ES2293313T3

ES2293313T3 - Derivados de 3,4-dihidro-1h-quinolin-2-ona como inhibidores de la recaptacion de norepinefrina.

Info

Publication number: ES2293313T3
Application number: ES04760215T
Authority: ES
Inventors: Nicholas Paul Camp; Roberta Penariol; Christopher David Beadle
Original assignee: Eli Lilly and Co
Current assignee: Eli Lilly and Co
Priority date: 2003-04-25
Filing date: 2004-04-16
Publication date: 2008-03-16
Anticipated expiration: 2024-04-16
Also published as: CA2518753A1; DE602004009306D1; US20070105845A1; WO2004096773A1; GB0309440D0; EP1622874A1; DE602004009306T2; JP2006524689A; ATE374751T1; EP1622874B1

Abstract

Un compuesto de fórmula (I) en la que -X- es -C(R4R5)-, -O- o -S-; n es 2 ó 3; R1 es H o alquilo C1-C4; R3 es H, halo, alquilo C1-C4, O(alquilo C1-C4), nitrilo, fenilo o fenilo sustituido con 1 ó 2 sustituyentes seleccionados entre alquilo C1-C4, O(alquilo C1-C4), S(alquilo C1-C4), halo, y fenilo opcionalmente sustituido con alquilo C1-C4, O(alquilo C1-C4), S(alquilo C1-C4), o halo; cada uno de R4 y R5 se selecciona independientemente entre H o alquilo C1-C4; Ar- se selecciona entre el grupo constituido por en las que R2a es H, halo, metilo o etilo; R2b es H, halo o metilo; R2c es H, halo, metilo, trifluorometilo, nitrilo o metoxi; R2d es H, halo, metilo o etilo; R2c es H, halo, metilo, trifluorometilo, nitrilo o metoxi; R2f es H, o fluoro; -Y- es -O-, -S- o -N(R6)-; y R6 es H o metilo; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Description

Derivados de 3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona como inhibidores de la recaptación de norepinefrina.

Esta invención se refiere a nuevos compuestos de quinolona, y a su uso en la inhibición selectiva de la recaptación de norepinefrina.

La inhibición selectiva de la recaptación de norepinefrina es un modo de acción relativamente nuevo para el tratamiento de trastornos afectivos. La norepinefrina parece desempeñar un papel importante en las alteraciones de la función vegetativa asociadas con trastornos afectivos, de ansiedad y cognitivos. El clorhidrato de atomoxetina es un inhibidor selectivo de norepinefrina, y se comercializa para el tratamiento del trastorno de hiperactividad con déficit de atención (ADHD). La reboxetina es un inhibidor selectivo de la recaptación de norepinefrina comercializado para el tratamiento de la depresión. Varias 3-(\omega-aminoalquil)-1-fenil-2-indolinonas y las 1-fenilindolinas correspondientes que se sintetizaron y evaluaron farmacológicamente como posibles agentes anti-depresivos se presentan en J. of Medicinal Chemistry, vol. 15 (7), 1972, 762-770. El documento US 5.552.429 informa de que la potencia de fluoxetina, venlafaxina, milnacipran y duloxetina para aumentar la disponibilidad de serotonina, norepinefrina y dopamina aumenta por administración junto con un agonista del receptor de serotonina 1A. El documento EP 0 919 236 describe el uso de un inhibidor de la captación de norepinefrina para el tratamiento del trastorno desafiante oposicional. El documento WO 01/27068 describe un grupo de derivados de biaril éter con actividad como inhibidores de la recaptación de serotonina, norepinefrina y dopamina que pueden usarse en el tratamiento de trastornos del sistema nervioso central y otros trastornos. El documento WO 02/094262 describe heteroariloxi propanaminas 3-sustituidas y su uso en la inhibición de la recaptación de serotonina y norepinefrina. El documento WO 02/40006 muestra el uso de inhibidores selectivos de la recaptación de norepinefrina para tratar trastornos de ansiedad, especialmente el trastorno obsesivo-compulsivo.

De acuerdo con la presente invención se proporciona un compuesto de fórmula (I)

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en la que

-X- es -C(R^{4}R^{5})-, -O- o -S-;

n es 2 ó 3;

R^{1} es H o alquilo C_{1}-C_{4};

R^{3} es H, halo, alquilo C_{1}-C_{4}, O(alquilo C_{1}-C_{4}), nitrilo, fenilo o fenilo sustituido;

cada uno de R^{4} y R^{5} se selecciona independientemente entre H o alquilo C_{1}-C_{4};

Ar- se selecciona entre el grupo constituido por

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en las que

R^{2a} es H, halo, metilo o etilo;

R^{2b} es H, halo o metilo;

R^{2c} es H, halo, metilo, trifluorometilo, nitrilo o metoxi;

R^{2d} es H, halo, metilo o etilo;

R^{2e} es H, halo, metilo, trifluorometilo, nitrilo o metoxi;

R^{2f} es H o fluoro;

-Y- es -O-, -S- o -N(R^{6})-; y

R^{6} es H o metilo

y sales farmacéuticamente aceptables del mismo.

La expresión "alquilo C_{1}-C_{4}", como se usa en este documento, incluye grupos alquilo de cadena lineal y ramificada de 1, 2, 3 ó 4 átomos de carbono. De esta manera, la expresión "alquilo C_{1}-C_{4}" incluye metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo y terc-butilo. Se prefieren los grupos alquilo C_{1}-C_{2}. Un grupo alquilo C_{1}-C_{4} particularmente preferido es metilo o etilo.

El término "halo" incluye F, Cl, Br y I, y es preferiblemente F o Cl.

La expresión "fenilo sustituido" significa fenilo sustituido con 1, 2, 3, 4 ó 5 sustituyentes, preferiblemente con 1 ó 2, por ejemplo 1, sustituyente. Los sustituyentes adecuados incluyen alquilo C_{1}-C_{4}, O(alquilo C_{1}-C_{4}), S(alquilo C_{1}-C_{4}), halo y fenilo opcionalmente sustituido, por ejemplo, con alquilo C_{1}-C_{4}, O(alquilo C_{1}-C_{4}), S(alquilo C_{1}-C_{4}) o halo.

Las expresiones "O(alquilo C_{1}-C_{4})" o "S(alquilo C_{1}-C_{4})" significan un grupo alquilo C_{1}-C_{4} como se ha definido anteriormente unido al punto de sustitución a través de un átomo de oxígeno o de azufre. Un grupo O(alquilo C_{1}-C_{4}) o S(alquilo C_{1}-C_{4}) incluye, por ejemplo, metoxi, etoxi, tiometilo o tioetilo.

La presente invención incluye las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de fórmula (I), fórmula (Ia) o fórmula (II). Las sales adecuadas incluyen sales de adición de ácidos, incluyendo las sales formadas con ácidos inorgánicos, por ejemplo ácido clorhídrico, bromhídrico, nítrico, sulfúrico o fosfórico, o con ácidos orgánicos, tales como ácido orgánico carboxílico o ácido orgánico sulfónico, por ejemplo, ácido acetoxibenzoico, cítrico, glicólico, mandélico-l, mandélico-dl, mandélico-d, maleico, mesotartárico monohidrato, hidroximaleico, fumárico, lactobiónico, málico, metanosulfónico, napsílico, naftalenodisulfónico, naftoico, oxálico, palmítico, fenilacético, propiónico, piridil hidroxi pirúvico, salicílico, esteárico, succínico, sulfanílico, tartárico-l, tartárico-dl, tartárico-d, 2-hidroxietano sulfónico, tolueno-p-sulfónico y xinafoico.

Además de las sales farmacéuticamente aceptables, otras sales pueden servir como intermedios en la purificación de compuestos o en la preparación de otras sales de adición de ácidos, por ejemplo farmacéuticamente aceptables, o son útiles para identificación, caracterización o purificación.

Se apreciará que compuestos de fórmula (I), fórmula (Ia) y fórmula (II) poseen átomos de carbono asimétricos, y que en la presente invención se prefieren estereoisómeros individuales específicos.

Un grupo preferido de compuestos de acuerdo con la presente invención se representa por la fórmula (Ia)

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en la que -X-, n, R^{1}, R^{3} y Ar tienen los valores como se han definido para la fórmula (I) anterior.

Todos los compuestos de fórmulas (I) y (Ia) son realizaciones de la presente invención, aunque se prefieren compuestos en los que -X- es -C(R^{4}R^{5})-. Se prefieren aún más los compuestos en los que X- es -C(R^{4}R^{5})- y R^{4} y R^{5} son ambos H o R^{4} y R^{5} son ambos el mismo alquilo C_{1}-C_{4}.

Como se ha mencionado anteriormente, todos los compuestos de fórmulas (I) y (Ia) anteriores son realizaciones de la presente invención, aunque también se prefieren los compuestos en los que Ar es (i). Preferiblemente Ar es (i) y R^{2c} es H. Se prefieren aún más los compuestos en los que Ar es (i), R^{2c} es H, y (a) R^{2a} es H o metilo, R^{2b} es H y R^{2f} es H o (b) R^{2a} es H, R^{2b} es halo, preferiblemente fluoro o cloro y R^{2f} es H o fluoro.

Otro grupo de compuestos preferidos de la invención son compuestos en los que Ar es (ii) e -Y- es -S-. Más preferiblemente Ar es 2-tiofenilo o 3-tiofenilo.

Otro grupo preferido de compuestos de acuerdo con la presente invención se representa por la fórmula (II)

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en la que

n es 2 ó 3;

R^{1} es H o alquilo C_{1}-C_{4};

R^{3} es H, halo, fenilo o fenilo sustituido;

R^{2a} es H, halo, metilo o etilo;

R^{2b} es H, halo o metilo; y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

Se apreciará que todos los compuestos de fórmulas (I), (Ia) y (II) son realizaciones de la presente invención, aunque se prefieren ciertos compuestos.

Preferiblemente n es 3.

También preferiblemente R^{1} es H, metilo, etilo o n-propilo.

Se prefiere también que R^{3} sea H o halo.

Los compuestos de la presente invención pueden prepararse usando los siguientes procedimientos. A continuación se dan esquemas generales que resumen las rutas de síntesis usadas para preparar productos racémicos. Todos los racematos activos se separaron en enantiómeros individuales usando HPLC quiral y en la mayoría de los casos los enantiómeros se convirtieron en sales D-tartrato.

Los compuestos de fórmula (I) en la que Ar es (i) y R^{2c} es H pueden prepararse como se muestra en el procedimiento A a continuación.

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Procedimiento A

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Esquema 1

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La quinolin-2-ona (1) o sus correspondientes derivados 4-oxo y 4-tio pueden N-arilarse usando condiciones modificadas respecto a las presentadas por Buchwald (J. Am. Chem. Soc, 123, 2001, pág. 7727). Por ejemplo, la quinolin-2-ona (1) se hace reaccionar con 3 equivalentes de Ar-Br, donde Ar es (i) y R^{2c} es H, 0,2 equivalentes de transciclohexanodiamina, 0,2 equivalentes de yoduro de cobre (CuI) y 2,1 equivalentes de carbonato potásico (K_{2}CO_{3}), en un disolvente orgánico tal como 1,4-dioxano a una temperatura de 125ºC durante toda la noche. La quinolin-2-ona N-arilada (2) resultante puede alquilarse por tratamiento con una base fuerte tal como hexametildisilazida de litio (LiHMDS) a temperaturas de -78ºC en un disolvente orgánico adecuado tal como tetrahidrofurano (THF), seguido de la adición de un haluro de alquilo tal como yoduro de alquilo para dar el derivado de quinolin-2-ona 3-alquilado-N-arilado (3) correspondiente. Usando las mismas condiciones de alquilación anteriores con un 1,2-dihaloetano, tal como 1-bromo-2-cloroetano, o un 1,3-dihalopropano, tal como 1-bromo-3-cloropropano, como agentes de alquilación, se proporciona (4) o (5) en las que n es 2 ó 3 respectivamente. Estos análogos halo se eligieron como precursores ideales para los productos amina deseados. Por ejemplo, el tratamiento de (4) o (5) con metilamina acuosa, en presencia de una cantidad catalítica de un yoduro adecuado, tal como yoduro potásico (Kl), en etanol a 100ºC proporcionó los productos amina racémicos (6) y (7) respectivamente, con rendimientos moderados.

Los compuestos de fórmula (I) en la que Ar es (i), R^{2c} es H y n es 3 pueden prepararse usando el procedimiento alternativo B.

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Procedimiento B

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Esquema 2

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Las quinolin-2-onas (2) y (3) pueden alquilarse usando el procedimiento de alquilación mencionado anteriormente usando un haluro de alilo, por ejemplo bromuro de alilo como agente de alquilación para dar las correspondientes 3-alil-N-ariladas-quinolin-2-onas (11a-g). Dichos análogos de alilo podrían convertirse después en los alcoholes primarios correspondientes (12a-g) mediante un procedimiento de hidroboración que implica un borano adecuado, tal como 9-BBN en un disolvente adecuado tal como THF. El tratamiento oxidativo usando por ejemplo condiciones de reacción tales como peróxido de hidrógeno acuoso en un disolvente tal como etanol, en presencia de una base adecuada tal como hidróxido sódico, dio rendimientos de moderados a buenos de productos alcohol después de purificación por cromatografía en columna. Los alcoholes se convirtieron limpiamente en sus mesilatos, por reacción de un haluro de mesilo tal como cloruro de mesilo en presencia de una base adecuada tal como trietilamina en un disolvente adecuado tal como THF a una temperatura adecuada tal como de 0ºC a la temperatura ambiente. Los mesilatos resultantes se usan directamente en la etapa de aminación descrita anteriormente en el procedimiento A para proporcionar buenos rendimientos de las dianas racémicas finales (13a-g).

