ES2307870T3 - Composicion bactericida, bacteriostatica y fingicida que comprende dos o mas especies vivas de trichoderma. - Google Patents
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Abstract
Composición bactericida, bacteriostática y fungicida, caracterizada porque comprende dos o más especies vivas de Trichoderma seleccionadas entre Trichoderma harzianum, viridae, polysporum, longibratum, koningii y variaciones de estas, obtenidas en laboratorio, sobre avena micronizada como medio sólido de cultivo, identificadas como T 22, Tr 115, Tr 116, KRL -AG 2 (Rifai), incluyendo holoformas como Hypocrea y Podostroma, donde la cepa T. longibratum se transformaba por medio de la exposición a radiación antes de ponerse en contacto con otras especies de Trichoderma.
Description
Composición bactericida, bacteriostática y
fungicida que comprende dos o más especies vivas de
Trichoderma.
La presente invención describe una composición
bactericida, bacteriostática y fungicida, en polvo, basada en la
coexistencia, la cohabitación y la repulsión mutua de dos o más
especies vivas de Trichoderma, y su procedimiento de
preparación.
La composición de la presente invención permite
una acción fungicida y bactericida sobre la mayoría de los
fitopatógenos de importancia agrícola a nivel foliar, radicular,
vascular y/o frutal. Además, este producto es soluble en cualquier
tipo de agua, usándolo para el tratamiento curativo y/o preventivo
en semillas, plantas, plantas ornamentales y/o árboles frutales,
frutos y tierra.
Las especies de Trichoderma fueron
descubiertas a finales de los 40 y, desde entonces, su potencial se
ha explorado como un antagonista fúngico de hongos fitopatógenos.
En la actualidad, se conocen más de 400 especies de
Trichoderma, que son de fácil aislamiento pero de difícil
crecimiento.
La actividad antagonista para espacio y
nutrientes que hace frente a un hongo fitopatógeno, incluyendo el
enfrentamiento de especies de Trichoderma; que es la razón
por la que no existen mezclas de dos o más especies de
Trichoderma vivas, está ampliamente documentada en centros de
investigación tanto de Europa como de los EE.UU. de A.
El desarrollo de Trichoderma, hasta
ahora, ha sido lento debido a la imposibilidad de encontrar una
técnica que permita su cultivo masivo y debido al hecho de que solo
puede existir una especie de Trichoderma por cultivo.
Actualmente, el modo de obtener especies de
Trichoderma en forma de esporas es por medio de cultivo
fermentativo en biorreactores, liofilización subsiguiente y
filtración de la materia obtenida en un tamiz que solo deja pasar a
su través las esporas. Otro modo es inocular harina de trigo fina
con una especie de Trichoderma y a continuación diluirla
usando tierra diatomácea y/o una matriz de arcilla. Estos dos
métodos son de baja productividad y no permiten, debido a las
características antagonistas de las especies de Trichoderma,
la producción de dos o más especies conjuntas, y, así, no hay
posibilidad de obtener enzimas líticas debido a que estas se
producen solo en presencia de otro hongo.
Las especies de Trichoderma ejercen una
violenta actividad antagonista, frente a otro hongo, incluidos los
de la misma especie, a través de los siguientes mecanismos:
- A.
- Liberación de enzimas volátiles que desnaturalizan y digieren la estructura del hongo con el que están compitiendo.
- B.
- Anclaje rápido al sustrato, permitiendo que las estructuras reproductoras (esporas) del hongo con el que están compitiendo se hagan no factibles.
- C.
- Establecimiento de simbiosis con una planta o estructura vegetal viva a la que pueden microparasitar, liberando sustancias beneficiosas al huésped, habitualmente microtrazas de ácido giberélico y/o estreptomicina cuando existe un ligero ataque bacteriano en el huésped.
Las preparaciones madre que existen actualmente
en el mercado internacional y nacional se obtienen por medio de
crecimiento vegetativo de especies de Trichoderma en fase
sólida, y/o agar de dextrosa-patatas. Después de
eso, se realiza una inoculación en germen de trigo, paja, tierra
diatomácea y/o una matriz de arcilla. El producto formulado solo
contiene esporas inactivas de especies de Trichoderma en un
excipiente inerte, habitualmente tierra diatomácea.
Debido a las características del modo en el que
se obtiene, debe mantenerse en un conducto frío hasta su uso, de
otro modo se desnaturaliza y puede entrar rápidamente en una fase de
descomposición.
El producto obtenido usando este método solo
puede usarse en una fase preventiva, debido a que las esporas de
una especie de Trichoderma deben desarrollarse para empezar a
llevar a cabo su acción antagonista sobre los patógenos,
generalmente uno, a controlar.
El producto formulado, que está constituido por
una especie de Trichoderma, tiene un espectro de acción muy
reducido sobre complejos de hongos fitopatógenos. Y, por otra parte,
si la población presente de fitopatógenos es muy alta, el producto
no es capaz de controlarlos debido a que la agresividad del
fitopatógeno impide el desarrollo de esporas de Trichoderma
que son el principio activo del producto.
La actividad de la especie de Trichoderma
contenida en la formulación de producto como un principio activo,
cuando se está aplicando en el campo, está restringida tanto en su
fase metabólica como en su crecimiento vegetativo por factores
ambientales, tales como el pH del agua, los fungicidas químicos, los
vientos que la deshidraten, etc., también por la localización de
los fitopatógenos que han de controlarse, teniendo una acción nula
sobre los patógenos radiculares y medulares, y una acción errática,
principalmente debido a las condiciones ambientales, sobre
fitopatógenos de los frutos y el follaje.
