ES2265636T3 - Esteres fosfolipidicos de clofarabina. - Google Patents

Esteres fosfolipidicos de clofarabina. Download PDF

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Abstract

Un derivado nucleotídico de **fórmula**, en la que R1 se selecciona del grupo que consta de una cadena de alquilo lineal o ramificada, saturada o no saturada, que tiene 1-20 átomos de carbono, que está no sustituida o que está sustituida al menos una vez con grupos halógeno, alcoxi C1-C6, alquil C1-C6-mercapto, alcoxi C1-C6- carbonilo, alquil C1-C6-sulfinilo o alquil C1-C6-sulfonilo, R2 se selecciona del grupo que consta de hidrógeno, una cadena alquilo lineal o ramificada, saturada o no saturada, que tiene 1-20 átomos de carbono, que está no sustituida o que está sustituida al menos una vez con grupos halógeno, alcoxi C1-C6, alquil C1-C6-mercapto, alcoxi C1-C6-carbonilo o alquil C1-C6-sulfonilo, R3 es amino, X se selecciona del grupo que consta de un átomo de azufre, un grupo sulfinilo o un grupo sulfonilo, Y es oxígeno, con lo que, cuando R3 es amino, dicho grupo amino puede estar no sustituido o puede estar sustituido con un grupo protector de amino conocido, sus tautómeros, sus formas ópticamente activas y mezclas racémicas, y sus sales fisiológicamente aceptables de ácidos o bases inorgánicos y orgánicos.

Description

Esteres fosfolipídicos de clofarabina.
El objeto de la presente invención son ésteres lipídicos específicos de nucleótidos de la fórmula general I,
1
en la que
R^{1}
es resto alquilo de cadena lineal o ramificada, saturado o no saturado, que tiene 1-20 átomos de carbono, opcionalmente mono- o polisustituido con grupos halógeno, alcoxi C_{1}-C_{6}, alquil C_{1}-C_{6}-mercapto, alcoxi C_{1}-C_{6}-carbonilo, alquil C_{1}-C_{6}-sulfinilo o alquil C_{1}-C_{6}sulfonilo,
R^{2}
es hidrógeno, una cadena alquilo lineal o ramificada, saturada o no saturada, que tiene 1-20 átomos de carbono, opcionalmente mono- o polisustituida con grupos halógeno, alcoxi C_{1}-C_{6}, alquil C_{1}-C_{6}-mercapto, alcoxi C_{1}-C_{6}-carbonilo o alquil C_{1}-C_{6}sulfonilo,
R^{3}
es amino
X
representa azufre, un grupo sulfinilo o sulfonilo, y
Y
es un átomo de oxígeno,
sus tautómeros y sus sales fisiológicamente aceptables de ácidos y bases inorgánicos y orgánicos, así como procedimientos para su preparación, y medicamentos que contienen estos compuestos como ingredientes activos.
El grupo amino en el resto de adenina de la fórmula general I también se puede proteger mediante grupos protectores de amino bien conocidos.
Puesto que los compuestos de la fórmula general I contienen átomos de carbono asimétricos, todas las formas ópticamente activas y mezclas racémicas de estos compuestos también son el objeto de la presente invención.
J. Biol. Chem. 265, 6112 (1990) y el documento EP-A-0.350.287 describen la preparación y el uso de liponucleótidos como fármacos antivíricos. Sin embargo, allí sólo se describen restos de dimiristoilfosfatidilo y dipalmitoilfosfatidilo acoplados a nucleósidos bien conocidos, tales como AZT y DDC, incluyendo su estructura de éster de ácido graso.
J. Med. Chem. 33, 1380, (1990) describe conjugados nucleosídicos de lípidos de tioéteres con difosfato de citidina, que tienen actividad antitumoral y pueden encontrar uso en oncología.
Chem. Pharm. Bull. 36, 209 (1988) describe 5'-(3-sn-fosfatidil)nucleósidos que tienen actividad antileucémica, así como su síntesis enzimática a partir de los nucleósidos y fosfocolinas correspondientes en presencia de fosfolipasa D con actividad de transferasa.
La Solicitud de Patente WO 92/03462 describe conjugados lipídicos de tioéteres que tienen actividad antivírica, particularmente para el tratamiento de infecciones por VIH.
El documento WO 96/15234 describe conjugados nucleosídicos de fosfolípidos que muestran una eficacia significativamente potenciada en comparación con los nucleósidos no conjugados.
La síntesis de 2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabinofuranosil)adenina se describe en J. Org. Chem. 34, 2632-2636 (1969), en la Solicitud de Patente WO 01/60383, y en la patente U.S. 6.680.382.
En Hematology 463 (1999) también se describe la actividad farmacológica de 2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabinofuranosil)adenina como inhibidor de la replicación de ADN, en comparación con otros nucleósidos.
En las Solicitudes de Patentes US 5.384.310 y WO 92/20347 se mencionan otras halo-arabinoadenosinas con actividad anticancerosa.
En el documento EP 0.314.011 se muestra la actividad antivírica de tales derivados purínicos.
La 2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabino-furanosil)adenina (Clofarabina) es un producto desarrollado bien conocido en ensayos clínicos (J. Med. Chem. 35, 397, (1992) y Bioorg. & Med. Chem. Letters, 5(24), 2999, (1995)).
Los compuestos de la presente invención de fórmula general I, que incorporan la estructura química de 2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabinofuranosil)adenina, poseen actividad biológica que los distinguen del nucleósido progenitor. En particular, los compuestos de la presente invención muestran actividad antitumoral, y son útiles por cuanto, a las dosis farmacológicas pertinentes, se mejora o mejoran uno o más de los efectos secundarios tóxicos del compuesto progenitor, y/o el resto lipídico unido covalentemente mejora la biodisponibilidad de la sustancia farmacéutica acoplada, y de este modo parece que contribuye a una mejor selectividad y eficacia de los compuestos.
Los compuestos de la presente invención tienen propiedades farmacológicas valiosas. En particular, son adecuados para la terapia y profilaxis de tumores malignos, incluyendo carcinomas, sarcomas o leucemias.
En comparación con los derivados nucleosídicos sin conjugar, empleados hasta ahora en el tratamiento de tumores malignos, los compuestos según la invención tienen una potencia/eficacia mejorada para indicaciones específicas o por una menor toxicidad, y en consecuencia tienen una ventana terapéutica más amplia. En algunas realizaciones de la presente invención, la administración de composiciones farmacéuticas que comprenden estos compuestos se puede realizar de forma continua durante un período de tiempo prolongado. Las incidencias de la retirada de la preparación, o de la administración intermitente, que frecuentemente son normales con agentes quimioterapéuticos debido a sus efectos secundarios indeseables, se pueden reducir con los compuestos según esta invención, en comparación con los compuestos progenitores. Además, se pueden emplear niveles de dosis más elevadas debido a la mejora de los efectos secundarios tóxicos, dada la mejor selectividad de la citotoxicidad del tumor.
