ES2307324T3

ES2307324T3 - Aparato y procedimiento para la deteccion de analitos.

Info

Publication number: ES2307324T3
Application number: ES98946166T
Authority: ES
Inventors: Howard Milne Chandler
Original assignee: Enterix Inc
Current assignee: Enterix Inc
Priority date: 1997-10-06
Filing date: 1998-10-05
Publication date: 2008-11-16
Anticipated expiration: 2018-10-05
Also published as: CA2305275A1; EP1031036A1; US20010004532A1; BR9812728A; PT1031036E; IL135082A0; EP1031036B1; WO1999018436A1; JP2001519531A; CA2713206C; US6221678B1; US20050158878A9; US7371583B2; US7972871B2; US20050158869A1; CA2713206A1; US7704729B2; CN1158526C; CN1274422A; DE69839490D1

Abstract

Dispositivo de prueba para la identificación de un analito de interés en una muestra, que comprende: a) un alojamiento que presenta una matriz de aplicación de muestras para recibir una muestra, y b) por lo menos un elemento de prueba insertable que, al insertarse en el alojamiento, establece una comunicación directa conductora de líquido con la matriz de aplicación de muestras de tal modo que los componentes de la muestra sean llevados de la matriz de aplicación de muestras al elemento o elementos de prueba.

Description

Aparato y procedimiento para la detección de analitos.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a un aparato y a un procedimiento para la detección directa o indirecta de un analito en una muestra, en particular, pero no exclusivamente, para la detección de un analito en una muestra biológica. La presente invención resulta particularmente útil para verificar el estado de salud de un humano u otro animal o planta u otra forma de vida o el estado medioambiental de una ubicación geográfica o industrial, verificando la presencia o ausencia de un analito.

Antecedentes de la invención

Se han desarrollado una variedad de dispositivos de diagnóstico para la detección de un analito de interés en una muestra. En los dispositivos en los que las funciones de recogida y ensayo de muestras no están vinculadas, la transferencia de la muestra recogida al aparato de ensayo introduce una potencial fuente de error. En los dispositivos en los que las funciones de recogida y ensayo de pruebas están vinculadas, los dispositivos están dedicados en su integridad
a la detección de un analito particular y no son fácilmente adaptables a un amplio rango de detección de analitos.

La cuestión del autodiagnóstico de enfermedades graves tales como cáncer o SIDA se ha considerado extensamente. Hay consenso general en que no se prefiere un autodiagnóstico de tales estados de enfermedad. Más bien, se acepta generalmente que un diagnóstico positivo para tal estado de enfermedad deberá ser comunicado por un médico, junto con la información relativa a la disponibilidad de servicios de asesoramiento.

Con respecto a sistemas relativos a mamíferos (por ejemplo, humanos), las muestras susceptibles de análisis utilizando el dispositivo de prueba de la presente invención incluyen fluidos biológicos (por ejemplo, sangre, orina, semen, saliva, etc.) o excrementos. Tales fluidos biológicos pueden contener una variedad de analitos, cuya presencia puede ser el diagnóstico de un estado de enfermedad particular. Un ejemplo importante de un estado de enfermedad que está caracterizado por la presencia de un analito específico de enfermedad en un fluido biológico es el Síndrome de Inmunodeficiencia Adquirida (SIDA). Utilizando el dispositivo y el procedimiento de la presente invención, puede detectarse en una muestra de sangre la presencia de anticuerpos específicos para el Virus de Inmunodeficiencia Humana (VIH), el agente causante del SIDA.

La aplicación de la presente invención a la detección de estados de enfermedad en humanos es de vital importancia. Sin embargo, además del uso en el contexto de la diagnosis de estados de enfermedad graves, la presente invención es útil también en una variedad de otros contextos. Se anticipan aplicaciones en relación con el análisis de microbios, plantas, animales, alimentos y agua.

Por ejemplo, pueden analizarse aguas subterráneas para determinar la presencia de contaminantes, tales como atrazina. Pueden analizarse alimentos, tal como carne de vaca triturada, para determinar la presencia de contaminación por bacterias, tal como E. coli. En el reino vegetal, la presente invención puede aplicarse al análisis de, por ejemplo, polen, esporas y fluidos vasculares de plantas. Generalmente hablando, el único requisito de detección utilizando el dispositivo y el procedimiento de la presente invención es que el analito de interés deberá ser soluble o suspendible en una solución acuosa.

El dispositivo y el procedimiento de la presente invención son particularmente útiles para la detección de pérdida de sangre intestinal oculta. La detección de pérdida de sangre gastrointestinal oculta es un procedimiento común para descubrir un cáncer colorrectal. Comúnmente denominado como ensayo de sangre oculta fecal (FOB), se conocen una variedad de formatos en la técnica (véase, por ejemplo, las patentes nº 3.996.006; nº 4.225.557; nº 4.789.629; nº 5.064.766; nº 5.100.619; nº 5.106.582; nº 5.171.528; nº 5.171.529; y nº 5.182.191).

La mayoría de los formatos de prueba se basan en la detección química de grupos heme en una deposición como un producto de descomposición de la sangre. En tales pruebas, la naturaleza de la pseudoperoxidasa del grupo heme se utiliza para catalizar una reacción colorimétrica entre un colorante indicador y peróxido. El colorante sensible al oxígeno puede ser goma guayaca, ortodianisidina, tetrametilbencidina o similar, prefiriéndose el guayaco.

Aunque las pruebas FOB basadas en guayaco son baratas y simples de utilizar, hay desventajas asociadas con su uso. Por ejemplo, las pruebas basadas en guayaco indican sólo la presencia de compuestos de peroxidasa y pseudoperoxidasa, tales como heme, que están presentes en una muestra. En consecuencia, estas pruebas no son específicas para la sangre humana y, por tanto, son objeto de resultados positivos falsos si la descomposición del paciente está contaminada con compuestos de reacción cruzada. Tales compuestos de reacción cruzada incluyen, por ejemplo, productos de descomposición de sangre no humana procedentes de carne poco cocinada, ciertos productos vegetales y algunos fármacos. Según la práctica médica corrientemente aceptada, una paciente que demuestre un resultado positivo deberá someterse a continuación a una sigmoidoscopia o colonoscopia flexible para identificar la fuente de la pérdida de sangre en el colon o en el recto. Estos procedimientos pueden ser invasivos, médicamente complicados y caros. Para minimizar reacciones positivas falsas y los innecesarios procedimientos de seguimiento, las pruebas FOB basadas en guayaco requieren una dieta restrictiva de hasta tres días antes de la realización de la prueba.

Los informes recientes en la literatura (Allison et al. N. Eng. J. Med. 344:155-159 (1996); y Favennec et al., Annales de Biologie Clinique 50:311-313 (1992) han sugerido que la selección por guayaco y la confirmación de resultados positivos por una prueba inmunológica, con absoluta especificidad para la sangre humana, incrementarían el valor de los resultados de la prueba FOB. Por este motivo, sólo los pacientes con pérdida de sangre gastrointestinal confirmada se someterían a los caros procedimientos de seguimiento, conduciendo a ahorros significativos en el coste de provisión de asistencia sanitaria y a una incomodidad reducida para el paciente.

