ES2276829T3 - Derivados de acido benzoico y su utilizacion. - Google Patents

Derivados de acido benzoico y su utilizacion. Download PDF

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ES2276829T3 ES01973891T ES01973891T ES2276829T3 ES 2276829 T3 ES2276829 T3 ES 2276829T3 ES 01973891 T ES01973891 T ES 01973891T ES 01973891 T ES01973891 T ES 01973891T ES 2276829 T3 ES2276829 T3 ES 2276829T3
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Tania Kastelic
Dominique Cheneval
Albert Leutwiler
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Abstract

Un compuesto que tiene una formula estructural (I): *** o osteoisomeros de este, o sales o hidratos de este característicamente aceptables o esteres hidrolisables de este que sean fisioligicamente aceptables, en donde: R1 es H, OH halogeno, (C1-C4) alquilo, hasta C4 alquenilo, (C1-C4) alcoxi, or (C1-C4) alquilo-COO-; R2 es H, OH halogeno, (C1-C4) alquilo, hasta C4 alquenilo, (C1-C4) alcoxi, or (C1-C4) alquilo-COO-; R3 es H, OH halogeno, (C1-C4) alquilo, hasta C4 alquenilo, (C1-C4) alcoxi, or (C1-C4) alquilo-COO-; R4 es H, OH halogeno, (C1-C4) alquilo, hasta C4 alquenilo, (C1-C4) alcoxi, or (C1-C4) alquilo-COO-; R5 es H, OH halogeno, (C1-C4) alquilo, hasta C4 alquenilo, (C1-C4) alcoxi, or (C1-C4) alquilo-COO-; Y es O o -NR'', en donde R'' es H o (C1-C4) alquilo; n es 0-8 R6 es una lactona o un anillo lactámico con 5 a 8 mienbros. R7 es H, (C1-C4) alquilo, hasta C3 alquenilo, (C1-C4) alcoxi, fenil o (C1-C4) alquilo-COO-, en donde el anillo lactámico o de lactona incluye opcionalmente uno o masC=C enlaces dobles y el anillo lactámico o de lactona es opcionalmente sustituido con uno o mas (C1-C4) alquilo.

Description

Derivados de ácido benzoico y su utilización.
Esta invención se relaciona a derivados de ácido benzoico biológicamente activos y a su uso en el tratamiento y profilaxis de enfermedades. La invención se relaciona particularmente a una clase de compuestos que afectan la estabilidad del mRNA que contienen una o más secuencias inestables de mRNA.
Se ha encontrado que varios ácidos benzoicos manifiestan actividades de valor terapéutico Por ejemplo, en Japón Kokai 61-22046, 61-22047 y 61-76440, se demostró que los derivados de ácidos benzoicos representados por la siguiente formula general:
1
En donde R'1, R'2, R'3, R'4 y R'5 son iguales o diferentes, y cada uno representa hidrógeno o un alquilo medio o bajo, a condición de que todos no sean hidrógenos simultáneamente, y donde dos sustitutos vecinos pueden estar combinados para formar un anillo ciclo-alquilo que tiene 5 o 6 átomos de carbono, R'6 representa oxhidrilo, alcoxi bajo, o alquilo amino bajo de formula -NR'7 R'8, en donde R'7 y R'8 representan cada uno un hidrógeno o un alquilo bajo, y X' representa un grupo de la formula:
2
son capaces de inducir la diferenciación de células malignas, especialmente células de leucemia, de células morfológicamente y funcionalmente maduras las cuales no pueden seguir proliferando, y son por consiguiente farmacológicamente importantes y útiles para el tratamiento de proliferaciones malignas o enfermedades inmunes tales como el cáncer, reumatismo o psoriasis, y en Japón Kokai 62-21558, también se muestran compuestos relacionados.
La literatura también muestra la actividad y la medida de la actividad de esos compuestos por la diferenciación de las células de la leucemia promiclocitica humana aguda (HL-60).
La Patente de U.S. No. Re. 36,477 también revela derivados del ácido benzoico que actúan como agentes inductores de la diferenciación para células neoplásticas, especialmente células de leucemia, o como un agente terapéutico para psoriasis o para enfermedades inflamatorias o inmunes.
La Patente de U.S. No. 5,849,796 revela derivados de ácido benzoico orto-sustituidos que exhiben propiedades anti-arrítmicas y actúan como inhibidores del anti-portador celular Na+/H+. Adicionalmente, fue mostrado que estos compuestos son útiles como intermediarios en la preparación de medicamentos, particularmente de inhibidores del anti-portador celular Na+/H+.
Esta información de fondo es provista con el propósito de hacer conocer la información que el aspirante cree ser relevante para la presente invención Ninguna admisión es necesariamente intencional, ni debe ser interpretado, que alguna de la información precedente constituye material anterior en contra de la presente invención. La publicaciones que han sido citadas a lo largo de la especificación son incorporadas como referencias enteras en esta aplicación
Un objetivo de la presente invención es proveer derivados de ácido benzoico y sus aplicaciones.
\newpage
En concordancia con uno de los aspectos de la presente invención, esta provisto un compuesto que tiene como formula estructural (I):
3
o estereoisómeros de esta, o sales o hidratos farmacológicamente aceptables de esta y ésteres hidrolisables de esta, en donde:
R1 es H, OH halógeno, (C1-C4) alquilo, (C1-C4) alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
R2 es H, OH halógeno, (C1-C4) alquilo, (C1-C4) alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
R3 es H, OH halógeno, (C1-C4) alquilo, (C1-C4) alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
R4 es H, OH halógeno, (C1-C4) alquilo, (C1-C4) alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
R5 es H, OH halógeno, (C1-C4) alquilo, (C1-C4) alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-; (C1-C4) alquenilo corresponde hasta C4 alquenilo en las demandas.
Y es O o -NR^{1}, en donde R' es H o (C1-C4) alquilo;
n es 0-8;
R6 es un anillo de lactama o de lactona con 5 a 8 miembros.
R7 es H, (C1-C4) alquilo, (C1-C4) alquenilo, (C1-C4) alcoxi, fenil o (C1-C4) alquilo-COO, en donde el anillo de lactama o de lactona incluye opcionalmente uno o más C=C enlaces dobles y el anillo de lactama o de lactona es opcionalmente sustituido con uno o más (C1-C4) alquilo o (C1-C4) grupos alquenilos:
a condición de que cuando R1 = R2 = R3 = R4 = R5 = R7 = H, y Y es O, y n es 0, entonces R6 es otro que:
4
Los compuestos de la presente invención son útiles para el tratamiento de la prevención de trastornos con una etiología que se asocia o incluye la producción excesiva de citoquina, particularmente la producción de II-1B, tales como la artritis reumatoidea, osteoartritis, shock séptico, psoriasis, aterosclerosis, enfermedad inflamatoria del intestino, enfermedad de Crohn y asma. La revelación de EP 0606044 A anticipa lactonas para el tratamiento de enfermedades que son asociadas con la producción recesiva de citoquina.
La presente invención también provee compuestos para usar en la preparación de medicamentos para el tratamiento de cáncer y/o enfermedades malignas.
Breve descripción de los esquemas
La figura 1 representa gráficamente la perdida porcentual de la viabilidad de las células de cáncer siguiendo el tratamiento con varias concentraciones de un derivado de ácido benzoico, en comparación a la viabilidad de las células de control.
La figura 2 representa gráficamente el crecimiento relativo de las células de cáncer siguiendo el tratamiento con varias concentraciones de un derivado de ácido benzoico, en comparación al crecimiento de las células de control.
Descripción detallada de la invención
Los términos y abreviaciones usados en los siguientes ejemplos tienen sus significados normales si no han sido designados de otra manera. Por ejemplo, "ºC" se refiere a grados Celsius; "N" se refiere a normal o normalidad; "mmol" se refiere a minimol o milimoles; "g" se refiere a gramo o gramos; "ml" significa milímetro o milímetros; "M" se refiere a molar o molaridad; "p-" se refiere a para, "MS" se refiere a espectroscopia de masa; "IR" se refiere a espectroscopia infrarroja; y "NMR" se refiere a espectroscopia de resonancia magnética nuclear.
La presente invención provee un compuesto de la formula I:
5
estereoisómeros de esta, o sales o hidratos farmacológicamente aceptables de esta y ésteres hidrolisables de esta, en donde:
R1 es H, OH, halógeno, (C1-C4) alquilo, (C1-C4) alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
R2 es H, OH, halógeno, (C1-C4) alquilo, (C1-C4) alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
R3 es H, OH, halógeno, (C1-C4) alquilo, (C1-C4) alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
R4 es H, OH, halógeno, (C1-C4) alquilo, (C1-C4) alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
R5 es H, OH, halógeno, (C1-C4) alquilo, (C1-C4) alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
Y es O o -NR', en donde R' es H o (C1-C4) alquilo;
n es 0-8
R6 es un anillo de lactama o de lactona con 5 a 8 miembros.
R7 es H, (C1-C4) alquilo, (C1-C4) alquenilo, (C1-C4) alcoxi, fenil o (C1-C4) alquilo-COO, en donde el anillo de lactama o de lactona es opcionalmente sustituido con uno o mas (C1-C4) alquilo o (C1-C4) grupos alquenilos. Halógeno o halo usados aquí se refieren a F, Cl, BR o I a menos que sea indicado de otra manera, preferiblemente Cl.
En una encarnación de la presente invención un compuesto de formula (I) es provisto en forma libre o en la forma de un éster hidrolisable fisiológicamente aceptable, en donde:
R1 = H, OH, MeCOO- o Metoxi,
R2 = H;
R3 = H, OH, MeCOO- o Metoxi;
R4 = H, Metoxi o halógeno;
R5 = H, OH, Metoxi o (C1-C4) alquilo;
Y es O;
R6 es
6
en donde, m es 0-4;
R7 = H, Metil, Isopropil.
En otra encarnación de la presente invención un compuesto de formula (I) es provisto en forma libre o en la forma de un éster hidrolisable fisiológicamente aceptable, en donde:
R1 es H, -OH, MeO- o MeCOO-i,
R2 es H; R4 es H o Halógeno
R3 es H, -OH, MeO- o MeCOO-;
R4 es H o Halógeno;
R5 es -OH, MeO-, MeCOO- o Metil.
En otra encarnación de la presente invención un compuesto de formula (I) es provisto en forma libre o en la forma de un éster hidrolisable fisiológicamente aceptable, en donde:
R1 es H o MeO, R3 es H, -OH o MeO-; R4 es H y R5 es Metoxi o Metil.
Compuestos de la presente invención incluyen, pero no se limitan a las siguientes moléculas ejemplares:
7
En otra encarnación de la presente invención compuestos de la presente incluyen, pero no se limitan a las siguientes moléculas ejemplares:
8 
\newpage
Como anotado anteriormente, esta invención incluye las sales de los compuestos definidos por la formula I que son farmacéuticamente aceptables. Un compuesto de esta invención puede poseer un grupo funcional suficientemente ácido, uno suficientemente básico, o ambos grupos funcionales, y reaccionar acordemente con cualquier número de bases orgánicas e inorgánicas, y ácidos inorgánicos y orgánicos, para formar una sal farmacéuticamente aceptable.
Esta invención abarca los futuros solvatos de compuestos de la Formula I que sean farmacéuticamente aceptables. Muchos de los compuestos de la formula I pueden ser combinados con solventes como agua, metanol, etanol y acetonitrilo para formar solvatos farmacéuticamente aceptables como el hidrato, metanolato, etanolato y acetonitrilato correspondientes.
Los compuestos de la presente invención pueden tener centros (quirales) asimétricos. Como una consecuencia de esos centros quirales, los compuestos de la presente invención ocurren como compañeros de raza, mezclas de enantiómeros y como enantiómeros individuales, así como diasterómeros y mezclas de diasterómeros. Todas las formas asimétricas, isómeros individuales (que pueden ser preparados vía síntesis estereoespecíficas o por separación de una mezcla sintetizada usada convencionalmente) y combinaciones de estos, están dentro del alcance de la presente invención.
Los prefijos "R" y "S" son usados adjuntamente como químicos orgánicos usados comúnmente para denotar la configuración absoluta de un centro quiral, de acuerdo a el sistema Cahn-Ingold-Prelog. El descriptor estereoquímico R (rectus) se refiere a la configuración de un centro quiral con una relación en el sentido de las manecillas del reloj de los grupos que siguen la trayectoria desde la prioridad mas alta hasta la segunda mas baja cuando son vistas desde el lado opuesto a aquel con el grupo de menor prioridad. El descriptor estereoquímico S (sinister) se refiere a la configuración de un centro quiral con una relación en el sentido opuesto a las manecillas del reloj de los grupos que siguen la trayectoria desde la prioridad mas alta hasta la segunda mas baja cuando son vistas desde el lado opuesto a aquel con el grupo de menor prioridad. La prioridad de los grupos es decidida usando usando reglas de secuencias descritas por Cahn et al., Angew. Chem., 78, 413-447, 1996 y Prelog, V. y Helmchen, G.; Angew. Chem. Int. Ed Eng., 21, 567-583, 1982
En adición al sistema R,S usado para designar la configuración absoluta de un centro quiral, el antiguo sistema D-L es también usado en este documento para denotar una configuración relativa, especialmente con referencia a amino ácidos y derivados de amino ácidos. En este sistema una proyección Fischer del compuesto es orientada de tal manera que el carbón-1 de la cadena padre este en la cima. El prefijo "D" es usado para representar la configuración relativa del isómero en el cual el grupo funcional (determinante) esta en el lado derecho del átomo de carbón en el centro quiral y "L", aquel del isómero en el cual esta en la izquierda.
