ES2291514T3 - Descontaminacion de superficies contaminadas con una sustancia infectada por priones con agentes oxidantes gaseosos. - Google Patents
Descontaminacion de superficies contaminadas con una sustancia infectada por priones con agentes oxidantes gaseosos. Download PDFInfo
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Abstract
Un procedimiento de desactivación de priones, caracterizado por: pretratar superficies que portan material infectado con priones con un limpiador que ataca a los priones; y tratar las superficies con un agente oxidante en forma gaseosa.
Description
Descontaminación de superficies contaminadas con
una sustancia infectada por priones con agentes oxidantes
gaseosos.
La presente invención se refiere al campo de la
descontaminación biológica. La invención encuentra aplicación
particular en conexión con la eliminación y/o destrucción de
materiales biológicos nocivos, tales como priones (agentes
proteínicos infecciosos), de instrumentos médicos, dentales y
farmacéuticos y se describirá con particular referencia a los
mismos. Se apreciará no obstante, que el procedimiento y sistema de
la presente invención se puede utilizar en la descontaminación
biológica de una amplia gama de equipamiento, instrumentos y otras
superficies contaminadas con material infectado por priones, tales
como instalaciones de preparación farmacéuticas, instalaciones de
procesamiento de alimentos, instalaciones de investigación con
animales de laboratorio incluyendo suelos, superficies de trabajo,
equipamiento, jaulas, tanques de fermentación, líneas de fluido y
similares.
El término prión se usa para describir agentes
proteínicos infecciosos que provocan enfermedades cerebrales
relativamente similares en seres humanos y/o animales, que son
invariablemente letales. Estas enfermedades se denominan
generalmente encefalopatías esponjiformes transmisibles (TSE, por
sus siglas en inglés). Las TSE incluyen la enfermedad de
Creutzfeld-Jakob (CJD) y la CJD variante (vCJD) en
seres humanos, encefalopatía esponjiforme bovina (BSE) en ganado
bovino, también llamada "enfermedad de las vacas locas",
encefalopatía esponjiforme ovina en ovejas y enfermedad consuntiva
en ciervos canadienses. Todas estas enfermedades atacan los órganos
neurológicos del animal o animales que son susceptibles a la
enfermedad en particular. Se caracterizan por unos tiempos de
incubación inicialmente largos seguidos de un corto periodo de
síntomas neurológicos, incluyendo demencia y pérdida de
coordinación, y finalmente la muerte.
Se piensa que el agente infeccioso responsable
de estas enfermedades es una proteína simple, sin ácidos nucleicos
asociados. Se ha propuesto que el mecanismo patogénico para tales
enfermedades causadas por priones implica una proteína normal
inicialmente codificada por el hospedador. La proteína sufre un
cambio conformacional hasta una forma anómala (prión) que tiene la
capacidad de autopropagarse. La causa exacta de este cambio se
desconoce actualmente. La forma anómala de la proteína no se degrada
de forma eficaz en el cuerpo y su acumulación en ciertos tejidos
(en particular en el tejido nervioso) finalmente provoca un daño
tisular, tal como la muerte celular. Una vez que se ha producido un
daño significativo en el tejido nervioso se observan los síntomas
clínicos.
Las enfermedades causadas por priones se pueden
clasificar por lo tanto como enfermedades de agregación de
proteínas, que también incluyen otras enfermedades letales, tales
como la enfermedad de Alzheimer y la amiloidosis. En el caso de la
CJD, la enfermedad causada por priones más común en seres humanos
(apareciendo en aproximadamente 1:1.000.000 de la población), se
cree que aproximadamente el 85% de los casos se originan de forma
esporádicamente, se piensa que el 10% se hereda y aproximadamente
se originan de forma iatrogénica.
A pesar de que no se consideran altamente
contagiosas, las enfermedades causadas por priones se pueden
transmitir mediante ciertos tejidos de alto riesgo, incluyendo el
cerebro, la espina dorsal, los líquidos cefalorraquídeos y el ojo.
Después de una intervención quirúrgica en un paciente infectado por
priones, puede permanecer un residuo que contenga priones sobre los
instrumentos quirúrgicos, particularmente instrumentos
neuroquirúrgicos y oftalmológicos. Durante el largo periodo de
incubación, es extremadamente difícil determinar si un candidato a
la cirugía es un portador de priones.
En la técnica se reconocen diferentes niveles de
descontaminación microbiana. Por ejemplo, el saneamiento denota
liberar de suciedad o gérmenes limpiando. Desinfectar requiere
limpiar para destruir microorganismos nocivos. La esterilización, el
nivel más alto de control de la contaminación biológica, denota la
destrucción de todos los microorganismos vivos.
Se sabe que ciertos materiales biológicos que no
viven o se reproducen en el sentido convencional, tales como los
priones, son capaces sin embargo de replicarse y/o transformarse en
entidades nocivas. En el presente documento se usa el término
"desactivación" para englobar la destrucción de tales
materiales biológicos nocivos, tales como priones, y/o su capacidad
para replicarse o sufrir cambios conformacionales hasta especies
nocivas.
La esterilización en fase vapor es una técnica
conocida para descontaminar o esterilizar las superficies exteriores
de instrumentos médicos reutilizables y se ha adaptado a la
esterilización intersticial mediante la aplicación selectiva de
presiones por debajo de la atmosférica. Durante la esterilización en
fase vapor, los instrumentos médicos se disponen en un espacio
cerrado o cámara en la que tiene lugar la esterilización. Los
objetos que se van a esterilizar se someten a un enfoque "de alto
vacío" o a un enfoque de "flujo continuo". Se vaporiza un
esterilizante líquido en un vaporizador calentado. Una vez
vaporizado, se usa un alto vacío para arrastrar el vapor de
esterilizante a la cámara evacuada y sellada. En el enfoque de flujo
continuo, se mezcla el esterilizante vaporizado con un flujo de gas
portador que suministra el vapor esterilizante a, a través de y
fuera de la cámara. La cámara puede estar a una presión ligeramente
negativa o positiva.
\newpage
Por ejemplo, Edwards y col., patente de EE.UU.
nº 5.779.973 describe la esterilización con vapor de peróxido de
hidrógeno de bolsas IV envueltas superficialmente con plástico. En
Childers, patente de EE.UU. nº 5.173.258 se describe un sistema
abierto de flujo continuo.
Técnica anterior adicional se describe en:
J.C. DARBORD: "Inactivation of prions in daily
medical practice" BIOMEDICINE & PHARMACOTHERAPY, vol. 53,
1999, páginas 34-38.
W.A. RUTALA Y COL.:
"Creutzfeld-Jakob Disease: Recommendations for
Disinfection and Sterilization" CLINICAL INFECTIOUS DISEASES,
vol. 32, nº 9, mayo de 2001 (2001-05), páginas
1348-1356.
Ambas citas se refieren a la inactivación de
priones de dispositivos médicos. La cita mencionada en primer lugar
describe un procedimiento de desactivación usando solución de
hidróxido de sodio 1 N, tratando en autoclave a 134º a 138ºC y
enjuagando en lejía de cloro (véanse las págs. 36 a 37). La segunda
describe varios procedimientos de descontaminación de dispositivos
médicos.
Los priones no obstante son notablemente muy
resistentes y demuestran resistencia a los procedimientos rutinarios
de descontaminación y esterilización. A diferencia de los
microorganismos, los priones no tienen ADN o ARN que destruir o
romper. Los priones, dada su naturaleza hidrófoba, tienden a
agregarse en grumos insolubles. En muchas condiciones que llevan a
la esterilización exitosa en microorganismos, los priones forman
grumos más compactos que los protegen a sí mismos y a los priones
subyacentes del procedimiento de esterilización. El protocolo de la
Organización Mundial de la Salud (1997) para la desactivación de
priones requiere el enjuague del instrumento en hidróxido de sodio
o hipoclorito concentrado durante dos horas seguido de una hora en
un autoclave. Estos tratamientos agresivos son a menudo
incompatibles con dispositivos médicos, en particular endoscopios
flexibles y otros dispositivos con partes de plástico, latón o
aluminio. Muchos dispositivos se ven dañados por la exposición a
altas temperaturas. Los tratamientos químicos, tales como bases
fuertes son dañinos para materiales de dispositivos médicos o
superficies en general. En general, se ha notificado que el
glutaraldehído, formaldehído, óxido de etileno, peróxido de
hidrógeno líquido, la mayoría de los fenólicos, alcoholes y
procedimientos tales como calor seco, cocción, congelación, UV,
ionización y radiación de microondas son ineficaces. Existe una
clara necesidad de productos y procedimientos que sean eficaces
contra los priones y compatibles con superficies.