Para preparar una serie de análogos N-arilados se prepararon intermedios avanzados que podían experimentar N-arilaciones con una serie de haluros de arilo sustituidos, tales como bromuros o yoduros de arilo, 2 y 3-halotiofenos, 2 y 3-halofuranos o 2 y 3-halopirroles (Procedimiento C). La ruta sintética usada para preparar los intermedios (19a-b) se muestra a continuación (Esquema 3).

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(Esquema pasa a página siguiente)

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Procedimiento C

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Esquema 3

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Los compuestos de fórmula (I) en la que n es 3 pueden prepararse como se muestra en el procedimiento C. Este procedimiento es particularmente adecuado para compuestos en los que Ar es (i) y R^{2c} es H o Ar es (ii), en el que -Y- es -S-.

La quinolin-2-ona (1) puede protegerse usando un grupo protector de amida adecuado como los descritos en T.W. Greene, "Protective Groups in Organic Synthesis", John Wiley and Sons, Nueva York, N.Y., 1991, denominado en lo sucesivo en este documento "Greene". Por ejemplo, la quinolin-2-ona (1) puede protegerse con un grupo 4-metoxibencilo. La reacción de protección puede realizarse por ejemplo usando una base adecuada tal como hidruro sódico en un disolvente adecuado, tal como dimetilformamida, seguido de reacción con un haluro de 4-metoxibencilo, tal como cloruro de 4-metoxibencilo, para dar el derivado N-protegido (14) correspondiente con un buen rendimiento. Este intermedio puede convertirse directamente en el análogo alilo (16a), en el que R^{1} = H, de la manera descrita anteriormente o convertirse en el análogo de alquilo (15) que puede alquilarse posteriormente con un haluro de alilo para dar el análogo de alilo (16b), en el que R^{1} es alquilo C_{1}-C_{4}. Usando la misma secuencia de hidroboración, mesilación y aminación descrita en el Procedimiento B se proporcionaron las dos aminas (18a-b). La desprotección de quinolin-2-ona protegida podría conseguirse usando cualquiera de las condiciones de desprotección adecuadas como las mostradas en Greene. Por ejemplo, el grupo 4-metoxibencilo podría escindirse limpiamente usando ácido trifluoroacético y anisol a 65ºC. El producto resultante podría protegerse selectivamente sobre la amina secundaria con un grupo protector de nitrógeno adecuado como los descritos en Greene. Por ejemplo, la amina secundaria puede protegerse con un grupo Boc. La reacción puede realizarse con anhídrido de Boc en un disolvente adecuado tal como THF para proporcionar cantidades de multi gramos de (19a-b). La reacción de (19a-b) con diversos bromuros de arilo usando las condiciones de N-arilación descritas anteriormente, desprotección usando condiciones de desprotección adecuadas tales como las descritas en Greene dio una serie de dianas racémicas finales (21a-q o 22a-b). Por ejemplo, para compuestos protegidos con un grupo Boc pueden desprotegerse en presencia de ácido trifluoroacético (TFA) en un disolvente orgánico adecuado tal como diclorometano (DCM).

Los intermedios (19 a-b) en los que R^{3} es un grupo halo, por ejemplo cloro o bromo, pueden usarse para proporcionar compuestos de fórmula (I) en la que R^{3} es un grupo fenilo, tal como el compuesto (24), por acoplamiento de Suzuki, véase el esquema 4 a continuación.

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Procedimiento D

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Esquema 4

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Los intermedios (19a-b), en los que R^{3} es, por ejemplo, bromo pueden N-protegerse con un grupo protector de amida adecuado, por ejemplo 4-metoxibencilo como se describe en el procedimiento C anterior y después acoplarse con ácido fenilborónico en condiciones de Suzuki para proporcionar los análogos de fenilo (23). La desprotección del grupo 4-metoxibencilo con TFA, seguido de protección de la amina secundaria resultante con un grupo protector de nitrógeno adecuado tal como Boc seguido de la posterior N-arilación y desprotección de Boc usando la metodología descrita anteriormente dio la diana final (24).

Se apreciará que los compuestos de fórmula (Ia) en los que R^{3} es bromo o cloro pueden prepararse como se muestra en los procedimientos A a D anteriores partiendo de las haloquinolin-2-onas correspondientes. Como alternativa, pueden prepararse a partir de la quinolin-2-ona (1a) correspondiente en la que R^{3} es hidrógeno como se ha mencionado anteriormente incluyendo una etapa extra que comprende la halogenación de un intermedio adecuado en alguna fase de la síntesis. Por ejemplo, la quinolin-2-ona (1a) en el procedimiento B puede halogenarse usando N-clorosuccinimida en un disolvente adecuado tal como DMF a una temperatura adecuada tal como a la temperatura ambiente para dar la 6-cloro-quinolin-2-ona (1c) correspondiente en la que R^{3} es Cl.

Como alternativa, los intermedios (19 a-b) en los que R^{3} es H en el procedimiento C pueden halogenarse en presencia de N-cloro y N-bromosuccinimida en un disolvente adecuado tal como DMF para dar las 6-cloro y 6-bromoquinolin-2-onas (20a-c) correspondientes.

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Se apreciará que los procedimientos A a D anteriores se refieren a procedimientos para la preparación de compuestos de fórmula I en la que Ar es (i) y R^{2c} es hidrógeno. Los compuestos de fórmula I en la que Ar es (i) y R^{2c} puede ser distinto de hidrógeno, pueden prepararse usando cualquiera de los procedimientos generales mencionados anteriormente, partiendo de la quinolin-2-ona N-arilada (27) correspondiente. Un procedimiento general para preparar dichos intermedios se ilustra en el Esquema 5. Los ácidos 3-(2-bromofenil)-propiónicos (25) disponibles en el mercado pueden convertirse en la amida (26) usando condiciones convencionales de acoplamiento de amida y convertirse en las quinolin-2-onas N-ariladas (27) mediante una ciclación intramolecular, catalizada con paladio de acuerdo con el procedimiento de Buchwald y col (Tetrahedron, 1996, 52, pág. 7525).

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Esquema 5

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La presente invención proporciona un procedimiento para la preparación de un compuesto de fórmula (I) que comprende hacer reaccionar metilamina con un compuesto de fórmula

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en la que R^{1}, R^{3}, X, n y Ar tienen los valores definidos para la fórmula I anterior y L es un grupo saliente adecuado tal como por ejemplo cloruro, bromuro, yoduro o mesilato. La reacción puede realizarse como se ha descrito anteriormente, haciendo reaccionar un compuesto de fórmula (III) con metilamina, por ejemplo en forma de metilamina acuosa, opcionalmente en presencia de una cantidad catalítica de un yoduro adecuado, tal como yoduro potásico (Kl), en etanol a 100ºC, proporcionando los productos amina racémicos (6) y (7) respectivamente, con rendimientos moderados. Una etapa opcional adicional comprende la formación de una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto de fórmula (1).

La presente invención proporciona otro procedimiento para la preparación de un compuesto de fórmula (I) que comprende la N-desprotección de un compuesto de fórmula

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en la que R^{1}, R^{3}, X, n y Ar tienen los valores definidos para la fórmula I anterior y P es un grupo protector de nitrógeno adecuado tal como los descritos en Greene, por ejemplo un grupo Boc. La reacción se realiza usando condiciones de desprotección adecuadas tales como las descritas en Greene de acuerdo con la naturaleza del grupo protector de nitrógeno usado (P). Por ejemplo, para compuestos protegidos con un grupo Boc, pueden desprotegerse en presencia de ácido trifluoroacético (TFA) en un disolvente orgánico adecuado tal como diclorometano (DCM). Una etapa opcional adicional comprende la formación de una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto de fórmula (I).

Los compuestos de la presente invención son inhibidores de la recaptación de norepinefrina y son selectivos sobre otros neurotransmisores, tales como dopamina o serotonina, es decir, su afinidad de unión en el transportador de norepinefrina es mayor que su afinidad por otros transportadores u otros receptores. Además, son estables en ácido.

Por lo tanto, la presente invención proporciona un compuesto de fórmula (I), fórmula (Ia) o fórmula (II), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para usar en terapia; y un compuesto de fórmula (I), fórmula (Ia) o fórmula (II), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para usar como un inhibidor selectivo de la recaptación de norepinefrina.

Además, la presente invención también proporciona un compuesto de fórmula (I), fórmula (Ia) o fórmula (II), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para inhibir selectivamente la recaptación de norepinefrina; y un compuesto de fórmula (I), fórmula (Ia) o fórmula (II), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para tratar trastornos asociados con disfunción de norepinefrina en mamíferos; y el uso de un compuesto de fórmula (I), fórmula (Ia) o fórmula (II), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la preparación de un medicamento para inhibir selectivamente la recaptación de norepinefrina; y el uso de un compuesto de fórmula (I), fórmula (Ia) o fórmula (II), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la preparación de un medicamento para el tratamiento de trastornos asociados con disfunción de norepinefrina en mamíferos, incluyendo los trastornos mostrados en este documento.

Los trastornos asociados con disfunción de norepinefrina en mamíferos, mencionados anteriormente en cualquiera de los usos o los procedimientos de la presente invención, incluyen, por ejemplo, afecciones del sistema nervioso tales como las seleccionadas entre el grupo constituido por un trastorno adictivo y síndrome de abstinencia, un trastorno de ajuste, un trastorno de aprendizaje y mental relacionado con la edad, anorexia nerviosa, apatía, un trastorno por déficit de atención (ADD) debido a afecciones médicas generales, trastorno de hiperactividad con déficit de atención (ADHD), trastorno bipolar, bulimia nerviosa, síndrome de fatiga crónica, estrés crónico o agudo, trastorno de conducta, trastorno ciclotímico, depresión, trastorno distímico, fibromialgia y otros trastornos somatoformes, trastorno de ansiedad generalizada, incontinencia, un trastorno de inhalación, un trastorno de intoxicación, manía, dolores de cabeza de tipo migraña, obesidad, trastornos obsesivos compulsivos y trastornos de espectro relacionado, trastorno desafiante oposicional, trastorno de pánico, neuropatía periférica, trastorno de estrés post-traumático, trastorno disfórico premenstrual, un trastorno psicótico, trastorno afectivo estacional, un trastorno del sueño, fobia social, un trastorno del desarrollo específico, inhibición selectiva de la recaptación de serotonina (SSRI), síndrome de "pérdida de efecto" o "poop out", trastornos TIC, trastornos cognitivos incluyendo deficiencia cognitiva moderada (MCI), demencia de tipo Alzheimer (DAT), demencia vascular y deficiencia cognitiva asociada con esquizofrenia (CIAS), estados hipotensivos incluyendo hipotensión ortoestática, y dolor incluyendo dolor crónico, dolor neuropático y dolor
antinociceptivo.

Además de los compuestos de fórmula (I), fórmula (Ia) y fórmula (II), y procesos para la preparación de dichos compuestos, la presente invención proporciona adicionalmente composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de fórmula (I), fórmula (Ia) o fórmula (II), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, junto con un diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable.

Los compuestos de la presente invención pueden usarse como medicamentos en medicina humana o veterinaria. Los compuestos pueden administrarse por diversas vías, por ejemplo, por vía oral o rectal, tópica o parenteral, por ejemplo por inyección, y normalmente se emplean en forma de una composición farmacéutica.

Dichas composiciones pueden prepararse por procedimientos bien conocidos en la técnica farmacéutica y normalmente comprenden al menos un compuesto activo en asociación con un diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable. En la preparación de las composiciones de la presente invención, el ingrediente activo normalmente se mezclará con un vehículo o se diluirá en un vehículo, y/o quedará encerrado en un vehículo que puede estar, por ejemplo, en forma de una cápsula, sello, papel u otro recipiente. Cuando el vehículo sirve como diluyente, puede ser un material sólido, semi-sólido, o líquido que actúa como vehículo, excipiente o medio para el ingrediente activo. Por lo tanto, la composición puede estar en forma de comprimidos, pastillas, sellos, obleas, elixires, suspensiones, soluciones, jarabes, aerosol (en forma de un sólido o en un medio líquido), pomadas que contienen, por ejemplo, hasta 10% en peso del compuesto activo, cápsulas de gelatina blandas y duras, supositorios, soluciones y suspensiones para inyección y polvos envasados estériles.

Algunos ejemplos de vehículos adecuados son lactosa, dextrosa, aceites vegetales, alcoholes bencílicos, alquilen glicoles, polietilenglicoles, triacetato de glicerol, gelatina, carbohidratos tales como almidón y vaselina líquida, sacarosa sorbitol, manitol, almidones, goma arábiga, fosfato cálcico, alginatos, tragacanto, gelatina, jarabe, metil celulosa, metil- y propil- hidrobenzoato, talco, estearato de magnesio y aceite mineral. Los compuestos de fórmula (I) también pueden liofilizarse y los liofilizados obtenidos se usan, por ejemplo, para la producción de preparaciones para inyección. Las preparaciones indicadas pueden esterilizarse y/o pueden contener auxiliares tales como lubricantes, conservantes, estabilizantes y/o agentes humectantes, emulsionantes, sales para afectar a la presión osmótica, sustancias tampón, colorantes, aromatizantes y/o uno o más compuestos activos adicionales, por ejemplo una o más vitaminas. Las composiciones de la invención pueden formularse para proporcionar, liberación rápida, sostenida o retardada del ingrediente activo después de la administración al paciente empleando procedimientos bien conocidos en la técnica.

