ES2284895T3 - Agente terapeutico para la eliminacion de una poblacion de proteinas no deseadas del plasma. - Google Patents
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Abstract
Uso de un agente para la preparación de una composición para el tratamiento de un sujeto que tiene un trastorno causado por una proteína patogénica por eliminación terapéutica de la proteína patogénica del plasma del sujeto; en el que el tratamiento comprende administrar al sujeto una dosificación del agente suficiente para la eliminación terapéutica; en el que el agente comprende una pluralidad de ligandos co-unidos covalentemente para formar un complejo con una pluralidad de las proteínas en presencia del mismo; en el que al menos dos de los ligandos son iguales o diferentes y son capaces de unirse por los sitios de unión a ligando presentes en la proteínas, y en el que la proteína patogénica es componente de amiloide P sérico (SAP) y el agente es una D-prolina de fórmula en las que R es el grupo ; R1 es hidrógeno o halógeno; X es (CH2)n-; CH(R2)(CH2)n-; -CH2O(CH2)n-; -CH2NH-; bencilo, -C(R2)=CH-; -CH2CH(OH)-; o tiazol-2, 5-diilo; Y es -S-S-; -(CH2)n-; -O-; -NH-; -N(R2)-; -CH=CH-; -NHC(O)NH-; -N(R2)C(O)N(R2)-; -N[CH2C6H3(OCH3)2]-; -N(CH2C6H5)-; -N(CH2C6H5)C(O)N(CH2C6H5)-; -N(alcoxialquilo)-; N(cicloalquil-metilo)-; 2, 6-piridilo; 2, 5-furanilo; 2, 5-tienilo; 1, 2-ciclohexilo; 1, 3-ciclohexilo; 1, 4-ciclohexilo; 1, 2-naftilo; 1, 4-naftilo; 1, 5-naftilo; 1, 6-naftilo; bifenileno; o 1, 2-fenilen-1, 3-fenileno y 1, 4-fenileno, en los que los grupos fenileno están opcionalmente sustituidos por 1-4 sustituyentes seleccionados entre halógeno, alquilo inferior, alcoxi inferior, hidroxi, carboxi, COO-alquilo inferior, nitrilo, 5-tetrazol, (ácido 2-carboxílico pirrolidin-1-il)-2-oxo-etoxi, N-hidroxicarbamimidoilo, 5-oxo[1, 2, 4]oxadiazolilo, 2-oxo-[1, 2, 3, 5]oxatiadiazolilo, 5-tioxo[1, 2, 4]oxadiazolilo y 5-terc-butilsulfanil-[1, 2, 4]oxadiazolilo; X'' es -(CH2)n-; -(CH2)nCH(R2)-; -(CH2)nOCH2-; -NHCH2-; bencilo, -CH=C(R2)-, -CH(OH)CH2; o tiazol-2, 5-diilo; R2 es alquilo inferior, alcoxi inferior o bencilo y n es 0-3, o una sal o mono o diéster farmacéuticamente aceptable de la misma.
Description
Agente terapéutico para la eliminación de una
población de proteínas no deseadas del plasma.
La presente invención se refiere a un agente
para la eliminación de una población de proteínas no deseadas del
plasma de un sujeto, y a un método para tratar a un sujeto con dicho
agente.
Las proteínas en el plasma sanguíneo, en la
matriz extracelular de los tejidos, y en las células son esenciales
para todas las funciones fisiológicas vitales. Sin embargo, muchas
diferentes proteínas también contribuyen a enfermedades. Los
mecanismos patogénicos subyacentes incluyen sobreproducción de
proteínas normales con efectos excesivos correspondientes, la
producción de proteínas anormales con efectos dañinos, y la
subversión accidental de la función proteica normal que conduce a
efectos dañinos durante procesos patológicos intercurrentes, tales
como inflamación e infección microbiana. Por lo tanto hay una
necesidad de eliminar una diversidad de proteínas normales o
anormales del cuerpo para proporcionar tratamiento para muchas
enfermedades humanas. Proteínas plasmáticas que contribuyen a la
patogénesis de enfermedades incluyen citoquinas, lipoproteínas,
autoanticuerpos, componentes del complemento y vías de coagulación,
proteínas amiloidogénicas incluyendo cadenas ligeras de
inmunoglobulina monoclonal, transtiretina, lisozima y
\beta_{2}-microglobulina, proteínas de fase
aguda en particular proteína amiloide A sérica (SAA), y pentraxinas
tales como componente amiloide P sérico (SAP). Todas estas
diferentes proteínas, producidas por diferentes células, son dianas
potencialmente atractivas para la eliminación terapéutica en
diversas enfermedades. Sin embargo, hay pocos métodos eficaces para
disminuir selectivamente la concentración en circulación de
proteínas específicas y estos enfoques que están disponibles, o se
han intentado, son complejos, difíciles y están sujetos a muchos
problemas extremadamente desafiantes.
Las citoquinas son hormonas proteicas producidas
por y que funcionan en una diversidad de tipos celulares
diferentes, y son mediadores críticamente importantes de respuestas
inmunológicas e inflamatorias de la defensa del hospedador, pero su
sobreproducción a algunas enfermedades contribuye a grave patología,
morbilidad y mortalidad. Los anticuerpos y proteínas de unión
recombinantes finalmente se han usado exitosamente para dirigirse a
una citoquina particular, el factor de necrosis tumoral (TNF), y el
bloqueo de TNF es terapéuticamente beneficioso en artritis
reumatoide y enfermedad de Crohn, pero hay pocos métodos eficaces
para reducir los elevados niveles dañinos de otras citoquinas.
La sobreproducción patogénica de otras proteínas
normales, tales como proteínas plasmáticas de fase aguda, puede
reducirse suprimiendo la actividad de una enfermedad primaria
subyacente, pero excepto en el caso de infección crónica tratable,
habitualmente esto es extremadamente difícil de conseguir. No hay
cura para enfermedades inflamatorias idiomáticas crónicas, tales
como artritis reumatoide o enfermedad de Crohn, o para la mayoría
de los neoplasmas malignos. El tratamiento de estas enfermedades y
la supresión de su actividad requieren regímenes que incluyen
fármacos anti-inflamatorios, citotóxicos e
inmunosupresores altamente tóxicos, y frecuentemente también
cirugía y/o radioterapia.