La presente invención proporciona un aparato
nuevo y mejorado y un procedimiento de tratamiento de superficies
contaminadas con material infectado por priones que supera los
problemas anteriormente mencionados y otros.
De acuerdo con un aspecto de la presente
invención, se proporciona un procedimiento de desactivación de
priones. El procedimiento incluye pretratar superficies que portan
material infectado por priones con un limpiador que ataca a los
priones y tratar las superficies con un agente oxidante en forma
gaseosa.
De acuerdo con otro aspecto de la presente
invención, se proporciona un sistema de desactivación de priones
para eliminar y desactivar priones sobre un objeto. El sistema
incluye una cámara para recibir el objeto. Se conecta de forma
fluida una fuente con la cámara para recibir un limpiador alcalino
concentrado. Se conecta de forma fluida un suministro de agua con
la fuente para proporcionar agua para mezclar con el limpiador
alcalino concentrado y formar una solución limpiadora alcalina. Se
conecta de forma fluida una fuente de vapor de peróxido de hidrógeno
con la cámara.
Una ventaja de la presente invención es que
resulta inofensiva para los instrumentos.
Otra ventaja de la presente invención es que
desactiva priones de forma rápida y eficaz.
Otra ventaja de la presente invención es que es
compatible con una amplia variedad de materiales y dispositivos.
Otras ventajas de la presente invención
resultarán evidentes para aquellos expertos en la materia al leer y
entender la siguiente descripción detallada de las formas de
realización preferidas.
La invención puede tomar forma en varios
componentes y disposiciones de componentes y en varias etapas y
disposiciones de etapas. Los dibujos únicamente tienen propósitos de
ilustrar una forma de realización preferida y no deben entenderse
como limitantes de la invención.
la fig. 1 ilustra la eliminación de material
proteínico con varias composiciones limpiadoras;
la fig. 2 representa gráficamente el material
proteínico frente a la alcalinidad;
\newpage
la fig. 3 compara el efecto de la concentración
de KOH sola y la alcalinidad total en las formulaciones limpiadoras
en la eliminación de material proteínico,
la fig.4 compara la eficacia de varias
composiciones limpiadoras en la reducción de un modelo de prión
(IFDO);
la fig. 5a es un gráfico que muestra cambios de
presión en un ciclo de desactivación de priones aminoácido vacío
ejemplar;
la fig. 5b es un gráfico que mísera un ciclo
atmosférico ejemplar;
la fig. 6 es una ilustración esquemática de un
sistema de desactivación de priones;
la fig. 7 muestra el sistema de desactivación de
priones de la figura 6 adaptado para el control y la evaluación de
condiciones de desactivación; y
la fig. 8 es una ilustración esquemática de una
forma de realización alternativa de un sistema de desactivación de
priones;
la fig. 9 es un gráfico de log de IFDO frente al
tiempo para tres ciclos de desactivación de priones (ATM=
condiciones atmosféricas);
la fig. 10 es una ilustración esquemática de un
lavador y un sistema de desactivación de priones combinado;
la fig. 11 es un gráfico de la concentración de
IFDO frente al tiempo para cupones inoculados con IFDO expuestos a
vapor de peróxido de hidrógeno a 1,5 mg/l y 30ºC y 3,0 mg/l y 40ºC;
y
la fig. 12 es una ilustración esquemática de un
ciclo de vacío/vapor de peróxido de hidrógeno ejemplar.
Un procedimiento para la descontaminación
microbiana y la desactivación de priones de instrumentos u otros
objetos que portan material que puede estar contaminado con priones
incluye una operación de limpieza usando un limpiador alcalino,
seguido de un tratamiento con un agente oxidante gaseoso o en fase
vapor. Un procedimiento preferido de limpieza y descontaminación de
una superficie que ha sido contaminada con un material biológico
que incluye priones incluye limpiar la superficie con un limpiador
alcalino que tiene un pH de al menos 10 y exponer la superficie
limpia a un vapor que incluye vapor de peróxido de hidrógeno durante
un tiempo suficiente para destruir priones viables sobre la
superficie.
La composición limpiadora se forma
preferiblemente mediante dilución de un concentrado que incluye un
agente limpiador alcalino, y opcionalmente incluye uno o más de los
siguientes: un tensioactivo, un agente quelante, un agente
anti-redeposición, un polímero catiónico y un
inhibidor de la corrosión de metales. Como alternativa, los
componentes de la composición limpiadora se mezclan por separado con
agua u otro disolvente adecuado.
El agente limpiador alcalino es preferiblemente
un hidróxido o un metal alcalino o un metal alcalinotérreo. Son
agentes limpiadores ejemplares hidróxido de potasio e hidróxido de
sodio. El hidróxido está presente preferiblemente desde
20-60% en peso del concentrado.
El agente quelante se proporciona para quelar
sales de la dureza del agua, tales como sales de calcio y magnesio,
que se depositan sobre el equipamiento que se va a limpiar. Los
agentes quelantes adecuados incluyen, pero no están limitados a
polímeros basados en ácido carboxílico, tales como poli(ácido
acrílico) y ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) o sales de los
mismos. El hexametafosfato de sodio, discutido a continuación,
también actúa como un agente quelante en cierta medida. El agente
quelante está preferiblemente presente desde aproximadamente
1-15% en peso del concentrado. Una composición de
concentrado preferida incluye 2-10% en peso de
Na-EDTA y 0,1-30% en peso de
poli(ácido acrílico).
El tensioactivo se selecciona del grupo
constituido por tensioactivos aniónicos, catiónicos, no iónicos y
de ión bipolar para potenciar el rendimiento de limpieza. Los
ejemplos de dichos tensioactivos incluyen, pero no se limitan a
sales solubles en agua o monosulfatos de monoglicéridos de ácido
graso superior, tales como la sal de sido del monoglicérido
monosulfatado de ácidos grasos de aceite de coco hidrogenado,
sulfatos de alquilo superior, tal como laurilsulfato de sodio,
sulfonatos de alquilarilo, tales como dodecilbencenosulfonato de
sodio, sulfoacetatos de alquilo superior, ésteres de ácido graso
superior de 1,2-dihidroxipropanosulfonatos y las
acilamidas sustancialmente saturadas alifáticas superiores de
compuestos de ácido aminocarboxílico alifáticos inferiores, tales
como aquellos que tienen 12 a 16 átomos de carbono en los radicales
ácido graso, alquilo o acilo, y similares. Los ejemplos de las
amidas mencionadas en último lugar son
N-lauroilsarcosina y las sales de sodio, potasio y
etanolamina de N-lauroil,
N-miristoil o N-palmitoil
sarcosina.
Son ejemplos adicionales los productos de
condensación de óxido de etileno con varios compuestos que contienen
hidrógeno reactivo, reactivos con el mismo, que tienen cadenas
largas hidrófobas (por ejemplo, cadenas alifáticas de
aproximadamente 12 a 20 átomos de carbono), conteniendo los
productos de condensación ("etoxámeros") restos de
polioxietileno hidrófilos, tales como productos de condensación de
poli(óxido de etileno) con ácidos grasos, alcoholes grasos, amidas
grasas, alcoholes polivalentes (por ejemplo, monoestearato de
sorbitán) y óxidos de polipropileno (por ejemplo, materiales
plurónicos).
Son tensioactivos de ión bipolar adecuados
anfocarboxilatos de alquilo tales como tensioactivos de
anfocarboxilato C-8 mixtos. Un concentrado preferido
incluye anfocarboxilatos C-8 mixtos a una
concentración de 0-5% en peso.
