ES2308824T3 - Eliminacion de interferencias de los inmunoanalisis por medio de sustancias derivadas de las regiones marco que abarcan anticuerpos. - Google Patents
Eliminacion de interferencias de los inmunoanalisis por medio de sustancias derivadas de las regiones marco que abarcan anticuerpos. Download PDFInfo
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Abstract
Se presentan supresores péptidos derivados de anticuerpos para su uso en inmunoensayos. Los péptidos derivados de una región estructural del dominio variable de un anticuerpo para la detección, inmunoterapia o para escintigrafías se utilizan en un procedimiento para detectar sustancias en una muestra eliminando interferencias en la muestra. Un procedimiento inmunológico para detectar sustancias en una muestra se caracteriza en que las sustancias de supresión, que contienen secuencias de péptidos se derivan de una región estructural del dominio variable de un anticuerpo, para la detección, inmunoterapia o para escintigrafías. También se incluye una reivindicación independiente para una sustancia de supresión, que contiene al menos una sustancia que contiene una secuencia de péptido derivada de una región estructural de un dominio variable de un anticuerpo para la detección.
Description
Eliminación de interferencias de los
inmunoanálisis por medio de sustancias derivadas de las regiones
marco que abarcan anticuerpos.
La presente invención se refiere a un método
inmunológico para la detección de un analito en una muestra, en
particular de un marcador tumoral, que se caracteriza porque para la
eliminación de interferencias se añaden al lote o equipo de
análisis unas sustancias que contienen una secuencia peptídica
derivada de las regiones del dominio variable de anticuerpos
detectores o bien de anticuerpos empleados para la inmunoterapia o
la inmunoescintigrafía. Además la invención se refiere al uso de
dichas sustancias para la eliminación de interferencias en los
inmunoanálisis, a un medio eliminador de interferencias y a un
método para la eliminación de interferencias de los inmunoanálisis
por medio de las sustancias mencionadas.
En el diagnóstico han destacado en los últimos
años los métodos de detección inmunológicos. Mediante estos métodos
se pueden detectar analitos en las muestras biológicas. Entre estos
analitos se encuentran, por ejemplo, medicamentos, hormonas,
proteínas, agentes infecciosos, microorganismos y anticuerpos contra
estos analitos. Especialmente en el diagnóstico de las enfermedades
cancerígenas se detectan por vía inmunológica y según la
enfermedad, los antígenos tumorales o marcadores tumorales como, por
ejemplo, CEA (antígeno carcinoembrionario), PSA (antígeno
específico de la próstata) o CA125.
En todas las reacciones de detección
inmunológicas se llega a una reacción de enlace específica entre la
sustancia que debe ser detectada (analito) y al menos un elemento
de fijación o enlace específico, que reacciona de forma específica
con el analito o se enlaza de forma específica. El analito y el
elemento de enlace específico forman un par de enlace específico,
en general un complejo entre un antígeno y un anticuerpo o un
fragmento de anticuerpo. Por lo que pueden reaccionar más de un
analito o más de un elemento de enlace en cada reacción. La
detección de estas reacciones de enlace específicas se puede
efectuar de forma diferente. En general, un elemento de enlace
marca una reacción específica de enlace. Las marcas convencionales
son cromógenos, fluoróforos, sustancias apropiadas para la quimio-
o electroquimioluminiscencia, radioisótopos, haptenos, marcadores
enzimáticos o sustancias que pueden formar un par de enlace
específico como, por ejemplo, la biotina/estreptavidina.
Un problema de peso en los inmunoanálisis es que
entre los elementos de enlace específicos del inmunoanálisis y de
los componentes de la muestra pueden producirse interacciones no
deseadas y reacciones de enlace no específicas. Este tipo de
interacciones producen en general una elevación de la señal de base,
una desviación más fuerte de la señal y por tanto una sensibilidad
y especificidad reducidas de la prueba pertinente. Según el tipo de
interferencias debidas a las interacciones no específicas se puede
llegar a resultados de la prueba, falsos positivos o falsos
negativos.
A ello se llega cuando en los sueros humanos
aparecen factores perturbadores, que especialmente interaccionan
con los reactivos de inmunoglobulina empleados frecuentemente como
elemento de enlace de un inmunoanálisis, y pueden influir en ellos.
Especialmente en los inmunoanálisis en los cuales se emplean dos
anticuerpos monoclonales, se puede llegar a claras mediciones
erróneas con graves consecuencias para el tratamiento de un paciente
(Kinders y Haas (1990) Eur. J. Cancer 26(5),
647-648; Boscato y Stuart (1988) Clin. Chem.
34(1), 27-33).
Muchos de estos factores perturbadores se
incluyen en el concepto de HAMA (anticuerpos humanos anti ratón).
Se trata de anticuerpos que existen en la muestra investigada y que
se dirigen contra los anticuerpos específicos, que se emplean como
reactivos. La denominación perturbación HAMA se emplea
frecuentemente para las perturbaciones debidas a anticuerpos, que
no se forman por el contacto con la inmunoglobulina de ratón o son
estrictamente específicos de la inmunoglobulina de ratón. Mediante
esta perturbación HAMA se puede llegar, por ejemplo, en el caso de
un ensayo sándwich típico, a pesar de la ausencia de analito, a una
reticulación no específica del anticuerpo fijado o enlazado a la
fase sólida con el cuerpo de detección marcado. Como consecuencia de
ello se forma una señal falsa positiva.