La producción de proteínas anormales, heredada o
adquirida como una complicación de otra enfermedad primaria,
también es extremadamente difícil de controlar. Por ejemplo, las
moléculas de transtiretina variante y de fibrinógeno variante
responsables de las formas de amiloidosis sistémica hereditaria,
pueden eliminarse del plasma solamente por transplante de hígado.
Ninguno de dichos enfoques es posible con muchas otras enfermedades
hereditarias causadas por proteínas variantes patogénicas. La
producción adquirida de proteínas anormales y patogénicas, como en
gammapatías monoclonales, puede tratarse solamente con fármacos
citotóxicos poderosos o transplante de médula ósea. Estos
procedimientos provocan morbilidad universal, e incluso índices de
mortalidad de hasta el 50%, sin ser uniformemente exitosos.
Otro enfoque ha sido retirar las proteínas
dañinas por absorción extracorpórea, pasando la sangre sobre medios
en fase sólida más o menos selectivos para retirar la proteína
diana. Esto puede ser una contribución útil para la retirada de las
elevadas concentraciones de lipoproteína de baja densidad
pro-aterogénica en hipercolesterolemia familiar.
También se ha intentado, hasta ahora de forma inexitosa, retirar dos
diferentes proteínas amiloidogénicas:
\beta_{2}-microglobulina en pacientes con
hemodiálisis crónica para fallo renal en fase final, y transtiretina
variante en pacientes con polineuropatía amiloide familiar.
En casos en los que proteínas particulares
producen sus efectos patogénicos por unión a estructuras de ligando
específicas in vivo, un posible enfoque para terapia es el
desarrollo de fármacos para inhibir dicha unión. Por ejemplo, en la
presente invención se ha propuesto un enfoque para el tratamiento de
amiloidosis y enfermedad de Alzheimer, dirigiéndose a la unión
patogénica del componente amiloide P sérico a fibrillas amiloides
por la administración de moléculas de bajo peso molecular que
bloquean dicha unión (1-5) (documento US 6.126.918).
Se conoce la unión específica de SAP a ligandos particulares que
contienen grupos aniónicos, incluyendo carboxilatos y fosfatos
(6-10). En el complejo de SAP con desoxiadenosina
monofosfato (dAMP) hay una molécula de dAMP en el sitio de unión
dependiente de calcio de cada protómero en la molécula SAP
homopentamérica (10). Como resultado del amontonamiento de bases,
dependiente de los enlaces hidrógeno entre pares de moléculas de
dAMP, los pares de pentámeros SAP cargados con dAMP se ensamblan
cara a cara para formar un complejo decamérico
proteína-ligado (10).
Los ligandos de bajo peso molecular conocidos de
SAP, tales como fosfoetanolamina y
4,6-O-(1-carboxietilideno)-\beta-D-galactopiranósido
de metilo (MO\betaDG), solamente se unen con afinidad
moderada de aproximadamente milimolar. Esto es poco comparable con
las afinidades nanomolares típicas de la mayoría de las
interacciones fármaco-proteína, y sugiere que
dichos compuestos probablemente no serían eficaces como inhibidores
de la unión patogénica de SAP a sus ligandos in vivo. Sigue
existiendo una necesidad de proporcionar un método eficaz para la
eliminación dirigida de una población de proteínas plasmáticas no
deseadas.
Por consiguiente, en un primer aspecto, la
presente invención proporciona el uso de un agente para la
preparación de una composición para el tratamiento de un sujeto que
tiene un trastorno causado por un proteína patogénica por
eliminación terapéutica de la proteína patogénica del plasma del
sujeto; en el que el tratamiento comprende administrar a un sujeto
una dosificación del agente suficiente para la eliminación
terapéutica; en el que el agente comprende una pluralidad de
ligandos co-unidos covalentemente para formar un
complejo con una pluralidad de las proteínas en presencia de los
mismos; en el que al menos dos de los ligandos son iguales o
diferentes y son capaces de unirse por los sitios de unión a
ligando presentes en las proteínas; y en el que la proteína
patogénica es componente amiloide P sérico (SAP) y el agente es un
D-prolina de fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en las
que
R es el grupo 2
R^{1} es hidrógeno o halógeno;
X es (CH_{2})_{n}-;
CH(R^{2})(CH_{2})_{n}-;
-CH_{2}O(CH_{2})_{n}-; -CH_{2}NH-; bencilo,
-C(R^{2})=CH-; -CH_{2}CH(OH)-; o
tiazol-2,5-diilo;
Y es -S-S-;
-(CH_{2})_{n}-; -O-; -NH-; -N(R^{2})-; -CH=CH-;
-NHC(O)NH-;
-N(R^{2})C(O)N(R^{2})-;
-N[CH_{2}C_{6}H_{3}(OCH_{3})_{2}]-;
-N(CH_{2}C_{6}H_{5})-; -N(CH_{2}C_{6}H_{5})C(O)N(CH_{2}C_{6}H_{5})-; -N(alcoxialquilo)-; N(cicloalquil-metilo)-; 2,6-piridilo; 2,5-furanilo; 2,5-tienilo; 1,2-ciclohexilo; 1,3-ciclohexilo; 1,4-ciclohexilo; 1,2-naftilo; 1,4-naftilo; 1,5-naftilo; 1,6-naftilo; bifenileno; o 1,2-fenilen-1,3-fenileno y 1,4-fenileno, en los que los grupos fenileno están opcionalmente sustituidos por 1-4 sustituyentes seleccionados entre halógeno, alquilo inferior, alcoxi inferior, hidroxi, carboxi, COO-alquilo inferior, nitrilo, 5-tetrazol, (ácido 2-carboxílico pirrolidin-1-il)-2-oxo-etoxi, N-hidroxicarbamimidoilo, 5-oxo[1,2,4]oxadiazolilo, 2-oxo-[1,2,3,5]oxatiadiazolilo, 5-tioxo[1,2,4]oxadiazolilo y 5-terc-butilsulfanil-[1,2,4]oxadiazolilo;
