MXPA00003333A - Aparato y metodo para deteccion de analitos - Google Patents
Aparato y metodo para deteccion de analitosInfo
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Abstract
Se describe un dispositivo y métodos de prueba para la identificación de un analito de interés en una muestra. En una modalidad preferida, el dispositivo de prueba incluye un panel frontal que tiene por lo menos una abertura para aplicación de muestras;un panel trasero que tiene por lo menos una abertura para aplicación de solventes;una matriz para recolección de muestras dispuesta entre el panel trasero y el panel frontal, la matriz para recolección de muestras estando en comunicación con las aberturas para aplicación de muestras y solventes de los paneles frontal y trasero;y por lo menos una tira de prueba insertable que contiene un reactivo que permite la detección deíanalito de interés.
Description
APARATO Y MÉTODO PARA DETECCIÓN DE ANALITOS
CAMPO DE LA INVENCIÓN Esta invención se refiere a un aparato y método para la detección directa o indirecta de un analito en una muestra, particularmente, pero no exclusivamente para la detección de un analito en una muestra biológica. La presente invención es útil particularmente para determinar el estado de salud de un humano o un animal o una planta u otra forma de vida o el estado ambiental de una ubicación geográfica o industrial mediante el establecimiento o ausencia de un analito.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Se han desarrollado una variedad de dispositivos de diagnóstico para la detección de un analito en una muestra. En esos dispositivos en los cuales las funciones de recolección y prueba de muestra no están vinculadas, la transferencia de la muestra recogida al aparato de prueba introduce una fuente de error potencial. En esos dispositivos en los cuales las funciones de recolección y prueba están vinculadas, los dispositivos están dedicados en su totalidad a la detección de un analito en particular y no son adaptables fácilmente a un amplio rango de detección de analitos. La cuestión de auto-diagnosis de enfermedades serias tal como cáncer o SIDA ha sido considerada finalmente. Hay un consenso general de que la diagnosis de tales estados de enfermedad no es preferida. Más bien, se acepta generalmente que una diagnosis positiva para tal estado de enfermedad debe ser comunicado por un doctor, junto con información relativa a la disponibilidad de servicios de orientación. Con respecto a sistemas para mamíferos (v. g. , humanos) las muestras adecuadas para análisis que usa el dispositivo de prueba de la presente invención incluyen fluidos biológicos (v. g., sangre, orina, semen, saliva, etc.) o excrementos. Tales fluidos biológicos pueden llevar una variedad de analitos, cuya presencia puede ser diagnosticada para un estado de enfermedad en particular. Un ejemplo importante de un estado de enfermedad que está caracterizado por la presencia de un analito específico de la enfermedad en un fluido biológico es el Síndrome de Inmunodeficiencia Adquirida (SIDA). Usando el dispositivo y método de la presente invención, la presencia de anticuerpos específicos para ei Virus de Inmunodeficiencia de Humanos (VIH), el agente causante del SIDA, en una muestra de sangre son detectables. La aplicación del tema de la invención para la detección de estados de enfermedad en humanos es de primordial importancia. Sin embargo, además del uso en el contexto de la diagnosis de estados serios de enfermedad, la presente invención es útil también en una variedad de otros contextos. Las aplicaciones en relación con el análisis de microbios, plantas, animales, alimentos y agua están todas anticipadas. Por ejemplo, muestras de aguas de superficie se pueden analizar para la presencia de contaminantes tales como atrazina. Alimentos, tal como carne roja terrestre, se puede analizar para la presencia de contaminación por bacteria tal como E. coli. En el reino vegetal, se puede aplicar la presente invención para el análisis, por ejemplo, de polen, esporas y fluidos vasculares de las plantas. Generalmente hablando, el único requisito para la detección usando el dispositivo y método de la presente invención es que el analito de interés debe ser soluble o suspendible en una solución acuosa. El dispositivo y método de la presente invención son particularmente útiles para la detección de sangrado gastrointestinal oculto. La detección del sangrado gastrointestinal oculto es un método común para revisión para cáncer, colo-rectal. Aludida comúnmente como prueba de sangre oculta en heces (FOB), se conocen una variedad de formatos en la técnica (ver v. g., las Patentes de E. U., Nos. 3,996,006; 4,225,557; 4,789,629; 5,064,766; 5, 100,619; 5, 106,582; 5, 171 ,528; 5,171 ,529; y 5, 182, 191). La mayoría de los formatos de prueba están basados en la detección química de grupos heme presentes en deposiciones como un producto de descomposición de la sangre. En tales pruebas, la naturaleza seudoperoxidasa del grupo heme se usa para catalizar una reacción coiorimétrica entre un colorante indicador y peróxido. El colorante sensible al oxígeno puede ser goma de guayaco, ortodianisidina, tetrametilbenzidina, o los similares siendo preferida la goma de guayaco. Aunque las pruebas FOB con base en guayaco son baratas y simples de uso, hay desventajas asociadas con su uso. Por ejemplo, las pruebas con base en guayaco indican solamente la presencia de compuestos de peroxidasa y seudoperoxidasa, tal como heme, que están presentes en una muestra. En consecuencia, estas pruebas no son específicas para sangre humana, y están sujetas por lo tanto, a resultados falso positivos si la deposición del paciente está contaminada con compuestos reactivos cruzados. Tales compuestos reactivos en cruz incluyen, por ejemplo, productos de descomposición de sangre no humana de carne sancochada, ciertos productos vegetales, y algunas drogas. De acuerdo con la práctica médica comúnmente aceptada, un paciente que demuestra un resultado positivo debe sufrir entonces una sigmoidoscopía o colonoscopía flexible para identificar la fuente del sangrado en el colon o el recto. Estos procedimientos pueden ser invasivos, complicados médicamente, y caros. Para minimizar las reacciones falso positivas y los procedimientos de seguimiento innecesarios, las pruebas FOB con base en guayaco requieren una dieta restringida por hasta tres días antes de la prueba. Reportes recientes en la literatura (AHison y colaboradores, N. Eng. J. Med. 344: 155-159 (1996); y Favennec y colaboradores, Anales de Biología Clínica, 50: 311-313 (1992)) han sugerido que el chequeo mediante guayaco y confirmación de resultados positivos mediante una prueba inmunológica, con especificidad absoluta para sangre humana, incrementaría el valor de los resultados de la prueba FOB. Por este medio, solamente aquellos pacientes con sangrado gastrointestinal confirmado serían sujetos a los procedimientos de seguimiento costosos, conduciendo a ahorros significativos en el costo de procuración de cuidado a la salud e inconveniencia reducida para el paciente. La presente invención se refiere a un dispositivo el cual es útil ínter alia para la detección de un analito acuoso soluble o suspendible el cual es detectable, por ejempte, s 1$ base de propiedades inmunológicas y/o químicas. Un ejemplo de u? analito detectado por sus propiedades inmunológicas incluye, pero no está limitado a, una molécula de interreacción inmune tal como un foiígeno, hapteno, inmunoglobulina o célula de unión de antígeno derivada de célula T. Un ejemplo de un analito detectado por propiedades químicas incluye una enzima, catalizador o ligando. Así, con respecto a las pruebas FOB, el dispositivo de la presente invención puede ser adaptado para cualquier prueba con base en guayaco, o prueba inmunológica. El formato preferido para prueba inmunológica es la inmunocromatografía. Este formato se describe de manera general en las Patentes de E. U. , Nos. 5,591 ,645 y 5,622,871 , cuyas descripciones se incorporan a la presente por referencia. Antes de discutir la invención en mayor detalle, se