Las composiciones se formulan preferiblemente en una forma de dosificación unitaria, conteniendo cada dosificación de aproximadamente 5 a aproximadamente 500 mg, más habitualmente de aproximadamente 25 a aproximadamente 300 mg, del ingrediente activo. La expresión "forma de dosificación unitaria" se refiere a unidades físicamente discretas adecuadas como dosis unitarias para sujetos humanos y otros mamíferos, conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada de material activo calculado para producir el efecto terapéutico deseado, en asociación con un vehículo farmacéutico adecuado.

Los siguientes ejemplos ilustran realizaciones particulares de los compuestos de la presente invención y procedimientos para su preparación.

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Procedimiento A

Preparación de Intermedios 1-Fenil-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (2a)

Una mezcla agitada de 3,4-Dihidro-1H-quinolin-2-ona (1a) (1,47 g, 10 mmol), K_{2}CO_{3} (2,9 g, 21 mmol), trans-ciclohexano-1,2-diamina (240 \mul, 2 mmol) y bromobenceno (3,16 ml, 30 mmol) en 1,4-dioxano (10 ml) se calentó en una atmósfera de nitrógeno a 125ºC durante 5 min para desoxigenar la mezcla de reacción. Se añadió yoduro de cobre (I) (380 mg, 2 mmol) en una porción y la mezcla de reacción se calentó a reflujo durante toda la noche a 125ºC. Después de enfriar a ta, la mezcla de reacción se vertió en acetato de etilo (100 ml) y se extrajo con agua. La capa orgánica se separó, se secó sobre MgSO_{4} y se concentró. El tratamiento del residuo con éter (100 ml) y la refrigeración (baño de hielo) dio el producto en forma de un sólido blanco después de la filtración (1,77 g, 79%).

6-Fluoro-1-p-tolil-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (2b)

Ésta se preparó usando el procedimiento descrito para (2a) usando 6-fluoro-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (1b) (617 mg, 3,7 mmol) y 4-bromotolueno (1,91 g, 11 mmol) para dar el producto en bruto, que se purificó usando cromatografía automatizada (sílice) (gradiente del 0 al 60% de acetato de etilo/ciclohexano) para proporcionar el producto en forma de un sólido pardo claro (880 mg, 92%).

3-Metil-1-fenil-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (3a)

A una solución de (2a) (892 mg, 4 mmol) en THF anhidro (40 ml) a -78ºC en una atmósfera de nitrógeno se le añadió LiHMDS (4,4 ml, solución 1 M en hexanos, 4,4 mmol) gota a gota durante 10 min. La mezcla de reacción se dejó a -78ºC durante 30 min y después se añadió gota a gota una solución de yoduro de metilo (298 \mul, 4,8 mmol) en THF (1 ml). La mezcla de reacción se calentó lentamente a ta, se inactivó con agua (2 ml) y se extrajo con acetato de etilo (100 ml). La capa orgánica se separó, se secó sobre MgSO_{4} y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía en columna (sílice, gradiente 100% hexano a acetato de etilo/hexano 3:10) dando el producto en forma de un aceite (667 mg, 70%).

3-Etil-1-fenil-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (3b)

Ésta se preparó de una manera similar a (3a) en una escala de 1,5 mmol usando 1-yodoetano (125 \mul, 1,1 equiv.) como agente de alquilación. El producto en bruto (378 mg) se usó directamente en la siguiente etapa.

3-(3-Cloro-propil)-1-fenil-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (4a)

A una solución de (2a) (892 mg, 4 mmol) en THF anhidro (40 ml) a -78ºC en una atmósfera de nitrógeno se le añadió LiHMDS (4,4 ml, solución 1 M en hexanos, 4,4 mmol) gota a gota durante 10 min. La mezcla de reacción se dejó a -78ºC durante 30 min y después se añadió gota a gota una solución de 1-bromo-3-cloropropano (405 \mul, 4,4 mmol) en THF (1 ml). La mezcla de reacción se calentó lentamente a ta, se inactivó con agua (2 ml) y se extrajo con acetato de etilo (100 ml). La capa orgánica se separó, se secó sobre MgSO_{4} y se concentró. El producto en bruto (1,2 g) se usó directamente en la siguiente etapa.

3-(3-Cloro-propil)-6-fluoro-1-p-tolil-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (4b)

Ésta se preparó a partir de (2b) (300 mg, 1,17 mmol) usando el procedimiento descrito para (4a) usando 1-bromo-3-cloropropano (140 \mul, 1,4 mmol) como agente de alquilación. El producto en bruto (399 mg) se usó directamente en la siguiente etapa.

3-(2-Cloro-etil)-1-fenil-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (4c)

Esto se preparó a partir de (2a) (892 mg, 4,0 mmol) usando el procedimiento descrito para (4a) usando 1-bromo-2-cloroetano (365 \mul, 4,4 mmol) como agente de alquilación. El producto en bruto (1 g) se usó directamente en la siguiente etapa.

3-(3-Cloro-propil)-3-metil-1-fenil-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (5a)

Esto se preparó a partir de (3a) (462 mg, 1,95 mmol) usando el procedimiento descrito para (4a) usando 1-bromo-3-cloropropano (270 \mul, 2,7 mmol) como agente de alquilación. El producto en bruto (650 mg) se usó directamente en la siguiente etapa.

3-(3-Cloro-propil)-3-etil-1-fenil-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (5b)

Esto se preparó a partir de (3b) (378 mg, 1,5 mmol) usando el procedimiento descrito para (4a) usando 1-bromo-3-cloropropano (179 \mul, 1,8 mmol) como agente de alquilación. El producto en bruto (528 mg) se usó directamente en la siguiente etapa.

Ejemplos Ejemplo 1 3-(3-Metilamino-propil)-1-fenil-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (6a)

Una solución de (4a) (1,2 g, 4 mmol), yoduro potásico (200 mg, 1,2 mmol) y metilamina acuosa al 40% (12 ml) en etanol (30 ml) se calentó a reflujo a 100ºC en una atmósfera de nitrógeno durante 3 h. La mezcla de reacción se enfrió, se vertió en agua y se extrajo con acetato de etilo (100 ml). La capa orgánica se separó, se secó sobre MgSO_{4} y se concentró. El producto se purificó por CLEM preparativa para dar 500 mg del racemato. El racemato se separó en sus enantiómeros individuales usando HPLC quiral. RMNH (300 MHz, CDCl_{3}) (racemato e isómero) \delta 1,5-1,73 (m, 4H), 1,88-1,97 (m, 1H), 2,43 (s, 3H), 2,62 (t, J = 6,69 Hz, 2H), 2,70-2,79 (m, 1H), 2,84-2,92 (m, 1H), 3,15 (dd, J = 15,45, 5,28 Hz, 1H), 6,33 (d, J = 7,73 Hz, 1H), 6,95-7,06 (m, 2H), 7,19-7,22 (m, 3H), 7,38-7,43 (m, 1H), 7,47-7,52 (m, 2H). CLEM (procedimiento de 12 minutos) [M+H]+ = 295 a Rt 4,0 min (100%).

Ejemplo 2 6-Fluoro-3-(3-metilamino-propil)-1-p-tolil-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (6b)

Ésta se preparó de una manera idéntica a (6a) usando (4b) en bruto (399 mg) para dar el producto en bruto, que se purificó por CLEM preparativa para dar el producto (35 mg). RMNH (300 MHz, CDCl_{3}) (racemato) \delta 1,40-1,70 (m, 3H), 1,75-1,90 (m, 4H), 2,34 (s, 3H), 2,36 (s, 3H), 2,50-2,83 (m, 2H), 3,01-3,08 (m, 1H), 6,21-6,26 (m, 1H), 6,62-6,68 (m, 1H), 6,82-6,86 (m, 1H), 6,99 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,22 (d, J = 8,1 Hz, 2H). CLEM (procedimiento de 12 minutos) [M+H]+= 327 a Rt 4,8 min (100%).

Ejemplo 3 3-(2-Metilamino-etil)-1-fenil-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (6c)

Ésta se preparó de una manera idéntica a (6a) usando (4c) en bruto (1 g) para dar el racemato (80 mg). El racemato se separó en sus enantiómeros individuales usando HPLC quiral. RMNH (300 MHz, CDCl_{3}) (racemato e isómero) \delta ppm 1,64-1,76 (m, 1H), 1,79 (a, 1H), 2,03-2,18 (m, 1H), 2,44 (s, 3H), 2,71 -2,82 (m, 2H), 2,82-2,94 (m, 2H), 3,09-3,21 (m, 1H), 6,33 (dd, J = 7,91, 1,32 Hz, 1H), 6,94-7,07 (m, 2H), 7,18-7,24 (m, 3H), 7,37-7,44 (m, 1H), 7,47-7,54 (m, 2H). CLEM (procedimiento de 12 minutos) [M+H]+ = 281 a Rt 3,82 min (100%).

Ejemplo 4 3-Metil-3-(3-metilamino-propil)-1-fenil-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (7a)

Ésta se preparó de una manera idéntica a (6a) usando (5a) en bruto (650 mg) para dar el producto en bruto (198 mg), que se purificó por CLEM preparativa. El racemato purificado se separó después en sus enantiómeros individuales usando HPLC quiral. RMNH (300 MHz, CDCl_{3}) (isómero) \delta ppm 1,27 (s, 3H), 1,43 (a, 1H), 1,53-1,66 (m, 4H), 2,39 (s, 3H), 2,54 (t, J = 6,12 Hz, 2H), 2,91 (d, J = 15,64 Hz, 1H), 2,98 (d, J = 15,64 Hz, 1H), 6,28 (dd, J = 7,91, 1,32 Hz, 1H), 6,97 (td, J = 7,21, 1,41 Hz, 1H), 7,03 (td, J= 7,68, 1,98 Hz, 1H), 7,14-7,22 (m, 3H), 7,36-7,44 (m, 1H), 7,46-7,53 (m, 2H). CLEM (procedimiento de 12 minutos) [M+H]^{+} = 309 a Rt 4,21 min (100%).

Ejemplo 5 3-Etil-3-(3-metilamino-propil)-1-fenil-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (7b)

Ésta se preparó de una manera idéntica a (6a) usando (5b) en bruto (528 mg) para dar el producto en bruto (105 mg), que se purificó por CLEM preparativa. El racemato purificado se separó después en sus enantiómeros individuales usando HPLC quiral. RMNH (300 MHz, CDCl_{3}) (racemato) \delta 0,93 (t, J = 7,53 Hz, 3H), 1,56-1,75 (m, 6H), 1,91 (s a, 1H), 2,41 (s, 3H), 2,55-2,60 (m, 2H), 2,91 (d, J = 15,82, 1H), 3,02 (d, J = 15,82, 1H), 6,25-6,28 (m, 1H), 6,94-7,05 (m, 2H), 7,16-7,19 (m, 3H), 7,38-7,43 (m, 1H), 7,4-7,52 (m, 2H). RMNH (300 MHz, MeOD-d4) (isómero sal D-tartrato) \delta 0,85 (t, J = 7,53 Hz, 3H), 1,45-1,75 (m, 6H), 2,57 (s, 2H), 2,83-2,89 (m, 2H), 3,01-3,06 (d, J = 16,01, 1H), 4,32 (s, 2H), 6,11 -6,14 (m, 1H), 6,89-6,97 (m, 2H), 7,09 (d, J = 7,16 Hz, 2H), 7,15-7,18 (m, 1H), 7,37 (t, J = 7,35 Hz, 1H), 7,46 (t, J = 7,35 Hz, 2H). CLEM (procedimiento de 12 minutos) [M+H]+ = 323 a Rt 4,9 min (98%).

Procedimiento B

Preparación de Intermedios 1-p-Tolil-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (2c)

Una mezcla agitada de 3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (1a) (4,41 g, 30 mmol), K_{2}CO_{3} (8,7 g, 63 mmol), trans-ciclohexano-1,2-diamina (720 \mul, 2 mmol) y 4-bromotolueno (15,4 g, 90 mmol) en 1,4-dioxano (30 ml) se calentó en una atmósfera de nitrógeno a 125ºC durante 5 min para desoxigenar la mezcla de reacción. Se añadió yoduro de cobre (I) (1,14 g, 2 mmol) en una porción y la mezcla de reacción se calentó a reflujo durante toda la noche a 125ºC. Después de enfriar a ta, la mezcla de reacción se filtró a través de celite, se vertió en acetato de etilo (100 ml) y se extrajo con agua. La capa orgánica se separó, se secó sobre MgSO_{4} y se concentró. El tratamiento del residuo con éter (200 ml) y la refrigeración (baño de hielo) dieron el producto en forma de un sólido blanco después de la filtración (6,2 g, 87%).

1-Fenil-3-propil-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (3c)

Ésta se preparó a partir de (2a) (669 mg, 3 mmol) y 1-yodopropano (352 \mul, 1,2 equiv.) como agente de alquilación. El producto en bruto (780 mg) se usó directamente en la siguiente etapa.

3-Etil-1-p-tolil-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (3d)

Ésta se preparó a partir de (2c) (711 mg, 3 mmol) y 1-yodoetano (265 \mul, 1,2 equiv.) como agente de alquilación. El producto en bruto (800 mg) se usó directamente en la siguiente etapa.

3-Propil-1-p-tolil-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (3e)

Ésta se preparó a partir de (2c) (711 mg, 3 mmol) y 1-yodopropano (352 \mul, 1,2 equiv.) como agente de alquilación. El producto en bruto (840 mg) se usó directamente en la siguiente etapa.

3-Butil-1-p-tolil-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (3f)

Ésta se preparó a partir de (2c) (711 mg, 3 mmol) y 1-yodobutano (354 \mul, 1,1 equiv.) como agente de alquilación. El producto en bruto (790 mg) se usó directamente en la siguiente etapa.

3-Isopropil-1-p-tolil-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (3g)

Ésta se preparó a partir de (2c) (711 mg, 3 mmol) y 2-yodopropano (330 \mul, 1,1 equiv.) como agente de alquilación. El producto en bruto (806 mg) se usó directamente en la siguiente etapa.