-N(CH_{2}C_{6}H_{5})-; -N(CH_{2}C_{6}H_{5})C(O)N(CH_{2}C_{6}H_{5})-; -N(alcoxialquilo)-; N(cicloalquil-metilo)-; 2,6-piridilo; 2,5-furanilo; 2,5-tienilo; 1,2-ciclohexilo; 1,3-ciclohexilo; 1,4-ciclohexilo; 1,2-naftilo; 1,4-naftilo; 1,5-naftilo; 1,6-naftilo; bifenileno; o 1,2-fenilen-1,3-fenileno y 1,4-fenileno, en los que los grupos fenileno están opcionalmente sustituidos por 1-4 sustituyentes seleccionados entre halógeno, alquilo inferior, alcoxi inferior, hidroxi, carboxi, COO-alquilo inferior, nitrilo, 5-tetrazol, (ácido 2-carboxílico pirrolidin-1-il)-2-oxo-etoxi, N-hidroxicarbamimidoilo, 5-oxo[1,2,4]oxadiazolilo, 2-oxo-[1,2,3,5]oxatiadiazolilo, 5-tioxo[1,2,4]oxadiazolilo y 5-terc-butilsulfanil-[1,2,4]oxadiazolilo;
X' es -(CH_{2})_{n}-;
-(CH_{2})_{n}CH(R^{2})-;
-(CH_{2})_{n}OCH_{2}-; -NHCH_{2}-; bencilo,
-CH=C(R^{2})-, -CH(OH)CH_{2}; o
tiazol-2,5-diilo;
R^{2} es alquilo inferior, alcoxi inferior o
bencilo y
n es 0-3,
o una sal o mono o diéster
farmacéuticamente aceptable de la
misma.
Sorprendentemente, se ha descubierto que agentes
de acuerdo con la presente invención son drásticamente potentes
in vivo para suprimir la proteína diana de la circulación
causando que se elimine rápidamente. La presente invención
proporciona moléculas de fármaco que se unen específicamente por
proteínas diana individuales y después captan la capacidad normal,
exquisitamente sensible del cuerpo de reconocer y destruir proteínas
autólogas que han experimentado cambios en la conformación o
ensamblaje.
El papel fisiológico normal de cada proteína
depende críticamente de su conformación molecular apropiada y/o
ensamblaje, y el cuerpo tiene mecanismos poderosos para detectar y
destruir proteínas que están dañadas, agregadas o mal plegadas. El
propósito de la presente invención es dirigirse específicamente a
proteínas individuales y causar que se identifiquen por los propios
mecanismos fisiológicos del cuerpo que requieren una rápida
eliminación y destrucción. Para conseguir este efecto la invención
usa ventajosamente agentes palindrómicos que agregan las proteínas
como dímeros o agregados de orden mayor.
La afinidad de cada interacción individual de
ligando-sitio de unión a proteína no tiene que se
particularmente elevada con la condición de que el ligando sea
específico para cada proteína diana. Es posible que una constante
de disociación de hasta 10 milimolar fuera suficiente. Sin embargo,
se prefiere que la constante de disociación no sea más de 1
milimolar, más preferiblemente menos de 100 micromolar, más
preferiblemente menos de 10 micromolar. La afinidad es
preferiblemente aproximadamente micromolar o mayor. Se ha
descubierto que la afinidad micromolar es suficiente en el caso de
SAP, aunque es claramente deseable la mayor afinidad posible.
En los agentes de la presente invención, aunque
los ligandos pueden unirse directamente juntos por un enlace
covalente, los ligandos se co-unen preferiblemente
de forma covalente por un enlazador. Esto posibilita que los
ligandos se separen suficientemente de forma espacial por lo que
puede unirse una pluralidad de proteínas diana al agente sin que
una proteína impida la unión de la otra proteína o proteínas. Cuando
el agente tiene dos ligandos, el enlazador típicamente es lineal;
un estructura general preferida es
ligando-enlazador-ligando. Esto se
llama convenientemente un "palíndromo" para los propósitos de
la presente solicitud.
En el caso de SAP, una clase de agentes
comprende las D-prolinas de fórmula expuesta
anteriormente, preferiblemente ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-carboxílico
o una sal o mono o diéster farmacéuticamente aceptable del
mismo.
El agente puede usarse para eliminar poblaciones
de proteínas no deseadas del plasma de sujetos humanos o animales.
A proporciones molares apropiadas de agente a proteína diana, el
agente entrecruza pares de moléculas proteicas para producir
complejos que se reconocen en el cuerpo como anormales y después se
eliminan y catabolizan rápidamente. Esto conduce a la eliminación
sustancial o completa de la proteína diana y confiere
beneficio
terapéutico.
terapéutico.
Las composiciones farmacéuticas pueden
formularse comprendiendo un agente de acuerdo con la presente
invención incorporando opcionalmente un excipiente, diluyente o
vehículo farmacéuticamente aceptable. Las composiciones
farmacéuticas pueden estar en forma de un profármaco que comprende
el agente o un derivado del mismo que llega a ser activo solamente
cuando se metabolizan por el destinatario. La naturaleza exacta y
las cantidades de los componentes de dichas composiciones
farmacéuticas pueden determinarse empíricamente y dependerán en
parte de la vía de administración de la composición. Las vías de
administración a los destinatarios incluyen oral, bucal,
sublingual, por inhalación, tópica (incluyendo oftálmica), rectal,
vaginal, nasal y parenteral (incluyendo intravenosa,
intra-arterial, intramuscular, subcutánea e
intra-articular). Por conveniencia de uso, las
dosificaciones de acuerdo con la presente invención se administran
preferiblemente por vía oral pero esto dependerá del fármaco real y
su biodisponibilidad. Una dosificación típica será de 50 a 500 mg
por día por vía oral o por infusión intravenosa continua, o
inyección subcutánea intermitente, por ejemplo de ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-
carboxílico.
carboxílico.