La presente invención se refiere a un dispositivo que es útil, entre otras cosas, para la detección de cualquier analito soluble o suspendible acuoso que sea detectable, por ejemplo, sobre la base de propiedades inmunológicas y/o químicas. Un ejemplo de un analito detectado por sus propiedades inmunológicas incluye, pero no se limita a, una molécula interactuante inmune tal como un antígeno, hapteno, inmunoglobulina o molécula de fijación de antígeno derivada de células T. Un ejemplo de un analito detectado por propiedades químicas incluye una enzima, catalizador o ligando. Así, con respecto a las pruebas FOB, el dispositivo de la presente invención puede adaptarse a pruebas basadas en guayaco o pruebas inmunológicas. El formato preferido para pruebas inmunológicas es inmunocromatografía. Este formato se describe generalmente en la patente US nº 5.591.645 y 5.622.871, cuya descripción se incorpora aquí por referencia.

Antes de discutir la invención con más detalle, se proporcionará una breve revisión del procedimiento de inmunocromatografía con el fin de establecer ciertos principios. Para detectar un analito de interés por inmunocromatografía, pueden emplearse dos reactivos de fijación que se fijan específicamente y de manera no competitiva al analito de interés. Un primer reactivo de fijación específico está marcado y es libre de migrar. Cuando se introduce en una muestra que se va a ensayar para determinar la presencia del analito de interés, el primer reactivo de fijación específico se fija al analito de interés, si está presente. El segundo reactivo de fijación específico es inmovilizado en una zona de detección sobre un material de fase sólida conductor de líquido, siendo remota la zona de detección y estando aguas abajo de la localización de contacto inicial entre el primer reactivo de fijación y el analito de interés. Un frente de disolvente que lleva el primer reactivo de fijación específico móvil complejado con el analito de interés (si está presente) migra a lo largo del material de fase sólida conductor de líquido a través de la zona de detección. Si el analito está presente en la muestra, el segundo reactivo de fijación específico inmovilizado fija el analito formando así un complejo de emparedado inmovilizado que comprende el primer reactivo de fijación específico (que está marcado), el analito de interés y el segundo reactivo de fijación específico (que está inmovilizado). La detección del marcador inmovilizado en la zona de detección es indicativa de la presencia del analito de interés en la muestra. En la mayoría de las formas de realización, los reactivos de fijación específicos primero y segundo son anticuerpos policlonales o monoclonales.

Sumario de la invención

La presente invención se refiere a un dispositivo y a procedimientos de prueba para la indicación de un analito de interés en una muestra. El dispositivo de prueba ofrece una variedad de ventajas sobre los dispositivos de la técnica anterior. Una característica importante del dispositivo de prueba de la presente invención es que el único dispositivo sirve para una función de recogida y ensayo. Sin embargo, la función de ensayo no está vinculada a la recogida. Esto es, la recogida de una muestra (por ejemplo, por un paciente en su casa) y la aplicación al dispositivo de prueba no produce un resultado de prueba. Con el fin de determinar el resultado de prueba, debe insertarse un elemento de prueba insertable en el dispositivo y, si la muestra se ha secado o desecado previamente, la muestra debe rehidratarse. En la práctica,
el elemento de prueba no estará provisto del dispositivo y, por tanto, el paciente no se autodiagnosticará en su casa.

En un aspecto, la presente invención proporciona un dispositivo de prueba para la identificación de un analito de interés en una muestra, que comprende:

(a): una matriz de aplicación de muestras adaptada para recibir una muestra, y

(b): por lo menos un elemento de prueba insertable adaptado para la comunicación con la matriz de aplicación de muestras, de tal modo que los componentes de la muestra sean llevados de la matriz de aplicación de muestras al elemento o elementos de prueba.

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Preferentemente, la muestra es una muestra que contiene líquido. La muestra puede ser en sí un líquido o puede estar en forma particulada o sólida como hidratos antes de la realización de la prueba.

De acuerdo con esta invención, el o cada elemento de prueba está adaptado para insertarse en el dispositivo de prueba, de modo que el elemento de prueba está en comunicación conductora de líquido con la matriz de aplicación de muestras como se describe anteriormente.

Como se utiliza en la presente memoria, la expresión "comunicación conductora de líquido" deberá considerarse que significa que un líquido aplicado a una matriz de aplicación de muestras es capaz de estar en comunicación conductora de líquido con un elemento de prueba bajo condiciones suficientes de hidratación.

En un aspecto preferido, pero no esencial de esta invención, el dispositivo de prueba está adaptado de modo que una muestra aplicada al dispositivo (por ejemplo, por un paciente en su casa) pueda secarse o desecarse en la matriz de aplicación de muestras. En consecuencia, en este aspecto, el dispositivo de prueba comprende:

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(a): una matriz de aplicación de muestras adaptada para:

(i): recibir una muestra que contiene líquido;

(ii): desecar in situ la muestra que contiene líquido; y

(iii): rehidratar la muestra que contiene líquido desecado para transferirla a un elemento de prueba; y

(b): por lo menos un elemento de prueba insertable adaptado para la comunicación conductora de líquido con la matriz de aplicación de muestras, de tal modo que, tras la rehidratación, los componentes resolubilizados o resuspendidos de la muestra que contiene líquido sean llevados de la matriz de aplicación de muestras al elemento o elementos de prueba.

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En una forma de realización de la presente invención, el dispositivo de prueba puede comprender:

(a): un panel delantero que tiene por lo menos una abertura de aplicación de muestra en él;

(b): un panel trasero que tiene por lo menos una abertura de aplicación de tampón en él;

(c): una matriz de aplicación de muestras dispuesta entre el panel trasero y el panel delantero, estando la matriz de aplicación de muestras en comunicación con las aberturas de aplicación de muestra de tampón de los paneles delantero y trasero; y

(d): por lo menos un elemento de prueba insertable adaptado para la comunicación conductora de líquido con la matriz de aplicación de muestras, de tal modo que los componentes de la muestra que contiene líquido sean llevados de la matriz de aplicación al elemento o elementos de prueba.

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Preferentemente, el o cada elemento de prueba insertable comprende un reactivo o reactivos que permiten la detección del analito de interés.

La presente invención proporciona también un procedimiento para realizar un ensayo para identificar un analito de interés en una muestra, que comprende:

(a): proporcionar un dispositivo de prueba que comprende una matriz de aplicación de muestras adaptada para recibir una muestra que contiene líquido;

(b): aplicar una muestra que contiene líquido a la matriz de aplicación de muestras;

(c): insertar en el dispositivo de prueba por lo menos un elemento de prueba insertable en comunicación conductora de líquido con la matriz de aplicación de muestras, de tal modo que los componentes de la muestra que contiene líquido sean llevados de la matriz de aplicación de muestras al elemento o elementos de prueba; y

(d): determinar los resultados de la prueba.

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En una forma de realización, el procedimiento comprende:

(a): proporcionar un dispositivo de prueba que comprenda:

(i): un panel delantero que presenta por lo menos una abertura de aplicación de muestra en el mismo;

(ii): un panel trasero que presenta por lo menos una abertura de aplicación de tampón en el mismo; y

(iii): una matriz de aplicación de muestras dispuesta entre el panel trasero y el panel delantero, estando la matriz de aplicación de muestras en comunicación con la muestra y las aberturas de aplicación de tampón de los paneles delantero y trasero;

(b): aplicar una muestra que contenga líquido a la matriz de aplicación de muestras;

(c): insertar en el dispositivo de prueba por lo menos un elemento de prueba insertable en comunicación conductora de líquido con la matriz de aplicación de muestras, por ejemplo una tira de prueba inmunocromatográfica, que comprende un material de fase sólida conductor de líquido y un material de apoyo, teniendo la tira de prueba inmunocromatográfica insertable una zona de contacto que, después de la inserción, contacta con la matriz de aplicación de muestras y conduce un frente de disolvente desde la matriz de aplicación de muestras a través de una zona de detección que contiene un reactivo de fijación específico, siendo la zona de detección espacialmente distinta de la zona de contacto;

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(d): aplicar tampón a la matriz de aplicación de muestras; y

(e): determinar los resultados de la prueba, por ejemplo observando los resultados inmunocromatográficos.

