ES2303561T3 - Metodo para inhibir la formacion de seromas utilizando el factor xiii. - Google Patents

Abstract

Uso del factor XIII en la fabricación de un medicamento para inhibir la formación de un seroma o líquido seroso en el lugar de cirugía o una herida en un mamífero.

Description

Método para inhibir la formación de seromas utilizando el factor XIII.

Antecedentes de la invención

Los seromas son acúmulos de linfa presentes normalmente como tumefacciones no dolorosas dentro de una herida o debajo del colgajo. Éstos se desarrollan a menudo en heridas que implican disección en áreas con ganglio linfáticos, por ejemplo en axilas, cuello, ingle etc., o en áreas donde queda un espacio muerto significativo tal como tras una resección abdominal-perineal, mastectomía total o en procesos de reducción de pecho tanto en mujeres como para tratar la ginecomastia en hombres. Los seromas impiden la adecuada aproximación de tejidos o pueden volverse infecciosos de forma secundaria.

La causa principal radica en el fracaso para identificar y controlar los vasos linfáticos durante la disección. Aunque la linfa es un fluido rico en proteínas, la electrocauterización no es eficaz para impedir la formación de seromas. Así, existe la necesidad de desarrollar un tratamiento para prevenir la formación de seromas.

Descripción de la invención

La presente invención satisface la demanda por administración del factor XIII a pacientes que han sufrido cirugía, para inhibir la acumulación de líquido o seromas bajo la piel donde ocurrió la cirugía o donde se produjo una herida. El factor XIII puede ser aplicado de forma local en solución bajo la piel o puede ser administrado de forma sistémica. La solución de factor XIII puede ser administrada antes de la cirugía, antes de suturar la zona operada o puede ser inyectada bajo la piel tras la cirugía. Si el factor XIII se administra de forma local, puede ser activado o no activado, o el factor XIII no activado puede ser aplicado conjuntamente con una alfa-trombina activada. Después, la trombina activada podría activar al factor XIII. La trombina activada puede ser administrada de forma local a una concentración de aproximadamente 0,5 mg/ml de solución. En la Patente de EE.UU 5,502,034 se puede encontrar un método para producir trombina recombinante humana.

El factor XIII, también conocido como factor estabilizante de fibrina, circula en el plasma a una concentración de 20 \mug/ml. La proteína existe en plasma como un tetrámero compuesto por dos subunidades A y dos subunidades B. Cada subunidad tiene un peso molecular de 83.000 Da, y la proteína total tiene un peso molecular de aproximadamente 330.000 Da. El factor XIII cataliza el entrecruzamiento entre los grupos \gamma-glutamilo y \varepsilon-lisilo de distintas hebras de fibrina. La actividad catalítica del factor XIII reside en las subunidades A. Las subunidades B actúan como portadores para las subunidades A en el factor XIII de plasma. Se puede producir factor XIII recombinante de acuerdo con el proceso descrito en la Patente Europea Nº 0 268 772 B1. El nivel de factor XIII en el plasma puede aumentarse administrando un concentrado de factor XIII derivado de placenta humana, llamado FIBROGAMMIN® (Aventis Corp.) o por administración de factor XIII recombinante.

Como se indicó arriba, la administración de factor XIII a un individuo puede ser administrada de forma local en el lugar de la herida o de forma sistemica. Generalmente, si se administra de forma sistémica, el factor XIII es administrado de forma intravenosa. Cuando se administran proteínas terapéuticas por inyección, la administración puede ser por infusión continua o por un solo bolo o múltiples bolos. Se puede formular una composición farmacéutica que comprenda el factor XIII de acuerdo con los métodos conocidos para preparar composiciones farmacéuticamente útiles, a través de las cuales, las proteínas terapéuticas se combinan en una mezcla con un vehículo farmacéuticamente aceptable. Se dice que una composición es "vehículo farmacéuticamente aceptable" si su administración puede ser tolerada por un paciente receptor. Una composición farmacéutica apropiada del factor XIII contendrá EDTA 1 mM, glicina 10 mM, 2% de sacarosa en agua. Una formulación alternativa será una composición de factor XIII que contiene histidina 20 mM, 3% peso/volumen de sacarosa, glicina 2 mM y 0,1% peso/volumen. de polisorbato, pH 8.

Otros vehículos apropiados son bien conocidos por expertos en la materia. Véase, por ejemplo, Gennaro (ed.), Remington's Pharmaceutical Sciences, 19a edición (Mack Publishing Company 1995).

