ES2350430A1 - Conjugado polimerico para el tratamiento de infecciones bacterianas. - Google Patents

Conjugado polimerico para el tratamiento de infecciones bacterianas. Download PDF

Info

Publication number
ES2350430A1
ES2350430A1 ES200930218A ES200930218A ES2350430A1 ES 2350430 A1 ES2350430 A1 ES 2350430A1 ES 200930218 A ES200930218 A ES 200930218A ES 200930218 A ES200930218 A ES 200930218A ES 2350430 A1 ES2350430 A1 ES 2350430A1
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
ptd7
conjugate according
peg
polymeric amphiphilic
baselineskip
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
ES200930218A
Other languages
English (en)
Other versions
ES2350430B1 (es
Inventor
Laura Cascales Bolaño
Angel Ramon Messeguer Peupoch
Enrique Perez Paya
Maria Jesus Vicent Docon
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Consejo Superior de Investigaciones Cientificas CSIC
Fundacion de la Comunidad Valenciana Centro de Investigacion Principe Felipe
Original Assignee
Consejo Superior de Investigaciones Cientificas CSIC
Fundacion de la Comunidad Valenciana Centro de Investigacion Principe Felipe
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Consejo Superior de Investigaciones Cientificas CSIC, Fundacion de la Comunidad Valenciana Centro de Investigacion Principe Felipe filed Critical Consejo Superior de Investigaciones Cientificas CSIC
Priority to ES200930218A priority Critical patent/ES2350430B1/es
Priority to PCT/ES2010/000211 priority patent/WO2010136617A1/es
Publication of ES2350430A1 publication Critical patent/ES2350430A1/es
Application granted granted Critical
Publication of ES2350430B1 publication Critical patent/ES2350430B1/es
Withdrawn - After Issue legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/001—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof by chemical synthesis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K11/00—Depsipeptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K17/00—Carrier-bound or immobilised peptides; Preparation thereof
    • C07K17/02—Peptides being immobilised on, or in, an organic carrier
    • C07K17/08—Peptides being immobilised on, or in, an organic carrier the carrier being a synthetic polymer
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/0806—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 0 or 1 carbon atoms, i.e. Gly, Ala
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

La presente invención se refiere a un conjugado polimérico amfifílico que comprende la fórmula general I, a la síntesis del mismo y al uso como medicamento para el tratamiento de infecciones bacterianas.

