ES2304944T3 - Composicion que comprende mx-dtpa y su utilizacion para producir un mx-dtpa radiomarcado. - Google Patents
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Abstract
Una composición que comprende el regioisómero del ácido 2-(p-isotiocianatobencil)-6-metildietilentriamino- N,-N,N''N'''',N''''''-pentaacético (MX-DTPA) de fórmula (I): (Ver fórmula) en la que el porcentaje de dicho regioisómero, con respecto a cualquier otro regioisómero, es al menos de 90%.
Description
Composición que comprende
MX-DTPA y su utilización para producir un
MX-DTPA radiomarcado.
La presente invención se refiere a una
composición que comprende un regioisómero de ácido
2-(p-isotiocianatobencil)-6-metildietilentriamino-N,N,N',N'',N''-pentacético
(MX-DTPA) que es útil como un agente de quelación
bifuncional en radioinmunoterapia y en formación de imagen.
Existe un creciente interés en nuevos agentes de
marcaje radiactivo para la formación de imagen, la detección de
tumores e inmunoterapia, que reduzcan las diversas desventajas
presentadas por los agentes convencionales.
Los agentes convencionales están basados
generalmente en compuestos halo radiactivos, tales como los
compuestos radiactivos basados en los isótopos de yodo. Sin
embargo, estos agentes presentan un cierto número de limitaciones.
Por ejemplo, el uso de isótopos de yodo está limitado grandemente
por la elevada velocidad de degradación del enlace
carbono-yodo, en vivo. Otras limitación se refiere a
las menos que ideales características de emisión y de períodos de
semi-descomposición física de los radionúcleos de
yodo. De acuerdo con esto, se han efectuado esfuerzos para el
desarrollo de nuevos agentes de detección de tumores para superar
las limitaciones de los agentes de marcaje radiactivo a base de
halógenos.
Un camino para proporcionar agentes de formación
de imagen y de detección de tumores más eficaces lo ofrecen los
compuestos orgánicos de metal en la forma de
radio-núcleos metálicos complejos. La asociación del
agente de formación de imagen y de detección de tumores a la
proteína se consigue generalmente a través de un enlace covalente
formado entre el quelato y la proteína mediante acilación con
compuestos de carbonilo activados, asociación con compuestos de
diazonio aromáticos, alquilación con bromoacetilo o a través de
enlaces de tiourea.
Sin embargo los complejos de compuestos
orgánicos de metal existentes no proporcionan una eficacia óptima
para su marcaje con compuestos radiactivos y para terapia. Por
ejemplo, más allá de la elección de un isótopo radiactivo en
particular, la detección de un tumor y la radioinmunoterapia con
éxito, depende también de la selección de un quelato eficaz que se
una fácilmente a un anticuerpo en particular y permita la inserción
del radionúcleo mientras que preserva la integridad del
anticuerpo.
Se deben considerar diversos factores en el
diseño de anticuerpos radiometalquelados (formación de un quelato
con compuestos orgánicos de metal radiactivos) para la formación de
imagen y la detección de tumores, y/o para inmunoterapia. Por
ejemplo, los radionúcleos eficaces se deben seleccionar de acuerdo
con sus propiedades físicas, químicas y biológicas. Un núclido
óptimo debería estar disponible de forma rutinaria, fácil de
asociar al MAb y tener un período de
semi-descomposición física apropiado para detectar
selectivamente y/o eliminar el tejido neoplástico diana mientras
que no ataca el tejido normal.
El MAb que sirve para llevar el radionúcleo al
tumor diana se debe seleccionar en base a la distribución de su
antigénico diana y en la especificidad y afinidad de unión del
anticuerpo a su diana.
Otro aspecto importante a considerar en el
diseño de anticuerpos radiometalquelados eficaces se refiere a la
elección del agente de quelación (CA) usado para asociar el
radionúcleo a los anticuerpos. Por ejemplo, los anticuerpos
radiometalquelados deben ser estables en vivo. La estabilidad en
vivo depende de la condición de que tanto el enlace de quelato como
los procedimientos de marcaje con compuestos radiactivos no alteren
la especificidad y la bio-distribución del
anticuerpo.
Además, la selección y síntesis del agente de
quelación es crítica para optimizar la adecuación entre el quelato
y el radionúcleo y el MAb seleccionados. En particular, la elección
y síntesis del quelato debería evitar la liberación inapropiada del
radionúcleo en vivo. Este aspecto es de capital importancia porque
el problema lo más común asociado con los agentes de quelación
convencionales es su defecto en unirse y mantenerse de manera
segura al anticuerpo. Como consecuencia, existe una considerable
disociación del radionúcleo en vivo del complejo de
MAb-CA con anterioridad al suministro de estos
agentes a la superficie de la célula de tumor. La acumulación de
radionúcleos tóxicos libres en los tejidos normales daña el tejido
normal sin el beneficio del tratamiento y/o la detección del tumor
diana. Otro aspecto importante se refiere al deseo de que el agente
de quelación seleccionado permita que el complejo
MAb-CA mantenga la ventaja proporcionada por la
especificidad del MAb seleccionado.
Así, se deben considerar varios criterios en la
selección de los quelatos adecuados para un MAb seleccionado. Por
ejemplo, (a) la adición del CA no debería alterar la especificidad o
la afinidad de unión del MAb al antigénico diana; (b) su adición al
MAb no debería dañar de otro modo el anticuerpo y así alterar sus
velocidades de catabolismo o los esquemas de distribución en el
tejido; (c) él debería mantener estrechamente el radiometal de tal
manera que no se produzca una elución prematura del radioisótopo
desde el complejo de MAb-CA en vivo; (d) el enlace
al MAb no debería alterar la capacidad del quelato para retener el
radio-núcleo; (e) el modo de enlace al MAb debería
ser tan específico como sea posible para facilitar el diseño de
protocolos para la detección y terapia específicos de los tumores
dianas así como también para el análisis de los datos relacionados
con la detección y tratamiento de los tumores; y (f) el quelato
debería ser capaz de ayudar a limpiar el radionúcleo después del
catabolismo del complejo de
MAb-CA-radionúcleo.
Un grupo de quelatos de metal adecuados se
proporciona por el ácido dietilentriaminopentaacético (DTPA) y el
ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) y sus derivados. Los
derivados modificados químicamente de (DTPA) y de (EDTA) se han
explorado como ligandos de metal capaces de quelar eficazmente
metales radiactivos, los cuales se pueden asociar fácilmente a las
inmunoglobulinas. Sin embargo, estos reactivos eran mínimamente
eficaces debido a la reducida afinidad para el radionúcleo unido, y
a la consecuente acumulación de compuestos radioquímicos en los
tejidos normales.
