ES2294150T3 - Procedimiento y kit de diagnostico para el diagnostico de helicobacter pylori. - Google Patents
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Abstract
Procedimiento para el diagnóstico de Helicobacter pylori mediante la administración por vía oral de cantidades definidas de urea marcada con C13 e investigación de muestras de sangre extraídas en un momento determinado respecto al contenido en C13, caracterizado porque, en muestras de sangres de pacientes en las que a) antes del comienzo del ensayo se extrajeron al paciente en ayunas 0, 1 a 0, 6 ml de sangre capilar del dedo o del lóbulo de la oreja o sangre venosa, b) al paciente se le administró la cantidad exacta de 10 a 50 mg de urea- C13 en solución acuosa con un valor de pH de 2 a 4, c) exactamente 10 a 15 minutos después de la administración se extrajo de nuevo sangre capilar o sangre venosa, se determina el contenido en C13 por medio de espectrometría de masas de relaciones isotópicas (EMRI) y a partir del aumento de los valores de C13, se deduce la presencia de Helicobacter pylori.
Description
Procedimiento y kit de diagnóstico para el
diagnóstico de Helicobacter pylori.
Es objeto de la presente invención un
procedimiento para el diagnóstico de Helicobacter pylori
mediante la administración por vía oral de cantidades definidas de
urea marcada con C_{13} e investigación de muestras de sangre
extraídas en un momento determinado respecto al contenido en
C_{13}.
El procedimiento habitual y que se lleva a cabo
con mayor frecuencia para el diagnóstico de Helicobacter
pylori es el ensayo de respiración de
urea-C_{13}. Este procedimiento se describe con
detalle en el documento
EP-A-0253927. Este ensayo tiene no
obstante la desventaja de que no se puede llevar a cabo en niños
menores de 3 años ni en pacientes con afecciones respiratorias,
como asma. En el documento EP 0881491 A1 se describe también un
ensayo de respiración.
Rex Moulton-Barrett y col., The
American Journal of Gastroenterology, vol. 88, 1993, páginas 369 a
374, describen un procedimiento en el que, tras la administración
por vía oral de urea marcada con C_{13}, se determina el
bicarbonato marcado con C_{13} en el suero. En el documento US
5.542.419 se da a conocer un procedimiento similar. En este ensayo
se administraron al paciente 5 mg/kg de urea marcada con C_{13} y
se extrajeron y se investigaron muestras de sangre de 3 ml después
de 15, 30, 60, 90, 120 y 180 minutos, respectivamente. Este
procedimiento ha sido investigado y descrito además por Mark J. Kim
y col. en Gastroenterology 1997, 113:31-37, W. D.
Chey y col., en The American Journal of Gastroenterology, vol. 94,
1999, páginas 1522 a 1524. Alan F. Cuttler y col., The American
Journal of Gastroenterology, vol. 94, 1999, páginas 959 a 961 y ha
conducido a la introducción de un ensayo de la empresa Metabolic
Solutions Inc., Nashua NH. En este ensayo se administra, sin la
determinación del valor cero, tras la administración de una comida
de muestra rica en grasas urea-C_{13}
"Ensure" 125 mg y después de 30 minutos se determina el
contenido en C_{13} en 3 ml de sangre. A causa de la escasa
precisión y exactitud por una parte, muy elevado precio para la
urea-C_{13} necesaria, así como la relativamente
gran cantidad de sangre de ensayo, este ensayo no ha conducido a
ningún éxito económico, de forma que el ensayo de respiración, a
pesar de todas sus desventajas, sigue siendo el procedimiento de
ensayo más utilizado.
La invención se ha fijado el objetivo de
proporcionar un procedimiento para el diagnóstico de Helicobacter
pylori con las mínimas cantidades posibles de
urea-C_{13} y la mínima cantidad posible de sangre
para la investigación del contenido en C_{13}, que establezca de
forma más económica, más exacta y más rápida el diagnóstico de una
infección por Helicobacter pylori.
Este objetivo se alcanza ahora extrayendo antes
del comienzo del ensayo al paciente en ayunas 0,1 a 0,6 ml de
sangre capilar del dedo o del lóbulo de la oreja o sangre venosa,
administrando al paciente la cantidad exacta de 10 a 50 mg de
urea-C_{13} en solución acuosa con un valor de pH
de 2 a 4, extrayendo de nuevo exactamente 10 a 15 minutos después
de la administración sangre capilar o sangre venosa y determinando
el contenido en C_{13} de las muestras de sangre por medio de
espectrometría de masas de relaciones isotópicas (EMRI) y a partir
del ascenso de los valores de C_{13} se deduce la presencia de
Helicobacter pylori.
Incluso cuando se usan 0,6 ml de sangre capilar
y 50 mg de urea-C_{13}, el procedimiento supera
claramente al procedimiento actual, además de que mediante la
determinación del valor inicial aumenta enormemente la precisión
del procedimiento y mediante la extracción de una segunda muestra de
sangre ya después de 10 a 15 minutos, el procedimiento se acorta
para el paciente de forma considerable. La obtención de sangre
capilar conlleva dificultades, especialmente en pacientes mayores.