proporcionará una breve revisión de los procesos inmunocromatográficos para establecer ciertos principios. Para detectar un analito de interés mediante inmunocromatografía, se pueden emplear dos reactivos de aglutinamiento que se aglutinan específicamente y no competitivamente al analito de interés. Un primer reactivo de aglutinamiento está marcado y es libre para migrar. Cuando es introducido en una muestra a ser probada para la presencia del analito de interés, el primer reactivo de aglutinamiento específico se aglutina al analito de interés, si está presente. El segundo reactivo de aglutinamiento específico es inmovilizado en una zona de detección en un material de fase sólida conductora de líquido, estando la zona de detección lejos y corriente abajo de la ubicación del contacto inicial entre el primer reactivo de aglutinamiento y el analito de interés. Un frente de solvente que lleva el primer reactivo de aglutinamiento específico móvil en complejo con el analito de interés (si está presente) emigra por el material de fase sólida conductora de líquido a través de la zona de detección. Si está presente el analito en la muestra, el segundo reactivo de aglutinamiento específico inmovilizado se aglutina con el analito por lo que forma un complejo de emparedado inmovilizado que comprende el primer reactivo de aglutinamiento específico (el cual está marcado), el analito de interés, y el segundo reactivo de aglutínamiento específico (el cual está inmovilizado). La detección del marcado inmovilizado en la zona de detección es indicativa de la presencia del analito de interés en la muestra. En la mayor parte de las modalidades, los primer y segundo reactivos de aglutinamiento específicos son ya sea anticuerpos policlonales o monoclonales.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a un dispositivo y método de prueba para la identificación de un analito de interés en la muestra. El dispositivo de prueba ofrece una variedad de ventajas sobre dispositivos de la técnica anterior. Un aspecto importante del dispositivo de prueba de la presente invención es que el dispositivo sencillo sirve para una función de recolección y prueba. Sin embargo, la función de prueba no está vinculada a la de recolección. Es decir, la recolección de una muestra (v. g. , por un paciente en su hogar) y la aplicación al dispositivo de prueba no da un resultado de prueba. Con el fin de determinar el resultado de prueba, se debe insertar un elemento de prueba insertable al dispositivo, y si la muestra se ha secado o desecado previamente la muestra debe ser rehidratada. En la práctica, el elemento de prueba no será proporcionado con el dispositivo y, por lo tanto, el paciente no se auto-diagnosticará en casa. En un aspecto, la presente invención proporciona un dispositivo de prueba para la identificación de un analito de interés en una muestra, que comprende: (a) una matriz de aplicación de muestra adaptada para recibir una muestra, y (b) por io menos un elemento de prueba insertabte adaptado para comunicación con la matriz de aplicación de muestra de manera que los componentes de la muestra son llevados de la matriz de aplicación de muestra at elemento o elementos de prueba. De preferencia, la muestra es una muestra que contiene líquido. La muestra puede ser ella misma un líquido o puede estar en forma de partículas o sólida como hidratos antes de la prueba. De acuerdo con esta invención, el o cada elemento de prueba está adaptado para ser insertado al dispositivo de prueba de manera que el elemento de prueba está en comunicación de conducción de líquido con la matriz de aplicación de muestra como se describió antes. Como se usa en la presente, el término "comunicación de conducción de líquido" debe ser tomado para decir que un líquido aplicado a una matriz de aplicación de muestra es capaz de estar en comunicación de conducción de líquido con un elemento de prueba bajo condiciones suficientes de hidratación. En un aspecto preferido, pero no esencial, de esta invención, el dispositivo de prueba está adaptado de manera que und muestra aplicada al dispositivo (por ejemplo, por un paciente en su casa) puede secarse o ser desecada en la matriz de aplicación de muestra. Consecuentemente, en este aspecto, el dispositivo de prueba comprende: (a) una matriz de aplicación de muestra adaptada para: (i) recepción de una muestra que contiene líquido; (ií) desecación de la muestra que contiene líquido in situ; y (iii) rehidratación de la muestra que contiene líquido desecada para transferencia a un elemento de prueba; y (b) por lo menos un elemento de prueba insertable adaptado para comunicación conductora de líquido con la matriz de aplicación de la muestra de manera que por rehidratación, resolubilización, o resuspensión los componentes de la muestra que contiene líquido son llevados desde la matriz de aplicación de la muestra al elemento o elementos de prueba. En una modalidad de esta invención, el dispositivo de prueba puede comprender: (a) un panel frontal que tiene por lo menos una abertura para aplicación de la muestra en el mismo; (b) un panel trasero que tiene por lo menos una abertura para aplicación de amortiguador a la misma; (c) una matriz de aplicación de muestra dispuesta entre et panel teasero y el panel frontal, la matriz de aplicación de muestra estando en comunicación con la muestra y las aberturas de aplicación para amortiguador de los paneles frontal y trasero; y (d) por lo menos un elemento de prueba insertable adaptado para comunicación conductora de líquido con la matriz de aplicación de muestra de la manera tal que los componentes de la muestra que contiene líquido son llevados desde la matriz de aplicación de muestra al elemento o elementos de prueba. De preferencia, el o cada elemento de prueba insertable comprende un reactivo o reactivos que permiten la detección del analito de interés. La presente invención proporciona también un método para conducir un ensayo para identificar un analito de interés en una muestra, que comprende: (a) proporcionar un dispositivo de prueba que comprende una matriz de aplicación de muestra adaptada para recibir una muestra que contiene líquido; (b) aplicar una muestra que contiene líquido a la matriz de aplicación de muestra; (c) insertar al dispositivo de prueba por lo menos un elemento de prueba insertable en comunicación conductora de líquido con la matriz de aplicación de muestra de manera que los componentes de la muestra que contiene líquido son llevados desde la matriz de aplicación de muestra hasta ei elemento o elementos de prueba; y (d) determinar los resultados de la prueba. En una modalidad, el método comprende: (a) proporcionar un dispositivo de prueba que comprende: (i) un panel frontal que tiene por lo menos una abertura para aplicación de la muestra en el mismo; (ii) un panel trasero que tiene por lo menos una abertura para aplicación de amortiguador en el mis«)o; (iii) una matriz de aplicación de muestra dispuesta entre el panel trasero y el panel frontal, la matriz de aplicación de muestra estando en comunicación con las aberturas de aplicación de ia muestra y el amortiguador de los paneles frontal y trasero; (b) aplicar una muestra que contiene líquido a la matriz de aplicación de muestra; (c) insertar al dispositivo de prueba por lo menos un elemento de prueba insertable en comunicación conductora de líquido con la matriz de aplicación de muestra, por ejemplo una tira de prueba inmuno-cromatográfica, que comprende un material de fase sólida conductor de líquido y un material de soporte, la tira de prueba inmunocromatográfica insertable teniendo una zona de contacto la cual, siguiendo a la inserción, hace contacto con la matriz de aplicación de muestra y conduce un solvente de la matriz de aplicación de muestra a través de una zona de detección que contiene un reactivo de aglutinamiento específico, la zona de detección siendo distinta espacialmente de la zona de contacto; (d) aplicar amortiguador a la matriz de aplicación de muestra; y (e) determinar los resultados de la prueba, por ejemplo mediante la observación de los resultados inmunocromatográficos.
