ES2310188T3 - Manipulacion de senectud utilizando un promotor de gen i myb/i y genes de biosintesis de citoquinina. - Google Patents
Manipulacion de senectud utilizando un promotor de gen i myb/i y genes de biosintesis de citoquinina. Download PDFInfo
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Abstract
Un método para manipular la senectud en una planta, incluyendo dicho método la introducción dentro de dicha planta una construcción genética que incluye un promotor de gen myb operativamente ligado a un gen de isopentenil transferasa (ipt).
Description
Manipulación de senectud utilizando un promotor
de gen i myb/i y genes de biosíntesis de citoquinina.
Presente invención se relaciona con métodos para
manipular la senectud en plantas. La invención también se relaciona
con vectores útiles en tales métodos, plantas transformadas con
características de senectud modificadas y células de plantas,
semillas y otras partes de tales plantas.
La senectud de hojas involucra cambios
estructurales y metabólicos en células antes de la muerte celular.
Esta también involucra el reciclamiento de nutrientes a regiones
activamente crecientes.
La regulación de la senectud de los órganos de
las plantas y las plantas por las citoquininas tiene consecuencias
agrícolas importantes. Los niveles elevados de citoquinina en las
hojas tienden a retardar la senectud. Se ha utilizado un número de
promotores para regular la expresión del gen ipt, cuyo producto
cataliza (isopenteniltransferasa) una etapa clave en la síntesis de
citoquinina. Sin embargo, en general, las plantas transgénicas que
sobre expresan el gen ipt se han reportado por tener crecimiento de
vástagos y raíces retardado sin formación de raíces, dominancia de
ápice reducida, y área de hojas reducidas.
WO 00/70061 describe promotores relacionados con
la senectud o regiones de iniciación transcripcionales del maíz.
Zhang et al. (Molecular Breeding, vol. 6, páginas
135-144, 2000) reporte sobre el desarrollo de
Arabidopsis thaliana tolerante a las inundaciones mediante
producción de citoquinina autorregulada. Gan & Amasino
(Inducible gene expression in plants. Reynolds, P.H.S. (ed). 1999.
CABI publishing. Wallingford, UK) reporte sobre el objetivo de
desarrollo de la expresión genética mediante el uso de un promotor
específico de senectud. Gan & Amasino (Science, vol. 270,
páginas 1986-1988, 1995) reporte sobre la inhibición
de la senectud de hojas mediante la producción de cito quinina
autorregulada. Smart et al. (Plant Cell, vol. 3, páginas
647-656, 1991) reportes sobre senectud de hoja
retardada en plantas de tabaco transformadas con tmr, un gen para la
producción de citoquinina en Agrobacterium. WO 96/29858 describe
plantas transgénicas con características de senectud alteradas.
Kranz et al. (Plant Journal, vol. 61, no. 2, páginas
263-276, 1998) reporte sobre la caracterización
funcional de los miembros de la familia de genes
R2R3-MYB de Arabidopsis thaliana. Li et
al. (FEBS Letters, no. 379, páginas 117-121,
1996) reporte sobre un gen relacionado con myb novedoso (Atmyb5) de
Arabidopsis thaliana. Lanahan et al. (Plant Cell,
vol. 4, páginas 203-211, 1992) reporte sobre el
complejo de respuesta de giberelina en promotores de gen
a-amilasa en cereal. Finalmente, la CA 2 263 067
describe un método para modificar la morfología, bioquímica y
fisiología de las plantas.
Es un objeto de la presente invención superar, o
por lo menos aliviar, una o más de las dificultades o deficiencias
asociadas con la técnica anterior.
En un aspecto, la presente invención proporciona
un método para manipular la senectud en una planta, dicho método
incluye introducir dentro de dicha planta una construcción genética
que incluye un promotor del gen myb, ligado operativamente a un gen
isopentenol transferasa (ipt) que codifica una enzima involucrada en
la biosíntesis de una citoquinina.
