemento vitamínico y/o mineral” es una fuente concentrada de dichos nutrientes, solos o combinados, o más concretamente, de vitaminas y/o minerales, solos o combinados, que son ingeridos por un animal o un humano para completar su alimentación o incluso para aumentar el aporte de nutrientes, vitaminas y/o minerales. En la presente invención, el complemento nutricional o el complemento vitamínico y/o mineral se fabrica combinando la cepa de la presente invención con los componentes de dichos complementos, obteniendo de esta manera un complemento rico en carotenoides.
Según otra realización preferida, el alimento probiótico o el complemento nutricional, preferiblemente cualquiera de los complementos vitamínico y/o mineral, se presenta en una forma adaptada a la administración oral. La forma adaptada a la administración oral se refiere a un estado físico que pueda permitir su administración oral. La forma adaptada a la administración oral se selecciona de la lista que comprende, pero sin limitarse, gotas, jarabe, tisana, elixir, suspensión, suspensión extemporánea, vial bebible, comprimido, cápsula, granulado, sello, píldora, tableta, pastilla, trocisco o liofilizado. El alimento probiótico o cualquiera de los complementos descritos puede ser un pienso para animales.
En cada caso el alimento probiótico o cualquiera de los complementos descritos se adaptará al tipo de administración utilizada, por ello, se pueden presentar bajo la forma de soluciones o cualquier otra forma de administración.
Otro aspecto de la presente invención es un método para la producción de carotenoides que comprende:
- a.
- Inocular la cepa o la población celular de la invención en un medio de cultivo,
- b.
- cultivar dicha cepa o población en el medio de cultivo del apartado (a) durante un periodo de entre 15 y 35 horas, y
- c.
- extraer los carotenoides de las células obtenidas en el paso (b).
Una realización preferida se refiere al método, donde el medio de cultivo comprende al menos una fuente de carbono, una fuente de nitrógeno, una solución tampón y componentes traza esenciales. El medio de cultivo del apartado
(a) puede comprender además, peptona, triptona, extracto de levadura, extracto de carne (Beef extract), polisorbato (como por ejemplo, pero sin limitarse, Tween 80). La fuente de carbono puede ser, pero sin limitarse, glucosa, galactosa, maltosa, lactosa, fructosa, sacarosa, mañosa, almidón, melaza, o cualquiera de sus combinaciones. La fuente de nitrógeno puede ser, pero sin limitarse, citrato amónico, fosfato amónico, sulfato amónico, casaminoácidos, peptona de carne, peptona de caseína, peptona de soja, o cualquiera de sus combinaciones. La solución tampón puede ser, pero sin limitarse, acetato sódico, fosfato monoácido de potasio, citrato sódico, o cualquiera de sus combinaciones. Los componentes traza esenciales pueden ser, pero sin limitarse, magnesio, manganeso, zinc, cobre, molibdeno, hierro o níquel.
Según una realización preferida del método, la fuente de nitrógeno es citrato amónico, la solución que ayuda a controlar el pH es acetato sódico y/o fosfato monoácido de potasio y los componentes traza esenciales son magnesio y/o manganeso.
Según otra realización preferida del método, el periodo de cultivo de la cepa o población según el apartado (b) es de entre 20 y 30 horas. Más preferiblemente el periodo de cultivo es de entre 23 y 25 horas.
Otra realización más preferida se refiere al método, donde el pH del medio de cultivo, durante cualquier duración del periodo de cultivo, se mantiene entre 6 y 7. Para mantener el pH del medio de cultivo se lleva a cabo una medida del mismo mediante una toma de muestras serial o mediante una medida continua y la rectificación del mismo mediante la adición de un ácido o una base como por ejemplo, pero sin limitarse, ácido clorhídrico o hidróxido sódico, respectivamente.
Otro aspecto de la presente invención es una composición probiótica que comprende la cepa o el cultivo celular de la presente invención. Dicha composición probiótica puede contener, además, una o más cepas de una bacteria de la misma especie o de una especie diferente o de cualquier otro microorganismo como por ejemplo un hongo o una levadura. La bacteria se selecciona de la lista que comprende, pero sin limitarse, Lactobacillus acidophilus (en adelante el término “Lactobacillus” se abreviará como “L.”), L. casei, L. casei var. Shirota, L. fermentum, L. crispatus, L. reuteri,
L. rhamnosus, L. plantarum, L. bulgaricus, L. cellobiosus, L. curvatus, L. gasseri, L. cremoris, Lactococcus lactis, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium adolescentis, Steptococcus salivaris, Steptococcus faecium, Steptococcus diacetylactis o Steptococcus intermedius.
La composición probiótica puede presentarse en una forma adaptada a la administración oral, como por ejemplo, pero sin limitarse, en forma de gotas, jarabe, tisana, elixir, suspensión, suspensión extemporánea, vial bebible, comprimido, cápsula, granulado, sello, píldora, tableta, pastilla, trocisco o liofilizado.
Otra realización preferida de la presente invención se refiere a una composición probiótica, que además comprende un vehículo. El vehículo se selecciona de la lista que comprende, pero sin limitarse, nutracéutico, alimento funcional, composición farmacéutica, alimento lácteo o alimento vegetal. Según una realización más preferida, el vehículo es un alimento lácteo. Preferiblemente el alimento lácteo es leche fermentada. La leche fermentada se selecciona de la lista que comprende, pero sin limitarse, queso, crema de leche, crema agria, yogurt, kéfir o koumiss. Según otra realización preferida, el vehículo también puede ser un alimento vegetal. Preferiblemente el alimento vegetal es fermentado. El alimento vegetal fermentado se selecciona de la lista que comprende, pero sin limitarse, aceitunas, col, pepinillos, alcaparra, alcaparrón, zanahoria o jugo vegetal fermentado.
