CN113832124B

CN113832124B - 一种蛋白质的相关生物材料在增强水稻白叶枯病抗性中的应用

Info

Publication number: CN113832124B
Application number: CN202111216379.6A
Authority: CN
Inventors: 武广珩; 傅仙玉; 张国栋; 张传海; 吕橄; 赵升云
Original assignee: Wuyi University
Current assignee: Wuyi University
Priority date: 2021-10-19
Filing date: 2021-10-19
Publication date: 2023-04-21
Anticipated expiration: 2041-10-19
Also published as: CN113832124A

Abstract

本发明涉及植物基因工程技术领域，具体涉及一种蛋白质的相关生物材料在增强水稻白叶枯病抗性中的应用。所述蛋白质如下1)或2)：1)SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；2)将SEQ ID NO.1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且由SEQ ID NO.1衍生的蛋白质；所述相关生物材料为如下任一所示：31)破坏所述蛋白质的基因的表达和/或降低所述蛋白质的含量的核酸分子；32)含有31)所述核酸分子的表达盒、重组载体或重组微生物。通过敲除或抑制该基因可实现水稻对病原菌抗性的提高和品种的改良，所以本发明基因和蛋白对农业生产具有重要意义。

Description

一种蛋白质的相关生物材料在增强水稻白叶枯病抗性中的应用

技术领域

本发明涉及植物基因工程技术领域，具体涉及一种蛋白质的相关生物材料在增强水稻白叶枯病抗性中的应用。

背景技术

植物为了保护自身免于各种病原菌的侵袭，逐渐进化形成了多层次的防御体系，即先天免疫系统，主要包含PAMP诱导的免疫反应PTI和效应因子诱导的免疫反应ETI。

PTI主要是利用宿主细胞膜上的正调控因子模式识别受体PRRs识别病原菌的PAMPs，进而激活下游的丝裂原激活蛋白激酶MAPKs的级联信号通路或钙依赖性蛋白激酶通路CDPKs，引发植物的抗病反应抵抗各种病原菌的侵入。拟南芥EDR1作为一个Raf样MAPKKK蛋白激酶，通过与蛋白激酶MKK4/MKK5直接相互作用，负调控MKK4/MKK5-MPK3/MPK6信号通路。edr1突变体表现出对丁香假单胞杆菌、白粉菌和卵菌的抗病表型；edr1突变体的抗性依赖于糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白LLG1、油菜素类固醇信号激酶BSK1和E3泛素连接酶KEG。LLG1作为一个共受体，与PAMP受体FLS2和EFR互作，调控免疫反应；与调控生长发育关键蛋白激酶FER结合，控制生长发育。BSK1属于胞质型类受体激酶第XII亚家族成员，与FLS2在同一复合体中，对于激活FLS2信号通路至关重要。KEG招募EDR1在反式高尔基体和早胞内体上定位。

EDR4(Enhanced Disease Resistance4)编码的蛋白包含一个Coiled-Coil结构域、四个LCRs结构域和一个Duf3133结构域。EDR4蛋白定位于质膜和内膜系统上，负调控对白粉病的抗性，同时该抗性依赖于水杨酸信号途径。EDR4通过与EDR1的相互作用，调控EDR1蛋白在白粉病菌的侵入位置的聚集。由于细胞运输相关网格蛋白重链蛋白亚基CHC2与EDR4在植物体内相互作用，且chc2突变体也影响EDR1蛋白在白粉病菌的侵入位置的聚集，推测EDR4可能作为衔接蛋白与网格蛋白形成复合体参与内吞作用调节EDR1的亚细胞定位来调控植物的抗病反应。网格蛋白介导的内吞作用是胞吞的一个主要途径，尽管CME的其它组分还有待发现，但CME接头蛋白以及其功能分析对我们重新认识CME在植物中作用提供了新的方向。例如，flg22、elf18和pep1触发的FLS2、EFR和PEPR1/2的囊泡运输均表现出依赖CME。最近的研究还发现，EDR4正调控拟南芥对丁香假单胞杆菌的抗性；该抗性依赖于互作蛋白RECEPTOR-LIKE KINASE 902和BSK1传递的信号通路，其中EDR4和CHC2调节RLK902在细胞内的积累与运输。目前，EDR1在水稻抗白叶枯病病原菌PXO61、PXO86和PXO99的功能已有报道。