Los compuestos de la presente invención tienen dobles enlaces carbono-carbono y pueden, por lo tanto formar isómeros cis/trans. La presente invención considera ambas mezclas de los isómeros y de los isómeros individuales aislados/purificados.
Los derivados de ácido benzoico para uso en la invención que abarcan sustituyentes -OH también pueden existir en la forma de derivados de éster farmacéuticamente aceptables y metabólicamente lábiles, y el uso de los cuales esta incluido dentro del alcance de la invención. Los ésteres farmacéuticamente aceptables son derivados de esteres profármacos preferibles, tales siendo transformables por solvólisis o bajo condiciones fisiológicas a individuos libres. Los ésteres profármacos farmacéuticamente aceptables que son preferidos son los derivados de un ácido carboxílico, un ácido carbónico mono éster o un ácido carbámico.
Preparación de los compuestos de la Formula (I)
De acuerdo a otro aspecto, la presente invención provee un proceso para la preparación de un compuesto de la Formula I, o un éster o amida metabólicamente lábil y farmacéuticamente aceptable de eso, o una sal farmacéuticamente aceptable de eso, lo que incluye:
a) Reaccionar un compuesto de formula (II)
9
en donde:
R1 es H, OH halógeno, (C1-C4) alquilo, (C1-C4) alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
R2 es H, OH halógeno, (C1-C4) alquilo, (C1-C4) alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
R3 es H, OH halógeno, (C1-C4) alquilo, (C1-C4) alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
R4 es H, OH halógeno, (C1-C4) alquilo, (C1-C4) alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
y X es halógeno;
con un compuesto de formula (III):
\vskip1.000000\baselineskip
10
en donde:
n' es 1-9; y
m es 0-4;
el compuesto (III) contiene opcionalmente uno o mas C=C enlaces dobles y es substituido con uno o mas grupos (C1-C4) alquilos o (C1-C4) alquenilo; en la presencia o ausencia de una base y un solvente apropiado. Ejemplos no limitantes de tales solventes son el diclorometano y el cloroformo.
El compuesto de la formula (II) puede ser preparado con la reacción del compuesto de la formula (IV):
\vskip1.000000\baselineskip
11
en donde: R1-R5 son iguales a las definidas anteriormente;
con un haluro de ácido de un ácido orgánico o inorgánico en la presencia de un solvente conocido por un trabajador hábil en las artes respectivas. Ejemplos no limitantes de tales haluros de ácido son el cloruro de tionilo, el tricloruro fosfórico, el tribromuro fosfórico, el pentacloruro fosfórico y el cloruro de oxalilo y ejemplos no limitantes como el DMF o el THF; o
b) Haciendo reaccionar el compuesto de formula (IV) con un compuesto de formula (II) en la presencia de un ácido, como el Ácido clorhídrico, el ácido sulfúrico o el ácido aril sulfónico. Esta reacción puede ser llevada acabo bajo condiciones de destilación azeotrópica usando benceno como un solvente; o
c) haciendo reaccionar una sal álcali o alcalinoterrea de un compuesto de formula (IV):
12
en donde R1-R5 están definidas anteriormente;
con un compuesto de formula (V):
13
En donde;
X es F, Cl, BR o I;
n' es 1-9; y
m es 0-4;
y un compuesto de formula (V) puede contener opcionalmente uno o mas enlaces dobles y es opcionalmente substituido con uno o mas grupos (C1-C4) alquilo o (C1-C4) alquenilo;
en la presencia de solventes apróticos polares o con catalizadores de éteres corona: Ejemplos no limitantes de tales solventes apróticos polares son la acetona, el DMF y el DMSO.
Compuestos de la formula (IV) son comercialmente disponibles o pueden ser preparados usando procedimientos estándar conocidos por una persona hábil en el arte. Por ejemplo: hidrolizando un compuesto de formula (VI):
14
En donde:
R1-R5 están definidos anteriormente;
R8 es un (C1-C4) alquilo, arilo o arilalquilo.
Los compuestos de la formula (VI) están convenientemente hidrolizados en la presencia de un ácido, tal como el ácido clorhídrico o ácido sulfúrico, o una base, tal como como un hidróxido alcalino. La hidrólisis convenientemente realizada en un solvente acuoso como el agua y a una temperatura en el rango de 50 a 200ºC. Compuestos de la formula (VI) son comercialmente disponibles o pueden ser preparados usando procedimientos estándar conocidos por una persona hábil en el arte.
Los compuestos de formula (III) o (V) son comercialmente disponibles o pueden ser preparados usando procedimientos estándar conocidos por una persona hábil en el arte.
Actividad de los derivados de ácido benzoico
Los derivados de ácido benzoico de la presente invención exhiben varias propiedades bioquímicas, incluyendo una o mas de las siguientes: la habilidad de inhibir el crecimiento de células de cáncer, la habilidad de incrementar o restaurar la sensibilidad de una célula de cáncer a una o mas drogas anti-neoplásticas/citotóxicas; y la habilidad de inducir la degradación del mRNA. Los compuestos de la siguiente invención pueden ser analizados para demostrar el grado de sus actividades usando procedimientos estándar conocidos por una persona hábil en el arte. Métodos testigos ejemplares son contorneados aquí y no intentan limitar el alcance de la siguiente invención.
Actividad anti cancerígena
Como demostrado aquí de acuerdo a la presente invención, ciertos derivados de ácido benzoico pueden inhibir el crecimiento de células cancerígenas. Los compuestos de la presente invención pueden ser probados por su actividad como agentes anti cancerígenos en células o en ensayos substanciales in vivo como descrito aquí o en variantes de tales ensayos usando líneas y condiciones celulares apropiadas que serian fácilmente apreciadas por una persona hábil en el arte.
Los compuestos de esta invención pueden ser probados para la actividad anti cancerígena por medios convencionales, incluyendo por ejemplo, los métodos descritos debajo:
1. Metodología In Vitro
La citotoxicidad puede ser medida usando una metodología estándar para líneas celulares adherentes tales como el ensayo de microcultivo del tetrazólio (MTT). Detalles de este ensayo han sido publicados (Alley, M C et al, Cancer Research 48:589-601, 1988). Cultivos crecientes exponencialmente de células tumorosas tales como el carcinoma de colon HT-29 o el tumor de pulmón LX-1 son usadas para hacer cultivos en microplacas. Se siembran en 3000 células por pozo en placas de 96 pozos (en 150 ul o medios) y se dejan crecer durante la noche a 37ºC. Los compuestos de prueba son adicionado, en dilusiones de diez veces variando de 10^{-4}M a 10^{-10}M. Las células son luego incubados por 72 horas. Para determinar el número de células viables en cada pozo, el tinte MTT es adicionado (50 ul o 3 mg/ml de solución salina de Bromuro de 3-(4,5-dimetil-2-tiazolil)-2,5-difeniltetrazoilo). Esta mezcla es incubada a 37ºC por 5 horas, y después 50 ul de 25% SDS, pH2 es adicionado a cada pozo. Después de la noche de incubación la absorbencia de cada pozo en 550 nm es leída usando un lector ELISA. Los valores de la media \pmSD de los datos de pozos replicados son calculados, usando la formula % T/C (% células viables tratadas/control). 1 OD de células tratadas OD de células controlados X 100 + % T/C. La concentración del compuesto de prueba que da un T/C de inhibición de crecimiento del 50% es designado como el valor IC_{50}.
Un método alternativo para evaluar la actividad anti cancerígena de los compuestos de la presente invención incluye la determinación del efecto de un compuesto de prueba en la viabilidad de las células cancerígenas. Las células cancerígenas de crecimiento exponencial son tratadas con varias concentraciones del compuesto de prueba. Ejemplos de líneas celulares que pueden ser usadas en este método son MCF-7, MDA-MB-231, HCT116, KB 31, HCT-15 y DU 145 los cuáles son fácilmente obtenibles de ATCC, Bethesda, MD, USA.
Las células se incuban otras 24, 48 y 96 horas y son marcadas con una molécula que permite la diferenciación entre células viables y no viables, por ejemplo YOPRO-1 descrita en T. Idziorek et al., J Immunol Meth 185, 249 (1995). El porcentaje de viabilidad es luego comparado a las células de control. Una disminución en la viabilidad (mostrado como un incremento en % de perdida de viabilidad en la Figura 1) de las células tratadas en comparación con las células de control es una indicación de una actividad anti cancerígena.
Otro método para la evaluación de actividad anti cancerígena de los compuestos de la presente invención implica el monitoreo del efecto de los compuestos en la progresión del ciclo de la célula. Las células cancerígenas de crecimiento exponencial son tratadas con varias concentraciones del compuesto de prueba. Las células se incuban otras 24, 48 y 96 horas. Las células son destruidas y el dsDNA es marcado con YOPRO-1 como descrito en T. Idziorek et al., J Immunol Meth 185, 249 (1995). Medidas fluorescentes son llevadas a cabo esencialmente como descritas en V.L. Singer et al., Anal Biochem 249, 228 (1997) y los valores son comparados a las células de control. Una disminución en el crecimiento relativo de las células tratadas en comparación con las células no tratadas es una indicación de una actividad anti cancerígena (ver figura 2).
En un método ejemplar para evaluar el efecto inhibitorio de los compuestos de la presente invención en el crecimiento de células cancerígenas, las células son tratadas con el compuesto de ensayo y los niveles de la expresión del gen son medidos en comparación a las células no tratadas. Por ejemplo, células humanas del cáncer de pecho, MCF-7, son cultivadas a 5% CO_{2} y 37ºC en MEM conteniendo 0.1 mM de amino ácidos no esenciales, 2 mM L-glutamina y 10% de FNSe. El total de RNA de células aproximadamente 50% confluentes es aislado usando un Qiagen Rneasy Midi kit de acuerdo a las instrucciones del fabricante. Se cosecha el RNA total varias veces en la presencia y ausencia de los derivados de ácido benzoico siendo evaluados. El análisis de protección RNase es realizado usando el sistema de ensayo de la protección de la ribonucleasa multi-sondar RubiQuant de Pharmingen usando hAPO-2c y plantillas humanas a la medida (bclx LIS, p53, GADD45, c-fos, bax, bcl-2, c-myc, L32 y GAPDH), polimerasa T7 RNA y [alfa 32P]UTP (siguiendo las instrucciones del fabricante). La cuantificación de los niveles de las expresiones es hecha usando un Phosphoimager de dinámica molecular Storm 860 con software ImageQuant. La reducción de la expresión de un proto-oncogén, por ejemplo bcl-2, en las células tratadas en comparación a las células no tratadas es un indicativo de actividad anti cancerígena.
2. Metodología In Vivo
Los compuestos de esta invención pueden ser probados más a fondo en ensayos pre-clínicos para actividad in vivo la cual es una indicación de utilidad clínica. Tales ensayos se llevan acabo con ratones desnudos a los cuales se les ha trasplantado (xenotrasplantado) tejido tumoroso, preferiblemente de origen humano, como es conocido en este campo. Los compuestos de ensayo son evaluados por su eficacia anti-tumorosa siguiendo la administración del ratón que lleva el xenotransplante.
Por ejemplo, tumores humanos de pecho (MX-1) que han crecido en ratones desnudos atímicos son trasplantados a un nuevo ratón, usando fragmentos de tumor de unos 50 mg de tamaño. El día del trasplante es nombrado el día 0. Seis o diez días después, los ratones son tratados con los compuestos de ensayo que son dados oralmente o como inyecciones intravenosas, en grupos de 5-10 ratones en cada dosis. Los compuestos son dados todos los otros días, durante 3 semanas.
Los diámetros de los tumores y el peso de los cuerpos son medidos dos veces por semana. Los volúmenes fueron calculados usando diámetros medidos con calibradores Vernier, y la formula:
(Longitud \ x \ Ancho^{2}) \div \ 2 = \ mm^{3} \text{del volumen del tumor}
Volúmenes medios del tumor son calculados para cada grupo en tratamiento, y valores T/C son determinados para cada grupo relativo a los tumores de control sin tratamiento.
Incrementando o Restableciendo la Sensibilidad a la Droga
De acuerdo a la presente invención, ciertos derivados de ácido benzoico pueden incrementar o restablecer la sensibilidad de una célula cancerígena a una o mas drogas anti-neoplásticas/citotóxicas. Un análisis conveniente basado en células para determinar la habilidad del compuesto candidato para restablecer la sensibilidad de las células cancerígenas a sustancias de drogas anti-neoplásticas/citotóxicas in vitro se explica a continuación. líneas celulares cancerígenas (CCL), e.g. del carcinoma humano de pulmón de células pequeñas, resisten a una o mas substancias de drogas terapéuticas contra el cáncer (CTDS) seleccionados de un grupo que incluye Daunorubicin (DR); Vincristine (VC); Adriamycin (AM); Etoposide (ET); Tenoposide (TE); Colchicine (CC); y Taxol son desarrollados de acuerdo a los métodos descritos en Twentyman et al., Br. J. Cancer, 54, 253 (1986).