3-Alil-3-etil-1-p-tolil-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (11b)

A una solución de (3d) (800 mg, 2,7 mmol) en THF anhidro (30 ml) a -78ºC en una atmósfera de nitrógeno se le añadió LiHMDS (3 ml, solución 1 M en hexanos, 3 mmol) gota a gota durante 10 min. La mezcla de reacción se dejó a -78ºC durante 30 min y después se añadió gota a gota una solución de bromuro de alilo (280 \mul, 3,2 mmol) en THF (1 ml). La mezcla de reacción se calentó lentamente a ta, se inactivó con agua (2 ml) y se extrajo con acetato de etilo (100 ml). La capa orgánica se separó, se secó sobre MgSO_{4} y se concentró. El producto en bruto (920 mg) se usó directamente en la siguiente etapa.

3-Etil-3-(3-hidroxipropil)-1-p-tolil-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (12b)

A una solución de (11b) (732 mg, 2,4 mmol) en THF anhidro (25 ml) a 0ºC en una atmósfera de nitrógeno se le añadió 9-BBN (12 ml, solución 0,5 M en THF, 6 mmol, 2,5 equiv.) gota a gota durante 10 min. La mezcla de reacción se calentó a ta y se dejó agitar durante toda la noche. La solución amarilla resultante se enfrió a 0ºC y después se inactivó cuidadosamente con etanol (3 ml), seguido de NaOH ac. (1,8 ml, solución 3 N). Finalmente, se añadió gota a gota H_{2}O ac. (1,8 ml, solución al 37%) manteniendo la temperatura interna de la mezcla de reacción entre 5 y 10ºC. La mezcla de reacción se calentó a ta y después se calentó a reflujo durante 90 min. La mezcla de reacción se enfrió a ta, se vertió en acetato de etilo y agua y se extrajo. La capa orgánica se separó, se secó sobre MgSO_{4} y se concentró. El producto en bruto se purificó usando cromatografía automatizada (sílice) (gradiente del 0 al 60% de acetato de etilo/ciclohexano) para proporcionar (12b) en forma de un aceite transparente (540 mg, 70%).

Ejemplos Ejemplo 6 3-Etil-3-(3-metilamino-propil)-1-p-tolil-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (13b)

A una solución de (12b) (540 mg, 1,67 mmol) y trietilamina (350 \mul, 2,5 mmol) en THF anhidro (20 ml) a 0ºC en una atmósfera de nitrógeno se le añadió gota a gota una solución de cloruro de metanosulfonilo (142 \mul, 1,8 mmol) en THF (1 ml). La mezcla de reacción se calentó a ta y se agitó durante 3 h. La mezcla de reacción se vertió en acetato de etilo y agua y se extrajo. La capa orgánica se separó, se secó sobre MgSO_{4} y se concentró. El mesilato en bruto (670 mg, 100%) se disolvió en etanol (10 ml) y metilamina acuosa al 40% (5 ml) y se calentó a 65ºC en una atmósfera de nitrógeno durante 2 h. La mezcla de reacción se enfrió, se vertió en agua y se extrajo con acetato de etilo (100 ml). La capa orgánica se separó, se secó sobre MgSO_{4} y se concentró. El producto se purificó por SCX-2 para dar 384 mg del racemato. El racemato se separó en sus enantiómeros individuales usando HPLC quiral. Cada enantiómero se disolvió en CH_{2}Cl_{2} (2 ml) y se trató con 1 equivalente de ácido D-tartárico disuelto en un volumen mínimo de metanol caliente. La solución resultante se concentró y el sólido se secó al vacío para proporcionar la sal D-tartrato de la amina. RMNH (300 MHz, CDCl_{3}) (racemato) \delta 0,92 (t, J = 7,44 Hz, 3H), 1,49-1,75 (m, 6H), 1,81 (a, 1H), 2,40 (s, 6H), 2,57 (t, J = 6,59 Hz, 2H), 2,89 (d, J = 15,82 Hz, 1H), 3,00 (d, J = 15,82 Hz, 1H), 6,29 (d, J = 7,91 Hz, 1H), 6,92-7,08 (m, 4H), 7,16 (d, J = 7,16 Hz, 1H), 7,29 (d, J = 7,91 Hz, 2H). RMNH (300 MHz, MeOD-d4) (isómero sal D-tartrato) 8 0,93 (t, J = 7,44 Hz, 3H), 1,54-1,84 (m, 6H), 2,42 (s, 3H), 2,66 (s, 3H), 2,91-3,00 (m, 3H), 3,11 (d, J = 15,83 Hz, 1H), 4,41 (s, 2H), 6,22-6,27 (m, 1H), 6,80-7,07 (m, 4H), 7,21 -7,27 (m, 1H), 7,36 (d, J = 7,91 Hz, 2H). CLEM (procedimiento de 12 minutos) [M+H]+ = 337 a Rt 5,21 min (100%).

Ejemplo 7 3-(3-Metilamino-propil)-1-fenil-3-propil-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (13a)

Ésta se preparó a partir de (3c) (780 mg, 2,9 mmol) usando la misma secuencia de síntesis descrita en el procedimiento B (3d a 13b) para dar 233 mg del racemato. El racemato se separó en sus enantiómeros individuales usando HPLC quiral y cada enantiómero se convirtió en su sal D-tartrato como se ha descrito para (13b). RMNH (300 MHz, CDCl_{3}) (racemato) \delta 0,88 (t, J = 7,16 Hz, 3H), 1,26-1,48 (m, 2H), 1,50-1,78 (m, 7H), 2,40 (s, 3H), 2,56 (t, J = 6,59 Hz, 2H), 2,92 (d, J = 15,83 Hz, 1H), 3,01 (d, J = 15,83 Hz, 1H), 6,25-6,28 (m, 1H), 6,94-7,05 (m, 2H), 7,16-7,19 (m, 3H), 7,37-7,42 (m, 1H), 7,47-7,52 (m, 2H). RMNH (300 MHz, MeOD-d4) (isómero sal D-tartrato) \delta 0,77-0,82 (t, J = 7,06 Hz, 3H), 1,24-1,35 (m, 2H), 1,44-1,51 (m, 2H), 1,69 (s a, 3H), 2,56 (s, 3H), 2,84-2,89 (m, 3H), 3,01-3,06 (d, J = 15,83 Hz, 1H), 3,20-3,22 (c, J = 1,55 Hz, 2H), 4,30 (s, 2H), 6,11-6,14 (dd, J = 7,72, 2,26 Hz, 1H), 6,89-6,97 (m, 2H), 7,07-7,10 (m, 2H), 7,14-7,17 (m, 1H), 7,34-7,39 (t, J = 7,35 Hz, 1H), 7,43-7,48 (t, J = 7,35 Hz, 2H). CLEM (procedimiento de 12 minutos) [M+H]^{+} = 337 a Rt 5,2 min (100%).

Ejemplo 8 3-(3-Metilamino-propil)-3-propil-1-p-tolil-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (13c)

Ésta se preparó a partir de (3e) (840 mg, 2,6 mmol) usando la misma secuencia de síntesis descrita en el procedimiento B (3d a 13b) para dar 393 mg del racemato. El racemato se separó en sus enantiómeros individuales usando HPLC quiral y cada enantiómero se convirtió en su sal D-tartrato como se ha descrito para (13b). RMNH (300 MHz, CDCl_{3}) (racemato) \delta 0,88 (t, J = 7,16 Hz, 3H), 1,20-1,75 (m, 11H), 2,39 (s, 3H), 2,40 (s, 3H), 2,90 (d, J = 15,64 Hz, 1H), 2,99 (d, J = 15,64 Hz, 1H), 6,29 (d, J = 7,72 Hz, 1H), 6,93-7,07 (m, 4H), 7,14-7,16 (m, 1H), 7,25-7,31 (m, 2H). RMNH (300 MHz, MeOD-d4) (isómero sal D-tartrato) \delta 0,91 (t, J = 7,06 Hz, 3H), 1,28-1,85 (m, 8H), 2,44 (s, 3H), 2,68 (s, 3H), 2,94-2,99 (m, 3H), 3,14 (d, J = 15,82 Hz, 1H), 4,41 (s, 2H), 6,25-6,28 (m, 1H), 7,02-7,07 (m, 4H), 7,25-7,28 (m, 1H), 7,38 (d, J = 7,91 Hz, 2H). CLEM (procedimiento de 12 minutos) [M+H]+ = 351 a Rt 5,6 min
(100%).

Ejemplo 9 3-Butil-3-(3-metilamino-propil)-1-p-tolil-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (13d)

Ésta se preparó a partir de (3f) (790 mg, 2,7 mmol) usando la misma secuencia de síntesis descrita en el procedimiento B (3d a 13b) para dar 334 mg del racemato. El racemato se separó en sus enantiómeros individuales usando HPLC quiral y cada enantiómero se convirtió en su sal D-tartrato como se ha descrito para (13b). RMNH (300 MHz, CDCl_{3}) (racemato) \delta 0,87 (t, J = 6,97 Hz, 3H), 1,20-1,40 (m, 4H), 1,55-1,74 (m, 6H), 2,40 (s, 3H), 2,40 (s, 3H), 2,55 (t, J = 6,78 Hz, 3H), 2,91 (d, J = 15,63 Hz, 1H), 2,99 (d, J = 15,63 Hz, 1H), 6,28-6,31 (m, 1H), 6,93-7,00 (m, 2H), 7,02-7,06 (m, 2H), 7,14-7,16 (m, 1H), 7,29 (d, J = 8,07 Hz, 2H). RMNH (300 MHz, MeOD-d4) (isómero sal D-tartrato) \delta 0,90 (t, J = 6,97 Hz, 3H), 1,20-1,85 (m, 10H), 2,44 (s, 3H), 2,68 (s, 3H), 2,94-2,99 (m, 3H), 3,14 (d, J = 15,82 Hz, 1H), 4,42 (s, 2H), 6,25-6,28 (m, 1H), 7,00-7,07 (m, 4H), 7,25-7,28 (m, 1H), 7,38 (d, J = 7,91 Hz, 2H). CLEM (procedimiento de 12 minutos) [M+H]+ = 365 a Rt 5,9 min (100%).

Ejemplo 10 3-Isopropil-3-(3-metilamino-propil)-1-p-tolil-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (13e)

Ésta se preparó a partir de (3 g) (806 mg, 2,89 mmol) usando la misma secuencia de síntesis descrita en el procedimiento B (3d a 13b) para dar 307 mg del racemato. RMNH (300 MHz, CDCl_{3}) (racemato) \delta ppm 0,92 (dd, J = 8,95, 6,88 Hz, 6H), 1,39-1,88 (m, 5H), 2,12-2,23 (m, 1H), 2,39 (s, 3H), 2,40 (s, 3H), 2,56 (t, J = 6,78 Hz, 2H), 2,94 (d, J = 15,92 Hz, 1H), 3,00 (d, J = 15,92 Hz, 1H), 6,28 (dd, J = 7,82, 1,04 Hz, 1H), 6,92-7,06 (m, 4H), 7,16 (dd, J = 6,97, 1,13 Hz, 1H), 7,29 (d, J = 7,91 Hz, 2H). CLEM (procedimiento de 12 minutos) [M+H]^{+} = 351 a Rt 5,55 min (100%).

Ejemplo 11 6-Cloro-3-etil-3-(3-metilamino-propil)-1-p-tolil-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (13f)

Ésta se preparó a partir de (1c) usando la misma secuencia de síntesis descrita en procedimiento B para dar 205 mg del racemato. El racemato se separó en sus enantiómeros individuales usando HPLC quiral y cada enantiómero se convirtió en su sal D-tartrato como se ha descrito para (13b). RMNH (300 MHz, CDCl_{3}) (racemato) \delta ppm 0,91 (t, J = 7,44 Hz, 3H), 1,50-1,75 (m, 6H), 2,15 (a, 1H), 2,40 (s, 3H), 2,41 (s, 3H), 2,55-2,64 (m, 2H), 2,85 (d, J = 16,01 Hz, 1H), 2,97 (d, J = 16,01 Hz, 1H), 6,23 (d, J = 8,85 Hz, 1H), 6,97 (dd, J = 8,67, 2,45 Hz, 1H), 7,02 (d, J = 8,29 Hz, 2H), 7,14 (d, J = 2,26 Hz, 1H), 7,29 (d, J = 8,10 Hz, 2H). RMNH (300 MHz, MeOD-d4) (isómero, sal D-tartrato) \delta ppm 0,84 (t, J = 7,35 Hz, 3H), 1,40-1,75 (m, 6H), 2,32 (s, 3H), 2,57 (s, 3H), 2,80-2,92 (m, 3H), 3,01 (d, J = 16,20 Hz, 1H), 4,31 (s, 2H), 6,13 (d, J = 8,67 Hz, 1H), 6,92-6,98 (m, 3H), 7,19 (d, J = 2,26 Hz, 1H), 7,26 (d, J = 7,91 Hz, 2H). CLEM (procedimiento de 12 minutos) [M+H]^{+} = 371/373 a Rt 5,75 min (100%).