Se dispone de un cierto número de métodos
convencionales para la asociación de los complejos de metal de EDTA
y de DTPA a las proteínas. Sin embargo, estos métodos no han
alcanzado las velocidades de eficacia elevada requeridas para la
formación eficaz de imagen y detección del tumor. Por ejemplo, los
métodos convencionales presentan un cierto número de desventajas,
tales como la necesidad de una purificación extensiva con
anterioridad a su marcaje radiactivo y su deficiencia en la
quelación del metal, lo que proviene del uso de un sitio de unión
del metal en la formación del enlace covalente con la proteína. Así,
se han estudiado nuevos modos de enlace con la proteína, y se han
propuesto nuevos modos que preservan todos los sitios de unión del
metal.
Por ejemplo, una descripción detallada de los
ligandos modificados químicamente que reaccionarían rápida y
eficazmente con el anticuerpo, y que retendrían el metal durante un
cierto tiempo que es prolongado en comparación con los períodos de
semi-descomposición de los radionúcleos útiles para
la formación de imagen o la terapia se proporciona por Brechbiel y
colaboradores en "Synthesis of
(1-(p-isothio-cyanatobenzyl)
derivatives of DTPA and EDTA. Antibody Labeling and
Tumor-Imaging Studies" Inorg. Chem. 1986, 25,
2772-2781, los contenidos de los cuales se
incorporan en la presente invención como referencia en su
totalidad.
Brechbiel y colaboradores proponen quelatos
modificados químicamente con EDTA y DTPA que tienen un grupo de
isotiocianato capaz de asociarse de manera eficaz a las proteínas.
La síntesis de los quelatos se puede resumir como un
"procedimiento en dos etapas", en el que la primera etapa
incluye generar una etilendiamina o una dietilen triamina seguido
de la alquilación de las aminas para formar el ácido poliacético
correspondiente, y la segunda etapa incluye convertir un grupo
funcional de la sustitución de bencilo para obtener un resto
reactivo útil para la asociación a la proteína.
Sin embargo, el procedimiento de "dos
etapas" anterior para la síntesis de los MX-DTPA
y los análogos de EDTA está limitado a un rendimiento global bajo
de menos del 2%. El procedimiento requiere una tediosa purificación
de los compuestos intermedios, lo que incluye el empleo de la
cromatografía de cambio de catión y de anión. Además, la síntesis
produce ambos regioisómeros de los MX-DTPA y ha
mostrado una mala reproducibilidad.
Así, existe una necesidad de un procedimiento de
síntesis alternativo para la preparación de los derivados de DTPA
con un elevado rendimiento. Es deseable que la nueva síntesis
elimine la necesidad del empleo de la cromatografía de cambio de
ion en la separación de los compuestos intermedios, proporcionando
así un procedimiento que se pueda realizar fácilmente a mayor
escala. Además, es también deseable que dicho procedimiento produzca
un único regioisómero del quelato, permitiendo así la síntesis
regioespecífica de los quelatos deseados útiles como agentes de
marcaje radiactivo eficaces.
Brechbiel y Gansow (Bioconjugate Chem. 1991, 2,
187-194) describen la síntesis de ligandos de DTPA
bifuncionales, que incluyen MX-DTPA, para
proporcionar agentes de quelación para la radioinmunoterapia con
^{90}Y.
La presente invención proporciona una
composición que comprende el regioisómero del ácido
2-(p-isotiocianatobencil)-6-metildietilentriamino-N,N,N,N'',N''-pentaacético
(MX-DTPA) de fórmula (I):
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
en la que el porcentaje de dicho
regioisómero, con respecto a cualquier otro regioisómero, es al
menos del 90%. Preferiblemente, el porcentaje de dicho
regioisómero, con respecto a cualquier otro regioisómero es al
menos del 95%, y más preferiblemente de al menos
99%.
En otro aspecto, la invención proporciona el uso
de la composición de MX-DTPA para la producción de
un MX-DTPA con marcaje radiactivo.
El MX-DTPA con marcaje
radiactivo se puede unir a una proteína, por ejemplo un
anticuerpo.
Se describe en la presente invención un
procedimiento para la síntesis regioselectiva de derivados de DTPA
adecuados para la quelación con metales radiactivos y su asociación
a las inmunoglobulinas. El procedimiento incluye asociar una
diamina monoprotegida y un compuesto que contiene una amina y un
resto capaz de asociar eficazmente el derivado de DTPA a las
inmunoglobulinas o un resto capaz de ser convertido para asociar
eficazmente el derivado de DTPA a las inmunoglobulinas.
En un aspecto, un procedimiento para la
preparación de un derivado de DTPA de fórmula (II):
comprende: (a) asociar la
N-terc-butoxicarbonil-p-nitro-L-fenilalanina
(A) con la diamina monoprotegida (B) para formar el compuesto (C);
(b) separar los grupos de protección de la amina en (C) para formar
la sal de TFA (D); (c) reducir (D) para formar (E); (d)
penta-alquilar (E) para formar (F); (e) separar los
grupos de protección de la amina en (F) para formar la sal de ácido
trifluoracético (G); (f) reducir el grupo nitro en (G) para formar
la sal de ácido trifluoracético (H); y (g) convertir el grupo amino
en (H) para formar el derivado de
DTPA.
El procedimiento permite sintetizar una variedad
de derivados de DTPA, que incluyen MX-DTPA,
IB3M-DTPA y CHx-DTPA.
La naturaleza del derivado de DTPA se determina
mediante la elección de la diamina monoprotegida (B). R_{1} y
R_{2} en el compuesto (B) se seleccionan para obtener el derivado
de DTPA modificado químicamente deseado.
