ES2334866T3 - Procedimiento para la caracterizacion de celulas cancerosas diseminadas y micrometastatizadas. - Google Patents
Procedimiento para la caracterizacion de celulas cancerosas diseminadas y micrometastatizadas. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2334866T3 ES2334866T3 ES98946419T ES98946419T ES2334866T3 ES 2334866 T3 ES2334866 T3 ES 2334866T3 ES 98946419 T ES98946419 T ES 98946419T ES 98946419 T ES98946419 T ES 98946419T ES 2334866 T3 ES2334866 T3 ES 2334866T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- cancer
- cells
- gene
- baselineskip
- body fluid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
- C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/112—Disease subtyping, staging or classification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/158—Expression markers
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Procedimiento para la caracterización de células cancerosas diseminadas y micrometastatizadas mediante análisis de ácidos nucleicos en el que i) las células obtenidas a partir del fluido corporal de un individuo se investigan para por lo menos un ARNm de un primer gen específico para cáncer; y ii) las células cancerosas separadas a partir del fluido corporal de un individuo se investigan para por lo menos un ADN o ARNm de un segundo gen específico para cáncer o asociado a cáncer y la misma investigación se realiza con células no cancerosas del mismo individuo para la comparación, siendo distintos el primer y el segundo gen.
Description
Procedimiento para la caracterización de células
cancerosas diseminadas y micrometastatizadas.
La presente invención se refiere a un
procedimiento para la caracterización de células cancerosas
diseminadas y micrometastatizadas mediante análisis de ácidos
nucleicos y al uso de este procedimiento para el diagnóstico in
vitro de cáncer y para otros fines.
El diagnóstico del cáncer en el ser humano
representa al igual que antes uno de los mayores desafíos de la
medicina actual. Los procedimientos de diagnóstico corrientes
permiten el reconocimiento de tumores de tipo canceroso que a
continuación deberán denominarse en conjunto tumores (sarcomas,
carcinomas, neoplasias sistémicas hematológicas), frecuentemente
sólo cuando el tumor ya ha alcanzado un estadio avanzado. A pesar de
los considerables avances en los procedimientos de obtención de
imágenes, a su aplicación satisfactoria siempre se le supone un
cierto tamaño mínimo del tumor. Además, con los procedimientos de
este tipo, dado el caso, sólo se obtiene muy poca información
secundaria sobre el tipo y la constitución del tumor. Por tanto, los
procedimientos de obtención de imágenes que requieren mucho tiempo
y de costes extremadamente altos sólo sirven generalmente como
ayudas para la orientación para el otro procedimiento,
frecuentemente directo, generalmente una extracción de tejido. Pero
esta última medida significa una intervención invasiva en el cuerpo
del paciente que, dependiendo de la localización y constitución del
tumor, puede ser muy desagradable e incluso peligrosa para el
paciente.
Si mediante una extracción de tejido tal se
identifica un tumor, normalmente siguen otras investigaciones que
deberán describir, por ejemplo, el potencial de diseminación, es
decir, la formación de metástasis de este tumor.
Si se diagnostica, por ejemplo, cáncer de mama,
de la paciente afectada se extirpan generalmente de 20 a 30
ganglios linfáticos y se determina el número de ganglios linfáticos
que presentan células cancerosas. La opinión prevaleciente se basa
en que la posibilidad de supervivencia de una paciente disminuye al
aumentar el número de ganglios linfáticos afectados. No obstante,
los hallazgos más recientes indican que la aparición de tales
metástasis de los ganglios linfáticos es más bien una medida de la
edad que de la malignidad o el potencial de metastatización del
tumor.
Como consecuencia del desarrollo avanzado de
procedimientos de biología molecular y el creciente conocimiento
sobre las bases genéticas de la degeneración celular, en los últimos
años se han abierto nuevos caminos para diagnosticar cáncer. Se
partió de que las células cancerosas expresan marcadores
característicos debido a los cuales deberán diferenciarse de
células no degeneradas y así identificarse como células cancerosas.
Con el desarrollo de la técnica del hibridoma y el cultivo así
hecho posible de anticuerpos monoclonales se diseñó una pluralidad
de inmunoensayos que deberán contribuir al diagnóstico del cáncer
mediante la detección de determinados marcadores. Ejemplos de tales
marcadores son el antígeno carcinoembrionario (CEA), la
\alpha-fetoproteína (AFP) o el antígeno prostático
específico (PSA). En el documento EP 0 747 705 se propuso
recientemente investigar sólo la glicoforma de 90 kDa de un grupo
estructuralmente asociado a CEA de proteínas (NCA) en la sangre ya
que aparentemente sólo esta glicoforma se libera al torrente
sanguíneo. El documento WO 96/21862 especifica que la medición de
la concentración de A-proteína en la sangre
permitiría el diagnóstico de cáncer, pero también establece que las
esperanzas depositadas en los marcadores investigados hasta la
fecha, como CEA, AFP o PSA, no se han cumplido. Otros
procedimientos basados en la detección inmunológica de determinadas
proteínas se describen, por ejemplo, en los documentos DE 195 00
723; WO 97/26271; WO 97/28186; WO 96/01907; US 5.633.142; US
5.620.848; US 5.589.579; y US 5.563.247. No obstante, un diagnóstico
fiable de cáncer no parece ser posible de esta forma al menos en
este momento.
Por el contrario, otros equipos de
investigadores se han concentrado en el análisis del material
genético de células cancerosas. Así, el documento WO 93/04200
propone para estimar una predisposición para cáncer de mama aislar
ADN de una muestra de sangre de la paciente, restringir este ADN de
determinada forma y, debido al patrón de restricción, hacer un
diagnóstico correspondiente. No obstante, con este procedimiento no
es posible una detección de células tumorales en la sangre.
El documento WO 96/02671 describe además un
procedimiento con el que se investiga ADN genómico o ADNc de tejido
neoplásico, sangre u otro fluido corporal solo mediante análisis de
secuencias (secuenciación o hibridación) para mutaciones de un gen
que codifica una proteína cuya alteración de la función está
relacionada con cáncer. En los documentos WO 97/26271; WO 97/28186;
WO 96/15262; WO 96/01907; WO 93/22456; US 5.620.848; US 5.149.628 y
WO 96/21021 se informa de enfoques similares.
También se ha propuesto reiteradamente
investigar el ADN y/o ARN presente libre en el plasma sanguíneo para
mutaciones o deleciones oncógenas, mutaciones o deleciones de genes
supresores de tumores o modificaciones del patrón de microsatélites
(véanse, por ejemplo, los documentos WO 95/16792; DE 37 21 400; DE
37 17 212; y WO 93/22456).
Finalmente, el documento WO 94/10343 también
describe un procedimiento para el diagnóstico de cáncer,
concretamente para reconocer micrometástasis de cáncer de próstata
investigando el ARN de la sangre de un paciente que codifica el
antígeno prostático específico. No obstante, en este procedimiento
se obtienen en aproximadamente dos tercios de los casos las
denominadas respuestas positivas falsas ya que las inflamaciones o
lesiones de la próstata también aumentan la concentración de la
proteína en la sangre. Por otra parte, debido a las insuficiencias
de la prueba, supuestamente el 30% de las enfermedades cancerosas
quedan sin detectar al igual que antes. En el documento US
5.601.990 se elige una manera de proceder similar para el
diagnóstico de cáncer de intestino metastatizante. El documento WO
96/35808 se ocupa de la detección de una proteína (hCRG). El
documento WO 96/17080 describe la detección de tumores y/o su
metastatización mediante la detección de CK20. El procedimiento
descrito en Noguchi, S. y col., Cancer, tomo 74, nº 5, 1994, páginas
1595-1600, se basa en la amplificación de ARNm de
MUC1. Pittman, K. y col., Annals of Oncology, tomo 7, 1996, páginas
297-301 y van der Velde-Zimmermann,
D. y col., American Journal of Pathology, tomo 149, nº 3, 1996,
páginas 759-764, recurren al ARNm de tirosinasa
para la detección de las células de melanoma en circulación. En
Burchill, S. A. y col., British Journal of Cancer, tomo 71, 1995,
páginas 278-281, se expone que el ARNm de CK20
podría servir posiblemente para la detección de células tumorales
metastatizadas de origen epitelial, mientras que CK8 y CK19 no
serían adecuadas para esto. El documento WO 97/07242 trata
procedimientos inmunológicos y el documento WO 97/07242 describe una
RT-PCR en PSA.
En Pantel, K. y Rietmüller, G., Onkologie, tomo
18, 1995, páginas 394-401, se toman cartas en los
análisis de PCR específicos para mutaciones (Ki-ras
y p53), así como en los planteamientos de RT-PCR
para la detección de los denominados antígenos específicos para
tejidos (CK19, CEA, PSA, PSM). Mientras que los análisis específicos
para mutaciones se aplican a tumores primarios, los análisis de
RT-PCR también deberán utilizarse en muestras de
sangre. No obstante, cada uno de los marcadores de ARNm específicos
para epitelio considerados se trata por sí mismo y sin referencia a
otros. Jung, R. y col., European Journal of Clinical Chemistry and
Clinical Biochemistry, tomo 35, nº 1, 1997, páginas
3-10, tratan distintos trabajos originales que se
basan respectivamente en análisis de RT-PCR
individuales. Schmitz-Dräger, B. J. y col., World
Journal of Urology, tomo 14,1996, páginas 190-196,
agrupan distintos planteamientos de otros grupos de trabajo que
analizan tumores primarios y de éstos derivan factores relevantes
para la metastatización.
El documento WO 96/29430 describe un
procedimiento denominado "ensayo de marcadores múltiples"
("Multiple Marker Assay") para detectar metástasis de melanoma
o de cáncer de mama con el que se investiga más de 1 parámetro.
Además, no obstante se utiliza exclusivamente la metodología de
RT-PCR para la detección de ARNm que normalmente no
están presentes en el fluido corporal investigado. Así, por ejemplo,
el recubrimiento de Buffy se obtiene a partir de sangre y se
investiga correspondientemente. Pelkey, J. P. y col., Clinical
Chemistry, tomo 42, 1996, páginas 1369-1381, en
tanto que se excede la analítica de parámetros individuales, sólo
tratan el trabajo basado en el documento WO 96/29430.
Resumiendo, por tanto, puede establecerse que el
estado de la técnica no permite ningún diagnóstico fiable del
cáncer.
Por tanto, la presente invención se basa en el
objetivo de lograr un procedimiento in vitro con el que
pueden reconocerse y valorarse de forma fiable y con suficiente
exactitud todas las formas de cáncer de mamíferos y especialmente
de seres humanos, también para pacientes individuales, y que haga
posible seguir el progreso de una terapia contra el cáncer
adecuada. El procedimiento deberá hacer posible además probar
principios activos para una acción antineoplásica.
Este objetivo se alcanza según la invención
mediante un procedimiento para la caracterización de células
cancerosas diseminadas y micrometastatizadas mediante analítica de
ácidos nucleicos en el que
- i)
- las células obtenidas a partir del fluido corporal de un individuo se investigan para por lo menos un ARNm de un primer gen específico para cáncer; y
- ii)
- las células cancerosas separadas a partir del fluido corporal de un individuo se investigan para por lo menos un ADN o ARNm de un segundo gen específico para cáncer o asociado a cáncer y la misma investigación se realiza con células no cancerosas del mismo individuo para la comparación,
siendo distintos el primer y el segundo gen.
Por caracterización se entiende según la
invención todas las medidas que pueden realizarse en células de
mamíferos y especialmente de seres humanos para registrar
cualitativa o cuantitativamente uno, dos, tres, cuatro, cinco, 6 a
10, 11 a 20 o más genes específicos para cáncer y/o asociados a
cáncer de estas células. Debido a los resultados obtenidos por la
caracterización, luego puede realizarse la identificación de las
células. Esto comprende según la invención no sólo la detección
cualitativa de las células cancerosas en circulación, sino que
también puede incluir su cuantificación y/o información sobre su
procedencia y comportamiento, por ejemplo, en lo referente a la
formación de metástasis o en las conductas terapéuticas más
distintas, por ejemplo citotóxicas.
A las células cancerosas en circulación
pertenecen según la invención sobre todo aquellas células cancerosas
que se han desprendido del tumor primario, es decir, células
cancerosas diseminadas y micrometastatizadas. A continuación se
habla de células cancerosas en circulación con el fin de
simplificación. Como la diseminación de estas células depende
generalmente de la vascularización del tumor primario, las células
cancerosas en circulación pueden encontrarse especialmente en la
sangre, siendo también adecuados médula ósea y ganglios linfáticos.
Correspondientemente, según la invención se investigan fluidos
corporales como sangre, linfa, orina, médula ósea y distintos
fluidos de irrigación de órganos como lavado bronquial, fluido de
irrigación pancreático o de la vejiga.
Según la invención se diferencia entre genes
específicos para cáncer y asociados a cáncer. Específico para
cáncer en el sentido según la invención son aquellos genes mediante
los cuales una célula cancerosa en circulación puede reconocerse
como tal. Por el contrario, los genes asociados a cáncer no son
específicos para células cancerosas. También pueden expresarse en
células sanas o en una pluralidad de otras enfermedades distintas,
por ejemplo, inflamaciones. No obstante, su expresión puede
modularse de forma característica en células cancerosas en
comparación con células no
cancerosas de manera que son posibles otras conclusiones sobre el tipo y el comportamiento de las células cancerosas.
cancerosas de manera que son posibles otras conclusiones sobre el tipo y el comportamiento de las células cancerosas.
En este sentido, naturalmente también es posible
que un gen determinado pueda contribuir a la caracterización tanto
específica para cáncer como asociada a cáncer. Por ejemplo, un gen
puede presentar una mutación que conduce a la expresión anómala de
una proteína reguladora del ciclo celular y por consiguiente a la
degeneración de la célula afectada. Por tanto, este gen mutado es
específico para cáncer y la investigación según la invención para
la detección de este gen mutado sirve para la caracterización
específica para cáncer. Además, un análisis de la expresión anómala
de este gen también puede contribuir a la caracterización asociada
a cáncer ya que el tipo o la cantidad de productos de expresión
correspondientes son importantes para el ciclo celular y de esta
manera son posibles otras conclusiones sobre el tipo y el
comportamiento de las células cancerosas.
La investigación de genes específicos para
cáncer y asociados a cáncer puede realizarse en cualquier forma
concebible para el experto. Así puede investigarse un gen según la
invención al nivel del ADN, al nivel del ARN y/o al nivel de las
proteínas. Al nivel del ADN se investiga preferiblemente ADN
genómico para mutaciones, amplificaciones, LOH, translocaciones y/o
polimorfismos. Al nivel del ARN y al nivel de las proteínas se
investigan productos de expresión, concretamente preferiblemente
productos de transcripción como ARNm o productos de traducción como
proteínas. Se prefieren procedimientos con cuya ayuda puede
evaluarse la participación de un gen en el estado de células en
circulación en el momento de la investigación, por ejemplo, la
investigación de ARNm especialmente en cuanto a la cantidad
presente en una célula de un ARNm determinado. Si el procedimiento
según la invención incluye una investigación de un fluido corporal
para proteínas, entonces se trata especialmente de aquellas que son
expresadas por los genes específicos para cáncer y/o asociados a
cáncer. A continuación, siempre y cuando no se especifique otra
cosa, se habla en conjunto de una investigación o análisis de los
genes según la invención.
Los genes específicos citados en la siguiente
descripción se denominan frecuentemente con abreviaturas o códigos
que normalmente se usan y, por tanto, con conocidos para el experto.
Además, para aclaración puede remitirse al glosario adjunto al
final de la presente descripción.
A los genes específicos para cáncer según la
invención pertenecen especialmente dos clases de genes que
desempeñan una función esencial en la carcinogénesis: oncogenes,
que se forman mediante la mutación de los denominados
proto-oncogenes, y los genes supresores de tumores
mutados. Ambos dirigen en su forma normal el ciclo vital de una
célula: los proto-oncogenes promueven el crecimiento
celular, los genes supresores de tumores lo inhiben. Los oncogenes
son favorecedores del cáncer ya que estimulan a la célula para una
proliferación excesiva, mientras que los genes supresores de
tumores contribuyen luego a la carcinogénesis, si se inactivan
mediante mutación, y como consecuencia la célula pierde un
inhibidor del crecimiento por lo que normalmente se previene una
proliferación inadecuada. Los oncogenes codifican, por ejemplo,
factores de crecimiento y sus receptores, proteínas señal, factores
de transcripción y una pluralidad de otras proteínas de las que
algunas desempeñan una función importante, por ejemplo, en la
apoptosis. A los oncogenes pertenecen, por ejemplo, genes como la
familia de bcl-2, mdm2, c-abl, la
familia de myc, por ejemplo c-, N-, R-, L- y B-myc,
la familia de ras, por ejemplo, H-, K- y N-ras,
erb-B2, que también se llama neu,
erb-B, PDGF, RET y oncogenes virales de distintos
virus tumorales como papovavirus, por ejemplo virus SV40, del
polioma y papiloma como HPV, adenovirus, determinados herpesvirus,
poxvirus, virus de la hepatitis B (gen HBx), virus de la hepatitis
C, HTLV-1, transcrito de fusión E1A en adenovirus,
transcritos de fusión E6 y E7 en HPV y EBV en el linfoma de
Burkitt.
Según la invención, los oncogenes preferidos son
genes de la familia de ras, erb-B2,
erb-B, c-myc, mdm2,
bcl-2, virus de la hepatitis B (gen HBx), virus de
la hepatitis C, HTLV1, transcrito de fusión E1A en adenovirus,
transcritos de fusión E6 y E7 en HPV y EBV en el linfoma de Burkitt.
Se prefieren muy especialmente c-myc,
k-ras y erb-B2.
A los genes supresores de tumores pertenecen,
por ejemplo, los genes de la familia de APC (FAP), DCC, DPC4,
NF-1, NF-2, MTS1, RB, p53, WT1,
BRCA1, BRCA2, VHL, MSH2, MLH1 y WAF1.
Según la invención, los genes supresores de
tumores preferidos son p53, RB, APC, DCC, BRCA1, BRCA2, MSH2, MLH1
y WAF1. Se prefieren muy especialmente p53, RB, APC, DCC y DPC4.
A los genes específicos para cáncer también
pertenecen, además de los oncogenes y los genes supresores de
tumores mutados anteriores, genes que están desactivados en células
no cancerosas en los fluidos corporales investigados según la
invención, es decir, no se expresan o sólo en cantidades
insignificantes. Por tanto, si se detectan productos de
transcripción y/o de traducción de estos genes en un fluido
corporal, por ejemplo, sangre, esto indica la presencia de células
cancerosas en circulación en el fluido corporal afectado.
A éstos pertenecen, por ejemplo, hCG, hTG,
calcitonina, albúmina, proteínas tensioactivas, telomerasa,
distintas translocaciones, Stat5a, variantes de receptores
esteroideos (ER, AR), receptor de progesterona, distintos genes que
presentan una LOH, CEA, PSM, PSA, AFP, tirosinasa, MAGE3, Mucl8,
MUC1, citoqueratina, especialmente CK20 y CK19, investigaciones de
LOH en distintas secciones de cromosomas mediante numerosos
microsatélites, hormona del tracto gastrointestinal como motilina,
enteroglucagón, GIP, gastrina, CCK o PYY, y neurotensina. Según la
invención se prefieren CEA, PSM, MUC1 (variante de corte y empalme
específica para tumores), AFP, citoqueratina, tirosinasa, MAGE3,
MUC18, variantes de corte y empalme específicas para tumores del
receptor de estrógeno y andrógeno, y EGP.
A los genes de este tipo también pertenecen los
genes específicos para tejidos citados más adelante que, debido a
su especificidad por tejidos, contribuyen a la caracterización
asociada a cáncer según la invención, pero que, debido a la
particularidad del objeto de investigación, concretamente células
cancerosas en circulación en un fluido corporal desprendidas del
tumor primario, también puede recurrirse a la caracterización
específica para cáncer.
Además, también puede recurrirse a oncoproteínas
pronósticas como anti- p53, pan p53, p53 o
c-erb-B2 para la investigación
específica para cáncer.