Los compuestos de ésteres lipídicos de la presente invención también son adecuados para el tratamiento de trastornos autoinmunitarios, incluyendo esclerosis múltiple, artritis reumatoide, lupus, vasculitis sistémica, enfermedad inflamatoria del intestino, escleroderma y síndrome de Sjorgen.
La estructura similar a la lecitina del resto lipídico es deseable para las mejoras reivindicadas de los compuestos de fórmula general I. Se facilita la penetración a través de las membranas y barreras de resorción, y los conjugados según la fórmula I muestran un efecto de depósito en diferentes tejidos.
La formación de conjugados lipídicos también puede facilitar que se atraviese la barrera hematoencefálica, debido a mejores procesos de difusión o de transporte activo.
De forma similar, los compuestos de la presente invención, y sus formulaciones farmacéuticas, se pueden emplear en combinación libre o fija, con otros fármacos, para el tratamiento y profilaxis de las enfermedades mencionadas anteriormente.
Los ejemplos de estos fármacos adicionales implican agentes tales como, por ejemplo, inhibidores de la mitosis, tales como colquicinas, vinblastina, agentes citostáticos alquilantes tales como ciclofosfamida, melfalán, milerán o cisplatino, antimetabolitos tales como antagonistas del ácido fólico (metotrexato) y antagonistas de bases de purinas y pirimidinas (mercaptopurina, 5-fluorouridina, citarabina), antibióticos citostáticamente activos tales como antraciclinas (por ejemplo, doxorrubicina, daunorrubicina), hormonas tales como fosfestrol, tamoxifeno, taxanos, por ejemplo taxol, y otros agentes quimioterapéuticos y biológicos citostática/citotóxicamente activos.
Las realizaciones de la invención también engloban sales de los compuestos de la fórmula general I, incluyendo sales de metales alcalinos, metales alcalino-térreos y de amonio del grupo fosfato. Los ejemplos de las sales alcalinas incluyen sales de litio, de sodio y de potasio. Las sales de metales alcalino-térreos incluyen sales de magnesio y de calcio, y se entiende que las sales de amonio son aquellas que contienen el ion amonio, que puede estar sustituido hasta cuatro veces con restos alquílicos que tienen 1-4 átomos de carbono, y/o restos arílicos tales como restos bencílicos. En tales casos, los sustituyentes pueden ser iguales o diferentes.
Los compuestos de fórmula general I pueden contener grupos básicos, particularmente grupos amino, que se pueden convertir en sales de adición de ácidos mediante ácidos inorgánicos u orgánicos adecuados. Para este fin, son posibles como ácidos, en particular: ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido fumárico, ácido succínico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido láctico, ácido maleico o ácido metanosulfónico.
En la fórmula general I, R^{1} representa preferiblemente un resto alquílico C_{8}-C_{16} de cadena lineal, que puede estar sustituido adicionalmente con un grupo alcoxi C_{1}-C_{6} o un grupo alquil C_{1}-C_{6}-mercapto. Más especialmente, R^{1} representa un resto nonilo, decilo, undecilo, dodecilo, tridecilo, tetradecilo o pentadecilo. Preferiblemente, son posibles como sustituyentes del resto R^{1} los grupos metoxi, etoxi, butoxi y hexiloxi. En el caso en el que R^{1} esté sustituido con un resto alquil C_{1}-C_{6}-mercapto, éste se entiende que es, en particular, el resto metilmercapto, etilmercapto, propilmercapto, butilmercapto y hexilmercapto.
Preferiblemente, R^{2} representa un grupo alquilo C_{8}-C_{15} de cadena lineal, que puede estar sustituido adicionalmente con un grupo alcoxi C_{1}-C_{6} o un grupo alquil C_{1}-C_{6}-mercapto. Más específicamente, R^{2} representa un grupo octilo, nonilo, decilo, undecilo, dodecilo, tridecilo o tetradecilo. Preferiblemente, como sustituyentes alcoxi C_{1}-C_{6} de R^{2}, son preferibles los grupos metoxi, etoxi, propoxi, butoxi y hexiloxi. En el caso en el que R^{2} esté sustituido con un resto alquil C_{1}-C_{6}-mercapto, se entiende que éste es, en particular, el resto metilmercapto, etilmercapto, propilmercapto, butilmercapto, pentilmercapto y hexilmercapto.
Un ejemplo de un resto lipídico preferido es el grupo
2
en el que
R^{1}
es C_{12}H_{25}
R^{2}
es C_{10}H_{21}
X
es S, SO o SO_{2}, e
Y
es O.
Los compuestos más preferidos son éster (3-dodecilmercapto-2-deciloxi)propílico del ácido [2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabinofuranosil)adenin]-5'-fosfórico, éster (3-dodecilsulfinil-2-deciloxi)propílico del ácido [2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabino-furanosil)adenin]-5'-fosfórico, éster (3-dodecilsulfonil-2-deciloxi)propílico del ácido [2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabinofuranosil)adenin]-5'-fosfórico, así como éster (3-dodecilmercapto-2-deciloxi)propílico del ácido [2-cloro-9-(2'-fluoro-\beta-D-arabinofuranosil)-6-metoxi-9H-purin]-5'-fosfórico, éster (3-dodecilsulfinil-2-deciloxi)-propílico del ácido [2-cloro-9-(2'-fluoro-\beta-D-arabino-furanosil)-6-metoxi-9H-purin]-5'-fosfórico, y éster (3-dodecilsulfonil-2-deciloxi)propílico del ácido [2-cloro-9-(2'-fluoro-\beta-D-arabinofuranosil)-6-metoxi-9H-purin]-5'-fosfórico.
