ES2259675T3 - Uso de un activador de ppar delta para el tratamiento de afecciones inflamatorias. - Google Patents
Uso de un activador de ppar delta para el tratamiento de afecciones inflamatorias.Info
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Abstract
Uso de un agonista selectivo de PPAR delta en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de enfermedades o afecciones inflamatorias.
Description
Uso de un activador de PPAR delta para el
tratamiento de afecciones inflamatorias.
La presente invención se refiere a medicamentos.
Más particularmente, la invención se refiere a compuestos que se
unen a y que activan PPAR delta.
El receptor activado por el proliferador de
peroxisoma (denominado en lo sucesivo en este documento PPAR) es un
miembro conocido de la familia del receptor de la hormona
esteroidea/retinoide/tiroidea de factores de transcripción
activados por ligandos y lo activan, entre otros, altas
concentraciones micromolares de ciertos proliferadores de
peroxisoma. El receptor activado por el proliferador de peroxisoma
alfa (denominado en lo sucesivo en este documento PPAR\alpha), el
receptor activado por el proliferador de peroxisoma gamma
(denominado en lo sucesivo en este documento PPAR\gamma) y el
receptor activado por el proliferador de peroxisoma delta
(denominado en lo sucesivo en este documento PPAR\delta) se han
identificado respectivamente como subtipos de PPAR.
El óxido nítrico es el estimulador endógeno de
la enzima guanilato ciclasa soluble y está implicado en numerosas
acciones biológicas. Se cree también que el exceso de la producción
de óxido nítrico está implicado en numerosas afecciones, incluyendo
muchas enfermedades inflamatorias. La síntesis bioquímica de óxido
nítrico a partir de L-arginina está catalizada por
la enzima NO sintasa. Se han descrito muchos inhibidores de NO
sintasa y se han propuesto para uso terapéutico, particularmente
aquellos que muestran selectividad por cualquier NO sintasa
inducible (iNOS) o NO sintasa neuronal (nNOS) sobre NO sintasa
endotelial (eNOS).
Se sabe que el factor de necrosis tumoral (TNF)
media muchas respuestas biológicas in vivo. Los estudios
clínicos y pre-clínicos en animales y seres humanos
con anticuerpos de neutralización de TNF específicos,
construcciones solubles del receptor de TNF y técnicas de detección
de TNF han implicado al TNF como mediador en numerosas patologías
incluyendo enfermedades o afecciones inflamatorias/autoinmunes.
Se ha descubierto sorprendentemente que los
activadores del receptor activado por el proliferador de peroxisoma
delta (denominado en lo sucesivo en este documento PPAR) inhiben la
formación de iNOS y TNF y, por lo tanto, son útiles en la profilaxis
y tratamiento de enfermedades o afecciones inflamatorias.
La presente invención, por lo tanto, proporciona
el uso de un agonista selectivo de PPAR\delta en la fabricación de
un medicamento para el tratamiento de enfermedades o afecciones
inflamatorias.
Figura 1: Muestra el efecto de agonistas de PPAR
delta sobre la actividad de iNOS inducida por lipopolisacárido
(LPS).
Figura 2: Muestra el efecto de un agonista de
PPAR delta sobre el aumento debido a LPS del ARNm de iNOS.
Figura 3: Muestra el efecto de un agonista de
PPAR delta sobre la expresión de un compuesto inducida por LPS
respecto a la activación de iNOS inducida por LPS.
La inflamación representa un grupo de respuestas
vasculares, celulares y neurológicas al traumatismo. La inflamación
puede caracterizarse como el movimiento de células inflamatorias
tales como monocitos, neutrófilos y granulocitos hacia los tejidos.
Esto está relacionado normalmente con una función reducida de la
barrera endotelial y edema en los tejidos. La inflamación con
respecto a una enfermedad típicamente se refiere a inflamación
crónica y puede durar toda la vida. Dicha inflamación crónica puede
manifestarse ella misma a través de los síntomas de enfermedad. El
objetivo de la terapia anti-inflamatoria es, por lo
tanto, reducir esta inflamación crónica y permitir que progrese el
procedimiento fisiológico o calentamiento y reparación de
tejido.