A través de esta especificación, a menos que el contexto lo requiera de otra manera, la palabra "comprenden", y o variaciones tales como "comprende" o "que comprende", será entendido que implica la inclusión de un entero establecido o paso o grupo de enteros o pasos, pero no la exclusión de cualquier otro entero o paso o grupos de enteros o pasos. Las modalidades preferidas de la presente invención están constituidas de un alojamiento que tiene un panel frontal y un panel trasero; una matriz de aplicación de muestra dispuesta entre el panel frontal y el panel trasero, et alojamiento estando adaptado para aplicación de la muestra a la matriz de aplicación de muestra; una ventana para inserción de elemento de prueba en el alojamiento; y por to menos un elemento de prueba insertable el cual, cuando se inserta, comunica con la matriz de aplicación de muestra. En modalidades preferidas, por lo menos se proporciona una abertura en el alojamiento que está en comunicación directa con la matriz de aplicación de muestra. Esta abertura provee acceso a la matriz de aplicación de muestra para el propósito de aplicar muestra. En otras modalidades, se proporcionan aberturas múltiples en el alojamiento para aplicación de muestra por lo que se facilita, por ejemplo, el ensayado de muestras recogidas en días múltiples en una prueba sencilla o alternativamente, el ensayado de muestras múltiples recogidas en un solo día en una sola prueba. En una modalidad importante de la presente invención, el dispositivo comprende dos o más elementos de prueba insertables cada uno de los cuales, cuando se j ¡¡É«'*a> comunica con la matriz de aplicación de muestra. En de prueba pueden ser ya sea los mismos o pueden ser diferentes. En el primer caso, se pueden llevar a cabo pruebas de replicado en la muestra o muestras aplicadas a ta matriz de aplicación de muestra. En el último caso, se pueden llevar a cabo pruebas diferentes en la misma muestra o muestras aplicadas a la matriz de aplicación de muestra. A manera de ejemplo, en la prueba de FOB para chequeo de cáncer colo-rectal, un elemento de prueba insertable puede ser un elemento de prueba FOB con base en guayaco, mientras que otro elemento de prueba insertable puede ser un elemento de prueba inmunocromatográfico. El alojamiento está construido de preferencia de un material flexible, plegable, resistente al agua. Ejemplos de tal material incluyen papel recubierto o cartón para tarjetas, o lámina delgada de plástico. En modalidades preferidas, el alojamiento está construido de una lámina sencilla de material la cual está doblada para crear una pluralidad de paneles o caras, que incluyen el panel frontal y el panel trasero. Alternativamente, se pueden laminar redes múltiples juntas para construir una estructura similar. La matriz de aplicación de muestra está dispuesta entre los paneles frontal y trasero y puede estar unida a cualquiera de los dos paneles con un adhesivo no soluble. La selección de un material para la matriz de aplicación de muestra depende, hasta algún grado, del tipo de muestra a ser aplicada. Generalmente hablando, sin embargo, se prefiere una matriz con celdas abiertas, inerte químicamente (v. g., plástico poroso, papel filtro, fibra de vidrio). Tal matriz de celdas afo áis permite la desecación rápida y completa de la muestra in situ. La desecación rápida y completa minimiza la posibilidad de descomposición de la muestra debido, por ejemplo, a la presencia microbiana. Siguiendo a la aplicación de la muestra, el dispositivo de prueba se regresa a un facultativo o laboratorio de prueba para la terminación del proceso de prueba. Dada la descripción que sigue, un experto en la técnica reconocerá que el elemento o elementos de prueba se pueden proporcionar en un arreglo de modalidades alternas. Haciendo referencia a la modalidad ¡nmunocromatográfica, por ejemplo, un elemento requerido de la tira de prueba es un material de fase sólida conductora de líquido al cual se puede inmovilizar un reactivo de detección (descrito anteriormente como el segundo reactivo de aglutinamiento específico). Este material de fase sólida es de preferencia nitrocelulosa. La nitrocelulosa es una matriz cargada a la cual se puede inmovilizar un reactivo cargado apropiadamente, tal como un anticuerpo monoclonal, sin tratamiento químico previo. También se pueden usar alternativas tales como papel filtro, sin embargo, se requiere acoplamiento químico (v. g. , acoplamiento de CNBr) para pegar un reactivo cargado tal como un anticuerpo a una matriz de este tipo. Un material de fase sólida conductora de líquido preferido es una membrana de nitrocelulosa que tiene un tamaño de poro de aproximadamente por lo menos 1 micrón. Las membranas de nitrocelulosa mejor adaptadas para uso en relación con inmuno- «¿?Üa cromatografía de este tipo tienen un tamanwSp É& poro de aproximadamente 5-20 micrones. La selección de tamaño de poro en particular dicta el régimen de flujo. Dependiendo de la aplicación particular, puede ser indicado un régimen de flujo más rápido o más lento
y se selecciona un material de fas .*sólida apropiado. Para facilitar el manejo, es deseable proporcionar un respaldo a la membrana de nitrocelulosa. Se puede cortar una hoja delgada de plástico (v. g. , lexán o poliestireno) para proporcionar un respaldo adecuado resistente al agua para el soporte sólido. Tal material de
lámina se selecciona para no interferir con la lectura de un resultado de prueba. Por ejemplo, la selección de una lámina blanca o clara se prefiere generalmente. En una modalidad alternativa, el material de fase sólida conductor de líquido puede estar emparedado entre tal material de lámina resistente al agua. 15 Cuando está insertado en el alojamiento, el o cada elemento de prueba está diseñado para comunicarse con la matriz de aplicación de muestra. Aunque esta comunicación puede ser dirigida entre la matriz de aplicación de muestra y el soporte sólido conductor de líquido, en una modalidad preferida de inmunocromatografía, se incorporan elementos
adicionales. Por ejemplo, se puede proporcionar un cojín conjugado. En uso, el cojín conjugado está dispuesto entre la matriz de aplicación de muestra y el soporte sólido conductor de líquido del elemento de prueba. Como se discutirá con mayor detalle más adelante, el cojín conjugado proporciona una matriz para la deposición de un reactivo de detección
marcado el cual es libre para emigrar cuando esté rehidratado (el primer
^sa^tesá*a «Í &»¿feB^ reactivo de aglutinante espeeftf^&r en la revisión breve de inmuno- cromatografía proporcionado anteriormente). La muestra es desecada dentro matriz de aplicación de muestra antes de la inserción del elemento de prueba. En el momento de la rehidratacíón durante el paso de prueba, el reactivo de detección marcado con el cojín conjugado es también resuspendido o resolubilizado. Si et analito está presente en la muestra, el reactivo marcado se aglutina con el analito y el complejo es llevado junto con el frente de solvente a la zona de detección del elemento de prueba. Aunque el cojín conjugado puede comunicar directamente con ambos, el soporte sólido conductor de líquido y la matriz de aplicación de muestra, pueden ser incorporados elementos adicionales como se discute en la Descripción de la Sección de Modalidades Preferidas que sigue. Al fin del elemento de prueba dista! a la matriz de aplicación de muestra cuando está en uso, se pega un cojín absorbente opcional, en comunicación con el material de fase sólida conductora de líquido. Este cojín proporciona un pozo de solvente que impulsa la emigración de la muestra líquida a través de la zona de detección al grado de que substancialmente todo et reactivo de detección marcado no unido es transportado más allá de la zona de detección del elemento de prueba. Un experto en la técnica reconocerá que un cojín absorbente no es un elemento esencial. La necesidad de este elemento puede ser obviada, por ejemplo, extendiendo la longitud del material de fase sólida conductor de líquido más allá de la zona de detección de manera que un volumen suficiente es transportado a través de la zona de detección. En uso, una muestra se aplica a la matriz de aplicación de muestra, de preferencia a través de una abertura en el aloja iei^'que está en comunicación directa con dicha matriz. La muestra se aplica a la matriz de aplicación de muestra de una manera convencional. Por ejemplo, se puede aplicar un frotis fecal - a" matriz de aplicación de muestra. Alternativamente, se puede muestrear agua de la taza del excusado usando un hisopo absorbente. En el último método de muestreo, se debe permitir un tiempo corto para que la hemoglobina se difunda desde la deposición antes de muestrear, o el hisopo se puede usar para dispersar la deposición en el agua de la taza del excusado. El hisopo se usa entonces para muestrear el agua y transferirla mediante