Según una forma de realización preferida de la
presente invención, un fluido corporal se investiga para por lo
menos un gen específico para cáncer y por lo menos un gen asociado a
cáncer. Además, adicionalmente se investigan células obtenidas a
partir del fluido corporal de un individuo para por lo menos un gen
asociado a cáncer que esencialmente no se expresa en células no
cancerosas del fluido corporal investigado; y/o adicionalmente se
investigan células cancerosas separadas a partir del fluido corporal
de un individuo para por lo menos un gen asociado a cáncer y la
misma investigación se realiza con células no cancerosas del mismo
individuo para la comparación.
Los genes asociados a cáncer según la invención
comprenden un amplio espectro de funciones. Especialmente son
adecuados genes específicos para tejidos, es decir, genes
organotípicos (morfogenes) que proporcionan información sobre la
procedencia de las células cancerosas en circulación de manera que
puede deducirse la localización del tumor primario, la fuente de
diseminación; genes que caracterizan la capacidad de metastatización
de células cancerosas; genes que codifican receptores de hormonas
esteroideas de manera que son posibles informaciones sobre el estado
del receptor de las células cancerosas; genes de
quimiorresistencia; o genes cuya expresión guarda una relación con
la modulación de la respuesta inmunitaria, así como con la
proliferación celular y la apoptosis de células cancerosas en
circulación. La expresión de estos genes asociados a cáncer puede
modularse de forma característica en células cancerosas de manera
que el patrón de expresión resultante también pueda dar una
indicación de cáncer.
Los genes específicos para tejidos asociados a
cáncer codifican frecuentemente marcadores organotípicos, es decir,
proteínas o antígenos, debido a los cuales puede deducirse la
procedencia de la célula que expresa el gen. A éstos pertenecen,
por ejemplo, genes específicos para el hígado como albúmina o AFP;
específicos para la próstata como AR, PSM, hK2 o PSA; específicos
para mama, ovario y/o cuello de útero como
\beta-hCG, AR, PR, SCCA-1,
maspina o BA46; específicos para colorrectal como CCK,
enteroglucagón, GIP, gastrina, motilina o PYY; específicos para el
páncreas como PYY; específicos para melanoma como MAGE1, MAGE3,
Muc18 o tirosinasa; específicos para glándulas tiroideas como hTG;
específicos para los pulmones como SF, SF-R,
proteínas tensioactivas, por ejemplo SP-A y
SP-C, CC10, N-CoR o RAR\beta2;
específicos para la vejiga como EGF-R y
\beta-hCG; específicos para el endometrio como
SCCA.
Para la caracterización específica para tejidos
también puede recurrirse a oncogenes y/o genes supresores de
tumores mutados cuando indican determinadas formas de cáncer.
Ejemplos de éstos son mutaciones asociadas a tumores como
translocación 14;18 (bcl-2) para linfomas,
translocación 9;22 (BCR/ABL) para leucemias mieloides crónicas,
translocación 15;11 para leucemias no linfocíticas agudas,
translocación 2;13 (PAX3-FKHR) y translocación 1;13
(PAX7-FKHR) para rabdomiosarcomas alveolares,
translocación 11;22 para sarcomas de Ewing, translocación 12;16
para liposarcomas mixoides, translocación x;18 para sarcomas
sinoviales; BRCA-1 y BRCA-2 para
carcinomas de mama, DPC-4 para carcinomas de
páncreas, erb-B para glioblastomas,
MLH-1 y MSH-2 para CCHNP (cáncer de
colon hereditario no polipósico "hereditary nonpolyposis colon
cancer"), NF-2 para
neurofibromatosis-1, NF-1 para
neurofibromatosis, RET para carcinomas de las glándulas tiroideas,
RB para retinoblastomas, VHL para carcinomas de riñón,
WT-1 para tumores de riñón y k-ras
para carcinomas de colon.
La caracterización de la capacidad de
metastatización de células cancerosas en circulación ocupa una
posición especial según la invención. Para este fin, las células se
investigan especialmente para genes que codifican factores de
angiogénesis, de crecimiento y de motilidad, factores de degradación
de la matriz como proteasas y sus inhibidores, o factores de
adhesión, como adherinas.
A los factores de angiogénesis pertenecen, por
ejemplo, aFGF y bFGF, así como sus receptores aFGF-R
y bFGF-R, VEGF y sus receptores
VEGF-R1 y VEGF-R2, así como
GD-AIF.
A los factores de crecimiento pertenecen, por
ejemplo, TGF-\alpha y TGF-\beta,
IGF, IGF-BP3, erb-B
(EGF-R), PDGF y EGF.
A los factores de motilidad estimulantes de la
migración pertenecen, por ejemplo, el factor de dispersión
SF-L y su receptor SF-R
(c-met).
Las proteasas y sus inhibidores comprenden, por
ejemplo, hidrolasas de matriz como MMP (metaloproteasas de matriz),
MT-MMP, UPA (activador de plasminógeno tipo
urocinasa) o sus inhibidores, como PAI1 y PAI2 (inhibidor del
activador de plasminógeno) o TIMP (inhibidores de tejido de
metaloproteasas).
A las adherinas pertenecen proteínas de adhesión
como cadherinas, por ejemplo E-cadherina, cateninas,
por ejemplo \beta-catenina, selectinas, por
ejemplo E-, P- y L-selectina, así como sus
receptores, CD44 (variantes estándar y de corte y empalme),
integrinas e ICAM.
Según la invención, los genes preferidos para la
caracterización de la capacidad de metastatización son factores de
angiogénesis (bFGF y bFGF-R; VEGF y
VEGF-R), proteasas (UPA; PAI; MMP; TIMP), adherinas
(E-cadherina; \alpha-catenina;
\beta-catenina; selectina-L y -R;
CD44), factores de motilidad SF-L y
c-met y el supresor de metástasis nm23.
De los genes receptores de hormonas esteroideas
se utilizan según la invención preferiblemente los genes que
codifican el receptor de estrógeno, progesterona o andrógeno (ER, PR
o AR).
La caracterización de genes de
quimiorresistencia de células cancerosas en circulación también es
según la invención de gran importancia ya que las células
cancerosas son frecuentemente resistentes a fármacos, en parte
también son multirresistentes, y una caracterización de estos genes
puede contribuir a la evaluación de las posibilidades de éxito de
determinadas terapias contra el cáncer, ejemplos de tales genes de
quimiorresistencia son MDR1, que codifica la
P-glicoproteína, nm23, hMLH1, gp170, MRP1, el gen de
la topoisomerasa, el gen de
glutatión-S-transferasa-pi,
el gen LRP y los genes que codifican \alpha- o
\beta-tubulina.
Los genes de quimiorresistencia preferiblemente
investigados según la invención son MDR1, MRP1, el gen de la
topoisomerasa II, el gen LRP, el gen de
\beta-tubulina y el gen de
glutatión-S-transferasa-pi.
Para la caracterización de una modulación de la
respuesta inmunitaria puede servir, por ejemplo, la evaluación de
la citotoxicidad mediada por células T y NK y/o la citotoxicidad
mediada por células dependientes de anticuerpos (ADCC). Para este
fin pueden investigarse células efectoras inmunológicas,
especialmente células NK, H1/TH2 y CD8, por una parte, y células
cancerosas en circulación, por otra parte, por ejemplo, para el gen
de TNF-\alpha (factor de necrosis tumoral), genes
que codifican interferones, por ejemplo \alpha- y
\gamma-IFN, genes de ligandos de FAS y receptores
de FAS, perforina, bcl-2, bax y granzimas. Se
prefieren FAS-R y FAS-L, perforina y
granzimas.
Las propiedades de proliferación y apoptosis de
células cancerosas en circulación se investigan según la invención
mediante genes que guardan relación con el estado de proliferación y
apoptosis de células, especialmente de células cancerosas. Además,
entre otros también pertenecen algunos de los oncogenes o
proto-oncogenes anteriormente mencionados y genes
supresores de tumores o genes supresores de tumores mutados que,
además de la caracterización específica para cáncer, también pueden
contribuir a la caracterización asociada a cáncer debido a su patrón
de expresión. Según la invención se recurre, por ejemplo, a p53,
genes activados (Bax; FAS-L y -R; ciclinas A, B1,
D1, D2, D3, E o G; GADD45; GD-AIF; HIC1;
IGF-BP3; mdm2; p21) e inactivados
(bcl-2; c-myc; bFGF,
c-fos; HSP70; IL-6; MDR1; PCNA)
transcripcionalmente de forma específica para secuencias por p53,
genes expresados al inicio de la apoptosis y de la parada del ciclo
celular (aparte de p53, TNF-\alpha,
TNF-R1, TNF-R2,
DPC-4, IFN-y y
FAS-L y -R),
así como genes que se presentan en el crecimiento sin regular como erb-B2, EGF y otros factores de crecimiento autocrinos (TGF-\alpha; PDGF). Se prefieren Bax, FAS, ciclinas, mdm2, p21, p16, bcl-2, c-myc, FGF, MDR1, TNF-\alpha, IFN-y, erb-B2, EGF y otros factores de crecimiento autocrinos.
así como genes que se presentan en el crecimiento sin regular como erb-B2, EGF y otros factores de crecimiento autocrinos (TGF-\alpha; PDGF). Se prefieren Bax, FAS, ciclinas, mdm2, p21, p16, bcl-2, c-myc, FGF, MDR1, TNF-\alpha, IFN-y, erb-B2, EGF y otros factores de crecimiento autocrinos.
Para la investigación biológica de tumores, es
decir, para la caracterización de una modulación de la respuesta
inmunitaria, de las propiedades de proliferación y apoptosis se
investigan preferiblemente ciclinas, especialmente las ciclinas B1,
D1 y E, Ki67, FAS-L, FAS-R, bax y/o
bcl-2.
La investigación según la invención de fluidos
corporales se realiza mediante análisis de ácidos nucleicos. A
éstos pertenecen, por ejemplo, investigaciones de ADN o ARN,
especialmente ARNm, con ayuda de técnicas que son conocidas para el
experto como técnicas de secuenciación, técnicas de hibridación, por
ejemplo, transferencia de Northern o Southern, hibridación en
microchips, especialmente procedimientos que se basan en la reacción
en cadena de la polimerasa (PCR) y también técnicas en las que el
ADN o ARN que va a investigarse se transcribe y/o traduce
inicialmente in vitro. Según la invención, cada fluido
corporal puede investigarse con ayuda de un análisis de ácidos
nucleicos. De manera ventajosa se recurre a sangre, especialmente
cuando se investiga ARNm. Para la investigación de un gen también
puede utilizarse naturalmente una combinación de diferentes
análisis de ácidos nucleicos.
La investigación de un fluido corporal puede
realizarse mediante la aplicación de procedimientos inmunológicos
conocidos. A éstos pertenecen, por ejemplo, experimentos de
inmunoprecipitación y competición, inmunofluorescencia,
procedimiento de tinción inmunohistoquímica, transferencia de
Western, citometría de flujo, ELISA, entre otros, así como
procedimientos de espectrometría de masas. Como los procedimientos
inmunológicos se refieren generalmente a determinadas interacciones
antígeno-anticuerpo, tales procedimientos sirven
preferiblemente para la investigación del fluido corporal en
proteínas, tratándose especialmente de proteínas que se expresan por
los genes anteriormente descritos. Para este fin, los anticuerpos
eventualmente necesarios son o conocidos para el experto o pueden
obtenerse según procedimientos habituales. Según la invención se
utilizan procedimientos inmunológicos preferiblemente para la
investigación de sangre y especialmente de médula ósea. Con los
procedimientos inmunológicos pueden analizarse de manera ventajosa,
por ejemplo, las siguientes proteínas: P53, ERB-B2 y
antígenos tumorales mediante ELISA y procedimientos similares;
ligando de FAS y receptor de FAS, fosfatidilserina, citocinas,
perforina, citoqueratinas y ciclinas con ayuda de
inmunofenotipado.
También puede ser ventajosa una combinación de
procedimientos inmunológicos y análisis de ácidos nucleicos.
Muchos de los genes específicos para cáncer y
asociados a cáncer se investigan preferiblemente mediante ARNm. Una
técnica aplicada para este fin es la hibridación directa de ARNm y/o
ADNc (cualitativamente/cuantitativamente) sobre una matriz sólida
(por ejemplo, en forma de microchips) con oligonucleótidos
inmovilizados o estreptavidina inmovilizada y oligonucleótidos
biotinilados. En éstos se hibridan ARNm, ADNc o productos de PCR de
cadena doble. Para la introducción de la señal están a disposición
distintas formas, por ejemplo, extensión de cebadores mediante dNTP
y ddNTP marcados. El principio de detección se elige
correspondientemente al marcado: radiactividad, fluorescencia,
quimioluminiscencia u otros procedimientos conocidos para el experto
para este fin.
Especialmente se sirve de una técnica conocida
que combina la transcripción inversa (RT) y la reacción en cadena
de la polimerasa (PCR) y a continuación se denomina
RT-PCR. En este procedimiento se aísla inicialmente
el ARNm de las células de un fluido corporal según la invención.
Éste se transcribe luego con ayuda de la transcriptasa inversa para
dar ADNc, que se amplifica sucesivamente con ayuda de PCR. Los
productos de PCR así obtenidos pueden introducirse luego o a un
análisis de fragmentos, opcionalmente después de una purificación
adecuada, secuenciarse directa o indirectamente mediante otros
ciclos de clonación o también expresarse in vitro. La
cuantificación del ARNm investigado se realiza mediante distintos
controles internos, preferiblemente en forma de equivalentes de
células o ADNc o ARNc clonados mediante cebadores marcados con
fluorescencia, mediante PCR "en tiempo real" o mediante
hibridación de ARN en microchips. La cuantificación específica para
células de genes se realiza mediante patrones internos,
especialmente de ARN independiente del tipo de célula (ADNc), que
codifica, por ejemplo, GAPDH,
\beta-microglobulina, L32 o
\beta-actina. La especificidad se garantiza
mediante extensos controles como muestras de desapareamiento o la
secuenciación de ADNc.
En los genes específicos para cáncer, que
preferiblemente se caracterizan mediante análisis de ARNm en fluidos
corporales, se trata especialmente de los genes anteriormente
descritos que en el caso de células no cancerosas no se expresan
esencialmente en el fluido corporal investigado.
Los genes asociados a cáncer se caracterizan
generalmente preferiblemente mediante análisis de ARNm de fluidos
corporales. A éstos pertenecen especialmente los siguientes genes:
bFGF, bFGF-R, VEGF, VEGF-R, MMP,
TIMP, MDR1, MRP, LRP, topoisomerasa II,
glutatión-S-transferasa, receptor de
progesterona, Bax, bcl-2, FAS-L,
FAS-R, mdm2, p21, p16, c-myc,
TNF-\alpha, IFN-y,
erb-B2 y EGF.
Un análisis de ADN, especialmente el análisis de
secuencias de ADN genómico, se prefiere generalmente para la
investigación de oncogenes y/o genes supresores de tumores mutados y
puede ser especialmente ventajoso en la caracterización de los
siguientes genes: p53, familia de ras, erb-B2,
c-myc, mdm2, BRCA1, BRCA2, APC, DCC, RB MSH2, MLH1,
RET e investigaciones de LOH en distintas secciones de cromosomas
mediante numerosos microsatélites.
Los fluidos corporales pueden analizarse en el
estado en el que se obtuvieron. No obstante, las muestras se
preparan según la invención generalmente inicialmente mediante
medidas por sí conocidas para la posterior investigación
obteniéndose células o concentrados que contienen células o líquidos
que contienen células a partir del fluido corporal. Esto es
especialmente válido para el análisis de ácidos nucleicos. Así
pueden usarse de manera ventajosa, por ejemplo en lugar de sangre,
determinados líquidos que contienen células o concentrados
celulares derivados de la misma, por ejemplo, el llamado
recubrimiento de Buffy o fracciones celulares después de la
centrifugación por densidad. Las células obtenidas a partir del
fluido corporal pueden investigarse luego especialmente para tales
genes que esencialmente no se expresan en células no cancerosas del
fluido corporal investigado.
En la investigación de genes que también son
expresados por células no cancerosas en el fluido corporal
investigado o en investigaciones en ADN genómico generalmente se
investiga según la invención células cancerosas separadas a partir
del fluido corporal.
Para separar células cancerosas pueden
utilizarse procedimientos conocidos, por ejemplo, procedimientos
físicos como microfiltración o centrifugación en gradiente de
densidad, o procedimientos de inmunoadsorción específicos para
antígeno en los que los anticuerpos específicos marcan las células
cancerosas de forma que a continuación puedan separarse. Los
anticuerpos adecuados (por ejemplo, anti-EGP) están
provistos, por ejemplo, de marcadores fluorescentes y especialmente
magnéticos de manera que en el uso de un anticuerpo específico para
células cancerosas marcado de esta forma pueden aislarse células
cancerosas después de la unión de tales anticuerpos en los llamados
citómetros. Para la elección de anticuerpos adecuados para los fines
de aislamiento de determinadas células cancerosas puede recurrirse
a la caracterización e identificación de estas células cancerosas
sin aislamiento previo. Preferiblemente, las células cancerosas se
aíslan en estado viable y especialmente capaz de proliferar. Los
ARNm deberán estar especialmente intactos para las investigaciones
anteriormente descritas.
Las fracciones celulares obtenidas después de
una separación deben cuantificarse luego contra marcadores
independientes del tipo de célula (por ejemplo, GAPDH,
\beta_{2}-microglobulina, L32 o
\beta-actina). Otra detección de la pureza puede
realizase mediante ARN que es específico para MNC (células
mononucleares) (perforina, CD45). Las distintas fracciones
celulares obtenidas después de la separación (fracción A: MNC
incluidas las células tumorales; fracción B: MNC después de la
eliminación de las células tumorales; fracción C: células tumorales
purificadas) también se comparan luego entre sí investigándose las
células cancerosas separadas y la misma investigación se realiza
con células no cancerosas del mismo individuo para la comparación.
De esta manera se incluyen controles propios de los pacientes en la
investigación.
Según una forma de realización especial de la
presente invención, las células cancerosas individuales se separan
del fluido corporal y éstas también se investigan por separado. Para
este fin, un genoma modificado de una célula degenerada por
separado puede analizarse mediante una llamada PCR de células
individuales mediante amplificación del genoma.
El aislamiento de células cancerosas en
circulación se realiza de manera ventajosa para investigaciones
genómicas y la investigación de genes que también son expresados
por células no cancerosas en el fluido corporal investigado, por
ejemplo, los siguientes genes:
- ADN:
- p53, familia de ras, erb-B2, c-myc, mdm2, RB, APC, DCC, investigaciones de LOH en distintas secciones de cromosomas mediante numerosos microsatélites:
- ARN:
- bFGF, bFGF-R, VEGF-R, MMP, TIMP, MDR1, MRP, LRP, topoisomerasa, glutatión-S-transferasa, Bax, bcl-2, FAS, mdm2, p21, p16, c-myc, FGF, MDR1, TNF-\alpha, IFN-y y EGF, AR, ER, EGP y SF.
\vskip1.000000\baselineskip
Determinadas investigaciones según la invención
se realizan preferiblemente en cultivos celulares. Además, las
células cancerosas en circulación pueden aislarse en el modo
anteriormente descrito y a continuación cultivarse en condiciones
adecuadas. Para la biología tumoral (por ejemplo, la modulación de
la respuesta inmunitaria por células cancerosas o la proliferación)
de estas células puede facilitarse especialmente información de
cultivos in vitro.
Los genes que se caracterizan de manera
ventajosa en células cancerosas cultivadas in vitro son, por
ejemplo, los siguientes: Bax, FAS, ciclinas, mdm2, p21, p16,
bcl-2, c-myc, FGF, MDR1,
TNF-\alpha, IFN-y,
erb-B2 y EGF.