Administración del Factor XIII

Los niveles del factor XIII en un individuo pueden determinarse por ensayos bien conocidos en la técnica como el ensayo BERICHROM® F XIII (Dade Behring Marburgh GMBH, Marburg, Alemania). El adulto normal tiene un promedio de aproximadamente 45 ml de plasma por kg de peso corporal. Cada litro de sangre tiene 1000 unidades (U) de factor XIII. La cantidad de factor XIII administrado tendrá que ser suficiente para llevar un nivel de factor XIII en el plasma de un individuo al 100% del plasma normal o ligeramente por encima hasta 1-5% sobre el nivel normal. Una dosis de 0,45 U/kg podría aumentar el nivel del factor XIII en aproximadamente un 1% en comparación con el nivel normal. Una unidad del factor XIII es aproximadamente 10 \mug de factor XIII recombinante, que contiene sólo la subunidad A dimerizada. Así, para aumentar el nivel del factor XIII en un 1%, se deberían administrar aproximadamente 4,5 \mug de la subunidad A2 por peso en kilogramos del individuo. Así, para aumentar el nivel al 30% de lo normal, se deberían administrar 13,5 U/kg. Para un individuo de 75 kg, esto sería aproximadamente 1.012,5 U. Algunos pacientes pueden tener coagulopatías de consumo que implican pérdida de factor XIII. En dichos casos, se requiere una dosis superior (por ejemplo, 1-2 U/kg-%) o múltiples dosis de factor XIII (por ejemplo, 1-2 U/kg-%-día).

Ejemplo 1

El Uso del Factor XIII para Prevenir la Formación de Seroma en un Modelo de Mastectomía con Formación de Serona en Rata Objeto del experimento

El objeto del experimento era determinar si el factor XIII, cuando se administra de forma sistémica, influiría en la formación de seroma utilizando un modelo de mastectomía de rata.

Antecedentes

Los seromas son las complicaciones post-operatorias más comunes para pacientes que sufren mastectomía. La formación de estos acúmulos de fluido se facilita por la sección de vasos linfáticos y sanguíneos, así como por la creación de grandes cavidades potenciales bajo la piel. Los problemas post-operatorios debidos a la formación de seromas incluyen retraso en la curación de heridas, necrosis de tejido, edema linfático del brazo e infección.

La preparación del factor XIII fue proporcionada por ZymoGenetics, Inc., Seattle WA en botellas que contienen 13,2 mg de factor XIII liofilizado que contiene ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) 0,3 mM, glicina 31 mM, y 6,2% de sacarosa. El factor XIII liofilizado se reconstituyó con 3,3 ml de agua estéril y se pipeteó en alícuotas de 0,5 ml y se almacenó en un congelador a -20ºC.

Preparación del vehículo

La preparación del vehículo fue un polvo liofilizado que comprende EDTA 0,3 mM, glicina 31 mM y 6,2% de sacarosa. Éste se reconstituyó con 3,3 ml de agua estéril y se pipeteó en alícuotas de 0,5 ml y se almacenó en un congelador a -20ºC. Tras la descongelación, se añadió a cada vial 0,5 ml de albúmina sérica bovina (BSA).

Procedimiento experimental

Las ratas se anestesiaron con isoflurano (3% de isoflurano, 1% de oxígeno) y se insertó un catéter dentro de la vena yugular de cada rata. Dos o tres días después de la inserción del catéter, once ratas recibieron una sola inyección bolo intravenosa, a través del catéter, de la preparación vehículo (el grupo control) y 12 ratas recibieron una sola inyección bolo de 1 mg/kg de la preparación del factor XIII (el grupo experimental) 30 minutos antes de una mastectomía radical del lado izquierdo. La mastectomía consistió en la extirpación del músculo pectoral, tejido linfático incluyendo ganglios (3 o más) y trauma de la superficie subcutánea del sistema linfovascular. El trauma del sistema linfovascular se produjo raspando 50 veces la superficie interna del colgajo de piel elevado con una cuchilla de bisturí del Nº 22. Cinco días después de la mastectomía, las ratas se anestesiaron con anestesia de uretano. Se tomaron muestras de sangre para su análisis. Se aspiró y pesó el seroma de cada rata para determinar el volumen de seroma y el contenido de factor XIII.

Resultados

No se observaron diferencias significativas entre las ratas Control y las ratas Experimentales para lo siguiente: hematología, química clínica sanguínea y niveles de factor XIII.

Se observó una diferencia significativa en el volumen de seroma aspirado en el momento del sacrificio (día 5). El grupo control tenía un promedio de 2,7 ml de seroma y el grupo al que se administró el factor XIII tenía un promedio de 1,4 ml de seroma. Así, el factor XIII era eficaz inhibiendo la formación de seroma.

Claims (5)

1. Uso del factor XIII en la fabricación de un medicamento para inhibir la formación de un seroma o líquido seroso en el lugar de cirugía o una herida en un mamífero.

2. Uso según la reivindicación 1, donde el medicamento es para administración sistémica.

3. Uso según la reivindicación 1, donde el medicamento es para administración local en el lugar de la cirugía o herida.

4. Uso según la reivindicación 3, donde el factor XIII está activado.

5. Uso según la reivindicación 3, donde el factor XIII es para administración conjuntamente con trombina activada.