Un compuesto nutracéutico tal como se entiende en la presente invención es un suplemento dietético, presentado en una matriz no alimenticia como por ejemplo, pero sin limitarse, píldoras, cápsulas o polvo, de una sustancia natural bioactiva concentrada presente en los alimentos y que, tomada en dosis superior a la existente en esos alimentos, tiene un efecto beneficioso sobre la salud, mayor que el que podría tener el alimento normal.
A lo largo de la descripción y las reivindicaciones la palabra “comprende” y sus variantes no pretenden excluir otras características técnicas, aditivos, componentes o pasos. Para los expertos en la materia, otros objetos, ventajas y características de la invención se desprenderán en parte de la descripción y en parte de la práctica de la invención. Las siguientes figuras y ejemplos se proporcionan a modo de ilustración, y no se pretende que sean limitativos de la presente invención.
Descripción de las figuras
Fig. 1. Muestra el análisis cromatográfico típico de los pigmentos carotenoides extraídos de los pellets de células de cepas de L. plantarum.
En los paneles de la derecha se muestran los espectros de absorción de los picos cromatográficos correspondientes a 4,4’-diaponeurosporeno (1), 4,4’-diapo-zeta-caroteno (2) y 4,4’-diapofitoflueno (3), con indicación de sus máximos expresados en nanómetros (nm).
Fig. 2. Muestra la ruta biosintética de compuestos carotenoides triterpenoides (C30) y tetraterpenoides (C40).
Ejemplos
A continuación se ilustrará la invención mediante unos ensayos realizados por los inventores. Los siguientes ejemplos específicos que se proporcionan en este documento de patente sirven para ilustrar la naturaleza de la presente invención. Estos ejemplos se incluyen solamente con fines ilustrativos y no han de ser interpretados como limitaciones a la invención que aquí se reivindica. Por tanto, los ejemplos descritos no pretenden limitar el campo de aplicación de la misma.
Ejemplo 1
Producción del triterpenoide 4,4’-diaponeurosporeno por varias cepas de L. plantarum
Se realizó un cultivo de las cepas de L. plantarum (Tabla 1) en las condiciones propuestas en la presente invención. Alícuotas del cultivo se centrifugaron, y se obtuvieron pellets que fueron sometidos a extracción y análisis cromatográfico. En todos los casos en los que hubo producción de carotenoides, se observó un pico cromatográfico
principal a 14.8 minutos (Fig. 1). El espectro de absorción mostró máximos a 416, 438 y 468 nm (%III/II=95), lo cual es consistente con la presencia de un cromóforo conteniendo nueve dobles enlaces conjugados. En un principio, estas propiedades sugirieron la presencia de neurosporeno en las muestras analizadas, sin embargo la movilidad cromatográfica para este pico fue diferente, fluyendo a tiempos de retención menores (cerca de 1 minuto) que para neurosporeno (menor polaridad). El espectro de masas mostró un ión quasimolecular [M+H]+ a m/z 403, lo cual está en consonancia con la formula molecular C30H42 correspondiente a 4,4’-diaponeurosporeno (Fig 2, pico 1). Estos datos corroboran los descritos por Breithaupt et al., (2001). European Food Research and Technology, 213: 231-233) para L. plantarum LTH4936. Otros dos picos minoritarios se encontraron a 15.3 y 15.6 minutos (Fig. 2, picos 2 y 3), mostrando espectro de absorción UV-visible con máximos a 380, 402, 426nm (%III/II=93) y 333, 349, 368 nm (%III/II=81), respectivamente. El espectro de masas de estos picos mostró fragmentos [M+H]+ a m/z 405 y 407 respectivamente, los cuales están en concordancia con las fórmulas moleculares C30H44 yC30H46, correspondientes a 4,4’-diapo-zetacaroteno y 4,4’-diapofitoflueno (también denominado como 4,4’-diapo-7,8,11,12-tetrahidrolicopeno) respectivamente, y correspondientes a los intermediarios biosintéticos de la ruta de formación de 4,4’-diaponeurosporeno (Fig. 1) (Wieland et al., (1994). Journal of Bacteriology, 176: 7719-7726). Aunque la mayoría de los pigmentos carotenoides encontrados en bacterias son tetraterpenoides (C40), algunos triperpenoides (C30) han sido descritos en tres especies de bacterias no-fotosintéticas, tales como S. aureus, Streptococcus faecium y Methylobacterium rhodinum, así como en las especies fotosintéticas analizadas de heliobacterias. Tanto en el caso de los carotenoides C30 como los C40, la ruta biosintética comienza con la síntesis del isoprenoide isopentenil pirofosfato (IPP), el cual, después de la elongación de la cadena, catalizado por prenyl transferasas, es convertido en farnesyl pirofosfato (FPP) o geranylgeranyl pirofosfato (GGPP). FPP (C15) y GGPP (C20) son los precursores inmediatos de los carotenoides C30 yC40, respectivamente (Lee y Schmidt-Dannert, 2002. Applied Microbiology and Biotechnology, 60: 1-11). La condensación