El producto así formulado no tiene acción sobre
patologías vasculares y puede ser algo eficaz solo si los troncos
se perforan para inocular la preparación en la forma de una bala y/o
inyección.
En los últimos años se han realizado intentos de
facilitar y masificar su uso. Existen en el mercado mundial
preparaciones que contienen una especie de Trichoderma en la
forma de una bala, para enfermedades de tipo vascular. Aquellas
deben aplicarse a través de la perforación del tronco del árbol, con
el consiguiente estrés del vegetal; esto disemina la enfermedad
cuando se retira la broca usada para perforar el tronco y actúa como
catéter mientras se inoculan territorios sanos durante su proceso
de penetración y retirada subsiguiente.
El uso de esta formulación está restringido a
especies arbóreas y/o leñosas y el método no es aplicable a
cultivos menores como labranza de frutos y hortalizas, por ejemplo,
remolacha, lechuga, fresa, etc.
También existen composiciones basadas en esporas
de una sola especie de Trichoderma en solución acuosa, que
se deterioran rápidamente, en un espacio de horas, incluso en latas
cerradas herméticamente, debido a la rápida proliferación de
bacterias, dándolas un olor penetrante, característico de la
putrefacción. El mismo olor está presente en preparaciones sólidas
cuya cadena se ha roto.
Las composiciones de Trichoderma
disponibles en el mercado comprenden una especie de
Trichoderma, habitualmente la Harzianum, en la forma
de una espora, no existiendo mezclas de dos o más especies de
Trichoderma viviendo conjuntamente de naturaleza fungicida y
fungistática, debido a su naturaleza antagonista ya descrita.
En el estado actual de la técnica, no existen
antecedentes que muestren su uso potencial en medicina, humana y
veterinaria, para el control de bacterias y/u hongos
oportunistas.
El documento AU 8479301 describe la producción y
el uso de enzimas inducidas a partir de Trichoderma y
bacterias para el control de plagas de plantas y para
procedimientos industriales. Este documento difiere de la presente
invención debido a que se usan bacterias para controlar
bacterias.
El documento NZ 335107 describe celulasa aislada
procedente de un cultivo de Trichoderma Longibratum, con un
peso molecular estimado de 105 kD. En este documento, que difiere de
la presente invención, se obtienen Trichoderma Longibratum y
otras especies mediante un proceso fermentativo y las isoenzimas
están contenidas en el medio de cultivo y deben purificarse, a cada
especie le corresponde un fermentador individual debido a que no
cohabitan conjuntamente.
En el documento US 2028500 se describe un
procedimiento para la preparación de nuevos medios de cultivo para
plantas, para su multiplicación del biocontrol fúngico. En este
documento, que difiere de la presente invención, solo podría
conseguirse que vivieran conjuntamente dos o más variantes de la
misma cepa en residuos fermentativos.
En el documento CA 2304107 se describe un
procedimiento para proporcionar capacidad de impregnación a la
madera por medio de un pretratamiento con hongos. En este
documento, que difiere de la presente invención, se identifica un
método para proteger a árboles transgénicos del ataque de hongos, no
de insectos y bacterias.
En el documento WO 0183706 se describe un
plaguicida microbiológico, activo contra patógenos fúngicos de
plantas, y su procedimiento de preparación. En este documento, que
difiere de la presente invención, el producto está basado en
esporas, micelio o una mezcla con características fungicidas, usando
solo Trichoderma Harzanium YC 459 (registro 0772BP). WO
01/84935 muestra el uso de mas de una especie de Trichoderma
en una composición para incrementar su actividad biocida.
\vskip1.000000\baselineskip
En la presente invención se describen
composiciones que incluyen una combinación de dos o más especies de
Trichoderma genéticamente modificadas, mediante métodos
radiactivos, u otra forma, cepas originales de especies y/o
subespecies de Trichoderma procedentes de cualquier origen,
naturales o de laboratorio, vivas y activas en cualquiera de sus
fases de crecimiento vegetativo, esporas micelares fraccionadas o en
diferentes proporciones.
Más específicamente, en la presente invención se
describen composiciones que comprenden una combinación de tres
especies de Trichoderma, natural o genéticamente modificadas
mediante métodos radiactivos u otra forma, cepas originales de las
especies, y/o subespecies de Trichoderma, de cualquier
origen, naturales o de laboratorio, vivas y activas en cualquiera
de sus fases de crecimiento vegetativo, esporas micelares
fraccionadas o en diferentes proporciones.
En la presente invención se identifican y
seleccionan las cepas de Trichoderma que muestran
separadamente un poder antagonista frente a cierto número de hongos
fitopatógenos de interés económico. La identificación de cepas
originales se realizó de acuerdo con los criterios que definen cada
especie, contenidos en: "Moulds, their isolation, cultivation and
identification", 1981, Dr. David Malloch, University of
Toronto''. De acuerdo con este criterio, las cepas seleccionadas
eran: Trichoderma Viridae, Trichoderma Longibratum y
Trichoderma Harziano.
Subsiguientemente, se cultivaron en un
biorreactor tradicional, alimentado con
glucosa-maltosa para obtener una solución acuosa
rica en secreciones pero pobre en biomasa de Trichoderma. El
análisis químico permitía determinar la presencia de isoenzimas
líticas que corresponden a carboximetilcelulasa, quitanasa,
beta-1,3-gluconasa,
beta-xilosidasa, xilanasa y
6-pentil-alfa-pirona.
Una vez establecida la presencia de las sustancias descritas
anteriormente, se elaboró un tamiz, que permitía recoger las cepas
presentes en este cultivo.