Este problema se incrementa puesto que en los
últimos tiempos en el diagnóstico y la terapia de los tumores se
emplea con mayor frecuencia la inmunoescintigrafía. Para ello se
inyectan anticuerpos monoclonales marcados radioactivos en la
corriente sanguínea del paciente. Los anticuerpos marcados se
enlazan de forma específica al correspondiente tejido tumoral.
Mediante una detección final con radioactividad, por ejemplo, con
una cámara de escintilación se puede localizar con exactitud el
tumor. Asimismo frecuentemente se emplean terapias
inmunoestimulantes, también con anticuerpos monoclonales, que deben
actuar de forma que en el organismo del paciente se estimula la
formación de anticuerpos específicos tumorales para combatir el
tumor.
Mediante el empleo de este método aparecen, tal
como se ha mencionado antes, valores HAMA muy específicos en los
sueros de los pacientes (ver, por ejemplo, Kath y cols. (1996)
Onkologe 2, 287-296; Holz y cols. (1996) Clin.
Immunther. 5(3), 214-222; White y cols.
(1997) Europ. J. of Cancer 33(5), 40; Baum y cols. (1993)
Hybridoma 12(5), 583-589; Donnerstag y cols.
(1995) Int. J. Oncology 6, 853-858; Livingston y
cols., (1995) Vaccine Research 4(2), 87-94;
Juweid y cols. (1996) Cancer 78(1),
157-168). Estos pueden causar también interferencias
en los ensayos, en los cuales se emplean anticuerpos híbridos. Un
ejemplo importante es el anticuerpo 17-1 A
autorizado en Alemania en la terapia tumoral de carcinomas de colon
(cáncer intestinal), que lleva la denominación de venta Panorex
(Kath y cols. 1996, supra; Holz y cols (1996),
supra). Además la lista de los anticuerpos para terapia que
se hallan en los estudios clínicos comprende una multitud de
reactivos que contienen anticuerpos, cuya autorización es siempre
probable. En la inmunoescintigrafía se tienen en cuenta anticuerpos
contra la CEA, CA125 y CA72.4 en la aplicación clínica y aquí se
emplean cada vez más.
En la tecnología actual se emplean cada vez más
inmunoglobulinas no específicas o sus fragmentos para la eliminación
de estos factores perturbadores, que proceden de la misma especie
animal, de la cual se obtienen también los anticuerpos empleados
como reactivos en el ensayo. Los factores perturbadores ofrecen por
tanto lugares de enlace casi alternativos en los que se ubican, de
manera que la reacción inmunológica específica entre el analito y
los anticuerpos no se modifica. En la
EP-A-0 174026 se ha descrito la
adición de suero de ratas o de ratón o ascitis para la eliminación
de reacciones no específicas en los inmunoanálisis, en las cuales
se emplean anticuerpos monoclonales de ratón como reactivos. Otra
posibilidad para evitar dichas interferencias es la adición de
fragmentos Fab monoclonales purificados o bien moléculas de IgG de
ratón, que desarrollan una buena actividad eliminatoria de
interferencias según la US 4.914.040, especialmente en forma
polimerizada.
Para evitar reacciones de falsos positivos para
la detección de CEA se recomienda en la WO 91/16627 la adición de
una mezcla de moléculas de IgG de distintas clases (IgG1, IgG2a,
IgG2b). La disposición de distintos preparados de inmunoglobulina
en cantidades conocidas y de calidad similar requiere en general un
gran gasto experimental y se refiere principalmente a las regiones
constantes del anticuerpo.
La disminución del potencial perturbador en una
parte constante del anticuerpo puede realizarse mediante el empleo
de fragmentos Fab en lugar de inmunoglobulina intacta, puesto que
las interferencias Fc que predominan debido a la parte Fc ausente
aquí no entran en acción. El anticuerpo humanizado representa una
optimización adicional, su región Fv está formada por una parte
humana y una de ratón, de manera que la tendencia a las
interferencias se ve reducida también en la parte variable (Kuroki y
cols. (1995) J. of Immunolog. Methods 180, 81-91).
El uso de anticuerpos híbridos, en los cuales la parte variable
procede del ratón y las regiones constantes del hombre, la
tendencia a las interferencias de los ensayos diagnósticos puede
disminuir.
En la tecnología actual se ha descrito
(EP-A-0 296 544) además, la adición
de una proteína y en particular de anticuerpos, que están
emparentados desde el punto de vista inmunológico a los anticuerpos
empleados como reactivos de detección, para evitar valores elevados
o reducidos de forma poco específica en la detección de un analito.
Debido a la similitud de los anticuerpos empleados respecto a los
anticuerpos de reactivos empleados, estos son captados de forma
selectiva por esta sustancia que interfiere. En la
EP-A-0 296 544 se recomienda
desdoblar las estructuras que enlazan con los antígenos de los
anticuerpos de reactivos empleados, bloquear dichas estructuras
mediante una estructura de antígeno complementaria, modificar la
estructura que se enlaza con el antígeno del anticuerpo de reactivo
empleado mediante mutación o bien emplear el anticuerpo
antidiotípico de la misma subclase.