La manipulación de la senectud se relaciona con
la planta y/o órganos específicos de la planta. La senectud de
diferentes órganos de planta, tal como las hojas, las raíces, los
vástagos, tallos, tubérculos, flores, retoños, y frutas se pueden
manipular. La manipulación de la planta y la senectud de los órganos
de las plantas puede tener consecuencia agrícolas importantes, tal
como vida de almacenamiento incrementada de por ejemplo frutos,
flores, hojas y tubérculos en productos hortícola y flores de corte,
carácter perecedero reducido de cultivos hortícola, fijación de
carbón incrementada en hojas de senectud retardada que conduce a
rendimientos mejorados, producción de biomasa mejorada en plantas de
forraje, producción de semillas mejoradas etc.
La "Manipulación de la senectud" se
relaciona generalmente con retrazar la senectud en plantas
transformadas con relación a una planta de control no transformada.
Sin embargo, para algunas aplicaciones puede ser deseable promover
o modificar de otra manera la senectud en la planta. La senectud se
puede promover o modificar de otra forma por ejemplo, al utilizar un
gen anticodificante.
Una cantidad efectiva de dicha construcción
genética se puede introducir dentro de dicha planta, mediante
cualquier técnica adecuada, por ejemplo por transducción,
transfección o transformación. Por "una cantidad efectiva"
significa una cantidad suficiente para resultar en una traza
fenotípica identificable en dicha planta, o un planta, semilla de
planta u otra parte de la planta derivada de estas. Tales cantidades
se pueden determinar fácilmente por una persona apropiadamente
experta, teniendo en cuenta el tipo de la planta, la ruta de
administración y otros factores relevantes. Tal una persona será
capaz fácilmente de determinar una cantidad adecuada y método de
administración. Ver, por ejemplo, Maniatis et al, Molecular
Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory,Cold
Spring Harbor, la descripción completa de la cual se incorpora aquí
como referencia.
El promotor de gen myb puede ser de cualquier
tipo adecuado. Preferiblemente el promotor de gen myb es un gen
myb32. Preferiblemente el gen myb es de Arabidopsis, más
preferiblemente Arabidopsis thaliana. Más preferiblemente
promotor de myb incluye una secuencia de nucleótidos seleccionada
del grupo que consiste de la secuencia mostrada en la figura 1 aquí
(ID de Sec No: 1) y fragmentos funcionalmente activos y variantes de
éstos.
Un promotor adecuado se describe en Li et
al., Cloning of three MYB-_like genes from
Arabidopsis (PGR 99-138) Plant Physiology 121:_313
(1999), de la cual se incorpora aquí la descripción completa como
referencia.
Por "funcionalmente activos" significa que
el fragmento o variante (tal como un análogo, derivado o mutante)
es capaz de manipular la senectud en una planta mediante el método
de la presente invención. Tales variantes incluyen variantes
alélicas que ocurren naturalmente y variantes que no ocurren
naturalmente. Adiciones, eliminaciones, sustituciones y
derivaciones de uno o más nucleótidos se contemplan mientras que las
modificaciones no resulten en perdida de actividad funcional del
fragmento o variante. Preferiblemente el fragmento funcionalmente
activo o variante tiene por lo menos aproximadamente 80% de
identidad con la parte relevante de la secuencia mencionada
anteriormente, más preferiblemente por lo menos aproximadamente 90%
de identidad, más preferiblemente por lo menos aproximadamente 95%
de identidad. Preferiblemente el fragmento tiene un tamaño de por lo
menos 10 nucleótidos, más preferiblemente por lo menos 15
nucleótidos, más preferiblemente por lo menos 20 nucleótidos.
El gen ipt que codifica una enzima involucrada
en la biosíntesis de una citoquinina puede ser de cualquier tipo
adecuado. Preferiblemente el gen es de Agrobacterium, más
preferiblemente Agrobacterium tumefaciens. Más
preferiblemente el gen incluye una secuencia de nucleotidito
seleccionada del grupo que consiste de la secuencia mostrada en la
figura dos aquí (secuencia ID No. 2).