La presente invención se describirá ahora con
mayor detalle solamente a modo de ejemplo, con referencia a los
siguientes Ejemplos y a los dibujos adjuntos en los que:
la Figura 1 muestra la estructura cristalina de
rayos X tridimensional de SAP en complejo con un agente de la
presente invención;
la Figura 2A muestra una vista detallada de la
Figura 1 y la Figura 2B muestra una representación alternativa
detallada de parte de la Figura 1;
la Figura 3 muestra el efecto de un agente de la
presente invención en SAP en ratones in vivo;
la Figura 4 muestra el efecto de infusión de un
agente de la invención en valores de SAP plasmático en pacientes
con amiloidosis sistémica;
la Figura 5 muestra el efecto del agente en seis
horas usando centelleografía con ^{123}I-SAP;
la Figura 6 muestra el efecto del agente hasta
48 horas usando centelleografía con
^{123}I-SAP;
la Figura 7 muestra la concentración en plasma
del agente y su efecto sobre SAP durante infusión
intravenosa;
y
y
la Figura 8 muestra el efecto de inyección
subcutánea del agente en paciente con amiloidosis sistémica.
\vskip1.000000\baselineskip
Se ideó y usó un método para explorar y ensayar
inhibidores de la unión de componente amiloide P sérico (SAP) a
fibrillas amiloides in vitro en colaboración con F
Hoffmann-La Roche Ltd para identificar una molécula
principal adecuada para el desarrollo de fármacos. Por consiguiente
se exploró una biblioteca de compuestos candidatos. El programa de
química médica de colaboración posterior condujo a la síntesis de
una familia de moléculas de ácido carboxílico, que contienen
anillos de pirrolidona, de los que el más estudiado es el ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-carboxílico.
Esta molécula y los compuestos relacionados (documento
EP-A-0915088) son inhibidores
moderadamente potentes de la unión de SAP a fibrillas amiloides
in vitro, con valores de IC_{50} de aproximadamente
0,5-1,0 \muM. Sin embargo, hay inhibidores más
potentes que el compuesto principal original, que era
1-(3-mercapto-2-metil-1-oxopropil)-D-prolina,
que contiene justo un único anillo de D-prolina y
carboxilato.
SAP es un pentámero con 5 protómeros asociados
no covalentemente que tienen cada uno un único sitio de unión a
ligando dependiente de calcio en una cara plana, la cara de unión
(B) de la molécula (9). En ausencia de calcio, SAP humano forma
dímeros decaméricos estables, probablemente por interacciones cara A
a cara A (11). En presencia de calcio, SAP humano aislado se agrega
rápidamente y precipita, como resultado de la formación de redes
moleculares debido a la unión del carboxilato expuesto del resto de
Glu167 en una molécula SAP por el sitio de unión a ligando
dependiente de calcio de otra molécula SAP (12,13). Esta
autoagregación de SAP se inhibe por otros ligandos a los que se une
SAP, y todos los inhibidores presentes de la unión de SAP a
fibrillas amiloides eran activos en este aspecto. Sin embargo, se
muestra en este documento que la mayor potencia del ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-carboxílico
y compuestos relacionados, como inhibidores de la unión de SAP a
fibrillas amiloides in vitro, está provocada por su capacidad
de entrecruzar pares de moléculas SAP. La estructura palindrómica
del ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-carboxílico
posibilita que no sólo el bloqueo de los sitios de unión a ligando
en protómeros SAP individuales, sino que también podría entrecruzar
pares de moléculas SAP pentaméricas para formar dímeros decaméricos
B-B cara a cara. El análisis de filtración en gel
de mezclas de SAP aislado con ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-carboxílico,
a proporciones entre equimolar y un exceso molar de 100 veces de
fármaco (peso molecular 340 Da) a protómeros SAP (25.462 Da),
muestra que todos los SAP son decaméricos (Tabla 1). Sin embargo, a
un exceso molar de 128 veces o mayor, todos los SAP eluyen en un
volumen correspondiente a su forma pentamérica sencilla, porque
cada sitio de unión después se ocupa por una molécula de ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-carboxílico
individual diferente, evitando el entrecruzamiento y
dimerización.
dimerización.
\vskip1.000000\baselineskip
La proteína C reactiva (CRP) es una pentraxina
estrechamente relacionada con SAP. Se mezclaron muestras de SAP o
CRP humanos puros aislados con ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-carboxílico
a las proporciones molares mostradas, con respecto al protómero de
pentraxina, en solución salina tamponada con Tris de fuerza iónica
fisiológica pH 8,0, y se analizaron por cromatografía de exclusión
de tamaño precisamente como se ha descrito previamente (14). Las
mezclas y los eluyentes de la columna no contenían iones calcio o
contenían calcio 2 mM, y las concentraciones de fármaco apropiadas
para mantener las proporciones molares indicadas anteriormente. En
ausencia de un ligando específico al que pueda unirse, SAP humano
purificado es insoluble en presencia de calcio y eluye como
agregados de alto peso molecular en el volumen de huecos de la
columna (14). Sin embargo, en ausencia de calcio y ligando, SAP
aislado solo forma decámeros estables, proporcionando un excelente
marcador para el volumen de elución de este ensamblaje molecular
(14). CRP humana es un pentámero estable en presencia o ausencia de
calcio y por tanto proporciona un marcador robusto para la posición
de elución de la forma molecular (14).
El modelo molecular de dos moléculas SAP
pentaméricas nativas entrecruzadas por unión entre ellas de la
molécula de ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-carboxílico
palindrómica, se confirma por la estructura cristalina de rayos X
tridimensional del complejo de SAP con el fármaco en presencia de
calcio, como se muestra en vistas representativas a continuación
(Figuras 1 y 2). Estos descubrimientos son coherentes con las
observaciones publicadas sobre el complejo SAP-dAMP
(10) y el análisis cromatográfico (Tabla
1).