La sensibilidad de sub-líneas resistentes (CCL-R) es comparada con la sensibilidad de líneas parentales (CCL-S) a través del ensayo de la inhibición del crecimiento celular durante una exposición CTDS continua, e.g. En el caso de una linea DR-resistente (CCL-DRR) a través de la comparación del crecimiento de las líneas CCL-DRS y CCL-DRR en la presencia de DR contenido en el medio de crecimiento ab initio. Para el propósito, la proliferación de la célula es medido por el conteo celular usando un medidor celular electrónico, con el conteo siendo afectado cerca de la terminación de la fase de crecimiento exponencial. Las líneas CCL-R que son seleccionadas, son aquellas para las que el IC_{80} (concentración de la droga, e.g. Concentración de DR, requerida para reducir el número final de células al 20% de aquel para no-CTDS (e.g DR) controles tratados son >80 X, preferiblemente >100 X, mayores que aquellos de las líneas parentales CCL-S.
La sensibilidad de las líneas CCL-R seleccionadas a el CTDS (e.g. DR) en la presencia o ausencia de derivados de ácido benzoico de prueba es luego realizada, empleando el conteo celular como una medida de proliferación como descrito arriba. Para este propósito las células son cultivadas ab initio en la presencia de concentraciones que varían de CTDS y derivados de ácido benzoico. Para la investigación, son escogidas la concentraciones de la segunda sustancia que no causan una reducción significativa en la proliferación. Las concentraciones apropiadas son establecidas cultivando CCL-S y CCL-R en la presencia de concentraciones que varían de derivados de ácido benzoico en la ausencia de CTDS. Los derivados de ácido benzoico son frecuentemente ensayados con concentraciones que van desde 0.01 a 50 ug/ml, en particular 0.1 a 10.0 ug/ml, e.g. En concentraciones de 0.01, 0.02, 0.05, 0.1, 0.2, 0.5, 1.0, 2.0, 5.0, 10.0 y 50 ug/ml. El cociente de CTDS (e.g. DR) requerido para inhibir la proliferación celular por un 50% en la ausencia de derivados de ácido benzoico de prueba (IC_{50}-CS) comparado con aquel obtenido en la presencia de derivados de ácido benzoico de prueba (IC_{50}+CS) es tomado como una medida del incremento de la sensibilidad de la linea CCL-R al CTDS el cual ha sido inducido por los derivados de ácido benzoico.
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La estabilidad de la linea CCL-R usada es asegurada con la comprobación cruzada de su sensibilidad al CTDS con aquella previamente establecida.
Procedimientos adicionales para determinar la utilidad en la restauración de la sensibilidad de las células cancerígenas a substancias de drogas anti-neoplásticas/citotóxicas, incluyendo procedimientos in vivo son descritos en EP 0296122B, los accesos relevantes de este han sido incorporados como referencias en la enseñanza de la presente aplicación.
Inducción de la degradación del mRNA
Recientemente, ha llegado a ser cada vez más evidente que la regulación de la media-vida del RNA juega un rol critico en el apretado control de la expresión genética y que la degradación del mRNA es un proceso altamente controlado. La inestabilidad del RNA permite regulaciones rápidas altas o bajas de los niveles de la transcripción del mRNA sobre cambios en cocientes de transcripción. Un número de factores celulares críticos, e.g. Factores de transcripción como el c-myc, o productos genéticos que están involucrados con la respuesta del sistema inmune como las citocinas, deben estar presentes solo transientemente para realizar sus funciones normales. La estabilización transitoria de los mRNAs que codifican esos factores permite la acumulación y traducción de esos mensajes para expresar los factores celulares cuando sea necesario; mientras que bajo condiciones normales, no estabilizadas el rápido coeficiente de cambio de esos mRNAs limita y "Apaga" efectivamente la expresión de los factores celulares. Sin embargo la regulación anormal de la estabilización mRNA puede llevar a la construcción no deseada de factores celulares que pueden conducir a transformaciones celulares indeseadas, e.g. Formación de tumores, o respuestas inapropiadas e inflamatorias que pueden dañar el tejido.
Aunque los mecanismos que controlan la estabilidad del mRNA están lejos de ser entendidos, regiones secuenciales en un número de mRNAs han sido identificadas, las cuales parecen conferir inestabilidad a los mRNAs que las contienen. Esas regiones secuenciales son referidas adjuntamente como "secuencias inestables del mRNA". Por ejemplo, secuencias inestables del mRNA típicas son los AREs (elementos ricos en AU), que se encuentran en el 3'UTR (región no traducida) de ciertos genes incluyendo un número de genes tempranos inmediatos y codificación de genes para citocinas inflamatorias, e.g. IL-1B y TNF-\Box.
Las secuencias inestables del mRNA han sido identificadas en los UTRs, en particular los 3' UTRs, de un gran número de genes transientemente expresados incluyendo genes para citocinas, quimosinas, factores de transcripción nuclear, protooncogénes, genes tempranos inmediatos, genes de control celular cíclico, oxigenosas, y genes que están involucrados o controlan la apoptosis. Las secuencias naturales de RNA que incluyen las secuencias inestables del mRNA son también conocidas como elementos ricos en adenilita/uridilato (UA), o AREs. Genes transientemente expresados que contienen secuencias inestables del mRNA, por ejemplo, los códigos genéticos para GM-CSF, c-fos, c-myn, c-jun, krox-20, nur-77, zif268, IFN-B, uPA, IL-1, IL-3, TNF-\Box, MCP1, syn1, B2-Ar, E-selectin, VCAM-1, ICAM-1, P-glicoproteínas (MDR), MRPs, Pyh1 (pf mdr), COX II metaloproteínas (MMPs), bcl-2 y MIP-2a.
Las siguientes publicaciones incluyen una discusión extensiva de las secuencias inestables del mRNA y los AREs, los motivos secuenciales que contienen y las secuencias (mínimas) requeridas para la desestabilización del mRNA, al igual que la identificación de un número de secuencias inestables del mRNA y los genes que los contienen:
Shaw & Kamem, Cell, Vol. 46, 659-667 Aug 29 1986 (GM-CSF);
Shyu et al., Genes & Development, 5:221-231 (1991) (c-fos);
Sachs, Cell, Vol. 74, 413-421, Aug. 13 1993 (Review "Messanger RNA degradation in Eukaryotes");
Chan et al., Mol. Cell. Biol., Jan 1994, 416-426 (c-fos);
Akashi et al., Blood, Vol 83, No. 11, (June 1), 1994: p 3182-3187 (GM-CSF etc.);
Nanbu et al., Mol. Cell. Biol., July 1994, p 4920-4920 (Upa);
Stoecklin et al., J. Biol. Chem., Vol. 269, No. 46, Nov. 18 1994, pp 28591-28597 (IL-3);
Lagnado et al,. Mol. Cell. Biol., Dec. 1994, p. 7984-7995 (general);
Zhang et al,. Mol. Cell. Biol., Apr. 1995, p. 2231-2244 (yeast);
Zubiaga et al,. Mol. Cell. Biol., Apr. 1995, p. 2219-2230 (general);
Winstall et al,. Mol. Cell. Biol., July. 1995, p. 3796-3804 (c-fos, GM-CSF);
Chen et al,. Levy et al,. Mol. Cell. Biol., Oct. 1995, p. 5777-5788 (c-fos, GM-CSF);
Chen et al,. TIBS 20 Nov. 1995, 465-470 (Review);
Levy et al,. J. Biol. Chem., Vol. 271, No., Feb. 2 1996, pp 2746-2753 (VEGF);
Kastelic et al., Cytokine, Vol. 8, No. 10 (Oct), 1996; 751-761;
Crawford et al,. J. Biol. Chem., Vol. 271, No., Nov. 18 1994, pp 28591-28597 (IL-3);
Xu et al,. Mol. Cell. Biol., Aug. 1997, Vol. 18, No. 8, p. 4611-4621, (general);
Danner et al,. J. Biol. Chem., Vol. 273, No. 6, Feb 6 1998, pp. 3223-3229 (human B2-adrenergic receptor);
Lewis et al,. J. Biol. Chem., Vol. 273, No. 22, May 29 1998, pp. 13781-13786 (TNF-\Box).
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Como descrito en las publicaciones anteriores, las secuencias inestables del mRNA a menudo contienen una o más copias de adornos secuenciales, e.g. Seleccionados de: AUUUA, UAUUUAU, UUAUUUA(U/A)(U/A), y AUUUAUUUA. Tales adornos secuenciales se encuentran normalmente en los genes entre la parada del codón y la señal poli A, puede ser asociada con secuencias flanqueantes apropiadas y pueden interactuar en combinación con otras secuencias, e.g. presentes en el 5' UTR y e.g. Con adornos inestables presentes en la región de codificación.
Como demostrado adjuntamente, ciertos derivados de ácido benzoico de la presente invención pueden actuar como inductores de la degradación de mRNAs que contienen secuencias inestables del mRNA. La actividad de los compuestos que son usados en la presente invención como inductores de la degradación del mRNA puede ser demostrada usando pruebas conocidas a trabajadores hábiles en el arte, por ejemplo por medio del análisis de un gen reportero como descrito adjuntamente, o como descrito en detalle en el Internacional Patent Application número PCT/CA99/01235.
Un método que pueda identificar la habilidad de un compuesto de la presente invención para inducir la degradación del mRNA, incluye i) entrar en contacto el compuesto con un sistema de expresión de DNA que en la ausencia del compuesto es capaz de expresar una proteína que tiene una señal detectable, en donde el mRNA que codifica la proteína y que es transcrito del sistema de expresión incluye al menos una copia de una secuencia inestable del mRNA; ii) la medición de la señal detectable en la presencia del compuesto de prueba y su comparación con el resultado obtenido del compuesto de control. Un método relacionado puede ser usado para comparar compuestos que inducen una degradación mRNA. Este método incluye separadamente el contacto de compuestos con un sistema de expresión del DNA que en la ausencia de los compuestos es capaz de expresar una proteína que tiene una señal detectable, en donde el mRNA que codifica la proteína y que es transcrito del sistema de expresión incluye al menos una copia de una secuencia inestable del mRNA, midiendo la señal detectable en la presencia de cada compuesto de prueba y comparándola con las señales obtenidas.
El sistema de expresión del DNA usado en los métodos descritos anteriormente incluye típicamente un codificador genético para la expresión de la señal que tiene una señal detectable, en donde el gen incluye la codificación DNA para la secuencia amino ácido de la proteína junto con las secuencias asociadas 5' y 3'UTR abarcando elementos de control apropiados para la expresión incluyendo regiones promotoras y/o reforzadoras, y característicamente DNA correspondiente a al menos una copia de una secuencia inestable del mRNA. Un sistema de expresión del DNA ejemplar que puede ser usado en los métodos descritos anteriormente es un sistema de expresión basado en células, por conveniencia en la forma de una linea celular adecuadamente transformada, opcionalmente una linea celular establemente transformada.
La célula huésped es típicamente una célula huésped eucariótica, en particular una célula huésped animal como una célula huésped mamífera.
La célula huésped puede ser del mismo tipo general celular que las células que expresan la proteína que es codificada por el mRNA que se desea estabilizar. Así por ejemplo si el análisis va a ser utilizado para la caracterización de los compuestos de la presente invención para demostrar su habilidad para desestabilizar la codificación del mRNA para una citocina, la célula huésped usada es preferiblemente una célula o linea celular que es del mismo tipo o un tipo similar a las células que normalmente producen la citocina en cuestión. Por ejemplo, los monocitos o líneas celular parecidas al monocito pueden ser usadas como células huéspedes para el análisis de compuestos que desestabilicen la citocina, e.g. IL-1 ss, mRNA. Las líneas celulares preferidas para un oncogén y otros genés relacionados con el cáncer son, e.g. Colon 205, KB 31, KB 8511, DU145, HCT116, MCF7, MCF7/ADR, MDA-MB-231, MDA-MB-435 y MDA-MB-435/TO.
La codificación genética para la expresión de la proteína que tiene una señal detectable puede codificar una proteína que puede incluir una señal detectable. Por ejemplo, la proteína puede abarcar una proteína fluorescente, e.g. Una proteína verde fluorescente.
Alternativamente, la proteína es tal que es capaz de reaccionar con un substrato apropiado u otra substancia para dar una señal detectable. Convenientemente la proteína codificada por el mRNA es una enzima o un fragmento enzimáticamente activo de un enzima. Ejemplos de enzimas adecuadas incluyen peroxidosa de rábano picante (HRP), cloranfenicol acetiltransferasa (CAT), fosfatosa alcalina (AP), fosfatosa alcalina secretada, B-galactosidosa, o luciferosa. Métodos para la detección y la cuantificación de tales enzimas son bien conocidos, usando sustratos y medidas apropiadas. Aunque se apreciaría, que cualquier proteína adecuada detectable y cualquier procedimiento de medición pueda ser usado con los métodos descritos adjuntamente.
Métodos alternativos para la medición de la habilidad de las moléculas de prueba para inducir una degradación en el mRNA son conocidos por trabajadores hábiles en el arte y pueden ser usados para medir la actividad de los derivados de ácido benzoico de la presente invención.
Actividad Anti-Inflamatoria
Como demostrado adjuntamente ciertos derivados de ácido benzoico de la presente invención demuestran actividad anti-inflamatoria, por ejemplo debido a su actividad para inhibir el lanzamiento de citocinas o actuar como antagonistas de la actividad de las citocinas.