El procedimiento según la invención puede
aplicarse independientemente del estadio de un cáncer. Puede
utilizarse solo o en combinación con otros procedimientos de
diagnóstico del cáncer como procedimientos de obtención de imágenes
o basados en marcadores tumorales convencionales. El procedimiento
según la invención puede utilizarse para la prevención en la
aparición de los primeros indicios de advertencia de cáncer o, por
ejemplo, después de una terapia de un cáncer para el reconocimiento
temprano de la reaparición. Es adecuado para la caracterización e
identificación de todas las formas de cáncer siempre y cuando las
células cancerosas en circulación correspondientes están presentes
en los fluidos corporales investigados. A éstos pertenecen, por
ejemplo, cáncer abdominal, cáncer anal, cáncer pélvico, cáncer del
conducto biliar, cáncer de útero, cáncer de endometrio, cáncer
cerebral, cáncer de la cabeza y el cuello, cáncer de labio, cáncer
de la boca, cáncer de riñón, cáncer de parótida, cáncer de lengua,
cáncer inguinal, cáncer de tejido blando, linfomas, leucemias,
leucemias múltiples y preferiblemente carcinomas de mama, sarcomas,
carcinomas de ovario, carcinomas de pulmón, carcinomas de páncreas,
carcinomas de colon, carcinomas de recto, carcinomas de próstata,
carcinomas de hígado, carcinomas de vejiga, carcinomas de estómago,
carcinomas de las glándulas tiroideas, carcinomas de cuello de
útero, carcinomas de endometrio, melanomas, linfomas de no Hodgkin
y leucemias mieloides crónicas.
Especialmente interesante es la utilización del
procedimiento según la invención en formas de cáncer libres de
ganglios linfáticos ya que en este caso fracasan los procedimientos
convencionales basados en la investigación de ganglios linfáticos.
Si se detectan células cancerosas en circulación en tumores NO (por
ejemplo, un carcinoma de mama o de colon), debido a la constelación
especial, es posible una información específica para la elección de
terapia. Por tanto, en estos casos se indica preferiblemente una
terapia curativa complementaria en tumores avanzados opcionalmente
con una terapia inmunomoduladora adicional posterior.
Independientemente de si sólo se investigan
genes específicos para cáncer o adicionalmente también genes
asociados a cáncer, según la invención se investigan por lo menos
dos genes distintos de manera que según la invención se proporciona
un procedimiento para la caracterización múltiple de células
cancerosas diseminadas y micrometastatizadas.
Una primera aplicación del procedimiento según
la invención va dirigida a la detección de células cancerosas en
circulación. Para este fin se mide preferiblemente la expresión de
genes específicos para cáncer. Se prefieren especialmente análisis
de expresión de múltiples parámetros de tales genes que están
desconectados en células no cancerosas del fluido corporal
investigado. Estos análisis pueden comprender hasta aproximadamente
40 genes. Generalmente se investigan hasta aproximadamente 25
genes, preferiblemente de aproximadamente 2 a 10 genes y
especialmente de aproximadamente 3 a 7 genes. Preferiblemente se
analizan los ARNm correspondientes, especialmente mediante
RT-PCR.
Las combinaciones especialmente efectivas
comprenden los genes CEA y CK20 prefiriéndose el análisis de los
ARNm correspondientes. Estas combinaciones pueden complementarse
ventajosamente opcionalmente mediante una investigación de MUC1
analizándose especialmente la relación entre la variante de corte y
empalme 336BP específica para tumor y la variante de corte y
empalme 309BP natural. Las investigaciones de este tipo son
especialmente útiles para la detección de células cancerosas en
circulación de tipo carcinoma. En este contexto se prefieren
carcinomas ginecológicos como carcinomas de ovario, mama o distintos
carcinomas de útero, carcinomas de colon, carcinomas de pulmón,
carcinomas de estómago, carcinomas de glándulas tiroideas,
carcinomas de vejiga, carcinomas de endometrio y carcinomas de
próstata. La investigación puede realizarse sin separación previa de
las células cancerosas. En investigaciones en sangre se usa
preferiblemente la fracción de MNC.
Otras combinaciones efectivas comprenden el gen
MAGE3 y de tirosinasa prefiriéndose el análisis de los ARNm
correspondientes. Estas combinaciones pueden complementarse
ventajosamente opcionalmente mediante una investigación en Muc18.
Las investigaciones de este tipo son especialmente útiles para la
detección de células cancerosas en circulación de tipo
melanoma.
Los análisis de expresión previamente
mencionados pueden complementarse mediante otros procedimientos de
detección de genes específicos para cáncer. Para este fin se
realizan preferiblemente investigaciones en oncogenes y/o genes
supresores de tumores mutados recurriéndose especialmente a los
genes preferidos según la invención anteriormente mencionados de
este tipo. Los análisis de este tipo, especialmente para la
detección de mutaciones, amplificaciones, LOH, translocaciones o
polimorfismos, se realizan de manera ventajosa al nivel de ADN, por
ejemplo mediante técnicas de secuenciación o hibridación de DNA, y
pueden comprender hasta aproximadamente 40 genes. Generalmente se
investigan hasta aproximadamente 20 genes, preferiblemente de
aproximadamente 2 a 10 genes y especialmente de aproximadamente 3 a
7 genes.
Las combinaciones especialmente efectivas
comprenden los genes p53 y/o erb-B2. En este caso se
investiga p53 preferiblemente mediante el ADNc correspondiente para
mutaciones y/o LOH y erb-B2 preferiblemente al nivel
de ADN para amplificaciones. Estas combinaciones pueden
complementarse ventajosamente opcionalmente mediante
investigaciones de c-myc y/o K-ras,
investigándose c-myc preferiblemente al nivel de ADN
para la amplificación y K-ras para mutaciones, y/o
mediante investigaciones de RB, APC, DCC y/o DPC4, preferiblemente
mediante LOH.
Esta primera aplicación puede complementarse
investigando las células cancerosas en circulación para genes que
permiten informaciones sobre su origen, es decir, permiten una
localización de órganos de la fuente de diseminación. Esto también
puede producirse en forma de análisis de expresión de múltiples
parámetros en los que se miden morfogenes organotípicos. Tales
análisis pueden comprender hasta aproximadamente 36 genes.
Generalmente se investigan hasta aproximadamente 14 genes,
preferiblemente de aproximadamente 1 a 8 y especialmente de 2 a 5
genes.
Las combinaciones especialmente efectivas
comprenden los genes maspina y/o PR especialmente para la detección
de carcinomas de mama analizándose preferiblemente los ARNm
correspondientes. Ventajosamente, esta combinación puede
complementarse mediante investigaciones en
\beta-hCG y/o ER. Lo mismo rige para la detección
de carcinomas de ovario y de cuello de útero pudiendo
complementarse en este caso ventajosamente mediante una
investigación de SCCA.
Otras combinaciones especialmente efectivas
comprenden los genes PSM y/o PSA especialmente para la detección de
carcinomas de próstata analizándose preferiblemente los ARNm
correspondientes. Ventajosamente, esta combinación puede
complementarse mediante investigaciones de hK2.
Otras combinaciones especialmente efectivas
comprenden el gen gastrina especialmente para la detección de
carcinomas de colon analizándose preferiblemente los ARNm
correspondientes. Una combinación de GIP y/o motilina también
ofrece una posibilidad de detección efectiva de carcinomas de
colon.
Otras combinaciones especialmente efectivas
comprenden SP-A y SP-C especialmente
para la detección de carcinomas de pulmón analizándose
preferiblemente los ARNm correspondientes. Ventajosamente, esta
combinación puede complementarse mediante investigaciones de
\betahCG.
Otras combinaciones especialmente efectivas
comprenden EGF-R y \betahCG especialmente para la
detección de carcinomas de vejiga.
Otra aplicación del procedimiento según la
invención se refiere a la creación de un perfil de riesgo de células
cancerosas en circulación detectadas debido al cual puede hacerse
un pronóstico. Para este fin se evalúan preferiblemente las
propiedades de metastatización de estas células cancerosas.
El potencial de riesgo del tumor se describe
además por el análisis de mutaciones y amplificaciones y/o expresión
reforzada/reducida de determinados genes que influyen en el
comportamiento de crecimiento de las células cancerosas (por
ejemplo: c-myc,
c-erb-B2, c-fos,
erb-B, mdm2, nm23, p16, p21).
Otro factor importante para estimar el riesgo es
la sensibilidad del tumor a ataques inmunológicos del organismo
afectado. Muchos mecanismos efectores producen la apoptosis de las
células diana (células tumorales). Cuando un tumor se resiste a
estos mecanismos de defensa, esto es una enorme ventaja para éste.
Los genes relevantes para la apoptosis pueden mostrar en qué grado
un tumor es resistente o sensible a los ataques de las células de
defensa, o eventualmente incluso pueden atacar por sí mismos a las
células efectoras (por ejemplo: perforina, granzima, bax,
bcl-2, fas, fas-L, GADD45, p53,
TNF-R1, TNF-R2).
También es de enorme importancia la
cuantificación de células tumorales en la sangre. Es decisivo si se
diferencia el número de células tumorales en circulación antes y
después de la intervención quirúrgica o terapia. Una cuantificación
de las células cancerosas mediante los genes específicos para cáncer
anteriormente especificados proporciona una información tal con
ayuda de patrones longitudinales.
Para crear un perfil de riesgo tal se prefieren
análisis de expresión de múltiples parámetros. Éstos pueden
comprender hasta aproximadamente 50 genes. Generalmente se
investigan hasta aproximadamente 25 genes, preferiblemente de
aproximadamente 2 a 15 genes y especialmente de aproximadamente 4 a
12 genes.
Para estimar el riesgo se prefiere especialmente
la evaluación de las propiedades de metastatización; en este caso
se refiere preferiblemente a la capacidad de las células cancerosas
para la degradación de la matriz y para controlar la angiogénesis.
En este contexto se recurre especialmente a los factores de
angiogénesis y/o proteasas anteriormente mencionados, así como a
sus antagonistas.
Las combinaciones especialmente efectivas para
la caracterización de las propiedades de metastatización comprenden
bFGF, bFGF-R, VEGF-R1 y/o
VEGF-R2 opcionalmente junto con VEGF, investigándose
preferiblemente los ARNm correspondientes. Estas combinaciones
pueden complementarse opcionalmente mediante investigaciones de MMP,
especialmente MMP2, y/o TIMP, especialmente TIMP3, investigándose
también en este caso preferiblemente los ARNm correspondientes.
Las combinaciones efectivas para la
investigación biológica de tumores comprenden los genes
FAS-L- y FAS-R que se investigan
preferiblemente mediante los ARNm correspondientes. Ventajosamente,
esta combinación puede complementarse mediante investigaciones en
ciclinas, especialmente ciclina B1, D1 y E, Ki67, bax y/o
bcl-2.
Una ventaja especial del procedimiento según la
invención consiste en poder crear perfiles de riesgo individuales
para pacientes individuales. Como el procedimiento es especialmente
adecuado para la aplicación continua, es decir, puede repetirse en
cualquier momento, mediante la modificación de tales perfiles de
riesgo pueden facilitarse valiosas informaciones sobre el
desarrollo de un cáncer para un paciente individual. Otra ventaja
es que así no debe recurrirse a estadísticas que en general se basan
en encuestas en las que se promedian pacientes con condiciones muy
diferentes.
Otra aplicación del procedimiento según la
invención se refiere a la terapia de un cáncer detectado. Así pueden
facilitarse informaciones para la elección, control y resistencia
de la terapia.
Para la elección de la terapia son importantes
cuestiones que se refieren a la forma de terapia o la elección de
medicamentos. A ésta pertenecen, por ejemplo, decisiones de si la
terapia debe ser curativa o paliativa, complementaria o adaptada al
riesgo, así como la evaluación de la eficacia de una terapia contra
el cáncer. Por ejemplo, los agentes antineoplásicos (citostáticos)
que conducen a la muerte celular programada (apoptosis) se
comprueban para su eficacia investigándose genes asociados a la
apoptosis. Para este fin son especialmente adecuados los análisis
de distintos ARNm de los genes asociados a apoptosis anteriormente
descritos. Estas pruebas se realizan preferiblemente en células
cancerosas en circulación que se cultivan in vitro. Así no
tiene que administrarse al paciente ningún citostático.
Por tanto, otro campo de aplicación también es
el uso de células cancerosas diseminadas y micrometastatizadas
caracterizadas según la invención para probar principios activos
para su acción antineoplásica.
En principio, con el procedimiento según la
invención pueden evaluarse todas las terapias contra el cáncer. A
éstas pertenecen por ejemplo, vacunas, inmunomodulación, terapias
moleculares como sustitución de genes, nucleótidos antisentido,
ribozimas, anticuerpos monoclonales, inhibidores de MMP y virus
atenuados, por ejemplo, virus atenuados con E1B para la citólisis
de células cancerosas deficientes en p53wt.
Como el procedimiento según la invención se basa
en investigaciones de biología molecular, es excelentemente
adecuado para proporcionar información referente a la elección de
terapia que se adapta a la dotación molecular de las células
cancerosas investigadas.
Se parte de que una terapia contra el cáncer
satisfactoria conduce a la reducción y, en el mejor de los casos, a
la desaparición completa de células cancerosas en circulación y/o a
la pérdida de factores de riesgo. Si una forma de cáncer no
reacciona a una determinada terapia, generalmente se parte de que el
número de células cancerosas en circulación no disminuye, sino que
opcionalmente aumenta o que aumenta el riesgo específico para el
paciente. Por tanto, es posible evaluar el progreso de una
enfermedad cancerígena o su terapia mediante la aplicación
reiterada del procedimiento según la invención. Por tanto, mediante
una comparación dependiente del tiempo puede valorarse la eficacia
de una terapia y también reconocerse de manera sencilla resistencias
en comparación con determinadas formas de terapia. Además, su
aparición puede confirmarse mediante investigaciones de células
cancerosas en circulación para genes de quimiorresistencia después
de la administración de fármacos a los pacientes.
Los análisis de distintos genes diana de
determinados fármacos, como EGP (anticuerpo contra antígeno
epitelial), c-erb-B2 (complejo de
anticuerpo
anti-erb-B2-mostaza),
MMP (terapia anti-proteasa), PR y ER (terapia
antihormonal), bFGF (terapia anti-bFGF) o
topoisomerasa II (doxorubicina, entre otros), pueden proporcionar
información sobre la acción específica de las sustancias
cuantificándose directamente los "parámetros diana". El éxito
de una terapia citostática con taxanos estabilizadores de
microtúbulos (por ejemplo, taxol) puede predecirse mediante la
detección de la expresión de ARN de las moléculas diana monoméricas
(\alpha- y \beta-tubulinas) cuya unión se
previene con taxol. Una resistencia de células cancerosas contra
citostáticos (por ejemplo, cisplatino) puede detectarse mediante la
pérdida de la expresión de genes de reparación de ADN (por ejemplo,
hMLH1). Además, mediante la generación de sistemas in vitro
de células tumorales propias del paciente puede probarse previamente
directamente la acción de los fármacos más distintos para
determinar de esta manera la mejor forma de tratamiento
posible.
Las combinaciones especialmente efectivas para
valorar una quimiorresistencia posiblemente existente comprenden
los genes MDR1, MRP, topoisomerasa II y
glutatión-S-transferasa-pi
midiéndose, por ejemplo, los ARNm correspondientes. Adicionalmente,
también pueden investigarse mutaciones de
\beta-tubulina y la amplificación de MDR1. En
relación con la investigación de MDR1 también se recurre
frecuentemente al análisis de la bomba de MDR1 gp170 y/o a la
prueba de doxorubicina de eflujo de MDR1.
Una ventaja especial del procedimiento según la
invención consiste en poder caracterizar e identificar células
resistentes a terapia (enfermedad mínima residual "minimal
residual disease"; EMR) y, basándose en esto, una conducta
terapéutica ya citada puede extenderse de una forma adaptada al
riesgo para eliminar completamente las células cancerosas
residuales.
Aunque el procedimiento según la invención se ha
descrito en primera línea en cuanto a la caracterización de genes
humanos, no debe limitarse a esto. Más bien, para el experto se abre
una serie de otras aplicaciones como las aplicaciones en modelos de
animales para responder planteamientos que se corresponden o al
menos son similares a los anteriores.
Los agentes para la realización del
procedimiento según la invención deberán manipularse lo más
sencillamente posible y esencialmente estar listos para uso.
Ventajosamente, los agentes para la realización del procedimiento
según la invención se usan en forma de kit, por ejemplo, como kit de
prueba y/o diagnóstico. Un kit tal contiene por lo menos un
compartimento, por ejemplo un vial o tubo de ensayo, en el que los
agentes para la investigación de los genes anteriores según la
invención están contenidos, si es posible, en cantidades en
alícuotas. Normalmente, el kit comprende varios compartimentos
pudiendo asignarse a un compartimento de la investigación un
determinado gen, pero también puede comprender agentes que pueden
usarse para la investigación de varios genes. Eventualmente,
también pueden asignarse varios compartimentos de la investigación a
un determinado gen. Opcionalmente, el kit también comprende otro
compartimento para recoger la muestra de fluido corporal. El
contacto de la muestra de fluido corporal con los agentes para la
realización del procedimiento según la invención puede tener lugar
opcionalmente en otro compartimento. La elección de los agentes se
basa en los genes investigados y el procedimiento elegido.
Según la invención, los kits de diagnóstico y/o
de prueba pueden contener agentes para la preparación de la muestra
de fluido corporal, por ejemplo, agentes para la concentración de
células a partir de fluidos corporales como gradientes de densidad
y/o filtros, agentes para el aislamiento y la purificación de ADN
y/o ARN a partir de células, especialmente sistemas basados en
guanidinisotiocianato, columnas de centrifugación con fases sólidas
adecuadas y/o sistemas de oligo-dT; agentes para la
realización de la transcripción inversa (RT), por ejemplo,
transcriptasa inversa, tampones de RT, inhibidor de RNasa, cebadores
y/o dNTP adecuados; agentes para la realización de la PCR, por
ejemplo, polimerasa termoestable, tampones de PCR, MgCl_{2} y/o
dNTP; agentes para la realización de la digestión con enzimas de
restricción (RD), por ejemplo, enzima de restricción y tampones de
RD y/o agentes para el análisis de los productos obtenidos mediante
RT, PCR y/o RD, por ejemplo, geles o agentes para la preparación de
geles apropiados, ELISA, entre otros.
Por otra parte, muchos de los agentes necesarios
para la realización de los procedimientos anteriores también pueden
adquirirse, frecuentemente incluso en forma de kit, en el comercio
de manera que para la realización del procedimiento según la
invención sólo se requieren agentes complementarios. Los kits
complementarios según la invención ponen a disposición
preferiblemente cebadores, sondas y/o controles negativos/positivos
apropiados, así como opcionalmente otros coadyuvantes.
Según la invención se prefieren kits o kits
complementarios que hagan posible la investigación de la combinación
de genes anteriormente descrita que resulta efectiva. Los kits de
este tipo se usan con la finalidad de detectar cáncer en general,
localizar tumores primarios, realizar una estimación del riesgo y
del pronóstico o facilitar información en cuanto a una terapia.
Para una valoración comprensiva de un cáncer, los kits de este tipo
pueden combinarse en un tipo de sistema modular.
Por otra parte, los kits según la invención
también pueden contener agentes que hacen posible investigaciones
de genes para la caracterización específica para cáncer y asociada a
cáncer de un determinado tipo de cáncer. Por ejemplo, un kit
específico para melanoma puede contener por lo menos agentes para la
investigación de tirosinasa y bFGF, un kit específico para colon
por lo menos agentes para la investigación de CK20, bFGF y MMP2 y
un kit específico para mama por lo menos agentes para la
investigación de CK19, bFGF, MMP2 y PR.
Los siguientes ejemplos explicarán más
detalladamente la invención sin limitarla.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo de referencia
1
Se llena un tubo de centrífuga (50 ml) con 15 ml
de medio de gradiente de densidad (DGM) 1,077 (RT) y cuidadosamente
se recubre con 30 ml de sangre/PBS (sangre heparinizada o con EDTA).