cola-con-cola de dos moléculas de GGPP, catalizado por la enzima fitoeno sintetasa, da lugar al primer carotenoide, fitoeno. Del mismo modo, la condensación de dos moléculas de FPP, catalizada por la enzima dehydrosqualeno sintetasa, da lugar a dehidrosqualeno (también denominado diapofitoeno), el primer carotenoide C30. Seguidamente, varias reacciones sucesivas de desnaturalización incrementan el número de dobles enlaces conjugados inicialmente presentes en fitoeno o dehidroesqualeno para producir carotenoides coloreados (Lee y Schmidt-Dannert, 2002. Applied Microbiology and Biotechnology, 60: 1-11). Aunque las desaturasas son especificas de las rutas C30 oC40, alguna intercambiabilidad, natural o inducida a través de ingeniería molecular, ha sido descrita en diversos estudios (Raisig y Sandmann, 2001. Biochimica and Biophysica Acta, 1533: 164-170; Umeno et al. 2005. Microbiology and Molecular Biology Reviews, 69: 51-78). En los pocos microorganismos productores de carotenoides C30, el producto final acumulado es 4,4’-diaponeurosporeno o un compuesto derivado de éste por oxidación o incluso glicosilación, como es el caso de staphyloxanthin en S. aureus (Pelz et al., 2005. Journal of Biological Chemistry, 280: 32493-32498). La naturaleza triterpenoide de estos compuestos evita la ciclación de los extremos terminales como en el caso de los carotenoides C40, y por lo tanto la diversidad estructural de los derivados de esta ruta es menor (Lee y Schmidt-Dannert, 2002. Applied Microbiology and Biotechnology, 60: 1-11; Umeno et al. 2005. Microbiology and Molecular Biology Reviews, 69: 51-78).
Ejemplo 2
Estimación cualitativa y cuantitativa de la producción de 4,4’-diaponeurosporeno por cepas de L. plantarum
Como se muestra en la Tabla 1, la mitad de los pellets celulares de las cepas de L. plantarum descritas en el Ejemplo 1, aparecieron amarillos a simple vista (debido a la producción de carotenoides). Cultivos líquidos de cepas seleccionadas que se incubaron durante 24, 48, 72 y 96 horas mostraron que después de las primeras 24 horas de incubación, el contenido de carotenoides disminuía progresivamente. Por otra parte, en ensayos preliminares con algunas cepas seleccionadas se comprobó que el medio de cultivo donde más carotenoides se producían era el denominado DM1. Por lo tanto, las condiciones estándar para el estudio comparativo de producción de carotenoides en cepas de
L. plantarum se establecieron como cultivos líquidos de 500 ml de medio DM1, inoculados con una colonia aislada e incubados estáticamente a 30ºC durante 24 h.
TABLA 1
Cepas de Lactobacillus plantarum estudiadas y producción de 4,4’-diaponeurosporeno
En todas las cepas estudiadas, la producción de diaponeurosporeno estuvo comprendida entre niveles de trazas, apenas distinguibles como picos cromatográficos en los análisis por HPLC, y los 46,03 mg/kg de peso seco producidos por la cepa CECT 7531 de L. plantarum (Tabla 1). El color amarillo de los pellets fue evidente a simple vista para aquellas cepas que producían al menos 4,95 mg de diaponeurosporeno por kg de peso seco (Tabla 1). Se encontró una cierta correlación entre la producción de pigmentos carotenoides y el origen de las diferentes cepas estudiadas. Así, las cepas aisladas de fermentaciones de aceitunas de mesa fueron las más productoras, mientras que en las aisladas de queso o ensilados de maíz sólo se encontraron trazas de compuestos carotenoides. La producción de carotenoides por microorganismos es muy diversa en lo que respecta a niveles de producción, lo cual unido a los diferentes métodos
de cuantificación empleados, hace difícil la comparación entre especies y cepas distintas. A todo ello hay que añadir que diversos autores han descrito diversos modos de estimular la síntesis de carotenoides en microorganismos a través de las condiciones y medios de cultivo (Bhosale, 2004. Applied Microbiology and Biotechnology, 63: 351-361). De este modo, aumentos de dos a mil veces en la producción de carotenoides han sido conseguidos mediante cambios en irradiación lumínica, temperatura de cultivo, y la adición de diversos compuestos químicos. Resultados preliminares obtenidos por los inventores han mostrado diferencias amplias en la producción y contenido final de diaponeurosporeno en función de la marca y composición del medio de cultivo empleado, a pesar de que en todos los casos la densidad celular a las 24 horas de incubación a 30ºC, antes de la extracción de carotenoides, fuera virtualmente la misma. Este resultado ilustra la importancia e influencia de la composición del medio de cultivo en relación a la biosíntesis de carotenoides. En la presente invención se selecciona el medio definido DM1, tal como se ha mencionado anteriormente, como el más rentable a este respecto.