Description

Conjugado polimérico para el tratamiento de infecciones bacterianas.
Campo de la invención
La presente invención se encuadra en general dentro del campo de la química médica y en particular se encuadra dentro del campo de los polímeros terapéuticos.
Antecedentes de la invención
Las endotoxinas o lipopolisacáridos (LPS) son constituyentes de la membrana externa de bacterias Gram negativas. Cuando se liberan como resultado de la división celular o el tratamiento con antibióticos, los LPS son reconocidos como patrones moleculares asociados a patógenos (PAMP) por receptores tipo toll (TLR; siendo el TLR4 específico para LPS) (Poltorak, A. et al. Science 282, 2085-2088 (1998). Poltorak, A., Ricciardi-Castagnoli, P., Citterio, S. & Beutler, B. Proc Natl Acad Sci U S A 97, 2163-2167. (2000)). Estos receptores retransmiten la señal de los LPS a los núcleos de células inmunes innatas, dando como resultado su activación y la secreción subsiguiente de citoquinas proinflamatorias. La presencia continua de LPS en la corriente sanguínea de los mamíferos induce la desregulación de citoquinas, dando lugar al choque séptico (Heine, H., Rietschel, E.T. & Ulmer, A.J. Mol Biotechnol 19, 279-296. (2001)), la causa principal de mortalidad en pacientes sépticos.
La sepsis es la décima causa principal de muerte en general, así como la causa más importante de muerte en las unidades de cuidados intensivos (Minino, A.M., Heron, M.P., Murphy, S.L. & Kochanek, K.D. Natl Vital Stat Rep 55, 1-119 (2007)). A pesar de la incidencia de la sepsis, solo se ha aprobado como tratamiento un agente, la drotrecogina alfa (Xigris®), (Vincent, J.L. Expert Opin Biol Ther. 7, 1763-1777. (2007)).
Recientemente, las investigaciones en este campo se han centrado en terapias extracorpóreas contra endotoxinas dirigidas a reducir los niveles en circulación de LPS (Burns, M.R. et al. J Med Chem 50, 877-888 (2007); Cruz, D.N. et al. Crit Care 11, R47 (2007); Nguyen, T.B. et al. Bioorg Med Chem 15, 5694-5709 (2007) y Sil, D. et al. Antimicrob Agents Chemother 51, 2811 -2819 (2007)).
La polimixina B, es un péptido que neutraliza LPS pero es demasiado tóxico para el uso sistémico, se ha desarrollado como un dispositivo médico de purificación de sangre basado en diálisis en el que se inmoviliza en fibras de poliestireno (PMX-F); este dispositivo ha sido utilizado desde 1994 por el programa de seguro sanitario nacional japonés (Shoji, H. Ther Apher Dial 7, 108-114 (2003)).
En investigaciones previas, los autores identificaron una molécula pequeña neutralizante de LPS, el peptoide 7 (PTD7) (Mora, P. et al. J Med Chem 48, 1265-1268. (2005)) (Fig. 1). Sin embargo, el PTD7 tiene una escasa solubilidad en agua y una toxicidad no específica, de tal forma que su uso como terapia queda limitado.
Existe pues una necesidad apremiante de desarrollar medicamentos efectivos contra las endotoxinas útiles en el tratamiento y prevención de las infecciones bacterianas y contra la sépsis.
Descripción de la invención
La presente invención se refiere a un conjugado polimérico amfifílico que neutraliza y promueve la eliminación sistémica de endotoxinas, siendo útil en el tratamiento de infecciones bacterianas y evitando la sépsis.
Así pues, en un primer aspecto, la presente invención se refiere a conjugado polimérico amfifílico que comprende la fórmula general I:
PTD7-(L1)n-(L2)m-(PEG)-(L2)m-(L1)n-PTD7
donde:
L1 es una secuencia peptídica de entre uno a cinco aminoácidos cuyos aminoácidos son iguales o diferentes y son seleccionados de entre el grupo formado por Gly, Val, Leu, Ile, Phe, Arg, Lys, Asp, Glu, preferentemente es Gly
n = 1-5
L2 es ácido láctico
m = 0-1
\newpage
PTD7 comprende la siguiente fórmula general II
1
En un aspecto más en particular, el conjugado polimérico de la presente invención comprende la fórmula general III, donde L1 es Gly, n = 2, L2 es ácido láctico, m = 0.
2
En otro aspecto en particular, el conjugado polimérico amfifílico de la presente invención comprende la fórmula general IV, donde L1 es Gly, n = 2, L2 es ácido láctico y m =1.
3
En otro aspecto particular la presente invención se refiere al conjugado polimérico amfifílico de la presente invención para su uso como medicamento. En un aspecto más en particular el medicamento comprende el conjugado polimérico descrito en la fórmula general I, en un aspecto más en particular, el medicamento comprende el conjugado polimérico descrito en la fórmula general III. En otro aspecto en particular, el medicamento comprende el conjugado polimérico descrito en la fórmula general IV.
En otro aspecto en particular, la presente invención se refiere al conjugado polimérico amfifílico de la presente invención para uso en diálisis intracorpórea. En un aspecto más en particular el conjugado polimérico amfifílico de la presente invención comprende la fórmula general I. En otro aspecto más en particular el conjugado polimérico amfifílico de la presente invención comprende la fórmula general III. En otro aspecto más en particular, el conjugado polimérico amfifílico de la presente invención comprende la fórmula general IV.
En la presente invención se entiende por diálisis intracorpórea la eliminación del torrente sanguíneo de contaminantes o toxinas que puedan desencadenar cuadros de enfermedad tales como infecciones graves e incluso inducir shock séptico. Los nanoconjugados descritos actúan como "scavengers".
Esto es posible debido a la farmacocinética asociada a los conjugados polímero-fármaco como los conjugados de PEG descritos en la presenta invención. Estos nanoconjugados son administrados de forma intravenosa, distribuidos por el torrente sangíneo y eliminados de forma renal (Duncan, R. Nat. Rev. Cáncer 6, 688-701 (2006); Webster, R. et al Drug Metabol. Disp. 35, 9-16 (2007)) una vez han ejercido su actividad, en este caso la interacción con la endotoxina LPS.
