ES2313267T3 - Composicion farmaceutica de cicatrizacion de heridas que comprende sucralfato, glicina, acetato de aluminio y vitaminas. - Google Patents
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Abstract
Una composición que comprende sucralfato, acetato de aluminio, glicina y al menos una vitamina que se selecciona a partir de vitamina A, C o E.
Description
Composición farmacéutica de cicatrización de
heridas que comprende sucralfato, glicina, acetato de aluminio y
vitaminas.
La presente invención se refiere a una
composición farmacéutica que presenta actividad de cicatrización de
heri-
das.
das.
El sucralfato es un complejo amorfo de hidróxido
de aluminio y sulfato de sacarosa, que se identifica con el nombre:
complejo de
\beta-D-fructofuranosil-\alpha-D-glucopiranosida
octakis (sulfato de hidrógeno) y aluminio.
Las composiciones farmacéuticas que contienen
sucralfato como principio activo se usan actualmente como
tratamientos contra la úlcera. De hecho, el sucralfato tiene la
capacidad de inhibir la actividad de la pepsina, creando una capa
protectora que impide la acción del ácido clorhídrico sobre la
mucosa gástrica, y uniéndose a las sales biliares, neutralizando su
actividad agresiva con respecto a la mucosa misma.
El documento WO 89/05645 se refiere a
composiciones para la cicatrización de heridas que comprenden
sucralfato, que opcionalmente contienen vitaminas y aluminio.
La presente invención se dirige a composiciones
que contienen sucralfato que han demostrado actividades distintas
de las conocidas hasta la fecha.
En un primer aspecto, la presente invención se
refiere a una composición que comprende sucralfato, acetato de
aluminio, al menos una vitamina que se selecciona a partir de:
vitamina A, C, o E, preferiblemente vitamina A, y glicina.
De forma más particular, la composición de la
invención también incluye cantidades apropiadas de sustancias
emolientes e hidratantes, tales como por ejemplo lanolina y
vaselina.
En un aspecto adicional, la composición de la
invención también contiene un agente antimicótico, que
preferiblemente se selecciona a partir de econazol, miconazol o
itraconazol y/o un agente antibacteriano que se selecciona a partir
de eritromicina, gentamicina, neomicina, plata coloidal o
sulfadiazina de plata.
La composición de la invención posee actividades
citoprotectoras, aislantes y de transporte. En particular, el
sucralfato posee las tres actividades. De hecho, el sucralfato tiene
la capacidad de unirse a proteínas de la base de las heridas y
llagas epidérmicas formando, junto con el exudado, una película
protectora que protege la herida de agentes citotóxicos externos y
asegura la persistencia prolongada de otras sustancias activas en
los sitios de ulcera-
ción.
ción.
La glicina es el aminoácido más simple y posee
acción citoprotectora porque proporciona la base biológica para los
procesos de revitalización de las células metabólicamente
estresadas. Además, inhibe la conducción de las fibras nerviosas
periféricas con la consiguiente reducción de los síntomas de
dolor.
La vitamina A es esencial para la formación de
colágeno y la queratinización epidérmica. Sus actividades también
se expresan en la diferenciación de las células recientemente
formadas e intervienen en su desarrollo. La vitamina A también
tiene actividad anticarcinógena, particularmente útil en los
procesos de diferenciación celular.
El acetato de aluminio es un compuesto con
actividades astringentes y antisépticas. Únicamente es absorbido
por las membranas celulares de la base de la herida, sin efectos de
absorción sistémica.
Por lo tanto, la composición de la invención
presenta actividad en la cicatrización de heridas epidérmicas y es
de utilidad particular en la cicatrización y protección de
ulceraciones epiteliales, tanto las que han sido producidas por
agentes externos: quemaduras, heridas de diversos orígenes, etc., y
por fenómenos isquémicos: úlceras diabéticas y llagas de decúbito.
La composición también se usa como agente para la cicatrización de
heridas ginecológi-
cas.
cas.