1).
Estudios in vivo de
1-(3-mercapto-2-metil-1-oxopropil)-D-prolina,
el compuesto principal original, muestran que inhibe la unión de
SAP a depósitos amiloides inducidos experimentalmente en ratones y
disocia SAP que ya se había unido en los depósitos. Los estudios
con ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-carboxílico
confirmaron que es más activo en estos aspectos que
1-(3-mercapto-2-metil-1-oxopropil)-D-prolina.
La potencia del ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-carboxílico
in vivo se consideró inicialmente coherente con su valor de
IC_{50} inferior in vitro. Sin embargo, el ensamblaje
decamérico de moléculas SAP pentaméricas, inducido por la capacidad
de entrecruzamiento del fármaco palindrómico, es una configuración
molecular anormal que, de acuerdo con la presente invención, se
reconocerá in vivo y se eliminará rápidamente de la
circulación. Esta acción del fármaco, que conduce a la eliminación
masiva de SAP del plasma, hace una contribución crítica a la
retirada de SAP de los depósitos amiloides porque SAP en amiloide
se obtiene de, y en equilibrio con, la combinación de SAP en
plasma.
El ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-carboxílico
no se metabolizó en ratones y se excretó muy rápidamente,
predominantemente en la orina, con una pequeña cantidad en la bilis.
Sin embargo, la inyección uniforme intermitente intraperitoneal o
subcutánea de ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-carboxílico
inhibió la captación de marcador SAP humano radiomarcado en
depósitos amiloides AA de ratón inducidos experimentalmente. Cuando
se administró ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-carboxílico
por infusión continua durante 5 días mediante una bomba osmótica
intravascular, se disoció tanto el marcador SAP humano radiomarcado
con el que se habían cargado previamente los depósitos amiloides,
como todo el SAP de ratón endógeno en los depósitos (Figura 3).
Incuso 50 \mug/kg/día de ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-carboxílico
disocia significativamente SAP humano de los depósitos (no
mostrado), pero se requerían 1,5 mg/kg/día para disociar cualquier
SAP de ratón endógeno significativamente, y hubo un claro efecto de
respuesta a la dosis hasta 15 mg/kg/día, que retiró el SAP de ratón
(Figura 3). Una única inyección intraperitoneal de 5 mg de ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-carboxílico
aceleró la eliminación en plasma de marcador SAP humano
radiomarcado en ratones normales, pero no tuvo efecto significativo
sobre la eliminación de SAP de ratón radiomarcado (Figura 3). Sin
embargo, cuando se preincubó SAP de ratón o humano radiomarcado con
ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-carboxílico
in vitro, antes de la inyección intravenosa en ratones
normales, ambos marcadores se eliminaron de forma extremadamente
rápida (Figura 3). El complejo SAP-ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-carboxílico
se reconoce evidentemente como anormal in vivo y se retira
rápidamente de la circulación, pero aparentemente se forma y/o
elimina de forma menos eficaz in vivo con SAP de ratón en
comparación con SAP humano. De forma remarcada, a pesar de la
biodisponibilidad oral muy limitada, la administración de ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-carboxílico
en el agua potable a ratones transgénicos para SAP humano, que
tienen valores medios en plasma de aproximadamente 80 mg/ml de SAP
humano, eliminó rápidamente SAP humano en circulación (Figura 3).
Los animales transgénicos para SAP humano no tienen ningún SAP de
ratón en circulación, pero ni la administración oral, ni la
inyección intermitente o infusión continua de ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-carboxílico
a ratones normales de tipo silvestre, causó la eliminación de su
SAP en
circulación.
circulación.
Se administró ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-carboxílico
durante 48 horas por infusión intravenosa a 8 pacientes con
amiloidosis sistémica (7 con tipo AL y uno con tipo AA), un
paciente con amiloidosis AL localizada minoritaria, y uno que es un
vehículo de la variante de transtiretina Ala60 amiloidogénica pero
que no tiene amiloidosis clínica. Hubo una eliminación drástica,
rápida y un uniforme de SAP en circulación en todos los objetos. En
estudios similares con infusión continua lenta, la concentración de
SAP comenzó a caer cuando se habían dado aproximadamente 2 mg de
ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-carboxílico,
y por lo tanto en estudios posteriores se inyectó está cantidad en
forma de un bolo en el comienzo, seguido por infusión a los índices
mostrados (Figura 4). A un índice de infusión de 0,1 mg/kg/día, se
ralentizó la eliminación de SAP y fue menos completa, pero a 0,25
mg/kg/día y todos los índices mayores hasta un máximo de 6
mg/kg/día, SAP se eliminó casi completamente del plasma al final de
la infusión, independientemente de la carga de amiloide (Figura 4).
Sin embargo, después de que hubo cesado la infusión de fármaco, la
concentración de SAP en plasma volvió rápidamente a la normalidad
en individuos con poco o ningún amiloide, mientras que esta
recuperación se ralentizó marcadamente en sujetos con amiloidosis
significativa. En un paciente con una carga de amiloide muy
elevada, la concentración de SAP en plasma permaneció por debajo del
25% de su valor inicial 20 días después de la infusión. La mayoría
de la producción diaria de SAP, que es aproximadamente
50-100 mg por día (15), se estaba distribuyendo de
forma uniforme en los depósitos de amiloide antes de que llegara a
estar disponible para renovar la combinación de plasma. Esta es una
evidencia indirecta muy fuerte de que incluso dicha breve infusión
de ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-carboxílico
había eliminado sustancialmente el SAP asociado a amiloide.