Un procedimiento para la preparación de
MX-DTPA comprende: (a) asociar la
N-terc-butoxicarbonil-p-nitro-L-fenilalanina
(A) con la N-terc-butoxicarbonil
diamina mono-protegida (B') para formar
N-(2-N-terc-butoxicarbonil-amino-propil)-N-terc-butoxicarbonil-p-nitrofenilalaninamida
(C'); (b) separar los grupos boc en (C') para formar la sal de TFA
de
N-(2-aminopropil)-p-nitrofenilalaninamida
(D'); (c) reducir (D') para formar el trihidrocloruro de
2-metil-6-(p-nitrobencil)dietilentriamina
(E'); (d) penta-alquilar (E') para formar
N,N,N',N'',N''-pentaquis[terc-butoxicarbonil)metil]-2-[(4-nitrofenil)metil]-6-metildietilentriamina
(F'); (e) separar los grupos boc en (F') para formar la sal de
ácido trifluoracético de
N,N,N',N'',N''-pentaquis(carboximetil)-2-[(4-nitrofenil)metil]6-metildietilentriamina
(G'); (f) reducir los grupos nitro en (G') para formar la sal de
ácido trifluoracético de
N,N,N',N'',N''-pentaquis(carboximetil)-2-[(4-aminofenil)metil]-6-metildietilentriamina
(H'); y (g) convertir el grupo amino en (H') para formar el ácido
2-(p-isotiocianatobencil)-6-metildietilentriamina-N,N,N',-N'',N''-pentaacético
(MX-DTPA).
En un aspecto del procedimiento para la síntesis
del MX-DTPA, la etapa (a) incluye el uso de
hexafluorfosfato de
benzotriazol-1-iloxitris(dimetilamino)fosfonio
(BOP) como el reactivo de asociación.
En otro aspecto del procedimiento para la
síntesis del MX-DTPA, la etapa (a) incluye el uso de
cloruro de
bis(2-oxo-3-oxazolidinil)fosfínico
(BOP-Cl) como el reactivo de asociación.
En todavía otro aspecto del procedimiento para
la síntesis del MX-DTPA, la diamina monoprotegida
con boc (B') se obtiene mediante un procedimiento que incluye (i)
tratar un lactonitrilo con hidróxido de amonio para formar el
\alpha-aminonitrilo (2); (ii) tratar (2) con ácido
clorhídrico para formar la sal de hidrocloruro de amina (3); (iii)
proteger la amina con dicarbonato de
di-terc-butilo para formar el
derivado protegido con boc (4), (iv) reducir el nitrilo usando
níquel Raney con una disolución saturada de etanol bajo dos
atmósferas de hidrógeno para formar la diamina monoprotegida con
boc (B').
En todavía otro aspecto del procedimiento para
la síntesis del MX-DTPA, la diamina monoprotegida
con boc (B') se obtiene mediante un procedimiento que comprende (i)
alquilar una base de Schiff (5) bajo condiciones de transferencia
de fase para formar un producto mono-sustituido con
alquilo (6); (ii) desproteger (6) con ácido clorhídrico 1 N seguido
por la protección de la amina con dicarbonato de
di-terc-butilo para formar la amina
protegida con boc (4); y (iii) reducir (4) con níquel Raney para
formar la diamina monoprotegida con boc (B').
En un aspecto adicional del procedimiento para
la síntesis del MX-DTPA, la separación de los grupos
en (C') para formar (D') se efectúa usando ácido trifluoracético en
diclorometano.
En otro aspecto del procedimiento para la
síntesis del MX-DTPA, la etapa de reducir (D')
incluye tratar (D') con un complejo de
borano-tetrahidrofurano, seguido del tratamiento con
cloruro de hidrógeno para formar la sal de hidrocloruro de triamina
(E').
En todavía otro aspecto del procedimiento para
la síntesis del MX-DTPA, la
penta-alquilación del compuesto intermedio (E') se
efectúa usando acetonitrilo y carbonato de potasio.
En todavía otro aspecto del procedimiento para
la síntesis del MX-DTPA, la
penta-alquilación del producto intermedio (E') se
efectúa usando bromoacetato de terc-butilo en
dimetilformamida y carbonato de sodio.
En un aspecto adicional del procedimiento para
la síntesis del MX-DTPA, (F') se purifica usando la
cromatografía en columna sobre gel de sílice.
En un aspecto adicional del procedimiento para
la síntesis del MX-DTPA, (F') se purifica usando
cromatografía en columna sobre gel de sílice.
En todavía otro aspecto del procedimiento para
la síntesis del MX-DTPA, la etapa de desprotección
de los ácidos carboxílicos en (F') para formar el derivado de ácido
pentaacético (G') se efectúa usando ácido trifluoracético.
En todavía otro aspecto del procedimiento para
la síntesis del MX-DTPA, la reducción del grupo
nitro en (G') para formar (H') se efectúa usando paladio sobre
carbono bajo dos atmósferas de hidrógeno en agua.
En todavía otro aspecto del procedimiento para
la síntesis del MX-DTPA, la etapa de convertir (H')
en MX-DTPA incluye convertir la amina (H') a la
funcionalidad de isotiocianato vía tiofosgeno. La conversión se
puede efectuar de varias maneras. Por ejemplo, mediante (i) añadir
tiofosgeno a una mezcla bifásica que contiene el derivado de ácido
pentaacético (H) en cloroformo y agua; (ii) agitar rápidamente la
mezcla durante dos horas; (iii) separar el disolvente bajo presión
reducida para formar un residuo; (iv) purificar el residuo sobre
sílice en fase reversa; y (v) eluir con 25% de acetonitrilo en agua
que contiene 1% de ácido acético. La conversión se puede efectuar
también usando diclorometano y trietilamina, o acetonitrilo y
bicarbonato de sodio o carbonato de sodio.
También se describe en la presente invención un
procedimiento para la preparación de CHx-DTPA que
comprende: (a) asociar la
N-terc-butoxicarbonil-p-nitro-L-fenilalanina
(A) y la diamina monoprotegida (B'') para formar el compuesto
(C''); (b) separar los grupos de protección de la amina en (C'')
para formar la sal de TFA (D''); (c) reducir (D'') para formar
(E''); (d) penta-alquilar (E'') para formar (F'');
(e) separar los grupos de protección de la amina en (F'') para
formar la sal de ácido trifluoracético (G''); (f) reducir el grupo
nitro en (G'') para formar la sal de ácido trifluoracético (H''); y
(g) convertir el grupo amino en (H'') para formar el
CHx-DTPA. La diamina monoprotegida (B'') se puede
usar como un isómero sys o trans.
La Figura 1 es un esquema de reacción que resume
el procedimiento en siete etapas para la síntesis regioespecífica
de derivados de DTPA de fórmula (II).
La Figura 2 es un esquema de reacción que resume
el procedimiento en siete etapas para la síntesis regioespecífica
de MX-DTPA.