tocado o "pintado" de la matriz de recolección de muestra. La muestra líquida transferida es típicamente casi incolora. Dependiendo de la naturaleza del analito, el dispositivo de prueba con muestra aplicada puede ser almacenado en esta forma durante un periodo de días, semanas o meses antes de probarla. Para determinar la presencia de un analito, la muestra es rehidratada agregando una solución apropiada a la matriz de aplicación de muestra. La solución se puede agregar a través de la misma abertura(s) det alojamiento a través de la cual se aplicó la muestra. Sin embargo, en la mayor parte de los casos es preferible proporcionar una segunda abertura, o serie de aberturas, en el alojamiento a través de la cual se aplica el solvente. Esta segunda abertura, o serie de aberturas, también está en comunicación con la matriz de aplicación de muestra. De preferencia, el solvente aplicado a través de una abertura para aplicación de solvente debe emigrar a través de la región de (a matriz de aplicación de muestra donde la muestra se aplicó realmente, antes de alcanzar el punto en la matriz de aplicación de muestra que comunica con el elemento de prueba. El reactivo de detección marcado puede ser introducido al ensayo inmunocromatográfico en una variedad de maneras. Por ejemplo, el reactivo de detección marcado puede ser solubilizado en la solución usada para rehidratar los contenidos de la matriz de aplicación de muestra antes de la resolubilización de los componentes de la muestra. Alternativamente, como se discutió antes, el reactivo de detección marcado puede ser introducido en solución al cojín conjugado y desecado in situ. En esta modalidad, el reactivo de detección marcado es resolubilizado conforme la solución de resolubilización emigra de la matriz de aplicación de muestra al elemento de prueba. En otra modalidad aun, una solución que contiene el reactivo de detección marcado puede ser agregado a la matriz de aplicación de muestra antes de la aplicación de la muestra. Esta solución se deseca entonces in situ. En esta modalidad, el analito de interés, si está presente, y el reactivo de detección marcado serán solubitizados a partir de la matriz de aplicación de muestra seca en el momento de la prueba. De las modalidades descritas en el párrafo precedente, se prefiere para la mayoría de las modalidades el uso de un cojín conjugado. La adición del reactivo de detección marcado a la solución de resolubilización antes de la resolubilización de la muestra tiene la desventaja de usar el reactivo de detección caro (el cual podría requerir almacenaje a 4o C) en una manera ineficiente. Con respecto a la desecación in situ del reactivo de detección marcado en el cojín de aplicación de muestra antes de la aplicación de la muestra, esto resultaría en el establecimiento de un dispositivo de prueba en el cual ei elemento de alojamiento está dedicado a un ensayo en particular. Uno de los muchos beneficios del dispositivo descrito es el hecho de que el alojamiento (junto con otros elementos del dispositivo excluyendo el elemento de prueba) es totalmente genérico. Así, el componente de alojamiento de prueba del dispositivo de prueba puede comprarse a granel y almacenarse como sea necesario para cualquier variedad de requerimientos de prueba. El componente específico para prueba relativamente caro es el elemento de prueba que puede seleccionarse para una necesidad particular y usarse en conjunto con el alojamiento genérico. De preferencia el reactivo de detección marcado es un anticuerpo monoclonal o policlonal específico para un primer epitopo del analito de interés, acoplado a una etiqueta detectable. La etiqueta detectable puede estar acoplada con el anticuerpo mediante cualquiera de las técnicas aplicables conocidas en la técnica incluyendo, por ejemplo, la ligadura covalente y adsorción pasiva. La etiqueta detectable puede ser una etiqueta directa o una indirecta. Una etiqueta directa es una etiqueta que es visible fácilmente en su estado natural, ya sea a simple vista o con la ayuda de dispositivos ópticos. Una etiqueta que es visible solamente en la presencia de un estimulo externo, tal como luz ultravioleta, también se considera que es una etiqueta directa. Ejemplos de etiquetas directas incluyen soles
to colorantes (v. g., carbono oro y fierro), partículas fluorescentes y partículas de látex coloreado. Las etiquetas indirectas requieren la adición de uno o más reactivos de revelado, tal como substratos» pera facilitar la detección. Tales etiquetas incluyen, por ejemplo, ^ as tales como fosfatasa alcalina y peroxidasa de rábano picante. El reactivo de captura inmovilizado es también típicamente un anticuerpo monoclonal o policlonal que es específico para un segundo epitopo o rango de epitopos en el analito de interés. Así, el analito presente en la muestra, ya sea unido mediante el reactivo de detección o no, es unido mediante el reactivo de aglutinamiento inmovilizado en la zona de detección. En un caso en el cual se emplea una etiqueta directa, una línea visible aparece en el soporte sólido conductor de líquido conforme la etiqueta unida se acumula en ta zona de detección. La aparición de esta línea puede ser diagnóstico de la presencia del analito de interés en la muestra. También puede estar integrada una zona de control opcional en el elemento de prueba. La función de una zona de control es transportar una señal no relacionada at usuario que indica solamente que el proceso de prueba está completo y que la interacción de aglutinamiento que resulta en la señal no relacionada detectabte ha tenido lugar como se esperaba. Por ejemplo, la zona de control puede comprender un anticuerpo policional "anti-ratón" inmovilizado para el material de fase sólida conductor de líquido, de preferencia corriente abajo de la zona de detección. Suponiendo que el reactivo de detección es un anticuerpo monoclonal de murino reactivos de detección no unidos n fi zona de detección a través de una interacción de emparedado que involucra el analito de Interés se unirá finalmente en la zona de control. En la ausencia de una señal en la zona de detección, una señal de la ^^de control indicaría al usuario que, por ejemplo, que la muestra no contuvo nada que resultara en interferencia general con un ensayo inmunológico. Se puede imaginar, por ejemplo, que los extremos de pH o concentración de sales podrían resultar en interferencia general a través de cambios de conformación o destrucción física en uno o más de los participantes en la interacción con base inmunológica a ser detectados. La inclusión de una zona de control funciona para proporcionar un grado de confianza con respecto a tales variables. Ef analito de interés se determina con anticipación para que sea uno que es diagnóstico de una condición en particular. Por ejemplo, en relación con las pruebas POB, el analito de interés es de preferencia hemoglobina humana. El método y aparato de la presente invención es aplicable para detectar analitos en humanos y otros animales. Otros animales incluyen primates, animales de ganado (v. g., vacas, ovejas, caballos, burros, cerdos), animales para pruebas de laboratorio (v. g. , conejos, ratones, ratas, cobayos, hamsters), animales de compañía (v. g., perros, gatos) y animales salvajes en cautiverio. La presente invención se extiende también para detectar analitos en plantas (v. g. , monocotiledoneas y dicotiledóneas) y otras formas de vida (v. g. microbios, levadura, hongos,
áaj&^ mohos). La presente invención se puede usar también para detectar analitos en ubicaciones geográficas e industriales, incluyendo tierra, océanos, ríos, regiones de almacenaje de agua, basureros de desechos tóxicos, sitios de construcción, áreas minadas (v. g., carbón, bauxita, uranio, grafito entre muchos otros) así como en el aire. El estado de salud de humanos, y otros animales o plantas u otras formas de vida puede deducirse o determinarse en la presencia o nivel de analito o por la ausencia de analito. El estatus ambiental puede ser establecido también tal como determinar la presencia de contaminantes en varias ubicaciones geográficas o industriales.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La Figura 1 es una vista en perspectiva del frente del dispositivo de la presente invención. La Figura 2 es una vista en perspectiva de la parte trasera del dispositivo de la presente invención. La Figura 3 es una vista de sección transversal en explosión del elemento de prueba de la presente invención. La Figura 4 es una vista de sección transversal del dispositivo de la presente invención como tomada a lo largo de la línea 4-4 de la Figura 2B. La Figura 5 es una vista de la parte superior del dispositivo de la presente invención mostrada en una forma pre-doblada. La Figura 6 es una vista de la parte superior de una modalidad alterna del dispositivo de la presente invención, mostrada en forma pre- doblada.