水稻作为一种重要的粮食作物，白叶枯病是其最严重的细菌性病害，高产水稻品种易感程度高，很容易发生大量减产，因此，如何提高水稻的白叶枯病抗性是本发明要解决的技术问题。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明的第一个方面，提供一种蛋白质的相关生物材料在增强水稻白叶枯病抗性中的应用，所述蛋白质如下1)或2)：

1)SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

2)将SEQ ID NO.1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且由SEQ ID NO.1衍生的蛋白质；

所述相关生物材料为如下任一所示：

31)破坏所述蛋白质的基因的表达和/或降低所述蛋白质的含量的核酸分子；

32)含有31)所述核酸分子的表达盒、重组载体或重组微生物。

进一步的，1)所述基因如下任一所示：

A1)SEQ ID NO.2的第1740-4586位所示的核苷酸序列；

B2)编码SEQ ID NO.1所示蛋白质的核苷酸序列；

C3)在高严谨条件下可与SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列杂交且编码SEQ ID NO.1所示蛋白质的核苷酸序列；

D4)与A 1)或B 2)或C 3)限定的核苷酸序列具有90％以上同源性，且编码SEQ IDNO.1所示蛋白质的核苷酸序列。

上述高严谨条件可为用6×SSC，0.5％SDS的溶液，在65℃下杂交，然后用2×SSC，0.1％SDS和1×SSC，0.1％SDS各洗膜一次。

本发明的第二个方面，提供所述的相关生物材料在培育白叶枯病抗性增强的基因突变水稻中的应用。

本发明的第三个方面，提供一种构建白叶枯病抗性增强的基因突变水稻的方法，所述方法包括破坏目的水稻的所述蛋白质的基因的表达和/或降低所述蛋白质的含量，得到基因突变水稻。

进一步的，所述破坏目的水稻中所述蛋白质的基因的表达和/或降低所述蛋白质的含量的方法为通过对所述目的水稻中所述蛋白质的基因进行敲除或抑制来实现的。

更进一步的，所述破坏目的水稻中所述蛋白质的基因的表达和/或降低所述蛋白质的含量的方法为利用RNA干扰、CRISPR/Cas9技术或TALEN技术对目的水稻的所述蛋白质的基因敲除或抑制来实现的。

更进一步的，所述CRISPR/Cas9技术中的靶序列如SEQ ID NO.3所示。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

本发明首次通过CRISPR/Cas9的方法验证了水稻中一个与白叶枯病抗性相关的基因。该基因编码区总共有2751个核苷酸组成，两个外显子，序列如SEQ ID NO.2的第1740-1857位和第1954-4586位核苷酸所示。所述基因编码的蛋白共有916个氨基酸组成，序列如SEQ ID No.2所示，敲除或抑制该基因可实现水稻对病原菌抗性的提高和品种的改良，所以本发明基因和蛋白对农业生产具有重要意义。

附图说明

图1为LOC4329315 sgRNA的靶标序列位置。

图2为BGK03载体示意图。

图3为LOC4329315基因编辑位置示意图。

图4为LOC4329315的CRISPR/Cas9基因编辑水稻的基因编辑效果验证。

图5为接种PXO99的基因编辑突变体的病斑长度(A)和表型(B)。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施例对本发明进行详细说明，但不应理解为本发明的限制。如未特殊说明，下述实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1：白叶枯病抗性增强的基因突变水稻的构建