La Figura 3 es un esquema de reacción en cuatro
etapas para la síntesis de (B').
La Figura 4 es un esquema de reacción
alternativo para la síntesis de (B').
La Figura 5 es un esquema de reacción para una
etapa alternativa 1 en el esquema de reacción de la Figura 2.
La Figura 6 es un esquema de reacción que
representa una condensación sin éxito de (B') con el éster metílico
de
4-nitro-L-fenilalanina
(a) en metanol y (b) en tolueno.
La Figura 7 muestra dos esquemas de reacción
alternativos (a) y (b) para la alquilación de (E') para formar
(F').
La Figura 8 es un esquema de reacción
alternativo para la conversión de (H') en
MX-DTPA.
La Figura 9 es un esquema de reacción que resume
el procedimiento en siete etapas para la síntesis regioespecífica de
CHx-DTPA.
La Figura 10 es un esquema que representa los
regioisómeros de CHx-DTPA preparados selectivamente
mediante el procedimiento descrito en la presente invención.
La Figura 11 es un esquema de reacción en dos
etapas para la síntesis de (B'').
A menos que se indique de otro modo, todos los
términos técnicos y científicos usados en la presente invención
tienen el mismo significado que se entiende comúnmente por una
persona medianamente especializada en la técnica a la que esta
invención pertenece. Aunque se pueden usar cualesquiera métodos y
materiales similares o equivalentes a los descritos en la presente
invención en la práctica o ensayo de la presente invención, se
describen los métodos y materiales preferidos.
La composición de MX-DTPA de la
presente invención se puede preparar mediante un procedimiento para
la síntesis regioselectiva de elevado rendimiento de derivados de
DTPA modificados químicamente que elimina la necesidad de
separación cromatográfica mediante cambio de ion de los compuestos
intermedios. Además, como este procedimiento produce un único
regioisómero del quelato, él proporciona la síntesis regioespecífica
de los quelatos deseados útiles como agentes de marcaje
radiactivo.
Más específicamente, la Figura 1 es un esquema
de reacción que resume el procedimiento en siete etapas para la
síntesis regioespecífica de derivados de DTPA de fórmula (II), que
comprende las etapas de (a) asociar la
N-terc-butoxicarbonil-p-nitro-L-fenilalanina
(A) con una diamina monoprotegida (B) para formar el compuesto (C);
(b) separar los grupos de protección de la amina en (C) para formar
la sal de TFA (D); (c) reducir (D) para formar (E); (d)
penta-alquilar (E) para formar (F); (e) separar los
grupos de protección de la amina en (F) para formar la sal de ácido
trifluoracético (G); (f) reducir el grupo nitro en (G) para formar
la sal de ácido trifluoracético (H); y (g) convertir el grupo amino
en (H) para formar el derivado de DTPA de fórmula (II).
El procedimiento permite sintetizar una variedad
de derivados de DTPA, que incluyen MX-DTPA,
1B3M-DTPA y CHx-DTPA.
La naturaleza del derivado de DTPA se determina
mediante la elección de la diamin amonoprotegida (B). R_{1} y
R_{2} en el compuesto (B) se seleccionan para obtener el derivado
de DTPA modificado químicamente deseado.
La Figura 2 contiene un esquema de reacción que
resume el procedimiento en siete etapas para la síntesis
regioespecífica de MX-DTPA. En esta realización, la
síntesis regioespecífica de MX-DTPA se efectúa en
las etapas siguientes: (a) asociar
N-terc-butoxicarbonil-p-nitro-L-fenil-alanina
(A) con la
N-terc-butoxicarbonildiamina
protegida (B') para formar
N-(2-N-terc-butoxicarbonil-aminopropil)-N-terc-butoxicarbonil-p-nitrofenilalaninamida(C');
(b) separar los grupos boc en (C') para formar la sal de TFA de
N-(2-aminopropil)-p-nitrofenilalaninamida
(D'); (c) reducir (D') para formar el trihidrocloruro de
2-metil-6-(p-nitro-bencil)dietilentriamina
(E'), (d) penta-alquilar (E') para formar
N,N,N',N'',N''-pentaquis[terc-butoxicarbonil)metil]-2-[(4-nitrofenil)metil]-6-metildietilentriamina
(F'); (e) separar los grupos boc en (F') para formar la sal del
ácido trifluoracético de N,N,
N',N'',N''-pentaquis(carboximetil)-2-[(4-nitrofenil)metil]-6-metildietilentriamina
(G'); (f) reducir el grupo nitro en (G') para formar la sal de
ácido trifluoracético de N,N,
N',N'',N''-pentaquis(carboximetil)-2-[(4-aminofenil)metil]-6-metildietilentriamina
(H'); y (g) convertir el grupo amino en (H') para formar el ácido
2-(p-isotiocianatobencil)-6-metildietilentriamina-N,N,N',N'',N''-pentaacético
(MX-DTPA).
El procedimiento para la síntesis
regioespecífica de MX-DTPA tiene un rendimiento
global de aproximadamente 20% comenzando a partir de la diamina
mono-protegida con boc (B') y
p-nitro-L-fenilalanina
protegida con boc (A) y es susceptible de su escalación. Así,
sintetizar MX-DTPA de acuerdo con la Figura 2
permite conseguir rendimientos globales de la síntesis de
aproximadamente un orden de magnitud más elevado que el rendimiento
global obtenido con los procedimientos previos (menos del 2%9.
Además, los procedimientos de síntesis previos necesitan la
purificación de un compuesto intermedio vía una cromatografía
tediosa de cambio de anión y de catión. Por contraste, el
procedimiento de la Figura 2 elimina este procedimiento de
purificación costoso y proporciona el compuesto diana con una
elevada pureza. Por ejemplo, en el procedimiento de la Figura 2,
solo se requiere una cromatografía en columna de fase normal y una
en columna de fase reversa para purificar el compuesto final.
La Figura 3 es un esquema de reacción de cuatro
etapas para la síntesis de la diamina monoprotegida con boc (B').
La síntesis de (B') se consigue vía tratamiento de lactonitrilo
disponible comercialmente con hidróxido de amonio para producir el
\alpha-aminonitrilo (2) que por tratamiento con
ácido clorhídrico proporciona la sal de hidrocloruro de la amina
(3). La protección de la amina con dicarbonato de
di-terc-butilo da lugar al derivado
protegido con boc (4). La reducción del nitrilo usando níquel Raney
con una disolución saturada de etanol bajo dos atmósferas de
hidrógeno produce la diamina monoprotegida con boc requerida (B').
