ES2250478T3 - Procedimiento para el diagnostico de la intolerancia a la lactosa, y kit diagnostico realizar el procedimiento. - Google Patents

Abstract

Procedimiento para el diagnóstico de la intolerancia a la lactosa de pacientes por medio de la administración por vía oral de cantidades definidas de lactosa, y subsiguiente determinación de productos metabólicos de la lactosa, caracterizado porque la lactosa administrada contiene lactosa marcada con 13C al 99%, y porque, tras la administración de la 13C-lactosa, se determina en una muestra de suero extraída en un momento definido posterior a la administración, el contenido en glucosa marcada con 13C, siendo la cantidad administrada de 13C-lactosa al 99% de 5 hasta 30 mg.

Description

Procedimiento para el diagnóstico de la intolerancia a la lactosa, y kit diagnóstico para realizar el procedimiento.

Objeto de la presente invención es un procedimiento para el diagnóstico de la intolerancia a la lactosa en pacientes, por medio de la administración por vía oral de cantidades definidas de lactosa y subsiguiente determinación de productos metabólicos de la lactosa, así como un kit diagnóstico para llevar a cabo el procedimiento.

La intolerancia a la lactosa es un síntoma muy frecuente en todo el mundo, y da lugar en el paciente afectado a trastornos digestivos más o menos intensos causados por la leche o productos lácteos. La intolerancia a la lactosa se debe, en general, a la ausencia de la enzima lactasa, de cuya formación es responsable un gen del cromosoma 2. Este gen determina el momento en el que el ser humano cesa de producir lactasa. En función de la raza, este hecho se puede producir antes o después. En tiempos remotos de la historia de la evolución, el hombre, al igual que muchos otros mamíferos, perdía la enzima cuando dejaba de alimentarse con leche materna (véase Pharm. Ztg, nº 9-Año 145, 2 de marzo de 2000). Para el diagnóstico de intolerancia a la lactosa se utiliza actualmente con mucha frecuencia el ensayo de H_{2} en el aire espirado ("test del aliento") debido a su sencillez y precisión. En el curso del mismo, el paciente bebe una solución de 50 g de lactosa en agua. El hidrógeno eliminado seguidamente en el aire espirado se mide, por cromatografía gaseosa, de manera repetida durante 4 horas. De esta forma, se obtiene un registro no sólo cualitativo, sino también cuantitativo del déficit de lactasa.

La intolerancia a la lactosa se considera, entretanto, como enfermedad que, de momento, sólo se trata de modo sintomático. Existe, no obstante, la posibilidad de administrar la enzima lactasa en forma de cápsulas, comprimidos o soluciones, compensando, de esta manera, el déficit de lactasa.

Además de la ya citada determinación de hidrógeno en el aire espirado, existe otro ensayo de tolerancia a la lactosa en el que se administran 50 g de lactosa a personas en ayunas, midiendo entonces en estas personas, durante varias horas, el nivel de glucosa en sangre. Mientras que la lactosa no sea degradada enzimáticamente por completo, el nivel de glucosa se mantiene bajo, confirmando de este modo la intolerancia a la lactosa, véase Scand. J. Clin. Lab 2000, 60, págs. 291-296.

Los métodos diagnósticos conocidos hasta la fecha presentan el inconveniente de que se debe administrar al paciente una cantidad relativamente elevada de lactosa, lo cual puede provocar molestias considerables en muchos pacientes que sufren intolerancia a la lactosa.

La determinación de la glucosa en sangre tiene, adicionalmente, el inconveniente de que el nivel de glucosa en sangre puede resultar modificado por factores secundarios, por ejemplo, el aumento de la liberación de adrenalina generado por el estrés.

Los dos métodos del estado de la técnica exhiben, además, el inconveniente de que la medición se debe llevar a cabo durante un período prolongado de tiempo, con múltiples pruebas, lo que resulta incómodo y oneroso para el paciente y dispara los costes.

En teoría, cabría la posibilidad de llevar a cabo el ensayo con lactosa marcada con ^{13}C. Sin embargo, un gramo de lactosa marcada con ^{13}C cuesta US\textdollar 2000. Para el ensayo de lactosa en el aire espirado se requieren, como mínimo, 150 mg de lactosa marcada con ^{13}C al 99%.