Ejemplo 12 6-Cloro-1-(4-cloro-fenil)-3-etil-3-(3-metilamino-propil)-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (13 g)

Ésta se preparó a partir de (1c) usando la misma secuencia de síntesis descrita en el procedimiento B para dar 222 mg del racemato, que se purificó por CLEM preparativa. RMNH (300 MHz, CDCl_{3}) (racemato) \delta ppm 0,84 (t, J = 7,44 Hz, 3H), 1,40-1,70 (m, 6H), 2,35 (a, 4H), 2,49-2,56 (m, 2H), 2,80 (d, J = 16,01 Hz, 1H), 2,90 (d, J = 16,01 Hz, 1H), 6,14 (d, J = 8,67 Hz, 1H), 6,93 (dd, J = 8,67, 2,26 Hz, 1H), 7,04 (ddd, J = 9,04, 2,83, 2,45 Hz, 2H), 7,09 (d, J = 2,26 Hz, 1H), 7,36-7,43 (m, 2H). CLEM (procedimiento de 12 minutos) [M+H]+ = 391/393 a Rt 5,67 min (92%).

Procedimiento C

Preparación de intermedios 1-(4-Metoxi-bencil)-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (14)

Un matraz sin estrechamiento en la boca de 5 litros equipado con un agitador de aire y una paleta, termómetro, burbujeador de nitrógeno y un embudo de goteo de equalización de presión se cargó con hidruro sódico (25,5 g, dispersión de aceite al 60%, 0,637 mol) y éter de petróleo 40-60 (100 ml). La mezcla se agitó brevemente y después se dejó en reposo en una atmósfera de nitrógeno. Después de decantar el líquido sobrenadante, el recipiente se cargó con dimetilformamida (2 litros). La suspensión bien agitada se enfrió a 7-8ºC usando un baño de hielo externo. Después se añadió gota a gota una solución de 3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (1a) (73,6 g, 0,5 mol) en dimetilformamida anhidra (500 ml) durante 25 min. La mezcla se agitó a 7-8ºC durante 30 min. Después se añadió cloruro de 4-metoxibencilo (102 g, 0,65 mol, 1,3 equiv.) durante 10 min. La mezcla de reacción se dejó en agitación durante 2 h. a <10ºC, después se dejó calentar hasta temperatura ambiente y se agitó durante toda la noche. La mezcla de reacción agitada se inactivó con hielo/agua (2,5 litros) y se enfrió a 15ºC usando un baño de hielo externo. El sólido blanco se aisló por filtración y se lavó con agua. Después de secar al vacío a 40ºC durante toda la noche se obtuvo el producto (113,4 g, 85%).

1-(4-Metoxi-bencil)-3-metil-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (15)

A una solución de (14) (20 g, 75 mmol) en THF anhidro (400 ml) a -78ºC en una atmósfera de nitrógeno se le añadió LiHMDS (78,6 ml, solución 1 M en hexanos, 78,6 mmol) gota a gota durante 10 min. La mezcla de reacción se dejó a -78ºC durante 30 min y después se añadió gota a gota una solución de yoduro de metilo (5,13 ml, 83 mmol) en THF (5 ml). La mezcla de reacción se calentó lentamente a ta, se inactivó con agua (50 ml) y se extrajo con acetato de etilo (400 ml). La capa orgánica se separó, se secó sobre MgSO_{4} y se concentró para dar el producto en forma de un sólido amarillo (21 g, 100%) que se usó directamente en la siguiente etapa.

3-Alil-1-(4-metoxi-bencil)-3-metil-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (16b)

A una solución de (15) (20,5 g, 73 mmol) en THF anhidro (400 ml) a -78ºC en una atmósfera de nitrógeno se le añadió gota a gota LiHMDS (80 ml, solución 1 M en hexanos, 80 mmol) durante 10 min. La mezcla de reacción se dejó a -78ºC durante 30 min y después se añadió gota a gota una solución de bromuro de alilo (7,6 ml, 87 mmol) en THF (5 ml). La mezcla de reacción se calentó lentamente a ta, se inactivó con agua (100 ml) y se extrajo con acetato de etilo (400 ml). La capa orgánica se separó, se secó sobre MgSO_{4} y se concentró para dar el producto en forma de un aceite naranja (23,9 g, 100%) que se usó directamente en la siguiente etapa.

3-(3-Hidroxi-propil)-1-(4-metoxi-bencil)-3-metil-3,4,4a,8a-tetrahidro-1H-quinolin-2-ona (17b)

A una solución de (16b) (23,9 g, 74 mmol) en THF anhidro (400 ml) a 0ºC en una atmósfera de nitrógeno se le añadió gota a gota 9-BBN (370 ml, solución 0,5 M en THF, 185 mmol, 2,5 equiv.) durante 10 min. La mezcla de reacción se calentó a ta y se dejó agitar durante toda la noche. La solución amarilla resultante se enfrió a 0ºC y después se inactivó cuidadosamente con etanol (95 ml), seguido de NaOH ac. (60 ml, solución 3 N). Finalmente, se añadió gota a gota H_{2}O_{2} ac. (60 ml, solución al 37%) manteniendo la temperatura interna de la mezcla de reacción entre 5 y 10ºC. La mezcla de reacción se calentó a ta y después se calentó a reflujo durante 90 min. La mezcla de reacción se enfrió a ta, se vertió en acetato de etilo y agua y se extrajo. La capa orgánica se separó, se secó sobre MgSO_{4} y se concentró. El producto en bruto se purificó usando cromatografía automatizada (sílice) (gradiente de 0 a 80% de acetato de etilo/ciclohexano) para proporcionar el producto en forma de un aceite transparente (21,3 g, 84%).

1-(4-Metoxi-bencil)-3-metil-3-(3-metilamino-propil)-3,4,4a,8a-tetrahidro-1H-quinolin-2-ona (18b)

A una solución de (17b) (18 g, 53 mmol) y trietilamina (11,1 ml, 79 mmol) en THF anhidro (450 ml) a 0ºC en una atmósfera de nitrógeno se le añadió gota a gota una solución de cloruro de metanosulfonilo (4,52 ml, 58 mmol) en THF (50 ml). La mezcla de reacción se calentó a ta y se agitó durante 3 h. La mezcla de reacción se vertió en acetato de etilo y agua y se extrajo. La capa orgánica se separó, se secó sobre MgSO_{4} y se concentró. El mesilato en bruto (22 g, 99%) se disolvió en etanol (500 ml) y metilamina acuosa al 40% (200 ml) y se calentó a 65ºC en una atmósfera de nitrógeno durante 2 h. La mezcla de reacción se enfrió, se concentró y después se extrajo con acetato de etilo (300 ml). La capa orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre MgSO_{4} y se concentró para dar el producto en bruto (17,8 g, 96%).

Éster terc-butílico del ácido metil-[3-(3-metil-2-oxo-1,2,3,4,4a,8a-hexahidro-quinolin-3-il)-propil]-carbámico (19b)

Una mezcla de (18b) (17,8 g, 50,5 mmol) y anisol (5,5 ml, 50,5 mmol) en ácido trifluoroacético (250 ml) se calentó a 65ºC en una atmósfera de nitrógeno durante 2 h. La mezcla de reacción se concentró al vacío y el residuo se disolvió en metanol (10 ml). La solución de metanol se aplicó a una columna SCX-2 (300 g, prelavada con metanol) y la columna se lavó con metanol (aproximadamente 1 litro) hasta que la solución se hizo incolora. El producto se eluyó con NH_{3} 2 N en metanol (500 ml) y la solución básica se concentró para proporcionar 3-metil-3-(3-metilaminopropil)-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (9 g, 77%).A una solución de esta amina (8,6 g, 37 mmol) en THF anhidro (350 ml) a 0ºC se le añadió gota a gota una solución de dicarbonato de di-terc-butilo (8,34 g, 97%, 50,5 mmol) en THF (20 ml). La mezcla de reacción se calentó a ta y se agitó durante 3 h. La mezcla de reacción se vertió en acetato de etilo (400 ml) y agua (200 ml) y se extrajo. La capa orgánica se separó, se secó sobre MgSO_{4} y se concentró para dar el producto en forma de un sólido amarillo (12,26 g, 100%). Este material se usó sin purificación adicional.

Éster terc-butílico del ácido metil-[3-(2-oxo-1,2,3,4-tetrahidro-quinolin-3-il)-propil]-carbámico (19a)

Ésta se preparó a partir de (14) usando la misma secuencia de síntesis descrita en el procedimiento C.

Éster terc-butílico del ácido [3-(6-cloro-1,2,3,4-tetrahidro-quinolin-3-il)-propil]-metil-carbámico (20a)

A una solución de (19a) (2,75 g, 8,6 mmol) en DMF anhidra (25 ml) a 0ºC se le añadió gota a gota una solución de N-clorosuccinimida (1,17 g, 8,7 mmol) en DMF anhidra (3 ml). La mezcla de reacción se calentó a ta, se agitó durante toda la noche y después se vertió en acetato de etilo (100 ml) y agua (50 ml) y se extrajo. La capa orgánica se separó, se secó sobre MgSO_{4} y se concentró para proporcionar el producto en forma de un aceite amarillo (3 g, 98%) que se usó sin purificación adicional.

Ejemplos Ejemplo 13 3-(3-Metilamino-propil)-1-p-tolil-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (21a)

Una mezcla agitada de (19a) (100 mg. 0,31 mmol), K_{2}CO_{3} (92 mg, 0,66 mmol), trans-ciclohexano-1,2-diamina (8 \mul, 0,06 mmol) y 4-bromotolueno (162 mg, 0,94 mmol) en 1,4-dioxano (0,5 ml) se calentó en una atmósfera de nitrógeno a 125ºC durante 5 min para desoxigenar la mezcla de reacción. Se añadió yoduro de cobre (I) (12 mg, 0,06 mmol) en una porción y la mezcla de reacción se calentó a reflujo durante toda la noche a 125ºC. Después de enfriar a ta, la mezcla de reacción se vertió en acetato de etilo (100 ml) y se extrajo con agua. La capa orgánica se separó, se secó sobre MgSO_{4} y se concentró. El producto en bruto se purificó usando cromatografía automatizada (sílice) (gradiente de 0 a 80% de acetato de etilo/ciclohexano) para proporcionar el producto protegido con Boc (70 mg, 54%). A una solución de este material (70 mg, 0,17 mol) en DCM (2 ml), se le añadió ácido trifluoroacético (197 \mul, 2,55 mmol, 15 equiv.). La mezcla de reacción se dejó en agitación a temperatura ambiente durante 90 min, se concentró al vacío, se vertió en acetato de etilo (50 ml) y NaHCO_{3} ac. (20 ml) y se extrajo. La capa orgánica se separó, se secó sobre MgSO_{4}, se concentró y el producto en bruto se purificó por SCX-2 para proporcionar el racemato (40 mg, 75%). El racemato se separó en sus enantiómeros individuales usando HPLC quiral. RMNH (300 MHz, CDCl_{3}) (racemato) \delta 1,49-1,77 (m, 3H), 1,86-1,96 (m, 1H), 2,34 (s a, 1H), 2,40 (s, 3H), 2,43 (s, 3H), 2,61-2,66 (t, J = 6,88 Hz, 2H), 2,68-2,78 (m, 1H), 2,83-2,90 (m, 1H), 3,09-3,17 (m, 1H), 6,36 (dd, J = 7,7 Hz, 1,0 Hz, 1H), 6,94-7,03 (m, 2H), 7,08 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,13-7,17 (m, 1H), 7,29 (d, J = 8,1 Hz, 2H); RMNH (300 MHz, MeOD-d4) (isómero, sal D-tartrato) \delta 1,64 (s a, 1H), 1,89 (s a, 3H), 2,41 (s, 3H), 2,70 (s, 3H), 2,75-2,87 (m, 1H), 2,91-3,06 (m, 3H), 3,20 (dd, J = 5,9, 15,26 Hz, 1H), 4,45 (s, 2H), 6,32-6,35 (m, 1H), 7,00-7,12 (m, 4H), 7,28-7,30 (m, 1H), 7,37 (d, J = 8,1 Hz, 2H). CLEM (procedimiento de 12 minutos) [M+H]+ = 309 a Rt 4,7 min (100%).

Ejemplo 14 6-Cloro-3-(3-metilamino-propil)-1-p-tolil-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (21n)

Ésta se preparó a partir de (20a) (132 mg, 0,29 mmol) usando los mismos procedimientos descritos para (21a) para proporcionar el racemato (86 mg). RMNH (300 MHz, CDCl_{3}) (racemato e isómero) \delta 1,50-1,57 (m, 1H), 1,62-1,90 (m, 3H), 2,34 (s, 3H), 2,41 (s, 3H), 2,63-2,82 (m, 5H), 3,00-3,07 (m, 1H), 6,22 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 6,92 (dd, J = 2,45, 8,66 Hz, 1H), 6,99 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,11 (d, J = 2,25 Hz, 1H), 7,23 (d, J = 8,1 Hz, 2H). CLEM (procedimiento de 12 minutos) [M+H]^{+} = 343/345 a Rt 5,2 min (96%).

Ejemplo 15 1-(3-Fluorofenil)-3-(3-metilamino-propil)-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (21b)

Ésta se preparó a partir de (19a) (200 mg, 0,63 mmol) usando el mismo procedimiento en dos etapas descrito para (21a) para proporcionar el racemato (83 mg). RMNH (300 MHz, CDCl_{3}) (racemato) \delta 1,60-1,70 (m, 1H), 1,92 (a, 3H), 2,64 (s a, 3H), 2,72-2,74 (m, 1H), 2,86-3,09 (m, 4H), 6,35 (dd, J = 7,72, 1,510 Hz, 1H), 6,94-7,23 (m, 6H), 7,43-7,51 (m, 1H). CLEM (procedimiento de 12 minutos) [M+H]+ = 313 a Rt 4,4 min (100%).