Esta secuencia de reacción es particularmente atractiva desde un
punto de vista económico debido a su reproducibilidad y a que es
fácilmente susceptible de escalación.
Se investigaron también diversas otras
condiciones diferentes para la preparación de (B'). Por ejemplo, la
Figura 4 muestra un esquema de reacción para la síntesis de (B'), en
la que (B') se prepara mediante alquilación de una base de Schiff
(5) bajo condiciones de transferencia de fases para producir el
producto mono sustituido con alquilo (6) con un moderado
rendimiento. La desprotección de (6) con ácido clorhídrico 1 N
seguido de su protección con di-carbonato de
di-terc-butilo proporciona la amina
protegida con boc (4) que por reducción con níquel Raney produce la
diamina mono protegida con boc requerida (B').
En la realización mostrada en la Figura 1, la
síntesis emplea
N-terc-butoxicarbonil-p-nitro-L-fenilalanina
(A) que se asocia con la
N-terc-butoxicarbonil-diamina
mono protegida (B'). El reactivo de asociación preferido para
realizar esta etapa es el hexafluorfosfato de
benzotriazol-1-iloxitris(dimetilamino)fosfonio
(BOP). Estas condiciones permiten la síntesis del compuesto (C')
con un rendimiento aislado en el intervalo desde 72 a 83%. La
purificación de (C') se puede conseguir vía su lavado con ácido/base
seguido de su trituración con hexanos.
La Figura 5 es un esquema de reacción que
representa una etapa alternativa 1 en el esquema de reacción de la
Figura 2. Como se muestra en la Figura 5, el uso de cloruro de
bis(2-oxo-3-oxazolidinil)fosfínico
(BOP-Cl) da lugar también a la formación del
producto deseado (C'); sin embargo, el rendimiento de esta reacción
es del 23% en comparación con el rendimiento del 83% que se puede
conseguir con la etapa 1 de acuerdo con la Figura 2.
Otras vías de reacción para la síntesis de (C')
no tenían éxito. Por ejemplo, como se muestra, esquemáticamente, en
la Figura 6, los esfuerzos para generar un derivado relacionado de
(C') vía la condensación directa de (B') con el éster metílico de
4-nitro-L-fenilalanina
(1) bien mediante (a) agitar en metanol ó (b) calentar a reflujo en
tolueno no tuvieron éxito.
Habiendo conseguido una síntesis viable del
compuesto (C'), los grupos de protección con boc se pueden separar
a continuación usando ácido trifluoracético en diclorometano para
formar la diamina (D'). En este procedimiento, (D') se produce con
un rendimiento cuantitativo (100%) como un sólido.
Como se representa en la Figura 2, la reducción
de la amida (D') con un complejo de
borano-tetrahidrofurano, seguido del tratamiento
con cloruro de hidrógeno produce la sal de hidrocloruro de la
triamina (E'). Además de la etapa de alquilación representada en la
Figura 2, se pueden usar otras vías de reacción. Por ejemplo, la
Figura 7 muestra dos esquemas de reacción (a) y (b) para la
alquilación de (E') para formar (F'). La
penta-alquilación del compuesto intermedio (E') se
puede conseguir usando bromo-acetato de
terc-butilo en dimetilformamida y carbonato de
sodio como base o alternativamente usando acetonitrilo como
disolvente y carbonato de potasio. Las últimas condiciones son más
conducentes a su escalación y a eliminar el uso de la
dimetilformamida que es generalmente difícil de separar. El
rendimiento aislado para esta etapa está en el intervalo de 60%
cuando la reacción se permite proceder durante 72 a 96 horas. La
purificación de (F') se efectúa preferiblemente vía la
cromatografía de columna sobre gel de sílice.
Como se muestra, esquemáticamente en la Figura
2, el derivado de ácido penta-acético (G') se puede
obtener mediante desprotección de los ácidos carboxílicos, y
preferiblemente mediante el uso de ácido trifluoracético. La
reducción del grupo nitro se efectúa usando paladio sobre carbono
bajo dos atmósferas de hidrógeno en agua. Se debe advertir aquí que
los inventores han evitado los inconvenientes de los procedimientos
de síntesis previamente conocidos. Por ejemplo, el procedimiento
evita el uso de hidróxido de amonio, que es difícil de separar, y
complica el procedimiento de síntesis al requerir una etapa para la
generación del isotiocianato debido a la formación de un
subproducto de tiourea.
La etapa final en el esquema de reacción de la
Figura 2 se refiere a la conversión de la amina en la funcionalidad
de isotiocianato vía tiofosgeno. A este respecto, los inventores han
investigado diversas condiciones de operación.
Las condiciones preferidas para convertir (H')
en MX-DTPA se representan en la última etapa del
esquema de la Figura 2. Estas condiciones incluyen la adición de
tiofosgeno a una mezcla bifásica que contiene el derivado de ácido
penta-acético (H') en cloroformo y agua y
rápidamente agitar la mezcla durante dos horas. La separación del
disolvente bajo presión reducida seguido de la purificación del
residuo sobre sílice en fase reversa y eluir con 25% de
acetonitrilo en agua que contiene 1% de ácido acético produjo el
compuesto diana MX-DTPA con buen rendimiento.
Se han investigado también otras condiciones de
operación. Por ejemplo, la Figura 8 muestra un esquema de reacción
para la conversión de (H') en MX-DTPA usando
dicloro-metano como disolvente y trietilamina como
una base. Sin embargo, además del MX-DTPA, la
reacción produce también hidrocloruro de trietilamina como un
subproducto que no se puede separar fácilmente.
La conversión de (H') en MX-DTPA
se puede efectuar también usando acetonitrilo como disolvente y
bicarbonato de sodio o carbonato de sodio como base. Esta reacción
produjo también otras impurezas.
La composición de MX-DTPA de la
invención se pude usar eficazmente en numerosas aplicaciones que
requieren un agente de quelación. Por ejemplo, la composición de
MX-DTPA proporciona agentes de quelación con marcaje
radiactivo eficaces, agentes de quelación de anticuerpos y agentes
de quelación de proteínas. Los MX-DTPA con marcaje
radiactivo proporcionan una herramienta eficaz para numerosas
aplicaciones, tales como la escintigrafía, la radioterapia y el
radioinmuneensayo.