DESCRIPCIÓN DE LAS MODALIDADES PREFERIDAS A manera de la 5 invención serán descritas ahora^ detalle con referencia a los dibujos adjuntos. Haciendo referencia a la Figura 1 , se muestra el dispositivo de prueba de la presente invención como configurado para la detección de sangre oculta fecal en deposiciones mediante métodos 0 inmunocromatográficos. La Figura 1A muestra el dispositivo de la presente invención con una cubierta de panel frontal (10) que comprende dos tapas de cubierta (11 y 13) de aplicación de muestra en la posición cerrada. Levantando la tapa (11 ), un paciente expone una primera abertura (14) de aplicación de muestra en el panel frontal (17) del 5 dispositivo (Figura 1 B). La ppmera abertura de aplicación de muestra está en comunicación con una matriz (18) de aplicación de muestra (mostrada en la Figura 4). La muestra se aplica a la matriz (18) de aplicación de muestra vía la abertura (14) para aplicación de muestra. Siguiendo a la aplicación de la muestra, la tapa de cubierta (11 ) se cierra 0 y se sella. Para este propósito se proporciona un adhesivo sensible a la presión con una cinta (19) de respaldo removible. El proceso se repite entonces en un segundo día consecutivo y la muestra se aplica vía la abertura para aplicación de muestra colocada atrás de la tapa (13). Aunque la modalidad mostrada en las Figuras 1A y 1 B tiene solamente 5 dos aberturas para aplicación de muestra, se pretende que no sea
S=Stü.
limitativo. El dispositivo de prueba sellado es enviado entonces a la oficina de un doctor o laboratorio de prueba para la determinación de los resultados de la prueba. Cuando se recibe, un técnico en la oficina del doctor o del laboratorio de prueba abre la ventana (25) de prueba colocada en la cubierta de panel (23) trasera, como se muestra en la Figura 2A. Se proporcionan perforaciones para la abertura o remoción de la ventana de prueba para facilitar el acceso. La abertura o remoción de la ventana (25) de prueba revela varias aberturas que caracterizan el panel (16) trasero. Estas incluyen aberturas (27 y 29) para aplicación de solvente y abertura (31) para inserción de elemento de prueba. Entonces se inserta un elemento (33) de prueba en la abertura (31 ) para inserción de elemento de prueba. El elemento (33) de prueba contiene un reactivo que permite la detección del analito de interés en la muestra. El elemento de prueba se muestra en la sección transversal en explosión de la Figura 3. Ei elemento de prueba está constituido de un material (35) de fase sólida conductor de líquido el cual es de preferencia una membrana de nitrocelulosa. Para facilitar el manejo, se proporciona una lámina (39) de respaldo. Plásticos no absorbentes tales como lexán o poliestireno son materiales para lámina de soporte preferidos. Las modalidades preferidas incluyen también una o más capas de material conductor de líquido de alta capacidad aludidas en la presente como "capas de puenteo". Una capa (38) de puenteo se muestra en la Figura 3. En la modalidad de la Figura 3, un cojín (37) conjugado está dispuesto entre la capa (38) de puenteo y el material (35) de fase sólida conductora de líquido. Co o se modalidades inmunocromatográficas contiene un reactivo de detección etiquetado in $ii<u. También se proporciona un cojín absorbente (41) como un compgMftÉÉÉÉLdel elemento (33) de prueba. El 5 cojín absorbente (41 ) funciona como un pozo de solvente por lo que impulsa ia emigración del frente de solvente. Los elementos mostrados en la Figura 3 se ensamblan usando un adhesivo no soluble en agua. Será evidente que el traslape de elementos tales como la capa (38) de puenteo y el cojín (37) conjugado crea un efecto de cuña progresiva que
resulta en buen contacto conductor de líquido entre la matriz (18) de aplicación de muestra y el elemento (33) de prueba, que sigue a la inserción del elemento (33) de prueba en la abertura (31 ) para inserción del elemento de prueba. El reactivo de captura inmovilizado está unido al material de fase sólida conductora de líquido por lo que se crea una zona
(43) de detección en el elemento (33) de prueba. La Figura 4 es una sección transversal del dispositivo con el elemento (33) de prueba insertado. La Figura 4 muestra muchos de los elementos discutidos previamente incluyendo, por ejemplo, el elemento (33) de prueba y componentes individuales del mismo (cojín (41)
absorbente, material (35) de fase sólida conductora de líquido, cojín (37) conjugado, capa (38) de puenteo y lámina (39) de respaldo); la tapa de cubierta (13) para aplicación de muestra; panel frontal (17) con abertura (15) para aplicación de muestra; panel trasero (16); cubierta (23) de panel trasero con ventana (25) de prueba; y matriz (18) de aplicación de
muestra. También se muestra un elemento opcional no discutido
i» r'~??i~'illiifii iiii ifJJTMflHí Él jj Jlj?í ^¡ previamente. Este elemento es aludido como un panel (42) espaciador. El panel espaciador, que se muestra en mayor detalle en la Figura 5, funciona para crear un espacio vacío para inserción del elemento de prueba entre la m§§Jɧ:; (18) de aplicación de muestra y el panel (17) frontal en el dispositivo ensamblado. El panel (42) espaciador incluye una segunda abertura (44) para inserción de elemento de prueba y un punto (48) grabado en relieve mostrado también en la Figura 5. Como se muestra en la Figura 4, cuando se inserta el elemento (33) de prueba, ocupa este espacio vacío para inserción de elemento de prueba. El acuñado progresivo aludido previamente en relación con la Figura 3 resulta en buen contacto conductor de líquido entre la matriz (18) de aplicación de muestra y el elemento (33) de prueba. Haciendo referencia otra vez a la Figura 4, siguiendo a la inserción del elemento de prueba, el técnico rehidrata la muestra agregando un solvente a la matriz (18) de aplicación de muestra vía la abertura (29) para solvente en el panel (16) trasero. El solvente solubiliza los componentes de la muestra en la matriz (18) de aplicación de muestra y lleva los componentes solubilizados a través de la capa (38) de puenteo y al cojín (37) conjugado con el frente de solvente. En el cojín (37) conjugado, el reactivo de detección etiquetado es solubilizado y se aglutina con el analito si está presente en la muestra. El frente de solvente, y cualesquiera materiales solubles llevados con el frente de solvente, se mueven entonces al material (35) de fase sólida conductor de líquido. Si el analito está presente en la muestra, un complejo detectable visiblemente que comprende el analito, reactivo de detección
g etiquetado y reactivo de (43) de detección. En una modalid la cubierta (23) de panel 6) y el panel (42) separador se producen a partir de una lámina sencilla de material mediante corte y doblado apropiados, Haciendo referencia a la Figura 5, se proporciona una lámina generalmente rectangular de material. Las aberturas (27 y 29) para aplicación de solvente y una abertura (31) para inserción del elemento de prueba están cortadas en el panel trasero (16). Las aberturas (14 y 15) para aplicación de muestra están cortadas en el panel frontal (17). El contorno de la ventana (25) de diagnóstico está perforado en la cubierta (23) de panel trasero. La cubierta (10) de panel frontal se corta de dos tapas (11 y 13) que sellarán las aberturas para aplicación de muestra en seguida a la aplicación de la muestra. El adhesivo (19) sensible a la presión se proporciona para sellar las tapas (11 y 13) de cubierta de aplicación de muestra. El panel (42) separador está cortado para proporcionar una segunda abertura (44) para inserción del elemento de prueba. Además, el panel (42) separador está grabado opcionalmente en los puntos (46 y 48) grabados en relieve. Como una alternativa para los puntos (46 y 48) grabados elementos separadores opcionales pueden unirse al panel (42) separador usando un adhesivo. La función de los puntos (46 y 48) grabados opcionales o los elementos separadores opcionales alternos, es incrementar el espacio vacío para inserción del elemento de prueba entre la matriz (18) de aplicación de prueba y el panel frontal (17) en el dispositivo ensamblado, si se desea. Incluir o no tales elementos opcionales depende, por ejemplo, del espesor relativo de la matriz (18) de aplicación de muestra y del material a partir del cual se produce el alojamiento. A lo largo de las líneas D-D, C-C, B-B y A-A se hacen dobleces