En el caso en el que la composición también
incluye un agente antibiótico o antifúngico, puede usarse para
tratar las heridas y llagas infectadas por bacterias y hongos
respectivamente. En este último caso, la composición se prevé
también para uso ginecológico.
Las cantidades de los diversos componentes que
se usan para la preparación de la composición de la invención se
reseñan en la siguiente tabla 1.
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Preferiblemente, cuando el agente antibacteriano
es eritromicina o plata coloidal, estará presente en la composición
en cantidades comprendidas entre el 0,05 y el 5% en peso.
Cuando el agente antibacteriano es sulfadiazina
de plata, preferiblemente estará presente en cantidades comprendidas
entre 0,01 y 3% en peso.
La composición de la invención se prepara
mezclando los componentes deseados con sustancias emolientes e
hidratantes, por ejemplo vaselina y lanolina, hasta que se obtiene
una consistencia cremosa. De forma alternativa, la composición
puede formularse en forma de sprays, polvos dermatológicos, geles,
ungüentos, emulsiones, gotas para uso externo, soluciones, duchas
vaginales, óvulos vaginales, barras labiales; también pueden
preverse gasas o emplastos impregnados con la composición de la
invención.
La composición de la invención también se emplea
para uso veterinario.
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A continuación se reseñan algunos ejemplos de
composiciones de la invención.
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Ejemplo
1
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\newpage
Ejemplo
2
Ejemplo
3
Ejemplo
4
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Ejemplo
5
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Ejemplo
6
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Ejemplo
7
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\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
8
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
La composición del ejemplo 1 se ha analizado
para evaluar su capacidad de reparar heridas inducidas
artificialmente in vitro en monocapas de células
endoteliales humanas. Esta capacidad puede considerarse una
indicación de la actividad de vasorreparación in vivo. Se ha
realizado un ensayo preliminar de citotoxicidad (MTT) para evaluar
las concentraciones subtóxicas a usar con estas células.
El tipo celular que se usa viene representado
por las células endoteliales primarias humanas (HUVEC) que son
reconocidas universalmente como modelo que simula las paredes de los
vasos para el estudio in vitro de la actividad de reparación
de los vasos y la angiogénesis.
Cuando las células HUVEC se ven expuestas a
sustancias que pueden estimular su capacidad migratoria, un elemento
indispensable en el proceso de vasorregeneración y reparación de
heridas, cambian de forma y alteran su organización
citoesquelética, transformándose de células con un fenotipo
estacionario en células con un fenotipo migratorio. Las marañas de
microfilamentos que contienen moléculas de adhesión tales como
vinculina, actina y fibras de estrés, que mantienen las células
ancladas al sustrato, desaparecen o migran a la periferia celular,
permitiendo la migración celular.
\vskip1.000000\baselineskip
El modelo experimental in vitro adoptado
consiste en cultivos primarios de endotelio vascular humano,
denominado HUVEC. Estas son células vesiculares derivadas de la vena
umbilical (Fuente: American Type Culture Collection Nº
CRL-1730).
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La composición del ejemplo 1 se disuelve a una
concentración de 1 mg/ml en etanol y después se diluye en medio de
cultivo celular a diferentes concentraciones finales.
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Las células se sembraron en DMEM + 10% de FCS en
placas de 24 pocillos durante 24 horas. Después, se añadió medio de
cultivo reciente, suplementado con 10% de FCS y que contenía el
producto de prueba, a cuatro diluciones finales compuestas por
entre 1,25 y 0,05 mg/ml.
La muestra se disolvió directamente en medio de
cultivo. Cada muestra se analizó por triplicado y los experimentos
se repitieron dos veces. Se usaron células sin tratar como control
negativo, y las células se trataron con un tensioactivo de
toxicidad conocida (laurilsulfato sódico) disuelto en medio de
cultivo a concentraciones comprendidas entre 0,05 mg/ml y 2
\mug/ml como controles positivos.