1. Metodología In Vitro
Un método ejemplar para medir la habilidad de los derivados de ácido benzoico de la presente invención para inhibir el lanzamiento de citocinas se realiza monitoreando el lanzamiento de citocinas desde células que han sido estimuladas a lanzar citocinas tanto en la ausencia como en la presencia des compuesto de prueba. El lipopolisacárido (LPS) es un tipo de estimulante que puede ser usado para inducir el lanzamiento de citocina aunque un trabajador hábil en el arte apreciaría que otros estimulantes puedan ser usados en este ensayo. Siguiendo el tratamiento de las células en este cultivo dado por el estimulante, con o sin el compuesto de prueba, las células se incuban por un periodo de tiempo apropiado y entonces el cultivo medio y las células lisatas son recogidas. Los análisis son realizados usando los cultivos medio y lisata aislados para determinar la cantidad de citocina (e.g. II-1B (medio o lisata), IL-6(medio),
TNF-\Box(medio) y PGE2 (medio y lisata)) presente en cada muestra. Para poder demostrar que los compuestos no son tóxicos a las células, la actividad lactato-deshidrogenasa (media y lisata) (LDH) y el DNA (lisata) son analizados también. Los análisis IL-1B, IL-6 y TNF-\Box pueden ser determinados usando kits ELISA (Cistron) comercialmente disponibles, el PGE2 puede ser medido usando un RIA estándar y DNA fluorimétrico usando DAPI (4', 6-diamidino-2-fenilindole 2HCl). Debería ser reconocido que este ensayo no esta limitado por el análisis usado para cuantificar las citocinas, el LDH liberado o el DNA ya que múltiples análisis son bien conocidos por trabajadores hábiles en el arte y los análisis listados adjuntamente no intentan limitar el alcance de la presente invención. Una reducción en la cantidad de citocina en el medio de las células tratadas en comparación al medio de las células no tratadas es una indicación de la habilidad del compuesto de prueba para inhibir la liberación de citocinas. Además, los compuestos son considerados como no tóxicos si la liberación de LDH no presenta diferencias entre las células tratadas y las no tratadas.
Otro método ejemplar para medir la habilidad de los derivados de ácido benzoico de la presente invención para inhibir la liberación de citocinas es realizado comparando la liberación de citocinas de células estimuladas en un cultivo en la presencia y ausencia del compuesto de prueba. En un ejemplo de este método células mononucleares son obtenidas y cultivadas en platos de cultivo de tejido con el compuesto de prueba en varias concentraciones [Schnyder et al., Agents & Actions, 30, 350-362 (1990)]. Los linfocitos no adherentes son retirados después de 4 horas a través de varios lavados. Un medio nuevo, compuesto de ensayo y estimulante, por ejemplo lipopolisacárido (LPS), son adicionados y los monocitos son incubados por un día más.
El II-1 purificado, recombinante humano IL-1-B(rhIL-1) o medios condicionados recogidos de monocitas humanas estimuladas, macrófagos de ratón o la linea celular P388D1 del ratón, causan cambios característicos en el patrón de secreción de los condrocitos. En particular, una metaloproteinasa latente es inducida, mientras que la secreción del activador del plasminógeno es reducida. La propiedad de la metaloproteinasa o del estromelicin se ha discutido en detalle [Chin et al., J. Biol. Chem. 260, 12367-12376 (1985)], como lo ha sido aquella del activador del plasminógeno [Schnyder et al., Anal. Biochem. 200, 156-162 (1992)]. En la ejecución del análisis se diluyen en proporción 1:10 los medios de cultivo reunidos con el medio fresco y se agregan al confluente los condrocitos de conejo. La actividad metaloproteinasa en el medio de cultivo de los condrocitos es analizada después de dos días más usando técnicas estándar conocidas por trabajadores habilidosos en el arte. Un ejemplo de una técnica para la medición de la actividad de la metaloproteinasa se proporciona en el ejemplo 6 de la presente divulgación Los compuestos que tienen la habilidad de reducir la liberación de citocina disminuirán la inducción de la actividad de la metaloproteasa en los condrocitos que son reunidos con los medios de cultivo de células tratadas en comparación a aquellos reunidos con los medios de cultivo de células no tratadas.
Para determinar los efectos antagónicos de los derivados de ácido benzoico de la presente invención, se agrega una citocina a células cultivadas que se sabe responden a la citocina y se monitorea la respuesta en la presencia y ausencia del compuesto de prueba. El Ejemplo 7 de la presente divulgación demuestra un ejemplo de esta prueba en el cual son usados los condrocitos. Como descrito adjuntamente, los condrocitos responderán a II-1 con un incremento en la actividad de la metaloproteinasa. Se demuestra que un compuesto de prueba tiene un efecto antagonista si la actividad de la metaloproteinasa se ve reducida en la presencia del compuesto de prueba en comparación a la actividad en su ausencia.
2. Metodología In Vivo
Un arte reconocido en el modelo animal de una respuesta inflamatoria es la fiebre LPS inducida en ratas. Una suspensión LPS se inyecta en las ratas. En un cierto intervalo de tiempo después de la inyección se mide la temperatura corporal de la rata y en el siguiente intervalo de tiempo se administra el compuesto de prueba. Al final del tercer intervalo de tiempo la temperatura corporal es medida nuevamente. El incremento en la temperatura medido en los controles no tratados puede ser tomado como el 100% y aquel del grupo tratado puede ser expresado como un porcentaje de este valor. El ED_{50} es la dosis que causa una inhibición del 50% del incremento en la temperatura determinado por las ratas de control. Los compuestos de la presente invención tienen por lo general un ED_{50} en este análisis de alrededor de 0.1 a alrededor de 1 mg/kg.
Un arte reconocido en el modelo animal de una inflamación es el del edema inducido por carragenina en la pata. El compuesto de prueba es dado a las ratas una hora antes de la inyección de carragenina. La carragenina es pasada a través de una inyección subplantar en una pata trasera. La hinchazón de la pata es medida. Una lectura de control es tomada inmediatamente después de la inyección, y la hinchazón es medida después de 3 y 5 horas. El valor medio de las lecturas a 3 y 5 horas se toma después de la resta de la medida de control. El ED_{50} es la dosis que causa una inhibición del 50% de la hinchazón inducida por la carragenina después de 3 horas. Los compuestos de la presente invención tienen por lo general un ED_{50} en este análisis de alrededor de 0.5 a alrededor de 1 mg/kg.
Debe ser visto fácilmente por un trabajador experto en el arte que las pruebas descritas adjuntamente son ejemplos de pruebas estándares que pueden ser usadas para medir la actividad de los compuestos de la presente invención. Una gran cantidad de pruebas para medir la actividad anti cancerígena o anti neoplásticas, la habilidad para incrementar o restaurar la sensibilidad a las drogas, la sensibilidad para inducir la degradación mRNA y la actividad anti-inflamatoria son bien conocidas y pueden ser usadas para demostrar las características de los derivados de ácido benzoico de la presente invención.
Uso de los derivados de ácido benzoico
En una encarnación de la presente invención los derivados de ácido benzoico son usados en el tratamiento de pacientes que tienen condiciones patológicas asociadas con la proliferación anormal de células, como el cáncer. La condiciones patológicas incluyen la proliferación anormal de células malignas de varios tejidos y/o órganos, incluyendo, pero sin implicar la limitación, músculos, huesos o tejido conectivo, la piel, el cerebro, los pulmones, los órganos sexuales, el sistema linfático y renal, células de mama o de sangre, hígado, el tracto digestivo, el páncreas o la tiroides o las glándulas adrenales. Estas condiciones patológicas también pueden incluir tumores sólidos, cáncer de los ovarios, pecho, cerebro, próstata, colon, estomago, riñones o testículos, sarcoma de Kaposi, colangioma, corioma, neuroblastoma, tumor de Wilms, enfermedad de Hodgkin, melanomas, mielomas múltiples, leucemias linfáticas y linfomas granulociticos graves o crónicos
En una encarnación de la presente invención los derivados de ácido benzoico son usados para inhibir el lanzamiento de citocinas y/o como antagonistas funcionales de las citocinas. En una encarnación especifica los derivados de ácido benzoico son usados para inhibir el lanzamiento del IL-1, IL-6 y TNF-\Box y/o como antagonistas funcionales del IL-1.
Una encarnación relacionada de la presente invención involucra el uso del ácido benzoico en el tratamiento de desordenes con una etiología asociada con, o incluyendo una liberación excesiva de citocinas, particularmente la liberación de IL-1B, e.g. En una gran variedad de estados inflamatorios y enfermedades tales como la artritis reumatoidea, osteoartritis, shock séptico, psoriasis, aterosclerosis, enfermedad inflamatoria del intestino, enfermedad de Crohn y asma.
En otra encarnación los compuestos de la presente invención pueden ser usados en la profilaxis o el tratamiento de enfermedades medicas que en general tienen una etiología asociada con el incremento o la estabilidad prolongada de mRNAs que contienen una o más secuencias inestables de mRNA, y las cuales, en una expresión prolongada o inadecuada dan lugar a efectos indeseados típicos, e.g. Crecimiento de células cancerígenas o una respuesta inflamatoria no deseada.
Los compuestos de la presente invención pueden ser usados en conexión con enfermedades y condiciones medicas asociadas con cualquiera de los genes mencionados anteriormente o descritos en las publicaciones listadas, los cuales incluyen las secuencias inestables de mRNA.
Ejemplos de enfermedades o condiciones medicas que pueden ser tratadas o prevenidas con el uso de la presente invención incluyen: cánceres (e.g. De colon, de pecho, de pulmón, etc.), inflamación aguda y crónica, enfermedades autoinmunes, enfermedades respiratorias, enfermedades infecciosas y el rechazo de trasplantes, al igual que, inflamaciones neuronales, la enfermedad de Alzheimer y enfermedades cardiovasculares.
En una encarnación relacionada los compuestos de la presente invención que inducen la degradación del mRNA que contiene una o más secuencias inestables de mRNA son provistas para uso farmacéuticos, e.g. Para uso en la profilaxis o tratamiento de enfermedades y condiciones medicas que en general tienen una etiología asociada con el incremento o la estabilidad prolongado de mRNAs que contienen una o mas secuencias desestabilizadores del mRNA, y que en expresiones prolongadas o inapropiadas normalmente dan cabida a efectos indeseados, e.g. Crecimiento de células cancerígenas o una respuesta inflamatoria no deseada.
En vista de su actividad como inductores de la degradación de mRNAs que contienen secuencias inestables de mRNA los compuestos de esta invención son útiles para la profilaxis y el tratamiento de cánceres y enfermedades malignas que involucran la acumulación inapropiada y la expresión de mRNAs, los cuales contienen secuencias inestables de mRNA y codifican las proteínas involucradas con la inicialización, progresión o persistencia de cáncer o enfermedades malignas. Ejemplos de genes relacionados con cáncer, con mRNAs que contienen secuencias desestabilizadoras del mRNA, incluyendo varios oncogenes y factores de transcripción, e.g. C-myc, c-fos, Spl, bcl-2 y genes similares. La expresión prolongada o inapropiada de tales oncogenes esta implicada en el comienzo de ciertos tipos de cáncer, como el cáncer de colon, cáncer de pecho, cáncer de pulmón, etc. Otros ejemplos de genes relacionados con el cáncer, con mRNAs que contienen secuencias inestables del mRNA son genes para enzimas metaloproteinasas, e.g. Mmp-1, MMP-2, colagensas, etc., implicados en la remodelación del tejido requerida por el crecimiento del tumor y la invasión de la metástasis; genes relacionados con el ciclo celular como el p45/SKIP2 etc. y genes de resistencia a multidrogas, e.g. Mdr-1, MRPs, etc. implicados en la resistencia intrínseca o adquirida de algunas células cancerígenas contra las multidrogas.
El tratamiento con compuestos de esta invención lleva ventajosamente a la degradación de los mRNAs de tales genes, resultando en la regulación baja o "apagamiento" de la expresión genética. Así por ejemplo, ellos pueden ser usados para el tratamiento y prevención de cánceres con un oncogén mediador y enfermedades malignas, para tratar y prevenir el crecimiento de tumores y la invasión de metástasis en general, y para prevenir o revertir la resistencia a multidrogas y por lo tanto facilitar el tratamiento de cánceres y tumores con agentes anti-cancerígenos convencionales e.g. Citotóxicos.
Característicamente, cuando los derivados de ácido benzoico son usados para prevenir o revertir la resistencia a multidrogas de tumores u otras células malignas, son usados en combinación con agentes citostáticos o citotóxicos.
De acuerdo a la presente invención, los derivados de ácidos benzoicos pueden ser usados tanto solos como en combinación con otros compuestos característicamente activos, por ejemplo junto con inhibidores de las enzimas de la síntesis de la poliamina, los inhibidores de la proteína quinasa C, los inhibidores de otras tirosinas quinasas, citocinas, reguladores de crecimiento negativo, por ejemplo TGF-B o IFN-B, inhibidores de aromatasas, antiestrógenos y/o agentes citoestáticos.
