ES2321551T3 - Procedimiento y dispositivo para el encapsulado de sustancias en liposomas con una estructura de la membrana libremente ajustable. - Google Patents

Abstract

Encapsulado de sustancias en liposomas (1), en especial para el encapsulado de principios activos en liposomas (1) de una bicapa (11) formada por capas (3, 4) monomoleculares, caracterizado porque dos monocapas (3, 4) distintas son aplicadas sobre la superficie de una membrana (2) soporte porosa, formando las dos monocapas (3, 4), debido a las interacciones físicas entre las sustancias de las monocapas (3, 4), una bicapa (11) con composición libremente ajustable del lado interior y del exterior, porque sobre los correspondientes lados exteriores de las monocapas (3, 4), que forman la bicapa (11) se aplican diferentes volúmenes (5, 7, 10) de fluidos con forma preferente de películas (33) delgadas, que, después de la fabricación de los liposomas (1) rodean el lado exterior de los liposomas (1) fabricados y/o se alojan en el interior de los liposomas (1), porque una membrana (6) compresible se une con la disposición de capas formada por la bicapa (11), los volúmenes (5,7, 10) de fluidos y la membrana (2) soporte porosa de tal modo, que los poros o canales (24) dispuestos en la membrana (6) compresible, llenos con un medio (7) tampón, se sitúen adyacentes al volumen (5, 9) de fluidos a alojar en el interior de los liposomas (1), porque la bicapa (11) es deformada localmente por medio de una sobrepresión (8), que puede ser ajustada en el medio (7) tampón, de tal modo, que la bicapa (11) sea presionada hacia el interior de los poros (23) de la membrana (2) soporte porosa y arrastrando al menos en parte el volumen (5, 9) de fluidos a alojar en el interior de los liposomas, lo estrangule y arranque de la bicapa (11), porque la zona (12) arrancada de la bicapa (11) se contrae, debido a la minimización de la energía te4nsoactiva hasta formar un liposoma (1) envolviendo al mismo tiempo el volumen (5, 9) de fluidos arrastrado de la sustancia (9) a alojar en el interior de los liposomas (1) y porque el liposoma (1) pasa a través de la membrana (2) soporte porosa.

Description

Procedimiento y dispositivo para el encapsulado de sustancias en liposomas con una estructura de la membrana libremente ajustable.

El invento se refiere a un procedimiento y a dispositivos según el preámbulo de la reivindicación 1, respectivamente el preámbulo de la reivindicación 21, respectivamente 31 para el encapsulado de sustancias en liposomas con una estructura de la membrana libremente configurable.

Los liposomas son burbujas con membrana, que rodea un espacio interior líquido y que están suspendidas coloidalmente en un medio acuoso. Las membranas están formadas por lípidos anfifilos, tales como fosfolípidos y glicolípidos, que forman una capa doble de lípidos (bicapa). Con frecuencia se incorporan a la bicapa colesterol u otros esteroles para reducir la fluidez en la bicapa. Los liposomas se pueden hallar en forma unilamelar, pero también en forma oligolamelar o multilamelar; su tamaño se pueden hallar, según el procedimiento de fabricación entre aproximadamente 20 nm y más de 1 \mum.

Como complemente de la utilización científica usual del nombre "liposoma" (sinónimo del concepto "vesícula") se entienden también siempre con este concepto en lo que sigue los siguientes agregados de la química coloidal, que se pueden fabricar, transformar o utilizar como liposomas, de acuerdo con el procedimiento según el invento: gotas de emulsión con tamaño de micrómetro o nanometro, liposomas polímeros, micelas o mezclas de estas formaciones de agregados con liposomas puros. Estos agregados de la química de coloides también son abarcados, incluso cuando sólo se utiliza el concepto liposoma.

Los liposomas desempeñan en la farmacología, la cosmética y la tecnología de productos alimenticios modernas un papel importante como medios de transporte para principios activos farmacéuticas, para mejorar la hidratación de la piel o para alojar principios activos, respectivamente para aditivos de alta calidad de los productos alimenticios. En lo que sigue se tratará siempre que se mencionen los diferentes campos de aplicación mencionados más arriba a título de ejemplo, pero no limitativo de la importancia de los liposomas para la tecnología farmacéutica. Otros campos relevantes, sólo citados aquí a título de ejemplo y sin limitaciones así como relevantes para el campo de aplicación del invento puede ser el aporte de medicamentos (drug delivery), la química sintética en eneral, las cámaras de reacción a escala de nanometros en los sectores de la energía, óptica, electrónica, técnica de microfluidos, química de coloides, biosensores y sectores emparentados en los que pueden hallar aplicaciones los liposomas y los agregados de la química de coloides o en los que puedan hallar aplicación procedimientos de fabricación correspon-
dientes.

Los liposomas pueden estar recubiertos con una capa de polietilenglicol (se hable de PEGlado), que los protege de manera estérica y forma una capa de hidrato adicional (véase para ello Papisoy, M.I. (1998) Theoretical considerations of RES-avoiding liposomes: Molecular mechanics and chimestry of liposome interactions, Advanced Drug Delivery Reviews, 32, 119-138). Los principios activos hidrófilos pueden ser encapsulados en liposomas, mientras que las sustancias lipofilas son incorporadas al recubrimiento. La cinética de los fármacos es modificada entonces por la naturaleza de los liposomas y apenas por la naturaleza del principio activo. Con la construcción de los liposomas (composición de la membrana, PEGlación, reducción del tamaño) se puede optimizar el "drug targeting", lo que en la terapia de tumores significa un enriquecimiento máximo en principios activos en el tejido del tumor. Por esta razón, numerosos quimoterapuéticos conocidos se aplican como formulaciones liposomales (por ejemplo DaunoXome®, Caelix®), ya que con ello se incrementa el efecto terapéutico, pero se reducen los efectos secundarios.

Las técnicas de fabricación actuales de liposomas se basan esencialmente en dos procedimientos alternativos:

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los métodos de homogeneización en los que los liposomas brutos son creados en primer lugar con el método de película (Bangham, A. D., Standish, M. M. & Watkins, J. C. (1965) Difusion of univalent ions across the lamellae of swollen phospholipids, J. Mol. Biol.. 13, 238-252) y son llevados después mecánicamente a un tamaño uniforme y

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la diálisis de detergente.

Todas las técnicas de fabricación desarrolladas hasta ahora tienen en común, que el espacio interior acuoso es, en el encapsulado, idéntico con el espacio exterior. Con una capacidad de encapsulado usual de aproximadamente el 2% significa esto, que el 98% del principio activo tiene que ser eliminado después del espacio exterior. El tratamiento ulterior de los liposomas con métodos térmicos o con gradientes del pH sólo es posible para determinados principios activos y conlleva otros inconvenientes (como por ejemplo una menor estabilidad de almacenamiento, pasos de tratamiento adicionales).

Un segundo defecto de las técnicas de fabricación desarrolladas hasta ahora es la uniformidad de la membrana, es decir, que el lado interior y el exterior de la bicapa son idénticos. Sin embargo, en todas las membranas biógenas son siempre distintos el lado interior y el exterior de la membrana, tanto desde el punto de vista de la composición del lípido, como también desde el punto de vista de la composición de proteínas. La asimetría de las membranas biológicas posee una función fisiológica importante para determinados mecanismos de identificación y de transporte celulares. Correspondientemente sería deseable la capacidad de manipulación ilimitada de la composición del lado interior y del exterior, por ejemplo para la fijación de principios activo en el lado interior o de capas de protección estéricas o receptores en el lado exterior, lo que sólo es posible en la actualidad de manera limitada con pasos de tratamiento adicionales.

