ES2315081B1 - Nuevo uso del peptido intestinal vasoactivo (vip) y de las celulas aisladas estimuladas con dicho peptido. - Google Patents
Nuevo uso del peptido intestinal vasoactivo (vip) y de las celulas aisladas estimuladas con dicho peptido. Download PDFInfo
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Abstract
Nuevo uso del péptido intestinal vasoactivo
(VIP) y de las células aisladas estimuladas con dicho péptido.
La invención se refiere al uso del péptido
intestinal vasoactivo (VIP) para la preparación de un medicamento
para enfermedades autoinmunes y/o rechazo de transplantes en
mamíferos. La invención también se refiere a composiciones que
comprenden células dendríticas y/o células T reguladoras capaces de
crear tolerancia inmunológica periférica, así como a las células
aisladas contenidas en las mismas.
Description
Nuevo uso del péptido intestinal vasoactivo
(VIP) y de las células aisladas estimuladas con dicho péptido.
La presente invención se refiere a un nuevo uso
del péptido intestinal vasoactivo (VIP) y a células aisladas
estimuladas con dicho péptido.
La invención también se refiere a nuevas a
composiciones farmacéuticas.
El péptido intestinal vasoactivo es una proteína
liberada por las células del sistema inmune, particularmente por
las células T auxiliares (Th de T helper) cuando estas son
estimuladas por un antígeno y en condiciones de inflamación o
reacciones autoinmunes.
El sistema inmune, como ya es conocido, debe
actuar contra cualquier cuerpo extraño al propio organismo o
patógeno, pero debe tolerar o reconocer los propios antígenos con la
finalidad de evitar la reacción contra el propio organismo. La
inducción de la tolerancia específica de antígeno permite pues,
mantener el sistema inmune bajo control para evitar las
enfermedades autoinmunes y para asegurar la mínima tolerancia
frente a los transplantes.
A este fenómeno por el cual las células que
integran el sistema inmune son capaces de no reaccionar contra
ciertos autoantígenos o antígenos extraños, se denomina tolerancia
inmunológica.
Las células T encargadas de la tolerancia
inmunológica reciben el nombre de células T reguladoras (Treg).
Estas células T reguladoras son activadas por células dendríticas
(CD), las cuales corresponden a un tipo de células presentadoras de
antígeno (CPA).
Las células presentadoras de antígeno, tal y
como el nombre indica, son las células del sistema inmune
encargadas de procesar y presentar los antígenos a aquellas otras
células del sistema que serán capaces de actuar contra los agentes
foráneos. Las células dendríticas son capaces de estimular las
células o linfocitos T conocidas como naiv (vírgenes), esto es, que
no han tenido contacto previo con ningún antígeno. La interacción
entre las células T y las células dendríticas provoca una serie de
reacciones o cascadas bioquímicas en el interior de la célula T
naiv, que le permiten entrar en un proceso de proliferación y
diferenciación celular que darán lugar a la aparición de células T
maduras y que modularan qué tipo de respuesta inmune se llevará a
cabo contra un determinado antígeno.
Parece ser que la maduración y/o activación de
las células dendríticas es uno de los puntos importantes para
inducir la diferenciación de células T a células T reguladoras y
así, promover la tolerancia periférica. Existen múltiples
publicaciones que indican que las células dendríticas maduras (CDm)
son células que promueven la inmunidad por activación de las
células T, mientras que las células dendríticas inmaduras (CDi) son
inductoras de tolerancia por parte de las células T. (Steinman, R.
M. et al. (2003) Annu. Rev. Immunol. 21,
685-711; Rutella, S. et al. (2004) Immunol
Lett. 94, 11-26; Banchereau, J. et al.
(2000) Annu. Rev. Immunol. 18, 767-811;
Hawiger, D. et al. (2001) J. Exp. Med. 193,
F5-F9). Sin embargo, se ha postulado que el empleo
de células dendríticas inmaduras no resulta útil para la terapia en
enfermedades autoinmunes, puesto que es probable que en el
organismo, las mismas acaben de madurar potenciando la respuesta
inmune celular (sobre todo cititóxica) en detrimento de la aparición
o proliferación de células T reguladoras.