Las cepas de estos hongos se cultivaron en una
serie de preparaciones de acuerdo con las indicaciones contenidas
en "Moulds, their isolation, cultivation and identification",
1981, Dr. David Malloch, University of Toronto'', hasta que se
aislaba cada una de las especies en botellas separadas.
Se estableció la necesidad de mantener dos o más
especies vivas y hacerlas vivir conjuntamente, con el objetivo de
producir sinergia en su espectro de acción frente a un fitopatógeno,
así como la necesidad de contar con altas concentraciones de las
enzimas líticas, ya descritas, que darían un poder curativo al
producto final. Se empezó por seleccionar un medio sólido de
cultivo que permitiera el crecimiento rápido y armónico de dos o
más especies y capaz de absorber las secreciones liberadas por estas
especies cuando se atacan entre sí y subsiguientemente
transferirlas a una solución acuosa. El medio seleccionado era
avena, que, para evitar la contaminación, previamente se esteriliza
y a continuación se incorpora en el cultivo.
Para evitar la aniquilación de las especies
cuando viven conjuntamente en el cultivo, se realizó una
transformación por medio de la exposición a radiación de la cepa de
Trichoderma Longibratum, cambiándola mediante selección
inducida por una cepa resistente a secreciones fungicidas liberadas
por las dos especies de Trichoderma que están contenidas en
el producto final. Más específicamente, las especies originales de
Trichoderma Longibratum se sometieron a microexposiciones de
cobalto durante 50 generaciones, obteniendo una cepa de
características únicas.
El micronutriente se selecciona después de haber
probado los diferentes medios y sus posibles combinaciones. Se
observaba que la avena era el medio en el que dos o más especies de
Trichoderma se desarrollaban más eficazmente, además, era
capaz de contener y subsiguientemente transferir a una solución
acuosa las isoenzimas líticas.
La ejecución del cultivo definitivo se realiza
sobre una capa de avena ligeramente hidratada, que se inoculaba con
una mezcla de dos o más especies. La avena micronizada se somete a
esterilización mediante exposición controlada a microondas para
evitar la degradación de la fructosa contenida en su germen. La
avena micronizada como micronutriente cumple las siguientes
funciones:
- \quad
- Soporte físico: permite que el hongo crezca sobre su superficie, siendo capaz de establecer a primera vista la presencia de cualquier otro patógeno no deseado, o cambios mutagénicos de estas especies no deseadas.
- \quad
- Soporte nutricional: da al hongo todos los requerimientos nutricionales para su desarrollo.
- \quad
- Aislamiento térmico: Durante el proceso de crecimiento de los hongos, tiene lugar una serie de reacciones exotérmicas, producto de su catabolismo y de reacciones que se producen entre las diferentes enzimas que liberan y su ataque a los azúcares contenidos en la avena.
- \quad
- Solución tamponadora: El producto final en solución acuosa actúa como una solución tamponadora, para aguas alcalinas.
- \quad
- Espuma: durante la fase de cultivo de las dos o más especies de Trichoderma que dan lugar al producto final, la avena es capaz de absorber las secreciones líticas liberadas por Trichoderma durante el proceso de antagonismo. Estas secreciones, ahora contenidas en la avena, son de naturaleza hidrosoluble, por lo que en solución acuosa se integran en ella, abandonando casi totalmente la matriz de avena.
- \quad
- Regulador del intercambio nitro-amonio en la estructura vegetal que ha de protegerse.
- \quad
- Absorbente y transportador de las isoenzimas solubles en agua, que liberan las dos o más especies de Trichoderma cuando se atacan entre sí mientras cohabitan en el mismo espacio.
- \quad
- Por otra parte, se incorpora en el sustrato extracto de Rubus, que permite, por una parte, dar a la composición una condición bactericida bacteriostática y también permite que el cultivo esté libre de bacterias oportunistas.
\vskip1.000000\baselineskip
La adición de extracto hidroalcohólico de una
especie de Rubus al micronutriente se lleva a cabo en una
concentración no menor de 0,68 mg/ml.
Para incrementar aún más su espectro de acción,
se selecciona un extracto hidroalcohólico de una especie de Rubus,
cuyos componentes han mostrado una importante acción bactericida
bacteriostática. El producto generado resulta de un poder fungicida
bactericida bacteriostático por las secreciones aportadas y la
actividad desarrollada por las especies de Trichoderma
contenidas. La acción entomicida se origina a partir de la invasión
del sistema digestivo-respiratorio de larvas,
ninfas, adultos y/o al infestar el huevo de diferentes especies;
también se ha presentado que la acción entomicida es activada por
el extracto hidroalcohólico de Rubus que tiene las características
bactericidas bacteriostáticas y también es teratogénica para los
insectos que están expuestos a ellas, los huevos en contacto con
estas sustancias y/o la oviposición realizada por hembras que han
entrado en contacto con el producto adecuado no son viables.
Además, pueden utilizarse otros extractos
vegetales, tales como: Oenothera rosea Aut., Alaysia triphylla (L.
Herit) Brit., Arenaria licopodioides Wiild Ex Schdl. y Erodium
cicutarium (L.) L. Herit, Birsonima cassifolia, Citrus limonia.