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En toda la memoria, a menos que el contexto lo requiera de otra forma, el término "comprender" y/o variaciones, tales como "comprende" o "comprendiendo" se entenderá que implica la inclusión de un número entero o paso establecido o un grupo de números enteros o pasos, pero no la exclusión de ningún otro número entero o paso o grupo de números enteros o pasos.

Las formas de realización preferidas de la presente invención comprenden una carcasa que tiene un panel delantero y un panel trasero; una matriz de aplicación de muestras dispuesta entre el panel delantero y el panel trasero, adaptándose la carcasa para la aplicación de la muestra a la matriz de aplicación de muestras; una ventana de inserción de elemento de prueba en el alojamiento; y por lo menos un elemento de prueba insertable que, cuando se inserta, comunica con la matriz de aplicación de muestras. En formas de realización preferidas, por lo menos se proporciona una abertura en el alojamiento que está en comunicación directa con la matriz de aplicación de muestras. Esta abertura proporciona acceso a la matriz de aplicación de muestras para fines de aplicar la muestra.

En otras formas de realización, se proporcionan múltiples aberturas en el alojamiento para aplicación de muestra, facilitando así, por ejemplo, el ensayo de muestras recogidas en múltiples días en una sola prueba o, alternativamente, el ensayo de múltiples muestras recogidas en un solo día en una única prueba.

En una forma de realización importante de la presente invención, el dispositivo comprende dos o más elementos de prueba insertables, cada uno de los cuales, cuando se inserta, comunica con la matriz de aplicación de muestras. En esta realización, los elementos de prueba pueden ser los mismos o pueden ser diferentes. En el primer caso, pueden llevarse a cabo pruebas de réplica en la muestra o las muestras aplicadas a la matriz de aplicación de muestras. En el último caso, las diferentes pruebas pueden llevarse a cabo en la misma muestra muestras aplicadas a la matriz de aplicación de muestras. A modo de ejemplo, en pruebas FOB para descubrir el cáncer colorrectal, un elemento de prueba insertable puede ser un elemento de prueba FOB basada en guayaco, mientras que otro elemento de prueba insertable puede ser un elemento de prueba inmunocromatográfico.

El alojamiento está construido preferentemente de material flexible, aplastable y resistente al agua. Ejemplos de tal material incluyen materia prima para papel o tarjetas revestidos o materia prima para láminas de plástico delgadas. En realizaciones preferidas, el alojamiento está construido de una sola lámina de materia prima que pliega para crear una pluralidad de paneles o caras, incluyendo el panel delantero y el panel trasero. Alternativamente, múltiples bandas pueden laminarse juntas para construir una estructura similar.

La matriz de aplicación de muestras está dispuesta entre los paneles delantero y trasero y puede sujetarse a cualquiera de los dos paneles con un adhesivo no soluble. La selección de un material para la matriz de aplicación de muestras depende, en cierta medida, del tipo de muestra a aplicar. No obstante, generalmente hablando, se prefiere una matriz químicamente inerte de celdas abiertas (por ejemplo, plástico poroso, papel de filtro, fibra de vidrio). Tal matriz de celdas abiertas permite la desecación rápida y completa de la muestra in situ. La desecación rápida y completa minimiza la posibilidad de descomposición de la muestra debido, por ejemplo, a la presencia microbiana. Después de la aplicación de la muestra, el dispositivo de prueba se devuelve a un médico o laboratorio de ensayo para completar el procedimiento de prueba.

Dada la siguiente descripción, un experto en la materia reconocerá que el elemento o elementos de prueba pueden disponerse en un conjunto de realizaciones alternativas. Haciendo referencia a la realización inmunocromatográfica, por ejemplo, un elemento requerido de la tira de prueba es un material de fase sólida conductor de líquido en el que puede inmovilizarse un reactivo de detección (descrito anteriormente como el segundo reactivo de fijación específico). Este material de fase sólida es preferentemente nitrocelulosa. La nitrocelulosa es una matriz cargada en la que puede inmovilizarse un reactivo apropiadamente cargado, tal como un anticuerpo monoclonal, sin tratamiento químico anterior. Pueden usarse también alternativas tales como papel de filtro, pero se requiere acoplamiento químico (por ejemplo, acoplamiento CNBr) para sujetar un reactivo cargado, tal como un anticuerpo, a una matriz de este tipo.

Un material preferido de fase sólida conductor de líquido es una membrana de nitrocelulosa que tiene un tamaño de poro de por lo menos aproximadamente un micrómetro. Las membranas de nitrocelulosa mejor adaptadas para uso en conexión con la inmunocromatografía de este tipo tienen un tamaño de poro de aproximadamente 5-20 micrómetros. La selección de un tamaño de poro particular dicta el caudal. Dependiendo de la aplicación particular, puede estar indicado un caudal más rápido o más lento y se selecciona un material de fase sólida apropiado.

Para facilitar la manipulación, es deseable proporcionar un apoyo a la membrana de nitrocelulosa. Puede contarse una materia prima de lámina de plástico delgada (por ejemplo, lexan o poliestireno) para proporcionar un apoyo resistente al agua adecuado para el soporte sólido. Tal materia prima de lámina se selecciona de manera que no interfiera con la lectura de un resultado de prueba. Por ejemplo, se prefiere la selección de una materia prima de lámina blanca o clara. En una realización alternativa, el material de fase sólida conductor de líquido puede emparedarse entre tal materia prima de lámina resistente al agua.

Cuando se inserta en el alojamiento, el o cada elemento de prueba se diseña para comunicar con la matriz de aplicación de muestras. Aunque esta comunicación puede ser directa entre la matriz de aplicación de muestras y el soporte sólido conductor de líquido, en una forma de realización de inmunocromatografía se incorporan elementos adicionales. Por ejemplo, puede proporcionarse una almohadilla conjugada. En uso, la almohadilla conjugada está dispuesta entre la matriz de aplicación de muestras y el soporte sólido conductor de líquido del elemento de prueba. Como se discutirá con mayor detalle más adelante, la almohadilla conjugada proporciona una matriz para la deposición de un reactivo de detección marcado que es libre de migrar cuando se rehidrata (el primer reactivo de fijación específico en la breve revisión de la inmunocromatografía proporcionado anteriormente). La muestra es desecada dentro de la matriz de aplicación de muestras antes de la inserción del elemento de prueba. En el momento de la rehidratación durante el paso de prueba, el reactivo de detección marcado dentro de la almohadilla conjugada es también resuspendido y resolubilizado. Si está presente un analito en la muestra, el reactivo marcado se fija al analito y el complejo es llevado junto con el frente de disolvente a la zona de detección del elemento de prueba. Aunque la almohadilla conjugada puede comunicar directamente con el soporte sólido conductor de líquido y la matriz de aplicación de muestras, pueden incorporarse elementos adicionales como se expone en sección de la Descripción de Realizaciones Preferidas que sigue.