Una de las enfermedades autoinmunes con más
prevalencia es la Esclerosis Múltiple (EM). La Esclerosis Múltiple
es una enfermedad en la que tiene lugar la desmielinación de las
neuronas como resultado de una cadena compleja de interacciones
celulares. Concretamente, la Esclerosis Múltiple (EM) es una
enfermedad inflamatoria desmielinizante del Sistema Nervioso
Central (SNC) - cerebro, médula espinal y nervios ópticos -, de
curso crónico. Las causas de la EM son múltiples y variadas y tal y
como se ha anunciado anteriormente tiene un origen autoinmune.
La EM es una enfermedad que afecta tanto a gente
joven como a gente mayor, puede comenzar entre los 20 y 40 años. La
sintomatología de la EM es muy variada y se presenta de distintas
formas en función de la persona afectada. Sin embargo, los síntomas
más comunes cursan con una sensibilidad anormal, debilidad (fatiga),
alteraciones de la visión (visión doble), entumecimiento y
hormigueos en las extremidades, mareos, etc. Todos estos síntomas
se experimentan durante períodos de tiempo no predecibles y cuando
reaparecen, los mismos pueden ser más graves produciéndose espasmos
musculares, parálisis, trastornos intestinales, etc.
Por tratarse de una enfermedad de gente joven,
crónica y potencialmente discapacitante, la EM puede tener un
fuerte impacto sobre el ámbito familiar, social y
económico-laboral pero no modifica esencialmente la
expectativa de vida de las personas que la padecen.
Hoy por hoy no existe una terapia para la
Esclerosis Múltiple y lo que se hace es aplicar medicamentos que
ayuden a paliar los síntomas de la enfermedad.
En general, suelen aplicarse corticoesteroides
con la finalidad de reducir la gravedad y tiempo del ataque. En
otros casos, se emplea interferón beta, que bloquea la expresión de
las proteínas de membrana conocidas como antígenos linfocitarios
humanos (HLA), y que son las proteínas de las células del sistema
nerviosos reconocidas por las células del sistema inmune.
Otro tipo de tratamiento consiste en la
administración de acetato de glatiramer, que consiste en una mezcla
de polipéptidos sintetizados a partir de cuatro aminoácidos
distintos. Su estructura se asemeja a la de la mielina, y aunque por
el momento se desconoce su mecanismo exacto de acción. El acetato
de glatiramer está indicado para reducir la frecuencia de recaídas
en pacientes con EM remitente recidivante del tipo de las que
implican dos ataques de disfunción neurológica durante los dos años
anteriores.
Otros intentos de terapia se basan en la
administración intravenosa de anticuerpos contra el antígeno CD4,
que es una molécula presente en la membrana de un tipo de células o
linfocitos T.
Del documento EP 1165125 B1 se desprende una
terapia alternativa basada en la inducción de tolerancia
inmunológica periférica específica de antígeno. En este documento
se describe el empleo de ácidos nucleicos que codifican una primera
y una segunda proteínas, donde la primera proteína induce la
apoptosis o la inactivación de células T y la segunda proteína es un
antígeno patogénico, para la fabricación de una composición para
transfectar células de un mamífero con la finalidad de reducir la
respuesta inmune frente al antígeno. Dicho antígeno puede consistir,
entre otros, en la proteína básica de la mielina. En EP1165125 B1
se detalla también una composición a base de nanosferas que
comprenden al menos estos ácidos nucleicos que codifican una primera
proteína inductora de apoptosis y un segundo antígeno
patogénico.
Regresando a las causas de base de las
enfermedades autoinmunes, los inventores del presente escrito han
descubierto que, sorprendentemente, si las células dendríticas (CD)
se hacen madurar en presenciar de VIP hasta un estadio determinado
de maduración, las mismas ejercen un potente control sobre la
proliferación y diferenciación de las células T reguladoras frente a
determinados antígenos.