para formar el alojamiento. Antes de doblar, fé^Wat iz de aplicación de muestra se coloca apropiadamente y se aplica adhesivo en lugares apropiados para ayudar a mantener la relación de elementos en el alojamiento doblado. Una modalidad alterna del dispositivo de la presente invención como se describe en detalle en las Figuras 1 a 5, que incorpora más de un elemento para inserción de prueba, se muestra en la Figura 6. En esta modalidad el panel trasero (16) está provisto con dos aberturas (31 , 32) para inserción de elemento de prueba y la matriz (18) de aplicación de muestra está configurada para proporcionar buen contacto conductor de líquido entre la matriz (18) de aplicación de muestra y los elementos (33) de prueba individuales insertados en cada abertura (31 , 32). El panel (42) separador incluye dos segundas aberturas (44, 45) para inserción de elemento de prueba que corresponden e posición con las aberturas (31 , 32) de manera que los elementos (33) de prueba individuales ocupa cada uno el espacio vacío para elemento de prueba como se describió previamente, y están cada uno en buen contacto conductor de líquido con la matriz de aplicación de muestra. Por supuesto, se pueden configurar dispositivos similares para uso con más de dos elementos de prueba que se pueden insertar. Como se describió previamente, en esta modalidad alterna, los dos o más elementos (33) de prueba que se pueden insertar pueden ser los mismos (que proporcionan matriz de diferentes (para proporcionar pruebas diferentes de la misma muestra aplicada a la matriz de aplicación de mues:Ü|§¡?' En una modalidad preferida particularmente para uso en la prueba de FOB, un elemento puede ser un elemento de prueba con base en guayaco y otro elemento puede ser un elemento de prueba inmunocromatográfico. Además de la acumulación y agregación de muestras de origen temporal discreto (es decir, muestras tomadas en días separados) como se ha discutido hasta aquí, la presente invención puede ser utilizada ventajosamente para acumular y agregar muestras de origen espacial discreto y/o biológico. Un ejemplo de muestras distintas espacialmente incluye muestras de tierra y/o agua de superficie obtenidas de varios lugares geográficos y fuentes distintos. De esta manera, además de las aplicaciones de diagnóstico médico antes descritas, la presente invención se puede usar en pruebas no médicas, tal como para detectar toxinas ambientales. Ejemplos de muestras distintas biológicamente incluyen muestras de orina, sangre, sudor y saliva, que pueden ser útiles particularmente en aplicaciones tales como revisión de droga, en las cuales puede estar presente un analito en particular en una o más de tales muestras. Las muestras pueden ser aplicadas en cualquier forma substancialmente, es decir, líquida o seca, y pueden ser aplicadas a uno o más lugares de la matriz (18) de aplicación de muestra. Por ejemplo, se pueden proporcionar varias aberturas (14, 15, etc.) para aplicación de muestra, con una sola muestra que se aplica a cada abertura. Alternativamente, se pueden aplicar una pluralidad de muestras a una sola abertura de aplicación. En este respecto, se pueden mezclar muestras líquidas en un dispositivo separado (es decir, un tubo de prueba), antes de la aplicación a una abertura de muestra. De manera similar, puede ser posible aplicar muestras líquidas múltiples de manera secuencial a una sola abertura de aplicación. En un ejemplo de este enfoque, se puede permitir que se sequen in situ las muestras líquidas antes de aplicación de muestras subsecuentes. Las muestras líquidas subsecuentes se pueden aplicar también a la matriz sin esperar que se sequen las muestras líquidas aplicadas anteriormente, tal como con un gotero para ojos, etc., por lo que las muestras líquidas serán absorbidas por la matriz. Estas muestras líquidas, mezcladas pueden desecarse in situ de manera subsecuente. Un experto en la técnica reconocerá que el número de muestras capaces de ser aplicadas de esta manera está limitado por la porosidad y volumen de la matriz, es decir, no se pueden aplicar muestras adicionales una vez que la matriz está saturada completamente. De manera similar, se pueden acumular muestras secas o sólidas, es decir, muestras secadas sobre discos de papel, apilando los discos dentro de una sola abertura. La aplicación subsecuente de líquido para hidratar ta matriz solubiliza las muestras, permitiéndoles pasar a través del material poroso de disco de papel y agregarse en la manera descrita hasta aquí. La utilización de la invención así descrita permite ventajosamente la identificación de caso de pruebas de FOB d^^as múltiples para sangrado intermitente. Además, la invención permite la revisión exitosa en el caso de que los niveles de analito sean bajos, gÉ ©mente por debajo del umbral de detección para una sola muestra, mediante la agregación de la señal generada por muestras múltiples para llevarla hasta niveles detectables. Personas expertas en la técnica reconocerán que cualquier combinación de las muestras antes mencionadas, tal como cualquier combinación de muestras líquidas y secas, de origen temporal, espacial, biológico distinto y/o no distinto, puede ser aplicada a lugares sencillos o múltiples de la matriz de aplicación de muestra, sin apartarse del espíritu y alcance de la presente invención.
EJEMPLIFICARON
CONSTRUCCIÓN DE DISPOSITIVO DE PRUEBA Se fabricaron elementos de prueba laminando los siguientes componentes en un soporte de plástico blanco (poliestireno de alto impacto, 0.5 mm), recubierto en una superficie con adhesivo (3M, St. Paul, MN, cinta de transferencia # 465), como se muestra en la Figura 3: 1 ) membrana de nitrocelulosa (Millipore, Berford, MA, tipo STH F0200, 18 mm) desprendida con anticuerpo de hemoglobina antihumana monoclonal a 2 mg/ml; 2) absorbente para el cojín absorbente (Ahlstrom, Mt. Holly Spring, PA, grado 904, 18 mm);
-j.\?g¡ ga 3) cojín conjugado (General Polymeric, Reading, PA, cinta de 25 micrones UHMWPE m§^$ , 10 mm) infiltrado y secado in situ con ** anticuerpo de hemoglobina antihumana polictonal conjugado con oro coloidal (EY Laboratories, San Mateo, CA); y 5 4) papel conductor para ciuaj^ puenteo (Ahlstrom, grado 1281).
para formar elementos de prueba individuales. Se fabricaron alojamientos (73 mm x 76.2 mm), como se representa en la Figura 5, a partir de cartón SBS a prueba de agua (polirecubierto).
La matriz de aplicación de muestra (Porex, Fairburn, GA, HDPE tipo
4588) se aplicó al panel trasero del alojamiento con adhesivo de transferencia (3M, # 465).
EJEMPLO 1 15 Se diluyó sangre humana 1 :10,000 y 1 : 100,000 en agua destilada. Para cada una de las disoluciones de sangre, y para una muestra de control de agua destilada, se agregaron 25 µl a cada una de las aberturas para aplicación de muestra de un dispositivo de prueba y se dejó secar at aire durante dos horas. Se agregaron 100 µl de reactivo reconstituyente
(P.B.S. conteniendo 0.5% de Albúmina de Suero de Bovino, 1 % de Tritón X100 y 0.1 % de azida de sodio) a cada abertura para aplicación de solvente y se insertó una tira de prueba. Se desarrolló una línea rojo claro en la tira de prueba con las dos disoluciones de sangre, es decir, detección positiva, mientras que la muestra de agua no dio señal
detectablß (es decir, un resultado negativo).
¡s** » 1 ¡«f *»i En un idéntico, se agregaron las mismas disoluciones de sangre (25 µl de cada una) a porta objetos Hemoccult (SmithKIine Diagnostica, & Alto, CA) y un cojín de prueba ColoCare (Helena Laboratories,<¡¡ l umont, TX) (un dispositivo para detectar sangre en el agua de la taza de excusado que se agrega directamente a la taza de excusado).
RESULTADOS
EJEMPLO 2 Sangre humana fresca (50 µl) se agregó al agua en una taza de excusado (~2L). Después de dispersión completa de la sangre agregada, el agua se muestreo con un hisopo Dacron (Hardwood Products, Guilford,
ME) y se transfirió a una tarjeta Hemoccult y a la matriz de aplicación de muestra del dispositivo de la presente invención. Enseguida del muestreo, se agregó un cojín GoloCare a la taza de excusado y se observó cualquier cambio en color.
RESULTADOS El dispositivo de la presente invención detectó rápidamente la
-a sangre, mientras que antes de la adición de la sangre dio negativo. Las pruebas Hemoccult y ColoCare permanecieron claramente negativas con el agua a ia cual había sido agregada la sangre.