Composiciones que incluyen los derivados de ácido benzoico
En una encarnación de la presente invención se proveen composiciones que incluyen uno o mas derivados de ácido benzoico de la Formula I y uno o mas portadores y/o diluentes y/o coadyuvantes y, si deseado, otros ingredientes activos que sean característicamente aceptables y no sean tóxicos Como indicado anteriormente tales composiciones son usadas en el tratamiento de varias condiciones en mamíferos, incluyendo humanos.
Los compuestos de la invención pueden ser suministrados por cualquier ruta convencional, en particular nasalmente, enteramente, preferiblemente oralmente, e.g. En la forma de tabletas o cápsulas, o parentalmente e.g. En la forma de soluciones inyectables o suspensiones en forma de supositorio. Las formas de dosificación contienen, por ejemplo de alrededor de 2 mg a 1 gr del compuesto de la invención. La invención también provee una composición farmacéutica que incluye una cantidad efectiva de los compuestos en asociación con un diluente o portador farmacéuticamente aceptable. Tales composiciones pueden ser producidas de una manera convencional.
Composiciones farmacéuticamente aceptables que incluyen los compuestos de la presente invención como un ingrediente activo y que pueden ser usadas especialmente en el tratamiento de las enfermedades mencionadas anteriormente incluyen composiciones para administración enteral, como nasal, bucal, rectal o específicamente oral y administración parental para animales de sangre caliente, especialmente humanos, como la administración intravenosa, intramuscular o subcutánea La composición incluye los ingredientes activos por si mismos o preferiblemente junto con un portador farmacéuticamente aceptable. La dosificación del ingrediente activo depende de la enfermedad a ser tratada, y de la especie, edad, peso y condición individual, condiciones farmacoquinéticas individuales y del modo de administración. La dosificación puede ser fácilmente determinada por un trabajador hábil en el arte, usando métodos estándares en la luz de las consideraciones mencionadas anteriormente.
Las composiciones farmacéuticas pueden incluir de aproximadamente 1% a aproximadamente 95% de ingrediente activo, las formas de administración en la forma de una sola dosis incluyen preferiblemente de aproximadamente 20% a aproximadamente 95% de ingrediente activo y las formas de administración que no se encuentran en la forma de una sola dosis incluyen preferiblemente de aproximadamente 5% a aproximadamente 20% de ingrediente activo. Formas de la unidad de la dosis son, por ejemplo, grageas, tabletas, ampollas, viales, supositorios o cápsulas. Otras formas de administración son, por ejemplo, ungüentos, cremas, gomas, espumas, tinturas, lápiz labial, gotas, aerosoles, dispersiones, etc. Un ejemplo serian cápsulas que incluyan de aproximadamente 0.05 g a aproximadamente 1.0 g del ingrediente activo.
Las composiciones farmacéuticas son preparadas de una manera conocida per se, por ejemplo por medio de mezclas convencionales, por granularización, confección, disolución o procedimientos de liofilización.
Soluciones del ingrediente activo, y también suspensiones o dispersiones, especialmente soluciones, dispersiones o suspensiones acuosas isotónicas, son preferiblemente usadas, siendo posible, por ejemplo en el caso de composiciones liofilizadas que contiene el ingrediente activo solo o junto con un portador, por ejemplo el manitol, tales soluciones, suspensiones o dispersiones pueden ser hechas antes de usarlas. Las composiciones farmacéuticas pueden ser estériles y/o pueden incluir excipientes, por ejemplo preservativos, estabilizadores, agentes de humidificación y/o emulsificadores, solubilizantes, sales para la regulación de la presión osmótica y/o almacenadores intermediarios, y son preparadas de una manera conocida per se, por ejemplo por medios de procedimientos de disolución o liofilización convencionales. Las soluciones o suspensiones pueden incluir sustancias que incrementan la viscosidad, como el carboximetil celulosa sódica, el dextrano, la porrivinilpirridolidona o la gelatina.
Las suspensiones en aceite abarcan como el componente del aceite los aceites vegetales, sintéticos o semisintéticos acostumbrados para los propósitos de inyección. Pueden ser mencionados como tales especialmente los ésteres líquidos de ácidos grasos que contienen como componente ácido un ácido graso de cadena larga que tiene de 8 a 22, especialmente de 12 a 22, átomos de carbono, por ejemplo el ácido láurico, el ácido tridecanoico, ácido mistírico, ácido pentadecíclico, ácido palmítico, ácido margárico, ácido esteárico, ácido araquídico, ácido behénico, o ácidos no saturados correspondientes, por ejemplo ácido oléico, ácido eláico, ácido erúcico, ácido brasídico o ácido linoléico, si deseado con la adición de antioxidantes, por ejemplo vitamina E, beta-caroteno o 3-5-di-tert-butil-4-hidroxitolueno. El componente de alcohol de esos esteres de ácidos grasos tiene un máximo de 6 átomos de carbón y es un alcohol mono o poli hídrico, por ejemplo un alcohol mono-, di- o tri-hídrico, por ejemplo metanol, etanol, propanol, butanol o pentanol o los isómeros de estos, pero especialmente el glicol o el glicerol. Los siguientes ejemplo de esteres de ácidos grasos deben por lo tanto ser mencionados: oleato etílico, miristato de isopropileno, palmitato de isopropilo "Labrafil M 2375" (glicerol trioleato polioxietileno, Gattefossé, París), "Labrafil M 1944 CS" (glicéridos poliglicolizados no saturados preparados por alcohólisis del aceite de la semilla de albaricoque y que consisten en glicéridos y éster de polietileno glicol; Gattefosé, France), "Labrasol" (glicéridos poliglieolisados preparados por la alcohólisis de TCM y que consisten de ésteres de polietileno glicol o ésteres glicéridos; Gattefossé, France) y/o "Migyol 812" ( triglicéridos de ácidos grasos saturados con una longitud de cadena de C8 a C12, Hüls AG, Germany), pero especialmente aceites vegetales, como el aceite de semillas de algodón, aceite de almendras, aceite de oliva, aceite de ricino, aceite de sésamo, aceite de soja y aun más especialmente el aceite del cacahuete.
Los compuestos de la inyección son preparados en una manera acostumbrada bajo condiciones estériles; lo mismo aplica al introducir los compuestos en, por ejemplo, ampollas o vías y al sellar los contenedores.
Las composiciones farmacéuticas para la administración oral pueden ser obtenidas, por ejemplo, al combinar el ingrediente activo con uno o más portadores sólidos, si se desea se puede granular la mezcla resultante, y procesando la mezcla o gránulos, si deseado, y si es necesario por la adición de excipientes adicionales, para formar bases de tabletas o grageas.
Los portadores convenientes son especialmente llenadores, como los azucares, por ejemplo la lactosa, sacarosa, manitol o sorbitol, preparaciones celulosas y/o fosfatos de calcio, por ejemplo fosfato tricálcico o calcio hidrógeno fosfato, y también vinculadores, tales como almidones, por ejemplo maíz, trigo, almidón de arroz o patatas, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio y/o polivinilpirrolidona, y/o, si deseado, desintegradores, como los almidones mencionados anteriormente, también el almidón carbonximetil, la polivinilpirrolidona reticulada, o el ácido algínico o una sal de estos, como el alginato de sodio. Excipientes adicionales son especialmente los acondicionadores de flujo y los lubricantes, por ejemplo el ácido silícico, talco, el aceito esteárico o las sales de estos, como el estearato de magnesio o calcio, y/o el polietilen glicol, o los derivados de estos.
Las bases de grageas pueden ser proporcionadas con una capa conveniente opcionalmente entérica, allí siendo usadas inter alia soluciones de azúcar concentrada que pueden contener goma árabe, talco, polivinilpirrolidona, polietilen glicol y/o dióxido de titanio, o soluciones recubridoras en solventes orgánicos convenientes o mezclas de solventes, o, para la producción de recubridores entéricos, soluciones de preparaciones celulosas convenientes, como el ftalato de acetilcelulosa o el ftalato de hidroxilpropilmetilcelulosa. Colorantes o pigmentos pueden se adicionados a las tabletas o a las capas de grageas, por ejemplo con fines de identificación o para indicar las diferentes dosis del ingrediente activo.
La composiciones farmacéuticas oralmente administrables también incluyen cápsulas seco-llenadas que consisten de gelatina, y también cápsulas suaves selladas que consisten de gelatina y un plastificador, como el glicerol o el sorbitol. Las cápsulas seco-llenadas pueden contener el ingrediente activo en forma de gránulos, por ejemplo en adición con llenadores, como el almidón de maíz, ligadores y/o glidantes, como el talco o el estearato de magnesio, y opcionalmente estabilizadores. En cápsulas suaves, el ingrediente activo esta preferiblemente disuelto o suspendido en excipientes líquidos convenientes, como aceites grasos, aceite de parafina o polietilen glicol liquido o esteres de ácidos grasos de etileno o polietilen glicol, a los cuales se les pueden agregar estabilizadores y detergentes, por ejemplo del tipo de esteres de ácidos grasos como el sorbinato de polioxietileno.
Otras formas de administración oral son, por ejemplo, jarabes preparados de una manera conveniente que contenga el ingrediente activo, por ejemplo, como una suspensión y en una concentración de alrededor de 5% a 20%, preferiblemente alrededor de 10%, o en una concentración similar que provea una dosis única conveniente, por ejemplo, cuando sea administrada en dosis de 5 o 10 ml. Son también convenientes, por ejemplo, los concentrados en polvo o en líquido para la preparación de malteadas, por ejemplo con leche. Tales concentrados pueden también ser empacados en cantidades convenientes para una dosis única.
Composiciones farmacéuticas convenientes para ser administradas rectalmente son, por ejemplo, supositorios que consisten en una combinación del ingrediente activo y una base de supositorio. Bases de supositorio convenientes son, por ejemplo, triglicéridos naturales o artificiales, hidrocarbonos de parafina, polietilen glicol o alcanoles más
altos.
Para la administración parenteral hay soluciones acuosas especialmente convenientes de un ingrediente activo en forma hidrosoluble, por ejemplo en la forma de una sal hidrosoluble o suspensiones de inyecciones acuosas que contienen substancias que incrementan la viscosidad, por ejemplo la carboximetilcelulosa de sodio, el sorbitol y/o el dextran, y, si deseado, estabilizadores. El ingrediente activo, opcionalmente junto con excipientes, también puede estar en la forma de un liofilisato y puede volverse una solución antes de la administración parenteral con la adición de solventes convenientes.
Los compuestos que son usados en la invención pueden ser administrados profilácticamente o terapéuticamente, como tales o en la forma de composiciones farmacéuticas, preferiblemente en una cantidad efectiva contra las enfermedades mencionadas anteriormente, para un animal de sangre caliente, por ejemplo un ser humano, que requiere un tal tratamiento, los compuestos son usados especialmente en la forma de composiciones farmacéuticas. En un tratamiento como este un individuo con un peso corporal de unos 70 kg deberá tener una dosis diaria de aproximadamente 0.1 g a aproximadamente 5 g, preferiblemente de alrededor de 0.5 g a alrededor de 2 g del compuesto.
La invención también provee un paquete farmacéutico o kit que incluye uno o mas contenedores llenos de uno o más de los ingredientes de la composición farmacéutica de la invención. Asociado con tales contenedores, se puede poner un anuncio en la forma prescrita por una agencia gubernamental regulando la manufactura, uso o venta de productos biológicos o farmacéuticos, tal anuncio refleja la aprobación de una agencia de manufactura, uso o venta para la administración humana. Adicionalmente, las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden ser empleadas en conjunción con otros compuestos terapéuticos.
Para obtener una mejor comprensión de la invención descrita adjuntamente, se disponen los ejemplos siguientes. Debe ser entendido que estos ejemplos tienen fines ilustrativos solamente. Por lo tanto, no deben limitar el alcance de la presente invención de ninguna manera.
Ejemplos Ejemplo 1 Preparación del compuesto de la Formula D y Derivados
15
Compuesto B
A una solución de 46.7 g de compuesto A (que ha sido sintetizado siguiendo el procedimiento de la literatura en Synthesis 1980, 814) en 800 ml de metanol se le agregaron 400 ml de 2N NAOH. Esta mezcla fue entonces refundida por 24 horas. El metanol fue evaporado y el licor acuoso restante fue extraído con dietileter. La fase acuosa fue enfriada y acidificada con conc. HCl. La precipitación fue filtrada, lavada con agua y secada a 80ºC bajo vacío para crear 31.8 g de un solido amarillento. M.p. 138-140C.
Compuesto D
A una solución de 1.55 g de compuesto B (preparado anteriormente) en 42 ml de THF se le agregaron 4.1 ml en gotas de cloruro de ácido oxálico a 20ºC. La solución fue revuelta a temperatura ambiente (RT) por 2 horas y después los solventes fueron removidos con el evaporador rotatorio. El residuo fue disuelto con 40 ml de cloruro de metileno y 0.8 ml de piridina. Una solución de 1 g de compuesto C (que es sintetizado siguiendo el procedimiento de J. Chem: Research (3) 1987, 369) en 10 ml de cloruro de metileno fue añadida por gotas. La mezcla fue revuelta en argón a RT por 17 horas y después fue extraída con una solución sat. aq. NaHCO3. La fase orgánica fue secada y evaporada para obtener 1.97g de un aceite café que fue purificado en una columna de gel de silicona con hexano: acetato etílico = 2 : 1 como solvente dejando 0.9 g del compuesto D en forma de cristales incoloros. M.p. 74-78ºC.