La posibilidad de sintetizar monocapas para formar bicapas y de incorporar liposomas por medio de fuerzascentrífugas ya se describe en la literatura científica en otros lugares (Träuble, H. & Greil, E. (1971): The formation of a-symetrical spherical lecithin vesicles, Neuroscience Research Program Bulletin, 9, 373-380).

Bajo el concepto monocapa se entienden usualmente capas monomoleculares de sustancias con actividad tensocativa. Además de esta definición, se entienden también siempre en lo que sigue bajo el concepto de monocapa todas aquellas sustancias y clases de sustancias capaces de formar capas delgadas y de protección capaces, como por ejemplo polímeros y proteínas y en especial también, cuando estas clases de sustancias y sustancias comprendan o puedan comprender eventualmente más de una capa de moléculas. De manera análoga, en el contexto siguiente se debe entender también siempre en el sentido expuesto más arriba la unión de dos monocapas.

Los correspondientes procedimientos para la fabricación de liposomas para aplicaciones farmacéuticas en el marco de la terapia de mistelas son conocidos a través del documento EP 0 310 984 B1 y del documento EP 0 288 603 B1. Con el procedimiento según el documento EP 0 603 984 B1 se fabrican con procedimientos de prensado extractos de plantas, es especial extractos de mistela, en los que el tejido celular de la planta pasa con una presión elevada por una ranura de 10 \mum y se homogeiniza al mismo tiempo. Las membranas de las paredes de las células y los órganos de la membrana son rotos con ello y sus fracciones se transforman en pequeñas burbujas huecas con contenido acuoso en un entorno acuoso (Koehler, R. Laue, H. B. v. & Leneweit, G. (2001): Veränderungen von Mistelextrakten durch ein pharmazeutisches Strömungsverfahren, en: R. Scheer, R. Bauer, H. Becker, P. A. Berg & V. Fintelmann (Eds.): Die Mistel in der Tumortherapie. Grundlagenforschung und Klinik, 55-64, KVC Verlag, Essen). Estas burbujas huecas pueden ser denominadas liposomas genuinos. El rendimiento en estos liposomas es muy pequeño.

Por ello, de acuerdo con el documento EP 0 310 984 B1 se intentó fabricar los liposomas sintéticamente de una manera definida. Para ello se crea en un dispositivo de discos rotativo una estructura con varias capas de monocapas dispuestas una encima de otra, que forman conjuntamente una bicapa, formándose las capas por la fuerza centrífuga debida a la rotación. La aplicación definida de liposomas genuinos o de células naturales sobre la bicapa así creada y la acción simultanea de la fuerza centrífuga dan lugar a que la membrana formada a partir de la bicapa se deforme y abombe localmente, pudiendo obtener con una deformación adicional debida a la fuerza centrífuga un estrangulamiento y un encapsulado del liposoma genuino, respectivamente de las células naturales y con ello también de el principio activo a encapsular. El principio farmacéutico activa puede ser fabricado así con la forma de un encapsulado liposomal. La problemática de este procedimiento es la garantía uniforme de las complicadas condiciones de flujo así como el rendimiento relativamente pequeño en sustancias encapsuladas de manera liposomal.

El estrangulamiento de liposomas también puede tener lugar con presión siguiendo el modelo de la extrusión de liposomas brutos a través de membranas adecuadas (Véase por ejemplo Lasch, J. Weissig. V & Brandl. M (2003): Preparation of liposomes, en: V. P. Torchillin & V. Meissig (Eds.) Liposomes, Parctical Approach, vol. 264, 3-30, Oxford University Press, Oxford). El coste de la realización allí mencionados es considerable, mientras que las cantidades de liposomas obtenidas son relativamente pequeñas. Las presiones necesarias también son elevadas, por lo que se pueden producir incluso daños en los liposomas fabricados.

El objeto del presente invento es por ello unir dos capas monomoleculares con distinta composición para formar una bicapa y lograr por medio de una manipulación definida de esta bicapa el encapsulado de las sustancias contenidas en forma de liposomas a fabricar.

La solución del problema según el invento resulta de las características de la reivindicación 1 en combinación con las características del preámbulo. Otras configuraciones ventajosas del invento se desprenden de las reivindicaciones subordinadas.

El invento parte de un procedimiento para el encapsulado de sustancias en liposomas, en especial para el encapsulado de principios activos de una bicapa formada por las capas monomoleculares. Un procedimiento de esta clase es perfeccionado por el hecho de que en un primer paso se aplican dos monocapas distintas sobre la superficie de una membrana soporte porosa, formando las monocapas, debido a las interacciones físicas entre las sustancias de las monocapas, una bicapa con composición libremente configurables del lado interior y del lado exterior. Después se aplican sobre los correspondientes lados exteriores de las monocapas, que forman la bicapa, distintos volúmenes de fluidos con la forma preferente de películas delgadas, que, después de la fabricación de los liposomas, rodean el lado exterior de los liposomas obtenidos y/o se alojan en el interior de los liposomas. A continuación se une una membrana compresible con la disposición de capas formada por la bicapa, el volumen fluido y la membrana soporte porosa, de tal modo, que los poros o canales dispuestos en la membrana compresible se sitúen, cargados con un medio tampón, adyacentes al volumen de fluido a alojar en el interior de los liposomas. La bicapa es deformada localmente a continuación en la zona de los poros de la membrana soporte porosa por medio de una presión ajustable en el medio tampón, de tal modo, que la bicapa sea introducida en los poros de la membrana soporte porosa y, arrastrando al menos en parte el volumen de fluido a alojar en el interior del los liposomas, lo estrangule y arranque de la bicapa, después de lo que la zona arrancada de la bicapa se estrangula, debido a la minimización de la energía tensoactiva para fdormar un liposoma y envuelva el volumen de fluido arrastrado de la sustancia a alojar en el interior de los liposomas, de manera, que el liposoma pase, en especial también debido a la sobrepresión en el medio tampón, a través de la membrana soporte porosa, respectivamente sea arrastrado a través de ella.