(一)LOC4329315用于CRISPR/Cas9的sgRNA靶点选择与表达载体的构建

通过NCBI的BLAST比对，发现拟南芥抗病基因AtEDR4(AT5G05190)的水稻同源基因OsEDR4(LOC4329315)。利用http://www.ricedata.cn/index.htm下载LOC4329315的基因序列(SEQ ID NO.2的第1740-4586位所示序列，该基因有两个外显子，分别如由SEQ ID NO.2的第1740-1857位和第1954-4586位所示，编码SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质)，根据在线软件http://crispor.tefor.net/搜寻20bp NGG靶标序列(5’-ATTTCTGTCTACCAGTGCGG-3’，如SEQ ID NO.3所示)，并通过BLAST检测序列的特异性，靶标序列位置如图1所示。

选择合适的sg序列(5’-GTTTCTGTCTACCAGTGCGG-3’，如SEQ ID NO.8所示)后，使用百格基因试剂盒进行载体构建(载体为BGK03，示意图如图2所示)。将获得的重组载体抽提质粒，转入农杆菌EHA105中。

(二)水稻日本晴的遗传转化

利用水稻粳稻品种日本晴的成熟胚诱导愈伤组织，以潮霉素作为抗性筛选剂，通过共培养、抗性筛选、预分化、分化和生根等过程获得20株基因编辑T0代植株。之后使用中科瑞泰基因组DNA提取试剂盒提取水稻T0代叶片的基因组DNA，基因编辑植株可利用靶序列的上下游引物SG-OsEDR4-F/R进行PCR扩增和测序，在Lasergene 7.0软件中序列比对和分析编辑情况。SG-OsEDR4-F/R引物(表1)是在SG序列前300bp左右的位置设一个上游引物F，序列后150bp左右设计一个下游引物R，全长460bp。

表1基因编辑的测序引物序列

测序结果表明，20个不同T0代转基因植株中的OsEDR4第一外显子中SG序列位置存在4个独立的纯合突变的转基因株系，其中T0-5、7、16均发生一个碱基T的插入，T0-15发生一个碱基A的插入(图3所示)。根据以上的测序结果，基因编辑主要是在SG序列发生了A或者T的单碱基插入，进而造成蛋白翻译的提前终止。

实施例2：白叶枯病抗性增强的基因突变水稻的分子标记验证

(一)PCR-RE引物的设计

将以上的T0代种植收种后，为了便于在T1代进行OsEDR4的基因编辑遗传效果的检测，我们进行了PCR-RE引物的设计。利用dCAPS(wustl.edu)设计网站，我们设计出OsEDR4-EDIT-F/R的dCAPS引物(表2)用于后续的基因编辑检测。

表2基因编辑的检测引物序列

(二)基因编辑水稻的分子鉴定

T1代基因编辑植株在苗期幼嫩叶片，液氮研磨均匀成细粉后进行DNA提取。使用中科瑞泰基因组DNA提取试剂盒提取水稻T1代叶片的基因组DNA，利用引物OsEDR4-EDIT-F/R进行PCR扩增和相应限制性内切酶的酶切，4％琼脂糖凝胶电泳分析结果。结果如图4所示，四个基因编辑T1代纯合水稻植株与野生型水稻日本晴对照均可以扩增出T0代所测基因编辑位置前后164bp(前25bp和后139bp)的片段(图中PCR字母位置标示)；经HhaI酶切扩增片段(图中HhaI字母位置标示)，发现野生型日本晴NB扩增出的片段因为没有发生基因编辑保留了HhaI酶切位点，可以被切除25bp，从而出现139bp片段；四个基因编辑T1代纯合水稻植株因为插入了A或者T的单碱基，所以HhaI酶切位点消失，无法被切割仍然保持164bp。综上所述，T1代OsEDR4基因编辑纯合植株的基因由于基因插入造成表达丧失，失去自身功能。

实施例3：白叶枯病抗性增强的基因突变水稻抗病表型分析

(一)病原菌的培养和接种

供试的白叶枯病菌菌种PXO99在-80℃冰箱保藏，用前取出在土豆培养基(1L：土豆300g，蛋白胨5g，十二水合磷酸氢二钠2g，硝酸钙0.5g，蔗糖15g，琼脂粉20g)中活化备用，用无菌水稀释至5×10⁹细胞/毫升。配制的菌液在2小时内采用剪叶法接种处于T1代分蘖期植株和日本晴对照植株。接种14天后，统计病叶的病斑长度，以此来衡量发病情况。

