ES2275433A1 - Metodo para la proteccion de crecimiento de plantas de tomate. - Google Patents

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Abstract

El método consiste en poner en contacto con las raíces de plántulas de tomate una suspensión de conidias formuladas de Penicillium oxalicum, cuando las plantas están en el semillero, de manera que dichas conidias potencian el desarrollo o crecimiento de las plántulas de tomate.

Description

Método para promoción de crecimiento de plantas de tomate.
Objeto de la invención
La presente invención se refiere a un método para potenciar o promocionar el crecimiento de plantas de tomate.
El método consiste en un tratamiento de las plantas en semillero con un microorganismo, concretamente con el Penicillium oxalicum, hongo que coloniza la rizosfera de las plantas de tomate potenciando el crecimiento de las mismas.
Antecedentes de la invención
La influencia de microorganismos en el crecimiento de las plantas es un fenómeno bien conocido en una serie de sistemas microorganismo-planta como las simbiosis rizobacteria-leguminosa y otras asociaciones bacterianas con especies vegetales diferentes (Spaink et al, 1998, Oke et al, 1999; Rai et al 2000). La promoción del crecimiento por diferentes géneros de hongos también ha sido constatada y se han aislado una serie de moléculas con características de fitohormonas que por si mismas son capaces de llevar a cabo este efecto promotor del crecimiento (Okon, 1994; Tikhonovich et al., 2004). El efecto promotor del crecimiento también es una característica asociada a muchos microorganismos que actúan como antagonistas induciendo resistencia en plantas frente a infecciones por patógenos (Murphy et al., 2000; Park et al., 2000; Zehnder et al, 2001; Tikhonovich et al., 2004). Penicillium oxalicum es un agente de biocontrol de la marchitez vascular del tomate inducida por patógenos como Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici y Verticillium dahliae. En experimentos in vitro previos se ha visto que la inmersión semillas de distintos cultivares de tomate en suspensiones de conidias de P. oxalicum durante 30 minutos da lugar a plantas que presentan un desarrollo más rápido y un mayor peso de raíces que las que no han sido expuestas a la acción del hongo (García-Lepe et al., 1996; Pascual, 1998). En estos ensayos se evaluó la promoción de crecimiento en semillas tratadas y no tratadas con P. oxalicum y sembradas en placas de Petri con distintos medios de cultivo. También se ha demostrado previamente que el tratamiento de semillas con P. oxalicum no es el más adecuado para conseguir controlar la marchitez vascular (De Cal et al., 1999). Se ha demostrado que el mejor método de aplicación de las conidias para el control de esta enfermedad en plantas de tomate es mediante un riego a las raíces en el semillero una semana antes del transplante (De Cal et al., 1999). Además, en los experimentos aludidos las conidias utilizadas se producían en un medio axénico de laboratorio, agar patata dextrosa, imposible de utilizar a gran escala a nivel industrial.
Descripción de la invención
El método que la invención propone demuestra la promoción del crecimiento en plantas de tomate plantadas en semillero y tratadas con Penicillium oxalicum. Dicho método de aplicación es sencillo y puede llevarse a cabo en condiciones de cultivo reales, a la vez que las conidias se producen mediante un método fácilmente escalable a nivel industrial.
Las conidias se presentan en una formulación seca que es estable y fácilmente aplicable en condiciones prácticas y la promoción de crecimiento está relacionada con el biocontrol de marchiteces vasculares de tomate.
De forma más concreta el método consiste en poner en contacto las raíces de las plantas con las conidias, concretamente en fase de plántulas para las primeras, en el correspondiente semillero, con una concentración final en el sustrato de dicho semillero comprendido entre 6x10^{6} y 10x10^{6} conidias por gramo.
La aplicación en suspensión se lleva a cabo mediante mediante riego del semillero.
Descripción de las figuras
Para complementar la descripción que se está realizando y con objeto de ayudar a una mejor comprensión de las características del invento, de acuerdo con un ejemplo preferente de realización práctica del mismo, se acompaña como parte integrante de dicha descripción, un juego de figuras en donde con carácter ilustrativo y no limitativo, se ha representado lo siguiente:
La figura 1.- Muestra dos fotografías de semilleros de plantas de tomate, las de la izquierdas tratadas con "Penicillium oxalicum" y las de la derecha no tratadas.
La figura 2.- Muestra fotografías de plántulas de tomate, las de la derecha tratadas en semillero con conidias de Penicillium oxalicum y las de la izquierda no tratadas.
La figura 3.- Muestra, finalmente, fotografías de semilleros de plantas de tomate en bandejas de alveolos, las de la derecha tratadas con conidias de Penicillum oxalicum y las de la izquierda sin tratar.