Después de centrifugar 30 minutos 30 (800 g, TA), todas las células
de la interfase (MNC) se transfieren con una pipeta Pasteur a un
nuevo tubo de centrífuga (15 ml) relleno de 6 ml de PBS/aditivo
(PBS + BSA al 0,2%, azida de sodio al 0,02%, EDTA 1 mM). A partir
de aquí todas las etapas se realizan con enfriamiento (4ºC). Se
centrifuga (10 min a 600 g, 4ºC), las células se recogen en 10 ml
de PBS/aditivo y el número de células se determina mediante tinción
con azul de tripano (95 \mul de disolución TB + 5 \mul de
disolución celular) (número de células = número de células de 16
cuadrados pequeños (Neubauer) x 2x10^{6}). Se centrifuga (10 min a
400 g, 4ºC), las células se recogen en PBS/aditivo frío en hielo y
se transfieren a un tubo de reacción Eppendorf (1,5 ml) (a un número
de células de hasta 2,5 E7 en 0,5 ml; a de 2,5 E7 a 5E7 en 1 ml).
La fracción A (1/4 vol. a 20 ml, 1/6 vol. a 30 ml) se extrae luego
para el aislamiento de ARN/ADN, las células contenidas en ella se
centrifugan (400 g, 3 min), el sedimento resultante se resuspende
en 600 \mul de tampón de RLT-Me (del kit RNEasy
Blood de Quiagen) y se almacena a -80ºC. Finalmente se añade
reactivo de bloqueo de FC al 10%.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo de referencia
2
Se lavan perlas anti-epiteliales
(40 \mul/0,5 ml) dos veces con 800 \mul de PBS/aditivo en una
pista magnética. Se añaden 40 \mul/0,5 ml de perlas lavadas a un
tubo de reacción Eppendorf, el tubo de reacción se deja rotar en un
rotor 25 min a 4ºC y luego se coloca en una gradilla de tubos de
reacción y la suspensión de la tapa del tubo de reacción se añade
al tubo de reacción. El tubo de reacción se coloca 1 min en MPC, la
suspensión celular se desecha, la pista magnética se quita (o se
saca el tubo), se añaden 800 \mul de PBS/aditivo y se resuspenden
cuidadosamente. La última sucesión de pasos se repite 6 veces,
resuspendiéndose por última lugar en PBS/EDTA 1 mM (sin BSA).
El tubo de reacción se coloca 1 min en MPC y el
sobrenadante se elimina completamente. Las perlas resultantes con
células adherentes forman la fracción C. Ésta se resuspende para el
aislamiento de ARN/ADN en 200 \mul de trizol y se almacena a
-80ºC. Como marcador de pureza de la fracción C puede medirse ARNm
de perforina.
La evaluación se realiza mediante la
determinación del ARN asociado a tumor y específico para tumor, así
como mediante la determinación del ARN de glicoproteína epitelial
mediante cuantificación del ARN de GAPDH.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo de referencia
3
El aislamiento de ADN/ARN se realiza de una
manera en sí conocida.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo de referencia
4
Para detectar células epiteliales en sangre, el
contenido de ARNm de CK20 se determina selectivamente para órganos
(ovario, colon > mama) mediante biología molecular con una
sensibilidad de más de 1 célula en 10^{6 }leucocitos. Además, se
investiga el contenido de ARNm de CEA. Esta detección de células
que forman la adherina oncógena CEA se realizó con una sensibilidad
de una célula cancerosa en 10^{6} leucocitos.
\vskip1.000000\baselineskip
Transcripción inversa (RT):
- \quad
- Se mezclaron los siguientes reactivos (mezcla de RT):
- 2,35 \mul de H_{2}O
- 4 \mul de 5x tampón de la primera cadena
- 2 \mul de DTT 0,1 M
- 0,15 \mul de RNA-Guard (38950 U/ml)
- 0,5 \mul de cebador al azar (500 \mug/ml)
- 0,5 \mul de mezcla de dNTP (20 mM de cada uno)
- 0,5 \mul de M-MLV (200 U/\mul)
\vskip1.000000\baselineskip
Se desnaturalizan 10 \mul de ARN aislado de
células mononucleares (5 ml de sangre) (aproximadamente 1 \mug) 1
min a 70ºC, se enfrían inmediatamente sobre hielo 3 min, se mezclan
sin burbujas de aire con 10 \mul de mezcla de RT, se incuban 60
min a 37ºC, se incuban 3 min a 95ºC, se enfrían inmediatamente sobre
hielo 3 min y o se introducen directamente a la PCR o se congelan a
-20ºC. PCR:
Por mezcla de PCR se mezclan los siguientes
reactivos (\mul):
La PCR se realiza en el detector de secuencias
ABI 7700 (TaqMan). Se usa un procedimiento de PCR de dos etapas. Se
utiliza el siguiente perfil de temperatura:
\vskip1.000000\baselineskip
- Pos. (CK20):
- línea celular de adenocarcinoma NCI-H508
- Neg. (CK20):
- línea celular de sarcoma de útero MES-SA/Dx5; linfocitos de un donante normal
- Pos. (CEA):
- línea celular de adenocarcinoma NCI-H508; línea celular de carcinoma de mama MCF7
- Neg. (CEA):
- linfocitos de un donante normal
\vskip1.000000\baselineskip
El rendimiento de la reacción de PCR que tiene
lugar se mide online para cada ronda de ciclos en el detector de
secuencias. La curva registrada en este caso del progreso de la
reacción sirve de base para la determinación de la cantidad de ADNc
que va a analizarse como equivalente del ARNm. La base es la
determinación de la transición de la reacción de PCR en la fase
exponencial.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo de referencia
5
Se realiza una determinación del ARNm de MUC1
para valorar la transcripción de mucina específica para
carcinoma.
\vskip1.000000\baselineskip
Transcripción inversa (RT):
- \quad
- Se mezclan los siguientes reactivos (mezcla de RT):
- 4 \mul de MgCl_{2} 25 mM
- 2 \mul de tampón de PCR II (10x)
- 2 \mul de dCTP 10 mM
- 2 \mul de dGTP 10 mM
- 2 \mul de dATP 10 mM
- 2 \mul de dTTP 10 mM
- 1 \mul de inhibidor de RNAsa (2000 U)
- 1 \mul de M-MLV (5000 U)
- 1 \mul de hexámero al azar (5 nmol)
\vskip1.000000\baselineskip
Se añaden 5 \mul de ARN (aproximadamente 1
\mug) aislado a partir de células mononucleares (5 ml sangre) a
la mezcla de RT, se incuban 10 min a temperatura ambiente, 15 min a
42ºC, 5 min a 99ºC y 5 min a 5ºC.
Por mezcla de PCR se mezclan los siguientes
reactivos (\mul):
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
La PCR se realiza en el termociclador Perkin
Elmer 9600 ó 2400. Se utiliza el siguiente perfil de
temperatura:
La mezcla de PCR se enfría hasta 4ºC.
\vskip1.000000\baselineskip
- Pos.:
- MES-SA/Dx 5 (línea celular de sarcoma de útero); sólo expresa la variante de corte y empalme de 336 pb
- Neg.:
- linfocitos de un donante normal; sólo expresan la variante de corte y empalme de 309 pb
\vskip1.000000\baselineskip
Se mezclan 12 \mul de formamida, 0,5 \mul de
Genescan Tamra 500 (PE) y 1 \mul de mezcla de PCR, se
desnaturalizan 3 min a 95ºC, se incuban sobre hielo y se analizan
en ABI Genescan 310 (tampón ánodo: 2% de polímero, 1x tampón
Genetic Analyzer; tampón cátodo: 3% de polímero, 40% de urea, 1x
tampón Genetic Analyzer; tiempo de inyección: 10 s; tensión de
inyección: 7 kV; tensión de elución: 13 kV; temperatura de elución:
30ºC; tiempo de elución: 18 min; módulo: Short Denatured C).
Para la evaluación se determinan las áreas de
los picos de los productos de PCR (336 pb y 309 pb). Se forma el
cociente entre el área de los picos de la variante de corte y
empalme de 336 pb y la variante de corte y empalme de 309 pb (0,2
es normal, hasta 0,7 se corresponde con una expresión débil y >
0,7 con una expresión fuerte).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo de referencia
6
La transcripción inversa (RT) se realiza según
el Ejemplo de referencia 4.
Por mezcla de PCR se mezclan los siguientes
reactivos (\mul):
La PCR se realiza en el detector de secuencias
ABI 7700 (TaqMan). Se usa un procedimiento de PCR de dos etapas. Se
utiliza el siguiente perfil de temperatura:
\vskip1.000000\baselineskip
- Pos. (GST-pi):
- MES
- MNC (GST-pi):
- El valor límite de la expresión normal se fija mediante el valor de CT de los controles de MNC.
- Pos. (FAS-R):
- MNC (donante normal); ES-2; serie de dilución de ADNc de MNC
- Neg. (FAS-R):
- Agua destilada
- Pos. (FAS-L):
- MNC (donante normal); ES-2; serie de dilución de ADNc de MNC
- Neg. (FAS-L):
- MCF-7 (carcinoma de mama); Daudi (linfoma de Burkitt)
- Pos. (MMP-2):
- COLO-320
- Neg. (MMP-2):
- SW403; linfocitos de un donante normal
\vskip1.000000\baselineskip
Las secuencias de cebadores y sondas para FAS se
diseñaron según el nº de registro de GenBank M67454; las secuencias
de cebadores y sondas para FAS-L se diseñaron según
el nº de registro de GenBank U08137.
\vskip1.000000\baselineskip
Análogamente al Ejemplo de referencia 4.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo de referencia
7
La transcripción inversa (RT) se realiza según
el Ejemplo de referencia 1.
Por mezcla de PCR se mezclan los siguientes
reactivos (\mul):
\vskip1.000000\baselineskip
La PCR se realiza en el termociclador Perkin
Elmer 9600 ó 2400. Se utiliza el siguiente perfil de
temperatura:
La mezcla de PCR se enfría hasta 4ºC.
\vskip1.000000\baselineskip
- Pos. (bFGF-R):
- ES-2 (carcinoma de ovario); NB-4 (ApML); MCF-7 (carcinoma de mama); 697 (cALL); Colo 829 (melanoma)
- Neg. (bFGF-R):
- linfocitos (donante normal); NCI-H508 (adenocarcinoma); K562 (CML)
- Pos. (bFGF):
- ES-2 (carcinoma de ovario); K562 (CML); MES-SA/Dx5 (sarcoma de útero); Colo 829 (melanoma)
- Neg. (bFGF):
- linfocitos (donante normal); 697 (cALL); NCI-H508 (adenocarcinoma)
- Pos. (VEGF-R2):
- ES-2 (carcinoma de ovario); Colo 829 (melanoma); EFM192A (carcinoma de mama)
- Neg. (VEGF-R2):
- linfocitos (donante normal); NCI-H508 (adenocarcinoma)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
- a)
- 20-30 \mul de la mezcla de PCR se separan en un gel de agarosa al 2% (1xTBE).
- b)
- 6-10 \mul del producto de PCR se incuban con (+) o sin (-) enzima de restricción 1 hora a 37ºC. Después de la separación en gel de agarosa al 2% pueden reconocerse dos fragmentos más pequeños.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo de referencia
8
La transcripción inversa (RT) se realiza según
el Ejemplo de referencia 1.
Por mezcla de PCR se mezclan los siguientes
reactivos (\mul):
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
La PCR se realiza en el termociclador Perkin
Elmer 9600 ó 2400. Se utiliza el siguiente perfil de
temperatura:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
La mezcla de PCR se enfría hasta 4ºC.
\vskip1.000000\baselineskip
- Pos. (tirosinasa):
- COLO-829 ADNc (melanoma humano); 697 ADNc (leucemia de células pre-B)
- Neg. (tirosinasa):
- Premezcla sin ADN de sondas (obligatorio); MES (sarcoma de útero); LNCAP (carcinoma de próstata)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
10 \mul del producto de PCR y 1,1 \mul de
tampón de sondas se someten junto con 10 \mul de conductor de 100
pb a una electroforesis en gel de agarosa a una tensión de elución
de 150 voltios y a un tiempo de elución de 20 min. La evaluación se
realiza bajo una lámpara de UV a 254 nm o 312 nm. El producto de PCR
después de la 1ª ronda posee un tamaño de 284 pb. El producto de
PCR después de la 2ª ronda posee un tamaño de 207 pb. Como patrón
de longitud se usa el conductor de 100 pb.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo de referencia
9
Se coamplifican el gen erb-B2,
c-myc y mdrl o el gen de
\beta-globina usando cebadores de oligonucleótidos
marcados con fluoresceína. La separación de los amplificados se
realiza mediante electroforesis capilar.
\newpage
Por mezcla de PCR se mezclan los siguientes
reactivos (\mul):
La PCR se realiza en un termociclador Perkin
Elmer 2400, 9600 ó 9700. Se utiliza el siguiente perfil de
temperatura:
Para erb-B2 y
c-myc:
\vskip1.000000\baselineskip
Para mdrl:
\vskip1.000000\baselineskip
La mezcla de PCR se enfría hasta 4ºC.
\vskip1.000000\baselineskip
- Pos. (erb-B2):
- DNA-A
- Norm. (erb-B2):
- ADN humano
- Pos. (c-myc):
- DNA-B; H82-DNA
- Norm. (c-myc):
- ADN humano
- Pos. (mdr1):
- ADN de CCRF
- Norm. (mdr1):
- ADN humano
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Los productos de PCR se aplican en un gel de
agarosa al 2%. Después de la electroforesis capilar
(Genetic-Analyzer ABI 310), para cada muestra de
paciente y los controles se forma el cociente de la integral del
área de erb-B2, c-myc o mdrl y de
la integral del área de \beta-globina. Se presenta
una amplificación de erb-B2, c-myc
o mdrl en una muestra de paciente cuando el cociente es
"significativamente" mayor que el del control normal, o de
muestras simultáneamente medidas.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo de referencia
10
Por mezcla de PCR se mezclan los siguientes
reactivos (\mul):
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
La PCR se realiza en el termociclador Perkin
Elmer 9600 ó 2400. Se utiliza el siguiente perfil de
temperatura:
Para DxSy:
La mezcla de PCR se enfría hasta 4ºC.
\vskip1.000000\baselineskip
- Neg.:
- Mezcla sin ADN
\vskip1.000000\baselineskip
Se aplican 9 \mul (15 \mul para DxSy) de
producto de PCR y 1 \mul (2 \mul) de 10x tampón de muestra TBE
con azul de bromofenol en un gel de agarosa al 2% (10 \mul de
disolución madre de bromuro de etidio, 10 mg/ml en 100 ml de gel)
en 1x tampón TBE. La electroforesis se realiza a de 160 a 170 V a
tensión constante.
Se desnaturalizan 12 \mul de formamida, 1
\mul de sonda y 0,5 \mul de Genescan Tamra 500 (PE) 2 min a
95ºC y se colocan directamente sobre hielo. A continuación se
realiza un análisis de fragmentos en ABI 310 (tampón de análisis;
ánodo y cátodo: 1x tampón de análisis de fragmentos (PE) con EDTA;
polímero: POP-4; tiempo de inyección: 5 s; tensión
de inyección: 15 kV; tensión durante la elución: 15 kV; temperatura
durante la elución: 60ºC; tiempo de elución: 24 min; matriz: GS
POP4C).
El análisis se realiza tanto en sangre completa,
que refleja la relación de alelos en las células normales, como en
la fracción C, que especifica representativamente el estado de las
células cancerosas. Sólo puede realizarse un análisis satisfactorio
cuando el paciente es heterocigoto para ambos alelos de un marcador.
Los alelos se diferencian en su tamaño de al menos 4 pb. Los
cocientes de las áreas de los picos de ambos alelos (alelo 1/alelo
2) en la fracción de sangre com-
pleta se comparan los de la fracción C. Cuando los valores se diferencian al menos el 50%, puede asumirse una LOH.
pleta se comparan los de la fracción C. Cuando los valores se diferencian al menos el 50%, puede asumirse una LOH.
Ejemplo de referencia
11
Por mezcla de PCR se mezclan los siguientes
reactivos (\mul):
La PCR se realiza en el termociclador Perkin
Elmer 9600 ó 2400. Se utiliza el siguiente perfil de
temperatura:
La mezcla de PCR se enfría hasta 4ºC.
\vskip1.000000\baselineskip
- Pos. (p53; 248):
- ADN de la línea celular de leucemia promielocítica aguda NB-4; ADN de la línea celular de carcinoma de colon Colo 320
- Pos. (p53; 273):
- células de carcinoma de colon SW480
- Pos. (K-ras):
- células de carcinoma de colon SW480 y SW403
- Neg. (p53):
- mezcla sin DNA; mezcla sin restricción
- Neg. (K-ras):
- ADN de linfocitos normales o DNA de una línea celular negativa
\vskip1.000000\baselineskip
Se aplican 9 \mul de producto de PCR y 1
\mul de 10x tampón de muestra TBE con azul de bromofenol en un
gel de agarosa al 2% (10 \mul de disolución madre de bromuro de
etidio, 10 mg/ml en 100 ml de gel) en 1x tampón TBE. La
electroforesis se realiza a de 160 a 170 V y tensión constante.
\vskip1.000000\baselineskip
Se incuban 7,3 \mul, 2,0 \mul de 10x tampón,
0,2 \mul de 100x BSA, 0,5 \mul de enzima de restricción y 10
\mul de producto de PCR (para el codón 245, 249 y 273: 7,5 \mul
de H_{2}O (bidest), 2,0 \mul de 10x tampón, 0,5 \mul de
enzima de restricción y 10 \mul de producto de PCR; para el codón
248: 7,75 \mul de H_{2}O (bidest), 2,0 \mul de 10x tampón,
0,25 \mul de enzima de restricción y 10 \mul de producto de
PCR) 1 hora a 37ºC. Dependiendo de la cantidad del producto de PCR,
la valoración se realiza en un gel MetaPhor al 4% o mediante ABI
310.
\vskip1.000000\baselineskip
Se aplican 18 \mul de producto de PCR
restringido y 2 \mul de 10x tampón de muestra TBE con azul de
bromofenol en un gel de agarosa MetaPhor al 4% (10 \mul de
disolución madre de bromuro de etidio, 10 mg/ml en 100 ml de gel)
en 1x tampón TBE. La electroforesis se realiza a de 160 a 170 V y
tensión constante. Para la comparación, sobre cada gel también se
aplica el producto de PCR sin cortar de una muestra
discrecional.
\vskip1.000000\baselineskip
Se desnaturalizan 12 \mul de formamida, 1
\mul de sonda y 0,5 \mul de Genescan Tamra 500 (PE) 2 min a
95ºC y se colocan directamente sobre hielo. A continuación se
realiza un análisis de fragmentos en ABI 310 (tampón de análisis;
ánodo y cátodo: 1x tampón de análisis de fragmentos (PE) con EDTA;
polímero: POP-4; tiempo de inyección: 5 s; tensión
de inyección: 15 kV; tensión durante la elución: 15 kV; temperatura
durante la elución: 60ºC; tiempo de elución: 24 min; matriz: GS
POP4C).
\vskip1.000000\baselineskip
Para la evaluación se forma la integral del área
de 88 pb a 70 pb, 168 pb a 145 pb, 246 pb a 77 pb, 147 pb a 81 pb,
137 pb a 116 pb o 143 pb a 114 pb.
\vskip1.000000\baselineskip
En la paciente que se investigó existía una
mastopatía con sospecha de un carcinoma de mama. Se tomó una muestra
de sangre.
\vskip1.000000\baselineskip
¿Había células cancerosas en circulación en la
muestra de sangre extraída que podían formar metástasis?
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
En la paciente pudieron detectarse células
hematógenamente en circulación que podían ser de tipo carcinoma.
Pudieron detectarse células específicas para células cancerosas que
transcribían fuertemente la variante de corte y empalme específica
para cáncer del gen mucina 1. Estas células también expresaron ARNm
de CEA y CK20. Como estas características de expresión se
encuentran en el carcinoma de mama, las células procedían con una
gran probabilidad de la mama, lo que se confirmó por la expresión de
maspina.
Las células tumorales pudieron concentrarse en
la fracción C (MUC1) sin contaminación linfocítica (negativa para
perforina). Las células detectadas también mostraron indicios de una
capacidad de metastatización ya que expresaban el receptor de bFGF
y VEGF, así como VEGF, todos requisitos previos de la
neoangiogénesis. Las células que circulaban en la sangre expresaron
el receptor de progesterona.