Este aspecto abre prometedoras ventanas para el
tratamiento de la mayoría de las enfermedades autoinmunes, tales
como la Esclerosis Múltiple, la Artritis Reumatoide, la enfermedad
de Graves, el Lupus eritematoso sistémico, etc., así como una
mejora en la inducción de tolerancia a los transplantes
alogénicos.
La presente invención tiene por objeto el uso
del péptido intestinal vasoactivo (VIP) para la preparación de un
medicamento para la terapia celular de enfermedades autoinmunes y/o
rechazo de transplantes en mamíferos.
Por el nombre "péptido intestinal vasoactivo
(VIP)" se entiende un péptido que contiene la siguiente
secuencia de 28 aminoácidos:
His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-GIn-Met-
Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-lle-Leu-Asn-NH_{2}.
Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-lle-Leu-Asn-NH_{2}.
De un modo preferente, la terapia celular es a
base de células T reguladoras y/o células dendríticas
tolerogénicas.
Según otro aspecto de la presente invención, el
péptido intestinal vasoactivo corresponde a una parte de dicho
péptido intestinal vasoactivo o a un derivado del mismo.
Así, por una "parte" del péptido intestinal
vasoactivo, se entiende una parte de la secuencia de los 28
aminoácidos que forman dicho péptido. Asimismo, un "derivado"
del péptido intestinal se corresponde con un producto obtenido a
partir de la reacción química del péptido, es decir, de al menos
uno de sus aminoácidos, con un reactivo.
El uso según la presente invención, se
caracteriza también porque el medicamento para el tratamiento de
enfermedades autoinmunes y/o rechazo de transplantes comprende
células dendríticas previamente sometidas a un proceso de maduración
en presencia del péptido intestinal vasoactivo (VIP) y estimuladas
con al menos un antígeno responsable de la respuesta autoinmune y/o
con células T aisladas de sangre de un donante de transplante.
Según otra característica de la invención, el
uso del péptido intestinal vasoactivo es para la preparación de un
medicamento para el tratamiento de enfermedades autoinmunes y/o
rechazo de transplantes que comprende células T reguladoras
inducidas a partir de células T CD4 vírgenes estimuladas con células
dendríticas, las cuales previamente han sido sometidas a un proceso
de maduración en presencia del péptido intestinal vasoactivo (VIP)
y estimuladas con al menos un antígeno responsable de la respuesta
autoinmune y/o con células T aisladas de sangre de un donante de
transplante.
Uso según la invención donde el o los antígeno/s
responsable/s de la respuesta autoinmune son componentes de las
vainas de mielina.
El uso según la invención donde la enfermedad
autoinmune es la Esclerosis Múltiple (EM).
Según otra característica de la invención, el
medicamento es para el tratamiento de enfermedades autoinmunes y/o
rechazo de transplantes en humanos.
Otro objeto de la presente invención es una
célula dendrítica aislada generada a partir de células de médula
ósea o de monocitos, obtenible por:
a) incubación de células de médula ósea o de
monocitos en medio completo con el agente de maduración factor
estimulador de colonias de granulocito macrófago
(GM-CSF) y en presencia del péptido intestinal
vasoactivo (VIP);
b) recolección de las células no adherentes de
la etapa a);
c) estimulación y maduración de las células de
la etapa b) con al menos un antígeno responsable de la respuesta
autoinmune y/o con células T aisladas de sangre de un donante de
transplante.
La célula dendrítica aislada se caracteriza
porque el antígeno responsable de la respuesta autoinmune es la
mielina o uno de sus componentes.
Es también objeto de la invención una célula T
reguladora aislada obtenible por incubación de células T CD4
vírgenes con células dendríticas sometidas a un proceso de
maduración en presencia de péptido intestinal vasoactivo (VIP) y
estimuladas con al menos un antígeno responsable de la respuesta
autoinmune y/o con células T aisladas de sangre de un donante de
transplante.
La célula T reguladora aislada según la
invención, se caracteriza porque el antígeno responsable de la
respuesta autoinmune es la mielina o uno de sus componentes.