El agente anti-redeposición
inhibe la redeposición de suciedad sobre el equipamiento. Los
agentes anti-redeposición adecuados incluyen
gluconatos, tales como gluconato de sodio y sales citrato. El
poli(ácido acrílico) también actúa como un agente
anti-redeposición. El agente
anti-redeposición está preferiblemente a una
concentración de 1-10% en peso de la composición de
concentrado. Una composición particularmente preferida incluye
poli(ácido acrílico) a una concentración de 0,1-3%
en peso, más preferiblemente aproximadamente 0,3% en peso, y
gluconato de sodio a una concentración de 1-10% en
peso, más preferiblemente aproximadamente 1-5% en
peso de la composición.
El polímero catiónico ayuda a mantener
compuestos de magnesio, silicato y cinc en solución, mantiene a los
inhibidores de la corrosión en solución y ayuda a prevenir la
precipitación de la dureza del agua y la deposición sobre las
superficies del equipamiento de limpieza cuando se usa la
composición limpiadora en agua dura. Son ejemplares de tales
polímeros catiónicos polímeros carboxilados que pueden categorizarse
de forma genérica como polímeros de ácido carboxílico solubles en
agua, tales como poli(ácidos acrílicos) o poli(ácidos metacrílicos)
o polímeros de adición de vinilo. Son ejemplos de los polímeros de
adición de vinilo contemplados copolímeros de anhídrido maleico
como con acetato de vinilo, estireno, etileno, isobutileno, ácido
acrílico y éteres de vinilo.
Son polímeros catiónicos ejemplares
homopolímeros o copolímeros de sales de amonio de dialquildialilo
(por ejemplo, haluro) tales como homopolímero de cloruro de
dimetildialilamonio, copolímero de cloruro de
dimetildialilamonio/acrilamida, copolímero de cloruro de
dimetildialilamonio/ácido acrílico y copolímeros de
vinilimidazolvinilpirrolidona. Otros polímeros catiónicos adecuados
no celulósicos se describen en el diccionario de ingredientes
cosméticos de la CTFA con la denominación "Polyquaternium"
seguida de un número entero. Todos los polímeros descritos
anteriormente son solubles en agua o al menos dispersables
coloidalmente en agua. Tales polímeros carboxilados de bajo peso
molecular, intervalo de peso molecular de aproximadamente 1.000 a
menos de 100.000, actúan como agentes antinucleación para prevenir
que el carbonato forme deposiciones indeseables en tanques de
lavado. Es representativo el Polyquaternium 7, un copolímero de
cloruro de dimetildialilamonio/acrilamida. El polímero catiónico
está presente preferiblemente a 0-10% en peso del
concentrado.
Son inhibidores de la corrosión ejemplares sales
de ácido silícico y sales de ácido fosfórico en una cantidad de
aproximadamente 0-10% en peso del concentrado.
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\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página
siguiente)
\newpage
En la tabla 1 se muestran intervalos de
concentración de un concentrado limpiador alcalino preferido.
\vskip1.000000\baselineskip
En particular, en la tabla 2 se especifican las
siguientes formulaciones
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Obsérvese que en las tablas 1 y 2 muchos de los
ingredientes ya están parcialmente diluidos. De esta forma, por
ejemplo, la concentración real de hidróxido de potasio en la
formulación A del concentrado es en realidad aproximadamente 30% en
peso y en la formulación B, aproximadamente 21% en peso.
Para llevar a cabo la operación de limpieza, el
concentrado limpiador se diluye en agua a aproximadamente
8-16 cc/litro y los objetos que se vana a limpiar se
tratan con la solución limpiadora, preferiblemente combinado con
agitación a 30 a 65ºC durante 2-30 minutos. Un ciclo
global típico en un lavador automático puede incluir un prelavado
de dos minutos con agua a 30 a 65ºC, un lavado de
2-3 minutos con el limpiador alcalino a
8-16 cc/litro, un aclarado de 15 minutos en agua,
un aclarado térmico de un minuto a 30 a 65ºC y finalmente una etapa
de secado (si se requiere). Un ciclo alternativo puede implicar
simplemente un preaclarado, limpieza alcalina y aclarado posterior
como se ha descrito anteriormente.
El concentrado limpiador incluye opcionalmente
un nivel bajo de un agente microbiano, tal como un fenol, compuesto
de amonio cuaternario, agente oxidante, por ejemplo, hipoclorito de
sodio, peróxido de hidrógeno, o ácido peracético, o combinaciones de
los mismos.
También se contemplan otros limpiadores. Los
limpiadores se dividen en varias categorías. Los limpiadores
enzimáticos incluyen proteasas, lipasas y otras enzimas activas para
ayudar en la degradación de tejido o suciedad sobre una superficie.
Estos productos colaboran en la eliminación de priones y otros
materiales proteínicos, pero generalmente carecen de eficacia
frente a priones, es decir, los priones son resistentes a la
proteasa. Los limpiadores no enzimáticos se pueden dividir en
productos neutros, básicos y alcalinos. Estos limpiadores incluyen
una variedad de excipientes que ayudan en la eliminación de suciedad
de una superficie, tal como agentes humectantes y
tensioactivos.
tensioactivos.
Se ensayaron agentes limpiadores con una gama de
pH frente a un modelo de priones respecto a la eficacia de
eliminación de priones. La albúmina de suero bovino (BSA), como los
priones, es de naturaleza proteínica y se ha demostrado que exhibe
respuestas a procedimientos de tratamiento que se correlacionan con
la respuesta de priones en tratamientos similares. Más
específicamente, se preparó una solución de BSA al 5% y se
pipetearon 2 ml en cada uno de cupones de acero inoxidable. Estos
cupones se secaron a 43ºC en un horno durante una hora, se
enfriaron a temperatura ambiente y se pesaron. En estas condiciones
de secado, la albúmina de suero bovino adopta una conformación de
gran lámina \beta que es similar a las proteínas priónicas
infecciosas. Los cupónes se lavaron en un lavador/desinfectante
STERIS 444^{TM} usando su ciclo de instrumento, pero con
diferentes composiciones limpiadoras. El ciclo de instrumento
incluye un prelavado de 2 minutos, un lavado de 2 minutos a 65ºC,
un aclarado, un aclarado térmico y un ciclo de secado. Después del
ciclo, los cupónes se retiraron del lavador, se secaron y se
pesaron. La figura 1 muestra la cantidad de material eliminado en el
ciclo, en la que las composiciones A, B, C y D son limpiadores
alcalinos con alcalinidad decreciente de A a D, la composición E es
un limpiador neutro (Renu-Klenz^{TM}, obtenible de
STERIS Corp., Mentor OH), la composición F es un limpiador ácido
(CIP-220^{TM}, obtenible de STERIS Corp.) y la
composición G es un mero control de agua. La figura 2 es un gráfico
del material eliminado frente a la alcalinidad total teórica en
partes por millón. Como se muestra en la figura 2, hay una fuerte
correlación entre la cantidad de material eliminado y la
alcalinidad, incrementándose la cantidad con la alcalinidad total
de la composición
limpiadora.
limpiadora.
La composición limpiadora usada y descrita
elimina materia proteínica fijada incluyendo grumos de proteína.
Cualquier sustancia proteínica restante está en forma de una fina
película a la que penetra más fácilmente el agente de desactivación
en una etapa de desactivación consiguiente. Además, el limpiador
alcalino preferido da como resultado una destrucción de
aproximadamente 50% de priones en la película residual que no se
elimina durante la etapa de limpieza.
\newpage
Se desarrollaron formulaciones limpiadoras
alcalinas optimizadas basadas en la tabla 1 y se analizaron como se
ha descrito anteriormente con los siguientes resultados:
Las composiciones de las formulaciones más
eficaces (marcadas como A y B) se especifican anteriormente en la
tabla 2. Los limpiadores preferidos tienen una alcalinidad
equivalente a KOH 0,030 M, o superior y un pH de al menos 10,
preferiblemente pH 13 o superior.