(二)编辑水稻抗病表型分析

与对照日本晴相比，接种PXO99的基因编辑突变体T1-5、T1-7、T1-16和T1-15表现出更短的病斑长度，对PXO99(P6)感病性降低(图5)。结果表明，OsEDR4功能缺失突变体增强了水稻对白叶枯病病原菌PXO99的抗病性。

由于实施例3中OsEDR4基因编辑出2种突变类型的4个单独的突变体接种白叶枯病菌后表型类似，进一步证明突变体表现出白叶枯病抗性增强的表型是由于LOC4329315基因翻译提前终止进而造成基因功能缺失产生的。

尽管已描述了本发明的优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例作出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。

显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。

序列表

<110> 武夷学院

<120> 一种蛋白质的相关生物材料在增强水稻白叶枯病抗性中的应用

<160> 7

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 916

<212> PRT

<213> 水稻

<400> 1

Met Ser Ala Glu Ala His Lys Leu Arg Phe Val Arg Cys Pro Lys Cys

1 5 10 15

Leu Gln Leu Leu Val Glu Tyr Pro Ser Ile Ser Val Tyr Gln Cys Gly

20 25 30

Gly Cys Gly Ala Val Leu Arg Ala Lys Asn Arg Phe Met Ser Val Thr

35 40 45

Gln Thr Gly Ser Lys Pro Asp Glu His Asn Asn Ile Ser Ser Ser Leu

50 55 60

Asn Gly Ser Ser Gln Asp Asn Glu Ser Ala Cys Ser Asp Gly Gln Lys

65 70 75 80

Ile Asp Ser Ser Ser Ala Gln Pro Asn Glu Asp Ala Val Glu Glu Asn

85 90 95

Ile Pro Ser Thr Thr Lys Asp Ala Lys Ser Cys Glu Ala Val Asn Gln

100 105 110

Glu Gln Asn Thr Thr Thr Val Gln Ser Val Thr Pro Thr Glu Asp Glu

115 120 125

Asn Lys Glu Lys Cys Pro Thr Thr Asp Ala Asp Ile Arg Asp Thr Gly

130 135 140

Cys Met Val Lys Val Pro His Asp Met Cys Thr Gly Ala Asp Ser Ser

145 150 155 160

Pro Met Leu Ile Asp Lys Val Glu Asn Ile Gly Thr Ser Glu Asn Thr

165 170 175

Asp Leu Gly Lys Gly Tyr Ser Tyr Asp Cys Val Ser Asp Gly Asn Ala

180 185 190

Gly Ser Asp Val Ala Ala Val His Ile Ala Gly Glu Glu Pro Gly Ala

195 200 205

Ile Ser Asn His Ser Met Lys Gly Glu Val Asp Ser Val Thr Asp Gln

210 215 220

Ile Phe Ser Val Ser Asn Lys Asn Val Asn Cys Lys Glu Leu Asp Glu

225 230 235 240

Arg Thr Asn Leu Cys Lys Glu Thr Glu Ala Lys Ser Cys Asn Glu Leu

245 250 255

Ile Gln Met Glu Glu Arg Ser Gln Pro Asn Glu Gly Phe His Val Glu

260 265 270

Ser His Glu Asp Leu Ile Glu Glu Leu Glu Arg Ser Leu Ser Phe Ser

275 280 285

Asp Asp Glu Glu Ser Leu Leu Asp Ala Thr Gly Asn Asn Glu Leu Asn

290 295 300

Glu Ala Leu Gln Phe Gln Ile Gly Ser Arg Arg Phe Ser Pro Gly Ser

305 310 315 320

Lys Met Asn Asp Ala Ser Arg Ser Asp Pro His Gly Arg Leu Ile Glu

325 330 335

Glu Leu Glu Arg Ser Phe Ser Asp Ala Glu Glu Ala Ala Glu Gln His

340 345 350

Val Val Val Val Asp Lys Val Ile Thr Glu Arg Asp Phe Gly Asn Glu

355 360 365

His Gly Lys Val Pro Thr Ser Leu Val Ala Glu Ser Gly His Pro Cys

370 375 380

Glu Gly Asn Ile Ser Ser Tyr Asp Asp Gly His Gln Lys Ser Gly Gln

385 390 395 400

Ser Phe Gln Gln Asn Glu Leu Thr Ala Asp Glu Thr Glu Glu Lys Glu

405 410 415

His Gly Leu Leu Glu Asn Asp Ser Lys Ile Asn Cys Ile His Gly Asn

420 425 430

Glu His Ala Met Val Ala Asp Asn Asp Ile Ala Glu Ile His Ser Glu

435 440 445

His Asp Lys Asp Pro Gln Leu Leu Asp Gly Glu Ser Ala Lys Leu Cys

450 455 460

Glu Gly Thr Ile Ser Ser Phe Asp Gly His Leu Lys Ser Gly Gln Cys

465 470 475 480

Phe Gln Glu Asp Glu Pro Thr Ala Asp Gly Asn Lys Gln Lys Glu Glu

485 490 495

Ser His Met Gly Asn Asn Asn Val Thr Asp Cys Ala His Glu Asp Asn

500 505 510

Ala Thr Val Val Gly Phe Ser Ser Leu Ser Asn Asp Gly Ile His Cys

515 520 525

Lys Ser Pro Ile Phe Asn Glu Lys Glu Glu Glu Arg Ser Asp Lys Tyr

530 535 540

Arg Ala Asn Gln Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Leu Asp Ser Glu Asp Phe