La presente invención tiene también por objeto
una composición farmacéutica que comprende junto con los excipientes
farmacéuticamente aceptables, células dendríticas previamente
sometidas a un proceso de maduración en presencia del péptido
intestinal vasoactivo (VIP) y estimuladas con al menos un antígeno
responsable de la respuesta autoinmune y/o con células T aisladas de
sangre de un donante de transplante.
Preferentemente, dicha composición farmacéutica
comprende células dendríticas previamente sometidas a un proceso de
maduración en presencia del péptido intestinal vasoactivo (VIP) y
estimuladas con componentes de la mielina.
Es también objeto de la invención una
composición farmacéutica que comprende junto con los excipientes
farmacéuticamente aceptables, células T reguladoras inducidas a
partir de células T CD4 vírgenes estimuladas con células
dendríticas, las cuales previamente han sido sometidas a un proceso
de maduración en presencia del péptido intestinal vasoactivo (VIP)
y estimuladas con al menos un antígeno responsable de la respuesta
autoinmune y/o con células T aisladas de sangre de un donante de
transplante.
Preferentemente, la composición farmacéutica
comprende células T reguladoras inducidas a partir de células T CD4
vírgenes estimuladas con células dendríticas, las cuales previamente
han sido sometidas a un proceso de maduración en presencia del
péptido intestinal vasoactivo (VIP) y estimuladas con mielina o uno
de sus componentes.
Las composiciones farmacéuticas según la
invención se caracterizan porque están en forma de composiciones
inyectables.
Con la finalidad de ilustrar los resultados
obtenidos por los inventores, a continuación se presentan, a modo de
ejemplo, dos gráficos representativos de los ensayos llevados a cabo
para determinar el efecto del péptido intestinal vasoactivo en la
respuesta autoinmune y/o en los transplantes de tejidos.
Así,
la Fig. 1 corresponde a un gráfico que ilustra
el grado de proliferación de células T de los nódulos linfáticos y
la producción de interferón y (IFN\gamma) y de anticuerpos contra
un componente de la mielina hallados en ratones con un modelo de
Esclerosis Múltiple, los cuales han recibido en medicamento que
comprende células dendríticas maduradas en presencia o en ausencia
de VIP;
la Fig. 2 es un gráfico que demuestra que la
administración de un medicamento que contiene células T reguladoras
estimuladas con células dendríticas que habían madurado en
presencia de VIP, posibilita que la Encefalomielitis Autoinmune
Experimental - EAE) se vea mejorada;
la Fig. 3 corresponde a otro diagrama que
ilustra el efecto de la administración de células dendríticas
diferenciadas en presencia de VIP en casos de rechazo de
transplantes de médula ósea; y
la Fig. 4 ilustra el efecto de la administración
de células T reguladoras en pacientes o modelos animales en los que
se espera un rechazo de médula ósea transplantada.
Con la finalidad de detallar los sorprendentes
resultados hallados por los inventores, a continuación y en base a
las Figs. 1 a 4 antes introducidas y a ejemplos y estudios, se
muestran los beneficiosos efectos derivados del uso del péptido
intestinal vasoactivo (VIP) para la preparación de un medicamento
para la terapia celular de enfermedades autoinmunes y/o rechazo de
transplantes en mamíferos.
Concretamente, los resultados obtenidos indican
que la terapia celular llevada acabo con células T reguladoras o
bien con células dendríticas tolerogénicas, es capaz de paliar o
remitir muchas de las enfermedades autoinmunes, tal como la
Esclerosis Múltiple (EM), así como de evitar que los transplantes de
tejidos, sobretodo alogénicos, sean rechazados por el receptor.
En primer lugar, debe destacarse que en la
presente invención, cuando se habla de maduración de las células
dendríticas, se hace referencia a aquel estadio de maduración que
alcanzan dichas células cuando son estimuladas por un antígeno de
interés, por ejemplo un antígeno causante de respuesta
autoinmune.