Los compuestos de la fórmula general I se pueden preparar:
1.
haciendo reaccionar un compuesto de fórmula general II, o una forma salina del mismo,
3
en la que R^{1}, R^{2}, X e Y tienen el significado según se indica, con un compuesto de fórmula general III
4
en la que R^{3} es amino u OR^{4}, en el que R^{4} es alquilo C_{1}-C_{8}, y el grupo 3'-hidroxi puede estar opcionalmente protegido mediante un grupo protector de oxígeno que sea familiar para la persona experta, y el compuesto de fórmula II se puede activar en presencia de un cloruro de ácido apropiado, tal como cloruro de 2,4,6-triisopropilbencenosulfónico, y una base de nitrógeno terciario, por ejemplo piridina o lutidina, en un disolvente inerte, tal como tolueno, o inmediatamente en piridina anhidra, y opcionalmente, subsiguiente a la hidrólisis, eliminando los grupos protectores de oxígeno según procedimientos convencionales en la química de nucleósidos, y convirtiendo el grupo OR^{4}, en la posición 6 de la purina, en un grupo amino; o
haciendo reaccionar un alcohol lipídico (que corresponde a la fórmula II) con un nucleósido-5'-monofosfato (que corresponde a la fórmula III), en el que R^{3} es amino, de la misma manera como se ha mencionado anteriormente, o
2. haciendo reaccionar un compuesto de fórmula general IV
\vskip1.000000\baselineskip
5
en la que R^{1}, R^{2}, X e Y tienen el significado mencionado anteriormente, con un compuesto de fórmula general III, en la que R^{3} es amino u OR^{4}, en el que R^{4} es alquilo C_{1}-C_{8}, y el grupo 3'-hidroxi puede estar protegido opcionalmente con un grupo protector de oxígeno que sea familiar para la persona experta, en presencia de fosfolipasa D procedente de Streptomyces, en un disolvente inerte, tal como cloroformo, en presencia de un tampón adecuado, y opcionalmente, subsiguiente a la reacción, eliminando los grupos protectores de oxígeno según procedimientos convencionales en la química de nucleósidos, y convirtiendo el grupo OR^{4}, en la posición 6 de la purina, en un grupo amino.
La preparación de los compuestos de la fórmula general II y IV se realiza por analogía con Lipids 22, 947 (1987) y J. Med. Chem. 34, 1377 (1991). Los compuestos de fórmula III se pueden preparar por analogía con J. Org. Chem. 34, 2632-2636 (1969), J. Med. Chem. 35, 397-401 (1992) o el documento WO 01/60383, si R^{3} es un grupo amino, o si R^{3} = OR^{4}, en dos etapas. La primera etapa comprende la preparación de 2,6-dicloro-9-(3',5'-O-dibenzoil-2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabinofuranosil)-9H-purina, haciendo reaccionar 2,6-dicloropurina con un haluro de 2-desoxi-2-fluoro-\alpha-D-arabinofuranosilo bloqueado, en un disolvente adecuado, en presencia de una base de potasio impedida, preferiblemente t-butóxido de potasio o t-amilato de potasio. Los grupos bloqueantes adecuados incluyen benzoilo y acetilo. Los haluros adecuados incluyen bromo y cloro. Los disolventes inertes adecuados incluyen, pero no se limitan a, alcohol t-butílico, acetonitrilo, diclorometano, dicloroetano, alcohol t-amílico, tetrahidrofurano o sus mezclas. Un disolvente preferido comprende una mezcla de acetonitrilo, t-butanol y 1,2-dicloroetano. Opcionalmente se puede añadir a la mezcla de reacción un hidruro de calcio. La segunda etapa comprende someter al derivado nucleosídico de 2,6-dicloropurina a condiciones que proporcionen la desprotección y una reacción de sustitución nucleófila aromática, por ejemplo hidróxido de sodio y un alcohol C_{1}-C_{8} o un alcóxido C_{1}-C_{8} de sodio en el alcohol C_{1}-C_{8} correspondiente (por ejemplo, metanol con metóxido sódico, etanol con etóxido sódico, etc.), u otro disolvente no alcohólico adecuado, para proporcionar el compuesto nucleosídico de 6-alcoxi C_{1}-C_{8}-purina deseado de fórmula III.
Los compuestos de fórmula I, en la que X = sulfinilo o sulfonilo, se pueden preparar mediante oxidación de los compuestos correspondientes de fórmula I, en la que X = azufre, con, por ejemplo, H_{2}O_{2}/ácido acético, o usando compuestos de partida apropiados de fórmulas II o IV.
Las sales de los compuestos de fórmula general I se preparan haciendo reaccionar el ácido libre con hidróxidos, alcoholatos o acetatos de metales alcalinos o alcalino-térreos.
Los "enantiómeros", en las partes lipídicas de los compuestos de fórmula I, se pueden preparar mediante separación vía sales diastereoméricas, o mediante síntesis enantioselectiva de los restos lipídicos partiendo de precursores C_{3} ópticamente activos de fórmula II.
Los fármacos que contienen los compuestos de fórmula I para el tratamiento del cáncer se pueden administrar en formas líquidas o sólidas, en la vía oral o parenteral. Son posibles formas de aplicación habituales, tales como comprimidos, cápsulas, comprimidos recubiertos, jarabes, disoluciones, o suspensiones.
Preferiblemente, se usa agua como el medio de inyección, que contiene aditivos tales como estabilizantes, solubilizantes y tampones como es habitual con disoluciones para inyección. Tales aditivos son, por ejemplo, tampones de tartrato y de citrato, etanol, agentes complejantes, tales como ácido etilendiaminotetraacético y sus sales no tóxicas, polímeros de alto peso molecular, tales como poli(óxido de etileno) líquido para el control de la viscosidad. Preferiblemente, es necesario que los vehículos líquidos para la disolución para inyección sean estériles y se rellenen en ampollas. Los vehículos sólidos son, por ejemplo, almidón, lactosa, manitol, metilcelulosa, talco, ácidos silícicos muy dispersos, ácidos grasos de elevado peso molecular, tales como ácido esteárico, gelatina, agar-agar, fosfato cálcico, estearato de magnesio, grasas animales y vegetales, polímeros sólidos de alto peso molecular tales como polietilenglicol, etc. Si se desea, las formulaciones adecuadas para la aplicación oral pueden incluir agentes aromatizantes o edulcorantes.
La dosis puede depender de diversos factores, tales como el modo de aplicación, la especie, la edad, o el estado del individuo.
Los compuestos según la invención se pueden administrar adecuadamente de forma oral o intravenosa (i.v.), en cantidades en el intervalo de 0,1-100 mg, preferiblemente en el intervalo de 0,2-80 mg por kg de peso corporal y por día. En algunos regímenes de dosificación, la dosis diaria se divide en 2-5 aplicaciones, teniendo los comprimidos un contenido de ingrediente activo en el intervalo de 0,5-500 mg, administrándose con cada aplicación.
De forma similar, los comprimidos pueden tener una liberación sostenida, reduciendo el número de aplicaciones, por ejemplo hasta 1-3 por día. El contenido de ingrediente activo de los comprimidos de liberación sostenida puede estar en el intervalo de 2-1000 mg. El ingrediente activo también se puede administrar mediante inyección de bolo i.v., o mediante infusión continua, en las que normalmente son suficientes cantidades en el intervalo de 5-1000 mg por día.