545 550 555 560

Met Ser Ile Gln Asn Phe Ile Glu Ser Gln Met Asp Gly Thr Ser Ser

565 570 575

Ser Leu Ser Ser Gly Ser Pro Asn Gln Gly Asn Leu Ser Leu Lys Ser

580 585 590

Ser Thr Lys Phe Lys Phe Asp Arg Leu Glu Arg Leu Lys Lys Ile Asp

595 600 605

Glu Leu Arg Asp Gln Leu Asn Arg Leu Cys Ser Lys Lys Arg Leu Glu

610 615 620

Asn Arg Tyr Arg Met Lys Gly Leu Glu Tyr Gln Pro Gln Leu Ser Ser

625 630 635 640

Tyr Tyr Val Asp Gln His Ser Gln Asn Val Asp Ala Asp Ser Ile Gln

645 650 655

Ser Ser Ser Thr Leu Gly Ser Tyr Tyr Trp Asn Gly Lys Gln Pro Ser

660 665 670

Tyr Pro Pro Arg Asn Gln Phe Ser Pro Pro His Ser Cys Thr His Cys

675 680 685

His Phe Gly His Val Glu Thr His Met Pro His Asn Tyr Gly Ala Trp

690 695 700

Asp Glu Phe Asn Ser Tyr Tyr Gln Pro Ser Tyr Ala Gly Ser Ser Ile

705 710 715 720

Ile Asp His Asp Ser Leu Asn Ser Ser Tyr Lys Glu Gln Lys Arg Val

725 730 735

Val Arg Lys His Ile Leu Arg Pro Val Ser Gly Ala Ser Pro Phe Thr

740 745 750

Val Cys Asn Ser Cys Phe Asn Leu Val Gln Met Pro Ser Asp Ile Tyr

755 760 765

Ile Ser Lys Thr Lys Met Gly Lys Met Gln Cys Gly Gln Cys Ser Lys

770 775 780

Val Leu Val Leu Ser Phe Pro Ala Ile His His Ala Cys Ala Asn Ser

785 790 795 800

Ser Lys Glu Val Ala Ser Lys Ser Asn Lys His Lys Gly Ser Ile Val

805 810 815

Val Lys Pro Glu Asp Ala Ala Ser His Phe Ala Glu Ser Phe Thr Arg

820 825 830

Asp Pro Val Ser Met Asn Glu Glu Tyr Gly Ala Ser Phe Thr Arg Ser

835 840 845

Phe Ser Thr Gln Ala Gly Ser Ala Leu Ala Ala Ser Gln Ser Gly Lys

850 855 860

Asn Val Ser Asp Ser Thr Leu His Arg Leu Met Gly Tyr Asp Ser Ala

865 870 875 880

Ser Gln Leu Leu His Asp Leu Arg His Ser Lys Val Tyr Asp Asp Gly

885 890 895

Tyr Glu Ser Phe Glu Ser Met Val Pro Val Ser Ser Arg Val Ser Arg

900 905 910

Arg Lys Asn Thr

915

<210> 2

<211> 4892

<212> DNA

<213> 水稻

<400> 2

gtttactcta ttcagcacac tttccgtagc caacgcaagg cacttcttga ggcactgcat 60

cgcgcccggc cgcccgcggg tctcgactag cccagccgcc gcgccgccct ccccgtcgcc 120

gccgccgccg ccgccgtcgc aggtcgcctt ccctgtctcc gtccccacca gccgcagccc 180

ctccccgtcc acccgccgcg ctgcgacggc cggactgccg ccctcccggt gcccgcaggc 240

ttagtgcggc ggccgccggc agccgccgcc acaaccggct accgcccgct ccattggccc 300

aatttagaag gcctgcgaaa tctcggtgag ctctctatta ggtttgtctt ggttaagaac 360

acagtggagt actctagcca agagcccgtg cgttgcaacg ggataaattg tgtttctagc 420