A continuación, se relata el procedimiento de
obtención de células dendríticas y células T reguladoras útiles para
la preparación del medicamento según la invención. También se
presentan ensayos de los que un experto fácilmente deduce que el
uso de dichas células es apto para el diseño de medicamentos para
terapia celular aplicada a pacientes con enfermedades autoinmunes,
o bien que han sido sometidos a una operación de transplante de
tejido.
Estudio
1
Siguiendo el protocolo habitual de
diferenciación celular, se generaron células dendríticas derivadas
de médula ósea obtenidas de células de médula ósea de ratones
C57BL/6(H-2^{b}). Las células de médula
ósea se incubaron en un medio completo (RPMI medium 1640
suplementado con 100 unidades/ml penicilina/estreptomicina, 2 mM
L-glutamina, 50 \muM
2-mercaptoetanol y un 10% de suero fetal de ternera
inactivado por calor) que contenía 20 ng/ml de factor estimulador de
colonias de macrófagos granulocitos (GM-CSF) en
presencia de 10^{-8}M de péptido intestinal vasoactivo (VIP).
Transcurridos 6 días, las células no adherentes
fueron colectadas y se estimularon con mielina (20 \mug/mI)
durante 12 horas. A esta etapa se la denomina pulsación de las
células dendríticas.
Estudio
2
Células T CD4 vírgenes (2 x 10^{5}) se
cultivaron con células dendríticas que habían madurado en presencia
de VIP (CD_{VIP}). En el medio de cultivo se añadió interleucina
2 IL-2 (100 unidades/ml) y se dejaron durante tres
días.
Para generar células T reguladoras específicas
de mielina, las células dendríticas que luego se ponían en contacto
con las células T CD4 vírgenes, se pulsaron con componentes de la
mielina y se cultivaron con células T CD4 singénicas.
Ensayo
1
Con la finalidad de determinar si la
administración de células dendríticas maduradas en presencia de VIP
era capaz de inducir in vivo tolerancia inmunológica
periférica, se ensayó en un modelo murino de Esclerosis Múltiple.
Para ello, se escogieron ratones C57BL/6 a los que se había
inducido Encefalomielitis Autoinmune Experimental (EAE) con un
componente de la mielina, la glicoproteína oligodendrocítica de la
mielina (MOG_{35-55}), según se describe en Kohm,
A.P. et al. (2002) J. Immunol. 169,
4712-4716.
Se inocularon (vía subcutánea) los ratones con
CD_{VIP} y se comprobó que se había producido una regulación de
las reacciones autoinmunes, en el sentido que éstas eran
disminuidas.
Como control, también se inocularon otros
ratones del mismo modelo experimental con células dendríticas que no
habían madurado en presencia de VIP, esto es, que únicamente habían
sido estimuladas con GM-CSF y pulsadas con mielina,
llamadas de ahora en adelante CD_{control}. Como blanco se
emplearon los datos extraídos de ratones que no habían recibido
ningún tipo de tratamiento (indicados como Ninguno).
\newpage
Tal y como puede apreciarse en la Fig. 1, en los
ratones tratados con CD_{VIP}, tanto la proliferación de células
T de los nódulos linfáticos como la producción de interferón
\gamma (IFN\gamma) en respuesta a autoantígenos eran bajas
comparadas con sus equivalentes en ratones inoculados con
CD_{control}. También de esta Fig. 1 se extrae que los niveles de
anticuerpos anti-MOG eran más bajos en los ratones
tratados con CD_{VIP} que en los ratones tratados con
CD_{control}.
Para la determinación de la proliferación
celular, o de los niveles de IFN\gamma o de los niveles de
anticuerpos se emplearon métodos y materiales conocidos por el
experto en la materia.
Aunque no aparecen datos en la presente memoria,
se observó que el efecto de la inoculación con CD_{VIP} era
específico del antígeno. Es decir, que si los ratones se inoculaban
con CD_{VIP} que habían sido estimuladas con un antígeno diferente
de la mielina, por ejemplo con ovoalbúmina (OVA), la inoculación de
estas células dendríticas no causaba la depresión de las respuestas
autoinmunes contra la mielina, aplicables por lo tanto, para el
tratamiento de la Esclerosis Múltiple.