Un procedimiento de fabricación de esta clase brinda una nueva posibilidad para fabricar de una manera técnicamente relativamente sencilla y barata liposomas, que se presten en especial para aplicaciones terapéuticas, pero, además, igualmente para todas las aplicaciones conocidas de liposomas, por ejemplo en el sector de la técnica de productos alimenticios o también en la cosmética. La aplicación de las diferentes monocapas sobre la superficie de la membrana soporte porosa permite unir estas dos monocapas por medio de interacciones físicas, como por ejemplo las fuerzas de Van der Waals, entre, por ejemplo cadenas de ácidos grasos para formar un bicapa estable con diferentes propiedades de los ulteriores lados interior, respectivamente exterior de un liposoma, siendo posible configurar libremente la composición en sustancia de la capa monomolecular interior y exterior de la bicapa, lo que abre nuevas posibilidades a la funcionalidad de los preparados de liposomas. El proceso de fabricación hace, además posible, una elevada eficiencia de encapsulado, ya que la aplicación de distintos volúmenes de fluido, de manera ideal en forma de películas delgadas en ambos lados de la bicapa, permite un control más exacto de las cantidades de sustancia previstas para el encapsulado en el interior del liposoma, respectivamente, que rodean este después de la fabricación de un liposoma, de manera, que, en especial en el encapsulado de principios activos en un liposoma sólo se producen pérdidas pequeñas de principio activo en el entorno del liposoma después de su fabricación y, por lo tanto, se puede obtener una tasa de rendimiento alta de los principios activos normalmente caros. La utilización de la membrana compresible en la que se aloja el medio tampón en los poros, respectivamente los canales y que se liberan al comprimir la membrana como en el caso de una esponja, permite manipular la asignación de las membranas compresibles a los volúmenes de líquido y a la bicapa la bicapa con una exactitud muy grande en la zona de los poros, respectivamente de los canales de la membrana soporte porosa, al mismo tiempo, que, en especial con una aplicación brusca de una presión sobre la membrana compresible el medio soporte no compresible o mucho menos compresible también sale bruscamente de los poros, respectivamente los canales de la membrana compresible y deforma la bicapa dispuesta adyacente en la zona de los poros, respectivamente los canales de la membrana soporte porosa hasta que se rompa esta y, arrastrando una parte del volumen de líquido, por ejemplo de un principio activo, penetre en los poros, respectivamente los canales de la membrana soporte porosa y se estrangule después y se desprenda de la bicapa. Esta zona arrancada de la bicapa se contraerá después forzosamente, debido a la tendencia de adoptar un estado de mínima energía tensoactiva con relación al entorno, hasta un liposoma usualmente con forma esférica y alojando con ello, rodeando totalmente el volumen de fluido arrastrado, por ejemplo de un principio activo, en el interior de la envolvente del liposoma formada por los componentes arrastrados de la bicapa. Un liposoma así creado puede ser evacuado y filtrado igualmente o separado de otra manera cualquiera del líquido circundante por medio de una sobrepresión en el medio tampón favorecida eventualmente por una aspiración correspondiente de los canales, respectivamente poros de la membrana soporte porosa. En este procedimiento se pueden obtener esfuerzos mecánicos relativamente pequeños de los principios activos, respectivamente los liposomas, que son inevitables por ejemplo en la extrusión con alta presión de otro procedimiento de fabricación conocido. Además, con la elección definida de la membrana soporte porosa y de su porosidad se puede lograr, que los liposomas se formen con un tamaño definido y también, que, con una superficie elevada de la porosidad en la superficie de la membrana soporte porosa, se formen en una cantidad relativamente
grande.

Aquí tiene especial importancia la aplicación de películas de líquido y de monocapas delgadas sobre las superficies cilíndricas de rodillos para dar lugar a una síntesis definida de dos monocapas en una bicapa así como la fijación de principios activos, respectivamente de capas de protección y de receptores en el lado interior, respectivamente exterior de la bicapa. Se puede obtener una variación sencilla de los parámetros del procedimiento influyendo en la rotura controlada con la presión de las bicapas y por medio del transporte de los liposomas, que se forman, a través de poros uniformes, contribuyendo también a la efectividad del procedimiento la aspiración de la suspensión de liposomas detrás de la membrana soporte porosa en un sistema de drenaje con un volumen muerto lo más pequeño posible.

Para la uniformidad de la formación de los liposomas es ventajoso, que la membrana soporte porosa posea poros con un tamaño exacto de los poros, para lo que se puede utilizar también por ejemplo una membrana de filtro con una porosidad mayor que la de la membrana soporte porosa. Estas membranas soporte porosas, que se pueden fabricar por ejemplo con la ayuda de procedimientos nanotecnológicos, con preferencia con la ayuda de la técnica "track-etch", poseen poros muy uniformes y, referido a la superficie de la membrana soporte, muchos poros, respectivamente canales a través de los que puede tener lugar la formación de liposomas descrita en lo que antecede.

Es especialmente ventajoso, que la membrana soporte porosa esté formada por una membrana de policarbonato (membrana de PC) en la que la porosidad esté formada por poros o canales pasantes. Los liposomas formados en el lado superior de la membrana soporte en la zona de la entrada en los poros, respectivamente los canales son transportados con ello después de la rotura de la bicapa por la presión, que sigue actuando, para la rotura de la bicapa, a través de todos los poros, respectivamente todos los canales de la membrana soporte porosa y salen nuevamente en el otro lado de la membrana soporte porosa. Obviamente, también cabe imaginar, que la membrana soporte porosa esté formada por otro material con poros pasantes y con una elevada porosidad.

Se puede obtener un rendimiento especialmente grande en liposomas, cuando la membrana soporte porosa posee una porosidad con una densidad de poros grande, con preferencia hasta el 25% de la superficie de la membrana soporte. En otra configuración se puede prever, que los poros o canales pasantes posean un diámetro de 10 nm a 20 \mum, con lo que el tamaño de los liposomas obtenidos se puede hallar en el mismo margen de tamaños.

A la efectividad del procedimiento contribuye, además, el hecho de que la bicapa sea transformada, debido a la elevada densidad de poros de la membrana soporte porosa, casi totalmente en liposomas esféricos. Con ello sólo una cantidad pequeña de la sustancia de la bicapa no es transformada en superficies de los liposomas y sólo se pierde una cantidad pequeña de la bicapa aplicada.

Desde el punto de vista de la utilización ulterior de los liposomas es especialmente ventajoso, que la capa de superficie de la bicapa, que se halle en el interior de los liposomas, se configure de tal modo, que las sustancias a encapsular en los liposomas se adsorban a esta capa interior o se encapsulen en ella. Con ello se puede lograr, que el volumen de fluido fijado a este lado de la bicapa posea una afinidad especial con este lado de la bicapa y que al arrancar la bicapa se arrastre una gran cantidad de este volumen de fluido. Igualmente, en otra configuración cabe imaginar, que la monocapa de la bicapa situada en el lado exterior de los liposomas se configura de tal modo, que las sustancias, que rodean los liposomas, se adsorban a esta capa exterior, pudiendo ser aplicadas, en un perfeccionamiento, las sustancias, que rodean los liposomas a esta capa exterior como capas de protección estéricas o receptores. Con ello es en especial posible adaptar también el lado exterior de los liposomas de manera definida a las propiedades exigidas, por ejemplo de una aplicación terapéutica, por el hecho de que las sustancias correspondientes, que rodena la capa exterior de los liposomas, pueden ser fijadas especialmente bien a esta superficie de la bicapa, respectivamente se adhieren fuertemente a ella.

Se puede lograr el control exacto de los gruesos de las capas, respectivamente también de los volúmenes a encapsular, cuando los volúmenes de fluido se aplican en forma de películas de fluido muy delgadas sobre la bicapa, respectivamente se te fijan al bicapa, en especial cuando los volúmenes de fluido poseen un espesor de la capa hasta de 1 \mum. La utilización de estos volúmenes de fluido es con ello muy efectiva y se pierde poca cantidad de estos volúmenes de fluido, ya que estos volúmenes de fluido con consumidos ampliamente en la formación de los liposomas.

Una primera configuración imaginable del procedimiento prevé, que el procedimiento se realice de una manera continua por medio de una disposición de cilindros, que ruedan unos encima de otros, sobre los que están aplicadas las diferentes membranas y volúmenes de líquido, que se pueden llevar al contacto mutuo por la rodadura de los diferentes cilindros. Con un procedimiento continuo de esta clase se pueden fabricar cantidades grandes de liposomas con una calidad muy constante, pudiendo alcanzar con el funcionamiento continuo del correspondiente dispositivo un control muy bueno del procedimiento.

Para cantidades menores de liposomas a producir o también para el procedimiento puede ser ventajoso, que el procedimiento se realice de manera discontinua por medio de una disposición de cilindros y de un soporte plano sobre el que se depositan las diferentes membranas y volúmenes de líquido y/o se puedan llevar al contacto mutuo con la rodadura de los cilindros. En este caso es posible variar con facilidad los parámetros del procedimiento, respectivamente realizar de manera sencilla la aplicación de las diferentes capas, respectivamente películas sobre un soporte plano.