Además de los compuestos mencionados en los ejemplos, los siguientes compuestos de fórmula I y sus sales farmacológicamente aceptables ejemplifican adicionalmente compuestos de la presente invención:
1. Éster (3-dodecilmercapto-2-deciloxi)propílico del ácido [2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabino-furanosil)adenina]-5'-fosfórico
2. Éster (3-dodecilsulfinil-2-deciloxi)propílico del ácido [2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabino-furanosil)adenina]-5'-fosfórico
3. Éster (3-dodecilsulfonil-2-deciloxi)propílico del ácido [2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabino-furanosil)adenina]-5'-fosfórico
4. Éster (3-undecilmercapto-2-deciloxi)propílico del ácido [2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabino-furanosil)adenina]-5'-fosfórico
5. Éster (3-undecilmercapto-2-undeciloxi)propílico del ácido [2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabino-furanosil)adenina]-5'-fosfórico
6. Éster (3-decilmercapto-2-dodeciloxi)propílico del ácido [2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabino-furanosil)adenina]-5'-fosfórico
7. Éster (3-dodecilmercapto-2-dodeciloxi)propílico del ácido [2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabino-furanosil)adenina]-5'-fosfórico
8. Éster (3-decilmercapto-2-deciloxi)propílico del ácido [2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabino-furanosil)adenina]-5'-fosfórico
9. Éster (3-undecilsulfinil-2-deciloxi)propílico del ácido [2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabino-furanosil)adenina]-5'-fosfórico
10. Éster (3-undecilsulfonil-2-deciloxi)propílico del ácido [2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabino-furanosil)adenina]-5'-fosfórico
11. Éster (3-undecilsulfinil-2-undeciloxi)propílico del ácido [2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabino-furanosil)adenina]-5'-fosfórico
12. Éster (3-undecilsulfonil-2-undeciloxi)propílico del ácido [2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabino-furanosil)adenina]-5'-fosfórico
13. Éster (3-tridecilmercapto-2-undeciloxi)propílico del ácido [2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabino-furanosil)adenina]-5'-fosfórico
14. Éster (3-tridecilmercapto-2-deciloxi)propílico del ácido [2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabino-furanosil)adenina]-5'-fosfórico
\newpage
15. Éster (3-tridecilsulfinil-2-deciloxi)propílico del ácido [2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabino-furanosil)adenina]-5'-fosfórico.
Ejemplo de referencia 1
Preparación de 2-cloro-6-metoxi-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabinofuranosil)-9H-purina
La primera etapa fue preparar 2,6-dicloro-9-\alpha-D-(3',5'-O-dibenzoil-2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabino-furanosil)-9H-purina según el siguiente esquema:
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Se cargó un matraz de 1000 ml con 2,6-dicloropurina (12,65 g, 66,9 mmoles), hidruro de calcio (2,43 g, 57,7 mmoles) y acetonitrilo (150 ml), y se comenzó la agitación. Se añadió una disolución de terc-butóxido de potasio (60,6 ml, 60,6 mmoles, 1,0 M en terc-butanol) durante 5 minutos para dar una suspensión viscosa pero agitable. Se añadió una disolución de bromuro de 3,5-O-dibenzoil-2-desoxi-2-fluoro-a-D-arabinofuranosilo (26,88 g, 63,5 mmoles), en 1,2-dicloroetano (200 ml), durante 45 minutos a temperatura ambiente. Después de que la adición estuvo terminada, la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. La mezcla se filtró a través de Celite y el matraz y los sólidos se lavaron con acetonitrilo (100 ml). Los volátiles se eliminaron mediante evaporación giratoria para dar una goma amarilla (38,1 g). Se añadió acetato de etilo (100 ml), se comprobó el pH, y se encontró que era 8. Se añadió ácido acético (0,5 ml), se volvió a comprobar el pH, y se encontró que era 4. La disolución turbia se filtró a través de papel de filtro Whatman 541. El matraz y el filtro se lavaron con acetato de etilo (100 ml). No se observó aclaramiento de la disolución. La capa orgánica se lavó con agua (100 ml), y después con salmuera (100 ml). La capa orgánica se secó (MgSO_{4}) y se redujo mediante evaporación giratoria, y después mediante bomba de alto vacío, para dar una espuma blanca (34,0 g). El material bruto se purificó mediante cromatografía en columna (gel de sílice 60, malla 230-400, diámetro 14 cm, altura 14,5 cm, 2232 ml). Se usó un gradiente de elución de hexanos/acetato de etilo, y las fracciones que contienen el producto más puro se redujeron mediante evaporación giratoria, se suspendieron dos veces en metanol, se filtraron y se lavaron con metanol para dar un sólido blanco (13,4 g, 92,6% AUC). Se combinaron las fracciones menos puras, se redujeron mediante evaporación giratoria y se volvieron a purificar mediante cromatografía en columna para dar un sólido blanco (3,85 g, 94,7% AUC). La recuperación total fue 17,3 g (56%). Una parte se resuspendió en metanol para la caracterización (97,9% AUC). P.f. = 157-159ºC. RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}) \beta 8,84 (d, 1H, J, 2,82 Hz, H8), 8,14-8,00 (m, 4H, Bz), 7,76-7,50 (m, 6H, Bz), 6,81 (dd, 1H, J= 18,2, 3,9 Hz, H_{1'}), 5,95 (m, 2H, H_{3,}), 5,91 (dm, 1H, J, 75,4 Hz, H_{2,}), 4,84-4,79 (m, 3H, H_{4'} y H_{5'}), RMN ^{13}C (DMSO-d_{6}) 165,4, 164,8, 152,7, 151,6, 150,3, 146,7 (d, J_{(cF)} = 4 Hz), 133,9, 133,4, 130,3, 129,6, 129,2, 128,7, 128,6, 128,5, 92,9 (d, J_{(cF)} = 192 Hz), 82,8 (d, J_{(cF)} = 16 Hz), 78,9, 76,2 (d, J_{(cF)} = 28 Hz), 63,7 ppm, RMN ^{19}F (DMSO-d_{6}) -197,6 (dt, J = 50, 19 Hz) ppm. IR (KBr) 3431, 3139, 3063, 2966, 1726, 1596, 1272, 1091, 714 cm^{-1}. UV (H_{2}O/MeCN) \lambdamax_{1} 214 nm (0.94AU), \lambdamax_{2} 231 nm (0,90AU), \lambdamax_{3} 273 nm (0,37AU). Espectro de masas (electropulverización, positiva) m/e [M+H]^{+} = 531. Análisis elemental calculado para C_{24}H_{17}C_{12}FN_{4}O_{5}: C, 54,25; H, 3,22; Cl, 13,35; F, 3,58; N, 10,54. Encontrado: C, 54,19; H, 3,11; Cl, 13,20; F, 3,49; N, 10,52.
