ES2345790T3 - Procedimiento de deteccion de virus de gripe. - Google Patents
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Abstract
Un procedimiento de detección rápida de virus y/o partículas víricas de la gripe que comprende un componente hemaglutinina y un componente neuraminidasa, comprendiendo dicho procedimiento las etapas de: a) la unión de virus y/o partículas víricas a un soporte que contiene al menos un tipo de receptor de carbohidrato seleccionado del grupo constituido por oligosacáridos naturales o sintéticos, que está conjugado a, o situado en una composición con glicoproteínas cuyo receptor de carbohidrato se une al componente hemaglutinina de los virus y/o partículas víricas; b) la reacción del componente neuraminidasa de los virus y/o partículas víricas unidos con su sustrato enzimático marcado, que causa la generación de una señal detectable; y c) la detección de la señal generada en la etapa b).
Description
Procedimiento de detección de virus de
gripe.
La presente invención se refiere a un
procedimiento de detección rápida de virus y/o partículas víricas de
la gripe que comprenden un componente hemaglutinina y un componente
neuraminidasa, dicho procedimiento comprende la unión de los virus
y/o partículas víricas a un soporte mediante una molécula de unión
específica, que se une al componente hemaglutinina de los virus y/o
partículas víricas y que detecta a los virus y/o partículas víricas
unidos mediante la reacción del componente neuraminidasa con su
sustrato enzimático, que da como resultado una señal detectable.
Adicionalmente se refiere a un sistema de detección para la
detección rápida de virus y/o partículas víricas de la gripe que
emplea el procedimiento según la invención y al uso del sistema de
detección según la inven-
ción.
ción.
Todos los virus de la gripe aviar (GA) son virus
de la gripe de tipo A de la familia de los virus
Orthomyxoviridae y todas las cepas conocidas del virus de la
gripe A infectan a pájaros. Los virus de la gripe de tipo A se
subdividen en subtipos en base a la proteína hemaglutinina (H) y
neuraminidasa (N) que sale del núcleo central del virus. Existen 16
tipos de H y hasta 9 subtipos de N, dando 144 combinaciones
potenciales diferentes de proteínas H y N.
La gripe aviar (también conocida como gripe de
los pájaros, gripe aviar, gripe A del virus de la gripe, gripe de
tipo A, o gripe de género A) es una gripe provocada por un tipo de
virus de la gripe que tiene a los pájaros como huésped, pero que
puede infectar a diversas especies de mamíferos.
Una pandemia de gripe es una epidemia a gran
escala del virus de la gripe, tal como la gripe española de 1918.
La Organización Mundial de la Salud (OMS) advierte de que existe un
riesgo sustancial de una pandemia de gripe en los próximos años.
Uno de los candidatos más probables es el subtipo A (H5N1) de la
gripe aviar.
El H5N1 es un tipo de virus de la gripe aviar
(virus de la gripe de los pájaros) que ha mutado por deriva
antigénica en docenas de variantes altamente patógenas, pero todas
ellas pertenecen actualmente al genotipo Z del virus de la gripe
aviar H5N1. El genotipo Z surgió por redistribución en 2002 de
genotipos previos altamente patógenos de H5N1 que apareció por
primera vez en China en 1996 en pájaros y en Hong Kong en 1997 en
seres humanos. Los virus H5N1 de infecciones en seres humanos y los
virus aviares íntimamente relacionados aislados en 2004 y 2005
pertenecen a un solo genotipo, a menudo denominado genotipo Z.
Los subtipos de gripe aviar que se han
confirmado en seres humanos, ordenados por el número de muertes
humanas conocidas, son: el H1N1 que causó la gripe española, el
H2N2 que causó la gripe asiática, el H3N2 que causó la gripe de
Hong Kong, H5N1, H7N7, H9N2, H7N2, H7N3, H10N7.
Para poder responder rápidamente en caso de que
aparezca una nueva cepa mutada y virulenta de gripe capaz de
transmitirse de humano a humano se requiere un procedimiento de
ensayo rápido y fiable para determinar si un animal o una persona
están infectados con el virus. Los procedimientos de laboratorio
actuales para la detección de virus a partir de muestras
medioambientales, animales, y de pacientes son laboriosos y
requieren tiempo.