Los ejemplos de enfermedades o afecciones
inflamatorias incluyen aquellos de las articulaciones,
particularmente artritis (por ejemplo artritis reumatoide,
osteoartritis, fallo protésico de las articulaciones), o del tracto
gastrointestinal (por ejemplo, colitis ulcerosa, enfermedad de
Crohn, y otras enfermedades inflamatorias del intestino y
gastrointestinales, gastritis e inflamación de la mucosa resultante
de la infección, la enteropatía provocada por fármacos
anti-inflamatorios no esteroideos), del pulmón (por
ejemplo, síndrome de insuficiencia respiratoria en adultos, asma,
fibrosis quística, o enfermedad pulmonar obstructiva crónica), del
corazón (por ejemplo miocarditis), del tejido nervioso (por ejemplo
esclerosis múltiple), del páncreas, (por ejemplo inflamación
asociada con diabetes mellitus y complicaciones de la misma, del
riñón (por ejemplo, glomerulonefritis), de la piel (por ejemplo
dermatitis, psoriasis, eccema, urticaria, lesión por quemadura), del
ojo (por ejemplo glaucoma) así como de órganos trasplantados (por
ejemplo rechazo) y enfermedades multi-órgano (por ejemplo lupus
sistémico eritematoso, sepsis) y secuelas inflamatorias de
infecciones virales o bacterianas y afecciones inflamatorias
asociadas con arteriosclerosis y después de episodios hipóxicos o
isquémicos (con o sin reperfusión), por ejemplo en el cerebro o en
enfermedad cardiaca isquémica.
Preferiblemente, los activadores de PPAR delta
son agonistas de PPAR\delta. Como se usa en este documento, por
"agonista", o "compuesto activante", o "activador", o
similares, se entiende aquellos compuestos que tienen un pKi de al
menos 6,0 para el PPAR pertinente, por ejemplo PPAR\delta humano,
en el ensayo de unión descrito a continuación, y que consiguen al
menos una activación del 50% del PPAR pertinente respecto al control
positivo indicado apropiado en el ensayo de transfección descrito,
por ejemplo en el documento WO 00/08002 a concentraciones de
10^{-5} M o menores. Más preferiblemente, los compuestos de esta
invención consiguen una activación del 50% de PEAR\delta humano en
el ensayo de transfección a concentraciones de 10^{-7} M o
menor.
Más preferiblemente, los activadores de PPAR
delta son agonistas selectivos de hPPAR\delta. Como se usa en
este documento, un "agonista selectivo de hPPAR\delta" es un
agonista de hPPAR\delta cuya CE50 para PPAR\lambda es al menos
10 veces menor que su CE50 para PPARS\lambda y PPAR\alpha.
Dichos compuestos selectivos pueden denominarse
"10-veces selectivos". La CE50 se define en el
ensayo de transfección descrito, por ejemplo en el documento WO
00,08002 y es la concentración a la que un compuesto alcanza el 50%
de su actividad máxima. Los compuestos más preferidos son más de
100-veces agonistas selectivos de PPAR\delta.
Los siguientes son aspectos particulares
adicionales de la presente invención:
El uso de un activador de PPAR delta (por
ejemplo, un compuesto de fórmula (I)) en la fabricación de un
medicamento para el tratamiento de enfermedades o afecciones
inflamatorias.
El término "tratamiento", como se usa en
este documento, incluye la profilaxis y el alivio de las
enfermedades o afecciones inflamatorias establecidas. Los
activadores de PPAR delta pueden usarse como compuestos o derivados
farmacéuticamente aceptables de los mismos.
Por derivado farmacéuticamente aceptable se
entiende cualquier sal, solvato, éster o amida farmacéuticamente
aceptable, o sal o solvato de dicho éster o amida, del activador de
PPAR delta, o cualquier otro compuesto que después de la
administración al receptor es capaz de proporcionar (directamente o
indirectamente) el activador de PPAR delta o un metabolito activo o
resto del mismo.
