RU2493247C1 - Ингибитор возбудителя бактериального ожога плодовых культур (erwinia amylovora) - Google Patents
Ингибитор возбудителя бактериального ожога плодовых культур (erwinia amylovora) Download PDFInfo
- Publication number
- RU2493247C1 RU2493247C1 RU2012109980/10A RU2012109980A RU2493247C1 RU 2493247 C1 RU2493247 C1 RU 2493247C1 RU 2012109980/10 A RU2012109980/10 A RU 2012109980/10A RU 2012109980 A RU2012109980 A RU 2012109980A RU 2493247 C1 RU2493247 C1 RU 2493247C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- inhibitor
- strain
- bacterial
- fruit crops
- burn
- Prior art date
Links
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 title claims abstract description 16
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 title claims abstract description 12
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 title claims abstract description 6
- 241000588694 Erwinia amylovora Species 0.000 title abstract description 9
- 241000223260 Trichoderma harzianum Species 0.000 claims abstract description 14
- 244000052769 pathogen Species 0.000 claims description 11
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 15
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 9
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 9
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 7
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 5
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 5
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 4
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 4
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 4
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 4
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 4
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 4
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000015099 wheat brans Nutrition 0.000 description 4
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010004733 L-lysine oxidase Proteins 0.000 description 2
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 2
- 241001295689 Pyracantha Species 0.000 description 2
- 239000003905 agrochemical Substances 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- QHRTZMDBPOUHPU-UHFFFAOYSA-N 4-(4-amino-3-methoxyphenyl)-2-methoxyaniline;hydrochloride Chemical compound Cl.C1=C(N)C(OC)=CC(C=2C=C(OC)C(N)=CC=2)=C1 QHRTZMDBPOUHPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001507946 Cotoneaster Species 0.000 description 1
- 235000009917 Crataegus X brevipes Nutrition 0.000 description 1
- 235000013204 Crataegus X haemacarpa Nutrition 0.000 description 1
- 235000009685 Crataegus X maligna Nutrition 0.000 description 1
- 235000009444 Crataegus X rubrocarnea Nutrition 0.000 description 1
- 235000009486 Crataegus bullatus Nutrition 0.000 description 1
- 235000017181 Crataegus chrysocarpa Nutrition 0.000 description 1
- 235000009682 Crataegus limnophila Nutrition 0.000 description 1
- 235000004423 Crataegus monogyna Nutrition 0.000 description 1
- 240000000171 Crataegus monogyna Species 0.000 description 1
- 235000002313 Crataegus paludosa Nutrition 0.000 description 1
- 235000009840 Crataegus x incaedua Nutrition 0.000 description 1
- 235000017788 Cydonia oblonga Nutrition 0.000 description 1
- 244000297803 Dombeya rotundifolia Species 0.000 description 1
- 235000017728 Dombeya rotundifolia Nutrition 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000009889 Herpes Simplex Diseases 0.000 description 1
- 241000700588 Human alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 244000141359 Malus pumila Species 0.000 description 1
- 235000011430 Malus pumila Nutrition 0.000 description 1
- 235000015103 Malus silvestris Nutrition 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 235000017784 Mespilus germanica Nutrition 0.000 description 1
- 244000182216 Mimusops elengi Species 0.000 description 1
- 235000000560 Mimusops elengi Nutrition 0.000 description 1
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical class O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000001987 Pyrus communis Species 0.000 description 1
- 235000014443 Pyrus communis Nutrition 0.000 description 1
- 241000220317 Rosa Species 0.000 description 1
- 235000004789 Rosa xanthina Nutrition 0.000 description 1
- 241000220222 Rosaceae Species 0.000 description 1
- 241001092391 Sorbus Species 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 241000223259 Trichoderma Species 0.000 description 1
- 235000007837 Vangueria infausta Nutrition 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 238000012272 crop production Methods 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 238000010413 gardening Methods 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 238000003898 horticulture Methods 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 235000008345 mountainash Nutrition 0.000 description 1
- 230000017066 negative regulation of growth Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 239000001965 potato dextrose agar Substances 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 230000028070 sporulation Effects 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- 238000009827 uniform distribution Methods 0.000 description 1
- 235000004336 wild pear Nutrition 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии и может найти применение в растениеводстве. Штамм гриба Trichoderma harzianum Rifai ВКПМ F-180 используют в качестве продуцента ингибитора возбудителя бактериального ожога плодовых культур. Изобретение позволяет снизить потери декоративных и плодовых культур, вызванных бактерией Erwinia amylovora. 1 пр.