Sin embargo, con el método actual no es posible
eliminar las interferencias sin un gran gasto experimental.
El cometido consistía en desarrollar un método
mejorado para la detección de un analito y en particular de
marcadores tumorales, con el cual se puedan evitar las
interferencias debidas a sustancias inespecíficas como las
interferencias HAMA.
La tarea se resuelve mediante un método nuevo
inmunológico para la detección de un analito en una muestra, que se
caracteriza porque la eliminación de interferencias se añaden al
equipo de análisis unas sustancias, que contienen una secuencia
peptídica derivada de la regiones del dominio variable del
anticuerpo detector o del anticuerpo empleado para la inmunoterapia
o inmunoescintigrafía.
Especialmente se trata de sustancias que
contienen las características de secuencia y/o de estructura, las
cuales se presentan en las zonas Fv de al menos un anticuerpo
detector específico empleado como reactivo en un inmunoanálisis o
bien corresponden a las secuencias de un anticuerpo de
terapia/inmunoescintigrafía, que evitan casi por completo las
interferencias debidas a HAMA. Un efecto eliminador se observa
cuando las sustancias empleadas contienen características de
estructura o de secuencia, las cuales aparecen en el Marco 1 o el
Marco 2 de la cadena pesada o del anticuerpo específico.
Para aclarar el tema se representan en la figura
1 las secuencias de las cadenas pesadas de la región variable de
los diferentes anticuerpos. Queda claro que en la región marco 1
(posición de aminoácido 1 hasta 30) bajo los anticuerpos tumorales
representados (OC125, B72.3, CD4 y PSA-M66) existe
una homología elevada y en gran parte domina ciertamente una
identidad. Lo mismo ocurre para la región marco 3 (posición 69 hasta
100 de aminoácidos). Aquí también domina un elevado grado de
homología en las secuencias de las cadenas pesadas de la región
variable de cada anticuerpo tumoral. Por el contrario domina una
comparativamente pequeña homología entre las secuencias de
anticuerpos tumorales y las secuencias de las regiones marco 1 y 3
del anticuerpo antitumoral MAK33 y de un anticuerpo TSH (TSH =
hormona estimulante tiroidea). El anticuerpo B72.3 se ha descrito en
Xiang y cols. 1990, Mol. Immunol. 27, S.809-817 así
como en J. Immunology (1993), 151, 6559-6568; el
anticuerpo MAK33 en Buckel y cols. 1987 Gene 51,
13-19; el anticuerpo TSH-A8 en la
EP-A-0 378 175; el anticuerpo OC125
en Tumor Biology (1996), 17, 196-219 y
325-331 así como en Hybridoma (1994) 13(5),
359-365).
En la tecnología actual se ha reconocido que el
parentesco inmunológico de los anticuerpos se atribuye a las
homologías de las secuencia en la región variable del anticuerpo.
Especialmente en las interferencias HAMA en las muestras de
pacientes, las cuales presentan valores HAMA muy elevados y
específicos debido a las terapias inmunoestimulantes y de
inmunoescintigrafía, la solución conforme a la invención aventaja a
la tecnología actual ya que estos tratamientos con anticuerpos
monoclonales en las muestras a investigan conducen a interferencias
HAMA similares, especiales, no idiotípicas en los distintos ensayos
del marcador tumoral.
Las regiones marco de un anticuerpo se
encuentran en una parte variable (Fv) de la molécula, pero no
participan en el enlace del antígeno. Son esenciales para el
plegamiento característico de la parte variable del anticuerpo y
soportan el andamiaje y la estructura del lugar de enlace del
antígeno (ver por ejemplo Ritt y cols. (1989) Immunology, Coger
Medical Publishing, London, New York, capítulo 7, reconocimiento del
antígeno).
Para el método conforme a la invención se
emplean preferiblemente anticuerpos como sustancia eliminadora de
interferencias. Resulta especialmente apropiado el empleo de
anticuerpos y de sus fragmentos, cuya secuencia de aminoácidos
equivale a la región marco de la secuencia de anticuerpos detectores
empleados como reactivos o bien de los anticuerpos empleados para
la terapia o inmunoescintigrafía.
Se prefieren especialmente como sustancias
empleadas para la eliminación de interferencias los anticuerpos
monoclonales B72.3 (J. Immunology (1993), 151,
6559-6568) y OC125 (Tumor Biology (1996), 17,
196-219 y 325-331; Hybridoma (1994)
13(5), 359-365) (ver también
informe-ISOBM: Tumor Biology 1996;
17:196-219). Para la eliminación de interferencias
se pueden emplear también anticuerpos que poseen propiedades de
enlace o características estructurales equivalentes a los
anticuerpos B72.3 y OC125.
Resulta básica para la acción eliminatoria de
interferencias del anticuerpo empleado la secuencia de aminoácidos
y la estructura de plegamiento en la zona de la región marco 1 ó 3.