La especies de Trichoderma corresponden a
hongos de tipo filamentoso que son antagonistas con otros hongos,
incluyendo la misma especie, principalmente como: harzanium,
viridae, polysporum, longibratum, koningii y variaciones de
estas obtenidas en el laboratorio e identificadas como T 22, Tr 115,
Tr 116, KRL-Ag 2 (Rifai), incluyendo holoformas
como Hypocrea, Podostroma. La mayoría de las subespecies se
seleccionan de acuerdo con el grado de agresividad y la capacidad
de supervivencia en condiciones de campo. Sin embargo, lo que se
pretende proteger no es la combinación de dos o más especies de
Trichoderma, debido a que esto existe en la naturaleza y en
preparaciones de tipo comercial. Lo que se pretende proteger es la
combinación de dos o más especies vivas de Trichoderma en
cualquier fase de crecimiento vegetativo, capaces de liberar enzimas
líticas de repulsión, para crecer conjuntamente en un medio de
cultivo y ser inmunes a las condiciones ambientales, de modo que
puedan ejercer su acción controladora durante un período no menor de
un día.
Las especies que conforman la composición
corresponden a subespecies seleccionadas por su alta adaptabilidad
a las condiciones fluctuantes del ambiente, lo que las permite
seguir viviendo.
Más específicamente, las tres especies de
Trichoderma seleccionadas corresponden a Trichoderma
Harzianum, Trichoderma Viridae y Trichoderma
Longibratum.
Las composiciones que comprenden las tres
especies vivas de Trichoderma están en las siguientes
proporciones: 10:20:70 ó 90:05:05.
La composición corresponde al extracto
hidroalcohólico de una especie de Rubus y las secreciones
específicas contenidas en el crecimiento posvegetativo y metabólico
del micronutriente de la especie de Trichoderma junto con el
Trichoderma vivo son resistentes a factores ambientales y son
capturadas mediante el método descrito y subsiguientemente son
capturadas en solución acuosa.
La composición contiene: a) las enzimas líticas
carboximetilcelulasa, quitinas,
b-1,3-gluconasa,
b-xilosidasa, xilanasa; b) una alta concentración
de 6-pentil-alfapirona (lactona
volátil que desprende un penetrante aroma a coco, dependiendo de la
concentración de esta, que da la característica al presente
producto); c) microtrazas de estreptomicina y auxinas, (los
metabolitos descritos en a) y b) son responsables a nivel celular de
la vacuolación, la granulación, la lisis y la desintegración de la
célula expuesta a estas secreciones); d) una concentración no menor
de 0,68 mg/ml de principios activos añadidos en el extracto
hidroalcohólico de especie de Rubus, que le da el carácter
bactericida y bacteriostático.
La acción bactericida y bacteriostática de muy
amplio espectro se describe en diversos estudios (France y otros,
2001; Stefanova M, 1995, Fernández, 2001) y se debe a la liberación
de estreptomicina bajo la presencia de bacterias, ejerciendo una
acción sobre bacterias sensibles a estreptomicina, que representan
un espectro muy pequeño, siendo la razón de la adición de extracto
de Rubus al cultivo. Este extracto tiene un espectro de acción muy
elevado sobre bacterias, sin acción sobre hongos, con lo que está
permitido un crecimiento de Trichoderma sin problemas.
El Trichoderma Longibratum previamente
tratado con radioterapia resultaba inmune a las secreciones
liberadas por las especies Harzianum y Viridae.
Estas secreciones son desactivadas por la
presencia de metabolitos que son liberados por el Longibratum
que cambia el pH del medio permitiendo la absorción de las
secreciones por la avena. Estas enzimas son de tipo termolábil y en
la avena se desactivan sin degradarse. Cuando el cultivo ha
alcanzado el crecimiento máximo, las bandejas que contienen hongos
se recogen y se diluyen inmediatamente en sustrato, lo que permite
que el hongo crezca más lentamente y la dilución de las enzimas que
podrían afectar a la estructura del hongo durante el envejecimiento
del producto.
Cuando están en condiciones diferentes a las de
cultivo, por ejemplo como un producto ya enlatado, la velocidad de
crecimiento desciende drásticamente.
Las especies que conforman la composición
corresponden a especies seleccionadas por su alta adaptabilidad a
las condiciones fluctuantes del ambiente, lo que las permite seguir
viviendo. Esta adaptabilidad las deja ejercer su actividad
antagonista frente al hongo patógeno durante un período de 20 días.
Las secreciones contenidas en el micronutriente, en una
concentración biológicamente activa, son de dos tipos:
- \quad
- Fungicidas: aportados por Trichoderma y representados principalmente por 6-pentil-alfa-pirona, carboximetilcelulasa, quitinasa, beta-1,3-gluconasa, beta-xilosidasa y 1,4-beta-xilanasa que destruye la estructura del hongo patógeno.
- \quad
- Bactericida bacteriostática: aportada por el extracto hidroalcohólico de Rubus, representada principalmente por los constituyentes químicos, pueden observarse de acuerdo con Costa (1994) ácidos libres; sustancias pépticas, ácidos ascórbico, fólico, acético, caproico y benzoico, así como cumarinas. A esto debe añadirse la estreptomicina liberada por los Trichodermas en presencia de bacterias.
\vskip1.000000\baselineskip
Debido a su amplio espectro fungicida,
bactericida, bacteriostático y entomicida, las secreciones
contenidas, el micronutriente y la biomasa de Trichoderma
activos y vivos ejercen acciones:
- \quad
- Curativa: al mezclar el producto en agua, el micronutriente libera todas las secreciones contenidas en él, que son solubles en agua, también los Trichoderma activos y vivos en todas sus fases de crecimiento. Estas secreciones son fungicidas de mayor poder que los derivados de las familias de los fungicidas químicos. Además, la contribución de las sustancias contenidas en el extracto hidroalcohólico de una especie de Rubus da al producto formulado las características bactericidas bacteriostáticas.