A este respecto, el procedimiento para la
síntesis de MX-DTPA presenta numerosas ventajas. Por
ejemplo, el procedimiento no requiere la cromatografía de cambio de
catión y de anión necesaria para la tediosa purificación de los
compuestos intermedios. El evitar la necesidad de la cromatografía
de cambio de catión y de anión proporciona un procedimiento que se
puede someter a escalación fácilmente.
Otra ventaja se refiere al elevado rendimiento
permitido por el procedimiento. Como se trató anteriormente, los
quelatos eficaces para su uso en los radioinmunoensayos deben estar
fácilmente disponibles en cantidades suficientes para satisfacer
una demanda potencialmente elevada. El procedimiento proporciona
MX-DTPA con un rendimiento tan elevado como el 20%,
un orden de magnitud más elevado que el de los procedimientos
existentes para sintetizar los MX-DTPA.
Los quelatos de MX-DTPA de la
invención tienen una elevada pureza. El proporcionar el quelato en
una forma pura proporciona numerosas ventajas, tales como un
acondicionamiento y preparación más fácil de los MAbs quelados, en
los que se minimiza la presencia de subproductos indeseables. La
minimización de las impurezas en los quelatos sintetizados permite
un acondicionamiento más fácil del quelato para sus aplicaciones
biológicas.
Una ventaja adicional se refiere a la
regioespecifidad obtenida con el procedimiento, lo que proporciona
la síntesis regioespecífica de los MX-DTPA.
Mientras que no se desea estar ligado a ninguna
teoría, la síntesis regioespecífica de los MX-DTPA
se puede obtener mediante el uso del compuesto (A) en la forma de
un único isómero. Una vez se selecciona un isómero en particular
del compuesto (A) para comenzar el procedimiento de síntesis, la
configuración alrededor del carbono quiral en (A) se mantiene a
través del procedimiento de síntesis.
El uso de MX-DTPA en la forma de
un único regioisómero presenta varias ventajas. Por ejemplo, el uso
de un único isómero de MX-DTPA proporciona mejores
resultados de escintigrafía y evita la pérdida de la señal óptica
asociada con el uso de mezclas racémicas. También, el uso de un
único isómero permite el diseño de complejos de
MAb-CA con elevada especificidad. A este respecto,
el uso de un único isómero permite que todas las moléculas del
quelato estén unidas al MAb en sustancialmente la misma manera.
Otra ventaja de sintetizar específicamente un
único regioisómero de los MX-DTPA se refiere al
control proporcionado por la posición del radionúcleo quelado en
relación con el MAb y en última instancia con el tumor diana. El
control de la posición del radionúcleo es posible a través del uso
de un isómero único del MX-DTPA. Las ventajas de
proporcionar un único modo de enlace mediante el uso de un único
isómero incluyen la mejora potencial en los resultados de obtención
de imagen y terapéuticos obtenidos con el complejo de
MAb-CA.
El quelato de MX-DTPA de la
invención es adecuado para la quelación de una variedad de
radionúcleos. El quelato es también adecuado para la formación de
complejos con una variedad de MAbs y de proteínas. Así, se anticipa
que el quelato de MX-DTPA de la invención
proporciona agentes de marcaje radiactivo y terapéuticos igualmente
eficaces cuando se combinan con cualquier radionúcleo o MAb adecuado
para su combinación con MX-DTPA.
En una realización, el MX-DTPA
se conjuga con un anticuerpo 2B8 para formar
2B8-MX-DTPA. El 2B8 es un anticuerpo
anti-CD20 que muestra afectar a la destrucción de
la célula B por administración a los pacientes de linfoma. Los
protocolos detallados para la formación de los
2B8-MX-DTPA se describen en detalle
en la Patente de EE.UU. Nº 5.736.-137, los contenidos de la cual se
incorporan en la presente invención como referencia en su
totalidad.
Sin embargo, debe ser evidente para las personas
especializadas en la técnica que los agentes de quelación de
MX-DTPA de la presente invención se pueden usar en
el marcaje radiactivo de otros anticuerpos
anti-CD20, o de cualquier otro anticuerpo que ha
sido conjugado con el DTPA u otro agente de quelación polivalente.
También, los quelatos de MX-DTPA de acuerdo con la
invención se pueden unir a otras proteínas y péptidos, por ejemplo,
receptores, hormonas, factores de crecimiento, tales como los
péptidos de somastotaton.
Mientras que la descripción detallada anterior
centra la atención en la síntesis de los MX-DTPA, el
procedimiento es igualmente aplicable a la síntesis de otros
derivados de DTPA modificados químicamente. A este respecto, el
procedimiento se puede usar ventajosamente en la síntesis
regioselectiva de una variedad de derivados de DTPA adecuados para
la quelación de metales radiactivos y para su asociación a las
inmunoglobulinas. El procedimiento comprende asociar una diamina
monoprotegida y un compuesto que comprende una amina y un resto
capaz de asociar eficazmente el derivado de DTPA a las
inmunoglobulinas o un resto capaz de ser convertido para asociar
eficazmente el derivado de DTPA a las inmunoglobulinas. Como se
puede apreciar fácilmente por las personas especializadas en la
técnica, el procedimiento es particularmente ventajoso porque una
variedad de diaminas monoprotegidas se pueden asociar a una
variedad de compuestos que comprende una amina y un resto capaz de
asociar eficazmente el derivado de DTPA a las inmunoglobulinas o un
resto capaz de ser convertido para asociar eficazmente el derivado
de DTPA a las inmunoglobulinas.
Por ejemplo, se puede preparar
1B3M-DTPA de acuerdo con un esquema de reacción
similar al esquema de reacción de la Figura 2. El
1B3M-DTPA se prepara mediante el uso de un isómero
de (B'), en el que las posiciones de R_{1} (es decir, H) y
R_{2} (es decir, CHQ3Q) están cambiadas.
El CHx-DTPA es otro ejemplo de
derivados de DTPA que se pueden preparar de acuerdo con el
procedimiento descrito en la presente invención. La Figura 9 es un
esquema de reacción que resume el procedimiento para la síntesis de
CHx-DTPA. En la etapa (a) del esquema de la Figura
9, el diamino ciclohexano monoprotegido con boc (B'') se condensa
con el compuesto (A) para formar el compuesto (C''). Después de que
se forma el compuesto (C''), la síntesis de
CHx-DTPA procede en etapas similares a las de la
Figura 2.