La amplificación de c-myc y
erb-B2 indicó además un mal pronóstico.
Cualitativamente se trató de un progreso de alto riesgo típico con
una potencia de crecimiento extrema ya que estos genes codifican
señales de crecimiento en tejido cancerígeno.
\vskip1.000000\baselineskip
En conjunto, el hallazgo indicó un carcinoma
diseminante con un mal pronóstico que se basó en la mastopatía.
\vskip1.000000\baselineskip
En el paciente que se investigó existía la
sospecha de un carcinoma de colon o de próstata. Se tomó una muestra
de sangre.
\vskip1.000000\baselineskip
¿Había células cancerosas en circulación en la
muestra de sangre extraída que podían formar metástasis? ¿Procedían
estas células de un carcinoma de colon o de próstata?
\vskip1.000000\baselineskip
Pudieron detectarse células hematógenamente
diseminantes que transcribían exclusivamente la variante de corte y
empalme específica para tumor del gen MUC1 como también CK20 y por
tanto pudieron asignarse al tipo carcinoma. Pudieron concentrarse
en la fracción C. Las células hematógenamente diseminantes
procedieron con seguridad del colon ya que pudo detectarse el ARNm
de gastrina, a diferencia del ARNm de PSM específico para
próstata.
En la fracción epitelial C también se encontró
el oncogén mutado puntualmente k-ras como es típico
de carcinomas de colon. Las células detectadas también mostraron
indicios de una capacidad de metastatización ya que expresaban el
receptor de bFGF, un requisito previo de la neoangiogénesis.
\vskip1.000000\baselineskip
En conjunto, el hallazgo indicó un carcinoma
diseminante que con seguridad se encontraba en la región
colorrectal. Como las células expresaban el gen diana terapéutico
EGP se indicó una terapia con panorex.
En la paciente que se investigó existía un
melanoma maligno en estado posoperatorio (Clark
II-III). Se tomó una muestra de sangre.
\vskip1.000000\baselineskip
¿Había células cancerosas en circulación en la
muestra de sangre extraída que podían formar metástasis? ¿Pudieron
hacerse otras predicciones pronósticas al tumor?
\vskip1.000000\baselineskip
Los resultados indicaron un melanoma maligno
progresivo con células hematógenamente diseminantes que podían
metastatizar. La expresión de los factores de angiogénesis receptor
de bFGF, receptor 1 de VEGF y VEGF, así como la capacidad de las
células en circulación para la degradación de la matriz (detección
de ARNm de MMP2), se indicó por la capacidad de metastatización de
las células en circulación en la sangre.
En la fracción C se encontró una mutación
relevante para las proteínas del oncogén p53 en el exón 5. Las
células sólo expresaron el ligando de FAS, pero no el receptor de
FAS; posiblemente no estaban accesibles a un citotoxicidad mediada
por células (apoptosis). Se excluyó una contaminación linfocítica de
la fracción C ya que no pudo detectarse perforina.
\vskip1.000000\baselineskip
En la paciente que se investigó se diagnosticó
un carcinoma de mama (pT1 b N1 M0). Se tomó una muestra de
sangre.
\vskip1.000000\baselineskip
¿Había células cancerosas en circulación en la
muestra de sangre extraída que podían formar metástasis? ¿Existió
una quimiorresistencia?
\vskip1.000000\baselineskip
En la paciente pudieron detectarse células
hematógenamente en circulación que podían ser de tipo carcinoma.
Pudieron detectarse células específicas para células cancerosas que
transcribían fuertemente la variante de corte y empalme específica
para cáncer del gen mucina 1. Estas células también expresaron ARNm
de CEA y CK20. Como estas características de expresión se
encuentran en el carcinoma de mama, las células procedían con una
gran probabilidad de la mama, lo que se confirmó por la expresión de
maspina.
Las células detectadas también mostraron
indicios de una capacidad de metastatización ya que expresaban el
receptor de bFGF y VEGF, así como VEGF, todos requisitos previos de
la neoangiogénesis. Además, en la fracción de células tumorales
pudo detectarse una mutación de p53 en el exón 8. Esto también es un
hallazgo típico para el carcinoma de mama.
\vskip1.000000\baselineskip
En conjunto, el hallazgo indicó un carcinoma
capaz de metastatizar. En la paciente no existió ningún indicio de
una quimiorresistencia. Debido a la expresión de la topoisomerasa
detectada como gen diana, se indicó una terapia con
antraciclinas.
\vskip1.000000\baselineskip
En la paciente que se investigó se diagnosticó
un carcinoma de mama. La paciente no recibió quimioterapia. Se tomó
una muestra de sangre.
\vskip1.000000\baselineskip
¿Había células cancerosas en circulación en la
muestra de sangre extraída que podían formar metástasis? ¿Existió
una quimiorresistencia?
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página
siguiente)
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
En la paciente pudieron detectarse células
hematógenamente en circulación de tipo carcinoma que transcribían
la variante de corte y empalme específica para cáncer del gen MUC1.
También pudo detectarse la expresión de CEA y CK20. Estas
características de expresión indicaron un carcinoma de mama. Como el
análisis de los factores de angiogénesis anteriores resultó
negativo, pudo asumirse que las células cancerosas en circulación
sólo mostraron un pequeño potencial de metastatización. En la
paciente no existió ninguna indicación de una quimiorre-
sistencia.
sistencia.
\vskip1.000000\baselineskip
En conjunto, el hallazgo indicó un carcinoma de
mama diseminante sin indicios de una quimiorresistencia.
\vskip1.000000\baselineskip
En el caso de la paciente se trató de la misma
que se describió en el Ejemplo 5. Debido al hallazgo planteado
según el Ejemplo 5, la paciente se trató con una quimioterapia
complementaria y con tamoxifeno. Después de finalizar la
quimioterapia, se volvió a tomar sangre de la paciente.
\vskip1.000000\baselineskip
¿Había células cancerosas en circulación en la
muestra de sangre extraída que podían formar metástasis?
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
En la paciente pudieron detectarse células
hematógenamente en circulación que podían ser de tipo carcinoma.
Pudieron detectarse células específicas para
células cancerosas que transcribían fuertemente la variante de corte
y empalme específica para cáncer del gen mucina 1. Las células
detectadas mostraron los primeros indicios de una capacidad de
metastatización; expresaron ARNm de bFGF-R, VEGF y
VEGF-R1; sin embargo, no pudo detectarse
MMP-2. Las células que circulaban en la sangre
fueron positivas para el receptor de progesterona. Entre las
oncoproteínas pronosticadas pudo detectarse
anti-p53; esta proteína reactiva indicó un
pronóstico reducido debido a las mutaciones de p53.
\vskip1.000000\baselineskip
En conjunto, el hallazgo indicó un carcinoma
todavía diseminante. Sin embargo, en comparación con el hallazgo
previo (antes de la quimioterapia) se presentó un cuadro claramente
cambiado. Así, especialmente MUC1 ya no se detectó en la fracción C
y en la fracción A los marcadores CK20 y CEA fueron negativos. Esto
indicó un claro éxito de la terapia.
\vskip1.000000\baselineskip
En la paciente que se investigó existía una
sospecha de carcinoma de ovario. Se tomó una muestra de sangre.
\vskip1.000000\baselineskip
¿Había células cancerosas en circulación en la
muestra de sangre extraída que podían formar metástasis? ¿Existió
una quimiorresistencia?
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
En la paciente pudieron detectarse células
hematógenamente en circulación de tipo carcinoma que transcribían
fuertemente la variante de corte y empalme específica para cáncer
del gen MUC1.
Como los análisis de los factores de
angiogénesis anteriores resultaron negativos, no pudieron detectarse
células capaces de la neoangiogénesis, la interacción funcional de
células endoteliales y epiteliales. Por tanto, las células
cancerosas en circulación no mostraron capacidad de metastatización;
no pudo partirse de la formación de metástasis activas. Las células
en circulación en la sangre expresaron el receptor de progesterona.
En la paciente no existió ninguna indicación de una
quimiorresistencia.
\vskip1.000000\baselineskip
En conjunto, el hallazgo indicó posiblemente un
carcinoma de un órgano sensible a hormonas.
\vskip1.000000\baselineskip
En la paciente que se investigó existía una
sospecha de carcinoma de mama debido a un hallazgo de mama
sospechoso (tumor del tamaño de una nuez en la mamografía común).
En la familia se conocían tres casos de neoplasias de mama, dos de
ellas en pacientes de menos de 50 años y un caso de una neoplasia de
ovario. Por tanto, existía una predisposición hereditaria a
tumores. Se tomó una muestra de sangre.
\vskip1.000000\baselineskip
¿Había células cancerosas en circulación en la
muestra de sangre extraída que podían formar metástasis?
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
\global\parskip0.900000\baselineskip
En la paciente pudieron detectarse pequeñas
cantidades de células cancerosas hematógenamente en circulación de
tipo carcinoma que transcribían fuertemente la variante de corte y
empalme específica para cáncer del gen MUC1. También pudo
detectarse la expresión de CK20 y CEA. Estas características de
expresión indicaron un carcinoma de mama. No obstante, no pudieron
concentrarse las células cancerosas en circulación.
Como los análisis de los factores de
angiogénesis anteriores resultaron parcialmente positivos (expresión
de bFGF y VEGF), pudieron detectarse células capaces de la
neoangiogénesis, la interacción funcional de células endoteliales y
epiteliales. Por tanto, las células cancerosas en circulación ya
mostraron indicios de una capacidad de metastatización. Esto
también lo indicó la expresión del gen MMP2. Por tanto, era muy
probable la formación de metástasis activas. Las células en
circulación en la sangre no expresaron el receptor de
progesterona.
\vskip1.000000\baselineskip
En conjunto, el hallazgo indicó un carcinoma
diseminante. Las células en circulación procedieron de la mama.
\vskip1.000000\baselineskip
La AFP es la principal proteína plasmática en el
feto. En adultos, la expresión de la AFP es muy pequeña, a menos
que se presente un tumor, como un hepatoma o un teratoma.
Lit.: Gibbs y col.; Biochemistry
26: 1332-1343, 1987.
\vskip1.000000\baselineskip
Lit.: Pollard, T.D. y Cooper,
J.A.; Ann. Rev. Biochem. 55, 987 y siguientes,
1986.
\vskip1.000000\baselineskip
La albúmina sirve para identificar células de
hepatoma en circulación en la sangre.
Lit.: Minghettei y col.; J. Biol.
Chem. 261: 6747-6757, 1986.
\vskip1.000000\baselineskip
Sinónimos: receptor de dihidrotestosterona,
receptor de testosterona, TFM.
Las células de carcinoma de próstata dependen de
la acción estimuladora del crecimiento del AR. En carcinomas de
próstata pudieron detectarse mutaciones del receptor de andrógeno
que conducen en parte a un receptor constitutivamente activo.
Lit.: Lubahn y col.; Proc. Natl. Acad.
Sci. USA 87(11): 9534-9538,
1989.
\vskip1.000000\baselineskip
Sinónimo: proteína de los glóbulos de grasa de
leche humana "Human Milk Fat Globule Protein"
La glicoproteína BA-46 es
expresada por carcinomas de mama y se utilizó satisfactoriamente
como diana de radioinmunoterapias experimentales.
Lit.: Couto y col.; DNA Cell Biol.
15: 281-286, 1996.
\vskip1.000000\baselineskip
Sinónimo: FGF-2
El bFGF se sobreexpresa en muchos tipos de
tumores y por tanto puede considerarse como un factor para la
capacidad de metastatización.
Lit.: Abraham y col.; EMBO J. 5:
2523-2528, 1986.
\global\parskip1.000000\baselineskip
El producto de bcl-2 se
heterodimeriza in vivo con un homólogo conservado, el BAX,
acelerándose la muerte celular programada.
Lit.: Tsujiimoto Y. y Croce C.M.;
PNAS, 83 (14), 5214-5218, 1986.
\vskip1.000000\baselineskip
El gen bcl-2 se descubrió en
linfomas no Hodgkin foliculares (linfomas de células B).
BCL-2 puede bloquear la apoptosis.
Lit.: Tsujiimoto Y. y Croce C.M.;
PNAS, 83 (14), 5214-5218, 1986.
\vskip1.000000\baselineskip
El gen BRCA1 es un gen supresor de tumores. En
el 5-10% de las pacientes con cáncer de mama existe
una clara predisposición hereditaria que frecuentemente también
está asociada a una predisposición para carcinomas de ovario. Las
mutaciones del gen BRCA1 están relacionadas con el 45% de los
carcinomas de mama con componente hereditario. Las mutaciones en el
gen BRCA1 también afectan a los carcinomas de ovario.
Lit.: Smith T.M., y col.; Genome
Res. 6, 1029-1049, 1996.
\vskip1.000000\baselineskip
El gen BRCA1 es un gen supresor de tumores. Las
mutaciones de este gen son responsables de una alta proporción de
tumores de mama hereditarios de aparición temprana.
Lit.: Lancaster J.M., y col.; Nature
Genet. 13, 238-240, 1996.
\vskip1.000000\baselineskip
La calcitonina (32 aminoácidos) está codificada,
como el "péptido relacionado con el gen de calcitonina"
("Calcitonin gene-related peptide") (CGRP; 37
aminoácidos), por un gen, el calc-1. La calcitonina
puede inhibir el crecimiento de una línea celular de carcinoma
gástrica y la neurohormona CGRP puede hacer de factor de crecimiento
autocrino para las líneas celulares de carcinoma murinas.
Lit.: Adema y Baas; BBRC
178: 985-992, 1991.
\vskip1.000000\baselineskip
La CC10 sólo se expresa en células del epitelio
alveolar de tipo 2 y en células claras del epitelio pulmonar y
participa en la formación del "fluido del revestimiento
epitelial" ("epithelial lining fluid").
Lit.: Am. L. Physiol. 268: L565
(1995).
\vskip1.000000\baselineskip
La CCK es una hormona cerebral e intestinal.
Además, la CCK es expresada por algunas líneas celulares de
sarcoma-neuroepitelioma.
Lit.: Friedman, J.M. y col.; PNAS
89: 5819-5823, 1992.
\vskip1.000000\baselineskip
Sinónimos: antígeno de Hermes,
Pgp-1.
La glicoproteína CD44 es una molécula de
adhesión celular. Determinadas variantes de corte y empalme de CD44
desempeñan una función en el proceso de metastatización de
tumores.
Lit.: Matsumura, Y. y Tarin, D.;
The Lancet 340, 1053-1058, 1992.
\vskip1.000000\baselineskip
Sinónimo: CD66e
El CEA se expresa en carcinomas
gastrointestinales y colorrectales, pero también en distintos
tumores sólidos, como carcinomas de mama, en el colon fetal, pero
no en linfocitos normales. Debido a este perfil de expresión, la
detección de células positivas para CEA en la sangre sirve para el
diagnóstico de células tumorales en circulación. Además, los
inmunoensayos de CEA son importantes procedimientos de diagnóstico
en la observación de pacientes con cáncer, especialmente en el caso
de carcinomas de colon.
Lit.: Zimmermann y col.; Proc. Natl.
Acad. Sci. USA 84: 2960-2964, 1987.
\vskip1.000000\baselineskip
Las células malignas conservan generalmente el
patrón de citoqueratinas y este puede utilizarse
correspondientemente para la retrolocalización de células tumorales
en un epitelio. Como la CK20 no es expresada por células de la
sangre periférica, sino principalmente por células del tracto
gastrointestinal, esta citoqueratina sirve para la detección en la
sangre de células en circulación de este origen.
Lit.: Moll y col.; Differentiation
63: 75-93, 1993; Burchill y col.;
British Journal of Cancer 71:278-281,
1995.
\vskip1.000000\baselineskip
Las ciclinas y las cinasas dependientes de
ciclinas (CDK) son esenciales para el control del ciclo celular de
células eucariotas. La medición de las ciclinas guarda relación con
el ciclo celular.
Lit.: Motokura T., y col.; J. Biol.
Chem. 1992 Oct 5; 267(28):
20412-5; Lees E., y col.;
Genes-Dev. 1992 Oct; 6(10):
1874-85.
\vskip1.000000\baselineskip
La ciclina G1 y la ciclina G2 representan dos
ciclinas recientemente identificadas que desempeñan una función en
el ciclo celular.
Lit.: Horne M.C., y col.; J. Biol.
Chem. 1996 Mar 15; 271(11):
6050-61.
\vskip1.000000\baselineskip
En tumores colorrectales se delecionan
frecuentemente secuencias del cromosoma 18 (DCC = Deleted in
colorectal carcinomas (delecionado en carcinomas colorrectales)).
La expresión del gen DCC está muy reducida en la mayoría de los
carcinomas colorrectales. La pérdida de la región 18q está unida a
un mal pronóstico. El estado del gen DCC puede determinarse
mediante marcadores de microsatélites y PCR a partir de material
fijado en formalina.
Lit.: Frank C.J., y col.; Cancer
Res. 57, (5), 824-827, 1997.
\vskip1.000000\baselineskip
La denominación significa "delecionado en
carcinoma pancreático"("deleted in pancreatic carcinoma").
Aproximadamente el 90% de los carcinomas pancreáticos humanos
muestra una pérdida de alelos en el cromosoma 18. Se trata de un
gen supresor de tumores. En carcinomas de mana y de ovario también
se descubrieron modificaciones del gen DPC4.
Lit.: Hahn S.A., y col.; Science
271, 350-354, 1996.
\vskip1.000000\baselineskip
La E-cadherina es, junto con las
cateninas asociadas (\alpha-catenina;
\beta-catenina), importante para la organogénesis
y la histogénesis de tejido epitelial y desempeña una función
importante en el proceso de metastatización de carcinomas.
Lit.: Aberle H., y col.; J. Cell.
Biochem. 1996 Jun 15; 61(4):
514-23.
\global\parskip0.900000\baselineskip
Sinónimos: HMGF (factor de crecimiento de leche
humana "human milk growth factor"); PGF (factor de crecimiento
prostático "prostatic growth factor"); urogastrona.
El EGF participa en el desarrollo embrionario
(células ectodérmicas, mesodérmicas y endodérmicas) y
controla/estimula la proliferación de células epidérmicas y
epiteliales in vitro. El EGF también puede actuar de factor
angiogénico y quimiotáctico.
Lit.: Carpenter: EGF; Curr. Opin.
Cell. Biol. 5: 261-264, 1993.
\vskip1.000000\baselineskip
Sinónimo: SA-7 (antígeno de
especies 7 "species antigen 7")
En algunos tumores humanos, el
EGF-R se sobreexpresa, lo que también guarda
relación con la malignidad de tumores; resulta un mal pronóstico de
la coexpresión de EGF-R con o
c-erb-B2 o
TGF-alfa.
Lit.: Ibelgaufts: Dictionary of
cytokines, VCH, 1994.
\vskip1.000000\baselineskip
Sinónimos: GA733-2; antígeno
17-1A; KS1/4.
La glicoproteína epitelial puede servir de
marcador específico para epitelio para la detección de
carcinomas.
Lit.: Simon, B. y col.; PNAS 87:
2755-2759, 1990; Szala, S. y col.;
PNAS 87: 3542-3546, 1990.
\vskip1.000000\baselineskip
Sinónimos: EG, glucagón 37.
El enteroglucagón es un péptido que es producido
por las células del yeyuno-íleon.
Lit.: Bell, G.I. y col.; Nature
304: 368-371, 1983.
\vskip1.000000\baselineskip
El gen erb-B codifica el
receptor (EGF-R) del factor de crecimiento
epidérmico (EGF). Este gen está amplificado en aproximadamente el
50% de los glioblastomas humanos avanzados.
Lit.: Haley J., y col.; Oncogene
Res. 1, 375-396, 1987.
\vskip1.000000\baselineskip
Sinónimos:
c-erb-B2; homólogo oncógeno 2 del
virus de la leucemia eritroblástica aviar "avian erythroblastic
leukemia viral oncogene homolog 2"; NGL (neuroblastoma o derivado
de glioblastoma "neuroblastoma or glioblastomaderived"); neu;
receptor superficial de células de tipo tirosina cinasa "tyrosine
kinase-type cell surface receptor" HER2;
TKR1.