En un aspecto más en particular la presente invención se refiere al conjugado polimérico amfifílico de la presente invención para el tratamiento de infecciones bacterianas, en otro aspecto más en particular la presente invención se refiere al conjugado polimérico de la presente invención para el tratamiento de las infecciones bacterianas producidas por endotoxinas de bacterias Gram negativas, en particular se refiere a las infecciones producidas por endotoxinas bacterianas de naturaleza lipídica, más en particular a infecciones producidas por LPS. En un aspecto más en particular el conjugado polimérico amfifílico de la presente invención comprende la fórmula general I. En otro aspecto más en particular el conjugado polimérico amfifílico de la presente invención comprende la fórmula general III. En otro aspecto más en particular, el conjugado polimérico amfifílico de la presente invención comprende la fórmula general IV.
En otro aspecto más en particular, la presente invención se refiere al conjugado polimérico amfifílico de la presente invención para el tratamiento de la sepsis bacteriana. En otro aspecto más en particular el conjugado polimérico amfifílico de la presente invención comprende la fórmula general I. En otro aspecto más en particular, el conjugado polimérico amfifílico de la presente invención comprende la fórmula general III. En otro aspecto más en particular, el conjugado polimérico amfifílico de la presente invención comprende la fórmula general IV.
En la presente invención se entiende por sepsis al síndrome de respuesta inflamatoria sistémica (SRIS) provocado por una infección causada por la presencia de microorganismos en sangre o por la presencia de sus toxinas.
En un segundo aspecto, la presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende el conjugado polimérico amfifílico de la presente invención. En otro aspecto más en particular el conjugado polimérico amfifílico de la presente invención comprende la fórmula general I. En otro aspecto más en particular, el conjugado polimérico amfifílico de la presente invención comprende la fórmula general III. En otro aspecto más en particular, el conjugado polimérico amfifílico de la presente invención comprende la fórmula general IV.
En un tercer aspecto, la presente invención se refiere a un procedimiento para la síntesis de un conjugado polimérico amfifílico de la presente invención, que comprende las siguientes reacciones:
a)
Incorporar mediante síntesis en fase sólida de al menos dos aminoácidos al PTD7 unido a una resina para dar lugar al compuesto PTD7-(L1)_{n}, donde los aminoácidos (L1) son iguales o diferentes y son seleccionados de entre el grupo formado por Gly, Val, Leu, Ile, Phe, Arg, Asp, Glu.
b)
Eliminar la resina unida al compuesto obtenido en el paso anterior.
c)
Conjugación del compuesto obtenido en b) con PEG funcionalizado con -COOH.
En otro aspecto en particular, en el procedimiento de la presente invención entre la etapa a) y la etapa b) hay otra etapa que comprende la incorporación de un ácido láctico al compuesto PTD7-2G para dar lugar al compuesto PTD7-2GLact.
Descripción de las figuras
La figura 1 muestra la estructura química y características de los nanoconjugados sintetizados a partir de Peptoide 7 (PTD7). a: PTD7, b: PEG-2G-PTD7, c: PEG-Lact2G-PTD7, d: PGA-4G-PTD7 y e: PGA-Lact4G-PTD7.
La figura 2 muestra la síntesis de los conjugados PEG-PTD7. a: petoidil-resina, b: PTD7-2GLact, c: PTD7-2G, d: PEG-COOH, e: conjugados PEG-PTD7.
La figura 3 muestra el perfil de liberación de PTD7 a partir de conjugados PEG-PTD7 tras la incubación con catepsina B y en condiciones hidrolíticas.
La figura 4 muestra la liberación del PTD7 del conjugado en plasma después de 1 y 24 h de incubación a 37ºC.
La figura 5 muestra el análisis de dispersión dinámica de luz (DLS) de los nanoconjugados a: PEG-2G-PTD7 y b: PEG-Lact2G-PTD7 en presencia o ausencia de LPS.
La figura 6 muestra los ensayos de viabilidad celular con MTT.
La figura 7 muestra la inhibición de TNF-\alpha inducida por LPS.
La figura 8 muestra los efectos de los nanoconjugados PEG-2G-PTD7 y PEG-Lact2G-PTD7 en la supervivencia y en los niveles de citoquinas inducidas por LPS en un modelo murino de sepsis.
Descripción detallada de la invención
La presente invención se refiere a un nanoconjugado polimérico amfifílico que supera las desventajas de toxicidad e insolubilidad del PTD7 de tal forma que se proporciona un medicamento útil en el tratamiento y prevención de las infecciones bacterianas y contra la sépsis.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 1 Síntesis de nanoconjugados
El conector polímero-fármaco fue clave para controlar la cinética de liberación del fármaco de los nanoconjugados. Las moléculas de carga pueden conjugarse a través de conectores de amida hidrolíticamente estables o a través de conectores de éster hidrolíticamente lábiles. Los autores sintetizaron cuatro conjugados de polímero-PTD7 (Fig. 1), dos basados en poli-(ácido L-glutámico) (PGA) (resultados no mostrados): PGA-4G-PTD7 (PTD7 unido a través de enlaces de amida al polímero) y PGA-Lact4G-PTD7 (PTD7 unido a través de un enlace éster), que enmascaran la actividad de PTD7 hasta la liberación intracelular lisosomotrópica; y dos basados en Polietilenglicol (PEG): PEG-2G-PTD7 y PEG-Lact2G-PTD7, que permiten la actividad de PTD7 prolongada en la corriente sanguínea.
En primer lugar se realizó la síntesis de derivados de PTD7, (Fig. 2) para ello se usó la síntesis de péptidos en fase sólida con Fmoc se incorporaron dos y cuatro residuos de glicina (G) en la peptoidil 7-resina preensamblada (una resina de poliestireno funcionalizada con peptoide 7 (PTD7) (f = 0,71 mmol/g). Para Lact-derivados, se introdujo ácido L-láctico en la última etapa usando las mismas condiciones. El derivado de PTD7 se segmentó de la resina mediante tratamiento con ácido trifluoroacético (TFA, 95%) y se purificó mediante una RP-HPLC preparativa (Lichrospher® 100 C18, 250 x 10 mm) usando un gradiente de acetonitrilo en TFA acuoso al 0,1% (de 30 a 90% de acetonitrilo en 25 min). La identidad y la pureza (90-95%) se confirmaron mediante HPLC y espectrometría de masas de desorción/ionización lasérica asistida por matriz-tiempo de vuelo que dieron los siguientes resultados:
PTD7-2G: ^{1}H NMR: (CDCl_{3}, 300 MHz) \delta 7.80 (1H, -NH-), 7.09-7.27 (m, 20H, Ar), 6.87 (d, J=9 Hz, 2H), 6.70 (d, J=9 Hz, 2H), 4.19-3.93 (m, 6H, COCH_{2}N), 3.99 (m, 1H, CHPh_{2}(N_{t})), 3.93 (m, 1H, CHPh_{2}(C_{t})), 3.82-3.66 (m, 4H, COCH_{2}N (2G)), 3.59 (s, 3H, OCH_{3}), 3.48 (m, 2H, NCH_{2}CH_{2}), 3.42-3.33 (m, 2H, NCH_{2}CH_{2}CH), 2.82 (m, 2H, NCH_{2}CH_{2}CH), 2.56 (m, 2H, NCH_{2}CH_{2}), 2.33 (m, 2H, CH_{2}CHPh_{2} (N_{t})), 1.94 (m, 2H, CH_{2}CHPh_{2} (C_{t})). ^{13}C NMR: (CDCl_{3}, 300 MHz) \delta 169.1, 158.7, 143.4, 143.3, 130.1, 129.7, 128.9, 128.5, 127.6, 127.5, 126.9, 126.8, 126.4, 114.3, 55.12, 51.2, 51.2, 48.2, 47.4, 42.4, 34.2, 33.5. MALDI-TOF MS: m/z 825,4 [M].
PTD7-2GLact: ^{1}H NMR: (CDCl_{3}, 300 MHz) \delta 7.80 (2H, -NH-), 7.09-7.27 (m, 20H, Ar), 6.87 (d, J=9 Hz, 2H), 6.70 (d, J=9 Hz, 2H), 4.19-3.93 (m, 6H, COCH_{2}N), 3.99 (m, 1H, CHPh_{2}(N_{t})), 3.93 (m, 1H, CHPh_{2}(C_{t})), 3.88 (m, 1H, CH_{3}-CH-OH), 3.82-3.66 (m, 4H, COCH_{2}N (2G)), 3.59 (s, 3H, OCH_{3}), 3.48 (m, 2H, NCH_{2}CH_{2}), 3.42-3.33 (m, 2H, NCH_{2}CH_{2}CH), 2.82 (m, 2H, NCH_{2}CH_{2}CH), 2.56 (m, 2H, NCH_{2}CH_{2}), 2.33 (m, 2H, CH_{2}CHPh_{2} (N_{t})), 1.94 (m, 2H, CH_{2}CHPh_{2} (C_{t})), 1.30 (dd, 3H, CHCH_{3}). ^{13}C NMR: (CDCl_{3}, 300 MHz) \delta 171.4, 169.1, 158.7, 143.4, 143.3, 130.1, 129.7, 128.9, 128.5, 127.6, 127.5, 126.9, 126.8, 126.4, 114.3, 68.2, 55.2, 51.2, 51.2, 48.2, 47.4, 42.4, 34.2, 33.5, 20.2. MALDI-TOF MS: 919,4 [M + Na]^{+}.
A continuación se realizó la funcionalización con Polietilenglicol (PEG), para ello se preparó un compuesto de PEG bifuncional (Mw 4000 Da) que contenía grupos extremos carboxilo (PEG-COOH). En primer lugar, PEG-OH (320 mg, 0,08 mmol) se destiló en tolueno, a continuación, se añadió una solución 1 M de terc-butóxido potásico en alcohol terc-butílico y la mezcla de reacción se dejó reposar durante 1 h a 50ºC y durante la noche a 37ºC. La mezcla de reacción en bruto se filtró y se trató con TFA al 45,4%/ CH_{2}Cl_{2} al 54,5%/H_{2}O al 0,1% durante 3 h a temperatura ambiente. El compuesto carboxilado esperado se precipitó en terc-butil-metil-éter frío y se filtró. ^{1}H NMR (\delta, CDCl_{3}): 10,9 ppm (s, COOH) y FT-IR (u, cm^{-1}): 1710 (s, COOH) confirmaban la presencia de la funcionalidad -COOH.
Posteriormente se realizó la síntesis del conjugado de PEG-2G-PTD7, para ello a una solución de PEG-COOH (65 mg, Mw 4000 Da) en DMF anhidra (4 ml) se añadió DIC (10 \mul, 0,064 mmol) y, después de 5 min, HOBt (8,8 mg, 0,064 mmol) y la mezcla se agitó durante 15 min. A continuación, se añadió el 2G-PTD7 (26,8 mg, 0,032 mmol, relación molar PEG/peptoide = 2) y el pH se ajustó hasta 8 con DIEA. Se dejó que la reacción avanzara durante 24 h a temperatura ambiente. La verificación mediante cromatografía en capa fina (TLC, gel de sílice) mostraba la conversión completa de PTD7-2G (Rf = 0,4) en conjugado de polímero (Rf = 0, CH_{2}Cl_{2}/MeOH = 90:10). Para detener la reacción, la DMF se retiró bajo vacío; el residuo se almacenó a -20ºC hasta la purificación, se redisolvió en agua, se centrifugó para retirar la urea y el sobrenadante se purificó a través de una columna G10. Las fracciones recogidas se liofilizaron a continuación para dar un polvo blanco (70%). El producto purificado se caracterizó mediante ^{1}H NMR, cuyos resultados fueron los siguientes.
^{1}H NMR: (CDCl_{3}, 300 MHz) \delta 7.92 (br, -NH-), 7.49 (br, -NH), 7.15-6.81 (m, Ar), 6.72 (m, Ar), 6.63 (m, Ar), 4.80 (m, 2H, COCH_{2}N), 4.60-4.03 (2H, COCH_{2}N), 3.95-3.41 (m, PEG + COCH_{2}N+ CHPh_{2} + COCH_{2}N (2G) + OCH_{3} + NCH_{2}CH_{2}+ NCH_{2}CH_{2}CH), 2.99 (m, 2H, NCH_{2}CH_{2}CH), 2.53 (m, PEG, -CH_{2}CO- + NCH_{2}CH_{2} + CH_{2}CHPh_{2} (N_{t})), 1.94 (ca, 2H, CH_{2}CHPh_{2} (C_{t})). ^{13}C NMR: (CDCl_{3}, 300 MHz) \delta 169.8, 158.6, 144.6, 143.6, 143.4, 135.1, 130.1, 128.8, 128.6, 127.8, 126.9, 126.4, 114.3, 114.1, 75.5, 72.4, 72.2, 71.4, 70.0 (m), 62.0, 57.4, 55.47, 41.2, 38.2, 35.0, 33.8, 32.6, 31.2, 30.6, 29.7,28.1,26.6.
Para la síntesis del conjugado PEG-Lact2G-PTD7, a una solución de PEG-COOH (55 mg, Mw 4000 Da) en DMF anhidra (4 ml) se añadió DIC (9 \mul, 0,055 mmol) y, después de 5 min, HOBt (7,4 mg, 0,055 mmol) y la mezcla se agitó durante 15 min. A continuación, se añadió el PTD7-2GLact (24,5 mg, 0,027 mmol, relación molar PEG/peptoide = 2) y el pH se ajustó hasta 8 con DIEA. Se dejó que la reacción avanzara durante 24 h a temperatura ambiente. La verificación por cromatografía en capa fina (TLC, gel de sílice) mostraba la conversión completa de PTD7-2GLact (Rf = 0,5) en conjugado de polímero (Rf = 0, CH_{2}Cl_{2}/MeOH = 90:10). La mezcla de reacción en bruto se trató y se purificó según se describe anteriormente. Las fracciones se liofilizaron a continuación para dar un polvo blanco (60%). El producto purificado se caracterizó mediante ^{1}H NMR, cuyos resultados fueron los siguientes:
^{1}H NMR: (CDCl_{3}, 300 MHz) \delta 7.92 (br, -NH-), 7.49 (br, -NH), 7.15-6.81 (m, Ar), 6.72 (m, Ar), 6.63 (m, Ar), 5.29 (m, 2H, CH_{3}-CH-O-), 4.80 (m, 2H, COCH_{2}N), 4.60-4.03 (ca, 2H, COCH_{2}N), 3.95-3.41 (m, PEG + COCH_{2}N+ CHPh_{2} + COCH_{2}N (2G) + OCH_{3} + NCH_{2}CH_{2}+ NCH_{2}CH_{2}CH), 2.99 (m, 2H, NCH_{2}CH_{2}CH), 2.53 (m, PEG, -CH_{2}CO- + NCH_{2}CH_{2} + CH_{2}CHPh_{2} (N_{t})), 1.94 (2H, CH_{2}CHPh_{2} (C_{t})), 1.30 (m, 6H, CHCH_{3}). ^{13}C NMR: (CDCl_{3}, 300 MHz) \delta 174.4, 169.8, 158.6, 144.6, 143.6, 143.4, 135.1, 130.1, 128.8, 128.6, 127.8, 126.9, 126.4, 114.3, 114.1, 90.4, 83.8, 75.5, 72.4, 72.2, 71.4, 70.0 (m), 62.0, 57.4, 55.4, 41.2, 38.2, 35.0, 33.8, 32.6, 31.2, 30.6, 29.7, 28.1,26.6, 18.1, 15.3.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 2 Evaluación de la estabilidad y la biosensibilidad de los nanoconjugados en diferentes ambientes fisiológicos (plasma, condiciones hidrolíticas y condiciones lisosómicas) Estabilidad de los conjugados en presencia de catepsina B