D: NMR (en CDCl3):
2.28 ppm (s, 3H); 3.8 ppm (s, 3H); 4.59 ppm (d, 2H);
5.32 ppm (m, 1H); 6.21 ppm (dd, 1H); 6.7-6.85 ppm (m, 2H);
7.23 ppm (t, 1H); 7.55 ppm (dd, 1H).
Ejemplo 2 Preparación del Compuesto de Formula F y Derivados
16
Compuesto E
A una solución de 3.6 g de ácido 2-metóxi-benzóico se le agregó gotas 10.1 ml de cloruro de ácido oxálico a 20ºC más una gota de DMF. La solución fue revuelta a RT por 3 horas. La solución amarillo pálido fue evaporada y redisuelta en 100 ml de diclorometano. A esta solución se le agregó una solución de 2.5 g del compuesto C (preparado anteriormente) en 25 ml de diclorometano. Esta mezcla fue revuelta a RT por 24 horas, después fue lavada con agua, secada con Na2SO4, y fue evaporada para dejar un aceite de un amarillo oscuro. Esto fue cromatografiado en columna flash sobre gel de sílice con tolueno: acetato etílico = 4:1 como eluyente produciendo 3.6 g de E como cristales incoloros con un m.p. De 53-58ºC.
E: NMR (en CDCl3):
3.9 ppm (s, 3H); 4.6 ppm (dq, 2H); 5.35 ppm (m, 1H);
6.21 ppm (dd, 1H); 6.9-7.05 ppm (m, 2H); 7.4-7.6 ppm (m, 2H);
7.78 ppm.
Compuesto F
A una solución de 3.1 g de E (preparada anteriormente) en 100 ml de diclorometano se le agregó 17.8 ml de una solución molar de 2.1 de BCl3 cloruro del etileno a 0C. Esta mezcla fue revuelta a 0ºC por 30 minutos y fue luego vertida en agua helada. La fase orgánica fue lavada 2 veces con agua y 1 vez con una solución sat. NaCl, secada con Na2SO4 evaporada. El residuo fue cromatografiado en un gel de sílice con tolueno: acetato etílico = 4:1 como eluyente produciendo 2.1 g de F como un aceite incoloro.
F: NMR (en CDCl3):
4.62 ppm (dq, 2H); 5.38 ppm (m, 1H); 6.27 ppm (dd, 1H);
6.8-7.0 ppm (m, 2H); 7.4-7.6 ppm (m, 2H); 7.76 ppm (dd, 1H);
10.42 ppm (s, 1H).
Ejemplo 3 Preparación del compuesto de Formula H y Derivados
17
Los compuestos G y H fueron preparados utilizando los procedimientos anteriores.
G: NMR (en CDCl3):
3.85 ppm (s, 3H); 3.88 ppm (s, 3H); 4.57 ppm (dq, 2H);
5.32 ppm (m, 1H); 6.19 ppm (dd, 1H); 6.4-6.55 ppm (m, 2H);
7.5 ppm (dd, 1H); 7.8 ppm (d, 1H).
H: NMR (en CDCl3):
3.82 ppm (s, 3H); 4.39 ppm (m, 2H); 5.35 ppm (m, 1H);
6.23 ppm (dd, 1H); 5.35-6.5 ppm (m, 2H); 7.5 ppm (dd, 1H);
7.67 ppm (d, 1H); 10.6 ppm (s, 1H).
Ejemplo 4 Preparación del compuesto de Formula I y Derivados
18
El compuesto I fue preparado utilizando los procedimientos anteriores.
I: NMR (en CDCl3):
2.5 ppm (s, 3H); 4.5-4.8 ppm (m, 2H); 5.35 ppm (m, 1H);
6.27 ppm (dd, 1H); 6.7 ppm (d, 1H); 6.83 ppm (d, 1H);
7.29 ppm (t, 1H); 7.5 ppm (dd, 1H); 11.0 ppm (s, 1H).
Los compuestos de la invención tienen propiedades farmacológicas. En particular, muestran efectos que inhiben la citocina, actuando no solo al inhibir la liberación de IL-1, IL-6 y TNF-\Box, pero también como antagonistas funcionales de IL-1 como indicado en las siguientes pruebas in vitro e in vivo descritas abajo.
Ejemplo 5 Liberación de citocina de las células THP-1
La linea celular THP-1 es generalmente disponible y es descrita por Tsuchiya et al. [Int. J. Cancer 26 1771-176 (1980)]. 900 ul de células THP-1 (0.5X10^{6} células) junto con un medio de 100 U y-interferon/0.9 ml de RPM 1640 (que contiene 2 mM de L-Glutamina y 5% de suero fetal de becerro inactivado por calor) son puestos con pipeta en placas de cultivo de 24 pozos. 100 ul del compuesto a ser ensayado son luego agregados. Después de 3 horas a 37ºC en 5% CO2/ 95% aire, 10 ul de lipopolisacárido (LPS) 500 ug/ml son agregados y la incubación continua por otras 40 horas. Controles apropiados (con o sin estímulos, solventes) son incluidos. Los medios son luego retirados y clarificados con centrifugación a 1000 g por 10 min. 1.0 ml de digitonina a 0.01% es agregado a los pozos para lisar las células que son soltadas raspando con un policía de goma y son dejadas a 4ºC por 10 min. Mediciones de la lactato deshidrogenasa son realizadas de manera inmediata y las muestras son guardadas a -20ºC hasta que las otras mediciones puedan ser hechas. Los análisis son: IL-1B (medio y lisata), IL-6 (medio), TNF-\Box (medio), PGE2 (medio y lisata), lactato deshidrogenasa (LDH) (medio y lisata) y DNA (lisatas). Los análisis de IL-B, IL-& y TNF-\Box son determinados usando kits (Cistron) ELISA comercialmente disponibles, el PGE2 es medido usando un RIA estándar y el DNA es medido fluorimétricamente usando DAPI (4',6-diamidino-2-fenilindole 2HCl). En esta prueba, los compuestos de la invención inhiben la liberación de IL-1B, IL-6, TNF-\Box y PGE2 a una concentración de alrededor de 0,1 a 10 uM. En contraste los niveles DNA permanecen sustancialmente inafectados, y los compuestos no son tóxicos, ya que la liberación de LDH no se altera.
Ejemplo 6 Liberación de citocina de los Monocitos Humanos Monocitos Humanos
Las células mononucleares son obtenidas de la sangre de voluntarios saludables vía centrifugación y son cultivadas en platos de cultura de tejido con el compuesto de prueba a varias concentraciones [Schnyder et al., Agents & Actions, 30, 350-362 (1990)]. Los linfocitos no-adherentes son removidos después de 4 horas a través de varios lavados. Un medio fresco, compuesto de prueba y LPS (10 ug/ml) como estimulante son agregados y los monocitos son incubados por un día mas. Los medios de cultivo reunidos son diluidos 1:10 con medio fresco y son agregados a condrocitos confluentes de conejo. La actividad de la metaloproteinasa en el medio de cultivo de los condrocitos es analizada después de otros 2 días como descrito debajo. Los compuestos de la invención son activos en la supresión de la liberación de monocina en este método de prueba a una concentración del morder de 0.1 a 10 uM.
Determinación del IL-1 a través de la prueba de condrocitos
IL-1 purificado, recombinante humano IL-1-B (rhIL-1) o medios acondicionados tomados de monocitos humanos estimulados, macrófagos de ratón o la linea celular de ratón P388D1, producen cambios característicos en el patrón de secreción de los monocitos. En particular, una metaloproteinasa latente es inducida, mientras que la secreción del activador del plasminógeno es reducida. La propiedad de la metaloproteinasa o de la estromelisina ha sido descrita en detalle [Chin et al. J. Biol. Chem. 260, 12367-12376 (1985)], así como aquella del activador del plasminógeno [Schnider et al., Anal. Biochem. 200, 156-162 (1992)]. Curvas de la respuesta a la dosis usando IL-1 purificado o recombinado y la neutralización con un anticuerpo al monitor humano IL-1 han mostrado que este sistema puede ser usado como un ubio análisis especifico y sensitivo para el IL-1. La estimulación de la secreción de una metaloproteinasa por los condrocitos articulares de conejo es relativamente especifica al IL-1, IL-2, TNF-\Box, recombinantes humanos interferon-alfa y gama, acetato de forbol miristato, Concavanalin A, prostaglandina tipo E e indometacina que no tienen influencia [Schnyder y Payne, Brit. J. Rheumatol. 24 (suppl. 1), 128-132 (1985); Schnyder et al., J. Immunol. 138, 496-403 (1987)].
Los condrocitos son cosechados y cultivados como descrito [Evequoz et al., Biochem. J. 219, 667-677 (1984)]. Brevemente, los condrocitos son liberados de cortes de cartílago articular del fémur distal de ca. 1.2 kd de ratones blancos hembras de Nueva Zelanda a través de un tratamiento con proteinasas. Las células lavadas son cultivadas en placas de cultivo de 48 pozos en DMEM, enriquecido con un 1% de antibióticos, 2 mM de glutamina y 10% de suero fetal de becerro inactivado por calor. Después de alcanzar la confluencia las células son incubadas con muestras de 20 ul del cultivo de prueba para un bio análisis IL-1 y compuesto a un volumen de 300 ul de medio de Dulbecco modificado por Iscove. Los medios flotantes son recogidos después de 48 horas, centrifugados y procesados para un análisis bioquímico.
Análisis Bioquímico
La metaloproteinasa es medida cinéticamente usando una placa Twinreader (Flow Laboratories AG) de 96 pozos conectada a un computador personal.
El Ac-Pro-Leu-Gly-S-Leu-Gly-OC2H5, un sustrato sintético para colegenasa vertebral es usado en la determinación de la metaloproteinasa [Weingarten and Feder, Anal. Biochem. 147, 437-440 (1985)].
52 ul de la metaloproteinasa latente es activada con 50 ul de tripsina (120 ug/ml en 50 mM PIPES pH 6.8, que contiene 20 mM de CaCl2) por 30 minutos a 37ºC, después de este tiempo las actividades de todas las serinas proteinasas son detenidas con la adición de 150 ul del inhibidor de la tripisina de soja (SBTI: 166 ug/ml en el almacenador intermediario ya mencionado). Una parte alícuota de 50 ul de las metaloproteinasas activadas es entonces mezclada con 100 ul de solución reagente (2.5 mM de 5,5'-ditio-bis-(2-ácido nitrobenzóico), 100 ug/ml de SBTI, 20 mM de CaCl2 en el almacenador intermediario ya mencionado), y guardado por 10 minutos a temperatura ambiente para reaccionar con todos los grupos SH libres. La reacción es comenzada cuando se agregan 100 ul de solución del sustrato (1.25 mM en el almacenador que contiene 100 ug/ml de SBTI) y los cambios en la absorbencia a 414 nm son medidos 11 veces con un intervalo de 1 minuto.
Ejemplo 7 Efectos Antagonistas del Funcional IL-1
El método de prueba descrito anteriormente en el ejemplo 6 es repetido, pero en lugar de agregar monocitos humanos al cultivo de condrocitos, se agrega el IL-1 mismo (recombinante humano IL-1, Sandoz) a una concentración de 1 ng/ml. La actividad de la metaloproteinasa en el cultivo de condrocitos es analizada después de 2 días. Los compuestos de la invención son activos como antagonistas del funcional IL-1 a concentraciones de 1-10 uM.
Ejemplo 8 Fiebre LPS
Una suspensión de LPS (Sigma, No. L-5856; 100 ug/5 ml de solución glucosa/kg s.c) es inyectada en ratas Tuttlingen SD (150-160 g) macho. Dos horas después la temperatura corporal es medida usando una punta de prueba rectal del termistor conectado a un teletermómetro ELLAB. Después de 4 horas se administra el compuesto de prueba. Dos horas después (6 horas después de la administración del LPS) la temperatura es medida otra vez. El incremento en temperatura mostrado por los controles sin tratamiento es tomado como el 100% y aquel del grupo tratado es representado como un porcentaje de este valor. El ED_{50} es la dosis que causa una inhibición del 50% en el incremento de la temperatura determinada por las ratas de control. Los compuesto de la invención tienen típicamente un ED_{50} en este análisis de alrededor de 0.1 a alrededor de 1 mg/kg.
Ejemplo 9 Edema inducido por carragenina en la pata de una rata
Cinco ratas macho OFA, con un peso corporal de 150-170 g, son usadas para cada grupo. El compuesto de prueba es administrado oralmente como una suspensión en salina fisiológica/0.5% de tragacanto una hora antes de la inyección de carragenina. La carragenina (0.1 ml de una subvenciona de 1% en salina fisiológica) es dada a través de una inyección subplantar en una pata trasera. La hinchazón de la pata es medida por medio de un antiflogómetro de acuerdo a Kemper & Amemlm. Una lectura de control es tomada inmediatamente después de la inyección, y la hinchazón es medida después de 3 y 5 horas. El valor medio de las lecturas a 3 y 5 horas se toma después de la resta de la medida de control, y los valores obtenidos de los animales tratados se expresan como porcentajes del valor obtenido de los controles no tratados. El ED_{50} es la dosis que causa una inhibición del 50% de la hinchazón inducida por la carragenina después de 3 horas. Los compuestos de la presente invención tienen por lo general un ED_{50} en este análisis de alrededor de 0.5 a alrededor de 1 mg/kg.