Se describen variantes funcionalmente activas e
incluyen variantes alélicas de ocurrencia natural y variantes de
ocurrencia no natural. Las adiciones, eliminaciones, sustituciones y
derivaciones de uno o más de los nucleótidos se contemplan mientras
que las modificaciones no resulten en pérdida de actividad funcional
del fragmento o variante. La funcionalidad del fragmento o variante
puede tener por lo menos aproximadamente 80% de identidad con la
parte relevante de la secuencia mencionada anteriormente, esta puede
tener por lo menos aproximadamente 90% de identidad, y esta puede
tener por lo menos aproximadamente 95% de identidad. Tales variantes
funcionalmente activas y fragmentos incluyen, por ejemplo, aquellos
que tienen cambios de acido nucleico que resultan en sustituciones
de aminoácidos conservadoras de uno o más residuos en la secuencia
de aminoácido correspondiente. El fragmento puede tener un tamaño
de por lo menos 10 nucleótidos, por lo menos 15 nucleótidos o por lo
menos 20 nucleótidos.
La construcción genética se puede introducir en
la planta mediante cualquier técnica adecuada. Las técnicas para
incorporar las construcciones genéticas de la presente invención en
las células de planta (por ejemplo por transducción, transfección o
transformación) se conocen bien por aquellos expertos en la técnica.
Tales técnicas incluyen introducción mediada por Agrobacterium,
eletraporación de tejidos, células y protoplastos, función
protoplástica, inyección en órganos reproductores, inyección en
enviones inmaduros e introducción de proyectiles de alta velocidad
a las células, tejidos, cayo, enviones maduros e inmaduros, y
combinaciones de éstos.
La elección de la técnica dependerá grandemente
del tipo de planta a ser transformada, y se puede determinar
fácilmente por una persona apropiadamente experta.
Las células que incorporan la construcción
genética de la presente invención se pueden seleccionar, como se
describe adelante, y luego cultivar en un medio apropiado para
regenerar las plantas transformadas, utilizando técnicas bien
conocidas en el arte, las condiciones de cultivo, tal como
temperatura, pH y similares, serán evidentes para la persona
experta en la técnica. Las plantas resultantes se pueden reproducir,
sexualmente o asexualmente, utilizando métodos bien conocidos en la
técnica, para producir generaciones sucesivas de plantas
transformadas.
El método de la presente invención se puede
aplicar a una variedad de plantas, que incluyen monocotiledóneas
[tal como pastos (forraje y turfgrasses), con com, trigo avena y
cebada)], dicotiledóneas [tal como Arabidopsis, tabaco, tréboles
(por ejemplo trébol blanco, trébol rojo, trébol subterráneo),
alfalfa, canola, vegetales como col, lechuga, espinaca] y
gimnospermas.
En segundo aspecto de la presente invención se
suministra un vector capaz de manipular la senectud en una planta,
dicho vector incluye un promotor del gen a myb ligado operativamente
a un gen de transferasa isopentenilo (ipt) que codifica una enzima
involucrada en la biosíntesis de una citoquinina.
En una modalidad preferida de este aspecto de la
invención, el vector puede incluir adicionalmente un terminador,
dicho promotor, gen y terminador se ligan operativamente.
Por "ligado operativamente" significa que
dicho promotor es capaz de originar la expresión de dicho gen en
una célula de planta y dicho terminador es capaz de terminar la
expresión de dicho gen en una célula de planta. Preferiblemente,
dicho promotor está en la dirección 5' de dicho gen y dicho
terminador está en la dirección 3'de dicho gen.