Claims (53)
1. Un dispositivo de prueba para la identificaci n de un analito de interés en una muestra, que comprenda: (a) un alojamiento que UßßriPwta matriz de aplicación de muestra para recibir una muestra, y (b) por lo menos un elemento de prueba insertable el cual, por inserción en el alojamiento, hace comunicación directa conductora de líquido con la matriz de aplicación de muestra de manera que los componentes de la muestra son llevados de la matriz de aplicación de muestra al elemento o elementos de prueba.
2. El dispositivo de prueba de la reivindicación 1 , en donde el o cada elemento de prueba está adaptado para ser insertado al dispositivo de prueba de manera que el elemento de prueba está en comunicación conductora de líquido con dicha matriz de aplicación de muestra.
3. El dispositivo de prueba de la reivindicación 1 , en donde el analito de interés es un anticuerpo, antígeno, haptenor una molécula capaz de interactuar con el mismo.
4. El dispositivo de prueba de la reivindicación 3, en donde el antígeno o hapteno es un indicador de diagnóstico de un estado de enfermedad en un organismo.
5. El dispositivo de prueba de la reivindicación 4, en donde el organismo es un humano.
6. El dispositivo de prueba de ta reivindicación 5, en donde el estado de enfermedad se selecciona del grupo que consiste de cáncer e infección patógena.
7. El dispositivo de prueba de la reivindicación 3, en donde el antígeno o hapteno es un contaminante en alimentos o agua.
8. El dispositivo de prueba de la reivindicación 7, en donde el antígeno o hapteno está asociado con un estado de enfermedad en un organismo.
9. El dispositivo de prueba de la reivindicación 8, en donde el organismo es un humano.
10. El dispositivo de prueba de la reivindicación 4, en donde el estado de enfermedad está caracterizado por sangrado gastrointestinal oculto.
11. El dispositivo de prueba de la reivindicación 10, en donde el analito de interés es hemoglobina, o un fragmento de la misma.
12. El dispositivo de prueba de la reivindicación 1 , en donde la o cada tira de prueba insertable es una tira de prueba inmuno-cromatográfica.
13. El dispositivo de prueba de la reivindicación 12, en donde la o cada tira de prueba inmunocromatográfica comprende un material de fase sólida conductora de líquido fijado a un material de respaldo.
14. El dispositivo de prueba de la reivindicación 13, en donde la o cada tira de prueba inmunocromatográfica está constituida de una zona de contacto la cual, siguiendo a la inserción, hace contacto con la matriz de recolección de muestra y conduce un frente de solvente de la matriz de recolección de muestra a través de una zona de detección que contiene un reactivo de aglutinamiento específico, siendo la zona de detección distinta espaciatmente de la zona de contacto.
la reivindicación 14, en donde et reactivo de aglutinamiento específico en la zona de detección es un anticuerpo específico para un csmpoitejfite de la sangre humana.
16. El dispositivo de pruete?<ie ia reivindicación 15, en donde el componente de la sangre humana es hemoglobina o un fragmento de la misma.
17. El dispositivo de prueba de la reivindicación 1, en donde la muestra es materia fecal.
18. El dispositivo de prueba de la reivindicación 17, en donde la materia fecal se obtiene mediante muestreo del agua de la taza de excusado.
19. Un dispositivo de prueba para la identificación de un analito de interés que comprende: a un alojamiento que tiene una matriz de aplicación de muestra para: i recepción de una muestra que contiene líquido; ii desecación de la muestra que contiene líquido in situ; y iii rehidratación de la muestra que contiene líquido desecada para transferencia a un elemento de prueba; y b por lo menos un elemento de prueba insertable el cual, por inserción al alojamiento, hace comunicación conductora de líquido directa con la matriz de aplicación de muestra de manera que por rehidratación, los componentes resolubilizados o resuspendidos de la muestra son llevados desde la matriz de aplicación de muestra al elemento o elementos de prueba.
20. El dispositivo # pruefef lÉHa reivindicación 19, en donde el o cada elemento de prueba está f aptado para ser insertado al dispositivo de prueba de manera que el elemento de prueba está en comunicación conductora de líquido con dicha matriz de aplicación de muestra.
21. Un dispositivo de prueba para la identificación de un analito de interés, que comprende: a. un alojamiento que tiene: (i) un panel frontal que tiene por fo menos una abertura para aplicación de muestra en el mismo; (ii) un panel trasero que tiene por lo menos una abertura para aplicación de solvente en el mismo; (iii) una matriz de recolección de muestra dispuesta entre el panel trasero y el panel frontal, la matriz de recolección da muestra estando en comunicación con ia muestra y las aberturas para aplicación de solvente de los paneles frontal y trasero; y b. por lo menos un elemento de prueba insertable el cual, por inserción al alojamiento, hace comunicación conductora de líquido directa con la matriz de aplicación de muestra de manera que los componentes de una muestra son llevados desde la matriz de aplicación de muestra al elemento o elementos de prueba.
22. El dispositivo de prueba de la reivindicación 21 , en donde el o cada elemento de prueba insertable comprende un reactivo o reactivos que permiten la detección de un analito de interés.
23. El dispositivo de prueba de la reivindicación 21 , que comprende además una cubierta de panel frontal y una cubierta de panel a ertura para apl caci n es ra y a abertura para ap cac n e solvente.
24. de la reivindicación 23, que comprende dispuesto entre el panel frontal y el panel trasero, dicho panel separador estando diseñado para crear un espacio vacío para inserción del elemento de prueba entre la matriz de aplicación de muestra y el panel frontal en el dispositivo ensamblado.
25. El dispositivo de prueba de la reivindicación 21 , en donde el analito de interés es una molécula interactuante inmune.
26. El dispositivo de prueba de acuerdo con la reivindicación 25, en donde la molécula interactuante inmune es una molécula aglutinante de antígeno derivada de antígeno, hapteno, inmunoglobulina o célula T.
27. El dispositivo de prueba de la reivindicación 25, en donde el antígeno o hapteno es un indicador de diagnóstico de un estado de enfermedad en un organismo.
28. El dispositivo de prueba de la reivindicación 27, en donde el organismo es un humano.
29. El dispositivo de prueba de la reivindicación 27, en donde el estado de enfermedad se selecciona del grupo que consiste de cáncer e infección patógena.
30. Un método para conducir un ensayo para identificar un analito de interés en una muestra, que comprende: a. proporcionar un dispositivo de prueba que comprende un alojamiento que tiene una matriz de aplicación de muestra para recibir una muestra; b. aplicar una muestra a*#a matriz de aplicación de muestra; c. insertar al dispositiv "de prueba por lo menos un elemento de prueba insertable el cual, por inserción al alojamiento, hace comunicación conductora de líquido directa corfYa matriz de aplicación de muestra de manera que los componentes de la muestra son llevados desde la matriz de aplicación de muestra hasta el elemento o elementos de prueba; y d. determinar los resultados de la prueba.