La diamina (B'') se puede usar en la forma sys ó
trans para preparar los isómeros de CHx-DTPA
correspondientes. La Figura 10 representa los regioisómeros de
CHx-DTPA que se pueden preparar mediante combinación
de los isómeros seleccionados de los compuestos (A) y (B'').
La diamina monoprotegida (B'') se puede preparar
de diversas maneras. Una vía preferida para la preparación de (B'')
se representa en el esquema de reacción en dos etapas de la Figura
11.
\vskip1.000000\baselineskip
Se usaron reactivos disponibles comercialmente y
disolventes grado HPLC ó anhidros sin posterior purificación. La
cromatografía en columna en fase normal y la TLC se efectuaron sobre
gel de sílice ICN (63-200, 60A) y gel de sílice
Merck (60A) con indicador fluorescente respectivamente. La
cromatografía en columna en fase reversa y la TLC se efectuaron
sobre gel de sílice impregnada con hidrocarburos en fase reversa EM
Science LiChroprep RP-18
(40-63 um) y Techware RPS-F con indicador fluorescente respectivamente.
(40-63 um) y Techware RPS-F con indicador fluorescente respectivamente.
Una mezcla que contiene 23,1 g (324,99 mmol) de
lactonitrilo (grado técnico de 90% de pureza), 7,1 g (132,74 mmol)
de cloruro de amonio y 86 ml (2208,3 mmol) de hidróxido de amonio se
permitió agitar a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla
de reacción se extrajo con diclorometano (2 x 500 ml) y la fase
orgánica se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. La mezcla se
filtró y el disolvente se separó bojo presión reducida para
producir 24 g de un aceite amarillo (2). El aceite amarillo se
diluyó con 250 ml de éter dietílico anhidro y se enfrió en un baño
de hielo. A continuación se añadieron 30 ml (350 mmol) de ácido
clorhídrico 1 N en éter. Después de agitar durante 10 minutos, el
sólido que se obtiene se filtró, se lavó con éter y se secó bajo
vacío para producir 28,79 g de producto con un rendimiento de
92,83%, basado en la pureza del lactonitrilo de partida.
A una mezcla que contiene 28,5 g (268,79 mmol)
de hidrocloruro de 2-aminopropanonitrilo en 300 ml
de diclorometano anhidro se añadió 104 ml (746,16 mmol) de
trietilamina. La mezcla se enfrió en un baño de hielo seguido de la
adición de 64,5 g (295,53 mmol) de dicarbonato de
di-terc-butilo en 100 ml de
diclorometano anhidro durante 30 minutos. La mezcla de reacción se
permitió calentar a la temperatura ambiente bajo agitación durante
48 horas. La mezcla de reacción se filtró a través de un embudo de
vidrio sinterizado y el filtrado se redujo bajo presión reducida.
Se añadió 1 L de éter dietílico y la mezcla se permitió agitar
durante 15 minutos. La mezcla se filtró de nuevo a través de un
embudo de vidrio sinterizado para separar el hidrocloruro de
trietilamina restante. El filtrado se concentró bajo presión
reducida. La cromatografía en columna del residuo sobre gel de
sílice con elución con 30% de acetato de etilo/hexanos produjo 18,50
g de producto con un rendimiento del 40,44%.
A un matraz Parr de 500 ml se añadió 18,4 g
(108,10 mmol) de
N-terc-butoxicarbonil-2-aminopropanonitrilo
y 200 ml de etanol absoluto saturado con amoniaco. A continuación
se añadió níquel Raney (10 g de una suspensión al 50% en agua) y el
matraz se presurizó a 344,85 kPa con gas hidrógeno y se puso en
contacto con la atmósfera. El matraz se presurizó de nuevo a 344,85
kPa con gas hidrógeno y se puso en contacto con la atmósfera. A
continuación, el matraz se presurizó a 344,85 kPa con gas hidrógeno
y se agitó hasta que no hubo ninguna absorción adicional de
hidrógeno, lo que generalmente se alcanzó durante la noche. El
matraz se puso en contacto con la atmósfera y la mezcla se filtró a
través de un relleno de celite 521. El filtrado se concentró bajo
presión reducida para producir 19,2 g de producto como un aceite
incoloro con rendimiento cuantitativo (100%).
A una disolución que contiene 50 g (226,98 mmol)
de N-difenilmetilen)aminoacetonitrilo en 250
ml de tolueno se añadió 4,5 g (19,76 mmol) de cloruro de
benzotrietilamonio (BTEAC) seguido de la adición de 28,3 g (707,50
mmol) de hidróxido de sodio en 50 ml de agua. La mezcla de reacción
se enfrió en un baño de hielo seguido de una adición gota a gota de
22 ml (232,51 mmol) de sulfato de metilo durante 1 hora. La mezcla
de reacción se permitió calentar a temperatura ambiente durante 24
horas. La mezcla de reacción se diluyó con 1 litro de diclorometano
y se lavó con agua (2 x 1 L). La fase orgánica se secó sobre sulfato
de magnesio anhidro. La filtración, separación del disolvente y la
cromatografía de columna del residuo sobre gel de sílice con
elución con 20% de acetato de etilo/hexanos produjo 46,2 g de
producto con un rendimiento del 62,05%.
Una mezcla que contiene 3,0 g (12,80 mmol) de
N-(difenilmetilen-2-metil-aminoacetonitrilo
en 30 ml de hexano y 25 ml (25 mmol) de ácido clorhídrico acuoso 1
N se permitió agitar a temperatura ambiente durante 72 horas. La
fase acuosa se separó y se lavó con hexano. La concentración de la
fase acuosa bajo presión reducida produjo 1,25 g de producto con un
rendimiento del 92,10%.
A una disolución que contiene 25 g (80,57 mmol)
de
N-t-boc-p-nitro-L-fenilalanina
en 300 ml de diclorometano anhidro se añadió 12,5 ml (89,68 mmol)
de trietilamina seguido de 37 g (83,66 mmol) de hexafluorfosfato de
benzotriazol-1-iloxitris(dimetilamino)
fosfonio (BOP). Después de agitar a la temperatura ambiente durante
1 hora, se añadió 15,1 g (86,66 mmol) de
1-N-terc-butoxicarbonil-2-metil-etilendiamina
en 40 ml de diclorometano anhidro. La mezcla de reacción se
permitió agitar a temperatura ambiente durante 20 horas. La mezcla
de reacción se diluyó con 300 ml de diclorometano y se lavó con
ácido clorhídrico acuoso 1 N (2 x 500 ml), bicarbonato de sodio
acuoso saturado (2 x 500 ml) y agua (1 x 500 ml). La fase orgánica
se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. La filtración y
separación del disolvente bajo presión reducida produjo un sólido
amarillo. A continuación se añadieron hexanos (600 ml) y la mezcla
se permitió agitar durante 20 minutos. El sólido se filtró y se
secó para producir 27,0 g (71,83%) de producto como un sólido
blanco.