Ensayo
2
En un estudio alternativo y complementario al
anterior, se generaron in vitro células T reguladoras
especificas de antígeno inducidas por CD_{VIP}. Estas células
reguladoras fueron inoculadas en ratones del mismo modelo
experimental que en el ensayo anterior.
La generación de células T reguladoras
específicas de MOG y que habían sido inducidas por CD_{VIP} (de
ahora en adelante Tr_{VIP}), se obtuvieron a partir de células CD4
estimuladas con células dendríticas pulsadas con MOG y maduradas en
presencia de VIP, tal y como se ha descrito en el Estudio 2.
También se generaron células T reguladoras
control (Tr_{control}) mediante la inducción de células T CD4 con
células dendríticas que no habían sido sometidas a maduración
celular en presencia de VIP.
La administración de Tr_{VIP} en ratones con
Encefalomielitis Autoinmune Experimental (EAE), tal y como puede
observarse en la Fig. 2 previene la progresión de la enfermedad de
un modo dependiente de dosis. Concretamente, en esta Fig. 2, donde
se confronta el nivel de progresión de la enfermedad respecto de los
días transcurridos después de la inyección de las células
Tr_{VIP} (datos representados por cuadrados negros, triángulos
negros y triángulos blancos), puede apreciarse que después de la
administración de estas células, la EAE remite a lo largo del
tiempo, de tal forma que la puntuación que indica el grado de la
enfermedad disminuye. Esto es, se obtienen puntuaciones de
alrededor de 1 o bien de 0, que significa que los síntomas de la
enfermedad van desapareciendo.
Como control, también se inocularon otros
ratones del mismo modelo experimental con células T reguladoras
obtenidas por cultivo con células dendríticas CD_{control},
llamadas de ahora en adelante Tr_{control} (círculos blancos).
Como blanco se emplearon los datos extraídos de ratones que no
habían recibido ningún tipo de tratamiento (círculos negros).
Aunque no aparecen datos en la presente memoria,
se observó que el efecto de la inoculación con Tr_{VIP} era
específico del antígeno. Es decir, que si los ratones se inoculaban
con Tr_{VIP} que habían sido inducidas por CD_{VIP} pulsadas con
un antígeno diferente de la mielina, por ejemplo con ovoalbúmina
(OVA), la inoculación de estas células T reguladoras no causaba la
depresión de las respuestas autoinmunes contra la mielina,
aplicables por lo tanto, para el tratamiento de la Esclerosis
Múltiple.
Los resultados obtenidos de los ensayos 1 y 2
demuestran que las células dendríticas inmaduras si son sometidas a
un proceso de maduración según los protocolos habituales
incluyéndose en el medio la presencia de VIP, las células
dendríticas maduras resultantes actúan, in vivo, induciendo
tolerancia inmunológica periférica. Las células dendríticas
maduradas en presencia de VIP y pulsadas o expuestas a un antígeno
responsable de la respuesta autoinmune inducen la diferenciación de
células T reguladoras que promueven la tolerancia inmunológica
frente a este antígeno.
Ensayo
3
En primer término, se indujo la enfermedad
conocida como transplante agudo versus huésped, del inglés "Acute
graft-versus-host disease"
(GVHD), que es un trastorno muy común y la causa principal de
mortalidad en pacientes que han sido sometidos a un transplante
alogénico de médula ósea para el tratamiento de leucemias y otros
trastornos inmunogenéticos. Para ello, a ratones de la cepa Balb/c
(H-2^{d}) se transplantaron células de médula ósea
que no contenían células T y células mononucleares de melsa de
ratones de la cepa B6 (H-2^{b}).
Después del transplante, los animales receptores
fueron inyectados con medios (no tratados) o con células
dendríticas de Balb/c (H-2^{d}) generadas en
ausencia (DC_{control}) o en presencia de VIP (DC_{VIP}).