El erb-B2 codifica un antígeno
tumoral, P185, que es serológicamente similar al receptor del factor
de crecimiento epidérmico (EGF-R). Una
sobreexpresión convierte el gen para un receptor de factor de
crecimiento normal, erb-B2, en un oncogén. Una
amplificación de erb-B2 se observa en
adenocarcinomas, en cáncer de mama y de ovario. El
erb-B2 participa además en el desarrollo de leucemia
promielítica aguda (APL) ya que el gen está localizado en la banda
q21.1 del cromosoma 17, en la que también se encuentra el punto de
rotura de la translocación entre el cromosoma 15 y 17 (t15:17).
Lit.: Slamon y col.; Science 244:
707-712, 1989.
\vskip1.000000\baselineskip
El gen de la poliposis adenomatosa familiar, una
enfermedad autosómica dominante, es fap.
Lit.: Groden j. y col.; Cell 66:
589-0, 1991.
\global\parskip1.000000\baselineskip
FAS pertenece al grupo de los factores
desencadenantes de apoptosis.
Lit.: Alderson M.R.; J. Exp. Med.
181, (1), 71-77, 1995; Itoh N.;
Cell 66, (6), 233-243, 1991.
\vskip1.000000\baselineskip
Sinónimos: tirosina cinasa 2 similar a fms
"fms-like tyrosine kinase-2";
FLT2; gen similar a FMS "FMS-like gene"; FLG
(bFGF-R1); K-SAM, bek
(FGF-R2).
Una expresión diferente y el corte y empalme
alternativo pueden ser críticos en la progresión maligna de
tumores.
Lit.: Yamaguchi y col.; Proc. Natl.
Acad. Sci. USA 91: 484-488, 1994.
\vskip1.000000\baselineskip
A los genes c-fos y
c-jun les corresponde una importancia central en el
marco de la regulación del crecimiento.
Lit.: Ekstrand A.J., y col.; Exp.
Cell. Res. 169, 262-266, 1987.
\vskip1.000000\baselineskip
Gadd45 es un gen de parada del crecimiento e
inducido por lesiones del ADN que está regulado por el gen supresor
de tumores p53.
Lit.: Constance, C.M. y col.;
Mol-Cell-Biol. 1996
Jul; 16(7): 3878-83 Crawford, D.R. y
col.; Arch-Biochem-Biophys.
15 de mayo de 1996; 329(2):
137-44.
\vskip1.000000\baselineskip
Este gen se expresa en todas las células. La
expresión de este gen guarda relación con el número de células y
sirve para la determinación cuantitativa y cualitativa de ADNc.
Lit.: Allen, R.W. y col.; J. Biol.
Chem. 262 (2), 649-653, 1987.
\vskip1.000000\baselineskip
La gastrina se produce particularmente por las
células de la mucosa del estómago y las células D en el
páncreas.
Lit.: Boel, E. y col.; PNAS 80:
2866-2869, 1983.
\vskip1.000000\baselineskip
El GD-AIF pertenece, al igual
que la trombospondina y la angiostatina, a los reguladores negativos
endógenos de la angiogénesis. El grado en el que los reguladores
negativos disminuyen durante la fase de cambio al fenotipo
angiogénico de la tumorigénesis decide si un tumor primario crece
lentamente o rápidamente y si se forman metástasis.
Lit.: Folkman J.; Nat. Med. 1
(1995) 27-31.
\vskip1.000000\baselineskip
Sinónimo: polipéptido insulinotrópico
dependiente de glucosa "Glucose-Dependent
Insulinotropic Polypeptide"
Esta hormona se produce particularmente por
células del intestino delgado superior.
Lit.: Inagaki, N. y col.; Molec.
Endocr. 3: 1014-1021, 1989.
\vskip1.000000\baselineskip
La GST-pi codifica un enzima
desintoxicante y por tanto desempeña una función en el desarrollo de
tumores quimiorresistentes. Después de la quimioterapia pudo
observarse un aumento de la expresión en tumores, lo que va
acompañado de un pronóstico con desfavorable y
quimiorresistencia.
Lit.: Morrow y col.; Gene 75:
3-11, 1989.
\vskip1.000000\baselineskip
La función principal de las granzimas se
encuentra en la lisis de células tumorales y células infectadas por
virus mediante una fragmentación apoptósica de ADN.
Lit.: Kummer, J.A. y col.; Kidney
Int. 47: 70-77 (1995).
\vskip1.000000\baselineskip
La subunidad \beta de la hCG sirve de marcador
para tumores de la línea germinal y coriocarcinomas y la detección
de ARNm de hCG mediante RT-PCR también es útil en el
diagnóstico de carcinomas de mama metastatizados y melanomas
malignos.
Lit.: Doi F. y col.; Int. J.
Cancer 65 (1996) 454-459.
\vskip1.000000\baselineskip
El HIC-1 se considera un posible
producto génico supresor de tumores. En células tumorales, en las
que está hipermetilado, se realiza una subexpresión.
Lit.: Wales M. M., y col.; Nat.
Med. 1 (1995) 570-577.
\vskip1.000000\baselineskip
Las proteínas de choque térmico como HSP70
pueden desempeñar una función en "mecanismos de escape" de
células tumorales.
Lit.: Kaur J. y Ralhan R.;
63(6): 774-9.
\vskip1.000000\baselineskip
La hTG es una proteína de las glándulas
tiroideas. Se identificaron cuatro transcritos que son la
consecuencia de cortes y empalmes alternativos.
Lit.: Bertaux y col.; Gene 156:
297-301, 1995.
\vskip1.000000\baselineskip
Sinónimos: ICAM-1 (CD54,
ICAM1-1); ICAM-2 (CD102);
ICAM-3.
Las ICAM-1, -2, y -3 son
moléculas de la superficie celular y sirven de ligandos de las
integrinas leucocitarias.
\vskip1.000000\baselineskip
Sinónimos: MSA (actividad estimuladora de la
multiplicación "multiplication-stimulating
activity"); somatomedina; NSILA (actividad similar a la insulina
no suprimible "non-suppressible
insulin-like activity"); SF (factor de
sulfatación "sulfation factor"), SFA, SGF (factor de
crecimiento esquelético "Skeletal growth factor"), SMP.
Los IGF actúan de factores mitogénicos,
autocrinos y angiogénicos.
Lit.: Cohick y Clemmons; Annual
Review of Physiology 55: 131-153,
1993.
\vskip1.000000\baselineskip
Sinónimos: IGBP; IBP; BP-53;
proteína de unión dependiente de la hormona de crecimiento "growth
hormone dependent binding protein"; proteína de unión 29
"binding protein 29".
El IGF-BP3 hace de inhibidor del
crecimiento.
Lit.: Lamson; Growth factors 5:
19-28, 1991.
\vskip1.000000\baselineskip
Las integrinas son antígenos de la superficie
celular heterodímeros que participan en interacciones
célula-célula y célula-matriz.
Lit.: VIth International Human Leukocyte
Differentiation Antigen Workshop and Conference, Kobe (Japón),
noviembre de 1996.
\vskip1.000000\baselineskip
Sinónimos: interferón inmunitario "Immune
interferon"; interferón tipo 2 "type 2 interferon";
interferón T "T interferon"; interferón inducido por antígeno
"antigen-induced interferon"; interferón
inducido por mitógeno "mitogen-induced
interferon"; interferón lábil a ph2 "ph2-labile
interferon".
Lit.: Gray y col.; Nature 295:
503-508, 1982; Ibelgaufts: Dictionary
of cytokines. VCH 1994.
\vskip1.000000\baselineskip
La inactivación de genes supresores de tumores
es una etapa crítica en la oncogénesis. Los mecanismos frecuentes
son tanto mutaciones inactivadoras como la pérdida genómica de todo
el gen, o partes del gen. La pérdida genómica de secciones de
cromosomas puede comprenderse experimentalmente mediante la
"pérdida de la heterocigosidad" (Loss of Heterozygosity =
LOH). En este caso, en el tejido normal de un paciente se encuentran
ambos alelos del gen supresor de tumores, mientras que en el tumor
tan sólo puede detectarse un alelo. Para la identificación de los
dos alelos sirven zonas cromosómicas altamente polimórficas
localizadas en o en la proximidad del gen supresor de tumores
(repeticiones de microsatélites) que se amplifican por una PCR. En
este caso se trata de repeticiones de secuencias de nucleótidos
cortas (por ejemplo, repeticiones de CA, repeticiones de CGG)
siendo diferente el número de copias y presentando por tanto el
producto amplificado en la PCR longitudes diferentes.
\vskip1.000000\baselineskip
Debido a la expresión ubicua de L32 es adecuado
como gen diana para cuantificaciones.
Lit.: Young, J.A. y Trowsdale, J.;
Nucleic Acids Res. 13 (24), 8883-8891,
1985.
\vskip1.000000\baselineskip
Sinónimos:
proteína-tirosina-fosfatasa;
alfa-polipéptido; PTPRA; PTPA.
La Lrp codifica una proteína
tirosina-cinasa ubicuamente expresada.
Lit.: Jirik y col.; FEBS Lett.
273: 239-242, 1990.
\vskip1.000000\baselineskip
Sinónimo: MZ2-E
El gen MAGE1 codifica un antígeno sobre la
superficie de células de melanoma. Mientras que MAGE1 puede
detectarse a un alto nivel en muchos tumores en el plano del ARN,
el ARN no se encuentra en tejidos normales, con la excepción de los
testículos y el ovario. Este producto génico también es
extraordinariamente adecuado como marcador para células tumorales
en circulación, especialmente células de melanoma.
Lit.: De Plaen y col.;
Immunogenetics 40: 360-369, 1994.
\vskip1.000000\baselineskip
El gen que codifica MAGE3 se transcribe en
aproximadamente el 69% de los melanomas. Como hasta la fecha sólo
se había encontrado en tejido tumoral y, aparte de los testículos,
en ningún tejido normal, este gen es adecuado como marcador para
células de melanoma en circulación.
Lit.: Gaugler y col.; J. Exp. Med.
179: 921-930, 1994.
\vskip1.000000\baselineskip
En el caso de la maspina se trata de un gen
supresor de tumores. Los defectos en este gen se encuentran
especialmente en células de carcinoma de mama.
Lit.: Luppi y col.; Annals of
Oncol. 7: 619-624, 1996.
\vskip1.000000\baselineskip
El efecto oncógeno de un aumento de la actividad
de MDM2 se hace notar en una inactivación de la inhibición del
crecimiento inducida por p53. Acorde con esto, en tumores humanos se
encuentra una sobreexpresión de mdm2.
Lit.: Zaubermann y col.; Nucleic Acids
Res. 23: 2584-2592, 1995.
\vskip1.000000\baselineskip
La \beta2-microglobulina se
expresa en todas las células que contienen núcleo de los
vertebrados.
Lit.: Wiliams, A.F. y Barclay,
A.N.; Annu. Rev. Immunol. 6, 381; 1988.
\vskip1.000000\baselineskip
Sinónimos: FCC2; COCA2; CCHNP (cáncer
colorrectal hereditario no poliposo de tipo 2 "Hereditary
Nonpoliposis colorectal cancer Type 2").
Las mutaciones del gen MLH1 son responsables de
aproximadamente el 30% de una forma hereditaria de carcinoma de
colon (cáncer colorrectal hereditario no poliposo = CCHNP). Pero
aproximadamente el 60% de los casos de CCHNP son causados por
mutaciones en el gen MSH2 en el cromosoma 2. Se aislaron otros dos
genes humanos que son homólogos a MutL: pms-1 y
pms-2. No obstante, éstos participan más raramente
en la génesis de tumores que msh2 y mlhl.
Lit.: Bellacosa y col.; Am. J. Med.
Genet. 62: 353-364, 1996.
\vskip1.000000\baselineskip
Las MMP son endopeptidasas de unión a Zn^{2}+
que descomponen componentes de la matriz extracelular. Participan
en la angiogénesis y la invasión tumoral. Existen como mínimo 11
MMP.
Una sobreexpresión de metaloproteinasas requiere
la invasión y la metástasis de tumores. Algunas de estas
metaloproteinasas son fuertemente expresadas por células tumorales
tanto en la superficie celular como al nivel de
ARNm.
ARNm.
Lit.: Freije y col.; J. Biol.
Chem. 269: 16766-16773, 1994; Sato
y col.; Nature 370: 61-65, 1994.
\vskip1.000000\baselineskip
La motilina es una hormona producida por células
del intestino delgado.
Lit.: Daikh, D.I y col.; DNA 8:
615-621; 1989.
\newpage
El gen MRP codifica una bomba de eflujo para
agentes antineoplásicos localizada en la membrana plasmática con
similitudes a la superfamilia del "casete de unión a ATP"
("ATP-binding casette") de sistemas de
transporte a la que también pertenece el MDR1 y el "regulador de
la conductancia transmembrana de fibrosis quística" ("cystic
fibrosis transmembran conductance regulator". En una línea
celular quimiorresistente del carcinoma de pulmón de células
pequeñas pudo detectarse una sobreexpresión de MDR1 que se atribuyó
a una amplificación genómica del gen.
Lit.: Cole y col.; Science 258:
1650-1654, 1992.
\vskip1.000000\baselineskip
Este gen desempeña una función en tumores que se
desarrollan en pacientes con cáncer colorrectal hereditario no
poliposo (CCHNP). Las mutaciones de MSH2 se encontraron en el 21% de
las familias de CCHNP afectadas.
Lit.: Fishel R., y col.; Science
266, 1403-1405, 1994.
\vskip1.000000\baselineskip
Sinónimo: urinario ("urinary").
El gen MUC1 codifica una glicoproteína
transmembrana que se forma por células tumorales para proteger de
células inmunitarias citotóxicas y para impulsar la
metastatización. La MUC1 es sintetizada por tejidos y células
normales, pero también por células y tejidos malignos. Por ejemplo,
las células de cáncer de mama, cáncer de páncreas y adenocarcinoma
muestran una sobreexpresión de la proteína de MUC1; además, en
algunos tipos de cáncer se detecta una variante de corte y empalme
específica para tumor, además de la variante "normal".
Lit.: Weiss y col.; Int. J. Cancer
66: 55-59, 1996.
\vskip1.000000\baselineskip
La Muc18 codifica una glicoproteína cuya
expresión se limita a melanomas primarios y metastatizantes
avanzados, así como a líneas celulares de la línea
neuroectodérmica. En aproximadamente el 80% de los melanomas se
encuentra una expresión de ARNm guardando la expresión una relación
con el estado de metastatización de las células. La presencia de
células en la sangre que expresan este ARNm es una buena indicación
de células tumorales en circulación de un melanoma avanzado o
metastatizante.
Lit.: Lehmann y col.; Proc. Natl.
Acad. Sci. USA 86:9891-9895, 1989.
\vskip1.000000\baselineskip
Sinónimo: proto-oncogén homólogo
al virus de la mielocitomatosis; c-myc.
La amplificación de c-myc se
encuentra en tumores primarios avanzados y en invasores.
Lit.: Adams y col.; Proc. Natl. Acad.
Sci. 80: 1982-1986, 1983.
\vskip1.000000\baselineskip
La N-CoR representa una proteína
co-represora para el receptor \beta de ácido
retinoico.
Lit.: Soderstrom y col.; Mol.
Endocrinol. 11:682 (1997).
\vskip1.000000\baselineskip
La neurotensina es un pequeño neuropéptido
localizado en las neuronas que contienen catecolamina.
Lit.: Bean, A.J. y col.;
Neurosience 50: 259-268, 1992.
\vskip1.000000\baselineskip
En el caso del gen NF1 se trata de un gen
supresor de tumores. El producto del gen de la neurofibromatosis 1
es la neurofibromina o NF1-GAP. En 10 familias con
neurofibromatosis (enfermedad de von Recklinghausen) se encontraron
mutaciones de NF-1.
Lit.: Marchuk D.A., y col.;
Genomics 11, 931-940, 1991.
\vskip1.000000\baselineskip
Sinónimo: merlina.
Los defectos del gen supresor de tumores de
NF-2 se encontraron en neurofibromatosis de tipo II,
una enfermedad maligna hereditaria con tumores bilaterales del 8º
nervio craneal, neurofibromas, meningiomas, gliomas o schwanomas y
también en meningiomas esporádicos, schwanomas y además en melanomas
y carcinomas de mama.
Lit.: Trofatter y col.; Cell 72:
791-800, 1993.
\vskip1.000000\baselineskip
El gen nm23-Hl representa un
posible supresor de metástasis. La expresión se comporta
inversamente proporcional a la formación de metástasis de ganglios
linfáticos.
Lit.: Royds JA., y col.; J. Natl.
Cancer Inst. 85, 727-31, 1993.
\vskip1.000000\baselineskip
Sinónimo: ER.
Además de su función como importante regulador
del crecimiento y la diferenciación de la glándula mamaria y del
tracto reproductor femenino, el receptor de estrógeno desempeña una
función en el desarrollo de carcinomas de mama. Por tanto, el
contenido de un tumor de receptor de estrógeno y progesterona es un
marcador pronóstico importante para el éxito de la terapia
endocrina.
Se describieron distintas variantes de corte y
empalme del receptor de estrógeno a las que se les atribuye una
función en la oncogénesis o metastatización. Así, entre otras, en
las líneas celulares de cáncer de mama y tumores se encontró una
variante del receptor de estrógeno a la que le falta el exón 5.
Lit.: Greene y col.; Science 231:
1150-1154, 1986.
\vskip1.000000\baselineskip
Sinónimos: PGY-1; MDR1; GP170;
gen de resistencia a doxorubicina "Doxorubicin Resistance
Gene"; gen de resistencia a múltiples fármacos "Multidrug
Resistance Gene".
El gen mdr1 codifica una bomba de eflujo
localizada en la membrana apical para citostáticos. En el
tratamiento de tumores con agentes antineoplásicos frecuentemente
se produce simultáneamente una "resistencia a múltiples
fármacos" ("multi drug resistance") contra muchos fármacos
estructuralmente distintos. Experimentalmente, bajo la acción de
agentes antineoplásicos pudo observarse una amplificación del locus
de mdr1. En las líneas celulares con quimiorresistencia existente
se encontró un aumento de la expresión de este gen.
Lit.: Gros y col.; Cell 47:
371-380, 1986.
\vskip1.000000\baselineskip
Sinónimos: p16(INK4) o CDKN2; MTS1.
Con p16 se designa al inhibidor de cinasas
dependiente de ciclinas. Las deleciones de mts1 son características
en una pluralidad de tumores. En melanomas se descubrieron tanto
deleciones como mutaciones de este gen. La frecuencia de las
deleciones del gen CDKN2 en células tumorales indica un gen supresor
de tumores.
Lit.: Stone S., y col.; Cancer
Res. 55, 2988-2994, 1995.
\global\parskip0.900000\baselineskip
p21 se refiere al inhibidor de cinasas
dependiente de ciclinas humano.
Lit.: Harper J.W., y col.; Cell 75
(4), 805-16, 1993.
\vskip1.000000\baselineskip
Las mutaciones en el gen p53 pertenecen a las
modificaciones genéticas más frecuentes en tumores malignos en los
seres humanos. En la mayoría de estos tumores se encuentra la
pérdida de un alelo del gen p53 (carcinoma de mama
(32-64%), carcinoma de ovario
(44-66%); carcinoma de estómago (>60%); carcinoma
de vejiga (38-58%); carcinoma de páncreas (70%);
carcinoma de pulmón (20%); carcinoma de próstata (59%); carcinoma de
cuello de útero (50%)). Las mutaciones se encuentran repartidas por
toda la longitud de la proteína habiendo una acumulación en los
exones 5 a 8 y en este caso con frecuencia todavía están afectados
algunos exones (codones 175, 245, 248, 249, 273). La frecuencia de
estas mutaciones de hipermutabilidad es diferente dependiendo del
órgano de origen del tumor. Las mutaciones en el codón 175 se
encuentran, por ejemplo, en el 6% de los carcinomas de mama, el 14%
de los tumores colorrectales y el 4% de los carcinomas de ovario. Se
trata casi exclusivamente de mutaciones puntuales que se producen
en una amplia región del gen.
Lit.: Levine A.J.; Nature 351,
453, 1991.