Description
Изобретение относится к биохимии и может найти применение в агробиотехнологии, микробиологии и растениеводстве.
Известен ингибитор вируса герпеса простого 1-ого типа [Ингибитор вируса герпеса простого 1-го типа. Патент РФ №2022012, 1994. Алексеев С.Б., Березов Т.Т., Анджапаридзе О.Г. и другие] и ингибитор вируса иммунодефицита человека [Ингибитор вируса иммунодефицита человека. Патент РФ №2022011, 1994. Алексеев С.Б., Веса B.C., Смирнова И.П. и другие], в качестве которых использовался метаболит штамма Trichoderma harzianum Rifai - гомогенный фермент L-лизин-a-оксидаза.
В последние годы резко возрос импорт посадочного материала декоративных и плодовых растений, который является хозяином возбудителя бактериального ожога плодовых культур (Erwinia amylovora). Бактериальный ожог - одно из наиболее опасных заболеваний плодовых культур, имеющее карантинный статус в Российской Федерации. Основными и наиболее восприимчивыми к бактериальному ожогу являются плодовые и декоративные растения из семейства Rosaceae подсемейства Pomoideae. Кизильник - самая восприимчивая к бактериальному ожогу культура, среди плодовых деревьев больше всего страдает от заболевания груша. Кроме того, возбудитель болезни поражает боярышник, айву, хеномелес, яблоню, рябину, иргу, мушмулу, пираканту, странвезию, дикую грушу, розу [Вредные организмы, имеющие карантинное фитосанитарное значение для Российской Федерации: справочник / под ред. С.А. Данкверта, М.И. Маслова, У.Ш. Магомедова, Я.Б. Мордковича. - Воронеж: Научная книга, 2009, С 280 - 286].
Бактериальный ожог плодовых культур вызывает большие потери урожая и гибель деревьев. Вредоносность ожога плодовых весьма велика вследствие очень быстрого его распространения. Экономический ущерб выражается в снижении или полной потере урожая, гибели плодовых деревьев, затратах на выкорчевку погибших и пораженных деревьев и закладку нового сада и др. В сильно зараженных садах возбудитель заболевания может поражать от 20 до 50%, в отдельных случаях до 90% деревьев, часть из которых полностью погибает [Шнейдер Е.Ю. Анализ фитосанитарного риска возбудителя бактериального ожога плодовых Erwinia amylovora (Burrill) Winslow et al. для территории Российской Федерации. ФГУ ВНИИКР, 2009, С.5-6, 13-14, 24].
В нашей стране частные и промышленные сады занимают большие площади, а применяемые меры борьбы не препятствуют акклиматизации возбудителя. Согласно Списку пестицидов и агрохимикатов, разрешенных к применению на территории Российской Федерации в настоящее время, в нашей стране не зарегистрировано препаратов для борьбы с возбудителем бактериального ожога плодовых культур [Список пестицидов и агрохимикатов, разрешенных к применению на территории Российской Федерации. 2010 г. ООО «Спектр-П», Курск. Справочное издание, 804 с.]. Все это говорит о том, что проникновение и акклиматизация возбудителя Е. amylovora приносит огромные убытки плодоводству и декоративному садоводству.
Техническим результатом изобретения является снижение потерь декоративных и плодовых культур, вызванных возбудителем бактериального ожога плодовых культур Е. amylovora.