El vector puede ser de cualquier tipo adecuado y
puede ser vírico o no vírico. El vector puede ser un vector de
expresión. Tales vectores incluyen secuencias de acido nucleico
sintéticas y cromosomitas, no cromosómicas, por ejemplo derivados
de virus de plantas; plasmados bacterianos; derivados del plásmido
Ti y de Agrobacterium tumefaciens; derivados del plásmido Ri
de Agrobacterium rizogenes; ADN fago; cromosomas artificiales
de levadura; cromosomas artificiales bacterianos; cromosomas
artificiales bacterianos binarios; vectores derivados de
combinaciones de plasmados y ADN fago. Sin embargo, se puede
utilizar cualquier otro vector mientras sea replicable o integrante
o viable en la célula de la planta.
El promotor, gen y terminador pueden ser de
cualquier tipo adecuado y pueden ser endógenos a la planta o a la
célula de la planta objetivo y pueden ser exógenos, dado que ellos
son funcionales en la célula de la planta objetivo.
Una variedad de terminadores que se pueden
emplear en los vectores de la presente invención también se conocen
bien por aquellos expertos en la técnica. El terminador puede ser
del mismo gen como la secuencia promotora o un gen diferente. Los
terminadores particularmente adecuados son señales de poliadenación,
tal como poli A CaMV 35S y otros terminadores de la sintasa
nopalina (nos) y los genes sintasa octopina (ocs).
El vector, en adición al promotor, el gen y el
terminador, pueden incluir elementos adicionales necesarios para la
expresión del gen, en diferentes combinaciones, por ejemplo
estructura de vector, origen de replicación (ori), múltiples sitios
de clonación, secuencias espaciadoras, mejoradores, intrones (tal
como intrón de ubiquitina Ubi), genes de resistencia antibiótica y
otros genes marcadores seleccionables [tal como el gen de
fosfotransferasa neomicina (nptII) el gen de fosfotransferasa
higromicina (hph), el gen acetiltransferasa fosfinotricina (bar o
pat)], y genes indicadores (tal como gen
beta-glucuronidasa (GUS) (gusA)]. El vector también
puede contener un sitio de unión ribosómico para la iniciación de
traducción. El vector también puede incluir secuencias apropiadas
para amplificar la expresión.
Como una alternativa para el uso de genes
indicadores seleccionables para proporcional una traza fenotípica
para selección de células anfitrionas transformadas, la presencia
del vector en las células transformadas se puede determinar
mediante otras técnicas bien conocidas en el arte, tal comos PCR
(reacción de cadena polimerasa), análisis de hibridación Southern
blot ensayos histoquímicas (por ejemplo ensayos GUS), cromatografía
de capa delgada (TLC), análisis de hibridación northern Y western
blot.
Aquellos expertos en la técnica apreciaran que
varios componentes del vector se ligan operativamente, de tal
manera que resulta en la expresión de dicho gen. Las técnicas para
ligar operativamente los componentes del vector de la presente
invención se conocen bien por aquellos expertos en la técnica. Tales
técnicas incluyen el uso de ligadores, tal como ligadores
sintéticos, por ejemplo que incluyen uno o más sitios de enzima de
restricción.
En un aspecto adicional de la presente invención
se suministra una célula de planta transgénica, planta, semilla de
planta u otra parte de planta que incluye una construcción genética
que incluye un promotor del gen myb limitado operativamente a un
gen de transferasa isopentenilo (ipt), con características de
senectud modificadas. Preferiblemente la célula de planta
transgénica, la planta, semilla de la planta u otra parte de la
planta se produce mediante un método de acuerdo con la presente
invención.
La presente invención también proporciona una
planta, semilla de planta u otra parte de la planta derivada de una
célula de planta de la presente invención.
La presente invención también proporciona una
planta, semilla de planta y otra parte de la planta derivada de una
planta de la presente invención.
La presente invención será más descrita con
referencia a los ejemplos acompañantes y los dibujos. Se debe
entender, sin embargo, que la siguiente descripción solo es
ilustrativa y no se debe tomar en ninguna forma como una restricción
de la generalidad de la invención descrita anteriormente.
En las figuras:
Figura 1 muestra la secuencias de nucleótido del
promotor del gen myb32 (atmyb32) de Arabidopsis thaliana (ID
de Sec No: 1).