Tras el periodo de incubación, se realizó la
prueba de citotoxicidad (MTT) para evaluar el porcentaje de
supervivencia celular. La prueba de MTT evalúa el impacto tóxico de
la sustancia en cuestión sobre la viabilidad celular.
\vskip1.000000\baselineskip
La prueba de MTT es simple, exacta y proporciona
resultados reproducibles. Este procedimiento fue desarrollado
originariamente por Mossman (Mossman, T. (1993), Rapid colorimetric
assay for cellular growth and survival:
application to proliferation and cytotoxicity assays, J. Immunol. Methods 65: 55-63). El reactivo clave es bromuro de 3-[4,5-dimetiltiazol-2-il]-2,5-difeniltetrazolio o MTT, una sustancia que proporciona un color amarillo en solución acuosa. Las deshidrogenasas mitocondriales de las células vivas escinden el anillo tetrazolio, provocando la formación de cristales de formazan insolubles de color morado. Los cristales se disuelven en isopropanol acidificado y la solución morada resultante se mide espectrofotométricamente. Una viabilidad celular mayor o menor provoca cambios concomitantes de la cantidad de formazan que se forma, lo que puede considerarse indicador del grado de citotoxicidad provocado por la exposición a las sustancias irritantes.
application to proliferation and cytotoxicity assays, J. Immunol. Methods 65: 55-63). El reactivo clave es bromuro de 3-[4,5-dimetiltiazol-2-il]-2,5-difeniltetrazolio o MTT, una sustancia que proporciona un color amarillo en solución acuosa. Las deshidrogenasas mitocondriales de las células vivas escinden el anillo tetrazolio, provocando la formación de cristales de formazan insolubles de color morado. Los cristales se disuelven en isopropanol acidificado y la solución morada resultante se mide espectrofotométricamente. Una viabilidad celular mayor o menor provoca cambios concomitantes de la cantidad de formazan que se forma, lo que puede considerarse indicador del grado de citotoxicidad provocado por la exposición a las sustancias irritantes.
Tras el tratamiento, las células se lavan con
solución de lavado (solución salina tamponada con fosfato de
Dulbecco). Tras retirar la solución, se añade el medio-MTT a cada pocillo y las células se incuban 37ºC.
Dulbecco). Tras retirar la solución, se añade el medio-MTT a cada pocillo y las células se incuban 37ºC.
Al final del periodo de incubación, se elimina
el medio-MTT y se añade la solución de
solubilización de MTT a cada pocillo.
Las placas se agitan en un agitador de placas
asegurándose de que los cristales se disuelvan y formen una
solución homogénea. La absorbancia se lee usando un colorímetro
provisto de un lector de placas, restando la lectura del
blanco.
blanco.
Los resultados se expresan como:
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\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Los datos de citotoxicidad obtenidos usando la
prueba de MTT se representan en una gráfica en función de la
concentración del producto que se está probando, proporcionando así
una curva de respuesta en función de la dosis, que permite
determinar:
- la curva de regresión teórica;
- el valor de CI_{50} teórico (la
concentración que inhibe el crecimiento en un 50%), es decir la
concentración que induce una reducción de la viabilidad celular del
50% con respecto a las células sin tratar y, por lo tanto, permite
evaluar la naturaleza potencialmente irritante de la
composición.
Los resultados de la citotoxicidad se han
corregido restando las lecturas de absorbancia debidas al medio de
dilución.
Para los productos terminados, los valores de
CL_{50} < 1 mg/ml pueden considerarse irritantes, los valores
> 3 mg/ml muestran una biocompatibilidad óptima.
\vskip1.000000\baselineskip
Las células se trataron con la composición del
ejemplo, a concentraciones finales de 0,1 y 0,05 mg/ml en medio de
cultivo, durante 4 días. Las células tratadas con medio solo o con
factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) se usaron como
controles negativos y positivos, respectivamente. Las células se
mantuvieron en una incubadora a 37ºC con 5% de CO_{2}. Las
pruebas se realizaron por triplicado.
