CN112695066B - 一种胃幽门螺杆菌培养鉴定药敏试剂盒及检测方法 - Google Patents

一种胃幽门螺杆菌培养鉴定药敏试剂盒及检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及微生物检测技术领域，尤其涉及一种胃幽门螺杆菌培养鉴定药敏试剂盒及检测方法。本发明试剂盒中可对样本中的胃幽门螺杆菌、或者已获取的HP分离株，同时进行培养、鉴定、药敏检测，其中，所述培养基利于胃幽门螺杆菌的生长。本发明试剂盒中分别包被尿素和精氨酸的鉴定孔可实现胃幽门螺杆菌的准确鉴定。本发明试剂盒具有检测快速、准确，检测过程简单，检测时间短等优点。

Description

一种胃幽门螺杆菌培养鉴定药敏试剂盒及检测方法
技术领域
本发明涉及微生物检测技术领域，尤其涉及一种胃幽门螺杆菌培养鉴定药敏试剂盒及检测方法。
背景技术
1983年，沃伦和马歇尔从胃黏膜标本中培养、分离出幽门螺旋杆菌(Helicobacterpylori，以下简称Hp)，研究证实Hp感染与消化性溃疡、慢性胃炎伴发胃黏膜萎缩及糜烂、胃癌、胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤等消化系统疾病具有紧密联系，且与50％以上特发性血小板减少性紫癜、儿童和成人不明原因缺铁性贫血等消化道外疾病也具有密切联系。但Hp对临床耐药状况较为严重，致使药物疗效欠佳，无法有效根除Hp，因此Hp的培养和药敏检测对临床意义很大，现有的检测方法有培养法、免疫学检测、核酸检测以及尿素呼气试验等方法。
1、细菌培养法
分离培养并进行细菌鉴定的方法特异性高，是Hp检测的“金标准”，常用的培养基有选择性培养基和非选择性培养基，选择性培养基加入了抗菌物质，不易于杂菌生长，有利于提高Hp的检出。培养获得Hp的纯培养后，可以进行药敏检测，现有的药敏检测方法有琼脂稀释法、纸片法，以及微孔板法。
其中，琼脂稀释法是美国CLSI推荐的方法，制备2.0麦氏的菌液，接种1-3uL于含有不同浓度抗菌药物的琼脂稀释平板上，根据生长情况判断待测菌的最低抑菌浓度。
纸片法药敏试验是将抗菌药物吸收到特定的纸片中，然后置于已接种带测定菌的固体培养基上，抗菌药物通过向培养基内的扩散，抑制敏感细菌的生长，从而出现抑菌环。由于药物扩散的距离越远，达到该距离的药物浓度越低，故可以根据抑菌环大小判断细菌对药物的敏感度。
微孔板法是在微孔中干燥抗菌药物，接种待测菌株根据生长情况判断药物敏感性，有文献报道在2倍稀释梯度之内，与琼脂稀释法的一致性较高。
2、免疫学检测
免疫学检测方法的基础是Hp感染后能诱发全身免疫反应，使宿主的血清产生Hp相应的IgG、IgA和IgM等抗体。目前临床上检测Hp常用的免疫学检测方法是ELISA方法定性或定量检测血液中HpIgG抗体，目前普遍认为ELISA检测外周血的抗HpIgG的灵敏度、特异性高，易于推广应用。其他免疫学检测方法还有检测人体感染Hp后的可溶性抗原、斑点金标免疫检测HpIgG等。但检测HpIgG阳性只能说明换成感染过Hp，不能标示现症感染。免疫学检测除了检测血液中Hp抗原、抗体检测方法之外，还有粪便Hp抗原检测、尿液抗Hp抗体检测、唾液抗Hp抗体等多部位样本的检测。