El invento se refiere, además, a un dispositivo con funcionamiento discontinuo para el encapsulado de sustancias en liposomas, en especial para la realización de un procedimiento según la reivindicación 1. En un dispositivo de esta clase posee el dispositivo un soporte plano sobre el que se halla una membrana soporte porosa, aplicando al menos un cilindro sucesivamente las diferentes membranas y volúmenes de fluido, que pueden ser aplicados previamente sobre el al menos un cilindro, por medio de un movimiento relativo sobre la membrana soporte porosa, por rodadura con la membrana soporte porosa. Con ello se puede influir, igual que en la antigua alta presión obtenida con una prensa manual, por medio del cilindro de manera definida en la superficie de la membrana soporte porosa, respectivamente en los volúmenes de fluido o en las capas aplicadas sobre el cilindro, de manera, que el desarrollo del proceso de un procedimiento según la reivindicación 1 es muy claro y puede ser modificado con facilidad desde el punto de vista de los parámetros del procedimiento.

Para la recuperación de los liposomas de los fluidos transformados en el dispositivo es ventajoso, que el soporte plano posea una placa con estrías de drenaje. Con estas estrías de drenaje se puede evacuar con facilidad el volumen de fluido, que sale unilateralmente de la membrana soporte porosa y puede ser procesado para la separación de los liposomas obtenidos. El soporte plano puede poseer, en este caso, de acuerdo con otra configuración, una delgada placa sinterizada, con preferencia de polietileno o de acero afinado, que sirve para la estabilización de la membrana soporte porosa usualmente muy delgada y que puede ser dispuesta junto con la placa sinterizada sobre la placa con las estrías de drenaje.

Otra configuración del dispositivo prevé, que la membrana compresible sea aplicada sobre al menos un cilindro y que se pueda desplazar con presión ajustable con relación al soporte plano y ruede así sobre el soporte plano. Este procedimiento equivale esencialmente a la antigua alta presión conocida por medio de una prensa manual y da lugar a esfuerzos muy uniformes en el soporte plano durante la rodadura del cilindro, con lo que se pueden modificar de manera muy definida las condiciones de formación de los liposomas.

Obviamente también cabe imaginar, que, en lugar de un solo cilindro para cada uno de los procesos de recubrimiento y de transformación, se prevea un cilindro de transferencia, separado, que se pueda introducir sucesivamente en el dispositivo y se lleve al contacto con la membrana soporte porosa o con el cilindro. Con ello se puede proceder a una preparación por separado de los diferentes pasos de los procesos de recubrimiento y de transformación en forma de diferentes cilindros de transferencia, de manera, que el proceso propiamente dicho de formación de los liposomas puede ser realizado con relativa rapidez y también con una elevada frecuencia de los ciclos.

En este caso es importante, que el movimiento relativo entre el soporte plano y el al menos un cilindro se produzca sin deslizamiento, de manera, que siempre tenga lugar una aplicación uniforme de las diferentes capas sobre la membrana soporte porosa.

Es ventajoso, que las sustancias, que forman las monocapas se puedan transferir al cilindro de transferencia como solución en un disolvente, en especial etanol. Esta aplicación de disolventes para la fabricación de monocapas es bien conocida y por ello perfectamente controlable, de modo, que de manera sencilla y reproducible se pueden obtener espesores definidos de las capas y propiedades definidas de las capas. En este caso cabe imaginar también, que las sustancias, que forman las monocapas, se sequen después de la transferencia al cilindro de transferencia sobre el cilindro de transferencia y se puedan transferir como películas secas a los volúmenes de fluido aplicados a la membrana. Para el desprendimiento de las películas aplicadas es en este caso ventajoso, que los volúmenes de fluido aplicados sobre la membrana disuelvan nuevamente las películas secas y las depositen como monocapas sobre los volúmenes de fluido.

Se puede influir de manera sencilla en los procesos durante la formación de los liposomas variando la elasticidad del recubrimiento del cilindro por medio de la capa elastómera situada debajo de la membrana compresible y de la presión de apoyo entre este cilindro y el soporte plano. Con ello se puede ajustar en la manera deseada la distribución de la presión en los poros del material soporte poroso durante la fabricación de los liposomas. Para la extrusión de la bicapa a través de la membrana soporte porosa y para la formación de los liposomas es necesaria una determinada presión mínima, que depende de varios factores (fluidez de la bicapa, tamaño de los poros, etc.).

Se pueden evitar volúmenes muertos innecesarios durante la recuperación de los liposomas del volumen de fluido, que se sale por el otro lado de la membrana soporte porosa, cuando el drenaje de los liposomas obtenidos tiene lugar por medio de una aspiración sólo de la zona del soporte plano en la que se presionan uno contra otro el cilindro y el material soporte poroso durante la rodadura del cilindro. Esto se puede obtener por ejemplo por el hecho de que para el drenaje sólo se lleven al contacto activo con la aspiración aquellas partes del soporte plano en las que se presionan uno contra otro el cilindro y el material soporte poroso durante la rodadura. Con ello sólo se aspira una cantidad muy pequeña del correspondiente volumen de fluido, de manera, que la recuperación de los liposomas obtenidos también es posible de un modo especialmente sencillo.

El invento se refiere, además, a un procedimiento con funcionamiento continuo para el encapsulado de sustancias en liposomas, en especial para la realización de un procedimiento según la reivindicación 1, en el que el dispositivo posee un soporte con forma de cilindro sobre el que está dispuesta una membrana soporte porosa y en el que una disposición de cilindros, que ruedan unos sobre otros, llevan las distintas membranas y volúmenes de fluidos por medio de movimientos rotatorios relativos al contacto con la membrana soporte porosa rodando sobre la membrana soporte porosa. La obtención continua de esta clase de los liposomas por medio de movimientos rotativos relativos, que se repiten permanentemente, permite también la fabricación de cantidades grandes de liposomas, al mismo tiempo, que las condiciones de transformación de los volúmenes de fluidos, respectivamente de las bicapas son muy uniformes y se pueden controlar fácilmente.

En este caso es ventajoso, que el soporte con forma de cilindro con la membrana soporte porosa dispuesta sobre un soporte igualmente con forma cilíndrica ruede con una membrana compresible, siendo ventajoso, que el recubrimiento de los cilindros, que ruedan unos sobre otros con los distintos volúmenes de fluidos tenga lugar al mismo tiempo debido a la asignación en el espacio de los cilindros entre sí y que la compaginación en el tiempo de los procesos de aplicación sobre los cilindros así como de los necesarios procesos de secado de las capas sobre los cilindros pueda ser realizada por medio de la variación de los diámetros de los cilindros con una velocidad lineal uniforme.

El recubrimiento del cilindro con los diferentes volúmenes de fluidos se puede realizar tanto en el dispositivo continuo, como también en el discontinuo de manera fundamentalmente conocida por medio de una disposición formada por cilindros cangilones, rasquetas y cilindros de transferencia con la que se ajustan de manera definida los gruesos de las capas de los volúmenes de fluidos aplicados. Las rasquetas se pueden disponer en todos los cilindros en posiciones cualesquiera y poseer distintas formas geométricas, como por ejemplo varillas redondas cilíndricas, cuchillas, labios de goma, etc.. Se pueden disponer de manera estática o girando en el mismo sentido o en el contrario. También cabe imaginar, que los gruesos de las capas de los volúmenes de fluidos aplicados se modifiquen por evaporación.

El dibujo muestra una forma de ejecución especialmente preferida del procedimiento según el invento así como del dispositivo según el invento. En él muestran:

La figura 1, en forma de plano de estados esquemático, un esquema del desarrollo del procedimiento según el invento para el encapsulado eficiente de principios activos en liposomas con composición libremente ajustable del lado interior y del exterior de la bicapa.

La figura 2, una representación muy esquemática de un dispositivo con funcionamiento continuo para la realización del procedimiento según la figura 1.