Se añadió catepsina B (5 U) a una solución de 3 mg de conjugado en 1 ml de un tampón de pH 6 compuesto por acetato sódico 20 mM, EDTA 2 mM y DTT 5 mM y la mezcla se incubó a 37ºC. Se tomaron alícuotas (150 \mul) en tiempos de hasta 72 h, se congelaron inmediatamente en nitrógeno líquido y se almacenaron congeladas en la oscuridad hasta que se ensayaban mediante HPLC (análisis de alícuotas de 100 \mul después del procedimiento de extracción) y/o SEC (análisis directo de alícuotas de 50 \mul). En experimentos de control, los polímeros se incubaron en tampón solo (sin adición de catepsina B) para determinar la segmentación hidrolítica no enzimática.
\vskip1.000000\baselineskip
Estabilidad de los conjugados en condiciones hidrolíticas (diferentes valores de pH)
Los conjugados (3 mg/ml) se incubaron a 37ºC en solución tamponadora de fosfato (PBS) a pH 5,5 y 7,4 durante 72 horas. Se recogieron muestras de 100 \mul en tiempos predeterminados y se analizaron mediante RP-HPLC, usando una columna C18 LiChroSpher 100 (5 \mum), con el detector UV a 480 nm. Como eluyente A se utilizó agua y como eluyente B se utilizó acetonitrilo, conteniendo ambos TFA al 0,1%. La elución se realizó mediante el siguiente gradiente: de 25% de B a 30% de B durante 10 min, de 30% de B a 80% de B durante 5 min, de 80% de B a 90% de B durante 5 minutos y de 90% de B a 25% de B durante 5 min. El caudal fue de 1 ml/min.
Los resultados (Fig. 3) mostraron que los conjugados de PGA eran estables en tampones acuosos. Los dos nanoconjugados se degradaban en presencia de enzimas lisosómicas (catepsina B), permitiendo la liberación del fármaco de un modo dependiente del tiempo.
\vskip1.000000\baselineskip
Estabilidad de los conjugados en plasma
Los conjugados (3 mg/ml) se incubaron durante 1 y 24 horas a 37ºC en plasma de ratón obtenido después de la centrifugación de sangre a 1500 x g durante 10 minutos a 4ºC. Se extrajeron muestras de 100 \mul en tiempos predeterminados y se añadieron 300 \mul de acetonitrilo para precipitar las proteínas. Las muestras se centrifugaron a 15000 x g y el sobrenadante se secó. El residuo se redisolvió con 100 \mul de acetonitrilo y se analizó mediante RP-HPLC según se ha descrito anteriormente.
Los resultados (Fig. 4) mostraron que los nanoconjugados eran estables en plasma y que la liberación de PEG-Lact2G-PTD7 fue más rápida que la de PEG-2G-PTD7, sin embargo, existía alguna liberación de PTD7 desde PEG-Lact2G-PTD7 en plasma (40% de liberación de fármaco en 24 h).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 3 Caracterización biofísica detallada de conjugados de polímero-PTD7 Estudios de NMR
Los experimentos homonucleares incluían 2D ^{1}H, ^{1}H NOESY y TOCSY con anchuras espectrales de 8 kHz en ambas dimensiones, usando un esquema WATERGATE para suprimir la señal de agua para el H_{2}O. Los tiempos de mezcladura eran 400 y 80 ms para los experimentos de NOESY y TOCSY, respectivamente. La espectroscopia de NMR ordenada por difusión bidimensional (DOSY) (Barjat, H., Morris, G. A., Smart, S., Swanson, A. G., Williams, S. C. R. J. Magn. Reson, Ser. B 108, 170-172 (1995)), se realizó con una ecosecuencia estimulada usando impulsos de gradiente bipolares (Brand, T.; Cabrita, E. J.; Berger, S. Prog. NMR Spectrosc. 46, 159-196 (2005)) y con un esquema WATERGATE para suprimir la señal del agua. Las longitudes de los impulsos y los retrasos se mantuvieron constantes y se adquirieron 16 espectros de 24 exploraciones cada uno con la fuerza del gradiente de difusión variando entre 5% y 100%. Las longitudes del gradiente de difusión y el eco estimulado se optimizaron para cada muestra. Valores típicos eran \delta = 6-7 ms, \Delta = 160-170 ms. El procesamiento y el análisis de los datos se realizaron con el protocolo de DOSY incluido en el paquete de software Topspin.
\vskip1.000000\baselineskip
Estudios de dispersión dinámica de luz (DLS)
Las medidas de DLS se realizaron a 25ºC usando un instrumento Malvern Zetasizer NanoZS, equipado con un láser de 532 nm con un ángulo de dispersión fijo de 90º. Se prepararon por duplicado soluciones micelares acuosas de LPS (E. Coli 0111 :B4; 1,2 mg/ml de solución de reserva) y cada polímero (1 mg/ml) usando agua destilada y una solución de tampón de fosfato (PBS) 0,1 M a pH 7,4 (Na_{2}HPO_{4}, KH_{2}PO_{4}, NaCl). Las soluciones micelares se sometieron a ultrasonidos durante 10 min a 4ºC y se filtraron a través de un filtro de membrana de celulosa de 0,45 \mum antes del análisis. No se observaban diferencias significativas en las diferentes soluciones. La distribución del tamaño de las micelas por volumen se midió (diámetro, nm) para cada polímero en ausencia o presencia de una concentración creciente de solución micelar de LPS (0,02-0,1 mg/ml) (n \geq 3).
Los análisis de dispersión dinámica de luz (DLS) mostraron que las micelas de LPS en de 0,2 a 0,1 mg/ml (muy por encima de la concentración micelar crítica, CMC (Santos, N.C., Silva, A.C., Castanho, M., Martins-Silva, J. & Saldanha, C. Chembiochem 4, 96-100 (2003)) tenían un tamaño promedio de 6 nm (figura 4: Fig. 1c), mientras que los conjugados de PEG-PTD7 producían micelas de diferentes tamaños, dependiendo del conector polímero-fármaco (Fig. 5). De forma interesante, cuando PEG-2G-PTD7 y PEG-Lact2G-PTD7, que tienen diámetros micelares promedio de 12 nm y 6 nm, respectivamente, se valoraban con concentraciones crecientes de LPS micelar, el tamaño promedio de las micelas se incrementaba hasta 20 nm, Por tanto, los conjugados PEG-PTD7 producen la estabilización de complejos comicelares disminuyendo de este modo la toxicidad del LPS al evitar su interacción con receptores celulares específicos y facilitando su eliminación del torrente sanguíneo de forma renal, por tanto los nanoconjugados PEG-PTD7 sirven para la diálisis intracorpórea.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 4 Viabilidad celular Evaluación biológica de con ¡upados de PTD7 en cultivo celular
Se obtuvieron macrófagos de ratón (RAW 264.7) de ATCC (American Type Culture Collection, EE. UU. de A). Las células se hicieron crecer en Medio de Eagle Modificado de Dulbecco (DMEM, Gibco BRI) complementado con suero bovino fetal (FBS - Gibco BRI) al 10% y L-glutamina al 1%. Los cultivos se incubaron a 37ºC en una atmósfera humidificada de CO_{2} al 5%-aire al 95%. Se prepararon subcultivos de macrófagos cada 2-3 días raspando las células en medio reciente.