Ejemplo 3
Análisis de la presencia del operón crtN-crtM en las cepas de L plantarum estudiadas
Los análisis genéticos a través de PCR mostraron que todas las cepas de L. plantarum estudiadas contenían los genes crtN y crtM dispuestos como un operón, tal y como había sido descrito en la secuencia anotada del genoma completo de L. plantarum WCFS1 (Kleerebezem et al., 2003. Proceedings of the National Academy of Sciences, 100: 1990-1995). Un fragmento de ADN amplificado de 2.379 pb pudo ser obtenido de casi todas las cepas cuando se usaron los cebadores SEQ ID NO: 1/SEQ ID NO: 2 (Ver notas al pie de Tabla 1), con 58 ó 60ºC como la temperatura de anillamiento. Sin embargo, con dos cepas con las que no se obtuvo amplificación de esta forma, pudo obtenerse un fragmento de ADN amplificado de 2.396 pb cuando los cebadores SEQ ID NO: 3/SEQ ID NO: 2 fueron usados (Ver notas al pie de Tabla 1), con 58ºC como la temperatura de anillamiento. Estos resultados sugieren que pueden aparecer pequeñas variaciones en la secuencia de ADN de los genes estudiados en todas las cepas. Las dos cepas de las que sólo se pudo amplificar ADN específico con la segunda pareja de cebadores fueron aisladas de quesos, no produciendo cantidades apreciables de carotenoides ninguna de ellas. La funcionalidad del operón crtN-crtM, por tanto, aunque retenida en la mitad de las cepas estudiadas, puede perderse debido a ligeras variaciones en la secuencia de ADN tal y como denotan los resultados obtenidos con los ensayos de PCR específicos. Además, estas variaciones podrían ser la causa de las grandes diferencias en producción de carotenoides observadas entre las distintas cepas ensayadas. Por otra parte, el hecho de que incluso en aquellas cepas donde sólo se encontraron trazas de producción de diaponeurosporeno contenían el operón crtN-crtM, en cualquiera de sus “variantes PCR” encontradas, sugiere que estos genes están bastante conservados entre las distintas cepas de L. plantarum, muy probablemente debido a que, debido a su función, merecen ser preservados. Experimentos de optimización con estas cepas que sólo producen trazas de carotenoides serían necesarios para saber si su baja producción es debida a albergar genes crtN o crtM defectuosos
o bien a que otras características metabólicas específicas están involucradas.
Materiales y métodos
Cepas bacterianas, medios y condiciones de cultivo
Las cepas de L. plantarum usadas en este estudio, y que se describen en la Tabla 1, fueron propagadas en agar MRS (Oxoid) a 30ºC. Para los experimentos de optimización preliminares, fueron usados caldos MRS de distintas procedencias, incluyendo los fabricados por Oxoid, Difco, Biokar y Merck. También para este propósito, se usaron dos caldos de cultivo definidos distintos: DM1, conteniendo, por litro, glucosa (Panreac, 20 g), peptona (Difco, 10 g), extracto de carne (Oxoid, 8 g), extracto de levadura (Oxoid, 4 g), K2HPO4 (Fluka, 2 g), acetato sódico-3H2O (Fluka, 5 g), citrato triamónico (Merck, 2 g), MgSO4 ·7H2O (Merck, 0.2 g), MnSCO4 ·4H2O (Merck, 0.05 g), y Tween 80 (Sigma, 1 ml); y DM2, conteniendo, por litro, glucosa (Panreac, 22 g), extracto de levadura (Oxoid, 10 g), (NH4)2HPO4 (Fluka,
2.5 g), MgSO4 ·7H2O (Merck, 0.05 g), MnSO4 ·H2O (Merck, 0.005 g), y Tween 80 (Sigma, 0.2 ml). En todos los casos, el pH se ajustó a 6,5 con HCl (10N) y los caldos de cultivo se esterilizaron a 121ºC, 1 atm, durante 15 min.
Cultivos de L. plantarum para la producción de carotenoides
Para la producción de carotenoides en condiciones estándar, alícuotas de 500 mi de caldo DM1 se inocularon con una colonia aislada de la cepa de L. plantarum a testar. Los cultivos se incubaron a 30ºC, sin aireación, durante 24, 48, 72 ó 96 h. Las células se recolectaron mediante centrifugación a 12.000 x g, a 4ºC durante 15 min, se lavaron con agua destilada estéril y se centrifugaron de nuevo para obtener un pellet que fue posteriormente liofilizado. Estas muestras se conservaron a -20ºC hasta la extracción de los carotenoides y el análisis cromatográfico de los mismos. Los datos obtenidos fueron expresados en términos de peso seco.
Extracción de carotenoides y su análisis mediante cromatografía líquida de alta resolución (HPLC)
El precipitado resultante de centrifugar el cultivo bacteriano (1 gramo) se introdujo en un tubo de ensayo de 15 ml, con tapón de rosca, y se extrajo con 10 ml de N,N-dimetilformamida durante 15 min a 65ºC. Las células se separaron y retiraron mediante centrifugación a 5.000 rpm, y la fase superior, conteniendo los pigmentos carotenoides, se transfirió a un embudo de decantación. La operación se repitió hasta la extracción completa del color (normalmente 4 extracciones fueron suficiente). Todos los extractos se reunieron y se mezclaron con 100 ml de éter dietílico, añadiendo seguidamente unos 50 a 100 ml de solución de NaCl al 10% (p/v) para ayudar a la separación de las fases.
Seguidamente la fase orgánica se secó haciéndola pasar por un lecho de Na2SO4 anhidro y se evaporó con la ayuda de un evaporador rotatorio a vacío. La muestra se disolvió en 1 ml de acetona, se centrifugó a 12.000 rpm, y se almacenó a -30ºC hasta su análisis.