Debería corresponder a las secuencias mencionadas en la figura 1 o
al menos presentar una homología notable. La homología es
suficientemente grande cuando al emplear el anticuerpo eliminador
de interferencias todavía se puede constatar un efecto eliminador
de las interferencias. En principio todos los anticuerpos son
adecuados para la eliminación de interferencias, los que poseen una
secuencia de aminoácidos indicada en SEQ ID NO 1 hasta 8 en las
regiones marco 1 y/o 3. El origen y la producción de dichos
anticuerpos puede ser cualquiera. Los anticuerpos monoclonales
pueden proceder de material de ascitis o ser fabricados en un
birreactor según métodos conocidos por el técnico. Los anticuerpos
eliminadores de interferencias no pueden ni deben provenir del mismo
organismo que el anticuerpo detector.
Las perturbaciones HAMA pueden reducirse
notablemente según la invención en el método para la detección de
marcadores tumorales. La eliminación de interferencias de los
diferentes ensayos con marcadores tumorales por medio de un
elemento eliminador es realmente sorprendente, ya que los antígenos
tumorales son distintos en sus secuencias de aminoácidos y en su
estructura. Por lo que es posible eliminar las interferencias de
los distintos ensayos de marcadores tumorales con un reactivo
homólogo en cuanto a su secuencia. El objeto de la invención es por
lo tanto un método inmunológico para detectar un marcador tumoral,
en el que se eliminen las interferencias de manera que al equipo de
análisis se añada al menos una sustancia -preferiblemente un
anticuerpo- que contenga una secuencia peptídica derivada de las
regiones marco del dominio variable del anticuerpo detector o del
anticuerpo empleado para la inmunoterapia o la
inmunoescintigrafía.
Entre los ensayos preferidos para eliminar
interferencias se encuentran la detección de los marcadores
tumorales CA125, CA15-3, CA19-9,
CEA, PSA (en forma libre y compleja) y AFP. Según la invención los
métodos para la detección de analitos que no están asociados a las
enfermedades tumorales, como, por ejemplo, los marcadores en
sistemas cardiovasculares (como la troponina o mioglobina) eliminan
muy bien las interferencias.
Bajo el concepto de anticuerpo en entiende
anticuerpo monoclonal y policlonal. Además se entiende también
tanto el anticuerpo completo como todos los fragmentos del mismo,
como F(ab')_{2}, Fab' o Fab. La fabricación de anticuerpos
se lleva a cabo según el método habitual del técnico. Se incluyen
también aquellos anticuerpos, que se han fabricado por modificación
de otros anticuerpos siguiendo medidas tecnológicas de tipo
genético. Es esencial en todas las sustancias empleadas para la
eliminación de interferencias que contengan una secuencia peptídica
derivada de las regiones marco del dominio Fv del anticuerpo
detector.
Por el término anticuerpo detector se entienden
aquellas inmunoglobulinas y sus conjugados que se emplean como
reactivos detectores en el ensayo. En el caso de un ensayo sándwich
clásico pertenecen a los anticuerpos detectores, el anticuerpo
ligado a la fase sólida que se enlaza de forma específica al
analito, y en anticuerpo de detección, que por un lado se enlaza de
forma específica al analito y por otro lado se encarga del marcaje.
Para la detección del marcaje se necesitan otros anticuerpos (por
ejemplo, en el marcaje de digoxigenina, que se detecta con un
anticuerpo anti-digoxigenina que marca el
enzima).
Según la invención se pueden emplear como
sustancias eliminadoras de interferencias uno o varios fragmentos
de las regiones marco- en particular de las regiones marco 1, y 3
del dominio Fv de la cadena pesada de inmunoglobulina. Se prefieren
estos trozos de péptidos que pueden ser sintetizados por la
digestión enzimática de los anticuerpos intactos o por vía química
según los métodos conocidos por el técnico.
Como sustancias para la eliminación de
interferencias del método inmunológico son también adecuados los
péptidos que contienen secuencias peptídicas, que proceden de las
regiones marco 1 y 3 de MAKs OC125, B72,3, PSA o CD4.
De la región marco 1:
| QVQLQQSGPEASVKMSCKASGYIFT | (SEQ ID NO 1 de MAK OC125) |
| QVQLQQSDAEASVKISCKASGYTFT | (SEQ ID NO 2 de MAK B72.3) |
| QVQLQQSGAEASVKISCKATGYTFT | (SEQ ID NO 3 de MAK <PSA>M66) |
| QVHLQQSGPEPSVKMSCKASGYTFT | (SEQ ID NO 4 de MAK <CD4>) |
\vskip1.000000\baselineskip
De la región marco 3
| RATLTVDKSSSTAYMQLNSLT | (SEQ ID NO 5 de MAK OC125) |
| KATLTADKSSSTAYMQLNSLT | (SEQ ID NO 6 de MAK B72.3) |
| RATFTADSSSNTAFMEFGSLT | (SEQ ID NO 7 de MAK <PSA>M66) |
| KAILTADKSSSTAYMEFSSLT | (SEQ ID NO 8 de MAK <CD4>) |
\vskip1.000000\baselineskip
Asimismo adecuadas para la eliminación de
interferencias son las secuencias parciales de los péptidos
mencionados antes con una longitud de 6 aminoácidos como mínimo.
Las secuencias peptídicas no deben presentarse en forma aislada.
Pueden estar flanqueadas por otras secuencias de aminoácidos, que no
proceden de la parte variable del anticuerpo. También es posible
que los péptidos estén flanqueados por restos lipídicos o de
hidratos de carbono. Sin embargo es un requisito para todas las
modificaciones que se mantenga la acción eliminatoria de
interferencias y las modificaciones no produzcan ninguna
perturbación en el inmunoanálisis.