\vskip1.000000\baselineskip
Ensayos de viabilidad celular con MTT
La viabilidad celular se evaluó mediante el ensayo del bromuro de 3-(4,5-dimetil-2-tiazolil)-2,5-difenil-2H-tetrazolio (MTT). Células RAW 264.7 se sembraron en placas de microvaloración de 96 pocillos estériles a una densidad de siembra de 6 x 104 células/ml en DMEM complementado con FBS al 10% y se dejaron sedimentar durante 24 h. Diversas concentraciones de los compuestos se añadieron a las placas y las células se incubaron durante 24 h. Después de la retirada del medio, los cristales de formazano precipitados se disolvieron en DMSO de calidad óptica (100 \mul) y las placas se leyeron a 570 nm usando una Wallac 1420 Workstation.
Los conjugados de PGA-PTD7 eran algo menos tóxicos que el PTD7 solo en un ensayo basado en líneas celulares de macrófagos RAW 264.7^{22}: los valores de IC_{50} eran 10 \muM equiv. de fármaco para PGA-4G-PTD7 y 2 \muM equiv. de fármaco para PTD7(resultados no mostrados). En contraste, ni PEG-2G-PTD7 ni PEG-Lact2G-PTD7 mostraban (Fig6) toxicidad celular hasta 30 \muM equiv. de fármaco, más de 20 veces menos tóxicos que el fármaco libre original.
\vskip1.000000\baselineskip
Evaluación de la expresión de TNF-\alpha
Se sembraron células RAW 264.7 en placas de 96 pocillos a una densidad de 100.000 células/ml en DMEM complementado con SBF al 1% y se dejaron sedimentar durante 24 h. A continuación, se añadió LPS (E. Coli 055:B5; 0,5 ng/ml) en ausencia o presencia de PTD 7 y los conjugados a diferentes concentraciones.
Después de 24 h, los sobrenadantes se recogieron y se centrifugaron durante 10 min a 400 x g y se almacenaron a -20ºC hasta la determinación del contenido de citoquina. El contenido de TNF-\alpha en el sobrenadante celular se determinó usando un kit ELISA comercial (BD Bioscience) siguiendo el protocolo del fabricante. Las muestras se diluyeron 10 veces con tampón. Los cambios de color a 450 nm se midieron usando un lector de placas de microvaloración. Los niveles de citoquinas se expresaron como picogramos por mililitro. El intervalo de detección del kit de ELISA era 0-1000 pg/ml. El contenido de TNF-\alpha de cada muestra se ensayó tres veces.
Los resultados mostraron que la presencia de PEG-2G-PTD7 o PEG-Lact2G-PTD7 disminuía casi cuantitativamente la producción de TNF-\alpha inducida por LPS (Fig 7).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 5 Estudios in vivo
Grupos de ratones BALB-c de 8-10 semanas de edad fueron inyectados intraperitonealmente (i.p.) con 500 \mug de LPS (E. Coli 055:B5) en PBS solo o en combinación con PTD7 (60 \mug), conjugados de PEG-PTD7 (60 \mug, equiv. de fármaco) o 100 \mug de polimixina B (PMB). Se analizó un total de 11 grupos. El LPS se inyectó en el lado izquierdo de la cavidad peritoneal mientras que el PTD7 (disuelto en PEG200), los conjugados de PEG-PTD7 (en PBS) o la PMB se inyectaron en el lado derecho de la cavidad peritoneal. Se extrajo sangre de los animales 90 min y 180 min después de la inyección de LPS desde la vena safena. Se llevó a cabo un análisis de supervivencia de Kaplan-Meier usando el software GraphPad.
Se obtuvo suero de cada muestra recogida después de la centrifugación de sangre a 1500 x g durante 10 min a 4ºC. Los niveles de citoquinas inducidos por LPS en suero se examinaron a los 90 y 180 min después de tratamientos en diferentes diluciones (1:0, 1:10, 1:40) mediante un ensayo múltiple de citoquinas LINCOplex de ratón, incluyendo interferón-\gamma (IFN-\gamma), interleuquina-1\beta (IL-1\beta), interleuquina-6 (IL-6), factor de necrosis tumoral-\alpha (TNF-\alpha), interleuquina-2 (IL-2), interleuquina-4 (IL-4), factor estimulante de colonias de granulocitos-macrófagos (GM-CSF) e interleuquina-12(p70) (IL-12(p70)). El ensayo múltiple se llevó a cabo por duplicado en dos ocasiones diferentes de acuerdo con las especificaciones del fabricante. Se generaron curvas estándar para cada citoquina usando las concentraciones de citoquinas de referencia suministradas por el fabricante. Se analizaron datos aleatorios (intensidad de fluorescencia media) mediante el MasterPlex Quantification Software para obtener valores de concentración. Los datos de las gráficas se expresan en pg/ml como media \pm E.E.M. (n \geq 3).
Para el análisis estadístico in vivo de citoquinas se usó el ANOVA bidirecccional para consignar la significación estadística. Se usó análisis retrospectivo de Bonferroni-Holm para corregir con respecto a múltiples comparaciones. En todos los casos, se consideraba que p < 0,05 representaba la significación estadística.
Los resultados mostraron que los niveles en plasma de IL-2, IL-4, IL-12 (p70) y GM-CSF no se incrementaban significativamente en respuesta a LPS. Las concentraciones de TNF-\alpha eran las más altas 90 min después de la estimulación con LPS, y PTD7 y PMB reducían los niveles en plasma de esta citoquina más eficazmente que PEG-2G-PTD7 y PEG-Lact2G-PTD7 (probablemente debido a la farmacocinética; Fig. 8). Sin embargo, los niveles de IL-1\beta, IL-6 e IFN-\gamma eran superiores 180 min después de la inyección, y PEG-2G-PTD7 y PEG-Lact2G-PTD7 reducían significativamente los niveles en plasma de IL-1\beta, IL-6 e IFN-\gamma. Estas tres citoquinas proinflamatorias median en muchas de las características inmunopatológicas del choque inducido por LPS (Cohén, J. Nature 420, 885-891 (2002)). Sus actividades biológicas se solapan y están notablemente incrementadas en pacientes que desarrollan choque séptico letal (Sil, D. et al. Antimicrob Agents Chemother 51, 2811-2819 (2007); Hack, C.E. et al. Blood 74, 1704-1710 (1989); Netea, M.G. et al. Eur J Immunol 31, 2529-2538 (2001); Yan, J.J. et al. Nat Med 10, 161-167 (2004)). Los datos demuestran una supervivencia mejorada de ratones estimulados con LPS tratados con PEG-2G-PTD7 y PEG-Lact2G-PTD7 que se debió, al menos en parte, a niveles en plasma significativamente reducidos de citoquinas proinflamatorias.