En tales casos, el procedimiento se puede llevar a cabo también con
la correspondiente escasa cantidad de sangre venosa.
En el caso del procedimiento según la invención
es de fundamental importancia la omisión de la comida de ensayo
rica en grasas. En su lugar, la urea marcada se administra en
solución acuosa con un valor de pH de 2 a 4. Esto se puede llevar a
cabo por ejemplo ajustando la solución acuosa de urea marcada por
medio de un ácido orgánico no volátil farmacológicamente inocuo al
valor de ph de 2 a 4 o añadiendo a la solución recién preparada de
urea marcada un sobre de un ácido orgánico sólido farmacológicamente
inocuo. A este respecto ha resultado especialmente adecuado el
ácido cítrico. No obstante, otros ácidos orgánicos de este tipo,
como el ácido ascórbico, también son capaces en principio de
ajustar el valor de pH deseado. También es posible alcanzar este
valor de pH bajo usando zumo de naranja, zumo de pomelo o zumo de
manzana ácido.
La determinación del contenido en C_{13} en
las muestras de sangre se puede realizar por ejemplo mediante la
adición de un ácido fuerte no volátil como ácido fosfórico, que es
capaz de liberar dióxido de carbono en forma gaseosa de la muestra
de sangre, de forma que se puede medir con un aparato de EMRI.
También es posible no obstante obtener suero a
partir de las muestras de sangre, eliminar componentes de alto peso
molecular de la muestra de suero con un filtro adecuado y determinar
en el líquido restante el contenido en C_{13} mediante análisis
elemental previamente conectado y a continuación espectrometría de
masas isotópica.
Mediante investigaciones comparativas se
determinó que la evidencia de una infección por Helicobacter
pylori en el ensayo de respiración está presente cuando el
valor de C_{13} en el aire respirado se encuentra aproximadamente
en 4^{0}/^{00} por encima del valor inicial. El procedimiento
según la invención es capaz, por el contrario, de evidenciar
infecciones por Helicobacter con una diferencia en el
contenido de _{13} sólo de 2,0^{0}/^{00}. Resulta obvio que
la notablemente menor cantidad de la costosa
urea-C_{13} por una parte y el adelanto del
momento de la segunda extracción de muestra de 30 minutos a 10
minutos son de notable importancia tanto para los pacientes como
para los médicos. Además, la extracción de cómo máximo 0,6 ml de
sangre capilar o sangre venosa es considerablemente más fácil y más
agradable que la extracción de 3 ml de sangre venosa en el ensayo
de Metabolic Solutions Inc. Frente a este ensayo, es también de
especial importancia la notablemente mayor precisión y exactitud,
dado que se determina el valor inicial para cada paciente y no se
usan valores promedio, unidos con importes oscilaciones, que se ven
influidos por la diferente toma de alimentos de los
participantes.
El kit de diagnóstico según la invención para
llevar a cabo el procedimiento se compone preferiblemente de una
solución acuosa ácida con un valor de pH de 2 a 4, que contiene
exactamente de 10 a 50 mg de urea-C_{13}, una
información para el paciente, dos recipientes de muestra para alojar
las muestras de sangre y un dispositivo de extracción de sangre. Es
decisivo que el kit de diagnóstico contenga una cantidad de
urea-C_{13} exactamente pesada. Esta cantidad se
puede escoger en distintos kits de diagnóstico, por ejemplo para
niños, en el intervalo entre 10 y 50 mg de
urea-C_{13}. También se debería respetar
exactamente el periodo entre las dos extracciones de sangre para un
kit de diagnóstico determinado, pero se puede fijar en el intervalo
entre 10 y 15 minutos para distintos kits de diagnóstico.
Otra forma de realización preferida contiene, en
lugar de la solución ácido de urea-C_{13} lista,
un recipiente para urea con exactamente de 10 a 50 mg de
urea-C_{13} y un sobre de un ácido orgánico
sólido, farmacológicamente inocuo como ácido cítrico. Son adecuados
normalmente 2 g de ácido cítrico disueltos en 200 ml de agua o 200
ml de zumo de naranja, zumo de pomelo o zumo de manzana ácido para
disolver 30 a 50 mg de urea-C_{13}. Especialmente
en el caso de niños, se puede reducir adicionalmente la cantidad de
urea-C_{13} hasta 10 mg.
Las muestras de sangre se alojan preferiblemente
en recipientes para muestras habituales en el mercado para alojar
las muestras de sangre, por ejemplo Vakutainer®. Estos pueden
contener también ya la cantidad necesaria de ácido fosfórico
concentrado, de forma que se libera inmediatamente el CO_{2} de la
muestra de sangre. En principio también es posible añadir
posteriormente al recipiente para muestras para el alojamiento de la
muestra de sangre un ácido fuerte no volátil.
La determinación del contenido en C_{13} se
realiza entonces por medio de EMRI directamente a partir de la fase
gaseosa. Un aumento del contenido en C_{13} en 2^{0}/^{00}
después de 10 minutos ya indica una infección por Helicobacter
pylori.