粪便抗原检测试验(Hp-SA),是一种非侵入性诊断方法。由于Hp定居于胃上皮细胞表面，而胃上皮细胞更新很快，在其更新的过程中，定植于上皮细胞表面的Hp随细胞脱落，经过肠道随粪便排出体外，故可以用抗Hp抗体的酶联免疫方法检测到Hp-SA。研究报道Hp粪便抗原检测试验的敏感度为90.0％-98.2％,特异度为75.0％-100％。Hp-SA是较理想的非侵入性Hp诊断方法，操作简便，省时，不需昂贵仪器，在Hp感染的流行病学调查、儿童检测消化不良，或内镜检查前筛查等诸多方面具有较好的应用价值，尤其适用于婴幼儿Hp感染的检测，并可作为远期根治疗效的评价指标。Hp-SA检测法准检测优点：检测费用明显低于C13-呼气试验；尿素呼气试验在有胃部分切除史的患者中准确性有限，而Hp-SA试验则不受影响；尿素呼气试验需被检者配合，年幼儿童可能会有困难，而Hpi-SA试验仅需收集粪便标本。Hp-SA检测法准检测缺点：由于本方法检测的是粪便中Hp抗原，当患者进行Hp根除治疗后，即便患者的Hp已经被根除，但在治疗结束4周时约有6％的患者粪便中仍然有可能被检测出Hp抗原，从而导致假阳性的结果。如果在采用本法进行疗效判断时，让患者在治疗结束后6-8周进行检测，则可以明显降低试验的假阳性率。
尿液抗Hp抗体检测。1993年Alemohammad等首次报道306例尿液抗Hpylori抗体检测的敏感性和特异性分别为95.9％和90％，证实他的有用性。尿液抗Hp抗体检测法诊断儿童Hp感染具有快速、费用低、可靠性强、容易操作的特点，而且对儿童群体大规模流行病学筛查有价值。
唾液抗Hp抗体检测长期以来多数学者认为胃部是Hp的主要储存地，胃黏膜、上皮、胃液、胃的反流物及胃炎患者甚至婴幼儿的呕吐物、粪便中均检测出了Hp的存在。1983年Krajden等首次从胃炎患者的牙菌斑中分离培养出Hp，并推测口腔可能是Hp在人体的另一个聚集地，从此，口腔内Hp的研究也逐渐成为热点问题。1993年，Ferguson等首次从9例胃炎患者的唾液中培养出1例具有生存能力的Hp，次年Patel等亦报道了唾液中的抗Hp IgG与血清抗Hp IgG一致性达91％，有良好正相关性，可正确判断患者感染Hpi情况。
3、RUT检测
Hp能够产生大量的尿素酶，分解胃液中的微量尿素引起酸碱度的变化，产生CO2，使局部的pH值升高，RUT检测正是基于这一原理所设计，可用于胃镜检查中诊断Hp感染，该方法属于侵入性检测方法之一，且研究表明，标本中必须含有104CFU/mL以上的Hp才能显示阳性，而标本的大小、反应时间的长短、环境温度的高低等因素均可影响试验结果。该法检测Hp中应该注意的是，在胃内有活动性出血时，因出血造成胃内pH值的变化，会影响尿素酶试验的敏感性和特异性。
4、尿素呼气试验
尿素呼气试验，又称C13、C14-UBT试验，由美国Garham和Klein博士于1986年首先报道,其原理是Hp在体内产生尿素酶，感染Hp的患者口服同位素标记的尿素溶液,尿素分解后产生的同位素CO2从肺呼出,通过收集呼气标本检测同位素CO2的量诊断Hp感染，根据标志物不同分为C13呼吸试验及C14呼吸试验。此项检测目前被认为是除培养之外诊断Hpylori感染的“金标准”，临床应用广泛，不需做内镜取标本，技术要求低，缺点是费用高。
C13-UBT优点在于：(1)采用的高精度气体同位素比值质谱仪分析精度可达十万分之一，准确性高；(2)反应是“全胃”的“实时”状态，在中国和欧洲的Hp共识意见中，该方法被首选推荐为确诊Hp现症感染及判断Hp根除的非侵入性方法；(3)操作简便快速，自动化程度高，30min即可得出结果；(4)C13为稳定性同位素，适合于各年龄的受试者；(5)呼气样品采用特制气体收集瓶收集，可通过邮寄该瓶对无此设备的其他地区患者进行Hp检测。因此C13-UBT在1996年通过美国食品药物管理局(FDA)评审后，便很快广泛应用于临床对Hp感染的诊断。缺点在于该检查受到诸如药物、上消化道出血、胃内其他杂菌(如人海尔曼螺杆菌等)的影响而可能出现假阳性和假阴性的结果，且检查需要大型质谱仪和试剂较昂贵，因此很大程度限制了在基层医院的开展。