En el extremo del elemento de prueba, situado en posición distal con respecto a la matriz de aplicación de muestras cuando está en uso, se sujeta una almohadilla absorbente opcional, en comunicación con el material de fase sólida conductor de líquido. Esta almohadilla proporciona un sumidero de disolvente que provoca la migración de la muestra de líquido a través de la zona de detección. Es importante que la almohadilla absorbente tenga suficiente volumen para inducir la migración hasta el punto de que sustancialmente todo el reactivo de detección marcado no fijado sea llevado más allá de la zona de detección del elemento de prueba. Un experto en la materia reconocerá que una almohadilla absorbente es un elemento no esencial. La necesidad de este elemento puede obviarse, por ejemplo, extendiendo la longitud del material de fase sólida conductor de líquido más allá de la zona de detección, de tal modo que se lleve un volumen suficiente a través de la zona de detección.

En uso, se aplica una muestra a la matriz de aplicación de muestras, preferentemente a través de una abertura en el alojamiento que está en comunicación directa con dicha matriz. La muestra se aplica a la matriz de aplicación de muestras de una manera convencional. Por ejemplo, puede aplicarse un frotis fecal a la matriz de aplicación de muestras. Alternativamente, puede muestrearse agua de taza de inodoro utilizando una torunda absorbente. En el último procedimiento de muestreo, puede permitirse un breve periodo de tiempo para que la hemoglobina se difunda desde la deposición antes del muestreo o puede usarse la torunda para dispersar la deposición en el agua de taza de inodoro. La torunda se utiliza entonces para muestrear el agua y transferirla tocando o "pintando" la matriz de recogida de muestras. La muestra de líquido transferida es típicamente casi incolora.

Dependiendo de la naturaleza del analito, el dispositivo de prueba con la muestra aplicada puede almacenarse en esta forma durante un periodo de días, semanas o meses antes de someterse a ensayo. Para determinar la presencia de un analito, la muestra es rehidratada añadiendo una solución apropiada a la matriz de aplicación de muestras. La solución puede añadirse a través de la misma abertura o aberturas del alojamiento a través de las cuales fue aplicada la muestra. Sin embargo, en la mayoría de los casos, es preferible proporcionar una segunda abertura o serie de aberturas en el alojamiento a través de las cuales se aplica el disolvente. Esta segunda abertura o serie de aberturas está también en comunicación con la matriz de aplicación de la muestra. Preferentemente, el disolvente aplicado a través de una abertura de aplicación de disolvente debe migrar a través de la región de la matriz de aplicación de muestras en la que se aplicó realmente la muestra, antes de alcanzar el punto en la matriz de aplicación de muestras que comunica con el elemento de prueba.

El reactivo de detección marcado puede introducirse en el ensayo de inmunocromatografía en una variedad de formas. Por ejemplo, el reactivo de detección marcado puede solubilizarse en la solución utilizada para rehidratar los contenidos de la misma matriz de aplicación de muestras antes de la resolubilización de los componentes de la muestra. Alternativamente, como se discute anteriormente, el reactivo de detección marcado puede introducirse en solución en la almohadilla conjugada y desecarse in situ. En esta realización, el reactivo de detección marcado es resolubilizado cuando la solución de resolubilización migra de la matriz de aplicación de muestras al elemento de prueba. Todavía en otra realización, puede añadirse una solución que contiene el reactivo de detección marcado a la matriz de aplicación de muestras antes de la aplicación de la muestra. Esta solución es desecada a continuación in situ. En esta forma de realización, el analito de interés, si está presente, y el reactivo de detección marcado se solubilizarán a partir de la matriz de aplicación de muestras en el momento de la realización de la prueba.

El uso de una almohadilla conjugada se prefiere en la mayoría de las realizaciones descritas en el párrafo anterior. La adición del reactivo de detección marcado a la solución de resolubilización antes de la resolubilización de la muestra tiene la desventaja de utilizar el reactivo de detección caro (que podría requerir almacenamiento a 4ºC) de una manera ineficiente. Con respecto a la desecación in situ del reactivo de detección marcado en la almohadilla de aplicación de muestra antes de la aplicación de la muestra, esto resultaría en el establecimiento de un dispositivo de prueba en el que el elemento de alojamiento está dedicado a un ensayo particular. Uno de los muchos beneficios del dispositivo descrito es el hecho de que el alojamiento (junto con otros elementos del dispositivo, excluyendo el elemento de prueba) es totalmente genérico. Así, el componente de alojamiento de prueba del dispositivo de prueba puede venderse en masa y almacenarse según sea necesario para cualquiera de una gran variedad de requisitos de prueba. El componente específico de prueba relativamente caro es el elemento de prueba que puede seleccionarse para una necesidad particular y utilizarse junto con el alojamiento genérico.

Preferentemente, el reactivo de detección marcado es un anticuerpo monoclonal o policlonal específico para un primer epitopo del analito de interés acoplado a un marcador detectable. El marcador detectable puede acoplarse al anticuerpo por cualquiera de las técnicas aplicables conocidas en el ramo, incluyendo, por ejemplo, enlace covalente y adsorción pasiva.

El marcador detectable puede ser un marcador directo o indirecto. Un marcador directo es un marcador fácilmente visible en su estado natural, a simple vista o con ayuda de dispositivos ópticos. Un marcador que es visible sólo en presencia de estimulación externa, tal como luz ultravioleta, es considerado también como un marcador directo. Ejemplos de marcadores directos incluyen soles de colorante (por ejemplo, carbono coloidal), soles metálicos (por ejemplo, oro y hierro), partículas fluorescentes y partículas de látex coloreadas.

Los marcadores indirectos requieren la adición de uno o más reactivos de revelado, tales como sustratos, para facilitar la detección. Tales marcadores incluyen, por ejemplo, enzimas tales como fosfatasa alcalina y peroxidasa de rábano.

El reactivo de captura inmovilizada es también típicamente un anticuerpo monoclonal o policlonal que es específico para un segundo epitopo o gama de epitopos en el analito de interés. Así, el analito presente en la muestra, fijado o no por el reactivo de detección, es fijado por el reactivo de fijación inmovilizado en la zona de detección. En un caso en el que se emplee un marcador directo, aparece una línea visible en el soporte sólido conductor de líquido a medida que el marcador fijado se acumula en la zona de detección. La aparición de esta línea puede ser el diagnóstico de la presencia del analito de interés en la muestra.

Una zona de control opcional puede integrarse también en el elemento de prueba. La función de una zona de control es transportar una señal no relacionada hasta el usuario, que indica solamente que el procedimiento de prueba está completo y que ha tenido lugar como se esperaba la interacción de unión que resulta en la señal no relacionada detectable. Por ejemplo, la zona de control puede comprender un anticuerpo policlonal "antirratón" inmovilizado en el material de fase sólida conductor de líquido, preferentemente aguas abajo de la zona de detección. Suponiendo que el reactivo de detección es un anticuerpo monoclonal de murina unido a un marcador detectable, los reactivos de detección no fijados en la zona de detección a través de una interacción de emparedado que implica el analito de interés se fijarán finalmente en la zona de control. En ausencia de una señal en la zona de detección, una señal de zona de control indicaría al usuario que, por ejemplo, la muestra no contenía nada que resultara en una interferencia general con un ensayo inmunológico. Por ejemplo, puede imaginarse que extremos de pH o de concentración de sal podrían resultar en una interferencia general a través de cambios de conformación o destrucción física en uno o más de los participantes en la interacción inmunológicamente basada que se desea detectar. La inclusión de una zona de control funciona para proporcionar un grado de confidencia con respecto a tales variables.

Se determina por adelantado que el analito de interés es uno que es diagnóstico de una condición particular. Por ejemplo, en conexión con pruebas POB, el analito de interés es preferentemente hemoglobina humana.