La segunda etapa fue preparar 2-cloro-6-metoxi-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabinofuranosil)-9H-purina según el siguiente esquema:
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Se cargó un matraz de 500 ml con 2,6-dicloro-9-\alpha-D-(3',5'-O-dibenzoil-2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabino-furanosil)-9H-purina protegida (13,33 g, 25,1 mmoles) y metanol (300 ml). El pH se ajustó hasta 9,5 con una disolución de NaOH (2 ml, 1,0 N en H_{2}O). La suspensión se agitó a temperatura ambiente durante 16,5 horas. El pH se comprobó y se encontró que era 5,5. Se añadió más disolución de NaOH (11,3 ml) (pH = 11), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1,5 horas. Se comprobó el pH y se encontró que era 6. La TLC (10% de EtOH/90% de CH_{2}Cl_{2}, UV_{254}) mostró 3 manchas a R_{f} 0,28, 0,72 y 0,88. Se añadió más disolución de NaOH (13,3 ml) (pH = 11). Después de agitar durante 5 minutos a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se convirtió en una disolución incolora clara, y, después de agitar durante 2,5 horas adicionales, se concluyó, mediante TLC, que la reacción estaba terminada. Se añadió ácido acético (0,8 ml) para neutralizar la base (pH = 5). La evaporación giratoria produjo un resto bifásico. Se añadió alcohol isopropílico (100 ml) para dar una suspensión blanca. Se eliminó el agua vía evaporación giratoria azeotrópica. Este proceso se repitió dos veces más con alcohol isopropílico (100 ml). La evaporación giratoria se detuvo quedando aproximadamente 50 ml en el matraz, y la suspensión se filtró y el matraz y la torta del filtro se lavaron con el filtrado, y después con alcohol isopropílico (10 ml). El sólido se secó (50ºC, 27 torr, 16,5 h). El peso del sólido fue 5,58 g (92,4% AUC). El filtrado se redujo mediante evaporación giratoria y con bomba de alto vacío. El peso del residuo fue 6,79 g (70,9% AUC). Tanto el sólido como el resto se purificaron separadamente mediante cromatografía en columna (gel de sílice 60, malla 230-400, 10% de etanol, 90% de diclorometano). El peso del material purificado procedente del sólido bruto fue 4,62 g (95,5% AUC). El peso del material purificado procedente del resto fue 1,69 g (98,1% AUC). La recuperación total fue 6,31 g (79%). P.f. = 197-201ºC. RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta 8,59 (d, 1H, J = 1,9 Hz, H_{8}), 6,47 (dd, 1H, J = 12,8, 4,9 Hz, H_{1'}), 6,02 (d, 1H, J = 5,4 Hz, 3'-OH), 5,31 (dt, 1H, J = 52,5, 4,5 Hz, H_{2'}), 5,15 (t, 1H, J = 5,7 Hz, 5'-OH), 4,47, ddd, 1H, J = 19,1, 9,9, 5,3 Hz, H_{3'}), 4,13 (s, 1H, MeO), 3,90 (dd, 1H, J = 9,7, 4,7 Hz, H_{4'}), 3,75-3,64 (m, 2H, H_{8'}). RMN ^{13}C (DMSO-d_{6}) 160,9, 152,6, 151,8, 143,0, 119,7, 95,3 (d, J_{(cF)} = 193 Hz), 83,6 (d, J_{(cF)} = 7 Hz), 81,8 (d, J_{(cF)} = 17 Hz), 72,3 (d, J_{(cF)} = 23 Hz), 60,2, 55,1 ppm. RMN ^{19}F (DMSO-d_{6}) -199,1 (ddd, J = 53, 19, 13 Hz) ppm. IR (KBr) 3438, 3235, 3113, 2916, 1599, 1471, 1389, 1320, 1238, 1045, 925, 691 cm^{-1}. UV (H_{2}O/MeCN) \lambdamax_{1} 210 nm (1,00AU), \lambdamax_{2} 257 nm (0,67AU). Espectro de masas (electropulverización, positiva) m/e [M+H]^{+} = 319, Análisis calculado para C_{11}H_{12}ClFN_{4}O_{4}: C, 41,46; H, 3,80; Cl, 11,12; F, 5,96; N, 17,58. Encontrado: C, 41,70; H, 3,36; Cl, 11,12; F, 5,75; N, 17,54.
Ejemplo 2
Preparación de éster (3-dodecilmercapto-2-deciloxi)-propílico del ácido [2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabinofuranosil)adenin]-5'-fosfórico
La primera etapa es la preparación del éster (3-dodecilmercapto-2-deciloxi)propílico del ácido [2-cloro-9-(2'-fluoro-\beta-D-arabinofuranosil)-6-metoxi-9H-purin]-5'-fosfórico según lo siguiente:
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Se trataron 3,12 g de éster (3-dodecilmercapto-2-deciloxi)propílico del ácido fosfórico dos veces con 60 ml de piridina anhidra, y se concentraron mediante evaporación. El resto se disolvió en 60 ml de piridina anhidra a temperatura ambiente, se trató con 3,80 g de cloruro de 2,4,6-triisopropilbencenosulfonilo (cloruro de trisilo) en nitrógeno, y se agitó a 20ºC durante 2 horas. Después, se añadió, en una sola porción, 2,00 g de 2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabinofuranosil)-6-metoxi-9H-purina, y la carga se agitó en nitrógeno durante 16 horas. La hidrólisis se realizó añadiendo 10 ml de agua, la mezcla se agitó durante otras 0,5 horas a temperatura ambiente, se liberó del disolvente a vacío, y se extrajo dos veces usando 20 ml de tolueno. El resto se agitó en t-butilmetiléter (160 ml) a 40ºC durante 0,5 h. Después de enfriar hasta la temperatura ambiente, se separó la sal de sulfonato de piridinio mediante filtración. El filtrado se lavó dos veces con 40 ml de ácido clorhídrico 2 N, y se evaporó hasta sequedad. El material de 7,38 g con aspecto de jarabe que queda se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
Una mezcla del material bruto anterior se purificó mediante cromatografía en columna en Lichrospher 60 RPSelect B, con metanol/acetato sódico 40 mM acuoso, 90:10, como eluyente. Las fracciones que contienen el producto se evaporaron, y el residuo se distribuyó entre 50 ml de terc-butilmetiléter y 10 ml de ácido clorhídrico 2 N. La capa orgánica se evaporó, y el residuo se disolvió en una mezcla de 5 ml de tolueno y 5 ml de metanol. El pH se ajustó hasta pH 7 mediante adición de metanolato de sodio. El disolvente se separó por evaporación, y el residuo se secó a vacío. La sal sódica del éster (3-dodecilmercapto-2-deciloxi)-propílico del ácido [2-cloro-9-(2'-fluoro-\beta-D-arabino-furanosil)-6-metoxi-9H-purin]-5'-fosfórico se recibió como un sólido amorfo que funde a 65-75ºC, con una rotación específica de [\alpha]^{Hg 436}_{20} =+31,9 (c = 1,0 en metanol).