ttattaactc aagtaagcac atacttagtt taagtagtac ttttatgatt tttcttattt 480

aacaagtatg gtgattttga aatttggaga gaaccagcag tgaaacgggg tggagggtgg 540

tgtaacagta tagattgtgg gggttaaatt tcagtggtag agttggtatg gtagaacggg 600

cgccaccaat attgatattt taagtagtat agatatgtga cacattattg agcaatagtt 660

tattcatatt tactgagggg gatttcttct cccatattgg tgaggatgat atagcaaaga 720

attccatggc tgtgagaaaa catagagcag ggtagtacta gccctgtaat atctatttat 780

aagataacag cgagatctgc cccctttgtg gcattgagcc agagacggct catcacctac 840

tcatggactg tgccttcgca agacaagttt ggagctccat ctggagcaag ctcggccttc 900

acatgccttc gctttctctt tatccggggc tattgctaga ttggtgggag gcttgcagga 960

aggagctagt taaggagcaa agacgtaatt tcgatggcct tttcatctac acagcctggg 1020

gcatctggct gcagagaaat ggaaggatct tcaatggcat ttacaacatg gttgctcagg 1080

tcgtcgagtc catcattgct ttgtgcaaag agttcgatga agccccttag ttcctagatg 1140

agccttatac gccttctcct actcgttgca gttcattttc ttaagattgg ggtttccccg 1200

cccccccccc ccccccttgt tttaacctcg caagctgtga gcgtgcctac aggttgcgtg 1260

gctggcttgt aaaacaacct ttaattctgc tcctccttat ttgcaattgg cagagctcct 1320

gccgtcttcc cctcaaaaaa aaaaaaatct atttataaga tcctttgttt ttggaccatt 1380

tattttgttc cattttcaaa ttatgaactt accttgctga ttttagacat tttgtgattt 1440

aacaaatttt gtacacacat attggattta cggtataact gaaatctggt aagcgaagta 1500

ggcacatcac tgctagaagt ctacccttgc ttcaaatcat atttctaatg tgtacaacac 1560

agggccgctg ttcctctagc taaaagtctt ggtaattgtt catacatggc ctgattttgg 1620

atcataactc gtgtgatatt ttttatcaac agggtgttca taaatcttga tagatggtag 1680

tatcatttga ctgaagtacc tctagcctct ccagttaatt tattgcgagg ggcaagatca 1740

tgtcggcgga agcacataag cttcggttcg ttagatgccc aaaatgcctc cagcttcttg 1800

tggaatatcc atccatttct gtctaccagt gcggtggctg tggtgctgtt cttagaggta 1860

taaatctcat aatttctgcc attcgctgat tcagtaatat ttacatcttc gcataaaaca 1920

gttttgattt atattaagtc tataatgatg cagcaaagaa ccgattcatg tctgtcacac 1980

aaactggatc caaacctgat gaacacaaca atatttcaag tagcttgaat gggtcctctc 2040

aggacaacga atcagcttgc tcagatggac agaaaattga ctcttctagt gctcagccta 2100

atgaagacgc tgtggaggaa aacattccct ccactaccaa ggatgcaaaa tcatgtgaag 2160

cagtaaatca agaacaaaat acgaccactg tacagagcgt aacccctacc gaggatgaga 2220

ataaggagaa atgtcctaca actgatgcag atatccgaga cactggttgt atggtcaaag 2280

tgccacatga tatgtgcact ggagctgatt ctagtcctat gttgattgac aaagtagaga 2340