Claims (13)

1. Conjugado polimérico amfifílico que comprende la fórmula general I:
PTD7-(L1)n-(L2)m-(PEG)-(L2)m-(L1)n-PTD7
donde
L1 es una secuencia peptídica de 1 a 5 aminoácidos donde dichos aminoácidos son seleccionados de entre Gly, Val, Leu, Ile, Phe, Arg, Lys, Asp, Glu.
n = 1-5
L2 es ácido láctico
m = 0-1
PTD7 comprende la siguiente fórmula general II
4 
\vskip1.000000\baselineskip
2. Conjugado polimérico amfifílico según la reivindicación 1, caracterizado porque
L1 es Gly
n = 2
L2 es ácido láctico
m = 0
\vskip1.000000\baselineskip
3. Conjugado polimérico amfifílico según la reivindicación 1, donde el conjugado polimérico comprende la fórmula general IV.
L1 es Gly
n = 2
L2 es ácido láctico
m = 1
\vskip1.000000\baselineskip
4. Conjugado polimétrico amfifílico según cualquiera de las reivindicaciones 1-3 para su uso como medicamento.
5. Conjugado polimérico amfifílico según cualquiera de las reivindicaciones 1-3 para uso en diálisis intracorpórea.
6. Conjugado polimérico amfifílico según cualquiera de la reivindicaciones 1-3 para el tratamiento de infecciones bacterianas.
7. Conjugado polimérico amfifílico según la reivindicación 6 donde la infección bacteriana es producida por endotoxinas de bacterias Gram negativas.
8. Conjugado polimérico amfifílico según la reivindicación 7 donde las endotoxinas bacterianas son de naturaleza lipídica.
9. Conjugado polimérico amfifílico según la reivindicación 8 donde la endotoxina bacteriana es LPS.
10. Conjugado polimérico amfifílico según cualquiera de las reivindicaciones 1-3 para el tratamiento de la sepsis bacteriana.
11. Composición farmacéutica que comprende un conjugado polimérico amfifílico según cualquiera de las reivindicaciones 1-3.
12. Procedimiento para la síntesis de un conjugado polimérico amfifílico según la reivindicación 1 que comprende las siguientes reacciones:
a)
Incorporar mediante síntesis en fase sólida de al menos 1 aminoácido al PTD7 unido a una resina para dar lugar al compuesto PTD7-(L1)n, donde L1 es una secuencia peptídica de 1 a 5 aminoácidos donde dichos aminoácidos son seleccionados de entre Gly, Val, Leu, Ile, Phe, Arg, Asp, Glu
b)
Eliminar la resina unida al compuesto obtenido en el paso anterior
c)
Conjugación del compuesto obtenido en b) con PEG funcionalizado con -COOH
\vskip1.000000\baselineskip
13. Procedimiento según la reivindicación 12 donde entre la etapa a) y la etapa b) comprende la incorporación de un ácido láctico al compuesto PTD7-2G para dar lugar al compuesto PTD7-2GLact.
ES200930218A 2009-05-28 2009-05-28 Conjugado polimerico para el tratamiento de infecciones bacterianas Withdrawn - After Issue ES2350430B1 (es)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
ES200930218A ES2350430B1 (es) 2009-05-28 2009-05-28 Conjugado polimerico para el tratamiento de infecciones bacterianas
PCT/ES2010/000211 WO2010136617A1 (es) 2009-05-28 2010-05-17 Conjugado polimérico para el tratamiento de infecciones bacterianas