Asimismo se piensa que los péptidos empleados
para la eliminación de interferencias llevan la correspondiente
secuencia incluso repetida varias veces. También se pueden emplear
como polihaptenos. Esto significa que los péptidos conforme a la
invención se acoplan varias veces sobre un soporte para la
producción de un polihapteno. También se pueden acoplar distintos
péptidos conforme a la invención sobre un soporte. Como soporte
puede servir una macromolécula que toma parte en la reacción
inmunológica, por ejemplo, una proteína grande como la albúmina de
suero bovino, partículas de látex, poliestireno, oro o dextrano. La
fabricación de polihaptenos se puede realizar de forma análoga al
método descrito en WO 96/03652.
En las sustancias conforme a la invención para
la eliminación de interferencias es preferible que se pueda evitar
un tratamiento previo de la muestra muy costosa como la
precipitación PEG, la cromatografía de proteínas A/G o el
tratamiento térmico para eliminar las interferencias HAMA.
Los formatos de ensayo y los ensayos podrán ser
cualesquiera. El técnico piensa en procedimientos homogéneos y
heterogéneos. Se prefieren los formatos heterogéneos, en los cuales
uno de los elementos de enlace específicos se acopla directa o
indirectamente a una fase sólida. Por ejemplo, se conoce la
detección clásica del antígeno en formato sándwich que se prefiere
especialmente en los ensayos de marcadores tumorales. En un formato
sándwich el analito (aquí un antígeno) se une en forma de sándwich
entre un anticuerpo marcado y uno ligado a la fase sólida. La
detección del marcaje se realiza tras la separación de la fase
sólida de la fase líquida en una de las fases.
Otro ejemplo para la realización del ensayo
heterogéneo es la detección indirecta de un
analito-anticuerpo a través de su enlace a un
antígeno enlazado a la fase sólida. La detección se realiza aquí
mediante el enlace de otro anticuerpo marcado al
analito-anticuerpo.
Otro formato que puede ser eliminado de
interferencias es la realización competitiva del ensayo, en la cual
se forma un complejo de dos elementos de enlace específicos o bien
anticuerpos, de manera que el elemento de enlace que no está
acoplado directamente a la fase sólida, está marcado. El analito,
que según el ensayo es un antígeno o un anticuerpo, desplaza según
la concentración el elemento de enlace marcado fuera del complejo.
Tras la separación de la fase sólida de la fase líquida se comprueba
el marcaje en una de las fases. Las sustancias eliminadoras de la
interferencia conforme a la invención bloquean también aquí el
enlace no específico de las sustancias de las muestras eliminadas
al elemento de enlace/anticuerpo empleado como reactivo detector y
evitan la aparición de resultados falsos.
Las concentraciones en un equipo de muestras en
las cuales se emplean los anticuerpos empleados para la eliminación
de interferencias se encuentran limitadas hacia arriba por la
solubilidad del anticuerpo en un medio acuoso. Se han verificado
como apropiadas las concentraciones mínimas de unos 10 \mug/ml
hasta 40 \mug/ml y como límite superior unos 2 mg/ml,
preferiblemente 250 \mug/ml de anticuerpo.
Además de las sustancias conforme a la invención
se pueden tomar otras medidas si es preciso. Por ejemplo, la
adición de MAK33 (Boehringer Mnnheim, GmbH, Alemania,
Ident-Nr.1200941) o anticuerpos de acción similar,
polyMAK33 (IgG de ratón polimérico, Boehringer Mannheim GmbH,
Alemania, Ident-Nr. 1368 338), RSA, Sales,
detergentes.
Además de los ensayos en húmedo mencionados, en
los cuales los reactivos de análisis se presentan en fase líquida,
se pueden emplear también todos los formatos de ensayos en seco que
sean adecuados para la detección inmunológica. En estos ensayos en
seco o tiras reactivas, como por ejemplo las descritas en
EP-A-0 186 799, se aplican los
componentes de ensayo sobre un soporte. El medio eliminador de las
interferencias conforme a la invención se aplica antes de la
reacción inmunológica sobre la tira de ensayo seca.
El medio eliminador de la interferencia conforme
a la invención se debería añadir a la muestra preferiblemente antes
o al mismo tiempo que la adición del elemento de enlace empleado
como reactivo detector, para facilitar una reacción a ser posible
prematura de las sustancias no específicas perturbadoras con el
medio eliminador de la interferencia.
Como muestras para la realización del
inmunoanálisis donde se va a eliminar la interferencia se podrán
emplear todos los líquidos biológicos conocidos por el técnico. Se
prefieren como muestras los líquidos corporales como la sangre
entera, el suero sanguíneo, el plasma sanguíneo, la orina o la
saliva.
Otro objetivo de la invención en un medio
eliminador de interferencias que contiene al menos una sustancia,
que contiene una secuencia peptídica derivada de las regiones marco
del dominio variable del anticuerpo detector o del anticuerpo
empleado para la inmunoterapia o la inmunoescintigrafía. Como otros
componentes del medio eliminador de la interferencia son posibles
detergentes, sales y soluciones tampón conocidas por el técnico. El
reactivo eliminador de la interferencia puede presentarse en forma
líquida, acuosa o liofilizada.