El documento
US-B-6.503.745 divulga compuestos de
ciclopentano y de ciclopenteno suministrados junto con su uso en un
procedimiento para la detección del virus de la gripe. El virus es
capturado usando una superficie recubierta de fetuína y la
detección se lleva a cabo con un compuesto marcado que se une a
neuraminidasa.
D.E. Noyola y col. informan en el Journal of
Clinical Microbiology, 2000, p. 1161-1165 sobre
perlas recubiertas con fetuína. La fetuína también actúa como
sustrato para la neuraminidasa, y la detección se lleva a cabo
usando aglutinación.
El documento
US-A-2003/0129618 divulga
procedimientos y composiciones para la detección de analitos usando
la fluorescencia que se produce en un material polimérico en
respuesta a la unión selectiva de analitos a materiales
poliméricos. En particular, la presente invención permite la
detección fluorescente de reacciones que modifican la membrana y de
analitos responsables de esas modificaciones y la selección de los
inhibidores de acción.
El documento
US-B-6.503.745 divulga ciclopentano
y compuestos de ciclopenteno y su uso en un procedimiento para la
detección del virus de la gripe.
Todas las soluciones rápidas in situ
conocidas y accesibles se basan en el uso de anticuerpos contra
epítopos virales o en simples pruebas para la neuraminidasa (NA).
La principal desventaja de las soluciones con anticuerpos basados
en una técnica de flujo lateral u otros tipos de ensayo es la
inestabilidad de los reactivos anticuerpos. Además, la mayoría de
ensayos inmunológicos disponibles hasta la fecha muestran una
especificidad por la gripe A, pero no por H5N1. Adicionalmente, el
uso de anticuerpos conduce irremediablemente a un incremento de los
costes del
ensayo.
ensayo.
La principal desventaja de las pruebas de NA
específicas para los virus de la gripe es el caro reactivo del
sustrato necesario usado en el estado de la técnica, que debe estar
parcialmente metilado.
La presente invención soluciona estos problemas
proporcionando un procedimiento para la detección rápida de virus
y/o partículas víricas de la gripe, un sistema de detección que
emplea dicho procedimiento así como el uso de dicho sistema de
detección como se define en las reivindicaciones.
En la memoria descriptiva se usarán las
siguientes abreviaturas:
- 3'SLN = Neu5Aca2-3Gal\beta1-4GlcNAc
- HA = hemaglutinina;
- HAR = reacción de hemaglutinación;
- LOD = limite de detección;
- NA = neuraminidasa;
- TCID = dosis infecciosa para un cultivo tisular;
- Tampón TN = tris-HCl 0,02 M (pH 7,2) con NaCl 0,1 M.
\vskip1.000000\baselineskip
Según la invención se emplea un procedimiento de
detección rápida de virus y/o partículas víricas de la gripe, el
procedimiento que comprende las etapas de:
a) la unión de virus y/o partículas víricas a un
soporte que contiene al menos un tipo de receptor de carbohidrato
seleccionado del grupo constituido por oligosacáridos naturales o
sintéticos, que está conjugado a, o situado en una composición con
glicoproteínas como la glicoforina, la
a1-glicoproteína ácida, la
a2-macroglobulina, el ovomucoide, y sus
combinaciones cuyo receptor de carbohidrato se une al componente
hemaglutinina de los virus y/o partículas víricas;
b) la reacción del componente neuraminidasa de
los virus y/o partículas víricas unidos con su sustrato enzimático
marcado, que causa la generación de una señal detectable; y
c) la detección de la señal generada en la etapa
b).
En particular, se detectan virus y/o partículas
víricas de la gripe que comprenden todos los subtipos conocidos de
gripe aviar (IA).
En otra forma de realización de la invención los
virus y/o partículas víricas de la gripe comprenden un cierto
subtipo o grupo de subtipos. El procedimiento es adecuado para
detectar virus y/o partículas víricas de la gripe que comprenden
una variante altamente patógena.
La invención se puede realizar en particular con
un soporte que es un papel o membrana cromatográficos. Esos
materiales son muy conocidos por la persona experta en la materia.