C14-UBT试验价格低廉，但试验具有放射性，且半衰期很长，尽管放射性较低,做一次呼气试验接受的放射剂量只相当于一次胸部X线拍片的1/60，但大规模应用可对环境造成污染，此外该方法对孕妇、儿童及活动性胃出血者慎用。
5、N15-尿氨排除试验
该方法是由我国吴继琮等首创并应用于临床的.其原理基本与标记碳的CO2呼气试验相同，即测试者口服N15-尿素，在胃中经尿素酶作用分解成标记N15的NH3和CO2，经消化系吸收进入血液循环，而N15标记的氨经机体氮代谢变为氨或尿素后由肾脏排除，利用色谱联用仪检测。该方法也是一种无创性检查，无放射性污染，具有较高的敏感性与特异性，但仪器昂贵，尚未得到普及推广。
6、分子生物学方法
Hoshina等首先将聚合酶链反应(PCR)技术用于Hp的诊断。PCR技术明显提高了Hp诊断的敏感性(可检出相当于100个细菌细胞)和特异性，且对原材料的要求低，除新鲜活检标本外，可检测唾液、胃液，石蜡包埋和已做过快速尿素酶试验的标本也可应用，并可对粪便和环境中的Hp DNA进行检测。目前PCR仪、引物皆已商品化，能进行大规模推广，应用于检验及流行病学调查，但这也存在着一个问题，即已被抗菌药物杀死而仍存留胃中的Hp DNA，也会被扩增出现阳性结果，故PCR不宜用来判断治疗的短期效果。分子生物学方法包括单一PCR法、逆转录PCR法、套式PCR法以及寡核苷酸探针杂交法等。
其他还有形态学检查方法，将活检胃黏膜标本的黏膜面涂片、染色，油镜下观察有无典型的弯曲形或螺旋形细菌，可迅速确定有无Hp感染和胃内的菌群及炎症细胞渗出情况。
以上除了细菌培养法之外，其他方法如免疫学检测、RUT检测、尿素呼气试验、N15-尿氨排除试验、分子生物学方法、形态学方法等，均无法进行药敏试验。细菌培养法虽然能够进行药敏检测，但现有的培养法需要先培养，再分离纯化，然后再进行鉴定和药敏试验，整个流程耗时较长。现有的其他药敏检测方法有琼脂稀释法、纸片法，以及微孔板法，但各自存在一些缺点。具体如下：
琼脂稀释法是美国CLSI推荐的方法，制备2.0麦氏的菌液，接种1-3uL于含有不同浓度抗菌药物的琼脂稀释平板上，根据生长情况判断待测菌的最低抑菌浓度。纸片法药敏试验是将抗菌药物吸收到特定的纸片中，然后置于已接种带测定菌的固体培养基上，抗菌药物通过向培养基内的扩散，抑制敏感细菌的生长，从而出现抑菌环。由于药物扩散的距离越远，达到该距离的药物浓度越低，故可以根据抑菌环大小判断细菌对药物的敏感度。微孔板法是在微孔中干燥抗菌药物，接种待测菌株根据生长情况判断药物敏感性，有文献报道在2倍稀释梯度之内，与琼脂稀释法的一致性较高。该方法操作复杂，需要配制多个浓度梯度的抗菌药物琼脂平板，涉及药物较多时工作量特别大。