La eficacia de eliminación de proteínas no es
sólo una función de la alcalinidad en estas formulaciones
optimizadas, sino de los otros componentes de la composición. Esto
se muestra en la figura 3. Las formulaciones están compuestas
principalmente de tres partes componentes: ingredientes de
alcalinidad, ingredientes de control del agua y tensioactivos. Los
ingredientes de alcalinidad también pueden actuar como agentes de
control del agua. Por ejemplo, el EDTA contribuye tanto a las
características de alcalinidad como de control del agua de las
formulaciones. Los agentes de control del agua se incluyen
preferiblemente porque la calidad del agua usada ara limpiar
superficies varía considerablemente y puede afectar de lo contrario
a la eficacia de una formulación dada. Un ejemplo es la dureza del
agua, que muestra solubilidad inversa, cuanto mayor es la
temperatura, menos solubles son las sales de la dureza del agua.
Las sales de la dureza del agua también son menos solubles a valores
de pH mayores. Por lo tanto, el EDTA u otros agentes quelantes se
emplean preferiblemente para mantener las sales de la dureza en
solución. Las tres partes componentes anteriores se cree que
funcionan de forma sinérgica para permitir que la formulación
limpie superficies. Esto se demuestra en la figura 3, que compara
los equivalentes de alcalinidad de nueve formulaciones comerciales
(curva superior) a la del KOH (curva inferior) solo como la fuente
de alcalinidad.
Se evaluó el efecto de la alcalinidad sola
añadiendo la proporción correspondiente de hidróxido de potasio
(KOH) al lavador y ensayando como se ha descrito anteriormente.
Aunque el efecto de la alcalinidad (expresada como la molaridad de
KOH) era significativo (como se demuestra en la curva inferior de la
figura 3), las formulaciones ensayadas (ejemplos 1 a 9 de la tabla
3) demostraron una eficacia potenciada de eliminación de proteínas,
por ejemplo, a 0,02 M, las formulaciones comerciales eliminaron 2 -
2,5 mg/cm^{2} de proteínas mientras que el KOH solo eliminó menos
de 1 mg/cm^{2} de proteínas.
Los autores de la presente invención han
descubierto que la selección apropiada de la composición limpiadora
no sólo elimina priones y otros materiales proteínicos, sino que
desactivan al menos parcialmente a los priones. En particular, los
limpiadores alcalinos son más eficaces en la desactivación de
priones que los limpiadores enzimáticos, neutros o ácidos.
Se ensayó una variedad de limpiadores frente a
un modelo de priones en el que se cultivó un organismo dependiente
de fluido ilíaco (IFDO, por sus siglas en inglés) en caldo de
cultivo basado en Micoplasma, se modificado, se cuantificó mediante
diluciones seriadas y se dispuso en placas en un agar similar. El
IFDO se extrajo originalmente de fluido ilíaco, de ahí su nombre.
Se ha descubierto desde entonces en otras partes del cuerpo. El IFDO
ha demostrado una fuerte correlación con priones reales en su
respuesta a procedimientos de tratamiento y por lo tanto se propone
como un modelo de la actividad de los priones. Las formulaciones se
prepararon en agua y se suspendió una alícuota del IFDO en cada una
de ellas. Las soluciones de ensayo se incubaron a 40ºC durante 30
minutos, se muestrearon por alícuotas y se cuantificaron mediante
dilución seriada y se dispusieron en placas en un agar de
crecimiento modificado. Después de incubar a 37ºC durante 48 horas,
las placas se contaron y se obtuvieron reducciones log en el IFDO
presente. Estos resultados de ensayo se ilustran en la figura 4, en
la que el limpiador A es un control simplemente de agua, el
limpiador B es un limpiador alcalino (CIP150^{TM}), el limpiador
C es un segundo limpiador ligeramente menos alcalino
(CIP100^{TM}), los limpiadores D (Klenzyme^{TM}) y E (Enzycare
2^{TM}) son limpiadores enzimáticos, los limpiadores F
(Renu-Klenz^{TM}) y G
(NpH-Klentz^{TM}) son limpiadores neutros y el
limpiador H (CIP 220^{TM}) es un limpiador ácido (cada uno de los
limpiadores ensayados se obtuvo de STERIS Corp.).
Por lo tanto, los limpiadores alcalinos no sólo
son más eficaces en la eliminación de material criónico, sino que
también son significativamente más eficaces en desactivar el
material criónico que pueda quedar, así como el material criónico
eliminado aún disuelto.
Después de la etapa de limpieza, los
instrumentos u otros objetos son sometidos a una etapa de
desactivación de priones. Durante la etapa de desactivación de
priones, los objetos se ponen en contacto con un agente oxidante en
fase gaseosa, de plasma o vapor, todos los cuales se denominarán en
el presente documento agentes oxidantes gaseosos. Los agentes
oxidantes preferidos incluyen vapor de peróxido de hidrógeno,
plasma/peróxido de hidrógeno o ácido peracético, plasma y/ perecido
en fase vapor, tales como vapor de ácido peracético, gas de dióxido
de cloro, y combinaciones de peróxido de hidrógeno con uno o más
perácidos. En una forma de realización, se permite condensar vapor,
por ejemplo vapor de peróxido de hidrógeno sobre los objetos que se
van a descontaminar. En una etapa consiguiente de aireación o
evacuación, el esterilizante condensado se reconvierte en vapor y
se elimina de los objetos. Un oxidante particularmente preferido
incluye vapor de peróxido de hidrógeno. Mientras que el sistema se
describirá con particular referencia a vapor de peróxido de
hidrógeno como el agente de desactivación de priones, se apreciará
que también se contemplan otros agentes oxidantes.
Los objetos que se van a tratar con el oxidante
gaseoso (que ya se han limpiado con una composición limpiadora
alcalina, se han aclarado y preferiblemente se han secado), se
colocan en una cámara de esterilización o simplemente se introducen
bajo una tienda, una caperuza u otro recubrimiento. Preferiblemente,
la descontaminación de priones en fase vapor tiene lugar a
temperaturas por encima de la ambiental, más preferiblemente a
aproximadamente 25-60ºC, de la forma más
preferible, a aproximadamente 45-55ºC. También se
contempla que la esterilización pudiera realizarse en condiciones
ambientales (15-30ºC), siempre que haya un flujo
suficiente de vapor esterilizante.
En una forma de realización, se introduce vapor
de peróxido de hidrógeno a una cámara que se puede evacuar. La
cámara que contiene los objetos que se van a tratar se evacua en
primer lugar a una presión de aproximadamente 100 Torr (1,33 x
10^{4} Pa) o inferior, más preferiblemente a aproximadamente 10
Torr (1,33 x 10^{3} Pa) o inferior. Si el objeto no está seco
cuando se coloca en la cámara, se mantiene el vacío durante un
periodo suficiente para evaporar cualquier residuo líquido. Se
introduce entonces vapor de peróxido de hidrógeno a la cámara para
que contacte con los objetos. Se cree que aplicar un vacío antes de
la introducción de peróxido de hidrógeno y/o entre los pulsos de
peróxido de hidrógeno ayuda a la penetración del vapor a través del
envasado y en regiones menos accesibles del objeto, tales como
lúmenes estrechos. La concentración de peróxido de hidrógeno se
mantiene preferiblemente por debajo de su nivel de saturación, para
evitar condensación sobre los objetos y las paredes de la cámara,
etc. Por ejemplo, el peróxido de hidrógeno se mantiene a
75-95% de la saturación. Cuando la cámara es capaz
de mantener de forma precisa el porcentaje de saturación a entre
1-5%, la saturación es preferiblemente cercana al
95%, y puede incluso ser superior si el porcentaje de saturación se
puede mantener incluso dentro de tolerancias más estrechas.