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Se usan células HUVEC, entre el 1^{er} y 4º
pases. Se plaquean a 20.000 células/pocillo en placas estériles de
24 pocillos previamente tratadas con 10 \mug/ml de fibronectina y
se dejan desarrollarse a confluencia en medio M199 suplementado con
10% de FCS, 100 \mug/ml de factor de crecimiento endotelial y 100
\mug/ml de heparina.
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Una vez alcanzada la confluencia, se practica
una herida artificial por toda la longitud de la monocapa, para
cada muestra, usando una boquilla de plástico estéril. El medio del
cultivo celular se elimina y se sustituye por medio que contiene la
sustancia de prueba, menos para los controles negativos.
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Justo después de practicar la herida (T0) y en
diversos tiempos después, se realizan observaciones nuevas de las
muestras tratadas y de los controles mediante microscopía de
contraste de fases usando un microscopio Leica
DM-IL IMC con aumentos de 200 y 400X. Las imágenes
se documentan mediante fotografías digitales que se toman usando
una cámara Olympus C-100.
\vskip1.000000\baselineskip
Las indicaciones de la viabilidad celular tras
el tratamiento con diversas diluciones del producto de prueba se
reseñan en la tabla 9.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
La actividad de reparación de heridas se
documentó fotográficamente en función del tiempo comparando con las
células tratadas con VEGF y con las células sin tratamiento, usando
un microscopio óptico de contraste de fases, con cámara digital,
durante la ejecución de la prueba (véanse las figuras
1.1-4.3).
Queda claro a partir de la secuencia fotográfica
que el producto a prueba induce la conversión del fenotipo celular
de estacionario a migrador. Las células tratadas con el producto, al
igual que las que se tratan con VEGF, empiezan a migrar a partir de
las 3 horas (figuras 2.1, 2.3, 2.4.), mientras que este fenómeno no
se observa en las células sin tratar (figura 2.2).
A las 24 horas, no se observan diferencias entre
las muestras tratadas y sin tratar, ya que en todos los casos, la
herida se rellena y se ha vuelto a formar la monocapa (figuras 3.1,
3.2, 3.3, 3.4). Sin embargo, al prolongar la exposición a 4 días,
queda claro que el producto a prueba continúa induciendo una mayor
proliferación y migración celulares, de una forma dependiente de la
dosis, con respecto a las células sin tratar, tanto es así que
induce la formación de una bicapa (figuras 4.1, 4.2, 4.3).
En conclusión, la composición del ejemplo 1
muestra actividad de estimulación de la regeneración vascular. De
hecho, el producto estimula la migración de células endoteliales
provocando la reparación de las heridas y ulceraciones de diversos
tipos.
Claims (16)
1. Una composición que comprende sucralfato,
acetato de aluminio, glicina y al menos una vitamina que se
selecciona a partir de vitamina A, C o E.
2. La composición de acuerdo con la
reivindicación 1, en la que dicha al menos una vitamina es vitamina
A.
3. La composición de acuerdo con las
reivindicaciones 1 ó 2 que comprende un agente antibacteriano.
4. La composición de acuerdo con la
reivindicación 3, en la que dicho agente antibacteriano se
selecciona a partir de eritromicina, gentamicina, neomicina, plata
coloidal y/o sulfadiazina de plata.
5. La composición de acuerdo con cualquiera de
las reivindicaciones 1 a 4 que comprende un agente antifúngico.
6. La composición de acuerdo con la
reivindicación 5, en la que dicho agente antifúngico se selecciona a
partir de econazol, miconazol y/o itraconazol.
7. La composición de acuerdo con cualquiera de
las reivindicaciones 1 a 6 que comprende agentes emolientes e
hidratantes.
8. La composición de acuerdo con la
reivindicación 7, en la que dichos agentes emolientes e hidratantes
son vaselina y lanolina.