Asimismo un objetivo de la invención es un
método para la eliminación de interferencias de los inmunoanálisis,
que se caracteriza porque para la eliminación de interferencias en
particular de efectos HAMA, se añaden al equipo de análisis
sustancias que contienen una secuencia peptídica derivada de las
regiones marco del dominio variable del anticuerpo detector o del
anticuerpo empleado para la inmunoterapia o la
inmunoescintigrafía.
Los ejemplos siguientes aclararán la
invención.
La realización del ensayo CA125 se lleva a cabo
según el modo de actuación indicado en las instrucciones del
paquete para el Enzymun-Test®CA 125 II de Boehringer
Mannheim GmbH Alemania (Ident. Nr. 1289004). El principio del
ensayo es una Elisa-sandwich de 1 etapa basado en la
tecnología de la estreptavidina. Se emplean dos anticuerpos
monoclonales específicos CA125 que reconocen de forma específica los
distintos epítopos en el CA125. Un anticuerpo se marca con biotina
y el otro con peroxidasa. La muestra se coloca en un tubito de
plástico revestido de estreptavidina junto con una solución de
incubación que contiene anticuerpos Anti-CA125
biotinilados y peroxidasa (POD). El CA125 existente en la muestra
se enlaza al anticuerpo biotinilado. El anticuerpo marcado con POD
se enlaza de nuevo al CA125 unido al anticuerpo biotinilado.
La detección en el complejo sándwich enlazado a
la fase sólida se realiza tras una etapa de lavado mediante una
reacción del indicador. Para ello se añade una solución de cromógeno
de sustrato que contiene
ABTS®(2,2'-Azino-di-[3-etil-benzotiazolinsulfónico(6)]-sal
de diazonio) y H_{2}O_{2}. Debido a la actividad enzimática de
la peroxidasa, se desarrolla un colorante que depende de la
cantidad de anticuerpo marcado con POD enlazado, que se detecta por
vía fotométrica.
A los lotes de ensayo se añaden simultáneamente
a la adición del anticuerpo biotinilado 40 \mug/ml de distintos
reactivos eliminadores de interferencias así como el reactivo
eliminador de interferencias conforme a la invención para
establecer una comparación.
Como reactivos eliminadores de interferencias se
emplean la solución conforme a la invención con ayuda del ejemplo
MAK B72.3 (IgG intacto), un reactivo eliminador de interferencias
HAMA de la empresa Trina (Maus-IgG), un reactivo
eliminador de interferencias HAMA de la empresa Scantibodies (HBR,
IgM antihumano monoclonal), un reactivo eliminador de
interferencias MAK33 de Boehringer Mannheim GmbH Deutschland
(Ident-Nr.: 1 200 941), un reactivo eliminador de
interferencias pMAK33 de Boehringer Mannheim GmbH Alemania
(polimerizado, Ident-Nr.1 096 478) así como tres
anticuerpos del marcador tumoral contra PSA, AFP y CEA.
Como muestras se emplean muestras de suero de
las pacientes con carcinoma de ovario y una inmunoescintigrafía
realizada así como paneles de HAMA vendibles así como un suero
normal (NS) de un paciente sano. La tabla 1 muestra los valores de
medición del ensayo CA125 al que se han añadido diferentes reactivos
eliminadores de interferencias. Una unidad POD (1U) equivale a la
actividad enzimática que oxida 1 \mumol de ABTS en un minuto a
25ºC y pH 5.
El ensayo CA 125 muestra sin reactivo eliminador
de interferencias unos valores de medición positivos, de forma que
se trata de valores falsos positivos. Se puede demostrar que con
ayuda del anticuerpo monoclonal B72.3, se consigue la mejor
eliminación de interferencias HAMA, es decir, el valor más bajo. Por
lo que el medio eliminador de interferencias conforme a la
invención aventaja claramente al de la tecnología actual. De los
anticuerpos marcadores tumorales se ha comprobado que el anticuerpo
PSA es el más adecuado para la eliminación de interferencias.
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La prueba para CA125 se realiza conforme al
ejemplo 1. Como reactivos eliminadores de interferencias se emplean
en comparación con el reactivo eliminador de interferencias conforme
a la invención (aquí: MAK B72.3), MAK33 polimerizado y no
polimerizado como en el ejemplo 1, el anticuerpo
<CD4>M3-10 así como el anticuerpo Panorex. La
adición de reactivos eliminadores de interferencias se realiza con
una concentración de 40 \mug/ml.
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\vskip1.000000\baselineskip
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(Tabla pasa a página
siguiente)
Se ha demostrado que con el anticuerpo
<CD4> homólogo de secuencia se logra una eliminación de
interferencias comparable a la del anticuerpo B72.3, que presenta
un efecto eliminador de interferencias muy inferior al anticuerpo
Panorex de menor homología en secuencia (solamente una reducción
mínima de la señal). Además es realmente evidente el efecto o la
acción claramente peor de los reactivos eliminadores de
interferencias de la tecnología actual.