Figura 2 muestra la secuencia de nucleótido del
gen isopentenil transferasa (ipt) de Agrobacterium
tumefaciens (ID de Seq No: 2).
Figura 3 muestra el análisis PCR y análisis de
ADN Southern de planta de trebol(Trifolium repens)
atmyb32::ipt transgénico. a) la región de T-DNA
patmyb32: ipt muestran sitios de enzima de restricción y ubicación
de sondas utilizadas para análisis de hibridación Southern. b) gel
de 1% agarosa teñido con bromuro de Etidiu de los productos ipt 583
bp y nptII 599 bp amplificados por PCR. c) hibridación Southern blot
con HindIII. ADN genómico total digerido aislado de plantas de
trébol blanco positivas PCR hibridadas con sonda ipt. d) hibridación
Southern blot con ADN genómico total HindIII digerido aislado de
plantas de trébol blanco positivas PCR hibridadas con la sonda
mptll. Las filas 1-2: dos reactivos independientes
resistentes a la canamicina cv. Haifa, código: Hmi01, Hmi08
respectivamente; filias 3-12: doces reactivos
independientes resistentes a la canamicina cv. Irrigation, códigos
Imi06, Imi07, Imi08, Imi09, Imi10, Imi11, Imi12, Imi14, Imi16, Imi18
respectivamente; fila C: trébol blanco no transformado; fila P:
plásmido de control positivo patmyb32ipt.
Figura 4 muestra análisis RT-PCR
de la expresión mARN ipt en plantas de trébol (T. repens) blanco
atmyb32:: ipt transgénico. Las filas 1-11 son
muestras de líneas transgénicas independientes 11 con códigos de
planta correspondiente como en la figura 4.8; fila C, planta de
control no transformada; línea P, plásmido como control positivo. El
ARN total se aísla de tejidos de hojas. ARN Total (13 \mug) se
utiliza para cada reacción de transcripción inversa y producto 1l5
de RT amplificado por PCR. Los productos de ADN en el gel en la
derecha se amplifican mediante ciclos 2X 30
intensivos PCR. No se agregan transcriptasa inversa a la reacción RT-PCR correspondiente cargada en filas alternas.
intensivos PCR. No se agregan transcriptasa inversa a la reacción RT-PCR correspondiente cargada en filas alternas.
Figura 5 muestra un bioensayo de senectud de
hojas cortadas de plantas de trébol (T. repens) atmyb32::ipt
transgénico. Por lo menos 30 hojas se recolectan de cada línea de
posiciones similares en retoños de líneas de planta. A. El número de
hojas amarillentas como una fracción del número total de hojas
cortadas B. la apariencia típica de las hojas se mantiene en agua
bajo luz durante dos semanas. La clave para líneas de planta: HC, IC
y Hmg, Img, plantas transgénica atmyb32::gusA y no transformadas
(cv. Haifa e Irrigation) respectivamente; 01 y 08, líneas Haifa
atmyb32:: ipt transgénicas Hmi01 y Hmi08 respectivamente; líneas
Irrigation 11, 12, 16 y 18 atmyb32::ipt transgénico y Imi11, Imi12,
Imi16 y Imi18 respectivamente.
Figura 6 muestra A) morfología general de la
planta, B) desarrollo de retoño normal, y C) desarrollo de raíz
normal en plantas de trébol (T. repens)(derecha) blanca atmyb32::ipt
transgénicas comparadas con plantas de control (izquierda).
\vskip1.000000\baselineskip
Trébol transgénicos (Trofolium repens cv. Haifa
e Irrigation) se producen por transformación mediada por y
Agrobacterium utilizando un vector binario que lleva el gen
quimérico atmyb32::ipt (Figura 3a). Las plantas transgénicas se
detectan sistemáticamente por PCR utilizando cebadores ipt y nptII.