\vskip1.000000\baselineskip
La estructura madre de las lactonas
(R=C_{2}H_{5} y R=CH_{3}) presenta dos sitios activos de la
unidad biológica, lo que conduce a una acción por contacto, pero
también a una acción translaminar, siendo capaz de alcanzar el
centro de la hoja, mientras se mantiene un medio desfavorable para
la proliferación de patógenos. En insectos, esta estructura también
provoca la liberación del ácido gamma-aminobutírico,
induciendo una migración masiva de iones cloro al interior de las
células de los insectos, induciendo una parálisis que provoca su
muerte. Las otras secreciones líticas ya descritas afectan a la
estructura de las hifas (filamentos celulares) y las unidades
reproductoras del hongo, manteniendo una actividad sostenida durante
un período de 20 días, antes de empezar a degradarse.
Los fungicidas tradicionales tienen en sus
moléculas un sitio activo de actividad biológica, por lo que es más
fácil para el hongo adquirir resistencia/tolerancia debido al hecho
de que la plaga está sometida a una variable.
Se realizaron pruebas de campo sobre diferentes
plantas afectadas por rhyzochtonia, fusarium, plata, esclerotinia,
botritis, cáncer bacteriano, infección por pseudomonas, todos ellos
en un grado avanzado cuya única indicación era el desprendimiento
de lar plantas. Un tratamiento consiste en dosis de 2 kilogramos de
la composición de la presente invención por hectárea, con una
dilución de hasta 600 litros de agua, y aplicada con bombas y/o
maquinaria de tipo mochila, dependiendo de la extensión afectada y
el tipo de vegetal. La evaluación se realizó dos días después,
visualizando una inhibición del crecimiento del patógeno o los
patógenos que están presentes en la planta o las plantas. El
control del experimento se mantuvo durante 26 días, determinando
que el día 21 la acción de la composición empezaba a decaer,
haciendo evidente un crecimiento de patógenos y/o una nueva
reinfección, obteniendo el día 26 un control inferior al 60% de la
población de fitopatógenos. Este margen de control permitía, con
propósitos comerciales, establecer una dosis de acción curativa de 2
kilos de la composición formulada con dilución en cualquier tipo de
agua, de hasta 600 litros, dando un efecto residual de 20 días.
Curativo y preventivo: En cultivos que
históricamente han tenido pérdidas debido a ataques
fungobacterianos, a pesar del uso de fungicidas químicos, la
composición de la presente invención se aplicó en dosis de 1 kg por
hectárea con humedecimiento hasta 600 litros de agua. En semillas,
se estableció que el porcentaje histórico de plantas caídas debido
a ataques de complejos de hongos (basculación) se reducía de 40% a
5% con el uso de la composición. En cultivos mayores (árboles
frutales) y menores (hortalizas), se estableció que aplicando la
composición de la presente invención dos o tres días antes de una
lluvia, y/o inmediatamente después de ella, el porcentaje de
ataques por hongos oportunistas (oidio, botritis, mildiú,
esclerotinium, cladiosporum) se reduce de 90% a 3% usando la
composición, mientras se mantiene el control durante un período de
tiempo de 20 días (efecto residual).
La acción curativa y preventiva de la
composición de la presente invención es frente a fitopatógenos,
solos o asociados con complejos fúngicos o asociaciones de
hongos-bacterias, tales como botritis, oidio, plata,
arrollamiento clorótico, rhizochtonia, raíz suberosa, cáncer
bacteriano, cladiosporum, fusarium, podredumbre ácida, armillaria,
tapiar cerasi, monilinia, verticillium, roya, agrobacterium
tumefaciens, citosporiosis, wilsonomyce carpophilus,
phytophthora, elsinoe veneta, septoria rubi, fumagina, una
especie de didymella, una especie de erwinia, una especie de
alternaria, esclerotinia, mildiú, especies de macrophomina, bacteria
aeróbicas y anaeróbicas sensibles a estreptomicina, macrólidos en
general, en particular ciclosporina y/o extracto de una especie de
Rubus.
La acción preventiva de la composición de la
presente invención se obtiene cuando las enzimas fungicidas se
desnaturalizan, las especies de Trichoderma ya han colonizado
el área y comienzan su acción antagonista haciendo frente a
poblaciones de hongo que podrían quedar, así como también evitando
su nueva reinfectación por las esporas que podrían llegar por
factores ambientales y/o trabajos de labranza.
La acción insecticida o entomicida de la
composición de la presente invención se describe para especies de
lepidópteros como rhyacionia buoliana y otros insectos
patógenos, por ejemplos una especie de margaroe, de un ciclo
larvario completo o incompleto, sensibles a las exotoxinas liberadas
por la composición. Estas infectan el huevo haciéndolo no viable e
incluso pueden infectar al individuo cuando se alimenta con
hortalizas contaminadas con estas microtoxinas.
\newpage
La composición de la presente invención que
comprende dos o más especies activas y vivas de Trichoderma
en diferentes fases de crecimiento vegetativo, junto con las
secreciones contenidas en el nutriente previamente hidratado con
una concentración del extracto hidroalcohólico de una especie de
Rubus, que se denomina ahora excipiente biológico activo, permite
un:
Control de fitopatógenos medulares y/o
vasculares, bacterias aisladas o en complejos, hongos aislados o en
complejos, y/o complejos de hongos-bacterias, solo
para aplicaciones foliares e irrigación por goteo, sin la necesidad
de realizar perforaciones para introducir el producto.
Control secundario sobre nematodos, al
incrementar la masa radicular de las plantas y también disminuir la
temperatura de gestación de los nematodos en medio grado.