RMN ^{1}H (300 MHz, DMSO-d_{6}): 8,5 (s, 1H, H_{8}), 6,6, (s (br), 1H, 3'-OH), 6,4 (dd, 1H, H_{1'}), 5,3 (dt, 1H, H_{2'}), 4,4, (dt, 1H, H_{3'}), 4,1 (s, 3H, OCH_{3}), 3,9-4,0, (m, 3H, H_{4'}, POCH_{2}), 3,6 (m, 1H, H_{5'a}), 3,6 (m, 1H, H_{5'b}), 3,3-3,4 (m, 3H, >CHOCH_{2}-), 2,5-2,6 (m, 4H, CH_{2}SCH_{2}), 1,1-1,5 (m, 36H, -(CH_{2})_{9}-, -(CH_{2})_{7}-), 0,8 (m, 6H, CH_{2}-CH_{3}); ^{3}J_{2'}-H,2'-H \approx ^{3}J_{2'-H,3'}_{\approx}^{3}J_{3'-H,4'-H} \approx 4,7 Hz, ^{3}J1_{'-H,F} = 12,1 Hz, ^{2}J_{2'-H,F} = 52,8 Hz, ^{3}J_{3'-H,F} = 19,0 Hz.
RMN ^{13}C (75,0 MHz, DMSO-d_{6}): 160,8, 152,6, 151,7(C-2, C-4, C-6), 142,9, (C-8), 119,6, (C-5), 94,9, (C-2'), 82,2, (C-4'), 81,6, (C-1'), 78,7, (O-CH<), 73,7, (C-3'), 69,1, (CH_{2}-CH_{2}O-CH<), 64,8, (C-5'), 63,4, (5'-O-P(O)_{2}OCH_{2}), 55,0, (6-CH_{3}), 32,1, 32,3, (-CH_{2}SCH_{2}-), 20,0-31,2 (-(CH_{2})_{9}-, -(CH_{2})_{7}-), 13,9, (2 x CH_{3})
RMN ^{31}P (121,5 MHz, DMSO-d_{6}): -0,46 ppm.
RMN ^{19}F (282 MHz, DMSO-d_{6}): -198,7 ppm.
UV (metanol)\lambda_{max1} 205,3 nm, \lambda_{max2} 255,9 nm, espectro de masas. (FAB-): m/z = 795 [M-Na^{+}].
La segunda etapa fue someter al éster (3-dodecilmercapto-2-deciloxi)propílico del ácido [2-cloro-9-(2'-fluoro-\beta-D-arabinofuranosil)-6-metoxi-9H-purin]-5'-fosfórico bruto a aminolisis para proporcionar el éster (3-dodecilmercapto-2-deciloxi)propílico del ácido [2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabinofuranosil)adenin]-5'-fosfórico:
9
La etapa de aminolisis se llevó a cabo en un reactor de acero inoxidable, a 80ºC.
El material bruto mencionado anteriormente (7,38 g) se disolvió en 30 ml de NH_{3} 7 M en etanol (saturado a -5ºC). No se pudo detectar agente reaccionante del metoxiderivado del éster (3-dodecilmercapto-2-deciloxi)propílico del ácido [2-cloro-9-(2'-fluoro-\beta-D-arabinofuranosil)-6-metoxi-9H-purin]-5'-fosfórico después de 20 h de calentamiento. El producto se purificó mediante cromatografía en columna en Lichrospher RPSelect B, con metanol/acetato sódico 40 mM acuoso, 85:15, como el eluyente. Las fracciones que contienen el producto se evaporaron. El resto se distribuyó entre 100 ml de terc-metilbutiléter y 50 ml de ácido clorhídrico 2 N. La capa orgánica se evaporó, el resto se disolvió en una mezcla de 30 ml de metanol, y el pH se ajustó hasta pH 7 mediante adición de metanolato sódico (30% en metanol). El disolvente se separó por evaporación, y la sal sódica residual se secó a vacío. El producto (2,90 g) se obtuvo con un rendimiento global del 57%, basándose en la conversión de la 2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabinofuranosil)-6-metoxi-9H-purina. La pureza, según se determina mediante HPLC, fue de 93,6 por ciento de área. Punto de fusión: 130-131ºC. MS (FAB^{-}): m/z 780 [M-Na+], UV (metanol) \lambdamax 263,4 nm.
RMN ^{1}H (300 MHz, DMSO-d_{6}): 8,2 (s, 1H, H_{8}), 7,7, (s (br), 1H, NH_{2}), 6,5, (s (br), 1H, 3'-OH), 6,2 (dd, 1H, H_{1'}), 5,2 (dt, 1H, H_{2'}), 4,4, (dt, 1H, Hz, H_{3'}), 3,8-4,0, (m, 3H, H_{4'}, POCH_{2}), 3,6 (m, 1H, -H_{5a'}), 3,6 (m, 1H, H_{5'b}), 3,3-3,5 (m, 3H, >CHOCH_{2}-), 2,5-2,7 (m, 4H, CH_{2}SCH_{2}), 1,1-1,4 (m, 36H, -(CH_{2})_{9}-, -(CH_{2})_{7}-), 0,8 (m, 6H, CH_{2-}CH_{3}); ^{3}J_{1'-H,2'-H} \approx ^{3}J_{2'-H,3'-H} \approx ^{3}J_{3'-H,4-H} \approx 4,2 Hz, ^{3}J_{1'-H,F} = 14,1 Hz, ^{2}J_{2'-H,F} = 54 Hz, ^{3}J_{3'-H,F} = 19,0 Hz.
RMN ^{13}C (75,0 MHz, DMSO-d_{6}): 156,8, 153,3, 150,1 (C-2, C-4, C-6), 139,8, (C-8), 117,3, (C-5), 95,0, (C-2'), 81,8, (C-4'), 81,2, (C-1'), 78,8, (0-CH<), 72,9, (C-3'), 69,1, (CH_{2}-CH_{2}O-CH<), 64,8, (C-5'), 64,4, (5'-O-P(O)_{2}OCH_{2}), 32,1, 31,3, (-CH_{2}SCH_{2}-), 22,1-29,7 (-(CH_{2})_{9}-, -(CH_{2})_{7}-), 13,9 (2 x CH_{3}).
RMN ^{31}P (121,5 MHz, DMSO-d_{6}): -0,48 ppm
RMN ^{19}F (282 MHz, DMSO-d_{6}): -198,7 ppm.