El seguimiento y cuantificación de los pigmentos carotenoides bacterianos se llevó a cabo mediante cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) en fase reversa, usando un método cromatográfico previamente desarrollado en nuestro laboratorio (Mínguez-Mosquera y Hornero-Méndez, (1993). Journal of Agriculture and Food Chemistry, 41: 1616-1620). En este método se emplea una columna de fase reversa C18 (Waters Spherisorb ODS2 column; 250x4.6 mm I.D., tamaño de partícula 5 μm) (Waters Ltd., Hertsfordshire, United Kingdom) y un gradiente de elución binario acetona-agua a un flujo de 1.5 ml/min. El volumen de inyección fue de 5 μl y la detección de los pigmentos se realiza espectrofotométricamente a 440 nm. La cuantificación se realizó mediante una recta de calibrado preparada con β-caroteno (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO). El sistema de análisis mediante HPLC consistió en una bomba cuaternaria Waters 600E equipada con un detector de fotodiodos (PDA 996, Waters), controlados con el software Empower2 (Waters Corporation, Milford, Massachusetts, USA).
Aislamiento e identificación de pigmentos
Se utilizaron procedimientos rutinarios para el aislamiento e identificación de pigmentos carotenoides, descritos en detalle en publicaciones previas de nuestro grupo de investigación (Mínguez-Mosquera y Hornero-Méndez, (1993). Journal of Agriculture and Food Chemistry, 41: 1616-1620), y que brevemente consisten en: separación y aislamiento de los pigmentos mediante cromatografía en capa fina (TLC) sobre placas de silicagel 60GF, y co-cromatografía con patrones de pigmentos; adquisición de los espectros UV-visible en diferentes disolventes y comparación con los valores descritos en la literatura (Britton, (1995). UV/Visible Spectroscopy. En: Britton G, Liaaen-Jensen S, Pfander H, editores. Carotenoids. Volume 1B: Spectroscopy. Basel, Switzerland: Birkhäuser), así como la realización de pruebas químicas para determinar la presencia de grupos 5,6-epoxido (adición de 2% HCl en etanol), de grupos hidroxilo mediante acetilación con Ac2O/Py, y de grupos carbonilos mediante la reducción con NaBH4 en etanol.
Análisis genético
La presencia del operón crtN-crtM en las diferentes cepas de L. plantarum fue detectada mediante PCR, usando cebadores oligonucleotídicos diseñados a partir de las secuencias de nucleótidos publicadas para estos genes en
L. plantarum WCFS1 (Nº de acceso GeneBank AL935261; Kleerebezem et al., 2003. Proceedinqs of the National Academy of Sciences, 100: 1990-1995). El par de cebadores SEQ ID NO: 1 y SEQ ID NO: 2 se utilizó para la amplificación de un fragmento (2.379 pares de bases [pb]) de ADN que incluía secuencias codificantes para ambos genes. Alternativamente, en aquellos casos en los que el primer par de cebadores no funcionó, se utilizó el par de cebadores SEQ ID NO: 3 y SEQ ID NO: 2 para amplificar un fragmento de ADN de 2.396 pb que incluía parte del promotor del operón crtN-crtM. Se introdujeron sitios de restricción para EcoRI en el extremo 5’ terminal de los cebadores SEQ ID NO: 1-SEQ ID NO: 2, y un sitio de restricción para KpnI en el extremo 5’ del cebador SEQ ID NO: 3 a fin de facilitar futuras estrategias de clonación (letras en negrilla en la secuencia anteriormente descrita).
Además, se introdujeron secuencias de anclaje (“clamps”) en el extremo 5’ para asegurar una digestión correcta por las enzimas de restricción (letras en itálica en la secuencia del cebador anteriormente descrita). El ADN total de colonias de L. plantarum fue extraído según el protocolo descrito por Ruiz-Barba et al. (Ruiz-Barba et al., 2005. Analytical Biochemistry 347, 333-335). La amplificación de los fragmentos de ADN fue realizada en mezclas de reacción de 100 μl, conteniendo 2.5 mM MgCl, 1x buffer de reacción, 100 μM de cada deoxynucleoside triphosphates, 100 pmol de cada cebador, 5 U de Taq ADN polimerasa (Promega), y 5 μl de ADN total de colonias como sustrato. Para la amplificación se utilizó un sistema termociclador GeneAmp PCR system 2400 (Perkin-Elmer) usando las siguientes condiciones: desnaturalización a 94ºC durante 2 min, seguido de 30 ciclos de desnaturalización a 94ºC durante 15 seg, anillamiento a 60ºC durante 30 seg, y polimerización a 72ºC durante 2 min, más una etapa final de polimerización a 72ºC durante 4 min. Alternativamente, cuando no se obtuvo amplificación en las condiciones anteriores, se utilizó 58ºC como temperatura de anillamiento. Los fragmentos de ADN amplificados mediante PCR fueron finalmente analizados mediante electroforesis en gel de agarosa. Búsquedas de homología de secuencias de ADN y proteínas fueron realizadas usando el programa WU-Blast2 desarrollado por EMBL-EBI (www.ebi.ac.uk).
Claims (21)
- REIVINDICACIONES
- 1.
- Cepa bacteriana CECT 7531 de Lactobacillus plantarum.
-
- 2.
- Población celular que comprende células de la cepa según la reivindicación 1.
-
- 3.
- Uso de la cepa o de la población celular según cualquiera de las reivindicaciones1ó2 para la producción de carotenoides.
-
- 4.
- Uso de la cepa o de la población celular según la reivindicación 3 donde el carotenoide es un triterpenoide.
-
- 5.
- Uso de la cepa o de la población celular según la reivindicación 4 donde el triterpenoide es un diapocaroteno.
-
- 6.