Tal y como se desprende de la Fig. 3, donde se
representa el porcentaje de supervivencia en relación con los días
desde la operación de transplante, los animales que no eran tratados
(círculos negros), así como los que recibieron células dendríticas
control (círculos blancos), presentan un índice de supervivencia
menor que aquellos animales tratados (triángulos negros) con
células dendríticas que habían madurado en presencia de VIP.
Ensayo
4
Con la finalidad de determinar si las células T
reguladoras inducidas in vitro y que habían estado en
contacto con células dendrítricas CD_{VIP}, podían ser útiles al
ser inyectadas junto con otros excipientes a mamíferos susceptibles
de rechazar un transplante, se inyectaron siguiendo el mismo
esquema que en el ensayo 3, esto es, en el mismo modelo animal y
transplantado con el mismo tipo de células de médula ósea, células
CD4Tr_{control}, o CD4Tr_{VIP} o bien únicamente medio
(excipientes habituales en este tipo de procedimientos) y se
observó el índice de supervivencia de los ratones
transplantados.
Estos resultados aparecen representados en la
Fig. 4, donde puede observarse que aquellos animales que después del
transplante fueron inyectados con células CD4Tr_{VIP} (triángulos
negros) sobrevivían al transplante, mientras que los animales no
tratados (círculos negros) o bien tratados con células Treguladoras
del tipo CD4Tr_{control} (círculos blancos) no sobrevivían al
transplante y presentaban índices de supervivencia nula a los 20
días desde la realización de éste.
Así pues, de los ensayos 3 y 4 se deduce que las
células dendríticas que han estado en contacto con células T de un
donante y que han madurado en presencia de VIP, son útiles para
prevenir los rechazos de transplantes. Del mismo modo, las células
T reguladoras generadas in vitro por cultivo con células
dendríticas maduradas en presencia de VIP al ser inyectadas a
pacientes sometidos a un transplante también evitarán el indeseable
rechazo.
Como conclusión de los ensayos 1 a 4 llevados a
cabo puede destacarse el papel del péptido intestinal vasoactivo
como componente esencial para la preparación de un medicamento
aplicable por terapia celular a pacientes con enfermedades
autoinmunes, tal como la Esclerosis Múltiple, o a pacientes que
deban ser sometidos a una operación de transplante, por ejemplo de
médula ósea.
Los resultados presentados, demuestran que el
medicamento para terapia celular puede comprender tanto células
dendríticas obtenibles por maduración y estimulación en presencia
del citado péptido intestinal vasoactivo o una parte o derivado del
mismo; o bien células T reguladoras capaces de inducir tolerancia
inmunológica periférica, las cuales han sido obtenidas por
maduración y estimulación de células CD4T con células dendríticas
que han madurado en presencia del péptido intestinal
vasoactivo.
Las composiciones empleadas para llevar a cabo
los ensayos se caracterizan pues por la presencia de dichas células
dendríticas o células T reguladoras tolerogénicas (capaces de
inducir la tolerancia), que evidentemente irán acompañadas de los
excipientes habituales y conocidos por un experto en la materia para
dotarlas de la formulación deseada, preferentemente
inyectables.
Todos estos resultados resultan claramente
esperanzadores para el diseño de terapias personalizadas y exitosas
capaces de paliar y/o eliminar los síntomas de enfermedades tan
importantes como la Esclerosis Múltiple, y también abre ventanas en
el campo de los transplantes alogénicos.
Claims (17)
1. Uso del péptido intestinal vasoactivo (VIP)
para la preparación de un medicamento para la terapia celular de
enfermedades autoinmunes y/o rechazo de transplantes en
mamíferos.
2. Uso según la reivindicación 1, donde la
terapia celular es a base de células T reguladoras y/o células
dendríticas tolerogénicas.
3. Uso según la reivindicación 1 ó 2, donde el
péptido intestinal vasoactivo corresponde a una parte de dicho
péptido intestinal vasoactivo o a un derivado del mismo.