La invención se ha propuesto la misión de poner a disposición un procedimiento mejor, más económico y más preciso para el diagnóstico de la intolerancia a la lactosa, exento de los inconvenientes anteriormente mencionados.

Esta misión se resuelve, de acuerdo con la invención, mediante la administración oral de cantidades definidas de lactosa y subsiguiente determinación de productos del metabolismo de la lactosa, en donde la lactosa administrada contiene lactosa marcada con ^{13}C al 99%, en cantidades de 5 hasta 30 mg. En un momento definido posterior a la administración de la ^{13}C-lactosa, se determina en una muestra de sangre extraída tras la citada administración, el contenido en glucosa marcada con ^{13}C. Preferentemente, la ^{13}C-lactosa se administra en forma de una cápsula de gelatina. De esta manera, es posible que la ^{13}C-lactosa llegue al intestino delgado sin ser absorbida en el estómago.

Adicionalmente, se puede mejorar el valor informativo del procedimiento determinando, además, en una muestra de heces obtenida en un tiempo posterior a la extracción de sangre, el contenido en lactosa marcada con ^{13}C y/o el ácido láctico marcado con ^{13}C. Esta determinación adicional sólo es necesaria cuando el análisis de glucosa en la muestra de suero no muestra un incremento significativo de ^{13}C y, por lo tanto, la intolerancia a la lactosa ya está confirmada.

Los pacientes con una intolerancia a la lactosa muy acusada pueden sufrir diarreas incluso con las cantidades reducidas de 5 hasta 10 g de lactosa. Estas muestras fecales contienen, en este caso, prácticamente la cantidad total de lactosa marcada con ^{13}C. En pacientes con una intolerancia a la lactosa menos pronunciada, las bacterias intestinales pueden metabolizar total o parcialmente la lactosa administrada, para formar ácido láctico marcado con ^{13}C. Adicionalmente, en estos casos, se pueden formar metano y H_{2} marcados con ^{13}C cuyo análisis resulta, sin embargo, esencialmente más difícil. El descenso del valor de pH de las muestras fecales, causado por el ácido láctico, representa un índice adicional de intolerancia a la lactosa. No obstante, el valor de pH de las heces puede verse influido por otros múltiples factores, de manera que este parámetro es escasamente apropiado para diagnosticar con seguridad una intolerancia a la lactosa.

El procedimiento según la invención utiliza, al contrario que los métodos diagnósticos empleados hasta ahora, una cantidad claramente menor de lactosa, concretamente 5 hasta 30 mg de ^{13}C-lactosa al 99% en una cápsula. Esta reducida cantidad no provoca molestias en los pacientes con intolerancia a la lactosa intensa durante el procedimiento diagnóstico.

Sin embargo, es de importancia decisiva el hecho de que el método según la invención es esencialmente más preciso y, además, de mayor valor informativo, dado que no se ve alterado por influencias secundarias. Esto es especialmente válido para el ensayo de H_{2} espirado y, en mucho mayor medida, para la determinación de glucosa en suero.

La determinación según la invención del contenido en ^{13}C en las muestras de suero y/o fecales se lleva a cabo, de manera especial, con ayuda de la moderna espectrografía de masa con cromatografía gaseosa o análisis elemental conectados en serie. Mientras tanto, estos métodos se han desarrollado y automatizado en tal grado, que resulta posible, desde el punto de vista económico, enviar las muestras de los pacientes para su análisis a un laboratorio central equipado de forma apropiada.

El laboratorio central deberá analizar, en primer lugar, solamente las muestras de suero. En el caso en que se hayan enviado también muestras fecales, éstas sólo se deberán analizar cuando las muestras séricas no hayan indicado un incremento importante de la glucosa marcada con ^{13}C. Frente a un aumento normal del contenido en ^{13}C en comparación con muestras estándares con un contenido conocido en ^{13}C, se pone de manifiesto que la lactosa es bien tolerada y degradada de manera suficiente por la lactasa para formar glucosa. Sólo en caso de un incremento nulo o claramente reducido del contenido en ^{13}C se puede establecer, a través del análisis de las muestras fecales, si se trata de una intolerancia a la lactosa muy intensa o de menor gravedad.