La figura 3, una representación de la construcción de un dispositivo con funcionamiento discontinuo para la realización del procedimiento según la figura 1 en una vista general así como de algunas piezas individuales.

La figura 4, otras vistas del dispositivo según la figura 3.

La figura 5, una vista lateral del dispositivo según la figura 3.

La figura 6, una vista en planta del dispositivo según la figura 3.

El desarrollo de un procedimiento según la reivindicación 1 se representa muy simplificado, pero unívoco, en sus fundamentos en la figura 1 en la que se puede ver un detalle muy ampliado de la disposición por capas de las diferentes capas y membranas durante la fabricación de liposomas de acuerdo con el procedimiento según el invento.

En la parte izquierda de la figura 1 se aplican en un primer paso dos monocapas 3, 4 distintas sobre la superficie de dos membranas 2, 6 soporte porosas, formando las dos monocapas 3, 4, debido a interacciones físicas como por ejemplo las fuerzas de Van der Waals entre las sustancias de las monocapas 3, 4 una bicapa 11 con composición libremente elegible de los lados interior y exterior. En la figura 1 se aplican de una manera no representada con detalle en un paso precedente del procedimiento sobre los correspondientes lados exteriores de las monocapas 3, 4, que forman la bicapa 11, diferentes volúmenes 5, 10 de fluidos, preferentemente en forma de películas delgadas, que, después de la fabricación de los liposomas 1, rodean el lado exterior de los liposomas 1 fabricados y/o se alojan en el interior del liposoma 1. En el volumen 5 de fluido está disuelta el principio 9 activo, que deba ser alojada en el interior del liposoma 1. La solución 10 se halla, después de la formación de los liposomas 1,en el espacio exterior a los liposomas.

La membrana 2 soporte porosa posee en este caso poros, respectivamente canales 48 pasantes con un diámetro definido, que se prevén en una gran parte de la totalidad de la superficie de la membrana 2 porosa. Estos poros, respectivamente canales 48 se fabrican por ejemplo con la ayuda de la nanotecnología y las membranas 2 correspondientes se hallan en el mercado. La bicapa 11 formada por las dos monocapas 3, 4 cubre en este caso los poros, respectivamente los canales 48, siendo rodeada la bicapa 11 por el volumen 10 de fluidos de la solución para el espacio exterior de los liposomas así como por la solución 7 tampón alojada en los poros, respectivamente los canales 47 de una membrana 6 compresible. Esta membrana 6 compresible se lleva, por ejemplo por medio de la rotación de un cilindro soporte o análogo no representado con detalle, en el transcurso del procedimiento al contacto con la disposición de capas formada por la bicapa 11, los volúmenes 5, 10 de fluidos y la membrana 2 soporte porosa, de tal modo, que el volumen 5 de fluido se introduzca en el liposoma 1 con el prinmcipio 9 activo. Los poros o canales 47 de la membrana 6 compresible y los poros o canales 48 de la membrana 2 porosa se solapan al menos en parte, con lo que, debido a la gran cantidad de poros de las membranas comerciales, una parte significativa de los poros o canales 47 puede ser llevada a la unión fluida con poros o canales 48 correspondientes, aun sin una asignación exacta de las membranas 2, 6.

En la parte central de la figura se deforma la bicapa 11 en la zona de los poros, respectivamente canales 48 de la membrana 2 porosa por medio de una sobrepresión ajustable en el medio 7 tampón localmente de tal modo, que la bicapa 11 sea introducida a presión por zonas en los poros, respectivamente canales 23 de la membrana 2 soporte porosa y, arrastrando al menos en parte el volumen 9 de fluido a alojar en el interior de los liposomas 1, lo estrangule y separe de la bicapa 11, con lo que la zona 12 arrancada de la bicapa 11 se estrangula, debido de la minimización de la energía tensoactiva para formar un liposoma y encapsula con ello el volumen 5 de fluido arrastrado del principio 9 activo a alojar en el interior del liposoma, de manera, que el liposoma pueda ser pasado, debido a la sobrepresión 8 en el medio 7 tampón, a través de la membrana 2 soporte porosa.

La creación de la presión 8 en el interior de la solución 7 tampón puede ser realizada por ejemplo con una presión mecánica ejercida sobre la membrana 6 compresible haciendo rodar un rodillo de presión no representado con detalle por encima de la membrana 6 compresible, creando con ello una compresión de la membrana 6 compresible. Dado que la solución 7 tampón no es compresible, la solución tampón escapará en la dirección hacia los poros 48 de la membrana 2 soporte porosa arrastrando la bicapa 11. En función de la magnitud de la deformación de la membrana 6 compresible, respectivamente de la velocidad de deformación se acelera también el volumen 5 de fluido del principio 9 activo, que posiblemente está adherido de una manera especialmente buena a la bicapa 11 debido a los procesos de adherencia, en la dirección hacia los poros 48 de la membrana 2 soporte porosa formando el abombamiento 12 con el volumen 9 de principio activo encerrado parcialmente en él. Si se mantiene la presión 8 o si se incrementa adicionalmente, la parte 12 ya abombada de la bicapa 11 se desprende definitivamente de la bicapa 11 y, para la minimización de la tensión tensoactiva se deformará, como se puede ver en a parte derecha de la figura 1, para formar un liposoma esencialmente esférico, que rodea totalmente el principio 9 activo arrastrado por el volumen 5 de fluido.

Los límites de las fases entre el volumen 5 de fluido del principio 9 activo y la solución 7 tampón así como la solución 10 se representan aquí esquemáticamente. Dado que los tres líquidos son acuosos y, por ello, miscibles, se producirá tanto una mezcla por convección, como también por difusión. El encapsulado eficiente del principio 9 activo del volumen 5 de fluido del principio activo en el espacio interior de los liposomas 1 es posible a pesar de ello, cuando el lado interior de la bicapa 11 (monocapa 4) se estructura de tal modo, que los principios activos se adsorban a él. La composición ajustable de manera definida de las dos monocapas 3, 4 resulta así ser una premisa tanto para una gran eficiencia del encapuslado, como también para la estructuración ordenada de la envolvente del liposoma.

Este procedimiento representado de una manera muy esquemática en la figura 1 puede ser realizado de distintas maneras desde el punto de vista de los dispositivos.

Las figuras 3 a 6 se refieren a un dispositivo 23 con funcionamiento discontinuo para un procedimiento por lotes, que sólo se describirá en sus aspectos fundamentales y no desde el punto de vista de todos los detalles de construcción, siempre que estos detalles no posean una importancia esencial para la comprensión del procedimiento, respectivamente el funcionamiento del dispositivo 23.

La pieza central del dispositivo 23 para el procedimiento por lotes es una placa 31 con ranuras con estrías 32 de drenaje finas. Sobre esta placa 31 con ranuras se coloca una delgada placa sinterizada (de polietileno con un espesor de 0,6 mm o acero afinado con una espesor de 1,5 mm) no representada con detalle y sobre ella se coloca la membrana 2 porosa con un espesor de aproximadamente 20 \mum con poros, respectivamente canales 23 pasantes. Las dos películas, es decir la membrana 2 porosa y la placa sinterizada situada debajo de ella, se aprisionan en los bordes de placa 31 con ranuras con regletas 43 de presión corridas.