Ejemplo 16 1-(4-Clorofenil)-3-(3-metilamino-propil)-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (21c)

Ésta se preparó a partir de (19a) (122 mg, 0,38 mmol) usando el mismo procedimiento en dos etapas descrito para (21a) para proporcionar el producto en bruto, que se purificó por SCX-2 para dar el racemato (70 mg). RMNH (300 MHz, CDCl_{3}) (racemato) \delta 1,49-1,73 (m, 3H), 1,89 (m, 2H), 2,43 (s, 3H), 2,62 (t, J = 6,79, 7,15 Hz, 2H), 2,68-2,78 (m, 1H), 2,83-2,93 (m, 1H), 3,14 (dd, J = 15,43,5,37 Hz, 1H), 6,34 (dd, J = 7,73,1,14 Hz, 1H), 6,96-7,09 (m, 2H), 7,14-7,21 (m, 3H), 7,45-7,48 (m, 2H). CLEM (procedimiento de 12 minutos) [M+H]^{+} = 329/331 a Rt 5,1 min (90%).

Ejemplo 17 1-(3,4-Diclorofenil)-3-(3-metilamino-propil)-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (21d)

Ésta se preparó a partir de (19a) (150 mg, 0,47 mmol) usando el mismo procedimiento en dos etapas descrito para (21a) para proporcionar el producto en bruto, que se purificó por SCX-2 para dar el racemato (111 mg). RMNH (300 MHz, CDCl_{3}) (racemato) \delta 1,49-1,75 (m, 3H), 1,83 (s a, 1H), 1,85-1,97 (m, 1H), 2,43 (s, 3H), 2,63 (t, J = 13,56, 6,59 Hz, 2H), 2,68-2,77 (m, 1H), 2,83-2,94 (m, 1H), 3,13 (dd, J = 15,45, 5,28 Hz, 1H), 6,36 (dd, J = 7,73, 0,93 Hz, 1H), 6,99-7,11 (m, 3H), 7,20-7,21 (m, 1H), 7,35 (d, J = 2,26 Hz, 1H), 7,57 (d, J= 8,48 Hz, 1H).CLEM (procedimiento de 12 minutos) [M+H]+ = 363/365 a Rt 5,4 min (92%).

Ejemplo 18 1-(3-Clorofenil)-3-(3-metilamino-propil)-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (21 e)

Ésta se preparó a partir de (19a) (200 mg, 0,63 mmol) usando el mismo procedimiento en dos etapas descrito para (21a) para proporcionar el producto en bruto, que se purificó por SCX-2 para dar el racemato (138 mg). RMNH (300 MHz, CDCl_{3}) (racemato) \delta 1,50-1,77 (m, 3H), 1,89-1,96 (m, 2H), 2,44 (s, 3H), 2,64 (t, J = 6,89 Hz, 2H), 2,69-2,78 (m, 1H), 2,84-2,93 (m, 1H,), 3,10-3,17 (m, 1H), 6,33-6,36 (m, 1H), 6,97-7,10 (m, 2H), 7,11-7,15 (m, 1H), 7,21-7,24 (m, 2H), 7,37-7,47 (m, 2H). CLEM (procedimiento de 12 minutos) [M+H]^{+} = 329/331 a Rt 5,01 min (90%).

Ejemplo 19 1-(4-Fluorofenil)-3-(3-metilamino-propil)-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (21f)

Ésta se preparó a partir de (19a) (200 mg, 0,63 mmol) usando el mismo procedimiento en dos etapas descrito para (21a) para proporcionar el producto en bruto, que se purificó por SCX-2 para dar el racemato (48 mg). RMNH (300 MHz, CDCl_{3}) (racemato) \delta 1,26-1,28 (m, 1H), 1,92 (m, 2H), 2,63 (s a, 1H), 2,72 (m, 1H), 2,85-3,08 (m, 2H), 3,48-3,51 (m, 5H), 6,32-6,34 (d, J = 7,91 Hz, 1H), 7,01 -7,70 (m, 2H), 7,16-7,19 (d, J = 7,16 Hz, 5H), 9,46 (s a, 1H). CLEM (procedimiento de 12 minutos) [M+H]+ = 313 a Rt 4,5 min (100%).

Ejemplo 20 1-(4-Etilfenil)-3-(3-metilamino-propil)-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (21g)

Ésta se preparó a partir de (19a) (148 mg, 0,46 mmol) usando el mismo procedimiento en dos etapas descrito para (21a) para proporcionar el racemato (61 mg). RMNH (300 MHz, CDCl_{3}) (racemato) 8 1,25-1,30 (m, 1H), 1,52-1,67(m, 1H), 1,69-1,80 (m, 2H), 1,87-1,98 (m, 1H), 2,46 (s, 3H), 2,67-2,92 (m, 9H), 3,11-3,16 (m, 1H), 6,34-6,37 (m, 1H), 6,94-7,06 (m, 2H), 7,09-7,11 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,17-7,20 (d, J = 7,35 Hz, 1H), 7,30-7,33 (d, J = 8,28 Hz, 2H). CLEM (procedimiento de 12 minutos) [M+H]^{+} = 323 a Rt 5,4 min (98%).

Ejemplo 21 3-Metil-3-(3-metilamino-propil)-1-p-tolil-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (21h)

Ésta se preparó a partir de (19b) (806 mg, 2,89 mmol) usando los mismos procedimientos que los descritos para (21a) para proporcionar el racemato. El racemato se separó en sus enantiómeros individuales usando HPLC quiral. RMNH (300 MHz, CDCl_{3}) (racemato e isómero) \delta 1,24 (s, 3H), 1,60-1,65 (m, 4H), 2,40 (s, 3H), 2,43 (s, 3H), 2,60-2,65 (m, 2H), 2,87 (d, J = 15,73 Hz, 1H), 2,98 (d, J = 15,73 Hz, 1H), 3,46 (a, 1H), 6,30 (dd, J = 7,91, 1,13 Hz, 1H), 6,90-7,05 (m, 2H), 7,05 (d, J = 8,29 Hz, 2H), 7,10-7,20 (m, 1H), 7,29 (d, J = 7,91 Hz, 2H). CLEM (procedimiento de 12 minutos) [M+H] = 323 a Rt 5,06 min (100%).

Ejemplo 22 1-(4-Clorofenil)-3-metil-3-(3-metilamino-propil)-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (21i)

Ésta se preparó a partir de (19b) (100 mg, 0,30 mmol) usando los mismos procedimientos que los descritos para (21a) para proporcionar el racemato (97 mg). RMN 1H (300 MHz, CDCl_{3}) (racemato) \delta ppm 1,25 (s, 3H), 1,55-1,65 (m, 4H), 2,41 (s, 3H), 2,58 (m, 2H), 2,89 (d, J = 15,82 Hz, 1H), 2,98 (d, J = 15,82 Hz, 1H), 3,12 (a, 1H), 6,29 (dd, J = 7,91, 0,94 Hz, 1H), 6,95-7,10 (m, 2H), 7,14 (d, J = 8,67 Hz, 2H), 7,15 (m, 1H), 7,45 (d, J = 8,67 Hz, 2H). CLEM (procedimiento de 12 minutos) [M+H]+ = 343/345 a Rt 5,09 min (100%).

Ejemplo 23 1-(3,4-Difluorofenil)-3-metil-3-(3-metilamino-propil)-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (21j)

Ésta se preparó a partir de (19b) (100 mg, 0,30 mmol) usando el mismo procedimiento en dos etapas descrito para (21a) para proporcionar el producto en bruto, que se purificó por SCX-2 para dar el racemato (100 mg). RMNH (300 MHz, CDCl_{3}) (racemato) \delta ppm 1,25 (s, 3H), 1,55-1,65 (m, 4H), 2,41 (s, 3H), 2,50-2,60 (m, 2H), 2,89 (d, J = 15,45 Hz, 1H), 2,90 (s, 1H), 2,98 (d, J = 15,45 Hz, 1H), 6,30 (dd, J = 7,91, 1,13 Hz, 1H), 6,90-7,10 (m, 4H), 7,18 (dd, J = 7,16, 1,32 Hz, 1H), 7,22-7,35 (m, 1H). CLEM (procedimiento de 12 minutos) [M+H]^{+} = 345 a Rt 4,85 min (97%).

Ejemplo 24 3-Metil-3-(3-metilamino-propil)-1-m-tolil-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (21k)

Ésta se preparó a partir de (19b) (100 mg, 0,30 mmol) usando el mismo procedimiento en dos etapas descrito para (21a) para proporcionar el producto en bruto, que se purificó por SCX-2 para dar el racemato (90 mg). RMNH (300 MHz, CDCl_{3}) (racemato) \delta ppm 1,26 (s, 3H), 1,50-1,70 (m, 4H), 1,75 (s, 1H), 2,38 (s, 3H), 2,39 (s, 3H), 2,50-2,60 (m, 2H), 2,89 (d, J = 15,64 Hz, 1H), 2,98 (d, J = 15,64 Hz, 1H), 6,30 (dd, J = 7,82,1,04 Hz, 1H), 6,90-7,07 (m, 4H), 7,18 (dd, J = 13,66, 7,63 Hz, 2H), 7,37 (t, J = 7,63 Hz, 1H). CLEM (procedimiento de 12 minutos) [M+H]+ = 323 a Rt 5,09 min (98%).

Ejemplo 25 1-(3,5-Difluorofenil)-3-metil-3-(3-metilamino-propil)-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (21l)

Ésta se preparó a partir de (19b) (100 mg, 0,30 mmol) usando el mismo procedimiento en dos etapas descrito para (21a) para proporcionar el producto en bruto, que se purificó por SCX-2 para dar el racemato (95 mg). RMNH (300 MHz, CDCl_{3}) (racemato) \delta ppm 1,26 (s, 3H), 1,50-1,65 (m, 4H), 2,40 (s, 3H), 2,50-2,60 (m, 2H), 2,82 (a, 1H), 2,89 (d, J = 15,82 Hz, 1H), 2,97 (d, J = 15,82 Hz, 1H), 6,34 (dd, J = 8,01,1,04 Hz, 1H), 6,74-6,83 (m, 2H), 6,83-6,92 (m, 1H), 6,97-7,13 (m, 2H), 7,19 (dd, J = 7,06, 1,22 Hz, 1H). CLEM (procedimiento de 12 minutos) [M+H]^{+} = 345 a Rt 4,87 min, (97%).

Ejemplo 26 6-Cloro-3-(3-metilamino-propil)-1-fenil-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (21m)

Ésta se preparó a partir de (20a) (285 mg, 0,8 mmol) usando el mismo procedimiento en dos etapas descrito para (21a) para proporcionar el producto en bruto, que se purificó por CLEM preparativa para dar el racemato (62 mg). RMNH (300 MHz, CDCl_{3}) (racemato) \delta 1,49-1,76 (m, 3H), 1,86-1,95 (m, 1H), 2,33 (s a, 1H), 2,44 (s, 3H), 2,61 -2,95 (m, 4H), 3,09-3,16 (m, 1H), 6,24-6,27 (d, J = 8,67 Hz, 1H), 6,99 (dd, J = 8,67, 2,26 Hz, 1H), 7,17-7,19 (m, 3H), 7,39-7,44 (m, 1H), 7,47-7,52 (m, 2H). CLEM (procedimiento de 12 minutos) [M+H]+ = 329/331 a Rt 5,04 min (93%).

Ejemplo 27 6-Cloro-1-(4-clorofenil)-3-(3-metilamino-propil)-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (21o)

Ésta se preparó a partir de (20a) (160 mg, 0,45 mmol) usando el mismo procedimiento en dos etapas descrito para (21a) para proporcionar el producto en bruto, que se purificó por CLEM preparativa para dar el racemato (52 mg). RMNH (300 MHz, CDCl_{3}) (racemato) \delta 1,57-1,67 (m, 1H), 1,73-1,75 (m, 2H), 1,87-1,9 (m, 1H), 2,47 (s, 2H), 2,64 (s, 1H), 2,68-2,73 (m, 2H), 2,81-2,89 (m, 1H), 3,07-3,13 (m, 3H), 6,27 (d, J = 8,48 Hz, 1H), 7,02 (d, J = 8,48 Hz, 1H), 7,14 (d, J = 8,29 Hz, 2H), 7,19 (s, 1H), 7,47 (d, J = 8,29 Hz, 2H). CLEM (procedimiento de 12 minutos) [M+H]^{+} = 363/365 a Rt 5,4 min (72%).

Ejemplo 28 6-Cloro-3-metil-3-(3-metilamino-propil)-1-p-tolil-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (21p)

Ésta se preparó a partir de (20b) (490 mg, 1,34 mmol) usando los mismos procedimientos que los descritos para (21a) para proporcionar el racemato (470 mg). El racemato se separó en sus enantiómeros individuales usando HPLC quiral. RMNH (300 MHz, CDCl_{3}) (racemato) \delta 1,25 (s, 3H), 1,50-1,65 (m, 4H), 2,39 (s, 3H), 2,40 (s, 3H), 2,50-2,60 (m, 3H), 2,86 (d, J = 16,01 Hz, 1H), 2,94 (d, J= 16,01 Hz, 1H), 6,24 (d, J = 8,67 Hz, 1H), 6,97 (dd, J = 8,76, 2,35 Hz, 1H), 7,03 (d, J = 8,10 Hz, 2H), 7,14 (d, J = 2,26 Hz, 1H), 7,29 (d, J = 7,91 Hz, 2H); RMNH (300 MHz, MeOD-d4) (isómero sal hemi-D-tartrato) \delta 1,15 (s, 3H), 1,50-1,75 (m, 4H), 2,32 (s, 3H), 2,51 (s, 3H), 2,78 (a, 2H), 2,84 (d, J = 16,20 Hz, 1H), 2,98 (m, 1H), 3,15-3,25 (m, 2H), 4,22 (s, 1H), 6,14 (d, J = 8,85 Hz, 1H), 6,90-6,70 (m, 3H), 7,19 (d, J = 2,26 Hz, 1H), 7,25 (d, J = 7,91 Hz, 2H). CLEM (procedimiento de 12 minutos) [M+H]+ = 357/359 a Rt 5,43 min (100%).