- Uso de la cepa o de la población celular según la reivindicación 5 donde el diapocaroteno es 4,4’-diaponeusporeno.
-
- 7.
- Uso de la cepa o de la población celular según cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2 para la fabricación de un alimento probiótico.
-
- 8.
- Uso de la cepa o de la población según cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2 para la fabricación de un complemento nutricional.
-
- 9.
- Uso de la cepa o de la población según la reivindicación 8, donde el complemento nutricional es un complemento vitamínico y/o mineral.
-
- 10.
- Uso de la cepa o de la población celular según cualquiera de las reivindicaciones 7 a 9, donde el alimento probiótico o el complemento nutricional se presenta en una forma adaptada a la administración oral.
- 11. Método para la producción de carotenoides que comprende:
- a.
- Inocular la cepa o la población celular según cualquiera de las reivindicaciones1ó2en un medio de cultivo,
- b.
- cultivar dicha cepa o población celular en el medio de cultivo del apartado (a) durante un periodo de entre 15 y 35 horas, y
- c.
- extraer los carotenoides de las células obtenidas en el paso (b).
-
- 12.
- Método según la reivindicación 11, donde el medio de cultivo comprende al menos una fuente de carbono, una fuente de nitrógeno, una solución tampón y componentes traza esenciales.
-
- 13.
- Método según cualquiera de las reivindicaciones 11 ó 12, donde la fuente de nitrógeno es citrato amónico, la solución tampón es acetato sódico y/o fosfato monoácido de potasio y los componentes traza esenciales son magnesio y/o manganeso.
-
- 14.
- Método según cualquiera de las reivindicaciones 11 a 13, donde el periodo de cultivo de la cepa o población celular según el apartado (b) es de entre 20 y 30 horas.
-
- 15.
- Método según cualquiera de las reivindicaciones 11 a 14, donde el pH del medio de cultivo durante el periodo de cultivo del apartado (b) se mantiene entre6y7.
-
- 16.
- Composición probiótica que comprende la cepa o el cultivo celular según cualquiera de las reivindicaciones 1 ó2.
-
- 17.
- Composición probiótica según la reivindicación 16, que además comprende un vehículo.
-
- 18.
- Composición probiótica según la reivindicación 17 donde el vehículo es un alimento lácteo.
-
- 19.
- Composición probiótica según la reivindicación 17 donde el vehículo es un alimento vegetal.
10 11 12LISTA DE SECUENCIAS- <110> Consejo Superior de Investigaciones Científicas (CSIC)
- <120> Nueva cepa de Lactobacillus plantarum para la producción de carotenoides.
- <130> 1641.416
- <160> 3
- <170> PatentIn version 3.5
- <210> 1 <211> 34 <212> DNA <213> Lactobacillus plantarum
- <400> 1
- cgcggaaattc atgaagcaag tatcgattat tggc
- 34
- <210> 2 <211> 34 <212> DNA <213> Lactobacillus plantarum
- <400> 2
- gatcgaattc ttaagcctcc ttaagggcta gttc
- 34
- <210> 3 <211> 34 <212> DNA <213> Lactobacillus plantarum
- <400> 3 ctagggtacc aagggggag tttactgatg aagct
- 34
OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS N.º solicitud: 200930276 ESPAÑAFecha de presentación de la solicitud: 08.06.2009- INFORME SOBRE EL ESTADO DE LA TECNICA
- Fecha de prioridad: 00-00-0000 00-00-0000 00-00-0000
- 51 Int. Cl. :
- Ver hoja Adicional
DOCUMENTOS RELEVANTES- Categoría
- 56 Documentos citados Reivindicaciones afectadas
- A
- BREITHAUP D.E. et al., "Characterization of the triterpenoid 4,4'-diaponeurosporene and its isomers in food-associated bacteria". European Food Research and Technology (2001), 213(3), pág. 231-233, todo el documento. 1-19
- A
- KROECKEL L. "Bacterial carotenoid stains cooked sausage (Weisswurst) yellow" Mitteilungsblatt der Fleischforschung Kulmbach, (2007), 46(178) pág. 223-230. 1-19
- A
- SACHINDRA N. M. et al., "Recovery of carotenoids fron ensilaged shrimp waste" Bioresource Tecnology (2007), 98, pág. 1642-1646, todo el documento. 1-19
- A
- WO 0070972 A1 (PROBI AB ) 30.11.2000 1-19
- A
- US 2004268436 A1 (CHENG Q et al.) 30.12.2004 1-19
- Categoría de los documentos citados X: de particular relevancia Y: de particular relevancia combinado con otro/s de la misma categoría A: refleja el estado de la técnica O: referido a divulgación no escrita P: publicado entre la fecha de prioridad y la de presentación de la solicitud E: documento anterior, pero publicado después de la fecha de presentación de la solicitud