atattggcac aagtgaaaat acagacttgg gaaaaggtta cagttacgat tgtgtatctg 2400

atggaaatgc tggtagtgat gttgctgctg tccacattgc aggtgaggaa ccaggagcaa 2460

tttctaatca tagtatgaag ggggaggtag atagtgtgac tgaccaaata ttttctgtta 2520

gcaataaaaa tgtgaactgc aaagagttag atgaaagaac caatctgtgt aaggaaactg 2580

aggccaagtc ttgtaatgaa ttgattcaaa tggaggagag gtcacagccg aatgaaggtt 2640

ttcatgttga atctcatgaa gatctgattg aagaattgga aagatctcta tcatttagtg 2700

atgatgaaga gagcttgttg gatgcaactg gcaacaatga acttaatgaa gctctacagt 2760

ttcaaattgg tagcaggaga ttttctccag gtagcaaaat gaatgatgct tctcgaagtg 2820

atcctcatgg tcgactgatt gaagaactgg agagatcttt cagtgatgca gaagaagcag 2880

cggagcagca tgttgtggtt gtggataagg tcattacaga gagagatttt ggtaatgagc 2940

atggcaaggt tccaacttcc ctggttgctg aaagtggaca tccatgtgaa ggaaacatct 3000

catcatatga tgatgggcat cagaaatctg gtcagagttt tcaacagaat gaactaacag 3060

ctgatgaaac tgaagaaaag gagcatggtc tcttggaaaa tgacagcaag atcaactgta 3120

ttcatgggaa tgagcatgcc atggttgcag acaatgacat tgcagagatt catagtgagc 3180

atgataagga tccacagttg ctggatggtg aaagtgcaaa attatgtgaa ggaaccattt 3240

cttcatttga tggacatctc aaatctggac aatgttttca agaagatgag ccaactgctg 3300

atggaaataa acaaaaggag gagagccata tgggcaataa caatgtgacc gactgtgcac 3360

atgaggataa tgcaactgtt gttggtttct caagcttgtc aaatgatggg attcactgca 3420

aatcacctat atttaatgag aaagaagaag agagatcaga taaatacaga gctaatcaac 3480

tttatcaggg actttcactt gattctgagg acttcatgtc aatccaaaac tttatcgagt 3540

cacaaatgga tgggacatca agttctctct caagtgggtc tcccaatcaa ggaaatttgt 3600

ctctgaaatc atcaaccaaa ttcaagtttg atcgacttga gcgcctcaag aagatcgatg 3660

agctaagaga tcagctaaat aggctttgta gcaaaaagcg cttggagaat aggtatcgga 3720

tgaaaggcct tgagtaccag ccacaactga gtagctacta cgttgaccaa catagtcaaa 3780

atgttgatgc agattccatc caaagttcct ctactctagg gtcctattat tggaatggaa 3840

agcaaccaag ttaccctcca cgaaaccagt tctcgccacc tcattcatgc acacactgcc 3900

attttgggca tgtggaaacg cacatgccac acaattatgg tgcttgggat gagttcaatt 3960

cgtattacca gccttcatat gctggaagct caatcattga tcatgactca ctcaattcaa 4020

gctacaagga gcagaagcga gtggtgcgaa agcatatttt gcggcctgtg tcaggtgctt 4080

caccatttac agtatgcaat agctgtttca atttagttca aatgccatca gatatctaca 4140

tatccaaaac aaagatgggc aaaatgcagt gcggccagtg ctccaaggtt cttgtattat 4200

catttcctgc catacaccac gcgtgtgcaa atagcagtaa ggaggtagcc tcaaaatcaa 4260