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Ejemplo 10 Análisis del gen reportero para compuestos que desestabilizan el mRNA
Las líneas celulares THP-1, clon No. 63 (que contiene PGL2_Neo30) y clon No. 53 (que contiene pGL2-Control) se hacen crecer, se diferencian y se estimulan con IFN-gama y LPS de una manera idéntica a las células THP-1 (ver WO 00/39314 para los detalles). El compuesto es adicionado 16 horas después de la adición del LPS y extractos celulares son tomados 8 horas después o como indicado. La actividad de la luciferasa fue inhibida en promedio un 40% por 1 uM de derivado de ácido benzoico, mientras que una cantidad de hasta 5 uM de derivado de ácido benzoico no tuvo ningún efecto en el clon de control No. 53.
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TABLA 1
19 
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Los compuestos de la invención son por lo tanto indicados para el tratamiento de desordenes con una etiología asociada o que incluye la liberación excesiva de citocina, particularmente la liberación de IL-1, e.g. En una gran variedad de estados inflamatorios y enfermedades como la artritis reumatoidea, la osteoartritis, el shock séptico, la psoriasis, la arteriosclerosis, la enfermedad inflamatoria del intestino, la enfermedad de Crohn y el asma.
Para los usos mencionados anteriormente las dosis requeridas variaran dependiendo del modo de uso, la condición particular a ser tratada y el efecto deseado. En general sin embargo, resultados satisfactorios son alcanzados con dosis de alrededor de 0.1 a 20 mg/kg del peso corporal del animal, preferiblemente 0.5 a 5 mg/kg.
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Ejemplo 11 Preparación de una composición farmacéutica
Las tabletas, cada una incluyendo e.g. 50 mg de compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable, son preparadas de la siguiente manera:
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Composición (10000 tabletas)
Ingrediente activo 500.0 g
lactosa 500.5 g
almidón de patata 352.0 g
gelatina 8.0 g
talco 60.0 g
estearato de magnesio 10.0 g
dióxido de silicona (altamente dispersado) 20.0 g
etanol q.s 
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El ingrediente activo es mezclado con la lactosa y 292 g de almidón de patata y la mezcla es humedecida con una solución etanólica de la gelatina y es granulada a través de un tamiz. Después del secado, lo que resta del almidón de patata, el estearato de magnesio, el talco y el diosido de silicona son mezclados y esta mezcla es comprimida en forma de tabletas, cada una pesando 145.0 mg e incluyendo 50.0 mg del ingrediente activo; las tabletas pueden, si deseado, ser provistas con muescas de fácil rompimiento para una adaptación mas fina de la dosis.
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Ejemplo 12 Preparación de una composición farmacéutica
Tableta revestidas por una película, donde cada una incluye 100 mg de derivados de ácido benzoico o una sal farmacéuticamente aceptable son preparadas de la siguiente manera:
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Composición (para 1000 tabletas recubiertas por una película)
Ingrediente activo 100.0 g
lactosa 100.0 g
almidón de maíz 70.0 g
talco 60.0 g
estearato de calcio 1.5 g
hidroxipropilmetilcelulosa 2.36 g
goma laca 0.64 g
agua q.s
cloruro de metileno q.s 
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El ingrediente activo, la lactosa y 40 g de almidón de maíz son mezclados y humedecidos con una pasta preparada de 15g de almidón de maíz y agua (con calor) y granulada. Los gránulos son secados, lo que queda del almidón de maíz, el talco y el estearato de calcio son adicionados y mezclados con los gránulos. La mezcla es comprimida en forma de tabletas (peso: 280 mg) que son luego recubiertas por una película con una solución de hidroxipropilmetilcelulosa y la goma laca en cloruro de metileno; peso final de la tableta recubierta por una película: 283 mg.
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Ejemplo 13 Preparación de una composición farmacéutica
Cápsulas de gelatina dura, que incluyen 100 mg del ingrediente activo, por ejemplo de derivados de ácido benzoico o una sal farmacéuticamente aceptable son preparadas, por ejemplo, de la siguiente manera:
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Composición (para 1000 cápsulas)
Ingrediente activo 100.0 g
lactosa 250.0 g
celulosa microcristalina 30.0 g
sulfato láureo de sodio 2.0 g
estearato de magnesio 8.0 g 
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El sulfato láureo de sodio es adicionado al ingrediente activo liofilizado a través de un tamiz de 0.2 mm de tamaño de acoplamiento. Los dos componentes son íntimamente mezclados. Luego la lactosa es adicionada a través de un tamiz de 0.6 mm de tamaño de acoplamiento y la celulosa microcristalina es adicionada a través de un tamiz de 0.9 mm de tamaño de acoplamiento. La mezcla es de nuevo mezclada íntimamente por 10 minutos. Finalmente se adiciona el estearato de magnesio a través de un tamiz de 0.8 mm de tamaño de acoplamiento. Después de mezclarlos por otros 3 minutos, cápsulas duras de gelatina de tamaño 0 son llenadas con 390 mg de la formulación resultante. Cápsulas de gelatina blanda pueden ser preparadas usando ingredientes y procedimientos similares.
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Ejemplo 14 Efectos en la viabilidad de las células cancerígenas
Las líneas celulares usadas en este experimento (MCF-7, MDA-MB-231, HCT116, KB 31, HCT-15, y DU 145) fueron obtenidos de ATCC, Bethesda, MD, USA. Células de crecimiento exponencial fueron tratadas con varias concentraciones del compuesto de prueba. Las células fueron incubadas por otras 24 h, 48 h y 96 h. Las células fueron teñidas con YOPRO-1 como descrito en T. Idziorek et al., J Immunol Meth 185, 249 (1995) y el porcentaje de células muertas o próximas a morir fue determinado.
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Ejemplo 15 Efecto en la progresión del ciclo celular de las células cancerígenas
Las líneas celulares en este experimento (MCF-7, MDA-MB-231, HCT116, KB 31, HCT-15, y DU 145) fueron obtenidos de ATCC, Bethesda, MD, USA. Células de crecimiento exponencial fueron tratadas con varias concentraciones del compuesto de prueba. Las células fueron incubadas por otras 24 h, 48 h y 96 h. Las células fueron teñidas con YOPRO-1 como descrito en T. Idziorek et al., J Immunol Meth 185, 249 (1995). Las medidas fluorescentes fueron llevadas acabo esencialmente como descritas en V.L. Singer et al., Anal Biochem 249, 228 (1997) y los valores fueron comparados a las células de control.
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Ejemplo 16 Efecto en los niveles interleukin-1Beta del mRNA
El RNA celular total fue aislado de las células THP-1 diferentes veces después de la nacionalización de la diferenciación usando el método de Chirgwin et al. (44) del isotiocianato de guanidina. 20 ug de cada muestra de RNA fueron desnaturalizados y analizados en un gel de 1% de agarosa que contenía 2.2 M de formaldehido. El gel fue transferido Hybond-N (Amersham), UV-reticulado por el Stratagene Stratalinker (1600 uJoules X 100) y juzgado por una carga igual de RNA por la marca de azul de metileno. Las manchas fueron cruzadas por hibridación para una punta de prueba marcada con digoxigenina (DIG). La marcación y la detección fue llevada a cabo con el kit DIG (Boehringer Mannheim) de acuerdo a las especificaciones del productor. Las puntas de prueba del DNA fueron obtenidas por subclonación de los fragmentos RT-PCR derivados de los genes de interés, en un vector oGemT (Promega). Para el análisis RT-PCR, 1 ug de RNA total fue reversamente transcrito usando transcriptasa reversible AMV (Life Sciences Inc., St. Petesburg, Florida), y luego amplificada con el método PCR. Cada reacción PCR también contiene un conjunto de cartillas Beta-actinia como control interno. Los niveles esperados del producto
PCR fueron comparados a los niveles constantes del Beta-actinia. El tamaño de los productos PCR fue comparado con los estándares pBR322 de Mspl digerido (New England Biolabs). Los productos PCR fueron analizados en un gel de agarosa de 4%. Las secuencias nucleótidas para las cartillas 5' y 3' de los oligonucleótidos, respectivamente,
fueron:
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100
Los compuestos de la invención reducen los niveles de RNA del interleukin-1Beta hasta un 70% a concentraciones de 10 uM.

Claims (33)

1. Un compuesto que tiene una formula estructural (I):
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20 
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o osteoisómeros de este, o sales o hidratos de este característicamente aceptables o esteres hidrolisables de este que sean fisiológicamente aceptables, en donde:
R1 es H, OH halógeno, (C1-C4) alquilo, hasta C4 alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
R2 es H, OH halógeno, (C1-C4) alquilo, hasta C4 alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
R3 es H, OH halógeno, (C1-C4) alquilo, hasta C4 alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
R4 es H, OH halógeno, (C1-C4) alquilo, hasta C4 alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
R5 es H, OH halógeno, (C1-C4) alquilo, hasta C4 alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
Y es O o -NR', en donde R' es H o (C1-C4) alquilo;
n es 0-8
R6 es una lactona o un anillo lactámico con 5 a 8 miembros.
R7 es H, (C1-C4) alquilo, hasta C3 alquenilo, (C1-C4) alcoxi, fenil o (C1-C4) alquilo-COO-,
en donde el anillo lactámico o de lactona incluye opcionalmente uno o mas C=C enlaces dobles y el anillo lactámico o de lactona es opcionalmente sustituido con uno o mas (C1-C4) alquilo o hasta C4 grupos alquenilos:
a condición de que cuando R1 = R2 = R3 = R4 = R5 = R7 = H, y Y es O, y n es 0, entonces R6 es otro que:
21 
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2. El compuesto según la demanda 1, en donde:
R1 = H, OH, MeCOO- o Metoxi;
R2 = H;
R3 = H, OH, MeCOO- o Metoxi;
R4 = H, Metoxi o Halógeno;
R5 = H, OH, Metoxi o (C1-C4) alquilo;
Y es O;
R6 es
22 
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en donde, m es 0-4;
R7 = H, Metil, Isopropil.
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3. El compuesto según la demanda 1, en donde:
R1 = H, -OH, MeO- o MeCOO-;
R2 = H;
R3 = H, -OH, MeO- o MeCOO-;
R4 = H o Halógeno;
R5 = H, OH, MeO-, MeCOO- o Metil;
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4. El compuesto según la demanda 2, en donde:
R1 = H o MeO-;
R3 = H, -OH, o MeO-;
R4 = H;
R5 = Metoxi o Metil;
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5. El compuesto según la demanda 1, en donde tal compuesto es seleccionado del grupo de compuestos:
23 
\newpage
6. El compuesto según la demanda 1, en donde tal compuesto es seleccionado del grupo de compuestos:
24
7. Un proceso para la preparación del compuesto de Formula I, de acuerdo a la demanda 1, un éster o amida de esta formula que sea metabólico lábil y farmacéuticamente aceptable, o una sal de esta que sea farmacéuticamente aceptable, los cuales incluyen:
a. Reaccionar un compuesto de fórmula (III):
25
en donde,
R1 es H, OH halógeno, (C1-C4) alquilo, (C1-C4) alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
R2 es H, OH halógeno, (C1-C4) alquilo, (C1-C4) alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
R3 es H, OH halógeno, (C1-C4) alquilo, (C1-C4) alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
R4 es H, OH halógeno, (C1-C4) alquilo, (C1-C4) alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
R5 es H, OH halógeno, (C1-C4) alquilo, (C1-C4) alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
con un compuesto de formula (III):
26
en donde:
n' es 1-9; y
m es 0-4;
el compuesto (III) contiene opcionalmente uno o más enlaces dobles C=C y es substituido con uno o más grupos (C1-C4) alquilo o (C1-C4) alquenilo; o
b) Reaccionar un compuesto de fórmula (IV):
27
en donde R1-R5 son como definidos anteriormente;
con un compuesto de formula (III) en la presencia de un ácido bajo condiciones de destilación Azeotrópica; o
c) Reaccionar una sal de un metal álcali o alcalinotérreo de un compuesto de formula (IV):
28
en donde R1-R5 son como definidos anteriormente;
con un compuesto de formula (V):
29
en donde;
X es F, Cl, BR o I;
n' es 1-9; y
m es 0-4;
y el el compuesto de formula (IV) contiene opcionalmente uno o más enlaces dobles y es substituido con uno o más grupos (C1-C4) alquilo o (C1-C4) alquenilo.
\newpage
8. Una composición farmacéuticamente que incluya un compuesto que tenga como formula estructural (I):
30
un estereoisómero de este, o una sal o hidrato de este que sea farmacéuticamente aceptable o un éste de este que sea hidrosoluble y fisiológicamente aceptable y un portador farmacéuticamente aceptable, diluyente o excipiente;
en donde:
R1 es H, OH halógeno, (C1-C4) alquilo, (C1-C4) alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
R2 es H, OH halógeno, (C1-C4) alquilo, (C1-C4) alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
R3 es H, OH halógeno, (C1-C4) alquilo, (C1-C4) alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
R4 es H, OH halógeno, (C1-C4) alquilo, (C1-C4) alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
R5 es H, OH halógeno, (C1-C4) alquilo, (C1-C4) alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
Y es O o -NR', en donde R' es H o (C1-C4) alquilo;
n es 0-8;
R6 es un anillo lactámico o de lactona con 5 a 8 miembros.