Según la invención es posible unir covalentemente o adsorber
físicamente el receptor de carbohidrato, como se ha mencionado
anteriormente, al soporte.
En particular, la invención emplea un receptor
de carbohidrato que contiene el motivo
\alpha2-3Gal. Según una forma de realización de
la invención (solución con transferencia de manchas) la unión de los
virus y/o partículas víricas se lleva a cabo cargando una muestra
que contiene los virus y/o partículas víricas en el soporte en
forma de punto. Según la invención la unión de los virus y/o
partículas víricas se lleva a cabo poniendo en remojo una muestra
que contiene los virus y/o partículas víricas a lo largo de dicho
soporte en forma de la denominada aproximación de flujo lateral. En
otra forma de realización de la invención un sustrato enzimático
marcado del componente neuraminidasa se precipita en el sitio del
virus y/o partículas víricas unidos.
En otra forma de realización más de la presente
invención, el sustrato enzimático está marcado con un grupo
cromógeno y la reacción con una neuraminidasa induce un cambio de
color de dicho sustrato enzimático. Como sustratos enzimáticos se
pueden emplear, entre otros, los siguientes derivados cromógenos del
ácido N-acetilneuramínico, en particular, el ácido
5-bromo-4-cloro-3-indolil-\alpha-N-acetilneuramínico.
Alternativamente, la reacción con la neuraminidasa induce una señal
de fluorescencia específica cuando se emplean como marcador
moléculas fluorescentes adecuadas.
El procedimiento de la invención se puede llevar
a cabo de manera ventajosa con un sistema de detección para la
detección rápida de virus y/o partículas víricas de la gripe según
la invención. El sistema comprende un sistema de detección para la
detección rápida de virus y/o partículas víricas de la gripe usando
el procedimiento de la invención, dicho sistema que comprende:
a) un soporte que contiene al menos un tipo de
receptor de carbohidrato seleccionado del grupo constituido por
oligosacáridos naturales o sintéticos, que está conjugado a, o
situado en una composición con glicoproteínas como la glicoforina,
la a1-glicoproteína ácida, la
a2-macroglobulina, el ovomucoide, y sus
combinaciones cuyo receptor de carbohidrato se une al componente
hemaglutinina de los virus y/o partículas víricas;
b) un sustrato enzimático marcado que reacciona
con el componente neuraminidasa, generando así una señal
detectable.
En particular, el soporte está encerrado en un
contenedor de plástico con una ventana para la lectura del
resultado de la prueba con una muestra y un control positivo. El
soporte comprende, en particular, al menos dos cantidades
diferentes de dichos agentes aglutinantes específicos para la
estimación semi-cuantitativa del contenido en virus
de la muestra. En otra forma de realización, el soporte comprende al
menos dos receptores específicos de especificidad de subtipo
diferente para la detección simultánea de virus que pertenecen a
diferentes subtipos. El sistema de detección de la invención sirve
como unidad contenedora y de transporte de la muestra para pruebas
confirmatorias como la reacción en cadena de la polimerasa de
transcripción inversa después de revelar la presencia de virus y/o
partículas víricas de la especificidad buscada.
Según la invención, también se reivindica el uso
de un sistema de detección para la detección del virus y/o
partículas víricas de la gripe en muestras de animales y/o seres
humanos tales como frotis, heces y sangre en muestras del entorno
y/o como un sistema de alerta temprana de la emergencia de subtipos
de virus altamente patógenos.
La hemaglutinina (HA) y neuraminidasa (NA) están
presentes sobre la superficie de virus de la gripe. La HA induce la
unión del virus a receptores celulares que contienen sialilo,
mientras que la NA promueve el acceso del virus a las células diana
y facilita la liberación del virus de las células infectadas y de
inhibidores naturales [Matrosovich, M.N., Matrosovich, T.Y., Gray,
T., Roberts, N.A., Klenk, H.D. 2004: J. Virol.. 78(22)
12665-7], es decir, la HA está para la unión al
receptor mientras que la NA está para la destrucción del receptor.