(Figura 3b). las muestras de ADN genómico digerido por HindIII
sometidas a análisis de hibridación de ADN Southern muestran que los
fragmentos de ADN mayores de 4.4 kb se detectan en todas las filas
por las sondas ipt y nptII, que de muestran la presencia e
integración de T-ADN de longitud completa dentro del
genoma del trébol (Figura 3). Las líneas transgénicas Hmi01, lmi06,
Imi11, y Imi18 (fila 1, 3, 5, 8 y 12 respectivamente) parecen tener
una única copia de T-ADNA de longitud completa
integrada en el genoma. Otras líneas transgénicas tienen múltiples
copias del transgen atmyb32::ipt.
\vskip1.000000\baselineskip
La expresión del transgen atmyb32::ipt en
plantas de trébol transgénico (T. repens) se evalúan por
RT-PCR. Se detecta el mRNA ipt en tejidos de hojas
de todas las plantas de trébol blanco atmyb32::ipt transgénicas
examinadas, con niveles variantes de productos PCR detectados
(Figura 4).
\vskip1.000000\baselineskip
Se desarrollan experimentos para evaluar las
senectud de hojas descartadas de plantas atmyb32::ipt transgénicas.
Se observa amarillamiento rápido en las hojas desechadas de plantas
de trébol blanco atmyb32:: gusA transgénicas de cultivos dentro de
una semana. Las líneas transgénicas Hmi01, Hmi08, Imi16 e Imi18
muestran senectud retrazada mientras que Imi11 e Imi12 no muestran
síntomas de amarillamiento al final de los 7 días. Después de dos
semanas, las hojas de todas las planta atmyb32::ipt Transgénicas
son mucho más verdes que aquellas de las no transformada y plantas
transgénicas atmyb32:: gusA de control transgénicas (Figura 5). El
grado de senectud en las hojas cortadas es del orden HC, Hmg >
Hmi01 > Hmi08 para cv.. Haifa, y IC e Img > Imi16 > Imi18
> Iimi11 y Imi12 para cv. Irrigation. HC es Haifa de control no
transformado, Hmg es Haifa atmyb32::gusA de control, IC es
Irrigation de control no transformado, Img es Irrigation
atmyb32::gusA de control. Hmi01, Hmi08, Imi16, Imi18, Imi11 e Imi12
son plantas de trébol blanco atmyb32:: ipt transgénicas
independientes de el cultivo Haifa (H) e Irrigation(I),
respectivamente.
\vskip1.000000\baselineskip
La morfología de planta normal así como también
el desarrollo de raíz normal y retoño normal se observan en plantas
de trébol blanco atmyb32::ipt transgénicas (Figura 6), indicando así
que la expresión regulada del gen ipt bajo control del promotor
atmyb32 no afecta negativamente la dominancia de ápice ni de raíz de
las planta de trébol blanco transgénicas (Tabla 1).
Se observa raíz normal y morfología de planta
normal en diez líneas de trébol blanco atmyb32::ipt transgénico
independiente analizadas. Se muestran Los números de copia de gen
ipt estimados en diez líneas de trébol blanco atmyb32::ipt
transgénico independientes.
Se entenderá que la invención descrita y
definida en esta especificación abarca todas las combinaciones
alternativas de dos o más características individuales mencionadas
o evidentes del texto o dibujo. Todas estas diferentes combinaciones
constituyen varios aspectos alternos de la invención.
También se entenderá que el termino
"comprende" (o sus variantes gramaticales) como se utiliza en
esta especificación es equivalente al termino "incluye" y no
se debe tomar como excluyente de la presencia de otros elementos o
características.
Los documentos citados en esta especificación
son para propósito de referencia y su inclusión no es un
reconocimiento de que ellos formen parte del conocimiento general
común en la técnica relevante.