La membrana 6 compresible es fijada sobre el cilindro 27. Esta membrana 6 debe ser compresible, de manera, que, sometida a una presión ceda el líquido a modo de una esponja. El cilindro 27 recubierto con la membrana se fija fuertemente en un bastidor 26 soporte. Debido la suspensión variable en el bastidor 26 soporte se presiona este cilindro 27 con una presión variable contra la placa 31 con ranuras. La placa 31 con ranuras está montada en un carro 25 desplazable por medio de un accionamiento 42 y se puede desplazar en los dos sentidos 30 por debajo del cilindro 27. Con ello, las dos membranas, es decir la membrana 6 compresible y la membrana 2 soporte porosa, ruedan una sobre otra y dan lugar a la formación, descrita más arriba, de los liposomas.

El recubrimiento de las membranas 2, 6 con las delgadas películas 5, 7, 10 de líquido, respectivamente las monocapas 3, 4 dispuestas sobre el cilindro 27, respectivamente la placa 31 con ranuras se realiza como sigue:

En estaciones 44 de impregnado con un soporte 36 separadas se preparan los líquidos 5, 7, 10, 3, 4 correspondientes en bandejas 39 planas en las que se sumerge un cilindro 40 de impregnado accionable en este caso con una manivela 37 manual, que durante la rotación arrastra una delgada película 33 de uno de los líquidos 5, 7, 10, 3, 4. El espesor de la película 33 se reduce al mínimo por medio de una rasqueta 38, que es presionada contra el cilindro 40 de impregnado. El cilindro 40 de impregnado rueda sobre el cilindro 28 recubierto con goma con el que se puede proceder después al recubrimiento de la membrana 6 compresible y de la membrana 2 soporte porosa con la correspondiente película 33 de líquido. El grueso de la película 33 de líquido puede ser reducido eventualmente de manera adicional por evaporación (manteniendo el tiempo de secado necesario para ello). Cuando la película 33 de líquido alcance sobre el cilindro 28 el grueso deseado, se suspende el cilindro 28 de una segunda suspensión 34 para cilindros del dispositivo 23. Esta suspensión 34 para cilindros puede ser ajustada de tal modo, que el cilindro 28 pueda ser presionado contra el cilindro 27 con la membrana 6 compresible o contra la membrana 2 soporte porosa sobre la placa 31 con ranuras. Para la aplicación de las tres películas 5, 7, 10 de líquido y de las dos monocapas 3, 4 se necesitan por lo tanto cinco cilindros 28, que se alojan uno detrás de otro en la suspensión 34 para cilindros y se hacen rodar una vez sobre su superficie envolvente, de manera, que la película 33 sea transferida de la manera descrita.

Para la preparación de la aplicación de las monocapas 3, 4 se utiliza el mismo principio con estaciones 44 de impregnado que para las películas 5, 7, 10 de líquido. Las sustancias (lípidos), que forman las monocapas 3, 4 se disuelven en etanol y se transfieren como película de etanol por medio del cilindro 40 de impregnado al cilindro 28. Después de una sola vuelta sobre el cilindro 28 engomado se somete, sin embargo, la película de etanol a un secado total. Los lípidos secos son disueltos durante la rodadura del cilindro 28 sobre la membrana 6 compresibles, respectivamente la membrana 2 soporte porosa con las películas 5, 7,10 de líquido aplicadas previamente sobre estas membranas 2, 6 y forman monocapas, 3, 4 sobre estas películas 5 y 10 de líquido.

Un ciclo del procedimiento discontinuo se desarrolla en el siguiente orden

a)

Aplicación de las películas 5, 7, 10 líquidas a los cilindros 28 por medio de los cilindros 40 de impregnado.

b)

Transferencia de las películas 5, 6, 10 líquidas de los cilindros 28 al cilindro 27 recubierto con la membrana 6 compresible, respectivamente a la placa 31 con ranuras cubierta con la membrana 2 soporte porosa.

c)

Transferencia de las capas 3, 4 de lípidos secas de los cilindros 28 a las superficies de las películas 5, 7, 10 de líquido delgadas mencionadas bajo b).

d)

Rodadura del cilindro 27 recubierto con la membrana 6 compresible por encima de la placa 31 con ranuras cubierta con la membrana 2 soporte porosa. La goma del cilindro 27 es sustituible, de manera, que con la variación de la presión de apoyo y de la dureza elastómera de la goma del cilindro 27 se puede ajustar la distribución de la presión necesaria en los poros, respectivamente en los canales 23 con la que se pueden producir los liposomas 1.

e)

Los liposomas 1 formados son aspirados a través de la placa 31 con ranuras. Cada uno de los canales 32 de drenaje fresados transversalmente termina en un taladro 41 de aspiración, que atraviesa la placa 31 con ranuras. En el dorso de la placa 31 con ranuras se prevé una ranura 35 de aspiración fresada longitudinalmente. Esta ranura 35 de aspiración se rellena con una regleta 29 de aspiración pasante con una hermetización de Teflón no representada con detalle en una superficie. La regleta 29 de aspiración está unida rígidamente con el bastidor 24 del dispositivo 23 y con ello inamovible con relación al cilindro 27, es decir, que la placa 31 con ranuras es desplazada con relación al cilindro 27 y a la regleta 29 de aspiración, mientras que las dos membranas 2, 6 ruedan una sobre otra (paso d). En la regleta 29 de aspiración se halla un taladro 46 de paso directamente debajo del cilindro 27, de manera, que la solución de liposomas pueda ser aspirada del canal 32 de drenaje, que se halla debajo de la superficie de presión del cilindro 27 y la placa 31 con ranuras.

Con el proceso de aspiración descrito bajo e) se reduce al mínimo el volumen muerto.

El dispositivo 23 se diseña de tal modo, que con él se puedan fabricar cantidades pequeñas (aproximadamente
1 ml) de liposomas suficientes para una caracterización y un análisis fisicoquímico.

Para cantidades mayores (100 ml y más) es necesario un dispositivo 45 continuo, que se representa en principio en la figura 2.

El dispositivo 45 posee dos diferencias esenciales frente al dispositivo 23:

1)

La membrana 2 soporte porosa ya no se fija en este caso sobre una placa soporte plana (placa 31 con ranuras), sino sobre un cilindro 22 con ranuras.

2)

El recubrimiento con películas 5, 7, 10 de líquido y con monocapas 3, 4 ya no tiene lugar en pasos sucesivos separados en el tiempo, sino al mismo tiempo en una construcción dispuesta una detrás de otra, con lo que es posible la realización continua del procedimiento.

El funcionamiento del dispositivo 45 para la realización continua del procedimiento se desprende de la figura 2 en la que tienen lugar de manera simultánea todos los procesos ya descritos en el procedimiento continuo. Con relación a los diferentes procesos se remite por ello de manera expresa a la descripción del dispositivo 23, exponiendo aquí únicamente las diferencias. Dado que todos los cilindros 14, 15, 16, 17, 18, 21, 22, que entran en contacto ruedan uno sobre otro con sentidos 19 de rotación contrarios sin deslizamiento y, en el caso de los cilindros 21 y 22, bajo un pretensado 20 con un resorte, la velocidad lineal de todos los cilindros 14, 15, 16, 17, 18, 21, 22 es la misma. Dado, sin embargo, que determinados pasos a) a e) de proceso según la descripción precedente del dispositivo 23 pueden requerir tiempos de secado, etc. distintos, es preciso, que las relaciones de los contornos de los correspondientes cilindros 14, 15, 16, 17, 18, 21, 22 se adapten a las condiciones deseadas de las velocidades angulares.

La determinación de las relaciones de velocidad necesarias y de las condiciones de contorno resultantes de ellas también se puede obtener a partir de los valores del funcionamiento del dispositivo 23 del procedimiento discontinuo.