- El presente informe ha sido realizado • para todas las reivindicaciones • para las reivindicaciones nº:
- Fecha de realización del informe 19.10.2010
- Examinador M. Hernández Cuéllar Página 1/4
Nº de solicitud: 200930276INFORME SOBRE EL ESTADO DE LA TÉCNICACLASIFICACIÓN OBJETO DE LA SOLICITUDC12N 1/20 (2006.01) C12P 23/00 (2006.01) A23L 1/30 (2006.01) C12R 1/25 (2006.01)Documentación mínima buscada (sistema de clasificación seguido de los símbolos de clasificación)C12N, C12P, A23L, C12RBases de datos electrónicas consultadas durante la búsqueda (nombre de la base de datos y, si es posible, términos de búsqueda utilizados)INVENES, EPODOCOPINIÓN ESCRITANº de solicitud: 200930276Fecha de Realización de la Opinión Escrita: 19.10.2010- Declaración
- Novedad (Art. 6.1 LP 11/1986)
- Reivindicaciones 1-19 Reivindicaciones _____________________________________ SÍ NO
- Actividad inventiva
- Reivindicaciones 1-19 SÍ
- (Art. 8.1 LP11/1986)
- Reivindicaciones _____________________________________ NO
Se considera que la solicitud cumple con el requisito de aplicación industrial. Este requisito fue evaluado durante la fase de examen formal y técnico de la solicitud (Artículo 31.2 Ley 11/1986).Base de la Opinión.-La presente opinión se ha realizado sobre la base de la solicitud de patente tal y como ha sido publicada.OPINIÓN ESCRITANº de solicitud: 2009302761. Documentos considerados.-A continuación se relacionan los documentos pertenecientes al estado de la técnica tomados en consideración para la realización de esta opinión.- Documento
- Número Publicación o Identificación Fecha Publicación
- D01
- BREITHAUP D.E. ET AL., "Characterization of the triterpenoid 4,4'-diaponeurosporene and its isomers in food-associated bacteria". European Food Research and Technology (2001), 213(3), pág. 231-233,todo el documento. --
- D02
- KROECKEL L. "Bacterial carotenoid stains cooked sausage (Weisswurst) yellow" Mitteilungsblatt der Fleischforschung Kulmbach, (2007), 46(178) pág. 223-230 --
- D03
- SACHINDRA N. M. ET AL., "Recovery of carotenoids fron ensilaged shrimp waste" Bioresource Tecnology (2007), 98, pág. 1642-1646, todo el documento. -
- 2. Declaración motivada según los artículos 29.6 y 29.7 del Reglamento de ejecución de la Ley 11/1986, de 20 de marzo, de Patentes sobre la novedad y la actividad inventiva; citas y explicaciones en apoyo de esta declaraciónLa invención de la presente Solicitud Internacional se refiere a una nueva cepa bacteriana, CECT 7531, que pertenece a la especie Lactobacillus plantarum. Esta cepa, aislada de una fermentación de aceitunas de mesa, produce altas cantidades de carotenoides, en particular el diapocaroteno 4,4'-diaponeurosporeno. La presente invención también se refiere al uso de dicha cepa para la fabricación de un alimento probiótico, de un complemento nutricional, vitamínico o mineral, así como un método para la producción de carotenoides mediante dicha cepa.El documento D01 describe la caracterización del triterpenoide 4,4'-diaponeurosporeno y sus isómeros en varias bacterias asociadas a la comida , entre ellas la cepa de Lactobacillus plantarum LTH 4936 aislada de levadura de panadería. Según los autores este documento es el primero es describir la producción de triterpenoides en Lactobacillus plantarum.El documento D02 describe la producción de 4 ,4'-diapo-7,8,11,12-tetrahydrolycopeno en Leuconostoc gelidum. Este compuesto es un intermediario de 4,4'-diaponeurosporeno que según el autor es el principal carotenoide producido por Lactobacillus plantarumEl documento D03 describe un proceso fermentativo de recuperación de carotenoides, en particular astaxantina, a partir de desechos de gamba, que utiliza como cultivo de partida la cepa de Lactobacillus plantarum B 4496.1.-NOVEDADNo se ha recuperado ningún documento en el estado de la técnica que describa o divulgue la cepa de Lactobacillus plantarum CECT 7531. Aun considerando la posibilidad de la existencia de una cepa igual en la naturaleza, a la vista del estado de la técnica relativo a la invención de la presente solicitud , esta Oficina no puede afirmar que esta cepa no sea nueva. En consecuencia, en opinión de esta Oficina las reivindicaciones 1-19 son nuevas.