Si el ensayo indica un incremento normal del contenido en ^{13}C y, sin embargo, se toleran mal la leche y los productos lácteos, se trata de una enfermedad diferente de la intolerancia a la lactosa mundialmente extendida. De este modo, el procedimiento según la invención se puede utilizar para establecer un diagnóstico diferencial. Este grupo de pacientes no responderá a la toma de preparados de lactasa.

El procedimiento según la invención se explica de manera más detallada en el siguiente ejemplo.

Ejemplo

Antes de iniciar el ensayo, se extraen del sujeto en ayunas 0,3 hasta 0,5 ml de sangre capilar del dedo o del lóbulo de la oreja. A continuación, el sujeto ingiere una cápsula de gelatina con 5 hasta 30 mg de lactosa marcada con ^{13}C. Entre 30 y 60 min después de la administración de la lactosa marcada, se extraen nuevamente 0,3 hasta 0,5 ml de sangre de la forma anteriormente indicada. A partir de las muestras de sangre se obtiene suero por centrifugación. Por medio de filtros, se separan de las muestras de suero los componentes de alto peso molecular (por ejemplo, lípidos y proteínas). Los filtrados se calcinan a través de un análisis elemental. El CO_{2} formado en este caso a partir de la glucosa, entre otras sustancias, se introduce en un espectrómetro de masa de isótopos, en donde se determina el contenido en ^{13}C. De la manera anteriormente descrita, se evalúan las dos muestras de sangre. Cuando entre las muestras previa y posterior a la administración de ^{13}C-lactosa se detecte un valor diferencial \Delta\delta menor que 1%, existe una intolerancia a la lactosa.

El procedimiento se desarrolla según el esquema siguiente:

\vskip1.000000\baselineskip

^{13}C-lactosa \xrightarrow{Enzima}^{13}C-glucosa + galactosa

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^{13}C-glucosa \xrightarrow{Oxidación}^{13}CO_{2}

\vskip1.000000\baselineskip

El paciente toma una muestra de su siguiente deposición y la introduce con ayuda de una espátula en un recipiente de ensayo. En general, la evacuación siguiente se produce entre 2 y 4 horas después de la administración de la cápsula. A partir de la muestra fecal se prepara en el laboratorio un extracto acuoso, que se analiza para detectar ^{13}C-lactosa y/o ácido ^{13}C-láctico. La presencia de ^{13}C-lactosa o ácido ^{13}C-láctico confirma la existencia de intolerancia a la lactosa.

Claims (11)

1. Procedimiento para el diagnóstico de la intolerancia a la lactosa de pacientes por medio de la administración por vía oral de cantidades definidas de lactosa, y subsiguiente determinación de productos metabólicos de la lactosa, caracterizado porque la lactosa administrada contiene lactosa marcada con ^{13}C al 99%, y porque, tras la administración de la ^{13}C-lactosa, se determina en una muestra de suero extraída en un momento definido posterior a la administración, el contenido en glucosa marcada con ^{13}C, siendo la cantidad administrada de ^{13}C-lactosa al 99% de 5 hasta 30 mg.

2. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado porque la lactosa marcada con ^{13}C se administra en una cápsula.

3. Procedimiento según la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque se determina en una muestra fecal, obtenida algún tiempo después de la extracción del suero, el contenido en lactosa marcada con ^{13}C y/o de ácido láctico marcado con ^{13}C.

4. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque la muestra de suero se toma alrededor de una hora después de la administración de la lactosa.

5. Procedimiento según la reivindicación 3 ó 4, caracterizado porque la muestra fecal se toma
entre 2 y 4 horas después de la toma de la cápsu-
la.

6. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque las muestras se envían a un laboratorio central, en el que se analiza el contenido en ^{13}C por espectrometría de masa con cromatografía gaseosa o análisis elemental conectados en serie.

7. Kit diagnóstico para la realización del procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 6, compuesto por

1.

5 hasta 30 mg de lactosa marcada con ^{13}C al 99% en una cápsula,

2.

un prospecto de información para el paciente,

3.

un dispositivo para la extracción de sangre,

4.

un recipiente de muestras para la recogida de la muestra de sangre, así como, eventualmente,

5.

un recipiente de muestras y espátula para una muestra fecal.