El proceso esbozado en la figura 2 se puede configura como procedimiento continuo por el hecho de que las dos membranas 2, 6 se fijan sobre cilindros 22, 21 cilíndricos, que ruedan uno sobre otro con sentidos de giro contrarios. La aplicación de las monocapas 3, 4 y de las delgadas películas 5, 7, 10 de líquido puede tener lugar por medio de cilindros 14, 15, 16, 17, 18 adicionales en estaciones 13 de impregnado ya descritas fundamentalmente en lo que antecede, que ruedan en el orden del recubrimiento de las membranas 2, 6 fijadas a los cilindros 21, 22. Para la aplicación de las monocapas 3, 4 se aplican en primer lugar las mezclas de lípidos utilizadas, disueltas por ejemplo para ello en una solución etanólica en al estación 13 de impregnado, sobre un cilindro 17, 18. Después de la evaporación de la película etanólica se transfiere la capa seca de lípidos por rodadura con un contacto ligero a los cilindros 21, 22 con las membranas 2, 6 recubiertos con las películas 5, 7, 10 de líquido, transfiriendo así las monocapas 3, 4.

Números de referencia

1

Liposomas

2

Membrana soporte porosa

3

Monocapa para el lado exterior del liposoma

4

Monocapa para el lado interior del liposoma

5

Solución de principio activo a encapsular

6

Membrana compresible

7

Solución tampón

8

Generación de presión

9

Volumen de principio activo encapsulado

10

Solución para el espacio exterior del liposoma

11

Recubrimiento

12

Deformación de la bicapa

13

Estación de impregnado

14

Cilindro de la solución de principio activo

15

Cilindro de la solución tampón

16

Cilindro de la solución para el espacio exterior del liposoma

17

Cilindro para monocapa

18

Cilindro para monocapa

19

Sentido de giro

20

Pretensado con resorte

21

Cilindro

22

Cilindro

23

Dispositivo discontinuo

24

Bastidor

25

Carro

26

Dispositivo de presión

27

Cilindro

28

Cilindro

29

Regleta de aspiración

30

Sentido de desplazamiento

31

Placa con ranuras

32

Canales de drenaje

33

Película aplicada

34

Suspensión de cilindros

35

Ranura de aspiración

36

Soporte

37

Manivela manual

38

Rasqueta

39

Cubeta

40

Cilindro de impregnado

41

Taladro de aspiración

42

Accionamiento de la placa con ranuras

43

Regleta de presión

44

Estación de impregnado

45

Dispositivo continuo

46

Taladro pasante en la regleta de aspiración

47

Poros/canales en la membrana compresible

48

Poros/canales en la membrana soporte porosa

Claims (41)

1. Encapsulado de sustancias en liposomas (1), en especial para el encapsulado de principios activos en liposomas (1) de una bicapa (11) formada por capas (3, 4) monomoleculares, caracterizado porque dos monocapas (3, 4) distintas son aplicadas sobre la superficie de una membrana (2) soporte porosa, formando las dos monocapas (3, 4), debido a las interacciones físicas entre las sustancias de las monocapas (3, 4), una bicapa (11) con composición libremente ajustable del lado interior y del exterior, porque sobre los correspondientes lados exteriores de las monocapas (3, 4), que forman la bicapa (11) se aplican diferentes volúmenes (5, 7, 10) de fluidos con forma preferente de películas (33) delgadas, que, después de la fabricación de los liposomas (1) rodean el lado exterior de los liposomas (1) fabricados y/o se alojan en el interior de los liposomas (1), porque una membrana (6) compresible se une con la disposición de capas formada por la bicapa (11), los volúmenes (5,7, 10) de fluidos y la membrana (2) soporte porosa de tal modo, que los poros o canales (24) dispuestos en la membrana (6) compresible, llenos con un medio (7) tampón, se sitúen adyacentes al volumen (5, 9) de fluidos a alojar en el interior de los liposomas (1), porque la bicapa (11) es deformada localmente por medio de una sobrepresión (8), que puede ser ajustada en el medio (7) tampón, de tal modo, que la bicapa (11) sea presionada hacia el interior de los poros (23) de la membrana (2) soporte porosa y arrastrando al menos en parte el volumen (5, 9) de fluidos a alojar en el interior de los liposomas, lo estrangule y arranque de la bicapa (11), porque la zona (12) arrancada de la bicapa (11) se contrae, debido a la minimización de la energía te4nsoactiva hasta formar un liposoma (1) envolviendo al mismo tiempo el volumen (5, 9) de fluidos arrastrado de la sustancia (9) a alojar en el interior de los liposomas (1) y porque el liposoma (1) pasa a través dela membrana (2) soporte
porosa.

2. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado porque la membrana (2) porosa posee poros, respectivamente canales (48) con un tamaño exacto de los poros.

3. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado porque como membrana (2) soporte se utiliza una membrana de filtro con una porosidad elevada.

4. Procedimiento según una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque la bicapa (11) se forma debido a las fuerzas de interacción, en especial de las fuerzas de Van der Waals, entre las monocapas (3, 4).

5. Procedimiento según una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque la sobrepresión (8) en el medio (7) tampón se genera por compresión de la membrana (6) compresible.

6. Procedimiento según una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque la membrana (2) soporte porosa está formada por una membrana de policarbonato (membrana de PC).

7. Procedimiento según una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque la membrana (2) soporte porosa posee poros o canales (48) pasantes.

8. Procedimiento según la reivindicación 7, caracterizado porque la membrana (2) soporte porosa posee una porosidad con una densidad grande de poros, con preferencia hasta del 25% de la superficie de la membrana (2) soporte porosa.

9. Procedimiento según una de las reivindicaciones 7 u 8, caracterizado porque la membrana (2) soporte porosa se fabrica con la ayuda de procedimientos nanotecnológicos, con preferencia con la ayuda de la técnica "Track-etch".

10. Procedimiento según una de las reivindicaciones 7 a 9, los poros o canales (48) pasantes poseen un diámetro de 10 nm a 20 \mum.

11. Procedimiento según una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el tamaño de los liposomas (1) fabricados se halle en el margen entre 10 nm y 20 \mum.

12. Procedimiento según una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque la bicapa (11) es transformada, debido a la elevada densidad de poros de la membrana (2) soporte porosa casi totalmente en liposomas (1) esféricos.

13. Procedimiento según una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque la monocapa (4) de la bicapa (11), que se halla en el interior de los liposomas (1) se configura de tal modo, que las sustancias a encapsular en estos liposomas (1) se adsorban a esta capa (4) interior.

14. Procedimiento según una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque la capa (3) superficial situada exteriormente en los liposomas (1) se configura de tal modo, que las sustancias, que encapsulan los liposomas (1) se adsorben a esta capa (3) exterior o se encapsulan en ella.

15. Procedimiento según la reivindicación 14, caracterizado porque las sustancias, que rodean los liposomas (1) se aplican sobre esta capa (3) exterior como capas de protección estéricas o como receptores.

16. Procedimiento según una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque los liposomas (1) fabricados se aspiran por medio de un sistema (32, 41, 46) de drenaje de la suspensión, que pasa a través de los poros, respectivamente los canales (48) de la membrana (2) soporte porosa.

17. Procedimiento según una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque los volúmenes (5, 7, 10) de fluidos se depositan sobre la bicapa (11), respectivamente se almacenan en la bicapa (11) en forma de películas de fluido muy delgadas.

18. Procedimiento según la reivindicación 17, caracterizado porque los volúmenes (5, 7, 10) de fluidos poseen espesores de capa hasta de 1 \mum.

19. Procedimiento según una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el procedimiento es realizado de manera continua por medio de una disposición de cilindros (21, 22), que ruedan unos sobre otros, sobre los que se depositan, respectivamente se apilan las diferentes membranas (2, 6) y los distintos volúmenes (5, 7, 10, 3, 4) de líquidos y se llevan al contacto mutuo sobre los cilindros (21), respectivamente (22) por rodadura de los diferentes cilindros (14, 15, 16, 17, 18).

20. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 19, caracterizado porque el procedimiento es realizado de manera discontinua por medio de una disposición de cilindros (27, 28) y de un soporte (31) plano sobre el que se depositan las diferentes membranas (2, 6) y los distintos volúmenes (5, 7, 10, 3, 4) de líquidos y/o se llevan al contacto mutuo por rodadura de los cilindros (27, 28).

21. Dispositivo (23) con funcionamiento continuo para el encapsulado de sustancias en liposomas (1), en especial para la realización de un procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado porque el dispositivo (23) posee un soporte (31) plano sobre el que está dispuesta una membrana (2) soporte porosa y porque el al menos un cilindro (27, 28) lleva, rodando sobre la membrana (2) soporte porosa, sucesivamente las diferentes membranas (2, 6) y los distintos volúmenes (5, 7, 10, 3, 4) de fluidos, que pueden ser aplicados previamente sobre al menos un cilindro (27, 28), por medio de un movimiento (30) relativo sobre la membrana (2) soporte porosa al contacto con la membrana (2) soporte porosa.

22. Dispositivo (23) según la reivindicación 21, caracterizado porque el soporte (31) plano posee una placa (31) con ranuras con canales (32) de drenaje.

23. Dispositivo (23) según una de las reivindicaciones 21 o 22, caracterizado porque el soporte (31) plano posee una placa sinterizada delgada, con preferencia de polietileno o de acero afinado.

24. Dispositivo (23) según una de las reivindicaciones 21 a 23, caracterizado porque la membrana (2) soporte porosa es aplicada sobre el apilamiento formado por la placa (31) con ranuras con canales (32) de drenaje y la capa sinterizada delgada.

25. Dispositivo (23) según una de las reivindicaciones 21 a 24, caracterizado porque sobre el al menos un cilindro (27, 28) se aplica una membrana (6) compresible, que se puede hacer rodar con una presión (26) ajustable de manera desplazable con relación al soporte (31) plano y con ello sobre el soporte (31) plano.

26. Dispositivo (23) según una de las reivindicaciones 21 a 25, caracterizado porque para cada uno de los procesos de recubrimiento y de transformación se puede prever un cilindro (28) de transferencia separado, que se pueden montar sucesivamente en el dispositivo (23) y que pueden ser llevados al contacto con la membrana (2) soporte porosa o con el cilindro (28).

27. Dispositivo (23) según una de las reivindicaciones 21 a 26, caracterizado porque el movimiento (30) relativo entre el soporte (31) plano y el al menos un cilindro (27, 28) tiene lugar sin deslizamiento.

28. Dispositivo (23) según una de las reivindicaciones 21 a 27, caracterizado porque los cilindros (27, 28) ceden las capas (5, 7, 10, 3, 4) aplicadas sobre ellos al cilindro (27, 28) o al soporte (31) plano.

29. Dispositivo (23) según una de las reivindicaciones 21 a 28, caracterizado porque el drenaje de los liposomas (1) fabricados tiene lugar por medio de una aspiración local de sólo la zona del soporte (31) plano en la que el cilindro (27, 28) y la membrana (2) soporte porosa son presionados uno contra otro durante la rodadura del cilindro (27, 28).

30. Dispositivo (23) según la reivindicación 29, caracterizado porque para el drenaje de sólo se lleva al contacto activo con una aspiración (29, 46) fija la zona del soporte (31) plano en la que el cilindro (27) y la membrana (2) soporte porosa son presionados uno contra otro durante la rodadura del cilindro (27, 28).

31. Dispositivo (45) con funcionamiento continuo para el encapsulado de sustancias en liposomas (1), en especial para la realización de un procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado porque el dispositivo (45) posee un soporte (22) con forma de cilindro sobre el que se fija una membrana (2) soporte porosa y porque una disposición de cilindros (14, 15, 16, 17, 18, 21), que ruedan unos sobre otros, lleva las distintas membranas (6) y los diferentes volúmenes (5, 7, 10, 3, 4) de fluidos al contacto con la membrana (2) soporte porosa por medio de movimientos (19) rotativos relativos.

32. Dispositivo (45) según la reivindicación 31, caracterizado porque el soporte (22) con forma de cilindro con la membrana (2) soporte porosa rueda sobre un soporte (21) igualmente con forma de cilindro con una membrana (6) compresible.

33. Dispositivo (45) según la reivindicación 31 o 32, caracterizado porque el recubrimiento de los cilindros (14, 15, 16, 17,18, 21, 22), que ruedan unos sobre otros con los diferentes volúmenes (5, 7, 10, 3, 4) de fluidos tiene lugar simultáneamente debido a la asignación mutua en el espacio de los cilindros (14, 15, 16, 17, 18, 21, 22).

34. Dispositivo (45) según la reivindicación 31 a 33, caracterizado porque el movimiento relativo entre los cilindros (14, 15, 16, 17, 18, 21, 22) tiene lugar sin deslizamiento y con la misma velocidad lineal.

35. Dispositivo (45) según la reivindicación 31 a 34, caracterizado porque la compaginación en el tiempo de los procesos de aplicación sobre los cilindros (14, 15, 16, 17, 18, 21, 22) así como de los necesarios procesos para el secado de las capas (5, 7, 10, 3, 4), respectivamente para la reducción del espesor sobre los cilindros (14, 15, 16, 17, 18, 21, 22) se puede realizar variando los diámetros de los cilindros manteniendo constante la velocidad lineal.

36. Dispositivo (23, 45) según una de las reivindicaciones 21 a 35, caracterizado porque el recubrimiento del cilindro (14, 15, 16, 17, 18, 21, 22, 27, 28) con los diferentes volúmenes (5, 7, 10, 3,4) de fluidos puede ser realizado con una disposición formada por cilindros (13, 40) de impregnado, rasquetas (38) y cilindros (14, 15, 16, 17, 18) con la que se puede ajustar de manera definida el espesor de las capas de los volúmenes (5, 7, 10, 3, 4) de fluidos aplicadas.

37. Dispositivo (23, 45) según una de las reivindicaciones 21 a 36, caracterizado porque las sustancias, que forman las monocapas (3, 4) se pueden transferir al cilindro (17, 18, 28) como solución en un disolvente, en especial etanol.

38. Dispositivo (23, 45) según la reivindicación 37, caracterizado porque las sustancias, que forman las monocapas (3, 4) se secan, después de la transferencia al cilindro (17, 18, 28) sobre el cilindro (17, 18, 28) y porque las películas (33) secas pueden ser transferidas a los volúmenes (5, 7, 10) de fluidos aplicados sobre las membranas (2, 6).

39. Dispositivo (23, 45) según la reivindicación 38, caracterizado porque los volúmenes (5, 7, 10) de fluidos aplicados sobre las membranas (2, 6) disuelven nuevamente las películas (33) secas y se depositan en forma de monocapas (3, 4) sobre los volúmenes (5, 10) de fluidos.

40. Dispositivo (23, 45) según una de las reivindicaciones 21 a 39, caracterizado porque el espesor de las capas de los volúmenes (5, 7, 10, 3, 4) de fluidos aplicadas pueden ser variadas por evaporación.

41. Dispositivo (23, 45) según una de las reivindicaciones 21 a 40, caracterizado porque variando la elasticidad del recubrimiento del cilindro (27, 21) con la membrana (6) compresible y la presión de apoyo entre este cilindro (27, 21) y la membrana (2) soporte porosa se puede influir en la distribución de la presión en los poros (23) de la membrana (2) soporte porosa durante la fabricación de los liposomas (1).