\vskip1.000000\baselineskip
Para tener un segundo criterio además del ensayo
CA125 para la eliminación de interferencias, se ha elegido la
prueba CEA-Enzymun® de Boehringer Mannheim
GmbH(Ident.-Nr.1448021) como matriz. La realización se lleva
a cabo según el modo descrito en las instrucciones del envase.
Análogamente al ensayo CA125, se trata de una
Elisa-sandwich de una sola etapa, que también se
basa en la tecnología de la biotina-estreptavidina.
Se emplean dos anticuerpos monoclonales específicos de CEA, que
reconocen diferentes epítopos en el CEA. Uno de los anticuerpos se
marca con biotina, el otro con peroxidasa. La muestra se coloca en
un tubo de plástico revestido de estreptavidina junto con una
solución de incubación que contiene anticuerpo
anti-CEA biotinilado y anticuerpo
anti-CEA marcado con peroxidasa (POD). Durante la
incubación, el anticuerpo biotinilado se enlaza a la fase sólida. La
CEA existente en la muestra se enlaza al anticuerpo biotinilado. El
anticuerpo marcado con POD se enlaza de nuevo al CEA enlazado del
anticuerpo biotinilado.
La detección de los complejos sándwich unidos a
la fase sólida se realiza como en el ejemplo 1 y 2 mediante la
reacción del indicador descrita.
Como reactivos eliminadores de interferencias se
eligen los de los ejemplos 1 y 2, así como se emplea el anticuerpo
OC125. La adición se realiza con una concentración de 10
\mug/ml.
Los resultados con los reactivos eliminadores de
interferencias conforme a la invención MAK B72.3 y OC125 son algo
comparables. Ambos anticuerpos son homólogos en secuencia en algunos
aminoácidos en las regiones marco 1 y 3. La tecnología actual
aporta claramente resultados peores en la eliminación de
interferencias.
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En comparación se visualizan diferentes ensayos
del marcador tumoral, que por un lado se basan en la realización
del ensayo Enzymun® (ver ejemplos 1 hasta 3) y por otro lado según
el método Elecsys® de Boehringer Mannheim GmbH. La realización de
la prueba Elecsys® para todas las detecciones se basa en el
principio del Sándwich de solo una etapa con dos anticuerpos, que
reconocen diferentes epítopos en el analito (marcadores tumorales),
análogamente al ejemplo 3. La fase sólida está formada por perlas de
látex revestidas de estreptavidina, magnéticas, a las que se enlaza
un anticuerpo biotinilado, específico para el marcador tumoral. La
detección del marcador tumoral enlazado se realiza tras la
separación de la fase sólida de la líquida mediante la medición de
la electroquimioluminiscencia, que procede de un segundo anticuerpo
específico del marcador tumoral, marcado con un complejo de
rutenio.
Aquí se investiga la acción eliminadora de
interferencias de la solución conforme a la invención en diferentes
ensayos Enzymun® y Elecsys®:
- CEA-Enzymun® (Ident. Nr. 1448021); CEAElecsys® (Ident. Nr. 1731629; CA125Enzymun® (Ident. Nr. 1289004); CA125Elecsys® (Ident .Nr. 1776223); AFPElecsys® (Ident. Nr. 1731327; PSAtot. Enzymun® (Ident. Nr. 1555332); PSAtot. Elecsys® (Ident. Nr. 1731262); PSA free Enzymun® (Ident. Nr. 1776444); PSA free Elecsys® (Ident. Nr. 1820800).
El reactivo eliminador de interferencias MAK
B72.3 se añade en una concentración de 40 \mug/ml.
En las muestras se trata de sueros HAMA de
inmunoterapia o escintigrafía.
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(Tabla pasa a página
siguiente)
En CA 125 ambos ensayos muestran una clara
disminución de la interferencia HAMA mediante la adición de
B72.3.
Asimismo de agrupa el potencial perturbador en
AFP, PSA y disminuye libremente. Para PSA libre sirve en general
que la tendencia a la perturbación del ensayo Elecsys® sea a través
del ensayo Enzymun. También se puede demostrar una eliminación de
interferencias independiente del sistema de ensayos.
\vskip1.000000\baselineskip
Para demostrar la acción eliminadora de
interferencias incluso en otros parámetros que el marcador tumoral
se elige el marcador cardiovascular Troponina T (Ident. -Nr.: 1 731
351) y la mioglobina(Ident. -Nr.: 1 820 788).
El principio del ensayo se basa en el ensayo
Elecsys® aclarado en el ejemplo 4. Se emplean dos anticuerpos
monoclonales contra la troponina T o la mioglobina, que reconocen
diferentes epítopos en el analito (troponina T o mioglobina). Uno
de los MAK está marcado con Biotina, el otro con un complejo de
rutenio, y se mide su señal de electroquimioluminiscencia.
Se añaden 100 \mug/ml de reactivo eliminador
de interferencias MAK B72.3 a los lotes de ensayo.
\vskip1.000000\baselineskip
También aquí la adición de B72.3 aporta señales
claramente inferiores y eleva la medición de falsos positivos. El
uso de reactivos eliminadores de interferencias conforme a la
invención se visualiza por tanto a través del marcador tumoral.