纸片法虽然操作相对简单，但纸片法药敏试验受抗菌药物、培养基、试纸片以及培养条件等多种因素的影响，通过抑菌环的大小很难准确判断细菌对药物的敏感程度。比如不同药物的溶解性不同影响药敏试验结果的真实性，易溶于水的药物制成药敏纸片后在培养基中很容易均匀扩算，而水溶性不好的药物制成药敏纸片后在培养基上很难完全溶解于培养基并扩散，当药敏纸片放置到培养基上之后，不同溶解性的药物在规定的培养时间内扩散到培养基中的程度是不相同的，有的能完全扩散，有的却不能完全扩散，这必然导致该药物的抑菌效果低于真实值。微孔板法药敏检测虽有文献报道，但仅是对已知的分离纯化后的菌株进行药敏检测，不能进行鉴定。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种胃幽门螺杆菌培养鉴定药敏试剂盒及检测方法。该试剂盒胃幽门螺杆菌的培养、鉴定和药敏检测，具有检测快速、准确性，检测过程简单，检测时间短等优点。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供一种胃幽门螺杆菌培养鉴定药敏试剂盒，包括培养基、矿物油和检测板；
所述培养基包括以下组分：
酵母浸粉0.1-10g/L、牛心浸粉0.1-10g/L、蛋白胨0.1-10g/L、氯化高铁血红素1-100mg/L、碳酸氢钠1-10g/L、六水合氯化镁0.1-10g/L、动物血清10-500mL/L、两性霉素1-100mg/L、万古霉素1-100mg/L、萘啶酸1-100mg/L、硫胺素1-100mg/L、烟酰胺1-100mg/L、生物素1-100mg/L、卟啉1-100mg/L、氯化钠0.1～10g/L、显色剂10～200mg/L和余量水；
所述检测板上设有Hp鉴定孔1、Hp鉴定孔2和药敏检测孔；
所述Hp鉴定孔1包被有尿素，Hp鉴定孔2包被有精氨酸。
本发明试剂盒中可对样本中的胃幽门螺杆菌、或者已获取的Hp分离株，同时进行培养、鉴定、药敏检测，本发明试剂盒中分别包被尿素和精氨酸的鉴定孔可实现胃幽门螺杆菌的准确鉴定。本发明试剂盒具有实现培养鉴定药敏同步进行、简化操作、缩短时间等优点。
本发明中，培养基可以是液体培养基的，也可以是冻干粉搭配稀释液使用，冻干粉和稀释液混合后与液体培养基的组成一致。液态型直接使用，冻干粉与稀释液混合后使用。
本发明中一些优选方案中，所述培养基包括以下组分：
酵母浸粉3-5g/L、牛心浸粉5-6g/L、蛋白胨1-5g/L、氯化高铁血红素5-10mg/L、碳酸氢钠2-3g/L、六水合氯化镁0.6-1g/L、动物血清100-200mL/L、两性霉素10-20mg/L、万古霉素10-20mg/L、萘啶酸10-20mg/L、硫胺素10-15mg/L、烟酰胺5-10mg/L、生物素5-10mg/L、卟啉5-10mg/L、氯化钠1-3g/L、显色剂30-50mg/L和余量水。
一些具体实施例中，所述培养基为液体培养基，包括以下组分：
酵母浸粉5g/L、牛心浸粉5g/L、蛋白胨1g/L、氯化高铁血红素10mg/L、碳酸氢钠3g/L、六水合氯化镁0.6g/L、动物血清200mL/L、两性霉素20mg/L、万古霉素20mg/L、萘啶酸10mg/L、硫胺素10mg/L、烟酰胺5mg/L、生物素5mg/L、卟啉10mg/L、氯化钠1g/L、苯酚红30mg/L和余量水。
一些具体实施例中，所述培养基为冻干粉，搭配稀释液使用，冻干粉和稀释液混合后的配方组成为：
酵母浸粉3g/L、牛心浸粉6g/L、蛋白胨5g/L、氯化高铁血红素5mg/L、碳酸氢钠2g/L、六水合氯化镁1g/L、动物血清100mL/L、硫胺素15mg/L、烟酰胺10mg/L、生物素10mg/L、卟啉5mg/L、两性霉素10mg/L、万古霉素10mg/L、萘啶酸20mg/L、氯化钠3g/L、苯酚红50mg/L，余量为水。