Ejemplo 29 6-Cloro-1-(4-clorofenil)-3-metil-3-(3-metilamino-propil)-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (21q)

Ésta se preparó a partir de (20b) (490 mg, 1,34 mmol) usando los mismos procedimientos que los descritos para (21a) para proporcionar el racemato (425 mg). RMNH (300 MHz, CDCl_{3}) (racemato) \delta ppm 1,25 (s, 3H), 1,50-1,65 (m, 4H), 2,39 (s, 3H), 2,40 (a, 1H), 2,50-2,60 (m, 2H), 2,87 (d, J = 16,20 Hz, 1H), 2,95 (d, J = 16,20 Hz, 1H), 6,23 (d, J = 8,85 Hz, 1H), 7,00 (dd, J = 8,57, 2,35 Hz, 1H), 7,05-7,20 (m, 3H), 7,40-7,50 (m, 2H). CLEM (procedimiento de 12 minutos) [M+H]+ = 377/379 a Rt 5,26 min (94%).

Ejemplo 30 3-Metil-3-(3-metilamino-propil)-1-tiofen-2-il-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (22a)

Ésta se preparó a partir de (19b) (200 mg, 0,60 mmol) usando el mismo procedimiento en dos etapas descrito para (21a) para proporcionar el producto en bruto, que se purificó por SCX-2 para dar el racemato (125 mg). RMNH (300 MHz, CDCl_{3}) (racemato) \delta ppm 1,25 (s, 3H), 1,50-1,65 (m, 4H), 2,39 (s, 3H), 2,50-2,60 (a, 2H), 2,88 (d, J = 16,20 Hz, 1H), 2,97 (d, J = 16,20 Hz, 1H), 3,17 (a, 1H), 6,58 (dd, J = 8,01, 0,85 Hz, 1H), 6,89 (dd, J = 3,58, 1,32 Hz, 1H), 6,95-7,15 (m, 3H), 7,16 (d, J = 7,16 Hz, 1H), 7,32 (dd, J = 5,65, 1,32 Hz, 1H). CLEM (procedimiento de 12 minutos) [M+H]+= 315 a Rt 4,35 min (98%).

Ejemplo 31 3-Metil-3-(3-metilamino-propil)-1-tiofen-3-il-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (22b)

Ésta se preparó a partir de (19b) (200 mg, 0,60 mmol) usando el mismo procedimiento en dos etapas descrito para (21a) para proporcionar el producto en bruto, que se purificó por SCX-2-2 para dar el racemato (128 mg). RMNH (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 1,24 (s, 3H), 1,50-1,65 (m, 4H), 2,40 (s, 3H), 2,50-2,60 (m, 2H), 2,87 (d, J = 15,82 Hz, 1H), 2,96 (d, J = 15,82 Hz, 1H), 3,07 (a, 1H), 6,45 (dd, J= 8,10, 0,94 Hz, 1H), 6,92 (dd, J = 5,09, 1,32 Hz, 1H), 6,98 (td, J = 7,35, 1,13 Hz, 1H), 7,07 (td, J = 7,77, 1,60 Hz, 1H), 7,16 (d, J = 7,35 Hz, 1H), 7,22 (dd, J = 3,20, 1,32 Hz, 1H), 7,41 (dd, J = 5,09, 3,20 Hz, 1H). CLEM (procedimiento de 12 minutos) [M+H]+ = 315 a Rt 4,29 min (100%).

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Procedimiento D

Preparación de intermedios Éster terc-butílico del ácido {3-[1-(4-metoxi-bencil)-3-metil-2-oxo-6-fenil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-3-il]-propil}-metil-carbámico (23)

Etapa (i)

A una solución de (20c) (2,7 g. 6,57 mmol) en DMF (40 ml) se le añadió en porciones hidruro sódico (340 mg, dispersión al 60% en aceite mineral, 8,55 mmol, 1,3 equiv.) a 0ºC. La mezcla de reacción se dejó durante 30 min a esta temperatura y después se añadió gota a gota cloruro de 4-metoxibencilo (1,16 ml, 8,55 mmol, 1,3 equiv.) en DMF (1 ml) durante 10 min. La mezcla de reacción se calentó a ta lentamente y después de 1 h se vertió en acetato de etilo (200 ml) y se extrajo con agua (3 x 50 ml). La capa orgánica se separó, se secó sobre MgSO_{4} y se concentró al vacío. El producto en bruto se purificó usando cromatografía automatizada (sílice) (gradiente de 0 a 80% de acetato de etilo/ciclohexano) para proporcionar el precursor 6-bromo protegido con 4-metoxibencilo (2,2 g, 63%).

Etapa (ii)

El producto de la Etapa (i) (100 mg, 0,23 mmol), ácido fenilborónico (85 mg, 0,70 mmol, 3 equiv.), K_{2}CO_{3} (138 mg, 1 mmol, 4,3 equiv.) y Pd(PPh_{3})_{4} (11 mg, 0,009 mmol, 0,04 equiv.) se suspendieron en etanol (1 ml) y agua (0,6 ml). La mezcla de reacción se calentó a 80ºC durante toda la noche, se enfrió a ta y se filtró a través de celite. El filtrado se vertió en acetato de etilo (100 ml) y agua (50 ml) y se extrajo. La capa orgánica se separó, se secó sobre MgSO_{4} y se concentró para proporcionar el producto (23) (120 mg, 98%) que se usó sin purificación adicional.

Éster terc-butílico del ácido metil-[3-(3-metil-2-oxo-6-fenil-1,2,3,4-tetrahidro-quinolin-3-il)-propil]-carbámico

Etapas (iii) y (iv)

Una mezcla de (23) (120 mg, 0,23 mmol) y anisol (25 \mul, 0,23 mmol) en ácido trifluoroacético (2,3 ml) se calentó a 65ºC en una atmósfera de nitrógeno durante 4 h. La mezcla de reacción se concentró al vacío y el residuo se disolvió en metanol (2 ml). La solución de metanol se aplicó a una columna SCX-2 (5 g) y la columna se lavó con metanol (50 ml). El producto se eluyó con Et_{3}N 2 N en metanol (50 ml) y la solución básica se concentró para proporcionar 3-Metil-3-(3-metilamino-propil)-6-fenil-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (72 mg, 100%). A una solución de esta amina (72 mg, 0,23 mmol) en THF anhidro (2 ml) a 0ºC se le añadió dicarbonato de di-terc-butilo (53 mg, 97%, 0,24 mmol) en una porción. La mezcla de reacción se calentó a ta y se agitó durante 3 h. La mezcla de reacción se vertió en acetato de etilo (25 ml) y agua (10 ml) y se extrajo. La capa orgánica se separó, se secó sobre MgSO_{4} y se concentró para dar el precursor protegido con Boc (95 mg, 100%). Este material se usó sin purificación adicional.

Ejemplos Ejemplo 32 3-Metil-3-(3-metilamino-propil)-6-fenil-1-p-tolil-3,4-dihidro-1H-quinolin-2-ona (24)

Ésta se preparó a partir del precursor protegido con Boc anterior (95 mg, 0,23 mmol) usando el mismo procedimiento en dos etapas descrito para el Procedimiento C (19a a 21a) para proporcionar el producto en bruto, que se purificó por SCX-2 para dar el racemato (53 mg). RMNH (300 MHz, CDCl_{3}) (racemato) \delta 1,29 (s, 3H), 1,50-1,70 (m, 4H), 2,42 (s, 6H), 2,55-2,65 (m, 2H), 2,94 (d, J = 15,64 Hz, 1H), 3,04 (d, J = 15,64 Hz, 1H), 3,18 (a, 1H), 6,38 (d, J = 8,29 Hz, 1H), 7,09 (d, J = 8,10 Hz, 2H), 7,29 (m, 4H), 7,41 (m, 3H), 7,54 (m, 2H). CLEM (procedimiento de 12 minutos) [M+H]+ = 399 a Rt 6,06 min (100%).

El perfil farmacológico de los compuestos de la presente invención puede demostrarse de la siguiente manera.

Generación de líneas celulares estables que expresan los transportadores de dopamina, norepinefrina y serotonina humanos

Se usan técnicas de clonación molecular convencionales para generar líneas celulares estables que expresen los transportadores de dopamina, norepinefrina y serotonina humanos. Se usa la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) a fin de aislar y amplificar cada uno de los tres ADNc de longitud completa a partir de una biblioteca de ADNc apropiada. Se diseñan cebadores para PCR usando los siguientes datos de secuencias publicados:

Transportador de dopamina humano: GenBank M95167. Bibliografía: Vandenbergh DJ. Persico AM y Uhl GR. A. human dopamine transporter cDNA predicts reduced glycosylation, displays a novel repetitive element and provides racially-dimorphic TaqI RFLPs. Molecular Brain Research (1992) volumen 15, páginas 161-166.

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Transportador de norepinefrina humano: GenBank M65105. Bibliografía: Pacholczyk T, Blakely, RD y Amara SG. Expression cloning of a cocaine- and antidepressant-sensitive human noradrenaline transporter. Nature (1991) volumen 350, páginas 350-354.

Transportador de serotonina humano: GenBank L05568. Bibliografía: Ramamoorthy S, Bauman AL, Moore KR, Han H, Yang-Feng T, Chang AS, Ganapathy V y Blakely RD. Antidepressant- and cocaine-sensitive human serotonin transporter: Molecular cloning, expression, and chromosomal localization. Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA (1993) volumen 90, páginas 2542-2546.

Los productos de PCR se clonan en un vector de expresión de mamíferos (por ejemplo, pcDNA3.1 (Invitrogen)) usando técnicas de ligación convencionales. Las construcciones se usan después para transfectar de manera estable células HEK293 usando un reactivo de lipofección disponible en el mercado (Lipofectamine^{TM} - Invitrogen), y siguiendo el protocolo del fabricante.

Ensayo de Unión a Norepinefrina

Se usa la capacidad de los compuestos para competir con [^{3}H]-nisoxetina por sus sitios de unión en membranas de norepinefrina humana clonada como una medida de su capacidad para bloquear la captación de norepinefrina a través de su transportador específico.

Preparación de Membrana

Se homogenizan pastas celulares procedentes de la producción a gran escala de células HEK-293, que expresan transportadores de noradrenalina humanos clonados, en 4 volúmenes de Tris.HCl 50 mM que contiene NaCl 300 mM y KCl 5 mM, a pH 7,4. El homogeneizado se centrifuga dos veces (40.000 g, 10 min, 4ºC), resuspendiendo el sedimento en 4 volúmenes de tampón Tris.HCl después de la primera centrifugación y en 8 volúmenes después de la segunda centrifugación. Se centrifuga el homogeneizado en suspensión (100 g, 10 min, 4ºC), se conserva el sobrenadante y se vuelve a centrifugar (40.000 g, 20 minutos, 4ºC). El sedimento se resuspende en tampón Tris.HCl que contiene los reactivos anteriores junto con sacarosa a 10% p/v y fluoruro de fenilmetilsulfonilo 0,1 mM (PMSF). La preparación de membrana se almacena en alícuotas (1 ml) a -80ºC hasta que se necesite. La concentración de proteína de la preparación de membrana se determina usando un kit de reactivo de ensayo de proteína de ácido bicinconínico (BCA) (disponible en Pierce).

Ensayo de Unión a [^{3}H]-nisoxetina

Se prepara cada pocillo de una placa de microtitulación de 96 pocillos para que contenga lo siguiente:

50 \mul: Clorhidrato de [N-metil-^{3}H]-nisoxetina 2 nM (70-87 Ci/mmol, de NEN Life Science Products)

75 \mul: Tampón de ensayo (Tris.HCl 50 mM a pH 7,4, que contiene NaCl 300 mM y KCl 5 mM)

25 \mul: Compuesto de ensayo, tampón de ensayo (unión total) o desipramina HCl 10 \muM (unión no específica)

50 \mul: Perlas SPA (Amersham Biosciences RPNQ0001) de poli(viniltolueno) revestidas con aglutinina de germen de trigo (WGA PVT) (10 mg/ml)

50 \mul: Membrana (0,2 mg de proteína por ml)

Las placas de microtitulación se incuban a temperatura ambiente durante 10 horas antes de leerlas en un contador de centelleo Trilux. Los resultados se analizan usando un programa automático de ajuste de curvas (Multicalc, Packard, Milton Keynes, UK), para proporcionar valores de Ki para cada uno de los compuestos de ensayo.

Ensayo de Unión a Serotonina

Se usa la capacidad de un compuesto de ensayo para competir con [^{3}H]-citalopram por sus sitios de unión en membranas de serotonina humana clonada como una medida de su capacidad para bloquear la captación de serotonina a través de su transportador específico (Ramamoorthy, S., Giovanetti, E., Qian, Y., Blakely, R., (1998), J. Biol. Chem. 273, 2458).

Preparación de Membrana

La preparación de membrana es esencialmente similar a la de la membrana que contiene el transportador de norepinefrina descrito anteriormente. La preparación de membrana se almacena en alícuotas (1 ml) a -70ºC hasta que se necesite. La concentración de proteína de la preparación de membrana se determina usando un kit de reactivo de ensayo de proteína BCA.

Ensayo de Unión a [^{3}H]-Citalopram

50 \mul: [^{3}H]-citalopram 2 nM (60-86 Ci/mmol, Amersham Biosciences)

75 \mul: Tampón de ensayo (Tris.HCl 50 mM a pH 7,4, que contiene NaCl 150 mM y KCl 5 mM)

25 \mul: Compuesto diluido, tampón de ensayo (unión total) o fluoxetina 100 \muM (unión no específica)

50 \mul: Perlas SPA de WGA PVT (40 mg/ml)

50 \mul: Preparación de membrana (0,4 mg de proteína por ml)

Las placas de microtitulación se incuban a temperatura ambiente durante 10 horas antes de leerlas en un contador de centelleo Trilux. Los resultados se analizan usando un programa automático de ajuste de curvas (Multicalc, Packard, Milton Keynes, UK) para proporcionar valores de Ki (nM) para cada uno de los compuestos de ensayo.