Технический результат достигается тем, в качестве продуцента ингибитора возбудителя бактериального ожога плодовых культур применяют штамм гриба Trichoderma harzianum Rifai ВКПМ F - 180.
Штамм депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов под №F-180 в 1987 году (Москва, Дорожный 1-й проезд, д.1. Институт генетики и селекции).
Морфолого-биохимическая характеристика штамма.
Штамм Trichoderma harzianum Rifai на среде сусло-агар образует колонии быстрорастущие. Мицелий гриба бесцветный, септированный,
распростертый. На 4-е - 5-е сутки роста появляются дерновинки с конидиеносцами, подушковидные, сначала белые, со временем желто или темно-зеленого цвета. Фиалиды бутыльчатые /9-12µ/, расположены мутовками по 3 и более. На каждой фиалиде образуются конидии, склеенные в головку. Конидии гриба округлые, гладкие, мелкие /3-5µ/, в проходящем свете бледно-зеленые, а в массе - темные.
На агаризованной среде Чапека колонии штамма-продуцента быстрорастущие, но слабо спороносящие. Штамм хорошо растет на среде Чапека, однако лучший рост наблюдается на среде сусло-агаре. Агар и желатину не разжижает, молоко не пептонизирует.Аэробный гриб. Температурный оптимум +28-+29°C. На картофельно-декстрозном агаре наблюдается снижение интенсивности роста, образование воздушного мицелия и спороношения. Оптимальные условия роста гриба при рН 4-6, однако может расти и при pH от 1,5 до 9.
Trichoderma harziatum Rifai в одинаковой степени усваивает, как аммонийные, так и азотнокислые соли. Лучшим источником азота из органических соединений является пептон. Хорошо растет на средах с аспарагином и с глутаминовой кислотой. Лучшими источниками углерода являются ксилоза, глюкоза, сахароза, лактоза, галактоза, маннит, крахмал. На средах с этими сахарами наблюдается интенсивный рост. Слабо усваиваются спирты метиловый, этиловый, дульцит. Хорошо усваивает в качестве источника углерода пшеничные отруби. Инокулят гриба, выросший на среде с пшеничными отрубями, дает положительный результат при использовании его при ферментации на средах разного состава.
Штамм Trichoderma harzianum Rifai обладает L-лизин-α-оксидазной активностью. Активность L-лизин-α-оксидазы в культуральной жидкости Trichoderma harzianum Rifai рассчитывали по приросту H2O2, количество которой определяли спектрофотометрическим ортодиазидиновым микрометодом. Сущность метода заключается во взаимодействии всей образующейся в реакции H2O2 с O-дианизидингидрохлоридом. Инкубационная смесь содержала 20 мкг пероксидазы, 250 мкг 0-дианизидингидрохлорида и 0,1-0,5 мг белка в 1 мл конечного объема. После 20 минут инкубирования в термостате при температуре +37°C пробы охлаждали до +4°C. Оптическую плотность окрашенных растворов опытной и контрольной (без субстрата) проб измеряли на спектрофотометре СФ-16 при 540 нм против второй контрольной пробы (без пероксидазы).
Удельную активность фермента выражали числом единиц активности на 1 мг белка или 1 мл культуральной жидкости.
Условия культивирования штамма Trichoderma harzianum Rifai.
Ферментация штамма производилась на оборудовании Опытной технологической установки ИБФМ РАН им. Г.К. Скрябина (г.Пущине).
Использовали ферментер типа БИОР-01 производства ОКБ ТБМ, г.Кириши, объемом 100 л с коэффициентом заполнения 0,6. Ферментер оснащен магнитной мешалкой, фильтрами тонкой очистки воздуха, датчиками температуры и pH.