4. Uso según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 3 anteriores, en la que el medicamento para la
terapia celular de enfermedades autoinmunes y/o rechazo de
transplantes comprende células dendríticas previamente sometidas a
un proceso de maduración en presencia del péptido intestinal
vasoactivo (VIP) y estimuladas con al menos un antígeno responsable
de la respuesta autoinmune y/o con células T aisladas de sangre de
un donante de transplante.
5. Uso según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 3 anteriores, en la que el medicamento para la
terapia celular de enfermedades autoinmunes y/o rechazo de
transplantes comprende células T reguladoras inducidas a partir de
células T CD4 vírgenes estimuladas con células dendríticas
previamente sometidas a un proceso de maduración en presencia del
péptido intestinal vasoactivo (VIP) y estimuladas con al menos un
antígeno responsable de la respuesta autoinmune y/o con células T
aisladas de sangre de un donante de transplante.
6. Uso según una cualquiera de las
reivindicaciones 4 ó 5 anteriores, en donde el antígeno responsable
de la respuesta autoinmune es un componente de la mielina.
7. Uso según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 6 anteriores, en donde la enfermedad
autoinmune es la Esclerosis Múltiple (EM).
8. Uso según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 7 anteriores, donde el mamífero es el
hombre.
9. Célula dendrítica aislada generada a partir
de células de médula ósea o de monocitos, obtenible por
a) incubación de células de médula ósea o de
monocitos en medio completo con el agente de maduración factor
estimulador de colonias de granulocito macrófago
(GM-CSF) y en presencia del péptido intestinal
vasoactivo
(VIP),
(VIP),
b) colección de las células no adherentes de la
etapa a);
c) estimulación y maduración de las células de
la etapa b) con al menos un antígeno responsable de la respuesta
autoinmune y/o con células T aisladas de sangre de un donante de
transplante.
10. Célula dendrítica aislada según la
reivindicación 9, donde el antígeno responsable de la respuesta
autoinmune es un componente de la mielina.
11. Célula T reguladora aislada obtenible por
incubación de células T CD4 vírgenes con células dendríticas
sometidas a un proceso de maduración en presencia de péptido
intestinal vasoactivo (VIP) y estimuladas con al menos un antígeno
responsable de la respuesta autoinmune y/o con células T aisladas de
sangre de un donante de trans-
plante.
plante.
12. Célula T reguladora aislada según la
reivindicación 11, donde el antígeno responsable de la respuesta
autoinmune es un componente de la mielina.
13. Composición farmacéutica que comprende junto
con los excipientes farmacéuticamente aceptables, células
dendríticas previamente sometidas a un proceso de maduración en
presencia del péptido intestinal vasoactivo (VIP) y estimuladas con
al menos un antígeno responsable de la respuesta autoinmune y/o con
células T aisladas de sangre de un donante de transplante.
14. Composición farmacéutica según la
reivindicación 13, caracterizada porque el antígeno
responsable de la respuesta autoinmune es un componente de la
mielina.
15. Composición farmacéutica que comprende junto
con los excipientes farmacéuticamente aceptables, células T
reguladoras inducidas a partir de células T CD4 vírgenes
estimuladas con células dendríticas, las cuales previamente han sido
sometidas a un proceso de maduración en presencia del péptido
intestinal vasoactivo (VIP) y estimuladas con al menos un antígeno
responsable de la respuesta autoinmune y/o con células T aisladas de
sangre de un donante de transplante.
\newpage
16. Composición farmacéutica según la
reivindicación 15, caracterizada porque el antígeno
responsable de la respuesta autoinmune es un componente de la
mielina.
17. Composición farmacéutica según una
cualquiera de las reivindicaciones 13 a 16, caracterizada
porque está en forma de composición inyectable.
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|---|---|---|---|
| ES200600656A ES2315081B1 (es) | 2006-03-15 | 2006-03-15 | Nuevo uso del peptido intestinal vasoactivo (vip) y de las celulas aisladas estimuladas con dicho peptido. |
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| ES200600656A ES2315081B1 (es) | 2006-03-15 | 2006-03-15 | Nuevo uso del peptido intestinal vasoactivo (vip) y de las celulas aisladas estimuladas con dicho peptido. |
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