Control de fitopatógenos aéreos para
aplicaciones foliares, bacterias aisladas o en complejos, hongos
aislados o en complejos y/o complejos de
bacterias-hongos. Se realizaron aplicaciones para
determinar las dosis, el espectro de acción y lo residual del
producto formulado. La presencia de estreptomicina y los principios
activos contenidos en la especie de Rubus, a nivel de laboratorio,
resultaba ser responsables del control bactericida y
bacteriostático. A medida que avanza el daño a la planta o la fruta,
producido por la infestación primaria con un hongo, habitualmente
existe un campo fértil para que otros organismos oportunistas,
incluidos insectos, lleguen y cohabiten. La prueba de campo con
una dosis de 1 a 2 kg (dependiendo de la gravedad del ataque,
siempre con una dilución máxima de 600 litros de agua) de la
composición de la presente invención por hectárea, directamente
aplicados con una bomba y/o maquinaria de tipo mochila, al follaje y
los frutos, permite verificar la acción destructora de la
composición, que se mantenía durante 20 días.
Control de fitopatógenos radiculares en la
irrigación por goteo, bacterias aisladas o en complejos, hongos
aislados o en complejos y/o complejos de
bacterias-hongos.
Control de fitopatógenos radiculares
bacterianos, hongos y/o complejos de
hongos-bacterias. Lo mismo que para el control de
un fitopatógeno medular y/o vascular, aquí la aplicación es 2 kg por
hectárea, con humedecimiento del follaje y el tronco del árbol.
Control secundario sobre nematodos: Esta
ampliamente documentado que el Trichoderma libera ácido
giberélico de forma sostenida; este es un importante promotor de la
mitosis y la meiosis, por lo que en las plantas se obtiene una
mayor masa radicular, que para una población constante de nematodo
se traduce en un control secundario de este; por otra parte, el
micronutriente contenido en la solución acuosa consigue disminuir la
temperatura en medio grado, por lo que un porcentaje de huevos de
nematodo no es viable.
La composición de la presente invención puede
aplicarse a plantas, árboles y/o frutos en la forma de un polvo
seco, mediante la técnica de voleo, en la impregnación de semillas,
por medio de una solución acuosa, directamente a las plantas,
incorporada en depósitos de
fertilización-irrigación, por medio de máquinas de
tipo mochila, máquinas de pulverización y máquinas electrostáticas.
Dependiendo de la gravedad del ataque, la dosis es 1 kg por hectárea
o 2 kg por hectárea, para cada 600 litros de agua.
Además, se describe un método para proteger a
las plantas, los suelos, las semillas, los árboles y/o los frutos
contra el daño de una plaga de insectos, bacterias, hongos, virus
y/o una combinación de uno o más de estos agentes, que comprende
plantar mediante un procedimiento de plantación, que se obtiene para
cualquier ruta en una base de látex, que puede tener o no un color
añadido, pero debe estar libre de fungicidas químicos, 100 gramos
de la composición de la presente invención, que incluye una mezcla
de dos o más especies de Trichoderma en diferentes fases de
crecimiento vegetativo, contenida en un soporte nutritivo
microionizado y está integrada, mezclada mediante cualquier medio
incluyendo manual) hasta que se obtiene una solución homogénea. Una
vez definido el color para el látex, se añaden 10 gramos de
colorante vegetal y/u orgánico, previamente disueltos en 1 litro de
agua caliente. Dependiendo de la tonalidad requerida, la cantidad de
colorante puede aumentarse o disminuirse.
La composición de la presente invención se
obtiene mediante un procedimiento de preparación que incluye:
- a)
- Siembra inicial sobre bandejas que contienen el micronutriente, microionizado, estéril e hidratado en un extracto hidroalcohólico de una especie de Rubus, con tres especies de Trichoderma en la forma de esporas originales, en las siguientes proporciones: Trichoderma Harzianum 50%, Trichoderma Viridae 30% y Trichoderma Longibratum (ya irradiado) 20%.
- b)
- Niveles críticos: el cultivo se maneja en los siguientes niveles, pH 5, temperatura 17ºC a 22ºC, con exposiciones de fotoperíodos interrumpidos.
- c)
- Capacidad del nutriente para absorber, contener y aportar (en solución acuosa) las secreciones volátiles, producto de la repulsión mutua de las especies Harzianum y Viridae y las secreciones no volátiles de Trichoderma Longibratum junto con su capacidad antibacteriana aportada por las sustancias de naturaleza bactericida bacteriostática contenidas en el extracto hidroalcohólico de la especie de Rubus.
\newpage
- d)
- La presencia de Trichoderma Longibratum en el cultivo permite una liberación controlada de secreciones antagonistas y de un carácter entomicida para hongos, bactericida y bacteriostático, por su parte, y de las especies de Trichoderma Viridae y Harzianum, evitando que se aniquilen entre sí y manteniendo un crecimiento vegetativo en todas sus fases de desarrollo y con todas las funciones metabólicas de las tres especies en el micronutriente que contiene extracto hidroalcohólico de especie de Rubus.
- e)
- La recogida de la biomasa generada implica la recolección total de esta por medios mecánicos, entre los días 4 y 7, su resiembra se realiza a partir de este punto, usando material vivo en todas sus fases de crecimiento vegetativo en 1% o más con respecto al nutriente ya hidratado sobre bandejas de cultivo.
\vskip1.000000\baselineskip
Un método para proteger plantas, suelos,
semillas, árboles y/o frutos contra el daño de una plaga de
insectos, bacterias, hongos, virus y/o una combinación de uno o más
de estos agentes comprende plantar una planta o árboles
transgénicos, que expresan una sustancia específica de naturaleza
entomicida, fungicida, bactericida, bacteriostática, nematicida y/u
otras características enzimáticas de Trichoderma dentro de un
área en la que pueden aparecer esas plagas.