本发明中，矿物油是一种液态的、不溶于水，且比重轻于水的物质，可在培养基上层形成保护层，一方面保护培养基在培养过程中不被蒸发，另一方面形成微氧环境利于胃幽门螺杆菌的生长。
本发明中，鉴定孔中滴加含待测样本的培养基，根据培养结果判断有无菌的生长。其中，鉴定孔1包被尿素，尿素包被浓度为1-10g/L，优选为4～6g/L，具体为4g/L或6g/L。鉴定孔2包被有1-10g/L精氨酸，优选为4～6g/L精氨酸，具体为4g/L精氨酸或6g/L精氨酸。
本发明中，所述药敏检测孔包括单一药物的药敏检测孔和联合药物的药敏检测孔。
其中，所述单一药物检测孔包被的抗菌药物包括但不仅限于阿莫西林、呋喃唑酮、克拉霉素、莫西沙星、四环素、利福平、甲硝唑、左氧氟沙星、替硝唑或环丙沙星。
所述联合药物药敏检测孔包被的抗菌药物包括但不仅限于以下至少两种的组合：
阿莫西林、呋喃唑酮、克拉霉素、莫西沙星、四环素、利福平、甲硝唑、左氧氟沙星、替硝唑和环丙沙星。
一些具体实施例中，所述联合药物药敏检测孔包被以下组合中的一种：
甲硝唑+阿莫西林、克拉霉素+阿莫西林、呋喃唑酮+阿莫西林、左氧氟沙星+阿莫西林、左氧氟沙星+克拉霉素
本发明中，本发明试剂盒还包括阴性对照孔。阴性对照孔包被有尿素。包被的尿素浓度1～10g/L。进行检测时添加未接种样本的培养基，作为阴性对照，阴性对照孔可以设置也可以不设置。
本发明还提供了一种胃幽门螺杆菌的检测方法，利用本发明上述的胃幽门螺杆菌培养鉴定药敏试剂盒对待侧样本进行检测，包括：将待测样本接种于培养基中，混匀，加入到检测板的各孔中，每孔加1-2滴矿物油，于35-37℃培养48-72h，根据显色情况判定结果。
本发明中，所述Hp鉴定孔的结果的判定方法为：两个鉴定孔的培养基均变红时，判断Hp检测阳性，不变色或只有1孔变色时判为Hp检测阴性。
本发明中，所述药敏检测孔的结果的判定方法为：若高浓度、低浓度两孔均不变色，判为敏感；若高浓度不变色，低浓度变色，判为中介；若高浓度、低浓度两孔均变色，判为耐药。
本发明试剂盒可对样本中的胃幽门螺杆菌、或者已获取的分离株，同时进行培养、鉴定、药敏检测，具有检测快速、准确，检测过程简单，检测时间短等优点。
附图说明
图1示实施例1胃幽门螺杆菌培养鉴定药敏试剂盒的结构示意图；
图2示实施例1检测板的结构示意图；
图3示实施例2胃幽门螺杆菌培养鉴定药敏试剂盒的结构示意图；
图4示实施例2检测板的结构示意图。
具体实施方式
本发明提供了一种胃幽门螺杆菌培养鉴定药敏试剂盒及检测方法。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1
如图1所示，本发明胃幽门螺杆菌培养鉴定药敏试剂盒包括带有矿物油1、培养基2和检测板3的盒体。
培养基2组成为：酵母浸粉5g/L、牛心浸粉5g/L、蛋白胨1g/L、氯化高铁血红素10mg/L、碳酸氢钠3g/L、六水合氯化镁0.6g/L、动物血清200mL/L、两性霉素20mg/L、万古霉素20mg/L、萘啶酸10mg/L、硫胺素10mg/L、烟酰胺5mg/L、生物素5mg/L、卟啉10mg/L、氯化钠1g/L、苯酚红30mg/L，余量为水。
检测板3的设置见图2。检测板3上设置有鉴定区5、药敏检测区域6(设有单一药物的药敏检测孔)和药敏检测区7(设有联合药物的药敏检测孔)。
鉴定区5包括两个HP鉴定孔1和HP鉴定孔2，分别包被尿素(4g/L)和精氨酸(6g/L)。
检测板3的药敏检测区6、7上各抗菌药物的浓度如表1所示。
表1
Figure BDA0002923611580000091