(1) DATOS GENERALES:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- SOLICITANTE:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE: Boehringer Mannheim GmbH
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- CALLE: Sandhofer Str.116
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- LUGAR: Mannheim
\vskip0.500000\baselineskip
- (E)
- PAÍS: Alemania
\vskip0.500000\baselineskip
- (F)
- CÓDIGO POSTAL: 68305
\vskip0.500000\baselineskip
- (G)
- TELÉFONO: 06217593215
\vskip0.500000\baselineskip
- (H)
- TELEFAX: 06217594457
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- DEFINICIÓN DE LA INVENCIÓN: Eliminación de interferencias de los inmunoanálisis mediante sustancias que proceden de las regiones marco de los anticuerpos
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- NUMERO DE SECUENCIAS: 14
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- EDICIÓN LEGIBLE POR ORDENADOR
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- SOPORTE DE DATOS: Floppy Disk
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- ORDENADOR: IBM PC compatible
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- SISTEMA DE FUNCIONAMIENTO: PC-DOS/MS-DOS
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- SOFTWARE: PatentIn Release nr. 1.0 Versión #1.30 (EPA)
\vskip0.800000\baselineskip
- (v)
- DATOS DE LA SOLICITUD ACTUAL: NÚMERO: DE 19828466.7
\vskip1.000000\baselineskip
(2) DATOS RESPECTO A SEQ ID NO: 1
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 25 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: Aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- FORMA DE RAMIFICACIÓN: RAMA ÚNICA
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: Péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) DATOS RESPECTO A SEQ ID NO: 2
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 25 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: Aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- FORMA DE RAMIFICACIÓN: RAMA ÚNICA
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: Péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 2
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) DATOS RESPECTO A SEQ ID NO: 3
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 25 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: Aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- FORMA DE RAMIFICACIÓN: RAMA ÚNICA
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: Péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 3
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) DATOS RESPECTO A SEQ ID NO: 4
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 25 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: Aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- FORMA DE RAMIFICACIÓN: RAMA ÚNICA
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: Péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 4
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) DATOS RESPECTO A SEQ ID NO: 5
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: Aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- FORMA DE RAMIFICACIÓN: RAMA ÚNICA
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: Péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 5
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) DATOS RESPECTO A SEQ ID NO: 6
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: Aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- FORMA DE RAMIFICACIÓN: RAMA ÚNICA
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: Péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 6
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) DATOS RESPECTO A SEQ ID NO: 7
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: Aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- FORMA DE RAMIFICACIÓN: RAMA ÚNICA
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: Péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 7
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) DATOS RESPECTO A SEQ ID NO: 8
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: Aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- FORMA DE RAMIFICACIÓN: RAMA ÚNICA
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: Péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 8
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) DATOS RESPECTO A SEQ ID NO: 9
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 114 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: Aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- FORMA DE RAMIFICACIÓN: rama única
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: Péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- Denominación: OC125
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 9
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) DATOS RESPECTO A SEQ ID NO: 10
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 114 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: Aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- FORMA DE RAMIFICACIÓN: rama única
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: Péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- Denominación: B72,3
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:10
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) DATOS RESPECTO A SEQ ID NO: 11
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 119 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: Aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- FORMA DE RAMIFICACIÓN: rama única
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: Péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- Denominación: CD4
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 11
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) DATOS RESPECTO A SEQ ID NO: 12
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 117 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: Aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- FORMA DE RAMIFICACIÓN: rama única
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: Péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- Denominación: PSA-M66
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 12
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) DATOS RESPECTO A SEQ ID NO: 13
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 123 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: Aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- FORMA DE RAMIFICACIÓN: rama única
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: Péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- Denominación: MAK33
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 13
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) DATOS RESPECTO A SEQ ID NO: 14
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 112 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: Aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- FORMA DE RAMIFICACIÓN: rama única
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TIPO DE MOLÉCULA: Péptido
\vskip0.800000\baselineskip
- Denominación: TSH A8
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 14
\vskip1.000000\baselineskip
Claims (6)
1. Método inmunológico para la detección de un
analito en una muestra, que se caracteriza porque las
sustancias que contienen una secuencia peptídica conforme a SEQ ID
NO 1-8 o secuencias parciales de la misma que tienen
una longitud de al menos 6 aminoácidos, se añaden a la mezcla de
prueba para reducir interferencias.
2. Método conforme a la reivindicación 1, que se
caracteriza porque se trata de un ensayo de marcadores
tumorales.
3. Método conforme a la reivindicación 1, que se
caracteriza porque las sustancias utilizadas para reducir
interferencias son anticuerpos o fragmentos de los mismos.
4. Método conforme a la reivindicación 1 ó 2,
que se caracteriza porque las sustancias utilizadas para
reducir interferencias son péptidos.
5. Uso de sustancias que contienen una secuencia
peptídica conforme a la SEQ ID NO 1-8 o secuencias
parciales de la misma que tienen una longitud de al menos 6
aminoácidos, para reducir interferencias en los inmunoanálisis.
6. Método para reducir interferencias en los
inmunoanálisis, que se caracteriza porque las sustancias que
contienen una secuencia peptídica conforme a SEQ ID NO
1-8 o secuencias parciales de la misma que tienen
una longitud de al menos 6 aminoácidos se añaden a la mezcla de
ensayo para reducir interferencias.
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|---|---|---|---|
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| DE59914768D1 (de) | 2008-07-10 |
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