Se obtuvo una evidencia directa de la
eliminación de SAP del amiloide en los órganos y para el mecanismo
de acción del ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-carboxílico
por centelleografía del cuerpo completo cuantitativa usando
^{123}I-SAP como marcador. Cada paciente recibió
una dosis convencional de ^{123}I-SAP 24 horas
antes de que comenzará la infusión con ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-carboxílico
y se exploró inmediatamente antes del tratamiento para proporcionar
una imagen y valores iniciales para la localización del marcador en
los depósitos amiloides. Después se exploraron a intervalos, hasta
el final de la infusión de 48 horas. El ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-carboxílico
causó una eliminación drástica del marcador del plasma, de forma
exactamente paralela en las imágenes de centelleografía y en el
recuento de muestras sanguíneas, y la eliminación de SAP se controló
por inmunoensayo del suero. Seis horas después del inicio del
tratamiento, y persistiendo después de ello, la señal de combinación
de sangre prácticamente desapareció (Figuras 5, 6), y hubo una
acumulación notable de marcador en el hígado, identificando este
órgano como el sitio para el que el ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-carboxílico
causó la eliminación del SAP en circulación. Al mismo tiempo hubo
una disminución marcada en la retención de marcador en depósitos
amiloides en otros sitios, ejemplificados por el bazo y los riñones,
en contraste con la situación habitual en pacientes con amiloidosis
no tratados de control (Tabla 2;
Figura 6).
Figura 6).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Todos los pacientes tenían amiloidosis AL
sistémica y recibieron una dosis de marcador intravenosa
convencional de ^{123}I-SAP a tiempo cero.
Después de la formación de imágenes de centelleografía cuantitativa
del cuerpo completo a las 24 horas, se obtuvo la captación en el
hígado y el bazo como el 100% para cada individuo. Después comenzó
la infusión intravenosa del fármaco ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-carboxílico
y se repitió la centelleografía con el recuento del órgano a las 48
horas. Los controles no recibieron tratamiento. El significado de
las diferencias entre los dos grupos se buscó por ensayo t.
Previamente se ha demostrado en ratones que el
hígado, y específicamente el hepatocito, son el único sitio
significativo de eliminación y catabolismo tanto de SAP de ratón
como humano in vivo (16). Además, SAP
asialo-humano se elimina instantáneamente por el
hígado en seres humanos, por el receptor de asialoglicoproteína de
hepatocitos, y se han formado imágenes de este proceso usando
^{123}I-asialo SAP (17). El ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-carboxílico
desencadena evidentemente la captación hepática similarmente rápida
de SAP in vivo, conduciendo a una eliminación prácticamente
total de SAP en circulación. Esto promueve la redistribución de SAP
de los tejidos al plasma y suplementa el efecto del ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-carboxílico
como inhibidor competitivo de la unión de SAP a fibrillas
amiloides, conduciendo de este modo a la retirada altamente eficaz
de SAP de los depósitos amiloides.
La potencia del ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-carboxílico
en la eliminación de SAP en circulación fue remarcable, con valores
de SAP que bajan cuando la proporción de concentración de fármaco a
pentámetro SAP en el plasma se aproximaba a equimolar (Figura 7).
Los estudios de filtración en gel in vitro mostraron que
incluso esta concentración muy baja de fármaco es suficiente para
generar algunos dímeros de SAP (Tabla 3), que son pares de moléculas
SAP pentaméricas entrecruzadas por moléculas de ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-carboxílico
para formar el ensamblaje decamérico observado en la estructura
cristalina (Figuras 1, 2). Ésta es evidentemente la especie
reconocida como normal y eliminada rápidamente por el hígado.
Se mezclaron alícuotas de una única combinación
de suero humano normal completo que contenía SAP y CRP, con ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-carboxílico
a las proporciones molares mostradas, con respecto al protómero de
pentraxina, y se analizaron por cromatografía de exclusión de
tamaño precisamente como se ha descrito previamente (14). Las
mezclas y los eluyentes de la columna no contenían iones calcio o
contenían calcio 2 mM, y las concentraciones de fármaco apropiadas
para mantener las proporciones molares indicadas anteriormente. SAP
en suero completo es un ensamblaje pentamérico soluble estable de
protómeros, estabilizado por la presencia de la concentración
elevada normal de albúmina sérica. Sin embargo, según se separa SAP
de la albúmina sérica durante filtración en gel con un eluyente que
contiene calcio, el SAP se autoagrega y eluye completamente como
polímeros de elevado peso molecular en el volumen de huecos de la
columna. Esto es porque, en ausencia de un ligando específico al que
pueda unirse, SAP humano aislado es insoluble en presencia de
calcio (14). Sin embargo, en ausencia de calcio, donde no puede
suceder unión al ligando o autoagregación, SAP forma decámeros
estables, proporcionando un marcador excelente para el volumen de
elución de este ensamblaje molecular (14). CRP humana es un
pentámero estable en presencia o ausencia de calcio y por tanto
proporciona un marcador robusto para la posición de elución de la
forma molecular (14). Incluso una concentración equimolar del
fármaco, algo del SAP se solubilizó como complejos
fármaco-decámero estables, y a un exceso molar de
100 veces del fármaco, todo el SAP estaba en esta forma.
La potencia del ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-carboxílico
se confirmó por la observación de que la inyección subcutánea de
justo 0,25 mg/kg/día, dada en dosis divididas cada 12 horas, tenía
el mismo efecto en SAP plasmático (Figura 8) que una infusión
intravenosa del fármaco.
El ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-carboxílico
se dirige específicamente a SAP in vivo, a través de la
capacidad de unión a ligando específico de SAP, pero adicionalmente,
como consecuencia de la estructura palindrómica del fármaco, de
acuerdo con la presente invención, causa la agregación de moléculas
SAP pentaméricas nativas en complejos decaméricos de fármaco y SAP
que después se eliminan rápidamente por el hígado. Este nuevo
efecto no se pretendía durante el desarrollo del ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-carboxílico
como inhibidor de la unión de SAP a fibrillas amiloides, y ni se
buscó ni se esperaba. Representa un ejemplo bien documentado de la
presente invención y potencia drásticamente la disociación de SAP de
los depósitos amiloides, que es el objetivo terapéutico en la
amiloidosis. Dicha eliminación farmacológica dirigida de una
proteína plasmática en circulación representa un nuevo mecanismo,
previamente no descrito de la acción de fármacos, con aplicabilidad
amplia a muchas proteínas diferentes y patologías.