Una condición importante para una replicación vírica eficiente es la
acción concertada de la HA y la NA, y para especies diferentes la
relación de estas dos actividades es diferente. Los virus de la
gripe aislados de pájaros presentan algunas características
distintivas. Todos los virus de gripe aviar poseen HA, que presentan
la afinidad más elevada por cadenas de carbohidratos
Neu5Ac\alpha2-3Gal-terminales.
Además, su actividad NA es mayor comparada con virus de otros
orígenes.
En el procedimiento de detección y el sistema de
detección según la presente invención, se usan estas propiedades de
ambos componentes del virión, HA y NA, de virus aviares. Un virus de
la gripe estará unido a una molécula de unión específica,
preferentemente a una sustancia que contenga carbohidratos
sialilados y que esté acoplada a una membrana, seguido de la
reacción con, preferentemente la digestión de, un sustrato
neuraminidasa que provoque la muerte de la zona que contiene el
virus sobre la membrana. El procedimiento de detección del virus de
la gripe y el sistema según la presente invención presentan una
variedad de ventajas comparados con sistemas de prueba del estado
de la técnica. Usando dos componentes, HA y NA, se incrementa la
especificidad del ensayo y permite la construcción de sistemas de
detección con especificidades seleccionadas. Al mismo tiempo y en
contraste con los sistemas de detección basados en procedimientos
inmunológicos, no hay necesidad de una enzima marcadora adicional
para revelar la detección positiva, debido a que para este propósito
se usa la propia neuraminidasa viral.
Las diferentes variantes de los tipos de
moléculas receptoras carbohidrato exhaustivamente seleccionadas
recogerán todos los virus de la gripe independientemente del tipo y
del subtipo, y son capaces de la detección simultánea específica de
variantes altamente patógenas como la H5N1.
El resultado del procedimiento de detección
según la invención se puede obtener sin el uso de ningún dispositivo
sofisticado.
El procedimiento según la invención permite la
detección de virus de la gripe en el intervalo de 0,1 a 2 horas.
La invención se explicará en profundidad por
medio de los siguientes ejemplos no limitantes.
Una disolución de 1,7 mg (10 \mumol) de ácido
poliacrílico completamente activado con
N-hidroxisuccinimida, MW \sim1000 kDa, en 200
\mul de DMSO, y 4 \mul de diisopropiletilamina se añadieron a
una disolución de 1,46 mg (2 \mumol) de
3'SLN-O(CH_{2})_{3}NH_{2} en 200
\mul de DMSO, la mezcla se mantuvo a 37ºC durante 48 h, se
añadieron 40 \mul de una disolución de amoniaco acuoso al 25% o 40
\mul de etanolamina y la disolución se mantuvo durante 18 h a
temperatura ambiente, seguido de cromatografía de exclusión
molecular en sefarosa LH, con un rendimiento del 90%
aproximadamente.
- 1.
- Tira de prueba
- 2.
- Tampón de la sonda. Tampón 1
- 3.
- Tampón de contraste. Tampón 2
- 4.
- Tampón de lavado A. Tampón 3
- 5.
- Tampón de lavado B. Tampón 4
- 6.
- Tampón de secado. Tampón 5
- 7.
- Tira doble (2 columnas con 8 pocillos) o placa de 96 pocillos
- 8.
- Tijeras o escalpelo
- 9.
- Tenazas
- 10.
- Placa para el lavado de la tira
- 11.
- Viales de revelado
- 12.
- Termostato (o su sustituto)
- 13.
- Cámara para el procedimiento cromatográfico (o una tapa, que se usa para cubrir la placa de 96 pocillos con tiras).
\vskip1.000000\baselineskip
Tiras: nitrocelulosa, absorbente, algodón de la
muestra obtenido en Whatman, EE.UU.
- 1.
- El reactivo específico (fetuína, Sigma) se aisló a partir de huevos de gallina frescos.
- 2.
- Tampón 1: tris-HCl 0,2 M (pH 7,2) con NaCl 3 M y el 0,5% de Tween-20
- 3.
- Tampón 2: tris-HCl 0,02 M (pH 7,2) con NaCl 0,3 M y el 0,05% deTween-20
- 4.