En una forma de realización preferida, se
introducen dos o más pulsos de peróxido de hidrógeno a la cámara,
cada uno precedido y seguido por una etapa de evacuación, como se
ejemplifica en la figura 5. Una primera etapa se muestra en la
figura 5 como una etapa de ensayo de escape/acondicionamiento. Esta
etapa se lleva a cano en ausencia de peróxido de hidrógeno e
incluye una etapa de evacuación A (a aproximadamente 10 Torr, 1,33
x 10^{3} Pa), seguida de una etapa de mantenimiento B, en la que
la presión dentro de la cámara se monitoriza en busca de fugas
observando los cambios de presión, en caso de haberlos. Durante la
etapa C, se introduce aire seco a la cámara para reducir la humedad
en la cámara antes de la introducción de vapor de peróxido de
hidrógeno. La cámara se vacua una vez más en D a 10 Torr o menos
(1,33 x 10^{3} Pa) antes de la introducción de peróxido de
hidrógeno en E aumentando la presión a aproximadamente
300-500 Torr (3,99-6,65 x 10^{4}
Pa). Opcionalmente se introduce un gas seco para aumentar la presión
a 500-750 Torr (6,65-9,98 x
10^{4} Pa). El peróxido de hidrógeno se pone en contacto con los
instrumentos en la cámara durante un periodo desde varios segundos
a varios minutos, F, luego se evacua en G hasta una presión de
aproximadamente 10 Torr (1,33 x 10^{3} Pa). Las etapas E, F y G
se repiten una o más veces, mostradas como E', F' y G'. En una
etapa de aireación final, se introduce aire filtrado a la cámara en
H y luego se evacua en J para arrastrar consigo todo el peróxido de
hidrógeno restante que se ha adsorbido sobre los objetos que están
siendo sometidos a la desactivación. Se vuelve a dejar entrar aire
filtrado a la cámara para devolver la presión a la atmosférica antes
de abrir la cámara.
Como alternativa, la descontaminación de priones
con peróxido de hidrógeno tiene lugar a presión atmosférica o en
condiciones por debajo de las atmosféricas. Cuando se usan
presiones atmosféricas o superiores, un ciclo de descontaminación
de priones ejemplar incluye cuatro fases: deshumidificación,
acondicionamiento, desactivación de priones y aireación. Durante la
deshumidificación, se reduce la humedad relativa secando la
atmósfera en la cámara hasta por debajo del 40% HR, por ejemplo a
aproximadamente 10-30% HR, por ejemplo, haciendo
circular aire seco a través de la cámara. Se puede proporcionar el
aire seco haciendo pasar aire a través de un cartucho desecante o
usando un sistema refrigerado para extraer la humedad. Durante la
etapa de acondicionamiento, se produce vapor de peróxido de
hidrógeno vaporizando una mezcla líquida de peróxido de hidrógeno y
agua que es de 5-95% peróxido de hidrógeno, más
preferiblemente 25-50% de peróxido de hidrógeno, de
la forma más preferible, 30-37% de peróxido de
hidrógeno. El vapor se introduce al flujo de aire recirculante y se
lleva a y a través de la cámara. Entonces tiene lugar la etapa de
desactivación de priones a lo largo del tiempo. El caudal de
recirculación, la presión de peróxido de hidrógeno y la temperatura
se miden y controlan para mantener condiciones de estado
estacionario. Preferiblemente, la concentración de peróxido de
hidrógeno se mantiene por debajo del punto de condensación tanto
del vapor de peróxido de hidrógeno como del de agua para prevenir la
condensación sobre las superficies de los objetos y las paredes de
la cámara. Una forma de realización incluye aumentar la
concentración de vapor hasta por encima del punto de condensación,
permitiendo que el peróxido de hidrógeno se condense sobre las
superficies contaminadas, y después reformando el vapor durante una
etapa de aireación haciendo pasar aire seco sobre las
superficies.
La concentración de peróxido de hidrógeno que se
puede mantener sin condensación aumenta de forma exponencial con la
temperatura. Por ejemplo, a 20ºC se pueden mantener aproximadamente
1-2 mg/l. A 30ºC, 2-3 mg/l, a 40ºC,
4-5 mg/l y a 50ºC se pueden mantener
8-9 mg/l. No obstante, a temperaturas por encima de
aproximadamente 60ºC, tiende a producirse más rápidamente la
degradación del peróxido de hidrógeno y los priones tienden a
aglomerarse en estructuras más compactas y más difíciles de atacar.
De acuerdo con esto, se prefiere una temperatura de aproximadamente
45-60ºC, más preferiblemente
53-57ºC, aunque temperaturas más bajas son eficaces
cuando se incrementan significativamente los tiempos de
exposición.
Con referencia a la figura 6, un recipiente de
desactivación de priones adecuado incluye una pared de la cámara
10, que define una cámara interior 12, capaz de presurizarse o
evacuarse. Un puerto de entrada de vapor 14 y un puerto de salida
16 están definidos en la pared de la cámara. Un generador 20
suministra un vapor esterilizante a la cámara 12, preferiblemente
un compuesto de peroxi vaporizado, tal como peróxido de hidrógeno,
vapor de ácido peracético, o mezclas de los mismos, introducidos en
un gas portador, tal como aire.
Un sistema circulante incluye una línea de
entrada de vapor 24, que lleva el vapor desde el generador 20 al
puerto de entrada 14. El peróxido de hidrógeno pasa a través de la
cámara 12 y abandona la cámara a través del puerto de salida 16.
Opcionalmente, una línea de retorno 26 retorna el vapor de peróxido
de hidrógeno parcialmente gastado al generador para que se
refresque o, como se muestra en la figura 6, lo hace pasar a través
de un destructor 28 y un secador 30. El destructor convierte el
peróxido en agua para que la elimine el secador 30.
En una forma de realización alternativa, el
vapor de peróxido de hidrógeno se recircula a través de la cámara
durante un periodo de tiempo a través de una línea de retorno son
refrescar el vapor con peróxido de hidrógeno fresco del
generador.
Como alternativa, tal como se muestra en la
figura 8, el vapor que abandona la cámara 12 se dirige a través de
un convertidor catalítico 32 que convierte el vapor en productos no
nocivos, tales como agua y oxígeno. Como otra alternativa más, el
vapor que abandona la cámara se ventila a la atmósfera en la que la
luz solar convierte rápidamente el vapor en vapor de agua y
oxígeno. El peróxido de hidrógeno vaporizado se hace fluir a través
de la cámara 12 hasta que se alcanzan las condiciones de
esterilización seleccionadas en términos de temperatura, presión,
tiempo de exposición y concentración de peróxido de hidrógeno.
Como alternativa, un sistema atmosférico permite
la entrada de vapor en un cerramiento, manteniéndolo en el
cerramiento durante un tiempo determinado y evacuando o aireando el
cerramiento.
El generador 20 es preferiblemente uno que
genere una corriente controlable de peróxido de hidrógeno
vaporizado. Un generador particularmente preferido es uno que
vaporiza gotitas de peróxido de hidrógeno líquido por contacto con
una superficie calentada e introduce el vapor en una corriente de
gas portador, tal como aire. El gas se transporta entonces con el
vapor a la cámara 12.
Como alternativa, se genera peróxido de
hidrógeno in situ en la cámara, por ejemplo, tratando un
compuesto que libera peróxido de hidrógeno, tal como al calentarse.
O bien, se pueden emplear otros procedimientos de vaporización,
tales como introducir peróxido de hidrógeno líquido en una cámara
evacuada, en la que se vaporiza por el vacío.
El peróxido de hidrógeno líquido se suministra
opcionalmente al generador desde una fuente única 36 como una
mezcla de peróxido de hidrógeno en agua, por ejemplo, un solución de
peróxido de hidrógeno al 5-95% en peso, más
preferiblemente peróxido de hidrógeno al 30-37%
(figura 8). Los componentes líquidos se convierten completamente en
vapor, de forma que el vapor resultante tiene la misma concentración
relativa de peróxido de hidrógeno que el líquido a partir del que
ha sido generado. En una forma de realización más preferida,
mostrada en la figura 6, los componentes del vapor están contenidos
por separado o están contenidos en concentraciones mayores y
menores de forma que la composición del vapor es ajustable variando
la tasa de suministro de cada uno de los componentes al
vaporizador. En el vaporizador, la solución de peróxido de hidrógeno
líquida se vierte gota a gota o se pulveriza a través de una
boquilla sobre una superficie calentada (no mostrada) que vaporiza
el oxidante sin degradarlo. También se contemplan otras técnicas de
vaporización, tales como vaporizadores ultrasónicos, atomizadores y
similares. Una fuente, tal como un depósito 40 de peróxido de
hidrógeno más concentrado y una fuente 42 de peróxido de hidrógeno
menos concentrado o agua se conectan con el vaporizador 20 mediante
líneas de suministro 44 y 46, respectivamente, de forma que la
concentración de peróxido de hidrógeno en el líquido que entra al
vaporizador es
ajustable.
ajustable.