Figura 1: Estructura cristalina de rayos X
tridimensional de SAP en complejo con el ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-carboxílico.
Vista lateral que muestra dos moléculas SAP tipo
disco pentaméricas (9, 10) de canto, entrecruzadas por cinco
moléculas de ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-carboxílico,
estando los restos de D-prolina terminales de cada
uno en el bolsillo de unión a ligando dependiente de calcio de los
protómeros apropiados.
Figura 2: Estructura cristalina de rayos X
tridimensional de SAP en complejo con ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-carboxílico.
Vistas detalladas que muestran dos
representaciones diferentes de los restos de unión a ligando en los
bolsillos de unión a ligando dependiente de calcio de dos
protómeros apropiados de diferentes moléculas SAP, y la densidad
electrónica y/o la estructura molecular del ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-carboxílico
que está entre ellos.
Figura 3: Efectos del ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-carboxílico
en SAP en ratones in vivo. Panel superior: se dio a grupos
de 10 ratones de edad, sexo y peso coincidentes con amiloidosis AA
sistémica reactiva inducida experimentalmente una única dosis de
carga de SAP humano marcado con ^{125}I en el día -1, y
recibieron minibombas osmóticas implantadas que suministraban las
dosis mostradas de ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-carboxílico
(indicadas en las Figuras como "desapina" por conveniencia).
Se controló la eliminación de los depósitos amiloides, catabolismo
y excreción del marcado SAP humano globalmente por el recuento
corporal completo de los ratones (izquierda) y se determinó la
cantidad total de SAP de ratón en los órganos amiloidóticos después
de sacrificar a los animales en el día 5 (derecha). Panel central,
izquierda: 4 grupos cada uno de 10 ratones de edad, sexo y peso
coincidentes con amiloidosis AA sistémica reactiva inducida
experimentalmente recibieron una inyección intravenosa de SAP
humano o de ratón puro marcado con ^{125}I a tiempo cero y después
se les extrajo sangre después de 15 minutos y en los otros momentos
mostrados. Inmediatamente después de la extracción de sangre a los
15 minutos, dos grupos, uno que había recibido SAP y el otro que
había recibido SAP de ratón, recibieron una única inyección
intraperitoneal de 5 mg de ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-carboxílico
(desapina). El marcador restante en la circulación se expresa como
el porcentaje de la media (SD) de la cantidad en un momento puntual
de 15 minutos para cada grupo. Panel central, derecha: grupos cada
uno de 10 ratones de edad, sexo y peso coincidentes con amiloidosis
AA sistémica reactiva inducida experimentalmente recibieron una
inyección intravenosa de SAP humano o de ratón puro marcado con
^{125}I a tiempo cero y después se les extrajo sangre después de
15 minutos y en los otros momentos mostrados. En uno de cada uno de
los pares de grupos que recibieron SAP de ratón o humano
respectivamente, el marcador se había mezclado con ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-carboxílico
(desapina) y se incubaron in vitro antes de la inyección a
los animales. El marcador restante en la circulación se expresa
como la radioactividad total media (SD) por gramo de sangre en cada
grupo. Panel inferior: efecto de la administración del ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-carboxílico
(desapina) en el agua potable a las concentraciones mostradas, en
valores de SAP humano en circulación en ratones transgénicos para
SAP humano. Los ratones de aproximadamente 20 g de peso corporal
consumen aproximadamente 3 ml de agua por día.
Figura 4: Efecto de la infusión intravenosa de
ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-carboxílico
en valores de SAP plasmático en pacientes con amiloidosis
sistémica. Los pacientes con diferentes formas de amiloidosis
sistémica y con cargas de amiloide variables recibieron las dosis
del fármaco mostradas durante un periodo de 48 horas. Los valores
de SAP en circulación se midieron por electroinmunoensayo (18) en
muestras tomadas durante y después de la infusión, en los momentos
mostrados. Cada línea representa un paciente individual
diferente.
Figura 5: Centelleografía con
^{123}I-SAP del cuerpo completo antes y 6 horas
después del comienzo de la infusión de ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-carboxílico.
Este paciente, con una carga moderada de amiloide AL en el bazo y
los riñones, tuvo un fondo en combinación de sangre notable de
marcador en el corazón y la circulación antes de la administración
del fármaco. A las 6 horas el fondo en combinación de sangre está
completamente ausente y el hígado, que es el único sitio de
catabolismo de SAP in vivo (16, 17) ha captado el marcador
mientras que la intensidad de la señal de SAP del bazo y los riñones
amiloidóticos está significativamente reducida (recuentos de los
órganos no mostrados).
Figura 6: Centelleografía con
^{123}I-SAP del cuerpo completo y 24 y 48 horas
después del comienzo de la infusión de ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-carboxílico.
Este paciente, con una carga moderada de amiloide AL en el bazo y
los riñones, tuvo un fondo en combinación de sangre notable de
marcador en el corazón y la circulación antes de la administración
del fármaco. A las 24 y 48 horas, el fondo en combinación de sangre
está completamente ausente y el hígado, que es el único sitio de
catabolismo de SAP in vivo (16, 17), ha captado el marcador
y los productos catabólicos se están excretando en la orina, como
se muestra por la señal de la vejiga. La intensidad de la señal de
SAP del bazo y los riñones amiloidóticos está significativamente
reducida: a las 24 horas los recuentos del bazo son del 85% del
tiempo
\hbox{0, los riñones el 77%; a las 48 horas, el bazo al
54%, los riñones al 50%.}
Figura 7: Concentración en plasma del ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-carboxílico
y de SAP durante una infusión de 48 horas.
Dos pacientes individuales con amiloidosis
sistémica y cargas amiloides moderadas recibieron ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-carboxílico
(desapina) por infusión intravenosa a los índices continuos
mostrados. Las concentraciones de SAP en circulación comenzaron a
caer casi inmediatamente y se dividieron a la mitad cuando las
concentraciones de fármaco y protómeros SAP eran equimolares.
Figura 8: Efecto de la administración de ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-carboxílico
por inyección subcutánea sobre los vales de SAP en circulación y la
retención en los órganos viscerales de marcador
^{123}I-SAP.