El procedimiento y el aparato de la presente invención son aplicables a la detección de analitos en humanos y otros animales. Otros animales incluyen primates, ganado (por ejemplo, vacas, ovejas, caballos, burros, cerdos), animales de pruebas de laboratorio (por ejemplo, conejos, ratones, ratas, cobayas, hámsters), animales de compañía (por ejemplo, perros, gatos) y animales salvajes cautivos. La presente invención se extiende también a la detección de analitos en plantas (por ejemplo, monocotiledóneas y dicotiledóneas) y otras formas de vida (por ejemplo, microbios, levaduras, hongos, mohos). La presente invención puede usarse también para detectar analitos en ubicaciones geográficas e industriales, incluyendo tierra, océanos, ríos, regiones de almacenamiento de agua, vertederos de desechos tóxicos, lugares de edificación, áreas de minería (por ejemplo, carbón, bauxita, uranio, grafito, entre muchos otros), así como en el aire. El estado de salud de los humanos y otros animales o plantas u otras formas de vida puede deducirse o determinarse por la presencia o nivel de analito o por la ausencia del analito. El estado medioambiental puede verificarse también, tal como determinando la presencia de contaminantes en diversas ubicaciones geográficas o industriales.

Breve descripción de los dibujos

La figura 1 es una vista en perspectiva por la parte delantera del dispositivo de la presente invención.

La figura 2 es una vista en perspectiva por la parte trasera del dispositivo de la presente invención.

La figura 3 es una vista en sección transversal explosionada del elemento de prueba de la presente invención.

La figura 4 es una vista en sección transversal del dispositivo de la presente invención tomada a lo largo de la línea 4-4 de la figura 2B.

La figura 5 es una vista en planta superior del dispositivo de la presente invención, mostrado en forma plegada previamente.

La figura 6 es una vista en planta superior de una forma de realización alternativa del dispositivo de la presente invención, mostrado en forma plegada previamente.

Descripción de formas de realización preferidas

Únicamente a título de ejemplo, ciertas formas de realización preferidas de la invención se describirán a continuación con detalle haciendo referencia a los dibujos adjuntos.

Haciendo referencia a la figura 1, el dispositivo de prueba de la presente invención se muestra como configurada para la detección de sangre oculta fecal en deposiciones por procedimientos immunocromatográficos. La figura 1A muestra el dispositivo de la presente invención con una cubierta de panel delantero (10) que comprende dos solapas de cubierta de aplicación de muestra (11 y 13) en la posición cerrada. Elevando la solapa (11), una paciente expone una primera abertura (14) de aplicación de muestra en el panel delantero (17) del dispositivo (figura 1B). La primera abertura de aplicación de muestra está en comunicación con una matriz de aplicación de muestras (18) (mostrada en la figura 4). La muestra se aplica a la matriz de aplicación de muestras (18) a través de la abertura (14) de aplicación de muestra. Después de la aplicación de la muestra, la solapa de cubierta (11) se cierra y se sella. Para esta finalidad se facilita un adhesivo sensible a la presión con un tira de respaldo retirable (19). El procedimiento se repite a continuación en un segundo día consecutivo y se aplica la muestra a través de la abertura de aplicación de muestra situada detrás de la solapa (13). Aunque la forma de realización mostrada en las figuras 1A y 1B tiene solamente dos aberturas de aplicación de muestra, esto está destinado a ser no limitativo. El dispositivo de prueba sellado se enviado a continuación al despacho del médico o a un laboratorio de ensayo para la determinados de los resultados
de la prueba.

Tras la recepción, un técnico en el despacho del médico o en el laboratorio de ensayo abre la ventana de prueba (25) situada en la cubierta (23) del panel trasero como se muestra en la figura 2A. Se proporcionan perforaciones para abrir o retirar la ventana de prueba con el fin de facilitar el acceso. La apertura o retirada de la ventana de prueba (25) revela varias aberturas que caracterizan el panel trasero (16). Éstas incluyen aberturas de aplicación de disolvente (27 y 29) y la abertura de inserción (31) del elemento de prueba. Un elemento de prueba (33) se inserta a continuación en la abertura de inserción (31) del elemento de prueba. El elemento de prueba (33) contiene un reactivo que permite la detección del analito de interés en la muestra.

El elemento de prueba se muestra en sección transversal y en despiece ordenado en la figura 3. El elemento de prueba está compuesto de un material de fase sólida conductor de líquido (35) que es preferentemente una membrana de nitrocelulosa. Para facilitar la manipulación, se proporciona una lámina posterior (39). Plásticos no absorbentes tales como lexan o poliestireno se prefieren como materiales de lámina posterior. Las realizaciones preferidas incluyen también una o más capas de material conductor de líquido de alta capacidad denominadas en la presente memoria "capas de puenteo". Una capa de puenteo (38) se muestra en la figura 3. En la forma de realización de la figura 3, una almohadilla conjugada (37) está dispuesta entre la capa de puenteo (38) y el material de fase sólida conductor de líquido (35). Como se expone anteriormente en conexión con realizaciones inmunocromatográficas, la almohadilla conjugada contiene un reactivo de detección marcado desecado in situ. Una almohadilla absorbente (41) se proporciona también como un componente del elemento de prueba (33). La almohadilla absorbente (41) funciona como un salpicadero de disolvente, induciendo así la migración del frente de disolvente. Los elementos mostrados en la figura 3 se montan utilizando un adhesivo no soluble en agua. Será evidente que la superposición de elementos tales como la capa de puenteo (38) y la almohadilla conjugada (37) crea un efecto de acuñamiento progresivo que da como resultado un buen contacto conductor de líquido entre la matriz de aplicación de muestras (18) y el elemento de prueba (33), después de la inserción del elemento de prueba (33) en la abertura de inserción (31) del elemento de prueba. El reactivo de captura inmovilizado se sujeta al material de fase sólida conductor de líquido, creando así una zona de detección (43) en el elemento de prueba (33).

La figura 4 es una sección transversal del dispositivo con el elemento de prueba (33) insertado. La figura 4 muestra muchos de los elementos previamente descritos, incluyendo, por ejemplo, el elemento de prueba (33) y los componentes individuales del mismo (almohadilla absorbente (41), material de fase sólida conductor de líquido (35), almohadilla conjugada (37), capa de puenteo (38) y lámina posterior 39); la solapa de cubierta de aplicación de muestra (13); el panel delantero (17) con la abertura de aplicación de muestra (15); el panel trasero (16); la cubierta (23) de panel trasero con la ventana de prueba (25); y la matriz de aplicación de muestras (18). Asimismo, se muestra un elemento opcional no descrito previamente. Este elemento opcional se denomina panel espaciador (42). El panel espaciador, que es muestra con mayor detalle en la figura 5, funciona para crear un espacio hueco de inserción de elemento de prueba entre la matriz de aplicación de muestras (18) y el panel delantero (17) en el dispositivo montado. El panel espaciador (42) incluye una segunda abertura de inserción (44) del elemento de prueba y un punto en relieve (48), mostrado también en la figura 5. Como se muestra en la figura 4, cuando se inserta el elemento de prueba (33), ocupa este espacio hueco de inserción del elemento de prueba. El acuñamiento progresivo mencionado anteriormente en conexión con la figura 3 resulta en un buen contacto conductor de líquido entre la matriz de aplicación de muestras (18) y el elemento de prueba (33).