Cuando se usa un sistema de dos fuentes, tal
como se muestra en la figura 6, puede no ser necesario destruir y
eliminar el vapor gastado en la línea de retorno 26, más que para
acomodar cambios de presión debidos al vapor adicional que entra a
través de la entrada (o puede tener lugar a una tasa más baja que en
un sistema de fuente única). Esto se debe a que la concentración
relativa del vapor se puede ajustar o mantener a un nivel
seleccionado fundamentalmente ajustando la proporción de los dos
componentes en la alimentación. Por lo tanto, el consumo global de
líquido de peróxido de hidrógeno es generalmente menor cuando se
emplean y combinan fuentes separadas de peróxido de hidrógeno y
agua, como se requiera para conseguir una concentración de peróxido
de hidrógeno en la alimentación al vaporizador.
La mezcla de agua y vapor de peróxido de
hidrógeno se mezcla con un gas portador, tal como aire. El gas
portador se suministra al vaporizador a través de una línea 48. Un
filtro, tal como un filtro HEPA 50 filtra preferiblemente el aire
de entrada. El aire se hace pasar preferiblemente a través de un
secador, para eliminar la humedad, y a través de un calefactor,
para elevar la temperatura del gas portador, antes de mezclar el gas
portador con el vapor de peróxido de hidrógeno.
Primeras y segundas bombas 58 y 60 bombean el
peróxido de hidrógeno y el agua desde los depósitos 40 y 42.
Válvulas ajustables por separado 62, 64, regulan el caudal de fluido
a través de las líneas 44, 46. Como alternativa, la regulación de
los caudales se ajusta ajustando la tasa de bombeo de las bombas 58,
60. En una forma de realización alternativa, una única bomba
sustituye a las dos bombas 58, 60.
Una camisa térmica 68, tal como una camisa de
agua o una resistencia calefactora rodea opcionalmente básicamente
toda la cámara 12. La camisa 68 sirve para mantener una temperatura
seleccionada en el interior de la cámara. Un calefactor 70,
conectado a la camisa térmica 68 calienta la camisa. Como
alternativa o adicionalmente, la cámara 12 está aislada para
reducir la pérdida de calor de la cámara 12. En una forma de
realización particularmente preferida, el aislamiento adicional de
las áreas sin camisa, tales como puertas, sirve adicionalmente para
mantener la temperatura interna de la cámara 12. Los objetos que se
van a desactivar se introducen en la cámara a través de una puerta
(no mostrada).
Para ensayar la eficacia del peróxido de
hidrógeno frente a priones, se usa opcionalmente un recipiente
resistómero evaluador indicador biológico (BIER). El recipiente
BIER funciona de forma similar a la cámara de desactivación de
priones descrita anteriormente, pero permite un mayor nivel de
control y monitorización de las condiciones de la cámara para
asegurar resultados reproducibles. Adicionalmente, los objetos que
se van a ensayar se introducen preferiblemente a la cámara a través
de un puerto una vez que las condiciones en el interior de la cámara
han alcanzado las condiciones seleccionadas para el estudio de
desactivación, mientras que en un sistema de desactivación de
priones normal, los objetos que se van a descontaminar se introducen
a través de una puerta convencional entes de la deshumidificación y
acondicionamiento de la cámara. En una forma de realización, el
recipiente BIER se simplemente un recipiente de esterilización por
vapor convencional que se ha adaptado para la investigación
controlada.
Preferiblemente, tal como se muestra en la
figura 7, los cupones de ensayo se introducen a la cámara a través
de una pequeña abertura 80 formada en la puerta o en cualquier otro
lugar en la pared de la cámara. Un puerto de acceso 82 permite la
rápida inserción de objeto que se van a ensayar en la cámara sin
perturbar demasiado las condiciones de la cámara. El puerto de
acceso incluye preferiblemente un tubo hueco 84, que se extiende
hacia fuera desde la puerta alrededor de la abertura 80. El tubo 84
define un paso interior 85, que está diseñado para recibir un
portamuestras o tubo D 86. El portamuestras 86 tiene una serie de
hendiduras 88 u otros receptáculos para alojar objetos, tales como
cupones contaminados con material infectado con priones o
indicadores biológicos, para exponerlos a las condiciones de la
cámara.
Preferiblemente, el puerto de acceso 82 está
construido para minimizar el flujo de gas o vapor a o fuera de la
cámara 12 mientras que los cupones y/o indicadores biológicos se
están introduciendo en la cámara 12 para evitar perturbar las
condiciones de equilibrio. En este aspecto, se montan dos sellados
90, 92 en el interior del tubo 84, que forman un sellado entre el
portamuestras y el tubo durante la inserción y la retirada. Cuando
no está en uso, una válvula 96 cierra el paso interior del tubo
85.
Después de un periodo de exposición
seleccionado, los cupones de ensayo y/o indicadores se retiran de la
cámara 12 y se evalúan respecto a actividad de priones remanente y/o
actividad microbiana.
En la forma de realización ilustrada, un
ventilador o ventiladores 104, preferiblemente dispuestos en el
interior de la cámara 12, mezclan los gases en el interior de la
cámara, mejorando con ello la uniformidad de la mezcla e
incrementando la tasa de flujo de esterilizante sobre los
indicadores biológicos. Opcionalmente se disponen placas perforadas
superior e inferior 106 y 108, respectivamente, en el interior de la
cámara 12 para inducir un flujo laminar de gas a través de la cámara
12.
Opcionalmente, el flujo de peróxido de hidrógeno
vaporizado desde el generador se controla mediante un dispositivo
de control de flujo 110, tal como una bomba, fuente de vacío o
soplador, amortiguador u otro regulador que sirve para regular el
flujo de peróxido de hidrógeno vaporizado en o fuera de la cámara.
Preferiblemente, el dispositivo de control de flujo 110 está
localizado en la línea de entrada 24 o línea de retorno 26.
Sondas 260, tales como sondas de temperatura,
presión y humedad, dispuestas en el interior de la cámara 12,
sirven para medir el ambiente de la cámara. Las sondas están
conectadas a un monitor 162, que monitoriza los cambios en las
condiciones ambiéntales. Preferiblemente, el monitor 162 señaliza a
un controlador 164, que controla las condiciones ambientales en el
interior de la cámara 12, controlando el calefactor 70 para regular
la temperatura de la camisa térmica 68 y también el funcionamiento
del control de flujo 110, el generador de peróxido de hidrógeno
vaporizado 20, las bombas 58, 60 y las válvulas 62, 64.
En el interior de la cámara también se posiciona
un sensor 166 para detectar la concentración de peróxido de
hidrógeno directamente y/o detectar la concentración de otros
componentes del vapor a partir de la cual se puede establecer
indirectamente la concentración de peróxido de hidrógeno.
Para ensayos en ambiente de vacío, una fuente de
vacío, tal como una bomba 170 evacua la cámara antes, durante o
después del procedimiento de esterilización. Opcionalmente se
conecta una válvula de tres vías 172 en la línea 26 a la bomba de
vacío 170. Conmutando la válvula 172 entre una primera posición en
la que se devuelven los gases de la cámara que pasan a través de la
línea 26 al generador a una segunda posición, en la que los gases
de la cámara se dirigen a la bomba 170, se evacua la cámara 12.
Opcionalmente, un convertidor catalítico 174 y un secador 176
descomponen el vapor de peroxi y secan y calientan el aire antes de
que se reintroduzca en el generador 20.
Más preferiblemente, el sistema de recipiente
BIER se usa sin recirculación del peróxido de hidrógeno o del gas
portador. La mezcla de aire y peróxido de hidrógeno fluye a través
de la cámara 12 en un paso único y luego es ventilada desde la
cámara por medio del convertidor catalítico 174. Esto proporciona un
mejor control del sistema.
El controlador 164 controla uno o más de la
temperatura de la cámara, la presión de la cámara, la tasa de
vaporización, la concentración de peróxido de hidrógeno en el
líquido que se va a vaporizar o el caudal de vapor a través de la
cámara en respuesta a condiciones medidas para mantener las
condiciones de desactivación de priones deseadas en la cámara
durante un ciclo de exposición.