\vskip1.000000\baselineskip
Sinónimos: factor FDGF; GDGF;
GDGF-1; GDGF-2; GSM; MDF; MDGF;
ODGF; T47D.
El PDGF es un factor de crecimiento local,
autocrino y paracrino de acción quimiotáctica, un potente
vasoconstrictor y factor de angiogénesis.
Lit.: Westermark y Sorg: Biology
of platelet-derived growth factor. Karger,
Basel 1993.
\vskip1.000000\baselineskip
Sinónimo: PYY.
El PYY se sintetiza endocrinamente por células
del intestino delgado, del colon y del páncreas.
Lit.: Hort, Y. y col.; Genomics
26: 77-83, 1995.
\vskip1.000000\baselineskip
Sinónimos: Citolisina; proteína relacionada con
C9 "C9-related protein"; proteína formadora de
poros "pore-forming protein"; PFP.
La perforina-1 pertenece a una
clase de proteínas citolíticas que permeabilizan las membranas de
las células diana.
Lit.: Ojcius y Young; TIBS
16: 225-229, 1991.
\vskip1.000000\baselineskip
Sinónimo: PGR.
Una alto contenido de receptor de progesterona
es un carcinoma de mama es un marcador pronóstico de la respuesta a
una terapia endocrina y una supervivencia más larga. Acorde con
esto, la progesterona tiene una acción protectora en comparación
con el cáncer de mama. El análisis del receptor de progesterona en
carcinomas de mama es especialmente interesante ya que también
puede determinarse indirectamente la presencia del receptor de
estrógeno.
Lit.: Misrahi y col.; Biochem.
Biophys. Res. Commun. 143: 740-748,
1987.
\vskip1.000000\baselineskip
Las células de próstata normales y neoplásicas
expresan PSM.
Lit.: Israeli y col.; Cancer Res.
53: 227-230, 1993.
Sinónimo: APS.
El nivel de PSA se mide en radioinmunoensayos
para el diagnóstico y la supervisión de carcinomas de próstata.
Lit.: Lundwall y col.; FEBS Lett.
214: 317-322, 1987.
\vskip1.000000\baselineskip
Los genes celulares de la familia de genes ras
se denominan según los oncogenes retrovirales correspondientes. Sus
nombres son: c-Harvey-ras
(c-H-ras),
c-Kirsten-ras
(c-K-ras) y N-ras
(descubierto en neuroblastomas).
Las mutaciones en los codones 12, 13 y 61 se
encuentran tanto en tumores sólidos como en hemopoyéticos. Las
mutaciones RAS pueden detectarse frecuentemente en carcinomas de
páncreas, de glándulas tiroideas y colorrectales. La mayoría de las
mutaciones en tumores colorrectales son transiciones
G-A, lo que permite sacar conclusiones sobre los
agentes alquilantes.
Lit.: Bos J.L.; Cancer Res., 49,
4682-9, 1989.
\vskip1.000000\baselineskip
La pérdida o la inactivación del gen RB es
decisiva para la génesis de retinoblastomas. La pérdida de la
función del gen en ambos alelos conduce a la oncogénesis. Pueden
usarse microsatélites y RFLP en retinoblastoma familiar para el
diagnóstico de ADN.
Lit.: Friend S.H., y col.; PNAS
84, (24) 9059-63, 1987.
\vskip1.000000\baselineskip
El oncogén de RET se transpone frecuentemente en
carcinomas de glándulas tiroideas papilares y se recombina con otro
gen. En pacientes con neoplasia endocrina múltiple de tipo MEN 2A,
como también en pacientes con carcinoma de glándulas tiroideas
familiar (FMTC), se detectaron en un alto porcentaje mutaciones de
la línea germinal del oncogén de RET.
Lit.: Viglietto-G y col.; Oncogene
1995 Sep 21, 11(6): 1207-10.
\vskip1.000000\baselineskip
La proteína SCCA-1 se aisló a
partir de un carcinoma "de células escamosas"
("Squamous-Cell") de cuello de útero
metastásico. La SCCA-1 se usa como marcador para
carcinomas epiteliales escamosos, especialmente de cuello de útero,
de la garganta y el cuello, de pulmón y de esófago, guardando la
cantidad de antígeno en la sangre una relación con la
progresión.
Lit.: Schneider y col.; Proc. Natl.
Acad. Sci. U.S.A. 92: 3147-3151,
1995.
\vskip1.000000\baselineskip
Las selectinas son glicoproteínas transmembrana
que se expresan en distintos tipos de células como plaquetas
(P-selectina); leucocitos
(L-selectina) y células endoteliales (E- y
P-selectina). El patrón de expresión de las
selectinas y sus ligandos sobre células permite sacar conclusiones
sobre el comportamiento de recirculación de las células
correspondientes.
Lit.: Springer, T.A. y col.; Cell
76: 301-314, 1994.
\vskip1.000000\baselineskip
Sinónimo: factor de crecimiento de hepatocitos
"Hepatocyte growth factor" (HGF).
El SF se expresa principalmente en células
mesenquimales, estroma y fibroblastos y es un potente factor de
angiogénesis y motilidad que como factor autocrino de células
tumorales puede impulsar su invasividad y la oncogénesis.
Lit.: Nakamura y col.; Nature 342:
440-443, 1989; Bellusci y col.;
Oncogene 9: 1091-1099, 1994.
\global\parskip1.000000\baselineskip
Sinónimos: proto-oncogén
met.
Al proto-oncogén
c-met le corresponde una función importante en la
oncogénesis.
Lit.: Park y col.; Proc. Natl. Acad.
Sci. USA 84: 6379-6383, 1987.
\vskip1.000000\baselineskip
Las STAT son una familia de proteínas que tanto
ejercen la función de transducción de señales como son activadores
de la transcripción.
Lit.: Darnell; PNAS 93:
6221-6224, 1996.
\vskip1.000000\baselineskip
Sinónimos: proteína tensioactiva "Surfactant
Protein" (SP)-A, -B, -C; -D.
La proteína tensioactiva A sólo es expresada,
por ejemplo, por células epiteliales alveolares de tipo II y
células claras en tejido pulmonar y la SP-C sólo
exclusivamente por células alveolares de tipo II. Existen varias
proteínas tensioactivas (A1 y A2, B, C y D) cuya expresión (por
ejemplo, ARNm) se describió en adenocarcinomas metastásicos,
micrometastásicos, pulmonares y extrapulmonares, carcinomas de
pulmón de células no pequeñas y carcinomas de mama.
Lit.: Betz y col.; Cancer Res. 55:
4283-4286, 1995.
\vskip1.000000\baselineskip
Las telomerasas definen los extremos de los
cromosomas.
Lit.: Morin G.B., y col.; Nature
353, 454-456, 1991. Blackburn E.H.;
Nature 350, 569-573, 1991.
\vskip1.000000\baselineskip
Sinónimos: MDGF-2 (factor de
crecimiento 2 derivado de la leche "milk-derived
growth factor 2"); TGF-1; TCGF (factor de
crecimiento de células transformadas "transformed cell growth
factor").
El TGF-alfa es expresado por un
gran número de carcinomas y líneas celulares transformadas (por
oncogenes virales o celulares). Puede actuar de factor de
crecimiento autocrino en carcinomas de ovario o de factor de
crecimiento hematopoyético y desempeñar una función en la
vascularización de tejido tumoral.
Lit.: Derynck; Advances in Cancer
Research 58: 27-52, 1992.
\vskip1.000000\baselineskip
Los TIMP pertenecen a una familia de los
inhibidores que inhiben la actividad de metaloproteinasas, por lo
que contrarrestan la desintegración de tejido y también participan
en la invasión y la metástasis de células de carcinoma en el
tejido.
Lit.: Apte y col.; Genomics 19:
86-90, 1994.
\vskip1.000000\baselineskip
Sinónimos: caquectina; TNF derivado de
monocitos/macrófagos "Monocyte/Macrophage-derived
TNF"; citotoxina (CTX); pirógeno endógeno "endogenous
pyrogen"; TNF-a.
El TNF-alfa ejerce un efecto
citotóxico y apoptósico directo sobre células tumorales.
Lit.: Wang y col.; Science 228:
149-154, 1985.
\vskip1.000000\baselineskip
Sinónimos: CD120a; TNF-R
citotóxico.
El TNF-R1 representa el receptor
1 del factor de necrosis tumoral humano y media principalmente en la
citotoxicidad y la apoptosis.
Lit.: Loetscher H., y col.; Cell
61, 351-59, 1990.
\vskip1.000000\baselineskip
Sinónimo: C120b; TNFBR.
El TNF-R2 media principalmente
en la activación de células T.
Lit.: Beltinger C.P.; Genomics 35,
94-100, 1996.
\vskip1.000000\baselineskip
Sinónimos: TOPO; TOP2A; topoisomerasa alfa.
Las topoisomerasas de ADN son enzimas
dependientes de ATP que controlan en estado topológico del ADN.
Puede encontrarse una quimiorresistencia en aquellos tumores en los
que la actividad de la topoisomerasa es reducida, como por ejemplo
por una expresión reducida. Además, se aisló una mutación del gen de
la topoisomerasa a partir de líneas celulares quimiorresistentes
que produce que la enzima ya no pueda ser inhibida por el agente
antineo-
plásico.
plásico.
Lit.: Hinds y col.; Cancer
Research 51: 4729-4731, 1991.
\vskip1.000000\baselineskip
En el transcurso de la diferenciación de células
B se transponen los genes de inmunoglobulina (Ig) y durante la
maduración de las células T el receptor de células T (TCR). Si en la
sangre de un paciente se encuentra una multiplicación de una célula
T, ésta puede identificarse detrás del fondo policlonal de todos los
linfocitos T restantes.
Lit.: Trainor y col.; Blood, 78,
192-196, 1991. Lehman y col.;
Hematopathology, 103, 171-176,
1995.
\vskip1.000000\baselineskip
Esta translocación es la más frecuente en
linfomas humanos.
Se encuentra en más del 80% de los linfomas
foliculares, en aproximadamente el 20% de los linfomas difusos de
células grandes y en aproximadamente el 50% de los linfomas sin
diferenciar adultos.
Lit.: Barker y col.; Blood, 83,
1079-1085, 1994.
\vskip1.000000\baselineskip
Sinónimos: cromosoma Philadelphia, BCR/ABL.
El cromosoma Philadelphia se produce por una
translocación recíproca entre los cromosomas 9 y 22 que se observa
en aproximadamente el 90% de los pacientes con leucemia mieloide
crónica (LMC) en las células tumorales. En una menor incidencia,
esta transposición también se encuentra en leucemias linfáticas
agudas. Sólo resultan 3 posibles transcritos de fusión distintos
que pueden utilizarse para la detección de una LMC o "enfermedad
mínima residual".
Lit.: Maurer y col.; The Lancet,
337, 1055-1058, 1991.
\vskip1.000000\baselineskip
En el 68% de los rabdomiosarcomas alveolares, la
translocación (2;13) se encuentra como una anomalía citogenética
específica en la que participan los genes de los factores de
transcripción PAX3 (cromosoma 2) y FKHR (cromosoma 13). El 14% de
los rabdomiosarcomas alveolares presenta la translocación (1;13),
participando el gen PAX7 en el cromosoma 1 en lugar del gen PAX3 en
el cromosoma 2.
Lit.: Sreekantaiah y col.; American J.
Pathol., 144: 1121-1134, 1194.
\vskip1.000000\baselineskip
Esta translocación se encuentra en el 91% de
todos los sarcomas sinoviales. Participan el gen SSX del cromosoma
X y el gen SYT del cromosoma 18, que conduce a un transcrito de
fusión que supuestamente ocupa una posición clave en el desarrollo
de tumores.
Lit.: Clark y col.; Nature
Genetics, 7, 502-508, 1994.
\vskip1.000000\baselineskip
En esta translocación, que se produce en el 77%
de todos los liposarcomas mixoides, participan los genes del factor
de transcripción CHOP (cromosoma 12) y el gen FUS (cromosoma 16),
cuya función es desconocida hasta la fecha.
Lit.: Rabbits y col.; Nature
Genetics, 4, 175-180, 1993.
\vskip1.000000\baselineskip
Esta translocación se encuentra en el 86% de
todos los sarcomas de Ewing y tiene como consecuencia la formación
de un transcrito de fusión que está constituido por el gen EWS
(cromosoma 22) y el gen FLI (cromosoma 11).
Lit.: West y col.; J. Clin.
Oncol., 15, 583-588, 1997.
\vskip1.000000\baselineskip
Las tubulinas representan los constituyentes
monoméricos del citoesqueleto.
Lit.: J. Biol. Chem. 272:2534
(1997).
\vskip1.000000\baselineskip
La tirosinasa es una enzima clave de la síntesis
de melanina que se expresa exclusivamente en melanocitos y células
de melanoma. Por tanto, la detección de las células que expresan
tirosinasa en la sangre indica la presencia de células de melanoma
en circulación en la sangre.
Lit.: Giebel y col.; Genomics 9.
435-445, 1991.
\vskip1.000000\baselineskip
y
El UPA es una enzima proteolítica cuya expresión
guarda relación con una elevada invasividad, angiogénesis asociada
a tumor y metastatización. Su actividad se regula por un inhibidor
(PAI-1). Las investigaciones, entre otros, en
carcinoma de mama primario y carcinoma de estómago han mostrado que
altos niveles de UPA van acompañados de un mal pronóstico. Acorde
con esto, en células tumorales invasoras no se encuentra expresión
de PAI-1. El equilibrio de UPA y
PAI-1 también forma un parámetro pronóstico para la
capacidad de metastatización y angiogénesis de un tumor.
Lit.: Ito y col.; Virchows Arch.
427:487-497, 1996.
\vskip1.000000\baselineskip
Sinónimos: VPF; factor de permeabilidad vascular
"vascular permeability factor"; vasculotropina
"vasculotropin"; CD(derivado de
glioma)-VEGF
"CD(glioma-derived)-VEGF".
El VEGF puede aparecer en cuatro formas como
consecuencia de cortes y empalmes alternativos de ARNm,
concretamente VEGF121 y VEGF165, así como VEGF189 y VEGF206. Parece
que el VEGF desempeña una función importante en el control de la
formación y la permeabilidad de los vasos sanguíneos y además parece
que es un regulador principal de la angiogénesis de tumores.
Lit.: Leung y col.; Science 246:
1306-1309, 1989. Tischer y col.; J.
Biol. Chem. 266: 11947-11954, 1991.
\vskip1.000000\baselineskip
Sinónimos: tirosina cinasa 1 similar a FMS
"FMS-like Tyrosine kinase-1";
receptor del factor de crecimiento endotelial vascular flt1/factor
de permeabilidad vascular "flt1 vascular endothelial growth"
factor/vascular permeability factor receptor; oncogén flt
"oncogene flt".
Se ha descrito reiteradamente una elevada
expresión de VEGF-R1 en carcinomas.
Lit.: Shibuya y col.; Oncogene 5:
519-524, 1990.
\vskip1.000000\baselineskip
Sinónimos: KDR; receptor del factor de
crecimiento de tirosina cinasa "Tyrosine kinase growth factor
receptor"; receptor FLK-1 para el factor de
crecimiento endotelial vascular "FLK-1 receptor
for vascular endothelial growth factor"; FLK1; receptor del
dominio de inserto de cinasa "kinase insert domain
receptor".
La regulación por incremento de ARNm de VEGF en
células tumorales y el ARNm de sus receptores en la vasculatura
tumoral guarda relación con una elevada malignidad del tumor. El
VEGF-R2 se transcribe además en células tumorales
de melanoma y de ovario.
Lit.: Terman y col.; Oncogene 6:
1677-1683, 1991; Boocock y col.; J.
Natl. Cancer Inst. 87: 506-516, 1995.
\vskip1.000000\baselineskip
El producto génico de VHL es una proteína
supresora de tumores que en mutaciones hereditarias conduce a
carcinomas de riñón, hemangiomas del cerebelo y la retina,
feocromocitomas y ependimomas. También pudo mostrarse una
participación en la génesis de tumores espontáneos.
Lit.: Latif y col.; Science 260:
1317-1320, 1993.
\vskip1.000000\baselineskip
De gran importancia para la oncogénesis viral
son los virus de la hepatitis B y C, opcionalmente también SV40,
con respecto a carcinomas de células hepáticas, el virus
HTLV-1 en relación con linfomas de células T, el
virus de Epstein Barr (EBV) en relación con linfomas de Burkitt,
carcinomas nasofaríngeos y la enfermedad de Hodgkin y el virus del
papiloma humano de los tipos 16 y 18 en relación con carcinomas en
la región uretrogenital, especialmente de cuello de útero.
Además, se tratan virus del herpes de los tipos
4 y 6 y el virus de HI en relación con la génesis de tumores.
Lit.: Mueller M.; Environ.
Health Perspect. 103 (1995), supl. 8,
259-261.
\vskip1.000000\baselineskip
Lit.: De-Vita S. y col.;
Blood 86 (1995) 1887-1892.
Koike K.; Intervirology 38 (1995)
134-142.
Casola S. y col.; Acta Genet. Med.
Gemellol Roma 45 (1996) 221 -225.
E Hara y col.; Dev. Genet. 18
(1996) 161-172.
\vskip1.000000\baselineskip
Carcinomas
uretro-genitales (carcinomas de cuello de útero,
carcinomas cervicales, carcinomas vulvares, cáncer de próstata,
cáncer anal, cáncer de vejiga)
Lit.: Beyer-Finkler E. y
col.; Intervirology 38 (1995)
173-180.
Moyet-Lalle C. y col.;
Int. J. Cancer 64 (1995) 124-129.
\vskip1.000000\baselineskip
Linfomas (linfomas no Hodgkin, linfomas
de Burkitt, linfomas de células T, linfomas de células B)
Lit.: Lee J.H. y col.; J. Korean Med.
Sci. 10 (1995) 399-405; Tomita Y.
y col.; Leuk. Lymphoma 19 (1995)
129-134.
Wang C.Y. y col.; Mayo Clin. proc.
70 (1995) 665-672; Maroushek S.R. y
col.; Microb. Pathog. 19 (1995)
317-333.
\vskip1.000000\baselineskip
Lit.: Hogg J.C., Hegele R.G.;
Semin Resp. Infect. 10 (1995)
244-253.
\vskip1.000000\baselineskip
En el caso de los tumores de Wilms se trata de
tumores de riñón de niños. Se trata con gran probabilidad de un gen
supresor de tumores.
Lit.: Bonetta L., y col.; Cytogenet.
Cell Genet. 51, 1989. Gessler M., y col.;
Genomics 12, 807-813, 1992.
Claims (17)
1. Procedimiento para la caracterización de
células cancerosas diseminadas y micrometastatizadas mediante
análisis de ácidos nucleicos en el que
- i)
- las células obtenidas a partir del fluido corporal de un individuo se investigan para por lo menos un ARNm de un primer gen específico para cáncer; y
- ii)
- las células cancerosas separadas a partir del fluido corporal de un individuo se investigan para por lo menos un ADN o ARNm de un segundo gen específico para cáncer o asociado a cáncer y la misma investigación se realiza con células no cancerosas del mismo individuo para la comparación,
siendo distintos el primer y el segundo gen.
2. Procedimiento según la reivindicación 1,
caracterizado porque el fluido corporal es sangre o médula
ósea.
3. Procedimiento según la reivindicación 1 ó 2,
caracterizado porque las células obtenidas a partir del
fluido corporal del individuo pueden obtenerse obteniendo células,
un concentrado que contiene células o un líquido que contiene
células del fluido corporal.
4. Procedimiento según la reivindicación 3,
caracterizado porque las células, el concentrado que contiene
células o el líquido que contiene células es una fracción de sangre
que comprende células mononucleares.
5. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque las células
cancerosas separadas a partir del fluido corporal de un individuo
pueden obtenerse separando células cancerosas del fluido corporal o
de fracciones que contienen células del mismo mediante
inmunoadsorción, microfiltración o centrifugación en gradiente de
densidad.
6. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque la investigación
de las células obtenidas a partir del fluido corporal del individuo
para por lo menos un ARNm de un primer gen específico para cáncer
incluye un análisis de expresión de ARNm, no expresándose
esencialmente el gen de células no cancerosas del fluido corporal
investigado.