Haciendo referencia de nuevo a la figura 4, después de la inserción del elemento de prueba, el técnico rehidrata la muestra añadiendo un disolvente a la matriz de aplicación de muestras (18) por medio de la abertura de disolvente (29) en el panel trasero (16). El disolvente solubiliza los componentes de la muestra en la matriz de aplicación de muestras (18) y lleva los componentes solubilizados a través de la capa de puenteo 38 y hacia la almohadilla conjugada (37) con el frente de disolvente. En la almohadilla conjugada (37), se solubiliza el reactivo de detección marcado y se fija al analito si está presente en la muestra. El frente de disolvente y cualesquiera materiales solubles llevados con el frente de disolvente continúan después hasta el material de fase sólida conductor de líquido (35). Si un analito está presente en la muestra, se forma en la zona de detección (43) un complejo visiblemente detectable que comprende analito, reactivo de detección marcado y reactivo de captura inmovilizado.

En una forma de realización preferida, la cubierta 10 de panel delantero, la cubierta (23) de panel trasero, el panel delantero (17), el panel trasero (16) y el panel espaciador (42) se producen a partir de una única lámina de materia prima por corte y el plegado apropiados. Haciendo referencia a la figura 5, se proporciona una lámina generalmente rectangular de materia prima. Las aberturas (27 y 29) de aplicación de disolvente y una abertura de inserción (31) del elemento de prueba son cortadas en el panel trasero (16). Las aberturas de aplicación de muestra (14 y 15) se cortan en el panel delantero (17). El contorno de la ventana de diagnóstico (25) se perfora en la cubierta (23) de panel trasero. La cubierta (10) de panel delantero se corta para formar dos solapas (11 y 13) que sellarán las aberturas de aplicación de muestra después de la aplicación de la muestra. Se proporciona el adhesivo sensible a la presión para sellar las solapas de cubierta (11 y 13) de aplicación de muestra (119'). Se corta el panel espaciador (42) para proporcionar una segunda abertura de inserción (44) del elemento de prueba. Además, el panel espaciador (42) está opcionalmente estampado en relieve en puntos estampados en relieve (46 y 48). Como alternativa a los puntos estampados en relieve (46 y 48), los elementos espaciadores opcionales pueden sujetarse al panel espaciador (42) utilizando un adhesivo. La función de los puntos estampados en relieve opcionales (46 y 48) o los elementos espaciadores opcionales alternativos es incrementar el espacio hueco de inserción del elemento de prueba entre la matriz de aplicación de muestras (18) y el panel delantero (17) en el dispositivo montado, si es deseable. El hecho de que se incluyan o no tales elementos opcionales depende, por ejemplo, de los espesores relativos de la matriz de aplicación de muestras (18) y de la materia prima a partir de la cual se produce el alojamiento. Se hacen los pliegues a lo largo de las líneas D-D, C-C, B-B y A-A para formar el alojamiento. Antes del plegado, se posiciona apropiadamente la matriz de aplicación de muestras y se aplica adhesivo en ubicaciones apropiadas para ayudar a mantener la relación de elementos en el alojamiento plegado.

En la figura 6 se muestra una forma de realización alternativa del dispositivo de la presente invención como se describe con detalle en relación con las figuras 1 a 5, que incorpora más de un elemento de prueba insertable. En esta forma de realización, el panel trasero (16) está provisto de dos aberturas de inserción (31, 32) del elemento de prueba y la matriz de aplicación de muestras (18) está configurada para proporcionar un buen contacto conductor de líquido entre la matriz de aplicación de muestras (18) y los elementos de prueba individuales (33) insertados en cada abertura (31, 32). El panel espaciador (42) incluye dos aberturas de inserción (44, 45) del elemento de prueba que corresponden en posición a las aberturas (31, 32), de modo que cada uno de los elementos de prueba individuales (33) ocupa el espacio hueco del elemento de prueba como se ha descrito previamente, y está en un buen contacto condutor de líquido con la matriz de aplicación de muestras. Por supuesto, pueden configurarse dispositivos similares para uso con más de dos elementos de prueba insertables. Como se describe previamente, en esta realización alternativa, los dos o más elementos de prueba insertables (33) pueden los mismos (proporcionando pruebas de réplica de la misma muestra aplicada a la matriz de aplicación de muestras), o pueden ser diferentes elementos de prueba (para proporcionar diferentes pruebas de la misma muestra aplicada a la matriz de aplicación de muestras). En una forma de realización particularmente preferida para uso en pruebas FOB, un elemento puede ser un elemento de prueba basada en guayaco y otro elemento puede ser un elemento de prueba inmunocromatográfico.

Además de la acumulación y agregación de muestra de origen temporal discreto (es decir, muestras tomadas en días separados) como se discute anteriormente, la presente invención puede utilizarse ventajosamente para acumular y agregar muestras de origen espacial y/o biológico discreto.

Un ejemplo de muestras espacialmente distintas incluye muestras de suelo y/o agua subterránea obtenidas a partir de diversas ubicaciones y/o fuentes geográficas. De esta manera, además de las aplicaciones de diagnósticos médicos descritas anteriormente, la presente invención puede usarse en pruebas no médicas, tal como para detectar toxinas medioambientales.

Ejemplos de muestras biológicamente distintas incluyen muestras de orina, sangre, sudor y saliva que pueden ser particularmente útiles en aplicaciones tales como selección de fármacos en las que un analito particular puede estar presente en una o más de tales muestras.

Las muestras pueden aplicarse sustancialmente de cualquier forma, es decir, líquidas o secas, y pueden aplicarse a una o más ubicaciones de la matriz de aplicación de muestras 18. Por ejemplo, pueden estar provistas varias aberturas de aplicación de muestra (14, 15, etc.), aplicándose una sola muestra a cada abertura. Alternativamente, una pluralidad de muestras puede aplicarse a una sola abertura de aplicación. A este respecto, pueden mezclarse muestras de líquidos en un dispositivo independiente (es decir, un tubo de prueba) antes de la aplicación a una abertura de muestra. Análogamente, puede ser posible aplicar múltiples muestras de líquido secuencialmente a un única abertura de aplicación. En un ejemplo de este enfoque, pueden permitirse que las muestras de líquido se sequen in situ antes de la aplicación de muestras subsiguientes.

Las muestras de líquido subsiguientes pueden aplicarse también a la matriz sin esperar que se sequen las muestras de líquido aplicadas con anterioridad, tal como con un gotero para los ojos, etc., con lo que las muestras de líquido serán absorbidas por la matriz. Estas muestras de líquido mezcladas pueden desecarse in situ seguidamente. Un experto en la materia reconocerá que el número de muestras capaces de ser aplicadas de esta manera está limitado por la porosidad y el volumen de la matriz, es decir, no pueden aplicarse muestras adicionales una vez que la matriz está completamente saturada.

Análogamente, las muestras secas o sólidas, por ejemplos muestras secadas en discos de papel, pueden acumularse apilando los discos dentro de una única abertura. La aplicación siguiente de líquido para hidratar la matriz solubiliza las muestras, permitiéndolas pasar a través del material de disco de papel poroso y agregarse de la manera descrita anteriormente.

El uso de la invención descrita de este modo permite ventajosamente la identificación de analitos intermitentemente expresados como en el caso de una prueba FOB multidía para pérdida de sangre intermitente. Además, la invención permite una selección exitosa en el caso de que los niveles de analito sean bajos, quizá por debajo del umbral de detección para una sola muestra, agregando la señal generada por múltiples muestras para llevarla hasta niveles detectables.

Los expertos en la materia reconocerán que cualquier combinación de las muestras antes mencionadas, tal como cualquier combinación de muestras líquidas y secas, de distinto origen temporal, espacial, biológico y/o de origen no distinto, puede aplicarse a una sola ubicación o a múltiples ubicaciones en la matriz de aplicación de muestras sin apartarse del espíritu ni del alcance de la presente invención.

