ES2275433A1 - Metodo para la proteccion de crecimiento de plantas de tomate. - Google Patents
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Abstract
El método consiste en poner en contacto con las raíces de plántulas de tomate una suspensión de conidias formuladas de Penicillium oxalicum, cuando las plantas están en el semillero, de manera que dichas conidias potencian el desarrollo o crecimiento de las plántulas de tomate.
Description
Método para promoción de crecimiento de plantas
de tomate.
La presente invención se refiere a un método
para potenciar o promocionar el crecimiento de plantas de
tomate.
El método consiste en un tratamiento de las
plantas en semillero con un microorganismo, concretamente con el
Penicillium oxalicum, hongo que coloniza la rizosfera de las
plantas de tomate potenciando el crecimiento de las mismas.
La influencia de microorganismos en el
crecimiento de las plantas es un fenómeno bien conocido en una
serie de sistemas microorganismo-planta como las
simbiosis rizobacteria-leguminosa y otras
asociaciones bacterianas con especies vegetales diferentes (Spaink
et al, 1998, Oke et al, 1999; Rai et al 2000).
La promoción del crecimiento por diferentes géneros de hongos
también ha sido constatada y se han aislado una serie de moléculas
con características de fitohormonas que por si mismas son capaces de
llevar a cabo este efecto promotor del crecimiento (Okon, 1994;
Tikhonovich et al., 2004). El efecto promotor del
crecimiento también es una característica asociada a muchos
microorganismos que actúan como antagonistas induciendo resistencia
en plantas frente a infecciones por patógenos (Murphy et
al., 2000; Park et al., 2000; Zehnder et al, 2001;
Tikhonovich et al., 2004). Penicillium oxalicum es un
agente de biocontrol de la marchitez vascular del tomate inducida
por patógenos como Fusarium oxysporum f. sp.
lycopersici y Verticillium dahliae. En experimentos
in vitro previos se ha visto que la inmersión semillas de
distintos cultivares de tomate en suspensiones de conidias de P.
oxalicum durante 30 minutos da lugar a plantas que presentan un
desarrollo más rápido y un mayor peso de raíces que las que no han
sido expuestas a la acción del hongo (García-Lepe
et al., 1996; Pascual, 1998). En estos ensayos se evaluó la
promoción de crecimiento en semillas tratadas y no tratadas con
P. oxalicum y sembradas en placas de Petri con distintos
medios de cultivo. También se ha demostrado previamente que el
tratamiento de semillas con P. oxalicum no es el más
adecuado para conseguir controlar la marchitez vascular (De Cal
et al., 1999). Se ha demostrado que el mejor método de
aplicación de las conidias para el control de esta enfermedad en
plantas de tomate es mediante un riego a las raíces en el semillero
una semana antes del transplante (De Cal et al., 1999).
Además, en los experimentos aludidos las conidias utilizadas se
producían en un medio axénico de laboratorio, agar patata dextrosa,
imposible de utilizar a gran escala a nivel industrial.
El método que la invención propone demuestra la
promoción del crecimiento en plantas de tomate plantadas en
semillero y tratadas con Penicillium oxalicum. Dicho método
de aplicación es sencillo y puede llevarse a cabo en condiciones de
cultivo reales, a la vez que las conidias se producen mediante un
método fácilmente escalable a nivel industrial.
Las conidias se presentan en una formulación
seca que es estable y fácilmente aplicable en condiciones prácticas
y la promoción de crecimiento está relacionada con el biocontrol de
marchiteces vasculares de tomate.
De forma más concreta el método consiste en
poner en contacto las raíces de las plantas con las conidias,
concretamente en fase de plántulas para las primeras, en el
correspondiente semillero, con una concentración final en el
sustrato de dicho semillero comprendido entre 6x10^{6} y
10x10^{6} conidias por gramo.
La aplicación en suspensión se lleva a cabo
mediante mediante riego del semillero.
Para complementar la descripción que se está
realizando y con objeto de ayudar a una mejor comprensión de las
características del invento, de acuerdo con un ejemplo preferente
de realización práctica del mismo, se acompaña como parte
integrante de dicha descripción, un juego de figuras en donde con
carácter ilustrativo y no limitativo, se ha representado lo
siguiente:
La figura 1.- Muestra dos fotografías de
semilleros de plantas de tomate, las de la izquierdas tratadas con
"Penicillium oxalicum" y las de la derecha no
tratadas.
La figura 2.- Muestra fotografías de plántulas
de tomate, las de la derecha tratadas en semillero con conidias de
Penicillium oxalicum y las de la izquierda no tratadas.
La figura 3.- Muestra, finalmente, fotografías
de semilleros de plantas de tomate en bandejas de alveolos, las de
la derecha tratadas con conidias de Penicillum oxalicum y
las de la izquierda sin tratar.