实验方法：
1、样本或待检测的分离株接种于培养基2，充分混匀后取100uL加在检测板3的各孔中，每孔加1-2滴矿物油后，于35-37℃培养48-72h，观察显色结果。
2、当两个鉴定孔的培养基均变红时，判断HP检测阳性，不变色或只有1孔变色时判为HP检测阴性。
3、根据药敏检测孔的颜色变化判断药敏结果，若高浓度、低浓度两孔均不变色，判为敏感；若高浓度不变色，低浓度变色，判为中介；若高浓度、低浓度两孔均变色，判为耐药。
实施例2
如图3所示，本发明胃幽门螺杆菌培养鉴定药敏试剂盒包括带有矿物油1、培养基干粉2、检测板3和稀释液4的盒体。
稀释液4含有氯化钠和纯化水，用于溶解培养基冻干粉2。
冻干粉2的制备：配置含有以下成分的培养基：酵母浸粉3g/L、牛心浸粉6g/L、蛋白胨5g/L、氯化高铁血红素5mg/L、碳酸氢钠2g/L、六水合氯化镁1g/L、动物血清100mL/L、硫胺素15mg/L、烟酰胺10mg/L、生物素10mg/L、卟啉5mg/L、两性霉素10mg/L、万古霉素10mg/L、萘啶酸20mg/L、氯化钠3g/L、苯酚红50mg/L，余量为水。上述成分制备成培养基后，经冻干工艺制程冻干粉。
检测板3的设置见图4；检测板3上设置有鉴定区5、药敏检测区域6(设有单一药物的药敏检测孔)和药敏检测区7(设有联合药物的药敏检测孔)。
检测板3的药敏检测区6、7上各抗菌药物的浓度如表2所示。
表2
Figure BDA0002923611580000101
实验方法：
1、取稀释液4倒入冻干粉2，得到培养基(酵母浸粉3g/L、牛心浸粉6g/L、蛋白胨5g/L、氯化高铁血红素5mg/L、碳酸氢钠2g/L、六水合氯化镁1g/L、动物血清100mL/L、硫胺素15mg/L、烟酰胺10mg/L、生物素10mg/L、卟啉5mg/L、两性霉素10mg/L、万古霉素10mg/L、萘啶酸20mg/L、苯酚红50mg/L、氯化钠3g/L)。
2、样本或者待检测的分离株接种于培养基，充分混匀后取100uL加在检测板3的各孔中，每孔加1-2滴矿物油后，于35-37℃培养48-72h，观察显色结果。
3、当两个鉴定孔的培养基均变红时，判断HP检测阳性，不变色或只有1孔变色时判为HP检测阴性。
4、根据药敏检测孔的颜色变化判断药敏结果，若高浓度、低浓度两孔均不变色，判为敏感；若高浓度不变色，低浓度变色，判为中介；若高浓度、低浓度两孔均变色，判为耐药。
对比例1
培养基不含硫胺素、烟酰胺、生物素、卟啉，具体组成为：酵母浸粉5g/L、牛心浸粉5g/L、蛋白胨1g/L、氯化高铁血红素10mg/L、碳酸氢钠3g/L、六水合氯化镁0.6g/L、动物血清200mL/L、两性霉素10mg/L、万古霉素10mg/L、萘啶酸10mg/L、苯酚红30mg/L。其他组分与本发明实施例1的是结合相同，制得对比例1试剂盒。按照实施例1的方法对HP阳性样本进行检测。
结果显示，48-72h时Hp鉴定孔不显色，培养5d微变色，结果表明对比例1试剂盒的检测结果准确性低，且检测时间较长。
试验例 准确性和药敏验证实验
利用实施例1的试剂盒检测大肠杆菌阳性样本，检测结果为阴性；对金黄色葡萄球菌阳性样本的检测结果为阴性；对种白色念珠菌阳性样本检测结果为阴性。对经质谱鉴定确定为胃幽门螺杆菌的Hp临床分离株的检测结果为阳性，鉴定结果与质谱结果一致。