7. Procedimiento según la reivindicación 6,
caracterizado porque el ARNm es un ARNm expresado por el gen
CEA, CK20, MUC1, tirosinasa o MAGE3.
8. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 a 7, caracterizado porque la investigación
de las células cancerosas separadas a partir del fluido corporal
del individuo para por lo menos un ADN o ARNm de un segundo gen
específico para cáncer o asociado a cáncer incluye una investigación
para mutaciones, amplificaciones, LOH, translocaciones o
polimorfismos de ADN genómico.
9. Procedimiento según la reivindicación 8,
caracterizado porque el ADN genómico es un ADN genómico del
gen p53, erb-B2, c-myc,
K-ras, RB, APC o DCC.
10. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 a 9, caracterizado porque la investigación
de las células cancerosas separadas a partir del fluido corporal
del individuo para por lo menos un ADN o ARNm de un segundo gen
específico para cáncer o asociado a cáncer incluye una investigación
para una expresión del gen modulada en comparación con células no
cancerosas del fluido corporal del mismo individuo.
11. Procedimiento según la reivindicación 10,
caracterizado porque se expresa el gen de células no
cancerosas del fluido corporal del mismo individuo.
12. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 a 11, caracterizado porque el gen asociado
a cáncer es un gen específico para tejidos, gen asociado a
metastatización, gen de receptores de hormonas esteroideas, gen de
quimiorresistencia o gen que guarda relación con la
inmunomodulación, proliferación celular o apoptosis.
13. Procedimiento según la reivindicación 12,
caracterizado porque el gen asociado a metastatización
codifica un factor de angiogénesis, factor de motilidad, factor de
crecimiento, factor de degradación de la matriz o factor de
adhesión.
14. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 10 a 13, caracterizado porque el ARNm es
ARNm expresado por el gen bFGF, bFGF-R, VEGF,
VEGF-R1, VEGF-R2 MMP2 o TIMP3.
15. Uso del procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 a 14 para el diagnóstico in vitro de
cáncer.
16. Uso del procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 a 14 para la detección de células cancerosas
diseminadas y micrometastatizadas.
17. Uso del procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 a 14 para la localización de órganos de la fuente
de diseminación de células cancerosas diseminadas y
micrometastatizadas o para la creación de un perfil de riesgo de
células cancerosas diseminadas y micrometastatizadas.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19736691 | 1997-08-22 | ||
| DE19736691A DE19736691A1 (de) | 1997-08-22 | 1997-08-22 | Verfahren zur Charakterisierung und Identifizierung disseminierter und metastasierter Krebszellen |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2334866T3 true ES2334866T3 (es) | 2010-03-16 |
Family
ID=7839922
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES98946419T Expired - Lifetime ES2334866T3 (es) | 1997-08-22 | 1998-08-24 | Procedimiento para la caracterizacion de celulas cancerosas diseminadas y micrometastatizadas. |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7056660B1 (es) |
| EP (1) | EP1007740B1 (es) |
| JP (1) | JP2001514012A (es) |
| AT (1) | ATE445710T1 (es) |
| CA (1) | CA2301962C (es) |
| DE (2) | DE19736691A1 (es) |
| ES (1) | ES2334866T3 (es) |
| WO (1) | WO1999010528A1 (es) |
Families Citing this family (36)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6143529A (en) * | 1996-08-14 | 2000-11-07 | Exact Laboratories, Inc. | Methods for improving sensitivity and specificity of screening assays |
| DE19833738A1 (de) * | 1998-07-27 | 2000-02-03 | Michael Giesing | Verfahren zur Isolierung von Krebszellen aus zellhaltigen Körperflüssigkeiten sowie Sets zur Durchführung dieses Verfahrens |
| US6586177B1 (en) | 1999-09-08 | 2003-07-01 | Exact Sciences Corporation | Methods for disease detection |
| CA2394921A1 (en) | 1999-12-07 | 2001-06-14 | Anthony P. Shuber | Supracolonic aerodigestive neoplasm detection |
| DE10037506A1 (de) * | 2000-08-01 | 2002-02-14 | Giesing Michael | Verfahren zum Nachweis von Nukleinsäuren mittels Hybridisierung, Verwendung dieses Verfahrens und entsprechender Analysekit sowie Nukleinsäure-Oligomere und deren Verwendung |
| US7507528B2 (en) | 2001-09-06 | 2009-03-24 | Adnagen Ag | Method and diagnosis kit for selecting and or qualitative and/or quantitative detection of cells |
| EP1409746A2 (de) * | 2001-09-06 | 2004-04-21 | Adnagen AG | Verfahren und kit zur diagnostik oder behandlungskontrolle von brustkrebs |
| WO2003023059A2 (de) * | 2001-09-06 | 2003-03-20 | Adnagen Ag | Verfahren und kit zur diagnostik oder behandlungskontrolle von darmkrebs |
| WO2003071252A2 (en) | 2002-02-15 | 2003-08-28 | Exact Sciences Corporation | Methods for analysis of molecular events |
| DE10238046A1 (de) | 2002-08-20 | 2004-03-04 | Giesing, Michael, Prof. Dr.med. | Verfahren zum Untersuchen von Körperflüssigkeiten auf Krebszellen, dessen Verwendung, entsprechende Analysekits und Verwendung bestimmter Wirkstoffe zur Behandlung von Krebs |
| WO2004024957A2 (en) * | 2002-09-12 | 2004-03-25 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Method for detection of micro-metastasis |
| GR1004303B (el) * | 2002-11-05 | 2003-07-30 | Ελευθεριος Γεωργακοπουλος | ΝΕΑ ΜΕΘΟΔΟΣ ΑΝΙΧΝΕΥΣΗΣ ΤΟΥ ΚΑΡΚΙΝΙΚΟΥ ΜΕΜΒΡΑΝΙΚΟΥ ΑΝΤΙΓΟΝΟΥ Ep-Cam ΚΑΙ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟΣ ΚΥΚΛΟΦΟΡΟΥΝΤΩΝ ΜΙΚΡΟΜΕΤΑΣΤΑΤΙΚΩΝ ΚΑΡΚΙΝΙΚΩΝ ΚΥΤΤΑΡΩΝ ΣΤΟ ΠΕΡΙΦΕΡΙΚΟ ΑΙΜΑ ΑΣΘΕΝΩΝ (ΚΑΙ ΣΕ ΙΣΤΟΥΣ) ΜΕ ΚΑΡΚΙΝΟ ΕΠΙΘΗΛΙΑΚΗΣ ΠΡΟΕΛΕΥΣΗΣ |
| AU2003290925A1 (en) * | 2002-11-14 | 2004-06-15 | John Wayne Cancer Institute | Detection of micro metastasis of melanoma and breast cancer in paraffin-embedded tumor draining lymph nodes by multimaker quantitative rt-pcr |
| US8039218B2 (en) | 2002-11-14 | 2011-10-18 | John Wayne Cancer Institute | Detection of cancer cells in body fluids |
| TWI340168B (en) * | 2003-05-07 | 2011-04-11 | Tosoh Corp | Method of detecting micrometastasis |
| WO2005023427A1 (en) * | 2003-09-05 | 2005-03-17 | Stokes Bio Limited | A microfluidic analysis system |
| DE10345021A1 (de) | 2003-09-23 | 2005-05-04 | Univ Potsdam | Verfahren zur nichtinvasiven Früherkennung von Dickdarmkrebs und/oder Darmkrebsvorläuferzellen |
| CA2584989A1 (en) * | 2004-10-22 | 2006-05-04 | Sydney David Finkelstein | Molecular analysis of cellular fluid and liquid cytology specimens for clinical diagnosis, characterization, and integration with microscopic pathology evaluation |
| EP1803822A1 (en) * | 2005-12-30 | 2007-07-04 | Adnagen AG | Method for the individual characterization of therapeutic target molecules and use thereof |
| CA2698545C (en) * | 2007-09-07 | 2014-07-08 | Fluidigm Corporation | Copy number variation determination, methods and systems |
| WO2009067546A2 (en) * | 2007-11-19 | 2009-05-28 | Celera Corpration | Lung cancer markers and uses thereof |
| MX2010005811A (es) * | 2007-11-27 | 2010-06-09 | Veridex Llc | Enumeracion automatica y caracterizacion de las celulas del melanoma circulantes en la sangre. |
| US10365279B2 (en) * | 2008-01-25 | 2019-07-30 | Berg Llc | Assay system for the assessment of oncogenicity, tumor progression, and treatment efficacy |
| CN110016499B (zh) | 2011-04-15 | 2023-11-14 | 约翰·霍普金斯大学 | 安全测序系统 |
| ES2701742T3 (es) | 2012-10-29 | 2019-02-25 | Univ Johns Hopkins | Prueba de Papanicolaou para cánceres de ovario y de endometrio |
| US9341628B2 (en) | 2012-11-30 | 2016-05-17 | Interpace Diagnostics Corporation | Methods for measuring carcinoembryonic antigen |
| CN105102978B (zh) * | 2013-02-02 | 2018-11-02 | 杜克大学 | 分离循环肿瘤细胞的方法 |
| US11304976B2 (en) | 2015-02-18 | 2022-04-19 | Enlivex Therapeutics Ltd | Combination immune therapy and cytokine control therapy for cancer treatment |
| US11497767B2 (en) | 2015-02-18 | 2022-11-15 | Enlivex Therapeutics R&D Ltd | Combination immune therapy and cytokine control therapy for cancer treatment |
| US11318163B2 (en) | 2015-02-18 | 2022-05-03 | Enlivex Therapeutics Ltd | Combination immune therapy and cytokine control therapy for cancer treatment |
| US11000548B2 (en) | 2015-02-18 | 2021-05-11 | Enlivex Therapeutics Ltd | Combination immune therapy and cytokine control therapy for cancer treatment |
| US11596652B2 (en) | 2015-02-18 | 2023-03-07 | Enlivex Therapeutics R&D Ltd | Early apoptotic cells for use in treating sepsis |
| EP3865139B1 (en) | 2015-02-18 | 2023-05-03 | Enlivex Therapeutics Rdo Ltd | Combination immune therapy and cytokine control therapy for cancer treatment |
| AU2016250570B2 (en) | 2015-04-21 | 2021-07-01 | Enlivex Therapeutics Rdo Ltd | Therapeutic pooled blood apoptotic cell preparations and uses thereof |
| WO2017027653A1 (en) | 2015-08-11 | 2017-02-16 | The Johns Hopkins University | Assaying ovarian cyst fluid |
| CA3014885A1 (en) | 2016-02-18 | 2017-08-24 | Enlivex Therapeutics Ltd. | Combination immune therapy and cytokine control therapy for cancer treatment |
Family Cites Families (30)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5030565A (en) * | 1983-08-17 | 1991-07-09 | Scripps Clinic And Research Foundation | Polypeptide-induced monoclonal receptors to protein ligands |
| DE3717212A1 (de) * | 1987-05-22 | 1988-12-08 | Viktor Dr Dr Med Balazs | Verfahren zur untersuchung einer azellularen biologischen fluessigkeit auf zellulare onkogen-transkripte bzw. deren fragmente |
| DE3721400A1 (de) * | 1987-06-29 | 1989-01-12 | Viktor Dr Dr Med Balazs | Verfahren zur untersuchung einer azellularen biologischen fluessigkeit auf zellulare onkogen-dna bzw. deren fragmente |
| US5149628A (en) * | 1989-11-15 | 1992-09-22 | Temple University | Methods for detecting bcl-3 gene in human leukemias |
| DE69131255T2 (de) * | 1990-01-26 | 1999-12-16 | Washington Research Foundation, Seattle | Immunreaktivität gegenüber exprimierten aktivierten Oncogenen zur Diagnose und Behandlung von bösartigen Geschwülsten |
| US5620848A (en) * | 1990-06-27 | 1997-04-15 | Trustees Of Princeton University | Methods for detecting mutant p53 |
| EP0655090B1 (en) * | 1992-04-27 | 2000-12-27 | The Trustees Of Dartmouth College | Detection of gene sequences in biological fluids |
| US5646042A (en) * | 1992-08-26 | 1997-07-08 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | C-myb targeted ribozymes |
| CA2148350A1 (en) * | 1992-10-29 | 1994-05-11 | Carlo Croce | Methods of detecting micrometastasis of prostate cancer |
| US5601990A (en) * | 1994-09-13 | 1997-02-11 | Thomas Jefferson University | Methods of diagnosing colorectal tumors and metastasis thereof |
| CH686982A5 (fr) * | 1993-12-16 | 1996-08-15 | Maurice Stroun | Méthode pour le diagnostic de cancers. |
| JPH07203974A (ja) * | 1994-01-13 | 1995-08-08 | Tosoh Corp | 癌特異的ムチンを認識する抗体の遺伝子断片等 |
| US5622835A (en) * | 1994-04-28 | 1997-04-22 | The Wistar Institute Of Anatomy & Biology | WT1 monoclonal antibodies |
| US5667987A (en) * | 1994-07-12 | 1997-09-16 | Bristol-Myers Squibb Company | P53 response genes |
| US5589579A (en) * | 1994-07-19 | 1996-12-31 | Cytoclonal Pharmaceutics, Inc. | Gene sequence and probe for a marker of non-small cell lung carinoma |
| GB9422814D0 (en) * | 1994-11-11 | 1995-01-04 | Medinnova Sf | Chemical method |
| GB9423912D0 (en) * | 1994-11-26 | 1995-01-11 | Imp Cancer Res Tech | Detecting tumours |
| US5843737A (en) * | 1994-12-30 | 1998-12-01 | Chen; Lan Bo | Cancer associated gene protein expressed therefrom and uses thereof |
| IT1275862B1 (it) * | 1995-03-03 | 1997-10-24 | Consiglio Nazionale Ricerche | Trascritto antisenso associato ad alcuni tipi di cellule tumorali ed oligodeossinucleotidi sintetici utili nella diagnosi e nel trattamento |
| AU5310296A (en) * | 1995-03-17 | 1996-10-08 | John Wayne Cancer Institute | Detection of melanoma or breast metastases with a multiple marker assay |
| US5605830A (en) * | 1995-05-05 | 1997-02-25 | The Wistar Institute Of Anatomy & Biology | Murine and human c-Myc interacting protein |
| WO1996035808A1 (en) * | 1995-05-10 | 1996-11-14 | Centocor B.V. | Methods for detection and therapy of squamous cell carcinoma and bladder carcinoma, in particular for determining the presence and treatment of minimal residual disease, micrometastases or dissemination of such carcinoma types |
| WO1997007242A1 (en) * | 1995-08-16 | 1997-02-27 | Steven Lehrer | Method for detecting circulating breast cancer cells |
| US6190870B1 (en) * | 1995-08-28 | 2001-02-20 | Amcell Corporation | Efficient enrichment and detection of disseminated tumor cells |
| US5712097A (en) * | 1996-01-19 | 1998-01-27 | The Johns Hopkins University School Of Medicine | Tumor suppressor gene, DPC4 |
| FR2744455B1 (fr) * | 1996-02-02 | 1998-04-24 | Sanofi Sa | Nouvelles sequences d'acides nucleiques de la famille des facteurs suppresseurs de tumeurs, produits d'expression correspondants et leurs applications |
| CA2251186A1 (en) * | 1996-04-05 | 1997-10-16 | The Johns Hopkins University | A method of enriching rare cells |
| US5871917A (en) * | 1996-05-31 | 1999-02-16 | North Shore University Hospital Research Corp. | Identification of differentially methylated and mutated nucleic acids |
| US5976797A (en) * | 1996-12-20 | 1999-11-02 | Hitachi Chemical Co., Ltd. | Method for quantifying total mRNA with poly(A)-complementary oligonucleotide-immobilized microtiter plate |
| US6197523B1 (en) * | 1997-11-24 | 2001-03-06 | Robert A. Levine | Method for the detection, identification, enumeration and confirmation of circulating cancer and/or hematologic progenitor cells in whole blood |
-
1997
- 1997-08-22 DE DE19736691A patent/DE19736691A1/de not_active Withdrawn
-
1998
- 1998-08-24 CA CA002301962A patent/CA2301962C/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-08-24 WO PCT/EP1998/005360 patent/WO1999010528A1/de active Application Filing
- 1998-08-24 DE DE59814404T patent/DE59814404D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-08-24 US US09/485,879 patent/US7056660B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-08-24 ES ES98946419T patent/ES2334866T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-08-24 AT AT98946419T patent/ATE445710T1/de active
- 1998-08-24 JP JP2000507835A patent/JP2001514012A/ja not_active Withdrawn
- 1998-08-24 EP EP98946419A patent/EP1007740B1/de not_active Revoked
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE59814404D1 (de) | 2009-11-26 |
| WO1999010528A1 (de) | 1999-03-04 |
| DE19736691A1 (de) | 1999-02-25 |
| EP1007740B1 (de) | 2009-10-14 |
| CA2301962C (en) | 2010-01-12 |
| ATE445710T1 (de) | 2009-10-15 |
| CA2301962A1 (en) | 1999-03-04 |
| US7056660B1 (en) | 2006-06-06 |
| EP1007740A1 (de) | 2000-06-14 |
| JP2001514012A (ja) | 2001-09-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2334866T3 (es) | Procedimiento para la caracterizacion de celulas cancerosas diseminadas y micrometastatizadas. | |
| Sugimachi et al. | Transcriptional repressor snail and progression of human hepatocellular carcinoma | |
| Sozzi et al. | Absence of Fhit protein in primary lung tumors and cell lines with FHIT gene abnormalities | |
| Kinugasa et al. | Selective up-regulation of claudin-1 and claudin-2 in colorectal cancer | |
| Kersemaekers et al. | Role of P53 and MDM2 in treatment response of human germ cell tumors | |
| Schoenfeld et al. | Detection of breast cancer micrometastases in axillary lymph nodes by using polymerase chain reaction | |
| Sagae et al. | Mutational analysis of β‐catenin gene in Japanese ovarian carcinomas: frequent mutations in endometrioid carcinomas | |
| Saito et al. | Expression of DCC protein in colorectal tumors and its relationship to tumor progression and metastasis | |
| Lynch et al. | Mutational analysis of the transforming growth factor β receptor type II gene in human ovarian carcinoma | |
| Tokunou et al. | Altered expression of the ERM proteins in lung adenocarcinoma | |
| Martin et al. | EN2 is a candidate oncogene in human breast cancer | |
| Kovacs | The value of molecular genetic analysis in the diagnosis and prognosis of renal cell tumours | |
| Mohebi et al. | Expression analysis of vimentin and the related lncRNA network in breast cancer | |
| Ichikawa et al. | Detection of regional lymph node metastases in colon cancer by using RT-PCR for matrix metalloproteinase 7, matrilysin | |
| Iwamoto et al. | Overexpression of E2F-1 in lung and liver metastases of human colon cancer is associated with gene amplification | |
| Coosemans et al. | Upregulation of Wilms’ tumour gene 1 (WT1) in uterine sarcomas | |
| Hruza et al. | HER-2 and INT-2 amplification estimated by quantitative PCR in paraffin-embedded ovarian cancer tissue samples | |
| Czerwenka et al. | Amplification and expression of the c-erbB-2 oncogene in normal, hyperplastic, and malignant endometria | |
| Van Heerden et al. | Immunohistochemical evaluation of Fhit protein expression in oral squamous cell carcinomas | |
| ES2241402B1 (es) | Metodo para el screening in vitro de agentes antitumorales basados en la regulacion de la expresion del gen slug. | |
| Hong et al. | Clinical and prognostic significances of nuclear and cytoplasmic KIT expressions in extrahepatic bile duct carcinomas | |
| Liu et al. | Overexpression or mutation of the p53 tumor suppressor gene does not occur in malignant ovarian germ cell tumors | |
| US20050042650A1 (en) | EN2 gene, diagnostic and therapeutic uses thereof | |
| Contegiacomo et al. | High cell kinetics is associated with amplification of the int‐2, bcl‐1, myc and erbB‐2 proto‐oncogenes and loss of heterozygosity at the DF3 locus in primary breast cancers | |
| US20050147986A1 (en) | Methods and compositions for diagnosing and suppressing metastasis thereof |