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
ES200930218A ES2350430B1 (es) 2009-05-28 2009-05-28 Conjugado polimerico para el tratamiento de infecciones bacterianas

Publications (2)

Publication Number Publication Date
ES2350430A1 true ES2350430A1 (es) 2011-01-24
ES2350430B1 ES2350430B1 (es) 2011-11-18

Family

ID=43222184

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES200930218A Withdrawn - After Issue ES2350430B1 (es) 2009-05-28 2009-05-28 Conjugado polimerico para el tratamiento de infecciones bacterianas

Country Status (2)

Country Link
ES (1) ES2350430B1 (es)
WO (1) WO2010136617A1 (es)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5371186A (en) * 1991-02-11 1994-12-06 Biosynth S.R.L. Synthetic peptides for detoxification of bacterial endotoxins and for the prevention and treatment of septic shock
US20040049011A1 (en) * 1997-07-31 2004-03-11 Academisch Ziekhuis Bij De Universiteit Novel synthetic peptides with antimicrobial and endotoxin neutralizing properties for management of the sepsis syndrome
CN101148470A (zh) * 2007-09-14 2008-03-26 西南大学 聚乙二醇修饰的抗菌/中和内毒素变构肽分子、其合成方法及医学用途

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5371186A (en) * 1991-02-11 1994-12-06 Biosynth S.R.L. Synthetic peptides for detoxification of bacterial endotoxins and for the prevention and treatment of septic shock
US20040049011A1 (en) * 1997-07-31 2004-03-11 Academisch Ziekhuis Bij De Universiteit Novel synthetic peptides with antimicrobial and endotoxin neutralizing properties for management of the sepsis syndrome
CN101148470A (zh) * 2007-09-14 2008-03-26 西南大学 聚乙二醇修饰的抗菌/中和内毒素变构肽分子、其合成方法及医学用途

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
I. M. PUIG MORA et al., "Identification from a positional scanning peptoid library of in vivo active compounds that neutralize bacterial endotoxins", J. Med. Chem., 2005, vol. 48, No. 4, páginas 1265-1268. *
M. HIRATA et al., "Endotoxin-binding synthetic peptides with endotoxin-neutralizing, antibacterial and anticoagulant activities", Prog. Clin. Biol. Res., 1994, vol. 388, páginas 147-159. *

Also Published As

Publication number Publication date
ES2350430B1 (es) 2011-11-18
WO2010136617A1 (es) 2010-12-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2002306500B2 (en) Transporters comprising spaced arginine moieties
ES2590679T3 (es) Glicopolisialilación de proteínas diferentes a proteínas de coagulación de la sangre
AU679788B2 (en) Polymer-bound camptothecin derivatives
JP4745664B2 (ja) カンプトテシン類の高分子誘導体
ES2385230T3 (es) Formulación farmacéutica inyectable que consiste en un agente citostático y una maleimida que se unen por medio de un espaciador
EP1198254B1 (de) Träger-pharmaka-konjugate
US8323669B2 (en) Polymer conjugate of taxane
JP5856069B2 (ja) 新規なシチジン系代謝拮抗剤の高分子誘導体
EP2042195A1 (en) Polymer conjugate of combretastatin
EA003790B1 (ru) Соединение сдлс и способ его измерения
US9415114B2 (en) Conformations of divergent peptides with mineral binding affinity
KR20000016558A (ko) 약물복합체
JPWO2007135910A1 (ja) ポドフィロトキシン類の高分子結合体
JP2004504358A (ja) 抗腫瘍薬のポリマー複合体
RU2439077C2 (ru) Белоксвязывающие производные метотрексата и содержащие их лекарства
US20040110678A1 (en) Novel drug delivery system
WO2001074399A1 (fr) Medicaments a long temps de conservation dans un tissu
CN111150844B (zh) 抗her2亲合体靶向光敏剂的合成和应用
Vicent et al. Nanoconjugates as intracorporeal neutralizers of bacterial endotoxins
ES2350430A1 (es) Conjugado polimerico para el tratamiento de infecciones bacterianas.
CN109152845A (zh) 含有在环内包含至少两个(-ch2-ch2-o-)单元的接头的缀合物和缀合试剂
AU2005205143A1 (en) Drug delivery system
KR100481434B1 (ko) 약물복합체의제조방법

Legal Events

Date Code Title Description
FG2A Definitive protection

Ref document number: 2350430

Country of ref document: ES

Kind code of ref document: B1

Effective date: 20111118

FA2A Application withdrawn

Effective date: 20120424