Además, en la presente invención se describe un
método para producir y/o formular cualquier producto fungicida,
bactericida bacteriostático de amplio espectro, con acción foliar,
radicular, vascular y sobre frutos (incluyendo los ya
recolectados); usado en fase preventiva y/o curativa, incluso sobre
tierra desnuda y/o compost, incluyendo cualquier superficie que
permita el crecimiento de vegetales basado en la mezcla de dos o más
especies de Trichoderma que comprende:
- a)
- El crecimiento de dos o más cepas de Trichoderma, (incluyendo viridae, harzianum y longibratum) sobre un cultivo sólido.
- b)
- La elección de avena como materia prima, y/o cualquier derivado de ella, en forma pura o en una mezcla en cualquier proporción, capaz de iniciar el crecimiento de dos o más especies de Trichoderma que contienen o no extracto hidroalcohólico de una especie de Rubus y/o extracto vegetal o de cualquier otro origen con un potencial bacteriostático bactericida que no afecta al crecimiento de Trichoderma, con propiedades similares.
\vskip1.000000\baselineskip
Adicionalmente, en la presente invención se
describe una composición que comprende dos o más especies de
Trichoderma, naturales o genéticamente modificadas, mediante
métodos radiactivos o de otra forma, cepas originales de especies
y/o subespecies de Trichoderma, naturales o de laboratorio, a
los que se añade un extracto hidroalcohólico total de una especie
de Rubus, o algunos de sus componentes, en una mezcla con sustancias
naturales o químicas destinadas a obtener un bacteriostático
bactericida y/o un conservante; siendo esa composición:
- a.
- Una composición formulada sobre la base de dos o más cepas de Trichoderma, con la adición de cualquier sustancia sintética, orgánica o inorgánica, incluyendo los conservantes y propulsores de estas sustancias, destinada a dar una característica bactericida bacteriostática, y/o cualquier sustancia fungicida en dosis menores que las necesarias para destruir el cultivo de Trichoderma, o sustancias fungicidas a las que las especies de Trichoderma seleccionadas se vuelven inmunes, pero suficientemente fuertes para dar a dicha preparación un carácter fungicida, así como la incorporación de sustancias de cualquier origen y naturaleza, y/o instigadores de la acción bactericida bacteriostática (incluyendo penicilina como extracto impuro del hongo propulsor y/o de origen comercial, macrólidos, neomacrólidos, ciclosporina, y cualquier otra familia terapéutica de bactericida bacteriostático fungicida ya disponible en el mercado o que pudiera estar disponible en los próximos años
- b.
- Una composición formulada sobre la base de dos o más especies vivas y activas de Trichoderma que debido a su carácter antagonista deben tener una presentación comercial separada, pero deben mezclarse en el momento en el que van a usarse de forma inmediata o en un plazo no mayor de 45 días después de la aplicación de la primera especie, todo esto con el objetivo de alcanzar un espectro de acción más amplio que el dado por cualquier especie y de cualquier origen posible en cualquier fase de crecimiento vegetativo, que podrían o no contener agentes que les dan las propiedades añadidas como bactericida bacteriostático.
\vskip1.000000\baselineskip
La presente invención, además, se refiere a una
formulación de bactericida bacteriostático fungicida de amplio
espectro con acción sobre hongos y/o bacterias que son responsables
de enfermedades fúngicas y/o bacteriosis en seres humanos y/o
animales, así como sobre bacteriosis y/u hongos que pueden infectar
alimentos, evitando de ese modo su crecimiento, y/o en fase
curativa sobre bacterias y/u hongos ya instalados, usada en fase
preventiva y/o curativa, que consiste en una presentación comercial
para repostería que permite introducir una o más cepas vivas de
Trichoderma y/o un extracto de ellas, que tienen lactonas
como principio activo en una concentración suficiente para permitir
la inhibición del crecimiento fúngico (como ejemplo, penicillium y
otros) sobre pan en particular y sobre masa en general, una vez
cocinados, prolongando así su vida útil.
Las cepas de Trichoderma Viridae, Trichoderma
Longibratum y Trichoderma Harzianum se identificaron y
seleccionaron, subsiguientemente se cultivaron en una biorreactor
tradicional alimentado con glucosa-maltosa para
obtener una solución acuosa rica en secreciones pero pobre en
biomasa de Trichoderma y posteriormente se elaboró un tamiz
que permitía recoger las esporas presentes en este cultivo.
Estas esporas fúngicas se cultivaron sobre una
capa de avena previamente esterilizada por medio de una exposición
controlada a microondas y se hidrataron ligeramente hasta que se
llegaba a aislar cada especie en una botella separada.
Para evitar la aniquilación de las especies
mientras vivían conjuntamente en el cultivo, se realizó una
transformación por medio de la exposición de las cepas de
Trichoderma Longibratum a radiación, transformándolas
mediante selección inducida en una cepa resistente a las
secreciones fungicidas que liberan las dos especies de
Trichoderma que están contenidas en el producto final. Más
específicamente, las especies de Trichoderma Longibratum
originales se sometieron a microexposiciones a cobalto durante 50
generaciones, obteniendo una cepa con características únicas.
Subsiguientemente, el extracto de especie de
Rubus se incorpora en una concentración de no menos de 0,68
mg/ml.
\vskip1.000000\baselineskip
Composición que comprende Trichoderma
Harzianum, Trichoderma Viridae y Trichoderma Longibratum
en las proporciones: 10:20:70 ó 99:05:05.