Ejemplo 3
Preparación de éster (3-dodecilmercapto-2-deciloxi)-propílico del ácido [2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabinofuranosil)adenin]-5'-fosfórico a partir de 2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-arabinofuranosil)adenina
Se trataron 0,91 g del éster (3-dodecilmercapto-2-deciloxi)propílico del ácido fosfórico dos veces con 20 ml de piridina anhidra, y se concentraron mediante evaporación. El resto se disolvió en 20 ml de piridina anhidra, a temperatura ambiente, se trató con 1,07 g de cloruro de 2,4,6-triisopropilbencenosulfónico, en nitrógeno, y se agitó a 25ºC durante 0,5 horas. Después, se añadieron de una sola vez 0,5 g de 2-cloro-9-(2'-fluoro-arabinofuranosil)-adenina, y la carga se dejó reposar en nitrógeno durante 20 horas. La hidrólisis se realizó añadiendo 5 ml de agua, la mezcla se agitó durante otras 0,5 horas a temperatura ambiente, se liberó del disolvente a vacío, y se extrajo dos veces usando 50 ml de tolueno. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna en Lichrospher 60 RPSelect B, con metanol/acetato sódico 40 mM acuoso, 88:12, como el eluyente. Las fracciones que contienen el producto se evaporaron. El residuo se distribuyó entre 50 ml de terc-butilmetiléter y 10 ml de ácido clorhídrico 2 N. La capa orgánica se evaporó. El resto se disolvió en una mezcla de 5 ml de tolueno y de 5 ml de metanol. El pH se ajustó hasta pH 7 mediante adición de metanolato sódico. El disolvente se separó por evaporación, y el resto se secó a vacío. El rendimiento es 0,82 g (62%) de un polvo blanco.
El éster (3-dodecilmercapto-2-deciloxi)propílico del ácido fosfórico se preparó como se describe en el documento WO 92/03462.
Ejemplo 4
Preparación de éster (3-dodecilmercapto-2-deciloxi)-propílico del ácido [2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabinofuranosil)adenin]-5'-difosfórico
La primera etapa es la preparación de 2-cloro-6-metoxi-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-5'-O-fosfato-\beta-D-arabinofuranosil)-9H-purina a partir de 2-cloro-6-metoxi-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabinofuranosil)-9H-purina:
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Se cargó un matraz con 2-cloro-6-metoxi-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabinofuranosil)purina y fosfato de trietilo (por ejemplo, 2,3 ml/mmol de nucleósido), en nitrógeno. La mezcla resultante se enfrió (por ejemplo, -25ºC), y después se cargó POCl_{3} (por ejemplo, 3 eq.). Al calentar hasta la temperatura ambiente, la mezcla se agitó (por ejemplo, 3 h). Después se añadieron, con agitación, hielo (por ejemplo, 1,4 g/mmol de nucleósido) y agua (por ejemplo, 8,7 ml/mol de nucleósido), y la mezcla se transfirió a un embudo de separación. Se añadió MTBE (por ejemplo, 4,4 ml/mol de nucleósido), y las fases se separaron después de agitar. La fase orgánica se lavó dos veces con agua (por ejemplo, 8,7 ml/mmol de nucleósido). Los extractos acuosos combinados se acidificaron hasta aproximadamente pH 2 con NaOH (por ejemplo, 50% ac.), y después se agitaron con carbón activado (por ejemplo, 5,7 g/mmol de nucleósido) durante un tiempo adecuado (por ejemplo, 2 h). La mezcla se filtró, y el filtrado se descartó. El carbón se agitó con una mezcla de MeOH (por ejemplo, 4,4 ml/mmol de nucleósido), hidróxido amónico (conc.) (por ejemplo, 44 ml/mmol de nucleósido) y agua (por ejemplo, 3,9 ml/mmol de nucleósido), durante un tiempo adecuado (por ejemplo, 30 minutos), y se filtró. El procedimiento se repitió (por ejemplo, 5 veces), y los filtrados se combinaron. La evaporación de los filtrados combinados proporciona 2-cloro-6-metoxi-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-5'-O-fosfato-\beta-D-arabinofuranosil)-9H-purina bruta. Ésta se disolvió en agua (por ejemplo, 8,7 ml/mmol de nucleósido), y se trató con resina catiónica Dowex 50WX8-100 (por ejemplo, 4 g/mmol de nucleósido), con agitación, durante un tiempo adecuado (por ejemplo, 30 minutos). La mezcla se filtró, y la resina se agitó con agua (por ejemplo, 9 ml/mmol de nucleósido) y se filtró. La resina se extrajo con agua (por ejemplo, cuatro veces), y los filtrados acuosos combinados se evaporaron para dar 2-cloro-6-metoxi-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabinofuranosil)-9H-purina (por ejemplo, con un rendimiento de 30-100%).
La segunda etapa es la aminolisis de 2-cloro-6-metoxi-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabinofuranosil)-9H-purina para dar 2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-5'-O-fosfato-\beta-D-arabinofuranosil)adenina:
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La 2-cloro-6-metoxi-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabinofuranosil)purina se disolvió en etanol anhidro, en una vasija a presión, y se enfrió en nitrógeno (por ejemplo, -5ºC). Se introdujo amoníaco en la disolución hasta que se logró una disolución saturada. El sistema se calentó entonces (por ejemplo, hasta 80ºC), durante un tiempo adecuado (por ejemplo, >20 h). El transcurso de la reacción se monitorizó tomando muestras y analizándolas mediante HPLC. Al terminar, el disolvente se evaporó para dar 2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-5'-O-fosfato-\beta-D-arabinofuranosil)-adenina bruta.
La tercera etapa es la producción de éster (3-dodecilmercapto-2-deciloxi)propílico del ácido (2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabinofuranosil)adenin]-5'-difosfórico haciendo reaccionar el morfolidato del éster mono-(3-dodecilmercapto-2-deciloxi)-1-propílico del ácido fosfórico con 2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-5'-O-fosfato-\beta-D-arabinofuranosil)adenina:
12
El morfolidato del éster mono-(3-dodecilmercapto-2-deciloxi)-1-propílico del ácido fosfórico se preparó por analogía con Bioorg. Med. Chem., 7, 1195-1200, (1999), en el que se disuelven el éster mono-(3-dodecilmercapto-2-deciloxi)-1-propílico del ácido fosfórico y morfilina en una mezcla de agua y terc-butanol (por ejemplo, 1:1 en volumen). A esta disolución se añade diciclohexilcarbodiimida (DCC) en terc-butanol (por ejemplo, aproximadamente un exceso 4 molar de DCC con relación al éster mono-(3-dodecilmercapto-2-deciloxi)-1-propílico del ácido fosfórico), y la reacción se puso a reflujo (por ejemplo, 3,5 h). El volumen se redujo por evaporación, y la mezcla se enfrió para provocar la precipitación del fosfo-morfolidato.