Se contempla que las características del
recipiente BIER descrito anteriormente se incorporen en el sistema
de desactivación de priones de la figura 6, tal como el sistema de
control, sondas, sensores, ventiladores, y similares, para una
monitorización y un control más cuidadosos de las condiciones de la
cámara.
Se llevaron a cabo exposiciones de cupones
contaminados con un modelo de priones, específicamente un organismo
dependiente de fluido ilíaco (IFDO) a peróxido de hidrógeno en el
recipiente BIER usando diferentes condiciones de ensayo y tiempos de
exposición.
Los resultados mostraron que un ciclo que
implicaba pulsos de vacío de peróxido de hidrógeno, similar a los
ilustrados en la figura 5 era más eficaz en el modelo de
desactivación de priones (IFDO) que las condiciones atmosféricas
(figura 9).
Cuando se combina con una etapa de limpieza
previa con un limpiador alcalino, como se ha descrito anteriormente,
se proporciona un procedimiento eficaz para asegurar la eliminación
y desactivación de cualquier prión restante sobre instrumentos
médicos o similares.
Los instrumentos u otros objetos limpiados
parcialmente y de forma grosera, se transportan de forma ventajosa
a la cámara del sistema de descontaminación de priones sin aireación
y secado. Cualquier humedad presente en los instrumentos se elimina
durante las fases de preacondicionamiento/deshumidificación.
Opcionalmente, los instrumentos se envuelven en una envoltura
estéril, tal como una gasa o envoltura Tyvek^{TM} antes de
someter a los instrumentos a la descontaminación con peróxido de
hidrógeno. También se contemplan una serie de procedimientos de
limpieza y descontaminación. Por ejemplo, se puede usar un sistema
combinado de limpieza y esterilización. O bien, se pueden colocar
los objetos en una bandeja cerrada para su esterilización y/o
limpieza. Una bandeja de este tipo se puede sellar después de que se
haya completado el procedimiento de descontaminación para mantener
la esterilidad de los objetos hasta su reutilización.
Un procedimiento de desactivación de priones que
implica una etapa de limpieza alcalina seguida de una etapa
esterilizante con peróxido de hidrógeno u otro vapor no sólo es
eficaz para eliminar y/o desactivar priones, sino que también es
eficaz para la esterilización de objetos. Por lo tanto, los
instrumentos médicos y otros dispositivos no tienen que someterse a
un procedimiento de esterilización por separado para asegurar que se
destruyen microorganismos que pueden suponer peligros para los
pacientes o aquellos que manejan los instrumentos.
De acuerdo con esto, una combinación de un
lavado con producto limpiador alcalino a una concentración de álcali
de aproximadamente 0,02 M a aproximadamente 0,2M seguido de un
tratamiento con vapor de peróxido de hidrógeno es una alternativa
eficaz a un tratamiento convencional (NaOH 1 N y/o calentamiento a
120ºC durante una hora seguido de descontaminación microbiológica)
y es menos dañino para los instrumentos médicos u otros objetos que
se tratan.
El procedimiento descrito por lo tanto se
combina de forma opcional con etapas adicionales de limpieza y/o
descontaminación microbiológica o desactivación de priones. Por
ejemplo, una etapa de esterilización líquida/desactivación de
priones precede opcionalmente a la etapa oxidante gaseosa. Por
ejemplo, los instrumentos se limpian con álcali, se aclaran, se
esterilizan con una solución de ácido peracético, se envuelven en un
envoltorio estéril o se colocan en una bandeja, y finalmente se
esterilizan/de desactivan los priones con peróxido de hidrógeno.
En una forma de realización mostrada en la
figura 1o, se usa un aparato que actúa tanto como un lavador como
un recipiente de descontaminación de priones. esto evita la
necesidad de retirar los objetos limpiados con álcali y
transportarlos a un recipiente distinto de tratamiento con vapor. El
dispositivo es similar al que se muestra en la figura 6. Las partes
similares se identifican con una prima (') y a los componentes
nuevos se les dan números nuevos. Los objetos se cargan en una
cámara 10' del aparato y se lavan con un limpiador alcalino y se
aclaran. En una forma de realización, una primera etapa de limpieza
usa un primer limpiador (por ejemplo, alcalino). A esto le sigue
una etapa de aclarado, luego otra etapa de limpieza con un segundo
limpiador (por ejemplo, enzimático) y una etapa de aclarado
adicional. El limpiador alcalino concentrado se suministra en forma
líquida o sólida a una fuente 180. Se introduce agua
(preferiblemente a aproximadamente 50-60ºC) a la
fuente a través de una línea de flujo 182 y porta el limpiador
alcalino u otro en solución a boquillas 184 localizadas en la
cámara 10'. Un agitador 186 agita el líquido en la cámara.
Opcionalmente, una bomba 187 suministra la solución limpiadora a
boquillas de pulverización a presión. Después de un periodo
suficiente para eliminar la masa de cualquier material contaminado
con priones de los objetos, se vacía el limpiador alcalino de la
cámara por medio de una línea de drenaje 188. Se introduce agua de
aclarado a la cámara para uno o más ciclos de aclarado y se drena.
La humedad en la cámara se reduce entonces haciendo fluir aire seco
desde la línea 48'. Opcionalmente, la cámara es capaz de resistir
presiones inferiores a la atmosférica y se evacua con una bomba de
vacío 110'. Entonces se introduce vapor de peróxido de hidrógeno
desde un generador 20 a la cámara mezclado con el aire estéril. En
un sistema de flujo continuo, se hace fluir el peróxido de
hidrógeno/gas portador a través de la cámara durante un tiempo
suficiente para efectuar la desactivación de los priones. Como
alternativa, se usa un sistema de pulsos similar al descrito
anteriormente en relación con la figura 5. En este sistema, la
cámara se evacua y se introduce entonces un pulso o pulsos de vapor
de peróxido de hidrógeno.
La cámara se ajusta preferiblemente con sondas
de temo y presión, sensores químicos y un sistema de control
similar a los descritos anteriormente en relación con la figura 7
para permitir una monitorización y un control cuidadosos de las
condiciones en el interior de la cámara. Se proporcionan válvulas
190, 192 para cerrar selectivamente los suministros de vapor y
líquido limpiador, respectivamente.
Opcionalmente se encierran uno o más objetos que
se van a lavar y descontaminar de priones en una bandeja 194
conectada con puertos de vapor y líquido limpiador 14' y 184. El
fluido limpiador y/o vapor se hace fluir a través de la bandeja. Al
final del ciclo, se cierran las válvulas 196, ,198 para sellar el
acceso a la bandeja, sellando de esta forma la bandeja frente al
ingreso de contaminantes aéreos hasta su uso.
A pesar de que la invención se ha descrito con
particular referencia a los priones, se apreciará que también se
puede desactivar otros materiales proteínicos mediante el
procedimiento descrito en el presente documento. Además, mientras
la desactivación de priones se ha descrito con particular referencia
a un recipiente o cámara de descontaminación, también se contempla
que se limpien y descontaminen de priones habitaciones u otros
espacios cerrados y sus contenidos, tales como líneas de envasado
aséptico, de una forma similar a la descrita anteriormente.
Sin pretender que limiten el alcance de la
invención, los siguientes ejemplos muestran los efectos de la
esterilización con vapor en modelos de priones.
Ejemplo de referencia
A
Se evalúa el efecto de la temperatura y la
concentración en proteína de IFDO en condiciones atmosféricas. Se
preparan cupones añadiendo gota a gota alícuotas de suspensión de
IFDO en agua sobre cupones de acero inoxidable que se secan
después. Los cupones se colocan en bolsas formadas de envoltorio
tyvek^{TM}. Los cupones envueltos se exponen a peróxido de
hidrógeno a 1,5 mg/l y 30ºC o 3,0 mg/l y 40ºC. La figura 11 muestra
la concentración de IFDO restante sobre los cupones a lo largo del
tiempo. Los efectos de temperaturas y concentraciones mayores son
significativos.