Experimento de realización práctica de la invención
El aislado de P. oxalicum (PO-212), se encuentra actualmente en la Colección Americana de Cultivos Tipo y tiene el número ATCC 201888. Se almacena en tubos con agar patata dextrosa (APD) a 4ºC y para producción inicial de conidias se crece en placas de Petri con APD a 20-25ºC durante 7 días en la oscuridad. Las conidias utilizadas para realizar los experimentos de promoción de crecimiento se producen y formulan de la siguiente forma. El hongo se crece en una mezcla de turba (Gebr. BRILL substrate GmbH&Co. KG, Germany): vermiculita (Termita, Asfaltex, S.A., Barcelona, Spain): harina de lenteja (1:1:0.5, p/p/p). Cincuenta gramos de este substrato (con un 40% p/p de contenido de agua) se introducen en bolsas de plástico (600 cm^{3}) diseñadas para fermentación sólida (VALMIC^{R}, Sacherei de Pont-Audemer S.A., France), se sellan y se esterilizan por autoclave a 1.0 kg cm^{-2} y 120ºC durante 1 h y 3 días consecutivos. Las bolsas se inoculan entonces con una suspensión de conidias de P. oxalicum producidas en APD a una concentración tal que se obtengan 10^{5} conidia g^{-1} substrato seco, se sellan de nuevo y se incuban en la oscuridad a 20-25ºC durante 5 días. Se añade agua estéril a esta mezcla de conidias + substrato a una proporción de 1:4, p/v. Esta suspensión se mezcla en un agitador orbital (Lab-Line Instruments, Inc., modelo 3527, Melrose Park, Illinois, USA) a 200 rpm durante 10 min y se filtra por lana de vidrio. La mayoría de las conidias pasan a través de ella y la suspensión de conidias recogida se concentra por centrifugación a 10.000 rpm durante 10 min. Las conidias se resuspenden en una solución de 1.5% alginato sódico donde se mantienen durante 10 minutos, filtrándose a continuación a vacío a través papel de filtro (1 \mum). El rendimiento final de conidias obtenido tras este proceso es de 10^{8} conidia g^{-1} peso seco de substrato. Un vez filtradas, las conidias se secan en un lecho fluido hasta conseguir que la humedad de las mismas sea inferior al 10%. Para el secado se introduce la pasta de conidias en un lecho fluido modelo 350 s (Burkard Manufacturing Co Ltd., Hertfordshire, UK), al máximo flujo de aire y a 40ºC durante el tiempo necesario para conseguir la humedad requerida. Estas conidias tienen una viabilidad media del 80%.
Semillas de tomate cv. San Pedro se sembraron en bandejas (27x42x7 cm) que contenían una mezcla autoclavada de vermiculita y turba (1:1, v:v). Las bandejas se mantuvieron en una cámara de crecimiento a 22-28ºC con luz fluorescente (100 \muE/m^{2} s, 16 h fotoperiodo) y 80-100% humedad relativa durante 3 semanas. En ese momento las plántulas tenían 2-4 hojas y recibieron un riego en el semillero con una suspensión de conidias formuladas de P. oxalicum a una concentración tal que la concentración final en el substrato del semillero (vermiculita:turba, 1:1 v/v) fué de 6 x 10^{6} conidias g^{-1}. El tratamiento control consistió en regar las plántulas sólo con agua destilada estéril. Una vez tratadas las bandejas de semillero se trasladaron a un invernadero, en el que estuvieron 7 días, transcurridos los cuales las plántulas se transplantan a su terreno de asiento. En este momento se sacaron cuidadosamente las plantas del semillero, separándose la parte aérea de las raíces. Se contó el número total de hojas de 10 plantas por tratamiento y se pesaron por separado las raíces de 3 plantas por tratamiento. Los datos se analizaron por análisis de la varianza. Cuando el test F resultaba significativo (P = 0.05) las medias se compararon por el test de Student-Newman-Keul
(P = 0.05).
Los resultados del ensayo se muestran en la Tabla 1
TABLA 1 Efecto del tratamiento de conidias de Pencillium oxalicum sobre el crecimiento de plantas de tomate cv San Pedro
Tratamiento Peso raíz (mg) Nº hojas
Penicillium oxalicum 800 \pm 60 30
Control no tratado 430 \pm 30 29
Como se puede observar el nº de hojas es mayor en las plantas tratadas y el peso de raíz se duplica.

Claims (3)

1. Método para promoción de crecimiento de plantas de tomate, caracterizado porque consiste en poner en contacto las raíces de las plantas de tomate con conidias de Penicillium oxalicum.
2. Método para promoción de crecimiento de plantas de tomate, según reivindicación 1ª, caracterizado porque las conidias, producidas en fermentación sólida, se introducen en una solución de alginato sódico, se secan en un lecho fluido hasta conseguir una humedad inferior al 10% y se aplican sobre las raíces de plantas de tomate o sobre la tierra en la que están implantadas.
3. Método para promoción de crecimiento de plantas de tomate, según reivindicaciones anteriores, caracterizado porque la concentración de conidias está comprendida el 6 x 10^{6} el 10 x 10^{6} conidias por gramo.
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