- Tampón 3: tris-HCl 0,02 M (pH 7,2) con NaCl 0,1 M y el 0,05% de Tween-20
- 5.
- Tampón 4: tris-HCl 0,02 M (pH 7,2) con NaCl 0,1 M (Tampón TN)
- 6.
- Tampón 5: disolución de Neu-X 4 mM en tampón TN con CaCl_{2} 0,01 M. El tampón TN se puede sustituir con otro tampón de equilibrado, por ejemplo, tampón fosfato salino o solución salina.
La tira (Figura 1) está dividida en tres zonas:
zonas de puesta en remojo, de detección y de absorción. En la zona
de detección está localizada una línea de la molécula receptora
carbohidrato (línea de prueba) así como una línea control. Las
tiras se ensamblan a partir de la membrana, el absorbente y los
algodones de la muestra. La molécula receptora carbohidrato (1
microlitro de disolución de 1 mg/ml) se cargó sobre la zona de
detección, después de que la tira se hubiese secado y lavado. A
continuación la tira se almacenó en un matraz herméticamente
cerrado a 18-25ºC.
\vskip1.000000\baselineskip
1. Preparación de la muestra. 1/10 partes
(v/v) de Tampón 1 se añadió directamente a la sonda antes del
análisis y se agitó bien. Ésta es la sonda 1 (P 1).
2. Procedimiento de detección que involucra
diversas fases (Tabla 1).
En la primera fase, el algodón de la
muestra de la tira se pone en 80-100 \mul de la P
1. Tras la acción de las fuerzas capilares el líquido de la muestra
se difunde hacia arriba y entra en la zona de absorción a través de
la zona de detección donde las partículas víricas se unen a la
molécula receptora carbohidrato. La duración de este procedimiento
depende de la viscosidad de la muestra, pero no debería superar los
15 minutos. Se añade el Tampón 2 al mismo pocillo de la placa
(alternativamente es posible transferir la tira a otro pocillo
relleno con el Tampón 2). Después de 10 minutos la tira se saca del
pocillo.
En la segunda fase, la parte en remojo de
la tira se corta (con tijeras). Después de la extracción con cuidado
(por ejemplo, con la ayuda de tenazas) de la zona de absorción de
la parte de la tira, la zona de prueba se lava con el Tampón 3 y a
continuación con el Tampón 4. Posteriormente también se corta la
zona de absorción.
La tercera fase. El resto de la zona de
pruebas se coloca en el matraz con el Tampón 5. El matraz se cierra
bien y se deja reposar en oscuridad a 37-40ºC. La
presencia de un virus de la gripe en la muestra se detecta como una
coloración azul oscura de la zona de la molécula receptora
carbohidrato. La duración de esta etapa depende de la concentración
del virus en la muestra y puede llevar entre 20 minutos y 60 minutos
antes de que se pueda detectar un virus por reacción de
hemaglutinación (titulación HAR de 2 aproximadamente). Como norma
estas muestras tienen un valor de TCID/ml de 10^{5}
aproximadamente. Para sondas con un contenido en virus de 10 a 100
veces inferior (10^{4}-10^{3} TCID/ml), la
coloración puede aparecer después de varias horas. Después de este
procedimiento, la tira se extrae de la disolución, seguido de una
evaluación visual del resultado de la reacción.
La línea control de neuraminidasa en la
zona de detección se usa para la evaluación de la funcionalidad del
ensayo. La coloración azul oscura de la zona control debe
producirse.
\vskip1.000000\baselineskip
- 1)
- Si se observa una línea uniformemente coloreada, se considera un positivo, es decir, la sonda contiene el virus; la intensidad del color debe ser comparable con la intensidad de la línea control.
- 2)
- Si se observa una línea débilmente coloreada, la muestra contiene el virus en una concentración que es insuficiente para una detección inequívoca, y la exposición de la tira en el Tampón 5 se debe prolongar durante toda la noche o se puede repetir la prueba una vez más.
- 3)
- La ausencia de la línea coloreada significa que no hay virus en la muestra o su concentración es inferior al nivel de detección mínimo.