Для приготовления питательной среды в аппарат заливали 60 л водопроводной воды, вносили 1% пшеничных отрубей, стимулятор - 0,1%, 1,3% сульфата аммония, значение pH 5.8-6,0 устанавливали 10%-ным раствором HCl. Пшеничные отруби и стимулятор предварительно замачивали в 10 литрах воды в течение 4-х часов, стерилизовали в автоклаве 1 час при t°+125°C. Затем подготовленный ферментер засевали посевным материалом из колб. Посевная доза не менее 5%. Культивирование проводили при температуре +26°C, расход воздуха на протяжении всей ферментации 30 л в минуту, скорость вращения мешалки 200 оборотов в минуту. Величину pH в процессе роста корректировали до 6,5. Продолжительность выращивания составила 94-98 часов, конечные значения pH от 5,3 до 7,5.
По окончании ферментации культуральную жидкость направляли на участок предварительной очистки, где мицелий гриба отделяли фильтрованием под вакуумом на нутч-фильтре. Вес полученной биомассы составил 3,5 кг. Полученный нативный раствор подвергали дополнительному сепарированию на сепараторе типа ОСБ при 9000 об/мин в течение часа при температуре +2-+4°C. Затем нативный раствор в объеме 55 л, полученный после отделения биомассы, концентрировали до 1,5 л (концентрат).
Активность полученного экстракта из культуры Trichoderma harzianum Rifai составляла 5,4 Ед/мл.
Возбудитель бактериального ожога плодовых культур - бактерия Erwinia amylovora, была выявлена в образцах побегов декоративного растения пираканта (лат.Pyracantha m.roem.) методом полимеразной цепной реакции и подтверждена посевом на питательную среду.
Для постановки опыта по определению ингибирующего действия экстракта штамма Trichoderma harzianum Rifai на бактерию Е. amylovora использовали метод диффузии в агар. В качестве питательной среды использовали сахарозно-пептонный агар.
Сахарозо-пептонный агар, Sucrose Pepton Agar (SPA)
| Сахароза | 20 г |
| Пептон | 5 г |
| K2HPO4 | 0,5 г |
| MgSO4×7H2O | 0,25 г |
| Бактоагар | 15 г |
| Дистиллированная вода | до 1 л |
pH 7,0-7,2
Стерилизовали автоклавированием при температуре +121°C в течение 15 минут.
В чашки Петри наливали питательную агаровую среду в количестве 20-30 мл и давали ей застыть. Посев культур на чашки Петри проводили путем нанесения одной петли чистой культуры бактерий на питательную среду и равномерного ее распределение путем растирания по поверхности агаровой среды с помощью стеклянного шпателя Дригальского.
Для размещения экстракта штамма Trichoderma harzianum Rifai готовили лунки, для чего в застывшей среде с поверхностно нанесенной культурой стерильным сверлом диаметром 10 мм просверливали необходимое количество лунок глубиной около 5 мм, после чего в лунки вносили экстракт на 1 мм ниже уровня среды (по 200 мкл в лунку). В лунки контрольных чашек вносили стерильную дистиллированную воду.
Приготовленные чашки Петри с образцами и контрольные чашки Петри помещали в термостат (температура +26±2°C). Образцы выдерживали в термостате 1-3 суток, отмечая интенсивность роста бактерий на чашках, замеряя зоны угнетения их роста и делая записи в журнале.
Ингибирующее действие экстракта штамма Trichoderma harzianum Rifai против Erwinia amylovora определяли по степени подавления роста чистой культуры возбудителя на питательной среде. Измерение зоны подавления роста культуры проводили через 24 часа после постановки опыта и далее наблюдали изменения в течение 3-х суток.
Пример.
Ингибирующее действие экстракта штамма Trichoderma harzianum Rifai определяли по степени подавления роста чистой культуры возбудителя на питательной среде. Опыт проводили в трех повторностях: в опытные чашки в лунки вносили экстракт штамма Trichoderma harzianum Rifai. В контрольную чашку в лунки вносили стерильную дистиллированную воду. Через 24 часа после поверхностного посева культуры Erwinia amylovora на питательную среду и внесения экстракта в лунки в опытных чашках наблюдали зоны подавления роста культуры возбудителя вокруг лунок. Радиус зон подавления составлял 5-9 мм. На остальной поверхности чашки наблюдался рост культуры возбудителя без признаков угнетения. На контрольной чашке, на всей поверхности среды наблюдался активный рост культуры возбудителя заболевания, без признаков подавления. Это указывает на то, что экстракт штамма Trichoderma harzianum Rifai оказывает ингибирующее действие на возбудителя бактериального ожога плодовых культур.