<110> Agriculture Victoria Services Pty
Ltd
\hskip1cmLa Trobe University
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<120> Manipulación de senectud de planta
utilizando un promotor de gen myb y genes de biosíntesis de
citoquinina
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<130> 392-1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<140> EP 01 962 486.5
\vskip0.400000\baselineskip
<141>
2001-08-30
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<150> AU PQ9946
\vskip0.400000\baselineskip
<151>
2000-09-06
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<160> 2
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<170> PatentIn version 3.1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 941
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Arabidopsis thaliana
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 2
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 1988
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
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<213> Agrobacterium tumefaciens
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<400> 2
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<110> Agriculture Victoria Services Pty
Ltd
\hskip1cmLa Trobe University
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<120> Manipulación de senectud de planta
utilizando un promotor de gen myb y genes de biosíntesis de
citoquinina
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<130> 392-1
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<140> EP 01 962 486.5
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<141>
2001-08-30
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<150> AU PQ9946
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<151>
2000-09-06
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<160> 2
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<170> PatentIn version 3.1
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<210> 1
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<211> 941
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<212> ADN
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<213> Agrobacterium thaliana
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<400> 1
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<210> 2
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<211> 1988
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<212> ADN
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<213> Agrobacterium tumefaciens
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<400> 2
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Claims (18)
1. Un método para manipular la senectud en una
planta, incluyendo dicho método la introducción dentro de dicha
planta una construcción genética que incluye un promotor de gen myb
operativamente ligado a un gen de isopentenil transferasa (ipt).
2. Un método de acuerdo con la reivindicación 1
en donde dicho promotor de gen myb es un promotor de gen myb32.
3. Un método de acuerdo con la reivindicación 2
en donde dicho promotor de gen myb es de Arabidopsis.
4. Un método de acuerdo con la reivindicación 1
en donde dicho promotor de gen myb incluye una secuencia de
nucleótido mostrada aquí en la Figura 1 (SEQ ID No: 1).
5. El método de acuerdo con la reivindicación 1
en donde dicho gen ipt es de Agrobacterium.
6. Un método de acuerdo con la reivindicación 1
en donde dicho gen ipt incluye una secuencia de nucleótido mostrada
aquí en la Figura 2 (SEQ ID No: 2).
7. Un método de acuerdo con la reivindicación 1
en donde dicha construcción genética se introduce dentro de dicha
planta mediante transducción, transfección o transformación de
células de planta.
8. Un método de acuerdo con la reivindicación 7
en donde las células de planta incorporadas en la construcción
genética se seleccionan y luego se cultivan para regenerar plantas
transformadas.
9. Un vector capaz de manipular senectud en una
planta, dicho vector incluye un promotor de gen myb operativamente
ligado a un gen isopentenil transferasa (ipt).
10. Un vector de acuerdo con la reivindicación
9, incluye adicionalmente un terminador; dicho promotor, gen y
terminador están operablemente ligados.
11. Un vector de acuerdo con la reivindicación
10 en donde dicho promotor de gen myb es un promotor de gen
myb32.
12. Un vector de acuerdo con la reivindicación
11 en donde dicho promotor de gen myb es de Arabidopsis.
13. Un vector de acuerdo con la reivindicación 9
en donde dicho promotor de gen myb incluye una secuencia de
nucleótido mostrada aquí en la Figura 1 (SEQ ID No: 1).
14. Un vector de acuerdo con la reivindicación 9
en donde dicho gen ipt es de Agrobacterium.
15. Un vector de acuerdo con la reivindicación 9
en donde dicho gen ipt incluye una secuencia de nucleótido mostrada
aquí en la Figura 2 (SEQ ID No: 2)..
16. Una célula de planta transgénica, planta,
semilla de planta u otra parte de planta, con características de
senectud modificadas, dicha célula de planta, planta, semilla de
planta u otra parte de planta que incluye una construcción genética
incluye un promotor de gen myb operativamente ligado a un gen
isopentenil transferasa (ipt).
17. Una célula de planta transgénica, planta,
semilla de planta u otra parte de planta, de acuerdo con la
reivindicación 16 producida mediante un método de acuerdo con la
reivindicación 1.
18. Una célula de planta transgénica, planta,
semilla de planta u otra parte de planta, de acuerdo con la
reivindicación 16 que incluye un vector de acuerdo con la
reivindicación 9.
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