- 4)
- La ausencia de la línea coloreada en la línea del control positivo significa que el experimento se llevó a cabo de manera incorrecta o que la NA en la línea control ha sido destruida; en ese caso se recomienda volver a someter a prueba al espécimen usando un nuevo kit de prueba.
Los datos sobre la sensibilidad de la prueba se
dan en la Tabla 2.
En este ejemplo se usaron los mismos materiales
y procedimientos que en el Ejemplo 2.
- 1.
- Se llevaron a cabo diluciones en serie de sondas que contienen el virus en suspensión de heces de gallinas sanas (2 g de sustancia seca por 10 ml de tampón). Se ha demostrado que las heces no afectan a la sensibilidad y especificidad de la detección del virus de la gripe con la prueba.
- 2.
- A heces frescas de gallina se les añadió 1/10 partes (v/v) del virus A/pato/Alberta/76 (titulación HAR 1:10) y la mezcla se homogeneizó. Después de la adición del Tampón 2 al homogeneizado (1:1 v/v), se tomó una alícuota de la suspensión resultante para su uso en el ensayo. La coloración azul oscura en la zona de prueba apareció después de 2 h. No se observó una influencia remarcable sobre los resultados de la prueba cuando las heces de gallina se añadieron a las muestras de la Tabla 1 antes de comenzar el procedimiento de ensayo.
\vskip1.000000\baselineskip
En este ejemplo se usaron los mismos materiales
y procedimientos que en el Ejemplo 2.
Se analizó el tejido pulmonar de una gallina que
había muerto de infección por el virus de la gripe H5N1 y que se
había extraído con tampón silina (recogido en: Crimea/enero de
2006). Se pudo demostrar que el virus de la gripe se puede detectar
de manera fiable en el pulmón del cadáver de la gallina
analizada.
\vskip1.000000\baselineskip
Claims (16)
1. Un procedimiento de detección rápida de virus
y/o partículas víricas de la gripe que comprende un componente
hemaglutinina y un componente neuraminidasa, comprendiendo dicho
procedimiento las etapas de:
- a)
- la unión de virus y/o partículas víricas a un soporte que contiene al menos un tipo de receptor de carbohidrato seleccionado del grupo constituido por oligosacáridos naturales o sintéticos, que está conjugado a, o situado en una composición con glicoproteínas cuyo receptor de carbohidrato se une al componente hemaglutinina de los virus y/o partículas víricas;
- b)
- la reacción del componente neuraminidasa de los virus y/o partículas víricas unidos con su sustrato enzimático marcado, que causa la generación de una señal detectable; y
- c)
- la detección de la señal generada en la etapa b).
\vskip1.000000\baselineskip
2. El procedimiento de la reivindicación 1 en el
que la glicoproteína se selecciona del grupo constituido por
glicoforina, la a1-glicoproteína ácida, la
a2-macroglobulina, el ovomucoide, y sus
combinaciones.
3. El procedimiento según la reivindicación 1 ó
2 en el que dichos virus y/o partículas víricas de la gripe
comprenden un cierto subtipo o un grupo de subtipos, en particular
todos los subtipos conocidos de gripe aviar (GA).
4. El procedimiento según la reivindicación 1,
en el que dichos virus y/o partículas víricas de la gripe comprenden
una variante altamente patógena.
5. El procedimiento según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 4, en el que el soporte es un papel o una
membrana cromatográficos.
6. El procedimiento según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 5, en el que el receptor de carbohidrato, en
particular cuando el receptor de carbohidrato contiene el motivo
\alpha2-3Gal, está unido covalentemente o
adsorbido físicamente al soporte.
7. El procedimiento según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 6, en el que dicha unión de dichos virus y/o
partículas víricas se lleva a cabo cargando una muestra que contiene
virus y/o partículas víricas a dicho soporte como un punto, o en el
que dicha unión de dichos virus y/o partículas víricas se lleva a
cabo poniendo en remojo una muestra que contiene virus y/o
partículas víricas a lo largo de dicho soporte.
8. El procedimiento según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 7, en el que dicho sustrato enzimático marcado
de dicho componente neuraminidasa se precipita en el sitio del virus
y/o partículas víricas unidos.