药敏检测结果与琼脂稀释法对比，配制含5％羊血的MH琼脂培养基，并添加对应浓度的表中所述抗菌药物，制备成培养基平板，制备4麦氏单位的Hp临床分离株菌液，涂布平板，于二氧化碳培养箱中，37℃培养72h，观察生长情况。结果见表3。结果显示，本发明试剂盒的药敏检测结果与琼脂稀释法结果一致。
表3
Figure BDA0002923611580000111
Figure BDA0002923611580000121
注：R指耐药；I指中介；S指敏感。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (9)

1.一种胃幽门螺杆菌培养鉴定药敏试剂盒，其特征在于，包括培养基、矿物油和检测板；
所述培养基由以下组分组成：
酵母浸粉3-5g/L、牛心浸粉5-6g/L、蛋白胨1-5g/L、氯化高铁血红素5-10mg/L、碳酸氢钠2-3g/L、六水合氯化镁0.6-1g/L、动物血清100-200mL/L、两性霉素10-20mg/L、万古霉素10-20mg/L、萘啶酸10-20mg/L、硫胺素10-15mg/L、烟酰胺5-10mg/L、生物素5-10mg/L、卟啉5-10mg/L、氯化钠1-3g/L、显色剂30-50mg/L和余量水；
所述检测板上设有HP鉴定孔1、HP鉴定孔2和药敏检测孔；
所述HP鉴定孔1包被有尿素，HP鉴定孔2包被有精氨酸。
2.根据权利要求1所述的胃幽门螺杆菌培养鉴定药敏试剂盒，其特征在于，所述培养基由以下组分组成：
酵母浸粉5g/L、牛心浸粉5g/L、蛋白胨1g/L、氯化高铁血红素10mg/L、碳酸氢钠3g/L、六水合氯化镁0.6g/L、动物血清200mL/L、两性霉素10mg/L、万古霉素10mg/L、萘啶酸10mg/L、硫胺素10mg/L、烟酰胺5mg/L、生物素5mg/L、卟啉10mg/L、氯化钠3g/L、显色剂30mg/L和余量水。
3.根据权利要求1所述的胃幽门螺杆菌培养鉴定药敏试剂盒，其特征在于，所述鉴定孔1包被有1~10g/L尿素，鉴定孔2包被有1~10g/L精氨酸。
4.根据权利要求1所述的胃幽门螺杆菌培养鉴定药敏试剂盒，其特征在于，所述药敏检测孔包括单一药物的药敏检测孔和联合药物的药敏检测孔。
5.根据权利要求4所述的胃幽门螺杆菌培养鉴定药敏试剂盒，其特征在于，所述单一药物的药敏检测孔包被的抗菌药物为阿莫西林、呋喃唑酮、克拉霉素、莫西沙星、四环素、利福平、甲硝唑、左氧氟沙星、替硝唑或环丙沙星。
6.根据权利要求4所述的胃幽门螺杆菌培养鉴定药敏试剂盒，其特征在于，所述联合药物的药敏检测孔包被以下抗菌药物中的至少两种：
阿莫西林、呋喃唑酮、克拉霉素、莫西沙星、四环素、利福平、甲硝唑、左氧氟沙星、替硝唑和环丙沙星。
7.根据权利要求1~6任一项所述的胃幽门螺杆菌培养鉴定药敏试剂盒，其特征在于，还包括阴性对照孔，所述阴性对照孔包被1~10g/L尿素。
8.一种非诊断目的的胃幽门螺杆菌的检测方法，其特征在于，利用权利要求1~7任一项所述的胃幽门螺杆菌培养鉴定药敏试剂盒进行检测，包括：将待测样本或已获得的Hp分离株接种于培养基中，混匀，加入到检测板的各孔中，每孔加1-2滴矿物油，于35-37℃培养48-72h，根据显色情况判定结果。
9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于，所述Hp鉴定孔的结果的判定方法为：两个鉴定孔的培养基均变红时，判断Hp检测阳性，不变色或只有1孔变色时判为Hp检测阴性。
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