A una disolución que contiene 26,50 g (56,80
mmol) de
N-(2-N-terc-butoxicarbonil-aminopropil)-N-terc-butoxicarbonil-p-nitrofenilalaninamida
en 300 ml de diclorometano se añadió 65 ml (843,77 mmol) de ácido
trifluoroacético. La mezcla de reacción se permitió agitar a
temperatura ambiente durante 1 hora. El disolvente se separó bajo
presión reducida seguido de la adición de 500 ml de éter dietílico
anhidro. El sólido que se obtiene se filtró a través de un embudo
de vidrio sinterizado y se lavó con 400 ml de éter dietílico. El
sólido se secó bajo vacío para producir 32,0 g (100%) de producto
que contiene algo de ácido trifluoro-acético y éter
dietílico residuales. El material se usó sin posterior
purificación.
A una disolución que contiene 35 g (70,80 mmol)
de la sal de TFA de
N-(2-aminopropil)-p-nitrofenilalaninamida
en 500 ml de tetrahidrofurano anhidro se añadió 500 ml de complejo
de borano-tetrahidrofurano 1 M durante 30 minutos.
La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 16 horas. Después
de enfriar la mezcla de reacción en un baño de hielo, se añadieron
lentamente 122 ml de metanol para enfriar rápidamente el reactivo de
borano en exceso. Después de que terminara el desprendimiento de
gas, se separó el disolvente bajo presión reducida. El residuo se
separó en 265 ml de etanol absoluto y la disolución se saturó con
ácido clorhídrico (g) mientras que se enfriaba en un baño de hielo.
A continuación la mezcla se diluyó con 200 ml de éter dietílico
anhidro y el sólido que se obtiene se filtró y se secó bajo vacío
para producir 19,39 g de producto con un rendimiento de 75,72%.
A una mezcla que contiene 19,0 g (52,53 mmol) de
trihidrocloruro de
2-metil-6-(p-nitrobencil)dietilentriamina
en 550 ml de acetonitrilo anhidro se añadió 86,60 g (626,58 mmol)
de carbonato de potasio seguido de 42 ml (284,44 mmol) de
bromoacetato de terc-butilo. Después de agitar a la
temperatura ambiente durante 90 horas, la mezcla de reacción se
diluyó con 500 ml de agua y se extrajo con acetato de etilo (2 x 500
ml). La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. La
filtración y separación del disolvente bajo presión reducida dio un
aceite amarillo. La cromatografía en columna de este aceite sobre
gel de sílice con elución con 30% de acetato de etilo/hexanos
produjo 26,37 g de producto con un rendimiento del 60,99%.
Una disolución que contiene 5,0 g (6,08 mmol) de
de N,
N,N',N'',N''-Pentaquis[(terc-butoxicarbonil)metil]-2-[(4-nitrofenil)metil]-6-metildietilentriamina
en 35 ml de ácido trifluoroacético se permitió agitar a la
temperatura ambiente durante 48 horas. Se separó el disolvente bajo
presión reducida y el sólido que se obtiene se secó bajo vació para
producir 4,02 g de producto como un sólido amarillo pálido con un
rendimiento del 74,75%.
A un matraz Parr se añadió 3,40 g (3,48 mmol) de
sal del ácido trifluoroacético de
N,N,N',N'',N''-pentaquis(carboximetil)-2-[(4-nitrofenil)metil]-6-metildietilentriamina
y 50 ml de agua seguido de la adición de 0,3 g de 5% de paladio
sobre carbono. El matraz se presurizó a 206,91 kPa con hidrógeno y
se puso en contacto con la atmósfera dos veces. A continuación el
recipiente se presurizó a 310,365 kPa con hidrógeno y se agitó. Una
vez había cesado la absorción de hidrógeno, típicamente después de
2 a 4 horas, el matraz se puso en contacto con la atmósfera y la
mezcla se filtró a través de un relleno de celita. La celita se
lavó con 20 ml de agua. El filtrado se concentró bajo presión
reducida para producir 3,02 g de producto con un rendimiento del
92,03%. Los datos espectrales obtenidos para este producto son
consistentes con los de un patrón de referencia.
En un matraz de fondo redondo de 1 L equipado
con agitación magnética, se añadieron 7,0 g (7,23 mmol) de sal del
ácido trifluoroacético de
N,N,N',N'',N''-pentaquis(carboximetil)-2-[(4-aminofenil)metil]-6-metildietilentriamina
a una mezcla que contiene 150 ml de agua y 300 ml de cloroformo,
seguido de 4,67 g (44,06 mmol) de carbonato de sodio. La disolución
que se obtiene tenía un pH de aproximadamente 9,0. A esta mezcla
bifásica se añadió 0,64 ml (8,39 mmol) de tiofosgeno y la
disolución se permitió agitar a temperatura ambiente durante 2
horas. El disolvente se separó bajo presión reducida para formar un
residuo. El residuo se disolvió en 15 ml de 1% de ácido acético en
agua y se colocó sobre una columna de gel de sílice de fase reversa
con elución con 1% de ácido acético seguido de 25% de
acetonitrilo/agua que contiene 1% de ácido acético. Las fracciones
que contienen el producto se mezclaron y el disolvente se separó
bajo presión reducida para producir 2,47 g producto como un sólido
amarillo pálido con un rendimiento del 61,60%.
Claims (4)
1. Una composición que comprende el regioisómero
del ácido
2-(p-isotiocianatobencil)-6-metildietilentriamino-N,-N,N'N'',N''-pentaacético
(MX-DTPA) de fórmula (I):
en la que el porcentaje de dicho
regioisómero, con respecto a cualquier otro regioisómero, es al
menos de
90%.
2. Uso de la composición de acuerdo con la
reivindicación 1, para producir un MX-DTPA con
marcaje radiactivo.
3. Uso de acuerdo con la reivindicación 2, en el
que el MX-DTPA con marcaje radiactivo está unido a
una proteína.
4. Uso de acuerdo con la reivindicación 3, en el
que la proteína es un anticuerpo.
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