- 2.-ACTIVIDAD INVENTIVALa invención de la presente solicitud plantea como problema técnico la producción de carotenoides, en particular el compuesto 4,4'-diaponeurosporeno. La solución propuesta en la solicitud es la provisión de una nueva cepa bacteriana: Lactobacillus plantarum CECT 7531 que en comparación con otras cepas de Lactobacillus plantarum analizadas en la descripción, produce grandes cantidades del compuesto 4,4'-diaponeurosporeno.El estado de la técnica relacionado con la invención de la presente solicitud, queda establecido por los documentos D01-D03 según los cuales es conocida la producción de carotenoides utilizando Lactobacillus plantarum. Especialmente cercano a la invención se considera el documento D01 el cual describe la producción de 4,4'-diaponeurosporeno y sus isómeros a partir de la cepa Lactobacillus plantarum LTH 4936 aislada de levadura de panadería. No obstante, ninguno de los tres documentos aporta datos de producción de carotenoides que se pudieran comparar con los datos aportados por el solicitante. Sin descartar la existencia en la naturaleza de cepas de Lactobacillus plantarum superproductoras de carotenoides, esta Oficina, a la vista del estado de la técnica expuesto, no puede negar la actividad inventiva de la solución propuesta en la invención, y en consecuencia considera que las reivindicaciones 1-19 tienen actividad inventiva.Informe sobre el Estado de la Técnica (Opinión escrita) Página 4/4
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ES200930276A ES2351134B1 (es) | 2009-06-08 | 2009-06-08 | Nueva cepa de lactobacilus plantarum para la producción de carotenoides. |
| PCT/ES2010/070375 WO2010142828A1 (es) | 2009-06-08 | 2010-06-07 | Nueva cepa de lactobacillus plantarum para la producción de carotenoides |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ES200930276A ES2351134B1 (es) | 2009-06-08 | 2009-06-08 | Nueva cepa de lactobacilus plantarum para la producción de carotenoides. |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2351134A1 ES2351134A1 (es) | 2011-02-01 |
| ES2351134B1 true ES2351134B1 (es) | 2012-01-23 |
Family
ID=43308457
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES200930276A Expired - Fee Related ES2351134B1 (es) | 2009-06-08 | 2009-06-08 | Nueva cepa de lactobacilus plantarum para la producción de carotenoides. |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| ES (1) | ES2351134B1 (es) |
| WO (1) | WO2010142828A1 (es) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR102203500B1 (ko) * | 2019-07-03 | 2021-01-14 | 인천대학교 산학협력단 | 카로티노이드를 생산하는 락토바실러스 펜토서스 균주 및 이를 포함하는 항산화용 조성물 |
| WO2021250535A1 (en) * | 2020-06-08 | 2021-12-16 | University Of Pretoria | Vitamin-a biosynthesizing bovine probiotic bacteria |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SE523771C2 (sv) * | 1999-05-21 | 2004-05-18 | Probi Ab | Sportdryck innehållande mikronäringsämnen i kombination med levande laktobaciller |
| US7098000B2 (en) * | 2003-06-04 | 2006-08-29 | E. I. Du Pont De Nemoure And Company | Method for production of C30-aldehyde carotenoids |
-
2009
- 2009-06-08 ES ES200930276A patent/ES2351134B1/es not_active Expired - Fee Related
-
2010
- 2010-06-07 WO PCT/ES2010/070375 patent/WO2010142828A1/es active Application Filing
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ES2351134A1 (es) | 2011-02-01 |
| WO2010142828A1 (es) | 2010-12-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Garrido-Fernández et al. | Carotenoid production in Lactobacillus plantarum | |
| Schneider et al. | Anaerobic transformation of quercetin-3-glucoside by bacteria from the human intestinal tract | |
| CN106318878B (zh) | 一种高产虾青素红酵母工程菌及其构建方法 | |
| US20200222474A1 (en) | Compositions and methods for increasing phytochemical bioavailablity and bioactivity | |
| CN105087604B (zh) | 一种sll0147基因在合成集胞藻类胡萝卜素中的应用 | |
| Steiger et al. | Annotation and functional assignment of the genes for the C30 carotenoid pathways from the genomes of two bacteria: Bacillus indicus and Bacillus firmus | |
| Ide et al. | Enhanced production of astaxanthin in Paracoccus sp. strain N-81106 by using random mutagenesis and genetic engineering | |
| US11046980B2 (en) | Method for producing rare fatty acid using novel enzyme, and novel rare fatty acid | |
| KR100836093B1 (ko) | 신규한 데이노코커스 종 ａ2 및 이를 이용하여아스타잔틴을 생산하는 방법 | |
| JP2006204296A (ja) | ダイゼイン資化によるエコール生成能を改善するための腸内細菌およびその利用 | |
| Hamzehlou et al. | Production of vitamins B3, B6 and B9 by Lactobacillus isolated from traditional yogurt samples from 3 cities in Iran, winter 2016 | |
| Wang et al. | Effect of two-week red beetroot juice consumption on modulation of gut microbiota in healthy human volunteers–a pilot study | |
| CN105602880B (zh) | 一株谷氨酸棒杆菌及其过量合成磷脂酰丝氨酸的方法 | |
| ES2351134B1 (es) | Nueva cepa de lactobacilus plantarum para la producción de carotenoides. | |
| US10494637B2 (en) | Mutant having ability to overproduce carotenoids and method for producing carotenoids by using same | |
| Guo et al. | Fermentation of soymilk by Lactobacillus acidipiscis isolated from Chinese stinky tofu capable of efficiently biotransforming isoflavone glucosides to dihydrodaidzein and dihydrogenistein | |
| Tanioka et al. | Occurrence of pseudovitamin B12 and its possible function as the cofactor of cobalamin-dependent methionine synthase in a cyanobacterium Synechocystis sp. PCC6803 | |
| Ma et al. | Development of a menaquinone-7 enriched functional food | |
| JP6374656B2 (ja) | 乳酸菌のカロテノイド生産促進および酸化ストレス耐性向上技術 | |
| Wu et al. | Separation and purification of coenzyme Q10 from Rhodobacter sphaeroides | |
| Siziya et al. | Enhanced production of C30 carotenoid 4, 4'-diaponeurosporene by optimizing culture conditions of Lactiplantibacillus plantarum subsp. plantarum KCCP11226T | |
| Patel et al. | Rhamnose catabolism in Bacteroides thetaiotaomicron is controlled by the positive transcriptional regulator RhaR | |
| CN105087627B (zh) | 一种sll0659基因在合成集胞藻类胡萝卜素中的应用 | |
| JP7126688B2 (ja) | オレンジ色乳酸菌 | |
| EP1268752A1 (en) | Production of lutein in microorganisms |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG2A | Definitive protection |
Ref document number: 2351134 Country of ref document: ES Kind code of ref document: B1 Effective date: 20120123 |
|
| FD2A | Announcement of lapse in spain |
Effective date: 20180924 |