Ensayo de Unión a Dopamina

Se usa la capacidad para competir con [^{3}H]-WIN35,428 por sus sitios de unión en membranas celulares humanas que contienen el transportador de dopamina humano clonado, como una medida de su capacidad para bloquear la captación de dopamina a través de su transportador específico (Ramamoorthy y col., 1998 supra).

Preparación de Membrana

Es esencialmente la misma que para las membranas que contienen el transportador de serotonina humano clonado como se ha descrito anteriormente.

Ensayo de unión a [^{3}H]-WIN35, 428

50 \mul: [^{3}H]-WIN35,428428 4 nM (84-87 Ci/mmol, de NEN Life Science Products)

25 \mul: Compuesto diluido, tampón de ensayo (unión total) o nomifensina 100 \muM (unión no específica)

50 \mul: Perlas SPA de WGA PVT (10 mg/ml)

50 \mul: Preparación de membrana (0,2 mg de proteína por ml)

Las placas de microtitulación se incuban a temperatura ambiente durante 120 minutos antes de leerlas en un contador de centelleo Trilux. Los resultados se analizan usando un programa automático de ajuste de curvas (Multicalc, Packard, Milton Keynes, UK) para proporcionar valores de Ki para cada uno de los compuestos de ensayo.

Estabilidad en Ácido

Se determinó la estabilidad en ácido de un compuesto según la presente invención como una solución en tampón a 6 diferentes valores de pH (HCl 0,1N, pH 2, pH 4, pH 6, pH 7 y pH 8) a 40ºC durante un transcurso de tiempo de 72 horas. Se tomaron muestras al comienzo del estudio y después de 3, 6 y 24 horas, y se analizaron por electroforesis capilar. La muestra original usada en este estudio contenía 0,8% del epímero no deseado como patrón interno. Las muestras tomadas a los diferentes puntos de tiempo durante el estudio no mostraron ningún cambio significativo en el porcentaje del epímero no deseado. Esto confirma que el compuesto es químicamente y configuracionalmente estable en condiciones ácidas.

Ensayos CYP2D6

El citocromo P450 2D6 (CYP2D6) es una enzima de mamíferos que está comúnmente asociada con el metabolismo de aproximadamente el 30% de los compuestos farmacéuticos. Además, esta enzima presenta polimorfismo genético, dando lugar a la presencia de metabolizantes tanto normales como deficientes en la población. Se desea una baja implicación de CYP2D6 en el metabolismo de compuestos (es decir, siendo el compuesto un mal sustrato de CYP2D6) a fin de reducir cualquier variabilidad de un sujeto a otro en la farmacocinética del compuesto. Además, son deseables compuestos con un bajo potencial inhibidor de CYP2D6, a fin de evitar interacciones fármaco-fármaco entre fármacos co-administrados que sean sustratos de CYP2D6. Pueden analizarse compuestos como sustratos y como inhibidores de esta enzima por medio de los siguientes ensayos.

Ensayo de sustrato de CYP2D6 Principio

Este ensayo determina el grado de implicación de la enzima CYP2D6 en el metabolismo oxidativo total de un compuesto en microsomas. Los compuestos preferidos de la presente invención presentan menos de 75% de metabolismo total a través de la ruta de CYP2D6.

Para este ensayo in vitro, se determina el grado de metabolismo oxidativo en microsomas del hígado humano (HLM) después de una incubación de 30 minutos en ausencia y presencia de quinidina, un inhibidor químico específico de CYP2D6. La diferencia en el grado de metabolismo en ausencia y presencia del inhibidor indica la implicación de CYP2D6 en el metabolismo del compuesto.

Materiales y Procedimientos

Los microsomas de hígado humano (mezcla de 20 donantes diferentes, de ambos sexos) se adquieren en Human Biologics (Scottsdale, AZ, EE.UU.). La quinidina y la \beta-NADPH (sal tetrasódica de \beta-Nicotinamida Adenina Dinucleótido Fosfato, forma reducida) se adquieren en Sigma (St. Louis, MO, EEUU). Todos los demás reactivos y disolventes son de calidad analítica. Se prepara una solución madre de la nueva entidad química (NCE) en una mezcla de acetonitrilo/agua para alcanzar una concentración final de acetonitrilo en la incubación por debajo del 0,5%.

La mezcla de incubación microsomal (volumen total de 0,1 ml) contiene la NCE (4 \muM), \beta-NADPH (1 mM), proteínas microsomales (0,5 mg/ml), y quinidina (0 ó 2 \muM) en tampón fosfato sódico 100 mM a pH 7,4. La mezcla se incuba durante 30 minutos a 37ºC en un baño de agua en agitación. La reacción se detiene por la adición de acetonitrilo (75 \mul). Las muestras se agitan vorticialmente y las proteínas desnaturalizadas se eliminan por centrifugación. Se analiza la cantidad de NCE en el sobrenadante por cromatografía liquida/espectrometría de masas (CL/EM) después de añadir un patrón interno. Se toma también una muestra al comienzo de la incubación (t=0), y se analiza de manera similar.

Se realiza el análisis de la NCE por cromatografía liquida/espectrometría de masas. Se inyectan diez \mul de muestras diluidas (dilución de 20 veces en la fase móvil) en una columna Spherisorb CN, 5 \muM y 2,1 mm x 100 mm (Waters corp. Milford, MA, EEUU). Se bombea la fase móvil, constituida por una mezcla de Disolvente A/Disolvente B, 30/70 (v/v) (Alliance 2795, Waters corp. Milford, MA, EEUU), a través de la columna a un caudal de 0,2 ml/minuto. El Disolvente A y el Disolvente B son una mezcla de formiato de amonio 5 x 10^{-3} M a pH 4,5/metanol en las proporciones 95/5 (v/v) y 10/90 (v/v), para el Disolvente A y el Disolvente B, respectivamente. La NCE y el patrón interno se cuantifican por monitorización de sus iones moleculares usando un espectrómetro de masas ZMD o ZQ (Waters-Micromass corp, Manchester, UK) que funciona en una ionización de electronebulización positiva.

El grado de implicación de CYP2D6 (% de implicación de CYP2D6) se calcula comparando el grado de metabolismo en ausencia y en presencia de quinidina en la incubación.

El grado de metabolismo sin inhibidor (%) se calcula como sigue:

100

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El grado de metabolismo con inhibidor (%) se calcula como sigue:

101

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en la que la respuesta de NCE es el área de NCE dividida por el área del patrón interno en el cromatograma del análisis CL/EM, y el tiempo 0 y el tiempo 30 se corresponden con los minutos 0 y 30 del tiempo de incubación.

El porcentaje de implicación de CYP2D6 se calcula como sigue:

102

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Ensayo de inhibidor de CYP2D6 Principio

El ensayo de inhibidor de CYP2D6 evalúa el potencial de un compuesto para inhibir CYP2D6. Esto se realiza por medición de la inhibición de la actividad de la bufuralol 1'-hidroxilasa por el compuesto en comparación con un control. La 1'-hidroxilación de bufuralol es una reacción metabólica específica de CYP2D6. Los compuestos preferidos de la presente invención presentan una CI_{50} mayor que 6 \muM para la actividad de CYP2D6, siendo la CI_{50} la concentración del compuesto que proporciona el 50% de inhibición de la actividad de CYP2D6.

Material y Procedimientos

Los microsomas de hígado humano (mezcla de 20 donantes diferentes, de ambos sexos) se adquieren en Human Biologics (Scottsdale, AZ). El \beta-NADPH se adquiere en Sigma (St. Louis, MO). El bufuralol se adquiere en Ultrafine (Manchester, UK). Todos los demás reactivos y disolventes son de calidad analítica.

La mezcla de incubación microsomal (volumen total de 0,1 ml) contiene bufuralol 10 \muM, \beta-NADPH (2 mM), proteínas microsomales (0,5 mg/ml), y la nueva entidad química (NCE) (0, 5, y 25 \muM) en tampón fosfato sódico 100 mM a pH 7,4. La mezcla se incuba en un baño de agua en agitación a 37ºC durante 5 minutos. La reacción se detiene por adición de metanol (75 \mul). Las muestras se agitan vorticialmente y las proteínas desnaturalizadas se eliminan por centrifugación. Se analiza el sobrenadante por cromatografía líquida conectada a un detector de fluorescencia. Se monitoriza la formación de 1'-hidroxibufuralol en muestras de control (NCE 0 \muM) y en las muestras incubadas en presencia de la NCE. La solución madre de NCE se prepara en una mezcla de acetonitrilo/agua para alcanzar una concentración final de acetonitrilo del 1,0% en la incubación a continuación.

La determinación de hidroxibufuralol en las muestras se realiza por cromatografía líquida con detección fluorimétrica como se describe a continuación. Se inyectan muestras de veinticinco \mul en una columna Chromolith Performance RP-18e (100 mm x 4,6 mm) (Merck KGAa, Darmstadt, Alemania). La fase móvil, que consiste en una mezcla de disolvente A y disolvente B cuyas proporciones cambiaron de acuerdo con el siguiente gradiente lineal, se bombea a través de la columna a un caudal de 1 ml/min:

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El Disolvente A y Disolvente B consisten en una mezcla de tampón dihidrogenofosfato potásico 0,02 M a pH 3/ metanol en la proporción 90/10 (v/v) para el disolvente A y 10/90 (v/v) para el disolvente B. El tiempo de ejecución es de 7,5 minutos. La formación de 1'-hidroxibufuralol se controla por detección fluorimétrica con extinción a \lambda 252 nm y emisión a \lambda 302 nm.

La CI_{50} del NCE para CYP2D6 se calcula por la medida del porcentaje de inhibición de la formación del 1'-hidroxibufuralol en presencia del NCE comparado con muestras de control (no NCE) a una concentración conocida del NCE.

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El porcentaje de inhibición de la formación del 1'-hidroxibufuralol se calcula de la siguiente manera:

103

La CI_{50} se calcula a partir del porcentaje de inhibición de la formación del 1'-hidroxibufuralol de la siguiente manera (suponiendo inhibición competitiva):

104

La estimación de CI_{50} se supone válida si la inhibición está comprendida entre el 20% y el 80% (Moody GC, Griffin SJ, Mather AN, McGinnity DF, Riley RJ. 1999. Fully automated analysis of activities catalyzed by the major human liver cytochrome P450 (CYP) enzymes: assessment de human CYP inhibition potential. Xenobiotica, 29(1): 53-75).

Claims

1. Un compuesto de fórmula (I)

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en la que

-X- es -C(R^{4}R^{5})-, -O- o -S-;

n es 2 ó 3;

R^{1} es H o alquilo C_{1}-C_{4};

R^{3} es H, halo, alquilo C_{1}-C_{4}, O(alquilo C_{1}-C_{4}), nitrilo, fenilo o fenilo sustituido con 1 ó 2 sustituyentes seleccionados entre alquilo C_{1}-C_{4}, O(alquilo C_{1}-C_{4}), S(alquilo C_{1}-C_{4}), halo, y fenilo opcionalmente sustituido con alquilo C_{1}-C_{4}, O(alquilo C_{1}-C_{4}), S(alquilo C_{1}-C_{4}), o halo;

Ar- se selecciona entre el grupo constituido por

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15

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en las que

R^{2a} es H, halo, metilo o etilo;

R^{2b} es H, halo o metilo;

R^{2c} es H, halo, metilo, trifluorometilo, nitrilo o metoxi;

R^{2d} es H, halo, metilo o etilo;

R^{2c} es H, halo, metilo, trifluorometilo, nitrilo o metoxi;

R^{2f} es H, o fluoro;

-Y- es -O-, -S- o -N(R^{6})-; y

R^{6} es H o metilo;

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

2. Un compuesto según la reivindicación 1, representado por la fórmula (Ia)

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en la que -X-, n, R^{1}, R^{3} y Ar tienen los valores como se han definido para la fórmula (I) en la reivindicación 1.

3. Un compuesto según la reivindicación 1 ó 2, en el que -X- es -C(R^{4}R^{5})-.

4. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que Ar es (i).

5. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que Ar es (ii) e -Y- es -S-.

6. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, representado por la fórmula (II)

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en la que n, R^{1}, R^{2a} y R^{2b} tienen los valores como se han definido para la fórmula (I) en la reivindicación 1 y R^{3} es H, halo, fenilo o fenilo sustituido con 1 ó 2 sustituyentes seleccionados entre alquilo C_{1}-C_{4}, O(alquilo C_{1}-C_{4}), S(alquilo C_{1}-C_{4}), halo, y fenilo opcionalmente sustituido con alquilo C_{1}-C_{4}, O(alquilo C_{1}-C_{4}), S(alquilo C_{1}-C_{4}), o halo.

7. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que R^{3} es H o halo.

8. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, junto con un diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable.

9. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso en terapia.

10. Uso de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la preparación de un medicamento para tratar un trastorno seleccionado entre el grupo constituido por un trastorno por déficit de atención (ADD) debido a afecciones médicas generales, trastorno de hiperactividad con déficit de atención (ADHD), trastorno de conducta, depresión, trastorno desafiante oposicional, y trastornos cognitivos incluyendo deficiencia cognitiva moderada (MCI), demencia de tipo Alzheimer (DAT), demencia vascular y deficiencia cognitiva asociada con esquizofrenia (CIAS).