9. El procedimiento según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 8, en el que dicho sustrato enzimático está
marcado con un grupo cromógeno y la reacción con la neuraminidasa
induce un cambio de color de dicho sustrato enzimático, en
particular dicho sustrato enzimático es un derivado cromógeno del
ácido N-acetilneuramínico, en particular, el ácido
5-bromo-4-cloro-3-indolil-\alpha-N-acetilneuramínico.
10. El procedimiento según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 9, en el que la reacción con la neuraminidasa
induce una señal de fluorescencia específica.
11. Un sistema de detección para la detección
rápida de virus y/o partículas víricas de la gripe usando un
procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones
1-10, comprendiendo dicho sistema:
- a)
- un soporte que contiene al menos un tipo de receptor de carbohidrato seleccionado del grupo constituido por oligosacáridos naturales o sintéticos, que está conjugado a, o situado en una composición con glicoproteínas, cuyo receptor de carbohidrato se une al componente hemaglutinina de los virus y/o partículas víricas;
- b)
- un sustrato enzimático marcado que reacciona con el componente neuraminidasa, generando así una señal detectable.
\vskip1.000000\baselineskip
12. El sistema de detección según la
reivindicación 11, en el que dicho soporte está encerrado en un
contenedor de plástico con una ventana para la lectura de los
resultados de la prueba con una muestra y un control positivo.
13. El sistema de detección según la
reivindicación 11 y/o 12, en el que dicho soporte comprende al menos
dos cantidades diferentes de dichos agentes aglutinantes
específicos para la estimación semi-cuantitativa
del contenido en virus de la muestra.
14. El sistema de detección según la
reivindicación 11 a 13, en el que dicho soporte comprende al menos
dos receptores específicos de diferente especificidad de subtipo
para una detección simultánea de virus que pertenecen a subtipos
diferentes.
15. El sistema de detección según cualquiera de
las reivindicaciones 11-14, en el que el sistema,
después de revelar la presencia del virus y/o partículas víricas de
especificidad buscada, sirve como unidad contenedora y de
transporte de la muestra para pruebas confirmatorias como la
reacción en cadena de la polimerasa de transcripción inversa.
16. Uso del sistema de detección según
cualquiera de las reivindicaciones 11 a 15 para la detección del
virus y/o partículas víricas de la gripe en muestras de animales
y/o seres humanos como frotis, heces y sangre, en muestras del
entorno y/o como un sistema de alerta temprana de la emergencia de
subtipos de virus altamente patógenos.
Applications Claiming Priority (6)
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|---|---|---|---|
| EP06114170 | 2006-05-18 | ||
| EP06114170 | 2006-05-18 | ||
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| EP06119398 | 2006-08-23 | ||
| US839415P | 2006-08-23 | ||
| EP06119398 | 2006-08-23 |
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2345790T3 true ES2345790T3 (es) | 2010-10-01 |
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Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES07729279T Active ES2345790T3 (es) | 2006-05-18 | 2007-05-18 | Procedimiento de deteccion de virus de gripe. |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| BR (1) | BRPI0712023A2 (es) |
| DK (1) | DK2018564T3 (es) |
| ES (1) | ES2345790T3 (es) |
| MY (1) | MY148949A (es) |
| NZ (1) | NZ572525A (es) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2019182466A1 (ru) * | 2018-03-21 | 2019-09-26 | Общество с ограниченной ответственностью "Синтавр" | Метод специфического выявления вируса гриппа человека |
-
2007
- 2007-05-18 BR BRPI0712023-0A patent/BRPI0712023A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2007-05-18 ES ES07729279T patent/ES2345790T3/es active Active
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- 2007-05-18 MY MYPI20084611 patent/MY148949A/en unknown
- 2007-05-18 NZ NZ572525A patent/NZ572525A/en unknown
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2019182466A1 (ru) * | 2018-03-21 | 2019-09-26 | Общество с ограниченной ответственностью "Синтавр" | Метод специфического выявления вируса гриппа человека |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| MY148949A (en) | 2013-06-14 |
| NZ572525A (en) | 2010-09-30 |
| DK2018564T3 (da) | 2010-08-16 |
| BRPI0712023A2 (pt) | 2011-12-27 |
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