31. El método de la reivindicación 30, que comprende: a. proporcionar un dispositivo de prueba que comprende: i. un panel frontal que tiene por lo menos una abertura para aplicación de muestra en el mismo; ii. un panel trasero que tiene por lo menos una abertura para aplicación de solvente en el mismo; y iii. una matriz de aplicación de muestra dispuesta entre el panel trasero y el panel frontal, fa matriz de aplicación de muestra estando en comunicación con las aberturas para aplicación de muestra y solvente de los paneles frontal y trasero; b. aplicar una muestra que contiene líquido a la matriz de aplicación de muestra; c. insertar al dispositivo de prueba por lo menos un elemento de prueba insertable en comunicación conductora de líquido con la matriz de aplicación de muestra, el o cada uno de dicho elemento de prueba que comprende una tira de prueba inmunocromatográfica, que comprende un material de fase sólida conductora de líquido y un material de soporte, y as a. ~ que tiene una zona de e«¡g¡ acto ia cual, siguiendo a la inserción, hace contacto con la matriz de apti§Éción de muestra y conduce un frente de solvente de la matriz de aplicación demuestra a través de una zona de detección que contiene un reacíif|| ¡¡í aglutinamiento específico, la zona de detección siendo distinta espacialmente de la zona de contacto; d. aplicar solvente a la matriz de aplicación de muestra; y e. determinar los resultados de la prueba mediante la observación de los resultados ¡nmupocromatográficos,
32. Un método para conducir un ensayo inmunocromatográfico, que comprende: a. proporcionar un dispositivo de prueba inmunocromatográfica que comprende: i. un panel frontal que tiene por lo menos una abertura para aplicación de muestra en el mismo; ii. un panel trasero que tiene por lo menos una abertura para aplicación de solvente en el mismo; y iii. una matriz de recolección de muestra dispuesto entre el panel trasero y el panel frontal, la matriz de recolección de muestra estando en comunicación con las aberturas para aplicación de muestra y solvente de los paneles frontal y trasero; b. aplicar a la matriz de aplicación de muestra, una muestra de un fluido corporal o excremento; c. insertar al dispositivo de prueba inmunocromatográfica por lo menos una tira de prueba inmunocromatográfica insertable, que comprende un material de fase sólida conductora de líquido y un material de soporte, la o cada teniendo una zona de contJr l l a cual, siguiendo a la inserción, ha,ce contacto con la matriz de recolección de muestra y conduce un frente de solvente de la matriz de recolección? <# muestra a través de una zona de detección que contiene un reactivo de aglutinamiento específico, la zona de detección siendo distinta espacialmente de la zona de contacto; d. aplicar solvente a la matriz de aplicación de muestra; y e. determinar los resultados de la prueba mediante la observación de los resultados inmunocromatográficos.
33. Un dispositivo de prueba para la identificación de un analito de interés, dicho dispositivo de prueba que comprende: (a) un alojamiento que tiene una matriz de aplicación de muestra para recibir una pluralidad de muestras en lugares discretos en la misma, y agregar las muestras; (b) por lo menos un elemento de prueba insertable el cual, por inserción al alojamiento, hace comunicación conductora de líquido directa con dicha matriz de aplicación de muestra de manera que por hidratación, los componentes solubilizados o suspendidos de dicha pluralidad de muestras son llevados desde dicha matriz de aplicación de muestra a dicho elemento o elementos de prueba; en donde se puede realizar una prueba sencilla para determinar simultáneamente la presencia del analito de interés en una pluralidad de muestras que tienen origen discreto.
34. El dispositivo de prueba de la reivindicación 33 en donde dicha matriz de aplicación de muestra está adaptada para: i. recepción de una muesl ie contiene líquido; ii. desecación de la muestra que contiene líquido in situ; y iii. rehidratación de la muestra que contiene líquido desecada para transferencia a dicho elemento o elementos de prueba.
35. El dispositivo de prueba de la reivindicación 33, en donde dicha matriz de aplicación de muestra está adaptada para recibir una muestra seca.
36. Un dispositivo de prueba para la identificación de un analito de interés, dicho dispositivo de prueba que comprende: a. un alojamiento que tiene por lo menos un orificio para muestras que puede abrirse y sellarse selectivamente para admitir y mantener de manera sellada una pluralidad de muestras en el mismo, y por lo menos un orificio de prueba adaptado para lá inserción de un elemento o elementos de prueba en el mismo; b. una matriz de aplicación de muestra dispuesta dentro de dicho alojamiento en comunicación con dicho por lo menos un orificio para muestras y dicho por lo menos un orificio de prueba, dicha matriz de aplicación de muestra adaptada para: i. recibir la pluralidad de muestras en la misma; y ii. agregar la pluralidad de muestras, en donde la pluralidad de muestras de origen discreto están adaptadas para ser aplicadas y selladas dentro de dicho dispositivo de prueba, y subsecuentemente probadas en el agregado; c. por lo menos un elemento de prueba insertable adaptado para inserción ai alojamiento a través del o cada uno de dichos orificios de prueba, para probar la plü»lidi ,#^ uestras.
37. El dispositivo de la reivindicación 36, en donde dicha matriz de aplicación de muestra está adaptada para recibir la pluralidad de muestras en una sola ubicación en la misma.
38. El dispositivo de prueba de la reivindicación 37, en donde la pluralidad de muestras se mezclan unas con otras antes de ser recibidas por dicha matriz.
39. El dispositivo de prueba de la reivindicación 36, en donde dicha matriz de aplicación de muestra está adaptada para recibir la pluralidad de muestras en ubicaciones discretas en la misma, dicha matriz estando adaptada para agregar las muestras por dicha inserción del elemento o elementos de prueba.
40. El dispositivo de prueba de la reivindicación 36, en donde dicho por lo menos un orificio para muestras comprende además una pluralidad de orificios para muestras que pueden abrirse y sellarse selectivamente para admitir y mantener de manera sellada la pluralidad de muestras en el mismo.
41. El dispositivo de prueba de ia reivindicación 36, en donde la pluralidad de muestras son de origen temporal discreto.
42. El dispositivo de prueba de la reivindicación 36, en donde la pluralidad de muestras son de origen espacial discreto.
43. El dispositivo de prueba de la reivindicación 36, en donde la pluralidad de muestras son de origen biológico discreto.
44. El dispositivo de prueba de ia reivindicación 36, en donde dicha matriz de aplicación de muestras está adaptada además para hidratación de la pluralidad de mííelP as.
45. El dispositivo de prueba de la reivindicación 44, en donde por lo menos una de la pluralidad de muestras contiene líquido, y dicha matriz de aplicación de muestras está adaptada además para: desecación de por lo menos una de la pluralidad de muestras in situ; y agregación de componentes resolubilizados o resuspendidos de dicha por lo menos una muestra con por lo menos otra de la pluralidad de muestras para prueba.
46. El dispositivo de prueba de la reivindicación 44, en donde el o cada uno de dichos elementos de prueba está adaptado para aplicación de líquido a dicha matriz de aplicación de muestras para dicha hidratación.
47. Un dispositivo de prueba para la identificación de un analito de interés, a partir de una pluralidad de muestras, por lo menos una de la pluralidad de muestras conteniendo líquido, dicho dispositivo de prueba que comprende: (i) un alojamiento que tiene una matriz de aplicación de muestras para: recepción de la pluralidad de muestras en lugares discretos en la misma; desecación de la por lo menos una de la pluralidad de muestras in situ; hidratación de la pluralidad de muestras; y agregación de componentes solubilizados o suspendidos de la pluralidad de muestras líquidas para análisis del analito, en donde se puede realizar una sola prueba para determinar simultáneamente la presencia del analito de interés en una pluralidad de muestras que tienen origen discreto; y (ii) por lo menos un elemento de prueba insertable el cual, por inserción al alojamiento, hace comunicación conductora de líquido directa con la matriz de aplicación de muestras de manera que los componentes de la muestra son llevados desde la matriz de aplicación de muestras al elemento o elementos de prueba.
48. Un método para identificación de un analito de interés a partir de una pluralidad de muestras, dicho método que comprende los pasos de: a. proporcionar un dispositivo de prueba que tiene una matriz de aplicación de muestras; b. aplicar la pluralidad de muestras a la matriz; c. agregar componentes de ta pluralidad de muestras para análisis del analito; y d. utilizar una sola prueba para determinar simultáneamente la presencia del analito de interés en la pluralidad de muestras.
49. El método de la reivindicación 48, en donde dicho paso c. de agregación comprende además el paso de hidratar la pluralidad de muestras.
50. El método de la reivindicación 48, en donde dicho paso c. de agregación comprende además el paso e. de mezclar las muestras antes de dicho paso b. de aplicación.
51. El método 50, en donde dicho paso e. de mezclado comprende a m^ ar tas muestras en un estado líquido.
52. El método de la reivindicación 50, en donde dicho paso e. de mezclado comprende además mezclar muestras en un estado seco.
53. El método de la reivindicación 50, en donde dicho paso e. de mezclado comprende además apilar una pluralidad de muestras en un estado seco en la matriz de aplicación de muestras.
B¡&. - - a
Applications Claiming Priority (2)
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