Como alternativa, se puede extraer suero de la
muestra de sangre después de poco tiempo de reposo. Mediante
ultrafiltración se pueden eliminar todas las macromoléculas y
especialmente los lípidos de la muestra de suero. El líquido que
queda entonces se somete en primer lugar a un análisis elemental
mediante combustión y se investiga el CO_{2} liberado entonces de
nuevo mediante EMRI respecto a la proporción de isótopos
C_{13}/C_{12}. En este procedimiento de ensayo, la infección
por Helicobacter pylori se puede determinar ya con un aumento
del contenido en C_{13} de 1 a 1,5 ^{0}/^{00}.
Las mayores sensibilidades y precisiones del
procedimiento de ensayo conseguidas según la invención se explican
en realidad porque el contenido en C_{13} de la urea marcada se
diluye menos que con otras fuentes de carbono. Este efecto de
dilución es máximo en el ensayo con aire respirado y mínimo con la
investigación de muestras de suero de las que se han eliminado sus
moléculas macromoleculares mediante ultrafiltración. No obstante,
ya el procedimiento en el que se libera CO_{2} mediante un ácido
fuerte no volátil y se determina en la fase gaseosa es
excelentemente adecuado para alcanzar los objetivos propuestos de la
presente invención.
En la realización práctica del procedimiento
según la invención, el médico procesa las muestras de sangre antes
y 10 a 15 minutos después de la administración de la
urea-C_{13}. Los Vakutainer® se pueden recoger y
mandar a un laboratorio central, en el que se lleva a cabo la
determinación de los contenidos en C_{13}. A partir de los
resultados remitidos al médico, el médico puede diagnosticar si la
infección por Helicobacter pylori está presente o no.
Para la determinación por EMRI se toman en
consideración en principio todos los espectrómetros de masas de
relaciones isotópicos de alta sensibilidad que se encuentran en el
mercado, que sin embargo sólo los laboratorios centrales pueden
instalar debido a sus precios. La inversión en aparatos de este tipo
no es de esperar en el caso de las clínicas. La recogida y análisis
de muestras en laboratorios centrales, por el contrario, no es, hoy
en día, problemática desde el punto de vista logístico y de los
precios al igual que el envío de los datos de análisis al médico
remitente o la clínica remitente.
Lo mismo es válido para el procedimiento de
determinación en suero, al que se han eliminado sus componentes de
alto peso molecular mediante ultrafiltración. El análisis elemental
mediante combustión antepuesto se puede realizar sin mayor problema
en laboratorios centrales. La obtención de suero a partir de sangre
capilar o sangre venosa, así como la ultrafiltración se puede
realizar al menos en clínicas sin problemas. Para la propia
determinación del contenido en C_{13} bastan 20 \mul de suero y
aportan ya con un aumento del contenido en C_{13} de 1 a 1,5
^{0}/^{00} sólidos resultados.
Claims (5)
1. Procedimiento para el diagnóstico de
Helicobacter pylori mediante la administración por vía oral
de cantidades definidas de urea marcada con C_{13} e
investigación de muestras de sangre extraídas en un momento
determinado respecto al contenido en C_{13}, caracterizado
porque, en muestras de sangres de pacientes en las que
a) antes del comienzo del ensayo se extrajeron
al paciente en ayunas 0,1 a 0,6 ml de sangre capilar del dedo o del
lóbulo de la oreja o sangre venosa,
b) al paciente se le administró la cantidad
exacta de 10 a 50 mg de urea- C_{13} en solución acuosa con un
valor de pH de 2 a 4,
c) exactamente 10 a 15 minutos después de la
administración se extrajo de nuevo sangre capilar o sangre
venosa,
se determina el contenido en C_{13} por medio
de espectrometría de masas de relaciones isotópicas (EMRI) y a
partir del aumento de los valores de C_{13}, se deduce la
presencia de Helicobacter pylori.
2. Procedimiento según la reivindicación 1,
caracterizado porque a las muestras de sangre se añade un
ácido fuerte no volátil, que libera CO_{2} en forma gaseosa y se
determinan los contenidos en C_{13} en la fase gaseosa.
3. Procedimiento según la reivindicación 1,
caracterizado porque se obtiene suero de las muestras de
sangre, se eliminan por filtro los componentes de alto peso
molecular del suero y en el líquido restante se determinan los
contenidos en C_{13} mediante análisis elemental antepuesto y a
continuación espectrometría de masas.
4. Kit de diagnóstico para llevar a cabo el
procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 3, constituido
por
1) una solución acuosa ácida con un valor de pH
2 a 4, que contiene exactamente de 10 a 50 mg de
urea-C_{13} o
- 1a)
- un recipiente de urea con exactamente de 10 a 50 mg de urea-C_{13} y
- 1b)
- un sobre de un ácido orgánico sólido farmacológicamente inocuo
2) una información para el paciente
3) dos recipientes de muestra para alojar las
muestras de sangre, que
- 3a)
- contienen un ácido fuerte no volátil o
- 3b)
- posibilitan la adición de un ácido de este tipo
4) un dispositivo de extracción de sangre.
5. Kit de diagnóstico según la reivindicación 4,
caracterizado porque el ácido orgánico es ácido cítrico.
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