R7 es H, (C1-C4) alquilo, hasta C4 alquenilo, (C1-C4) alcoxi, fenil o (C1-C4) alquilo-COO-;
en donde el anillo lactámico o de lactona incluye opcionalmente uno o mas enlaces dobles C=C y el anillo lactámico o de lactona es opcionalmente sustituido con uno o mas (C1-C4) alquilo o hasta C4 grupos alquenilos; para la profilaxis o el tratamiento de cáncer o una enfermedad maligna, o una enfermedad inflamatoria o una condición medica; o para la profilaxis o tratamiento de una enfermedad o condición medica seleccionada del grupo que incluye: inflamación aguda y/o crónica, enfermedades autoinmunes, enfermedades respiratorias, enfermedades infecciosas, rechazo de trasplantes, inflamaciones neuronales, la enfermedad de Alzheimer y enfermedades cardiovasculares; o para el tratamiento y prevención de cánceres con un oncogén mediador y enfermedades malignas, para tratar y prevenir el crecimiento de tumores y la invasión de metástasis en general, y para prevenir o revertir la resistencia a multidrogas.
9. Una composición farmacéutica incluye uno o mas compuestos de acuerdo a cualquiera de las demandas 1-6 y un portador, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.
10. La composición de acuerdo a las demandas 8 o 9 incluye adicionalmente un agente citoestático o citotóxico.
11. La composición de acuerdo a las demandas 8 o 9 incluye adicionalmente un agente quimioterapéutico.
12. El uso de un compuesto que tiene formula estructural (I):
31
o estereoisómeros de este, o una sal o hidrato de este que sea farmacéuticamente aceptable o un éster de este que sea hidrosoluble y fisiológicamente aceptable en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de un
mamífero
en donde:
R1 es H, OH halógeno, (C1-C4) alquilo, hasta C4 alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
R2 es H, OH halógeno, (C1-C4) alquilo, hasta C4 alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
R3 es H, OH halógeno, (C1-C4) alquilo, hasta C4 alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
R4 es H, OH halógeno, (C1-C4) alquilo, hasta C4 alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
R5 es H, OH halógeno, (C1-C4) alquilo, hasta C4 alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
Y es O o -NR', en donde R' es H o (C1-C4) alquilo;
n es 0-8;
R6 es un anillo lactámico o de lactona con 5 a 8 miembros.
R7 es H, (C1-C4) alquilo, hasta C4 alquenilo, (C1-C4) alcoxi, fenil o (C1-C4) alquilo-COO-;
en donde el anillo lactámico o de lactona incluye opcionalmente uno o mas enlaces dobles C=C y el anillo lactámico o de lactona es opcionalmente sustituido con uno o mas (C1-C4) alquilo o hasta C4 grupos alquenilos.
13. El uso del compuesto de acuerdo a cualquiera de las demandas 1-6 en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de un mamífero.
14. El uso del compuesto de acuerdo a la demandas 12 o 13, en donde el medicamento mencionado es utilizado en el tratamiento de un cáncer o una enfermedad maligna.
15. El uso de acuerdo a la demanda 14, en donde se menciona que el cáncer y/o las enfermedades malignas incluyen la proliferación anormal de células malignas de varios tejidos y/o órganos seleccionados del grupo que incluye: músculos, huesos o tejido conectivo, la piel, el cerebro, los pulmones, los órganos sexuales, el sistema linfático y renal, células de mama o de sangre, hígado, el tracto digestivo, el páncreas o la tiroides o las glándulas
adrenales.
16. El uso de acuerdo a la demanda 14, en donde se menciona que el cáncer y/o las enfermedades malignas son seleccionadas de un grupo que incluye: tumores sólidos, cáncer de los ovarios, pecho, cerebro, próstata, colon, estomago, riñones o testículos, sarcoma de Kaposi, colangioma, corioma, neuroblastoma, tumor de Wilms, enfermedad de Hodgkin, melanomas, mielomas múltiples, leucemias linfáticas y linfomas granulociticos graves o crónicos.
17. El uso del compuesto de acuerdo a las demandas 12 o 13, en donde el medicamento mencionado es utilizado en el tratamiento de una enfermedad inflamatoria o una condición médica.
18. El uso de acuerdo a las demanda 17, en donde se menciona que una enfermedad o condición medica es seleccionada del grupo que incluye: la artritis reumatoidea, osteoartritis, shock séptico, psoriasis, aterosclerosis, enfermedad inflamatoria del intestino, enfermedad de Crohn y asma.
19. El uso del compuesto de acuerdo a la demandas 12 o 13, en donde el medicamento mencionado es utilizado en el tratamiento de una enfermedad o condición medica seleccionada del grupo que incluye : inflamación aguda y/o crónica, enfermedades autoinmunes, enfermedades respiratorias, enfermedades infecciosas, rechazo de trasplantes, inflamaciones neuronales, la enfermedad de Alzheimer y enfermedades cardiovasculares.
20. El uso del compuesto de acuerdo a la demandas 12 o 13, en donde el medicamento mencionado es utilizado en el tratamiento y prevención de cánceres con un oncogén mediador y enfermedades malignas, para tratar y prevenir el crecimiento de tumores y/o la invasión de metástasis en general, o para prevenir o revertir la resistencia a
multidrogas.
21. El uso del compuesto de acuerdo a cualquiera de las demandas 12-20, en donde el mamífero mencionado es un humano.
\newpage
22. Un compuesto que tiene como formula estructural (I):
32
o estereoisómeros de este, o una sal o hidrato de este que sea farmacéuticamente aceptable o un éster de este que sea hidrosoluble y fisiológicamente aceptable
en donde:
R1 es H, OH halógeno, (C1-C4) alquilo, hasta C4 alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
R2 es H, OH halógeno, (C1-C4) alquilo, hasta C4 alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
R3 es H, OH halógeno, (C1-C4) alquilo, hasta C4 alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
R4 es H, OH halógeno, (C1-C4) alquilo, hasta C4 alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
R5 es H, OH halógeno, (C1-C4) alquilo, hasta C4 alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
Y es O o -NR', en donde R' es H o (C1-C4) alquilo;
n es 0-8;
R6 es un anillo lactámico o de lactona con 5 a 8 miembros.
R7 es H, (C1-C4) alquilo, hasta C4 alquenilo, (C1-C4) alcoxi, fenil o (C1-C4) alquilo-COO-;
en donde el anillo lactámico o de lactona incluye opcionalmente uno o mas enlaces dobles C=C y el anillo lactámico o de lactona es opcionalmente sustituido con uno o mas (C1-C4) alquilo o hasta C4 grupos alquenilos, para la profilaxis o el tratamiento de un cáncer y/o una enfermedad maligna.
23. El compuesto de acuerdo a cualquiera de las demandas 1-6, para la profilaxis o tratamiento de un cáncer y/o una enfermedad maligna.
24. El compuesto de acuerdo a las demandas 22-23, en donde el cáncer y/o enfermedades malignas mencionas incluyen la proliferación anormal de células malignas de varios tejidos y/o órganos seleccionados del grupo que incluye: músculos, huesos o tejido conectivo, la piel, el cerebro, los pulmones, los órganos sexuales, el sistema linfático y renal, células de mama o de sangre, hígado, el tracto digestivo, el páncreas o la tiroides o las glándulas adrenales.
25. El compuesto de acuerdo a las demandas 22-23, en donde el cáncer y/o enfermedades malignas mencionas son seleccionadas de un grupo que incluye: tumores sólidos, cáncer de los ovarios, pecho, cerebro, próstata, colon, estomago, riñones o testículos, sarcoma de Kaposi, colangioma, corioma, neuroblastoma, tumor de Wilms, enfermedad de Hodgkin, melanomas, mielomas múltiples, leucemias linfáticas y linfomas granulociticos graves o crónicos.
26. Un compuesto que tiene formula estructural (I):
33
estereoisómeros de este, o una sal o hidrato de este que sea farmacéuticamente aceptable o un éster de este que sea hidrosoluble y fisiológicamente aceptable
en donde:
R1 es H, OH halógeno, (C1-C4) alquilo, hasta C4 alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
R2 es H, OH halógeno, (C1-C4) alquilo, hasta C4 alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
R3 es H, OH halógeno, (C1-C4) alquilo, hasta C4 alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
R4 es H, OH halógeno, (C1-C4) alquilo, hasta C4 alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
R5 es H, OH halógeno, (C1-C4) alquilo, hasta C4 alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
Y es O o -NR', en donde R' es H o (C1-C4) alquilo;
n es 0-8;
R6 es un anillo lactámico o de lactona con 5 a 8 miembros.
R7 es H, (C1-C4) alquilo, hasta C4 alquenilo, (C1-C4) alcoxi, fenil o (C1-C4) alquilo-COO-;
en donde el anillo lactámico o de lactona incluye opcionalmente uno o mas enlaces dobles C=C y el anillo lactámico o de lactona es opcionalmente sustituido con uno o mas (C1-C4) alquilo o hasta C4 grupos alquenilos, para la profilaxis o el tratamiento de un cáncer y/o una enfermedad maligna.
27. El compuesto de acuerdo a cualquiera de las demandas 1-6, para la profilaxis o tratamiento de un cáncer y/o una enfermedad maligna.
28. El compuesto de acuerdo a las demandas 26-27, en donde la enfermedad o condición medica es seleccionada del grupo que incluye: la artritis reumatoidea, osteoartritis, shock séptico, psoriasis, aterosclerosis, enfermedad inflamatoria del intestino, enfermedad de Crohn y asma.
29. Un compuesto que tiene formula estructural (I):
34
estereoisómeros de este, o una sal o hidrato de este que sea farmacéuticamente aceptable o un éster de este que sea hidrosoluble y fisiológicamente aceptable
en donde:
R1 es H, OH halógeno, (C1-C4) alquilo, hasta C4 alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
R2 es H, OH halógeno, (C1-C4) alquilo, hasta C4 alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
R3 es H, OH halógeno, (C1-C4) alquilo, hasta C4 alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
R4 es H, OH halógeno, (C1-C4) alquilo, hasta C4 alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
R5 es H, OH halógeno, (C1-C4) alquilo, hasta C4 alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
Y es O o -NR', en donde R' es H o (C1-C4) alquilo;
n es 0-8;
R6 es un anillo lactámico o de lactona con 5 a 8 miembros.
R7 es H, (C1-C4) alquilo, hasta C4 alquenilo, (C1-C4) alcoxi, fenil o (C1-C4) alquilo-COO-;
en donde el anillo lactámico o de lactona incluye opcionalmente uno o mas enlaces dobles C=C y el anillo lactámico o de lactona es opcionalmente sustituido con uno o mas (C1-C4) alquilo o hasta C4 grupos alquenilos, para el tratamiento y prevención de cánceres con un oncogén mediador y enfermedades malignas, para tratar y prevenir el crecimiento de tumores y la invasión de metástasis en general, y para prevenir o revertir la resistencia a multidrogas.
30. El compuesto de acuerdo a cualquiera de las demandas 1-6, para el tratamiento y prevención de cánceres con un oncogén mediador y enfermedades malignas, para tratar y prevenir el crecimiento de tumores y la invasión de metástasis en general, y para prevenir o revertir la resistencia a multidrogas.
31. Un compuesto que tiene formula estructural (I):
35
estereoisómeros de este, o una sal o hidrato de este que sea farmacéuticamente aceptable o un éster de este que sea hidrosoluble y fisiológicamente aceptable
en donde:
R1 es H, OH halógeno, (C1-C4) alquilo, hasta C4 alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
R2 es H, OH halógeno, (C1-C4) alquilo, hasta C4 alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
R3 es H, OH halógeno, (C1-C4) alquilo, hasta C4 alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
R4 es H, OH halógeno, (C1-C4) alquilo, hasta C4 alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
R5 es H, OH halógeno, (C1-C4) alquilo, hasta C4 alquenilo, (C1-C4) alcoxi, o (C1-C4) alquilo-COO-;
Y es O o -NR', en donde R' es H o (C1-C4) alquilo;
n es 0-8;
R6 es un anillo lactámico o de lactona con 5 a 8 miembros.
R7 es H, (C1-C4) alquilo, hasta C4 alquenilo, (C1-C4) alcoxi, fenil o (C1-C4) alquilo-COO-;
en donde el anillo lactámico o de lactona incluye opcionalmente uno o mas enlaces dobles C=C y el anillo lactámico o de lactona es opcionalmente sustituido con uno o mas (C1-C4) alquilo o hasta C4 grupos alquenilos, para el tratamiento y prevención de cánceres con un oncogén mediador y enfermedades malignas, para tratar y prevenir el crecimiento de tumores y la invasión de metástasis en general, y para prevenir o revertir la resistencia a multidrogas.
32. El compuesto de acuerdo a cualquiera de las demandas 1-6, para el tratamiento y prevención de una enfermedad o condición medica seleccionada del grupo que incluye : inflamación aguda y/o crónica, enfermedades autoinmunes, enfermedades respiratorias, enfermedades infecciosas, rechazo de trasplantes, inflamaciones neuronales, la enfermedad de Alzheimer y enfermedades cardiovasculares.
33. El compuesto de acuerdo a cualquiera de las demandas 22-32, para el tratamiento de un humano.
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