Claims (1)
- Применение штамма гриба Trichoderma harzianum Rifai ВКПМ F-180 в качестве продуцента ингибитора возбудителя бактериального ожога плодовых культур.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2012109980/10A RU2493247C1 (ru) | 2012-03-15 | 2012-03-15 | Ингибитор возбудителя бактериального ожога плодовых культур (erwinia amylovora) |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2012109980/10A RU2493247C1 (ru) | 2012-03-15 | 2012-03-15 | Ингибитор возбудителя бактериального ожога плодовых культур (erwinia amylovora) |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2493247C1 true RU2493247C1 (ru) | 2013-09-20 |
| RU2012109980A RU2012109980A (ru) | 2013-09-20 |
Family
ID=49183094
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2012109980/10A RU2493247C1 (ru) | 2012-03-15 | 2012-03-15 | Ингибитор возбудителя бактериального ожога плодовых культур (erwinia amylovora) |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2493247C1 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2535983C1 (ru) * | 2013-12-17 | 2014-12-20 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Российский университет дружбы народов" (РУДН) | ПРОДУЦЕНТ ИНГИБИТОРА ВОЗБУДИТЕЛЯ БАКТЕРИАЛЬНОЙ ПЯТНИСТОСТИ ТЫКВЕННЫХ КУЛЬТУР (Acidovorax citrulli) |
| RU2569150C1 (ru) * | 2014-10-02 | 2015-11-20 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Российский университет дружбы народов" (РУДН) | ПРОДУЦЕНТ ИНГИБИТОРА МИКОПЛАЗМЫ (Mycoplasma hominis) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2010527C1 (ru) * | 1991-07-11 | 1994-04-15 | Государственный аграрный университет Молдовы | Штамм микромицета trichoderma harzianum rifai для получения препарата против возбудителя серой гнили винограда |
| WO1995020650A1 (fr) * | 1994-01-28 | 1995-08-03 | Irina Pavlovna Smirnova | Souche de trichoderma harzianum rifai, procede d'obtention de l-lysine-alpha-oxidase en tant qu'inhibiteur d'activite virale et bacterienne, immunomodulateur et agent de cicatrisation de la peau |
| US20040151699A1 (en) * | 2002-07-26 | 2004-08-05 | Salinas Mario Reyes | Bactericidal, bacteriostatic and fungicidal composition, comprising two or more live species of trichoderma and its preparation procedure, and a composition based on latex for a pruning cicatrizing that includes a latex base and a composition of two or more live species of trichoderma |
-
2012
- 2012-03-15 RU RU2012109980/10A patent/RU2493247C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2010527C1 (ru) * | 1991-07-11 | 1994-04-15 | Государственный аграрный университет Молдовы | Штамм микромицета trichoderma harzianum rifai для получения препарата против возбудителя серой гнили винограда |
| WO1995020650A1 (fr) * | 1994-01-28 | 1995-08-03 | Irina Pavlovna Smirnova | Souche de trichoderma harzianum rifai, procede d'obtention de l-lysine-alpha-oxidase en tant qu'inhibiteur d'activite virale et bacterienne, immunomodulateur et agent de cicatrisation de la peau |