Se preparan muestran de forma similar a las del
ejemplo A, pero en este caso se contaminan adicionalmente con 0, 10
o 50% de sangre. Las muestras se exponen a ciclos de esterilización
con vapor de peróxido de hidrógeno como se muestra en la figura 12,
con tres o seis pulsos de vapor de peróxido de hidrógeno a 30ºC o
50ºC. Los resultados que se muestran en la tabla 1 indican la
importancia de limpiar los objetos antes de la etapa de
descontaminación.
\vskip1.000000\baselineskip
Eliminando en primer lugar toda (representado
por 0% de sangre) o la mayoría (representado por 10% de sangre) de
la suciedad, se puede ver que un ciclo de vapor de peróxido de
hidrógeno puede ser eficaz en la eliminación de priones,
particularmente cuando se emplean un ciclo a 50ºC y una
concentración de 7,0 mg/l de peróxido de hidrógeno.
\vskip1.000000\baselineskip
Se preparan cupones añadiendo gota a gota
alícuotas de una suspensión de homogeneizado de cerebro contaminado
con CJD humano en agua sobre cupones de acero inoxidable que después
se secan. Los cupones se colocan en bolsas formadas de envoltorio
Tyvek^{TM}. Los cupones envueltos se exponen a varios
procedimientos de tratamiento, sin una etapa de limpieza previa, a
presión atmosférica o en condiciones de vacío, tanto con como sin
peróxido de hidrógeno. Después de la exposición, se extraen los
cupones en solución salina tamponada con fosfato mediante
sonicación. Los extractos se concentran, se separan mediante
SDS-PAGE y se analizan por inmunotransferencia de
Western. Se determina la presencia o ausencia de proteína criónica
(P_{R}P^{BC}) usando una matriz de anticuerpos. Los resultados
mostrados en la tabla 2 indican que el vapor de peróxido de
hidrógeno es eficaz en la destrucción de la forma nociva de la
proteína priónica.
\vskip1.000000\baselineskip
Esta lista de referencias citadas por el
solicitante es únicamente para comodidad del lector. No forma parte
del documento de patente europea. A pesar de haberse puesto gran
cuidado en la recopilación de las referencias, no se pueden excluir
errores u omisiones, y la OEP se exime de cualquier responsabilidad
a este respecto.
- US 5779973 A, Edwards
- US5173258 A
- J. C. DARBORD. Inactivation of prions
in daily medical practice. BIOMEDICINE & PHARMACOTHERAPY,
1999, vol. 53, 34-38.
- W. A. RUTALA y col.
Creutzfeld-Jakob Disease: Recommendations for
Disinfection and Sterilization. CLINICAL INFECTIOUS DISEASES,
09 de mayo de 2001, vol. 32, 1348-1356.
Claims (20)
1. Un procedimiento de desactivación de priones,
caracterizado por:
pretratar superficies que portan material
infectado con priones con un limpiador que ataca a los priones;
y
tratar las superficies con un agente oxidante en
forma gaseosa.
2. El procedimiento de desactivación de priones
como se expone en la reivindicación 1, caracterizado además
porque
el limpiador es un limpiador alcalino.
3. El procedimiento de desactivación de priones
como se expone en cualquiera de las reivindicaciones 1 y 2,
caracterizado además porque
el agente oxidante incluye vapor de peróxido de
hidrógeno.
4. El procedimiento de desactivación de priones
como se expone en la reivindicación 3, caracterizado además
porque
la etapa de tratamiento con agente oxidante se
lleva a cabo a desde aproximadamente 45-60ºC.
5. El procedimiento de desactivación de priones
como se expone en la reivindicación 2, caracterizado además
porque
el limpiador alcalino incluye un álcali fuerte
del grupo constituido por hidróxidos de metales alcalinos,
hidróxidos de metales alcalinotérreos y combinaciones de los
mismos.
6. El procedimiento de desactivación de priones
como se expone en la reivindicación 5, caracterizado además
porque
el álcali fuerte incluye uno o más de hidróxido
de sodio e hidróxido de potasio.
7. El procedimiento de desactivación de priones
como se expone en una cualquiera de las reivindicaciones precedentes
2, 5 y 6, caracterizado además porque
el limpiador alcalino incluye además un aditivo
se selecciona del grupo constituido por tensioactivos,
tensioactivos, polímeros catiónicos, agentes
anti-redeposición, inhibidores de la corrosión,
tampones, agentes quelantes y combinaciones de los mismos.
8. El procedimiento de desactivación de priones
como se expone en la reivindicación 7, caracterizado además
porque
la etapa de tratamiento de las superficies con
un agente oxidante en forma gaseosa se lleva a cabo a
aproximadamente 45-60ºC.
9. El procedimiento de desactivación de priones
como se expone en una cualquiera de las reivindicaciones precedentes
2 y 5-8, caracterizado además por
aclarar el limpiador alcalino de las superficies
antes de la etapa de tratamiento con agente oxidante gaseoso.
10. El procedimiento de desactivación de priones
como se expone en la reivindicación 9, caracterizado además
porque
después de aclarar la superficie, envolver la
superficie en una barrera a los microbios y
someter la superficie envuelta a la etapa de
tratamiento con agente oxidante gaseoso.
11. El procedimiento de desactivación de priones
como se expone en la reivindicación 8, caracterizado además
porque
las etapas de limpieza y tratamiento con agente
oxidante se llevan a cabo a un intervalo de temperaturas entre 50ºC
y 60ºC.
\newpage
12. El procedimiento de desactivación de priones
como se expone en una cualquiera de las reivindicaciones precedentes
1-11, caracterizado además porque
las etapas de limpieza y tratamiento con el
agente oxidante gaseoso se llevan a cabo en el mismo recipiente
(12').
13. El procedimiento de desactivación de priones
como se expone en la reivindicación 12, caracterizado además
porque
las etapas de limpieza y tratamiento con el
agente oxidante gaseoso se llevan a cabo sin la retirada intermedia
de las superficies del recipiente.
14. El procedimiento de desactivación de priones
como se expone en una cualquiera de las reivindicaciones precedentes
1-13, caracterizado además porque
la etapa de tratamiento con el agente oxidante
incluye:
- a)
- introducir la superficie que se va a tratar en una cámara (12, 12');
- b)
- reducir la presión en el interior de la cámara a una presión por debajo de la atmosférica; y
- c)
- introducir vapor de peróxido de hidrógeno en la cámara.
15. El procedimiento de desactivación de priones
como se expone en la reivindicación 14, caracterizado además
porque
la etapa de tratamiento con el agente oxidante
gaseoso incluye repetir las etapas b) y c) una o más veces.
16. El procedimiento de desactivación de priones
como se expone en cualquiera de las reivindicaciones precedentes 14
y 15, caracterizado además porque
la etapa b) incluye reducir la presión en el
interior de la cámara a aproximadamente 1,33 x 10^{3} Pa (10 Torr)
o inferior
17. El procedimiento como se expone en la
reivindicación 14, caracterizado además porque
después de la etapa c), reducir la presión en el
interior de la cámara a una presión por debajo de la atmosférica y
aumentar la presión a una presión subatmosférica mayor con aire
filtrado.
18. El procedimiento como se expone en una
cualquiera de las reivindicaciones precedentes 1-17,
caracterizado además porque
la etapa de pretratamiento incluye limpiar la
superficie con un limpiador alcalino que tiene un pH de al menos 10;
y
la etapa de tratamiento incluye exponer la
superficie limpiada a un vapor que incluye peróxido de hidrógeno a
una temperatura de 45-60ºC durante un tiempo
suficiente para destruir priones viables sobre la superficie.
19. Un sistema de desactivación de priones para
eliminar y desactivar priones sobre un objeto, caracterizado
por:
una cámara (12') para recibir el objeto;
una fuente (180) conectada de forma fluida con
la cámara para recibir un limpiador alcalino concentrado;
un suministro (182) de agua conectado de forma
fluida con la fuente para proporcionar agua para mezclar con el
limpiador alcalino concentrado y formar una solución limpiadora
alcalina;
una fuente (20') de vapor de peróxido de
hidrógeno conectada de forma fluida con la cámara.
20. El sistema de desactivación de priones como
se expone en la reivindicación 19, caracterizado además
por
un calefactor (70') para calentar la cámara a
una temperatura de al menos 30ºC.
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