El fosfo-morfolidato (por ejemplo, 1,13 moles por mol de derivado adenosínico) se preparó como una piridina anhidra (por ejemplo, 23 ml/mmol de derivado adenosínico), y se añadió 2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-5'-O-fosfato-\beta-D-arabinofuranosil)adenina con agitación, todo bajo nitrógeno. La mezcla se agitó (por ejemplo, 40ºC durante al menos 16 h), y después se añadió agua (por ejemplo, 4,5 ml/mmol de derivado adenosínico), y se continuó la agitación (por ejemplo, durante 1 h). El disolvente se evaporó, y el producto se cromatografió (por ejemplo, gel de sílice, eluyendo con una mezcla de CHCl_{3}, MeOH y NH_{4}OH (ac.)) para dar el éster [3-dodecilmercapto-2-deciloxi)propílico del ácido (2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabinofuranosil)adenin)-5'-difosfórico como un sólido blanco (por ejemplo, con un rendimiento de 20-100%).
Ejemplo 5
Formulación de comprimido
Se mezclaron en forma seca:
1,50 kg de sal sódica del éster (3-dodecilmercapto-2-deciloxi)propílico del ácido [2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabinofuranosil)adenin]-5'-fosfórico,
1,42 kg de celulosa microcristalina,
1,84 kg de lactosa,
0,04 kg de polivinilpirrolidona, y
0,20 kg de estearato de magnesio,
se humedeció con agua, y se granuló. Después de secar, el material se prensó en comprimidos de 500 mg de peso.
Ejemplo 6
Formulación para inyección
Se disolvieron 10,0 g kg del éster (3-dodecilmercapto-2-deciloxi)propílico del ácido [2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabinofuranosil)adenin]-5'-fosfórico en 500 ml de disolución fisiológica de cloruro sódico, se rellenó en 5 ml en ampollas, y se esterilizó. La disolución se puede aplicar mediante inyección intravenosa.
Ejemplo 7
Actividad antitumoral de éster (3-dodecilmercapto-2-deciloxi)propílico del ácido [2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabinofuranosil)adenin]-5'-fosfórico ("conjugado nucleotídico") y 2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-\beta-D-arabinofuranosil)adenina ("nucleósido") en un modelo de xenoinjerto de carcinoma de colon humano (HCT-15) in vivo
La actividad antitumoral del conjugado nucleotídico y su correspondiente nucleósido se ha comparado en el modelo de xenoinjerto de carcinoma de colon humano HCT-15, en ratones atímicos.
Se eligieron al azar, en el día 7 después de la inoculación de células tumorales HCT-15, ratones que tienen un tumor, y se distribuyeron en grupos de tratamiento de 9 animales por grupo. El tratamiento comenzó en el día 8. Los animales se trataron intraperitonealmente (ip) una vez al día, durante 5 días consecutivos, con el conjugado nucleotídico o con el nucleósido. Las dosis incluyeron 50 y 25% de las Dosis Tolerables Máximas (MTD). A los animales del control se les inyectaron los disolventes correspondientes (Vehículo 1 ó 2). En el día 28, los tumores primarios se explantaron, y se determinaron los pesos de los tumores. En la Tabla 1 se muestran los pesos medios de los tumores.
TABLA 1
Compuesto MTD Dosis Peso del Inhibición
(mg/kg/inyección) tumor (mg) del tumor (%)
Control I (Sin - - 592
tratamiento)
Control II - 0 572
(Vehículo 1)
Nucleósido* 25% 20 431 25%
Nucleósido* 50% 40 329 42%
Control III - 0 669
(Vehículo 2)
Conjugado 25% 63 257 62%
nucleotídico **
Conjugado 50% 125 16 98%
nucleotídico **
\hskip0.1cm * 2-Cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-(3-D-arabinofuranosil)adenina
\begin{minipage}[t]{155mm}** Éster (3-dodecilmercapto-2-deciloxi)propílico del ácido [2-cloro-9-(2'-desoxi-2'-fluoro-(3-D-arabinofura-{}\hskip0.4cm nosil)adenina]-5'-fosfórico - Ejemplo 2 ó 3\end{minipage}
La eficacia antitumoral del conjugado nucleotídico fue significativamente (p < 0,01) mayor que la del nucleósido correspondiente, en ambas dosis.

Claims (8)

1. Un derivado nucleotídico de fórmula I
13
en la que
R^{1} se selecciona del grupo que consta de una cadena de alquilo lineal o ramificada, saturada o no saturada, que tiene 1-20 átomos de carbono, que está no sustituida o que está sustituida al menos una vez con grupos halógeno, alcoxi C_{1}-C_{6}, alquil C_{1}-C_{6}-mercapto, alcoxi C_{1}-C_{6}-carbonilo, alquil C_{1}-C_{6}-sulfinilo o alquil C_{1}-C_{6}-sulfonilo,
R^{2} se selecciona del grupo que consta de hidrógeno, una cadena alquilo lineal o ramificada, saturada o no saturada, que tiene 1-20 átomos de carbono, que está no sustituida o que está sustituida al menos una vez con grupos halógeno, alcoxi C_{1}-C_{6}, alquil C_{1}-C_{6}-mercapto, alcoxi C_{1}-C_{6}-carbonilo o alquil C_{1}-C_{6}-sulfonilo,
R^{3} es amino,
X se selecciona del grupo que consta de un átomo de azufre, un grupo sulfinilo o un grupo sulfonilo,
Y es oxígeno,
con lo que, cuando R^{3} es amino, dicho grupo amino puede estar no sustituido o puede estar sustituido con un grupo protector de amino conocido,
sus tautómeros, sus formas ópticamente activas y mezclas racémicas, y sus sales fisiológicamente aceptables de ácidos o bases inorgánicos y orgánicos.
2. El derivado nucleotídico según la reivindicación 1, en el que R^{1} es un grupo alquilo C_{8}-C_{15} de cadena lineal, que está no sustituido o que está sustituido con un grupo alcoxi C_{1}-C_{6} o un grupo alquil C_{1}-C_{6}-mercapto.
3. El derivado nucleotídico según la reivindicación 1, en el que R^{2} representa un grupo alquilo C_{8}-C_{15} de cadena lineal, que está no sustituido o que está sustituido con un grupo alcoxi C_{1}-C_{6} o un grupo alquil C_{1}-C_{6}-mercapto.
4. El derivado nucleotídico según las reivindicaciones 1 a 3, en el que el compuesto es:
14
en el que X es azufre, sulfinilo o sulfonilo.
5. Una composición farmacéutica que comprende al menos un compuesto según las reivindicaciones 1-4, en combinación con un coadyuvante o vehículo farmacéuticamente aceptable.
6. Uso de un compuesto según las reivindicaciones 1-4, para la preparación de un medicamento para el tratamiento de tumores malignos, en el que dicho compuesto se va a administrar a un paciente que necesite de tal tratamiento en una cantidad eficaz para tratar dichos tumores.
7. El uso según la reivindicación 6, en el que dicho tumor se selecciona del grupo que consiste en carcinomas, sarcomas o leucemias.
8. El uso según la reivindicación 6 ó 7, en combinación fija o libre con otros agentes anticancerosos.
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