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Ejemplificación Construcción del dispositivo de prueba

Se fabricaron elementos de prueba por laminación de los siguientes componentes sobre un soporte de plástico blanco (poliestireno de alto impacto, 0,5 mm) revestido en una superficie con adhesivo (3M, St. Paul, MN, cinta de transferencia #465), como se muestra en la figura 3:

1): membrana de nitrocelulosa (Millipore, Bedford, MA, Tipo STHF0200, 18 mm) cargada con anticuerpo de hemoglobina antihumana monoclonal a razón de 2 mg/ml;

2): absorbente para almohadilla absorbente (Ahlstrom, Mt. Holly Spring, PA, Grade 904, 18 mm);

3): almohadilla conjugada (General Polymeric, Reading, PA, cinta cortada de UHMWPE de 25 micrones, 10 mm) infiltrada y secada in situ con anticuerpo de hemoglobina antihumana policlonal conjugada con oro coloidal (EY Laboratories, San Mateo, CA); y

4): papel conductor para capa de puenteo (Ahlstrom, Grado 1281).

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Tras la laminación, la banda se cortó a intervalos de 6 mm para formar elementos de prueba individuales.

Se fabricaron alojamientos (73 mm x 76.2 mm) como se representa en la figura 5 a partir de cartón SBS resistente al agua (polirrevestido). La matriz de aplicación de muestras (Porex, Fairburn, GA, HDTE Tipo 4588) se aplicó al panel trasero del alojamiento con adhesivo de transferencia (3M, #465).

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Ejemplo 1

Se diluyó sangre human 1:10.000 y 1:100.000 en agua destilada. Para cada una de las diluciones de sangre y para una muestra de control de agua destilada, se añadieron 25 \mul a cada una de las dos aberturas de aplicación de muestra de un dispositivo de prueba y se permitió que se secara el aire durante dos horas. Se añadieron 100 \mul de reactivo reconstituyente (P.B.S. conteniendo 0,5 % albúmina de suero bovino, 1% de Triton X100 y 0,1% de ázida de sodio) a cada abertura de aplicación de disolvente y se insertó una tira de prueba. Se reveló una línea roja clara en la tira de prueba con las dos diluciones de sangre, es decir, detección posible, mientras que la muestra de agua no dio ninguna señal detectable (es decir, un resultado negativo).

En un experimento por lo demás idéntico, se añadieron las mismas diluciones de sangre (25 \mul para cada una) a portaobjetos Hemoccult (SmithKline Diagnostics, Palo Alto, CA) y una almohadilla de prueba ColoCare (Helena Laboratories, Beaumont, TX) (un dispositivo para detectar sangre en el agua de la taza del inodoro que se añade directamente a la taza del inodoro).

Resultados

1

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Ejemplo 2

Se añadió sangre humana fresca (50 \mul) al agua en una taza de inodoro (~2L). Después de la dispersión total de la sangre añadida, se muestreó el agua con una formada de Dacron (Hardwood products, Guildford, ME) y se transfirió a un tarjeta Hemoccult y a la matriz de aplicación de muestras del dispositivo de la presente invención. Después del muestreo, se añadió una almohadilla ColoCare a la taza del inodoro y se observó para detectar cualquier cambio en el color.

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Resultados

El dispositivo de la presente invención detectó fácilmente la sangre, mientras que el agua tomada de la taza del inodoro antes de la adición de la sangre dio una prueba negativa. Las pruebas Hemoccult y ColoCare permanecieron claramente negativas con el agua a la que se había añadido la sangre.

Claims

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```
1. Dispositivo de prueba para la identificación de un analito de interés en una muestra, que comprende:

a)

un alojamiento que presenta una matriz de aplicación de muestras para recibir una muestra, y

b)

por lo menos un elemento de prueba insertable que, al insertarse en el alojamiento, establece una comunicación directa conductora de líquido con la matriz de aplicación de muestras de tal modo que los componentes de la muestra sean llevados de la matriz de aplicación de muestras al elemento o elementos de prueba.
```
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```
2. Dispositivo según la reivindicación 1, en el que la matriz de aplicación de muestras es para:
a)
i.
\hskip0.7cm
recibir una muestra que contiene líquido;
ii.

desecar la muestra que contiene líquido in situ; y

iii.

rehidratar la muestra desecada que contiene líquido para transferirla a un elemento de prueba; y

b)

cuando dicho por lo menos un elemento de prueba insertable establece comunicación directamente conductora de líquido con la matriz de aplicación de muestras tras la rehidratación, dichos componentes resolubilizados o resuspendidos de la muestra se conducen desde la matriz de aplicación de muestras al elemento o elementos de prueba.
```
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```
3. Dispositivo de prueba según la reivindicación 1 para la identificación de un analito de interés, en el que el alojamiento comprende asimismo:

a) un panel delantero que presenta por lo menos una abertura de aplicación de muestra en el mismo;

b) un panel trasero que presenta por lo menos una abertura de aplicación de disolvente en el mismo,

c) una matriz de recogida de muestras dispuesta entre el panel trasero y el panel delantero, estando la matriz de recogida de muestras en comunicación con las aberturas de aplicación de muestra y de disolvente de los paneles delantero y trasero.
```
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```
4. Dispositivo de prueba según la reivindicación 3, en el que el o cada elemento de prueba insertable comprende un reactivo o reactivos que permiten la detección del analito de interés.
5. Dispositivo de prueba según la reivindicación 3, que comprende asimismo una cubierta de panel delantero y una cubierta de panel trasero que, cuando se cierran, restringen el acceso a la abertura de aplicación de muestra y a la abertura de aplicación de disolvente.
6. Dispositivo de prueba según la reivindicación 5, que comprende asimismo un panel espaciador dispuesto entre el panel delantero y el panel trasero, estando diseñado dicho panel espaciador para crear un espacio hueco de inserción de elemento de prueba entre la matriz de aplicación de muestras y el panel delantero en el dispositivo montado.
7. Dispositivo de prueba según la reivindicación 1, en el que:

a) la matriz de aplicación de muestras está adaptada para recibir una pluralidad de muestra en ubicaciones discretas sobre la misma y para agregar las muestras;

b) tras la inserción de dicho por lo menos un elemento de prueba y de la hidratación, los componentes solubilizados o suspendidos de dicha pluralidad de muestras se conducen desde dicha matriz de aplicación de muestras a dicho elemento o elementos de prueba, pudiendo realizarse una única prueba para determinar simultáneamente la presencia del analito de interés en una pluralidad de muestras que tienen un origen discreto.
```
\vskip1.000000\baselineskip
```
8. Dispositivo de prueba según la reivindicación 7, en el que dicha matriz de aplicación de muestras está adaptada para recibir una muestra seca.
9. Dispositivo de prueba según la reivindicación 1, en el que:

a) el alojamiento presenta por lo menos un orificio de muestra que puede abrirse y sellarse selectivamente para admitir y mantener de manera sellada una pluralidad de muestras en el mismo, y por lo menos un orificio de prueba adaptado para la inserción del elemento o elementos de prueba en el mismo;

b) la matriz de aplicación de muestras está dispuesta dentro de dicho alojamiento en comunicación con dicho por lo menos un orificio de muestra y dicho por lo menos un orificio de prueba y está adaptada para:

i.

recibir la pluralidad de muestras en la misma; y

ii.

agregar la pluralidad de muestras, estando adaptadas la pluralidad de muestras de origen discreto para aplicarse y sellarse dentro de dicho dispositivo de prueba y para ensayarse a continuación en el agregado;

c) dicho por lo menos un elemento de prueba insertable está adaptado para su inserción en el alojamiento a través de dicho orificio de prueba o de cada uno de dichos orificios de prueba para ensayar la pluralidad de muestras.
```
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```
10. Dispositivo de prueba según la reivindicación 9, en el que dicha matriz de aplicación de muestras está adaptada para recibir la pluralidad de muestras en una única ubicación de la misma.
11. Dispositivo de prueba según la reivindicación 10, en el que la pluralidad de muestras son mezcladas unas con otras antes de ser recibidas por dicha matriz.
12. Dispositivo de prueba según la reivindicación 9, en el que dicha matriz de aplicación de muestras está adaptada para recibir la pluralidad de muestras en ubicaciones discretas de la misma, estando adaptada dicha matriz para agregar las muestras tras dicha inserción del elemento o elementos de prueba.
13. Dispositivo de prueba según la reivindicación 9, en el que dicho por lo menos un orificio de muestra comprende asimismo una pluralidad de orificios de muestra que pueden abrirse y sellarse selectivamente para admitir y mantener de manera sellada la pluralidad de muestra en los mismos.
14. Dispositivo de prueba según la reivindicación 8, en el que dicha matriz de aplicación de muestras está adaptada asimismo para la hidratación de la pluralidad de muestras.
15. Dispositivo de prueba según la reivindicación 14, en el que por lo menos una de la pluralidad de muestras contiene líquido y dicha matriz de aplicación de muestras está adaptada asimismo para:

desecar dicha por lo menos una de la pluralidad de muestras in situ;

rehidratar dicha por lo menos una muestra desecada; y

agregar los componentes resolubilizados o resuspendidos de dicha por lo menos una muestra con por lo menos otra de la pluralidad de muestras para ser ensayadas.
```
\vskip1.000000\baselineskip
```
16. Dispositivo de prueba según la reivindicación 1 para la identificación de un analito de interés de una pluralidad de muestras, conteniendo líquido por lo menos una de la pluralidad de muestras, estando adaptada la matriz de aplicación de muestras para:

recibir la pluralidad de muestras en ubicaciones discretas de la misma;

desecar dicha por lo menos una de la pluralidad de muestras in situ;

hidratar la pluralidad de muestras; y

agregar componentes solubilizados o suspendidos de la pluralidad de muestras de líquido para el análisis de analito, pudiendo realizarse una única prueba para determinar simultáneamente la presencia del analito de interés en una pluralidad de muestras que tienen origen discreto.
```
\vskip1.000000\baselineskip
```
17. Dispositivo de prueba según la reivindicación 1 ó 3, en el que la o cada tira de prueba insertable es una tira de prueba inmunocromatográfico, que comprende preferentemente un material de fase sólida conductor de líquido fijado a un material de soporte.
18. Dispositivo de prueba según la reivindicación 17, en el que la o cada tira de prueba inmunocromatográfica comprende una zona de contacto que, tras la inserción, entra en contacto con la matriz de recogida de muestras y conduce un frente de disolvente desde la matriz de recogida de muestras a través de una zona de detección que contiene una reactivo de fijación específico, siendo la zona de detección espacialmente distinta de la zona de contacto.
19. Dispositivo de prueba según la reivindicación 18, en el que el reactivo de fijación especifico en la zona de detección es un anticuerpo específico para un componente de sangre humana, preferentemente hemoglobina o un fragmento de la misma.
```
\newpage
```
20. Procedimiento para conducir un ensayo con la finalidad de identificar un analito de interés en una muestra, que comprende:

a)

proporcionar un dispositivo de prueba que comprende un alojamiento que presenta una matriz de aplicación de muestras para recibir una muestra;

b)

aplicar una muestra a la matriz de aplicación de muestras;

c)

insertar en el dispositivo de prueba por lo menos un elemento de prueba insertable que, al insertarse en el alojamiento, establece comunicación directa conductora de líquido con la matriz de aplicación de muestras, de tal modo que los componentes de la muestra sean conducidos desde la matriz de aplicación de muestras al elemento o elementos de prueba; y

d)

determinar los resultados de la prueba.
```
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```
21. Procedimiento según la reivindicación 20, que presenta las características definidas según cualquiera de las reivindicaciones 2 a 18.
22. Procedimiento según la reivindicación 20, en el que el analito de interés es una molécula interactuante inmune, preferentemente un anticuerpo, antígeno, hapteno, inmunoglobulina o molécula de fijación de antígeno derivada de células T, o una molécula capaz de interacción con los mismos.
23. Procedimiento según la reivindicación 22, en el que el analito de interés es un antígeno o hapteno que es un indicador de diagnóstico de un estado de enfermedad en un organismo, preferentemente un humano.
24. Procedimiento según la reivindicación 23, en el que el estado de enfermedad se selecciona de entre el grupo constituido por cáncer e infección patógena.
25. Procedimiento de prueba para detectar la presencia de un analito de interés utilizando el procedimiento según la reivindicación 20, en el que el analito de interés es un antígeno o hapteno que es un contaminante de alimentos o de agua.
26. Procedimiento según la reivindicación 23, en el que el estado de enfermedad está caracterizado porque comprende la pérdida de sangre gastrointestinal oculta, preferentemente en el que el analito de interés es hemoglobina o un fragmento de la misma.
27. Procedimiento según la reivindicación 19, en el que la muestra es material fecal.
28. Procedimiento según la reivindicación 26, en el que el material fecal se obtiene muestreando el agua de la taza de un inodoro.
29. Procedimiento según la reivindicación 20, que comprende:

a)

proporcionar un dispositivo de prueba según se define en la reivindicación 3;

b)

aplicar una muestra que contiene líquido a la matriz de aplicación de muestras;

c)

insertar en el dispositivo de prueba por lo menos un elemento de prueba insertable en comunicación conductora de líquido con la matriz de aplicación de muestras, comprendiendo el o cada elemento de prueba las tiras de prueba según se define en las reivindicaciones 16 y 17.

d)

aplicar disolvente a la matriz de aplicación de muestras; y

e)

determinar los resultados de la prueba observando resultados inmunocromatográficos.
```
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```
30. Procedimiento según la reivindicación 20, en el que la muestra es un fluido corporal o un excremento.
31. Procedimiento según la reivindicación 20 para ensayar una pluralidad de muestras utilizando el dispositivo de prueba de la reivindicación 8, en el que la pluralidad de muestras son de origen temporal discreto, u origen espacial discreto u origen biológico discreto, y en el que se agregan la pluralidad de muestras y se utiliza una única prueba para determinar simultáneamente la presencia del analito de interés en la pluralidad de muestras.
32. Procedimiento según la reivindicación 20, en el que se aplican una pluralidad de muestras a la matriz, utilizando de este modo una única prueba para determinar simultáneamente la presencia del analito de interés en la pluralidad de muestras.
```
\newpage
```
33. Procedimiento según la reivindicación 32, en el que la pluralidad de muestras son hidratadas para agregar componentes de la pluralidad de muestras para el análisis de analitos.
34. Procedimiento según la reivindicación 32, en el que se mezclan las muestras antes de aplicarlas a la matriz.
35. Procedimiento según la reivindicación 34, en el que se mezclan las muestras en un estado líquido.
36. Procedimiento según la reivindicación 34, en el que se mezclan las muestras en un estado seco.
37. Procedimiento según la reivindicación 34, en el que se apila la pluralidad de muestras, en un estado seco, en la matriz de aplicación de muestras.