Las dosis de ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-carboxílico
(desapina)
mostradas se dieron por inyecciones subcutáneas cada 12 horas a dos pacientes individuales con amiloidosis sistémica, y con cargas amiloides pequeñas y moderadas respectivamente. La desaparición de SAP en circulación fue de forma eficaz la misma que durante la infusión intravenosa del fármaco, y en el paciente ilustrado en el panel de la derecha, que había recibido una dosis marcadora de ^{123}I-SAP, hubo acumulación de SAP en el hígado y una eliminación acelerada del bazo.
mostradas se dieron por inyecciones subcutáneas cada 12 horas a dos pacientes individuales con amiloidosis sistémica, y con cargas amiloides pequeñas y moderadas respectivamente. La desaparición de SAP en circulación fue de forma eficaz la misma que durante la infusión intravenosa del fármaco, y en el paciente ilustrado en el panel de la derecha, que había recibido una dosis marcadora de ^{123}I-SAP, hubo acumulación de SAP en el hígado y una eliminación acelerada del bazo.
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Claims (4)
1. Uso de un agente para la preparación de una
composición para el tratamiento de un sujeto que tiene un trastorno
causado por una proteína patogénica por eliminación terapéutica de
la proteína patogénica del plasma del sujeto; en el que el
tratamiento comprende administrar al sujeto una dosificación del
agente suficiente para la eliminación terapéutica; en el que el
agente comprende una pluralidad de ligandos
co-unidos covalentemente para formar un complejo
con una pluralidad de las proteínas en presencia del mismo; en el
que al menos dos de los ligandos son iguales o diferentes y son
capaces de unirse por los sitios de unión a ligando presentes en la
proteínas, y en el que la proteína patogénica es componente de
amiloide P sérico (SAP) y el agente es una D-prolina
de fórmula
en las
que
R es el grupo 9
R^{1} es hidrógeno o halógeno;
X es (CH_{2})_{n}-;
CH(R^{2})(CH_{2})_{n}-;
-CH_{2}O(CH_{2})_{n}-; -CH_{2}NH-; bencilo,
-C(R^{2})=CH-; -CH_{2}CH(OH)-; o
tiazol-2,5-diilo;
Y es -S-S-;
-(CH_{2})_{n}-; -O-; -NH-; -N(R^{2})-; -CH=CH-;
-NHC(O)NH-;
-N(R^{2})C(O)N(R^{2})-;
-N[CH_{2}C_{6}H_{3}(OCH_{3})_{2}]-;
-N(CH_{2}C_{6}H_{5})-; -N(CH_{2}C_{6}H_{5})C(O)N(CH_{2}C_{6}H_{5})-; -N(alcoxialquilo)-; N(cicloalquil-metilo)-; 2,6-piridilo; 2,5-furanilo; 2,5-tienilo; 1,2-ciclohexilo; 1,3-ciclohexilo; 1,4-ciclohexilo; 1,2-naftilo; 1,4-naftilo; 1,5-naftilo; 1,6-naftilo; bifenileno; o 1,2-fenilen-1,3-fenileno y 1,4-fenileno, en los que los grupos fenileno están opcionalmente sustituidos por 1-4 sustituyentes seleccionados entre halógeno, alquilo inferior, alcoxi inferior, hidroxi, carboxi, COO-alquilo inferior, nitrilo, 5-tetrazol, (ácido 2-carboxílico pirrolidin-1-il)-2-oxo-etoxi, N-hidroxicarbamimidoilo, 5-oxo[1,2,4]oxadiazolilo, 2-oxo-[1,2,3,5]oxatiadiazolilo, 5-tioxo[1,2,4]oxadiazolilo y 5-terc-butilsulfanil-[1,2,4]oxadiazolilo;
-N(CH_{2}C_{6}H_{5})-; -N(CH_{2}C_{6}H_{5})C(O)N(CH_{2}C_{6}H_{5})-; -N(alcoxialquilo)-; N(cicloalquil-metilo)-; 2,6-piridilo; 2,5-furanilo; 2,5-tienilo; 1,2-ciclohexilo; 1,3-ciclohexilo; 1,4-ciclohexilo; 1,2-naftilo; 1,4-naftilo; 1,5-naftilo; 1,6-naftilo; bifenileno; o 1,2-fenilen-1,3-fenileno y 1,4-fenileno, en los que los grupos fenileno están opcionalmente sustituidos por 1-4 sustituyentes seleccionados entre halógeno, alquilo inferior, alcoxi inferior, hidroxi, carboxi, COO-alquilo inferior, nitrilo, 5-tetrazol, (ácido 2-carboxílico pirrolidin-1-il)-2-oxo-etoxi, N-hidroxicarbamimidoilo, 5-oxo[1,2,4]oxadiazolilo, 2-oxo-[1,2,3,5]oxatiadiazolilo, 5-tioxo[1,2,4]oxadiazolilo y 5-terc-butilsulfanil-[1,2,4]oxadiazolilo;
X' es -(CH_{2})_{n}-;
-(CH_{2})_{n}CH(R^{2})-;
-(CH_{2})_{n}OCH_{2}-; -NHCH_{2}-; bencilo,
-CH=C(R^{2})-, -CH(OH)CH_{2}; o
tiazol-2,5-diilo;
R^{2} es alquilo inferior, alcoxi inferior o
bencilo y
n es 0-3,
o una sal o mono o diéster
farmacéuticamente aceptable de la
misma.
2. Uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el
que cada ligando se selecciona para unirse por la proteína con una
constante de disociación que es no más de 1 milimolar.
3. Uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el
que la D-prolina es ácido
(R)-1-[6-(R)-2-carboxi-pirrolidin-1-il]-6-oxo-hexanoil]pirrolidina-2-carboxílico
o una sal o mono o diéster farmacéuticamente aceptable del
mismo.
4. Uso de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 3, en el que la dosificación está en el
intervalo de 0,1 a 6 mg/kg por sujeto/día.
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