El aislado de P. oxalicum
(PO-212), se encuentra actualmente en la Colección
Americana de Cultivos Tipo y tiene el número ATCC 201888. Se
almacena en tubos con agar patata dextrosa (APD) a 4ºC y para
producción inicial de conidias se crece en placas de Petri con APD a
20-25ºC durante 7 días en la oscuridad. Las
conidias utilizadas para realizar los experimentos de promoción de
crecimiento se producen y formulan de la siguiente forma. El hongo
se crece en una mezcla de turba (Gebr. BRILL substrate GmbH&Co.
KG, Germany): vermiculita (Termita, Asfaltex, S.A., Barcelona,
Spain): harina de lenteja (1:1:0.5, p/p/p). Cincuenta gramos de
este substrato (con un 40% p/p de contenido de agua) se introducen
en bolsas de plástico (600 cm^{3}) diseñadas para fermentación
sólida (VALMIC^{R}, Sacherei de Pont-Audemer
S.A., France), se sellan y se esterilizan por autoclave a 1.0 kg
cm^{-2} y 120ºC durante 1 h y 3 días consecutivos. Las bolsas se
inoculan entonces con una suspensión de conidias de P.
oxalicum producidas en APD a una concentración tal que se
obtengan 10^{5} conidia g^{-1} substrato seco, se sellan de
nuevo y se incuban en la oscuridad a 20-25ºC
durante 5 días. Se añade agua estéril a esta mezcla de conidias +
substrato a una proporción de 1:4, p/v. Esta suspensión se mezcla
en un agitador orbital (Lab-Line Instruments,
Inc., modelo 3527, Melrose Park, Illinois, USA) a 200 rpm durante
10 min y se filtra por lana de vidrio. La mayoría de las conidias
pasan a través de ella y la suspensión de conidias recogida se
concentra por centrifugación a 10.000 rpm durante 10 min. Las
conidias se resuspenden en una solución de 1.5% alginato sódico
donde se mantienen durante 10 minutos, filtrándose a continuación a
vacío a través papel de filtro (1 \mum). El rendimiento final de
conidias obtenido tras este proceso es de 10^{8} conidia g^{-1}
peso seco de substrato. Un vez filtradas, las conidias se secan en
un lecho fluido hasta conseguir que la humedad de las mismas sea
inferior al 10%. Para el secado se introduce la pasta de conidias
en un lecho fluido modelo 350 s (Burkard Manufacturing Co Ltd.,
Hertfordshire, UK), al máximo flujo de aire y a 40ºC durante el
tiempo necesario para conseguir la humedad requerida. Estas
conidias tienen una viabilidad media del 80%.
Semillas de tomate cv. San Pedro se sembraron en
bandejas (27x42x7 cm) que contenían una mezcla autoclavada de
vermiculita y turba (1:1, v:v). Las bandejas se mantuvieron en una
cámara de crecimiento a 22-28ºC con luz fluorescente
(100 \muE/m^{2} s, 16 h fotoperiodo) y 80-100%
humedad relativa durante 3 semanas. En ese momento las plántulas
tenían 2-4 hojas y recibieron un riego en el
semillero con una suspensión de conidias formuladas de P.
oxalicum a una concentración tal que la concentración final en
el substrato del semillero (vermiculita:turba, 1:1 v/v) fué de 6 x
10^{6} conidias g^{-1}. El tratamiento control consistió en
regar las plántulas sólo con agua destilada estéril. Una vez
tratadas las bandejas de semillero se trasladaron a un invernadero,
en el que estuvieron 7 días, transcurridos los cuales las plántulas
se transplantan a su terreno de asiento. En este momento se sacaron
cuidadosamente las plantas del semillero, separándose la parte
aérea de las raíces. Se contó el número total de hojas de 10
plantas por tratamiento y se pesaron por separado las raíces de 3
plantas por tratamiento. Los datos se analizaron por análisis de la
varianza. Cuando el test F resultaba significativo (P =
0.05) las medias se compararon por el test de
Student-Newman-Keul
(P = 0.05).
(P = 0.05).
Los resultados del ensayo se muestran en la
Tabla 1
Tratamiento | Peso raíz (mg) | Nº hojas |
Penicillium oxalicum | 800 \pm 60 | 30 |
Control no tratado | 430 \pm 30 | 29 |
Como se puede observar el nº de hojas es mayor
en las plantas tratadas y el peso de raíz se duplica.
Claims (3)
1. Método para promoción de crecimiento de
plantas de tomate, caracterizado porque consiste en poner en
contacto las raíces de las plantas de tomate con conidias de
Penicillium oxalicum.
2. Método para promoción de crecimiento de
plantas de tomate, según reivindicación 1ª, caracterizado
porque las conidias, producidas en fermentación sólida, se
introducen en una solución de alginato sódico, se secan en un lecho
fluido hasta conseguir una humedad inferior al 10% y se aplican
sobre las raíces de plantas de tomate o sobre la tierra en la que
están implantadas.
3. Método para promoción de crecimiento de
plantas de tomate, según reivindicaciones anteriores,
caracterizado porque la concentración de conidias está
comprendida el 6 x 10^{6} el 10 x 10^{6} conidias por gramo.
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