| US20040151699A1 (en) * | 2002-07-26 | 2004-08-05 | Salinas Mario Reyes | Bactericidal, bacteriostatic and fungicidal composition, comprising two or more live species of trichoderma and its preparation procedure, and a composition based on latex for a pruning cicatrizing that includes a latex base and a composition of two or more live species of trichoderma |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Биологическая защита растений. Под ред. М.В. Штернис. - М.: КолосС, 2004, с.195-198. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2535983C1 (ru) * | 2013-12-17 | 2014-12-20 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Российский университет дружбы народов" (РУДН) | ПРОДУЦЕНТ ИНГИБИТОРА ВОЗБУДИТЕЛЯ БАКТЕРИАЛЬНОЙ ПЯТНИСТОСТИ ТЫКВЕННЫХ КУЛЬТУР (Acidovorax citrulli) |
| RU2569150C1 (ru) * | 2014-10-02 | 2015-11-20 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Российский университет дружбы народов" (РУДН) | ПРОДУЦЕНТ ИНГИБИТОРА МИКОПЛАЗМЫ (Mycoplasma hominis) |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2012109980A (ru) | 2013-09-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102776130B (zh) | 一株金龟子绿僵菌及其应用 | |
| CN102851219B (zh) | 一株淡紫拟青霉及其应用 | |
| CN105039414B (zh) | 一种防治烟草黑胫病的青霉菌发酵液的制备方法 | |
| AU2020101344A4 (en) | Bacillus siamensis and application thereof | |
| KR20160000537A (ko) | 신규미생물 보베리아 바시아나 fg274와 이를 함유하는 파밤나방 유충 방제용 미생물제제 | |
| CN109628341B (zh) | 深红紫链霉菌及其生物防治菌剂和制备方法 | |
| RU2493247C1 (ru) | Ингибитор возбудителя бактериального ожога плодовых культур (erwinia amylovora) | |
| RU2529958C1 (ru) | Штамм азотфиксирующих бактерий pseudomonas sp. для получения биопрепарата против заболеваний пшеницы, вызываемых фитопатогенными грибами, и повышения урожайности | |
| CN114032182A (zh) | 一株兼具拮抗大蒜根腐病病原菌和促生功能的真菌 | |
| KR101896932B1 (ko) | 신규 미생물 보베리아 바시아나 fg317 또는 이를 함유하는 담배거세미나방 유충 방제용 미생물제제 | |
| CN109401982B (zh) | 一株高效防治蚧壳虫的爪哇棒束孢 | |
| CN116083298B (zh) | 一种用于培养侧孢短芽孢杆菌的培养基及其应用 | |
| NL2033035B1 (en) | Stachybotrys sp. hn17496 strain, microbial biocontrol agent, and preparation method and use thereof | |
| CN115806913B (zh) | 野尻链霉菌（Streptomyces nojiriensis）菌株9-13及应用 | |
| CN1846505A (zh) | 一种微生物抗烟草赤星病剂及其制备方法和应用 | |
| KR101953835B1 (ko) | 식물의 병 저항성을 증진시키는 아스페르질루스 테레우스 균주 및 이의 용도 | |
| CN114250176B (zh) | 一种微生物防治三七根腐病剂的制备方法及其应用 | |
| CN113025528B (zh) | 一种侧孢芽孢杆菌及其在线虫病害防治中的应用 | |
| RU2535983C1 (ru) | ПРОДУЦЕНТ ИНГИБИТОРА ВОЗБУДИТЕЛЯ БАКТЕРИАЛЬНОЙ ПЯТНИСТОСТИ ТЫКВЕННЫХ КУЛЬТУР (Acidovorax citrulli) | |
| SU1717052A1 (ru) | Штамм гриба ТRIсноDеRма LIGNоRUм дл производства триходермина | |
| EP0374499A1 (en) | Weed control compositions containing Drechslera spp. or a metabolite thereof and weed control methods using Drechslera spp. or a metabolite thereof | |
| RU2422511C1 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИЙ Brevibacillus laterosporus, ПРОДУЦИРУЮЩИЙ ШИРОКИЙ СПЕКТР БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ СОЕДИНЕНИЙ | |
| CN109207489B (zh) | 一种膨大弯颈孢菌株及其应用 | |
| RU2675503C1 (ru) | Способ получения биологического препарата для стимуляции роста и защиты растений от заболеваний | |
| CN109275667B (zh) | 爪哇棒束孢防治蚧壳虫的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20180316 |