acaagcacaa aggcagcata gtcgttaagc ctgaggatgc tgcttctcat tttgctgagt 4320

cctttactcg agatcctgtc agtatgaatg aagaatatgg agcatctttc acaagaagct 4380

tctctactca agctggatca gcccttgctg cctcacaaag tggcaagaat gtttcagatt 4440

cgacacttca tagactcatg ggatatgatt cagcaagcca gctactacat gacttacgtc 4500

acagcaaggt ttatgatgac ggatacgaga gctttgagtc aatggtgcca gtatccagca 4560

gagtatccag aagaaagaac acttgaggtt ttgcagtgct ccttgtaagc aggattataa 4620

ggcaaacagt tttgcggatc cgttgttaag ttcgtttttg aaaacatgcg gacatcttgc 4680

ctgcaaatag tttcacaggt tttcccatgg aaatctgaat ccatttgatg ttattgtttg 4740

tcagattctt tggtcatctt ggtatatgtg ctgtatattc ttttgctgta aatttgttaa 4800

tattcaagat tattataaca ttttgtgctg ttagtatctg atgtttgtgt ggaatgtggc 4860

tcaaactaaa taaatgaggt gatattcggg ta 4892

<210> 3

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 3

atttctgtct accagtgcgg 20

<210> 4

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 4

atgtcggcgg aagcacataa 20

<210> 5

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 5

tgttttcctc cacagcgtgc 20

<210> 6

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 6

atccatccat ttctgtctac cagcg 25

<210> 7

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 7

catgaatcgg ttctttgctg c 21

<210> 8

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 8

gtttctgtct accagtgcgg 20

Claims

1.一种蛋白质的相关生物材料在增强水稻白叶枯病抗性中的应用，其特征在于，所述蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；

所述相关生物材料为如下任一所示：

32)含有31)所述核酸分子的表达盒、重组载体或重组微生物。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，31)所述基因如下任一所示：

A1)SEQ ID NO.2的第1740-4586位所示的核苷酸序列；

B2)编码SEQ ID NO.1所示蛋白质的核苷酸序列；

C3)在高严谨条件下可与SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列杂交且编码SEQID NO.1所示蛋白质的核苷酸序列；

D4)与A1)或B 2)或C 3)限定的核苷酸序列具有90％以上同源性，且编码SEQ ID NO.1所示蛋白质的核苷酸序列。

3.权利要求1中所述的相关生物材料在培育白叶枯病抗性增强的基因突变水稻中的应用。

4.一种构建白叶枯病抗性增强的基因突变水稻的方法，其特征在于，所述方法包括破坏目的水稻中权利要求1中所述蛋白质的基因的表达和/或降低权利要求1中所述蛋白质的含量，得到基因突变水稻。

5.根据权利要求4所述的一种构建白叶枯病抗性增强的基因突变水稻的方法，其特征在于，所述破坏目的水稻的权利要求1中所述蛋白质的基因的表达和/或降低权利要求1中所述蛋白质的含量的方法为通过对所述目的水稻中权利要求1中所述蛋白质的基因进行敲除或抑制来实现的。

6.根据权利要求5所述的一种构建白叶枯病抗性增强的基因突变水稻的方法，其特征在于，所述破坏目的水稻的权利要求1中所述蛋白质的基因的表达和/或降低权利要求1中所述蛋白质的含量的方法为利用RNA干扰、CRISPR/Cas9技术或TALEN技术对目的水稻的权利要求1所述蛋白质的基因敲除或抑制来实现的。

7.根据权利要求6所述的一种构建白叶枯病抗性增强的基因突变水稻的方法，其特征在于，所述CRISPR/Cas9技术中的靶序列如SEQ ID NO.3所示。