9. La composición de acuerdo con cualquiera de
las reivindicaciones 1 a 8, en la que dicho sucralfato está
presente en cantidades que varían en el intervalo de 1% a 6% en
peso, preferiblemente de 2 a 5% en peso; dicho acetato de aluminio
está presente en cantidades que varían en el intervalo de 0,5% a
3,5% en peso, preferiblemente de 1% a 2,5% en peso; dicha al menos
una vitamina está presente en cantidades que varían en el intervalo
de 0,2% a 3,0% en peso, preferiblemente de 0,8% a 1,5% en peso;
dicha glicina está presente en cantidades que varían en el
intervalo de 1% a 6% en peso, preferiblemente de 2% a 5% en
peso.
10. La composición de acuerdo con cualquiera de
las reivindicaciones 3 a 9, en la que dicho agente antibacteriano
está presente en cantidades que varían en el intervalo de 0,01% a 5%
en peso, preferiblemente de 2% a 4% en peso y dicho agente
antifúngico está presente en cantidades que varían en el intervalo
de 0,01% a 5% en peso, preferiblemente de 0,1% a 4% en peso.
11. Una composición farmacéutica de acuerdo con
cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, seleccionándose dicha
composición a partir de: a) 4,5% de sucralfato, 4,0% de glicina,
2,0% de acetato de aluminio, 1,0% de vitamina A, lanolina y
vaselina; b) 4,0% de sucralfato, 4,0% de glicina, 2,0% de acetato de
aluminio, 1,0% de vitamina A, 3,0% de eritromicina, lanolina y
vaselina; c) 4,0% de sucralfato, 4,0% de glicina, 2,0% de acetato
de aluminio, 1,0% de vitamina A, 3,0% de econazol, lanolina y
vaselina; d) 4,0% de sucralfato, 4,0% de glicina, 2,0% de acetato
de aluminio, 1,0% de vitamina A, 0,1% de gentamicina, lanolina y
vaselina; e) 4,0% de sucralfato, 4,0% de glicina, 2,0% de acetato
de aluminio, 1,0% de vitamina A, 0,5% de neomicina, lanolina y
vaselina; f) 4,0% de sucralfato, 2,0% de acetato de aluminio, 1,0%
de vitamina A, 0,2% de plata coloidal, 0,1% de miconazol, lanolina
y vaselina, g) 4,0% de sucralfato, 2,0% de acetato de aluminio, 1,0%
de vitamina A, 0,1% de sulfadiazina de plata, lanolina y vaselina;
h) 4,0% de sucralfato, 2,0% de acetato de aluminio, 1,0% de
vitamina A, 0,5% de itraconazol, lanolina y vaselina.
12. La composición de acuerdo con cualquiera de
las reivindicaciones 1 a 11, en la que dicha composición está
formulada en una forma que se selecciona a partir de sprays, polvos
dermatológicos, geles, ungüentos, emulsiones, gotas para uso
externo, soluciones, duchas vaginales, óvulos vaginales, barras
labiales, gasas o emplastos.
13. La composición de acuerdo con cualquiera de
las reivindicaciones 1 a 11 para usar como medicamento.
14. Uso de la composición de acuerdo con
cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 para la preparación de un
medicamento para el tratamiento de heridas vaginales y
epidérmicas.
15. El uso de acuerdo con la reivindicación 14
para el tratamiento y la protección de ulceraciones epiteliales y
vaginales.
16. Uso de la composición de acuerdo con
cualquiera de las reivindicaciones 3 a 11 para la preparación de un
medicamento para el tratamiento de heridas infectadas con bacterias
y/u hongos.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP05425649A EP1764104B1 (en) | 2005-09-16 | 2005-09-16 | Wound healing pharmaceutical composition comprising sucralfate, glycine, aluminium acetate and vitamins |
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| Publication Number | Publication Date |
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Family Applications (1)
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|---|---|---|---|
| ES05425649T Active ES2313267T3 (es) | 2005-09-16 | 2005-09-16 | Composicion farmaceutica de cicatrizacion de heridas que comprende sucralfato, glicina, acetato de aluminio y vitaminas. |
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