\vskip1.000000\baselineskip
Una cantidad de 60 litros de una base de látex,
que puede o no tener color añadido, se mezcla con 100 gramos de la
composición del ejemplo 1 y se remueve mediante cualquier medio
(incluyendo agitación manual), hasta que se alcanza una solución
homogénea. Una vez definido el color para el látex, se añaden 10
gramos de colorante vegetal y/o orgánico y/o inorgánico previamente
disuelto en 1 litro de agua caliente. Dependiendo de la tonalidad
requerida, la cantidad de colorante puede aumentarse o
disminuirse.
\vskip1.000000\baselineskip
Composición basada en látex que puede tener o no
el color añadido, que comprende 60 litros de base de látex, 100
gramos de la composición del ejemplo 1.
Claims (20)
1. Composición bactericida, bacteriostática y
fungicida, caracterizada porque comprende dos o más especies
vivas de Trichoderma seleccionadas entre Trichoderma
harzianum, viridae, polysporum, longibratum, koningii y
variaciones de estas, obtenidas en laboratorio, sobre avena
micronizada como medio sólido de cultivo, identificadas como T 22,
Tr 115, Tr 116, KRL -AG 2 (Rifai), incluyendo holoformas como
Hypocrea y Podostroma, donde la cepa T.
longibratum se transformaba por medio de la exposición a
radiación antes de ponerse en contacto con otras especies de
Trichoderma.
2. Composición de acuerdo con la reivindicación
1, caracterizada porque comprende dos o más especies de
Trichoderma, naturales o genéticamente modificadas, cepas
originales de especies de Trichoderma y subespecies de
cualquier origen natural o de laboratorio, vivas y activas en
cualquiera de sus fases de crecimiento vegetativo, esporas
micelares, fraccionadas o en proporciones diferentes.
3. Composición de acuerdo con las
reivindicaciones 1 a 2, caracterizada porque comprende tres
especies vivas de Trichoderma.
4. Composición de acuerdo con las
reivindicaciones 1 a 3, caracterizada porque comprende tres
especies vivas de Trichoderma seleccionadas de las cepas
Trichoderma viridae, Trichoderma longibratum y Trichoderma
harziano.
5. Composición de acuerdo con las
reivindicaciones 1 a 4, caracterizada porque las tres
especies vivas de Trichoderma están en las proporciones:
10:20:70 ó 99:05:05.
6. Composición de acuerdo con las
reivindicaciones 1 a 5, caracterizada porque comprende las
tres especies vivas de Trichoderma y un extracto vegetal de
naturaleza bactericida bacteriostática.
7. Composición de acuerdo con las
reivindicaciones 1 a 6, caracterizada porque el extracto es
un extracto hidroalcohólico de una especie de Rubus.
8. Composición basada en látex para pintura
cicatrizante de podas, caracterizada porque comprende una
base de látex, que tiene un color añadido, y una composición de
acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7.
9. Composición basada en látex para pintura
cicatrizante de podas, caracterizada porque comprende una
base de látex, que no tiene color añadido, y una composición de
acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7.
10. Composición de acuerdo con las
reivindicaciones 8 y 9, caracterizada porque comprende
aproximadamente 60 litros de dicho látex y 100 gramos de dicha
composición.
11. Uso de la composición de acuerdo con
cualquiera de las reivindicaciones de composición precedentes, para
proteger plantas, suelos, semillas, árboles y/o frutos contra el
daño de una plaga de insectos, bacterias, hongos, virus y/o una
combinación de dos o más de estos agentes.
12. Uso de acuerdo con la reivindicación 11,
caracterizado porque se aplica en forma de polvo seco o en
forma de una suspensión acuosa.
13. Uso de acuerdo con las reivindicaciones 11 ó
12, caracterizado porque la aplicación se realiza por medio
la técnica de voleo, en la impregnación de semillas, directamente a
las plantas, incorporada en depósitos de
fertilización-irrigación, por medio de máquinas de
tipo mochila, máquinas de pulverización y máquinas
electrostáticas.
14. Uso de acuerdo con las reivindicaciones 11 a
13, caracterizado porque la dosis aplicada es 1 kg por
hectárea, por cada 600 litros de agua.
15. Uso no terapéutico de la composición para
proteger plantas, suelos, semillas, árboles y/o frutos de acuerdo
con las reivindicaciones de composición precedentes 1 a 10, como
bactericida bacteriostático fungicida de amplio espectro con acción
sobre hongos y/o bacterias, que son responsables de enfermedades
fúngicas y/o bacteriosis en seres humanos y/o animales y/o
alimentos.
16. Uso de acuerdo con la reivindicación 15,
caracterizado porque puede usarse en la fase de prevención
y/o la fase curativa.
17. Procedimiento de preparación de la
composición de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 6,
caracterizado porque comprende una siembra inicial sobre
bandejas que contienen el micronutriente en una extracto vegetal
con dos o más especies de Trichoderma en forma de unidades
originales reproductoras, y la recogida de la biomasa generada por
medios mecánicos.
18. Procedimiento de preparación de acuerdo con
la reivindicación 17, caracterizado porque la siembra
comprende tres especies de Trichoderma en la forma de
unidades originales reproductoras.
19. Procedimiento de preparación de acuerdo con
la reivindicación 18, caracterizado porque las tres especies
de Trichoderma se seleccionan de las cepas de Trichoderma
viridae, Trichoderma longibratum y Trichoderma
harzianum.
20. Procedimiento de preparación de acuerdo con
la reivindicación 19, caracterizado porque la proporción de
las tres especies es 50% de Trichoderma harzianum, 30% de
Trichoderma viridae y 20% de Trichoderma
longibratum.
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