Los activadores de PPAR delta adecuados se
describen, por ejemplo, en el documento WO 01/00603 que describe
compuestos de fórmula (I), y sales y solvatos farmacéuticamente
aceptables de los mismos,
en la
que:
X representa un COOH (o un éster hidrolizable
del mismo) o un grupo tetrazol;
X^{1} representa NH, NCH_{3}, O, S, un
enlace (es decir está ausente), CH_{2}, o CH donde la línea
discontinua indica que cuando X^{1} es CH el enlace representado
es un doble enlace;
X^{2} representa O o S;
R^{1} y R^{2} representan independientemente
H, CH_{3}, OCH_{3}, o halógeno;
n es 1 o 2;
uno de Y y Z es N y el otro es S u O:
y es 0, 1, 2, 3, 4 o 5;
cada R^{3} representa independientemente un
CF_{3} o halógeno.
Estos compuestos pueden prepararse
convenientemente mediante un procedimiento general en el que un
resto tal como A se acopla a un alcohol (B) usando el protocolo de
Mitsunobu (O. Mitsunobu, 1981 Synthesis, p 1) o por alquilación de
A usando una base no nucleófila adecuada tal como K_{2}CO_{3},
Cs_{2}CO_{3} o NaH, con un haluro de alquilo (C). Obsérvese que
esta síntesis se realiza preferiblemente out con el grupo ácido
protegido por R. Preferiblemente, R es alquilo 1-6
que puede hidrolizarse para dar un ácido de Fórmula (I), o si es
fácilmente hidrolizable, puede administrarse el éster
resultante.
Por ejemplo, cuando n es 1, Y es S, Z es N, y
R^{3} es para-CF_{3}:
\vskip1.000000\baselineskip
Los intermedios de tipo A están disponibles en
el mercado. La síntesis de intermedios de tipo B se ilustra también
a continuación.
Además, los derivados tetrazol pueden prepararse
convenientemente mediante un procedimiento general en el que un
resto tal como D se acopla a un alcohol (B) usando el protocolo de
Mitsunobu (O. Mitsunobu, 1981 Synthesis, p 1), por alquilación de D
usando una base no nucleófila adecuada tal como K_{2}CO_{3},
Cs_{2}CO_{3} o NaH, con un haluro de alquilo (C) o por
acoplamiento de un resto tal como E con un haluro de alquilo (C)
usando una base no nucleófila adecuada tal como NaOH.
Por ejemplo, cuando n es 1, Y es S, Z es N, y
R^{3} es para-CF_{3}:
\vskip1.000000\baselineskip
Los compuestos de la invención preferidos
son:
ácido
2-{2-metil-4-[({4-metil-2-[4-(trifluorometil)fenil]-1,3-tiazol-5-il}metil)sulfanil]fenoxi}acético
ácido
2-{2-metil-4-[({4-metil-2-[4-(trifluorometil)fenil]-1,3-oxazol-5-il}metil)sulfanil]fenoxi}acético
2-{4-[({4-metil-2-[4-(trifluorometil)fenil]-1,3-tiazol-il}metil)sulfanil]fenoxi}acetato
de metilo
ácido
2-{4-[({4-metil-2-[4-(trifluorometil)fenil]-1,3-tiazol-5-il}metil)sulfanil]fenoxi}acético
ácido
(E)-3-[2-metil-4-({4-metil-2-[4-(trifluorometil)fenil]-1,3-tiazol-il}
metoxi)fenil]-2-propenoico
ácido
2-{3-cloro-4-[({4-metil-2-[4-(trifluorometil)fenil]-1,3-tiazol-il}metil)sulfanil]fenil}acético
Un agonista de PPAR delta particularmente
preferido es ácido
{2-metil-4-[4-metil-2-(4-trifluorometil
fenil)tiazol-5-ilmetiltio]fenoxi}-acético
y sales, solvatos, y ésteres hidrolizables farmacéuticamente
aceptables del mismo (formula (II) a continuación).
Los especialistas en la técnica entenderán
también que el activador de PPAR delta puede utilizarse también en
la forma de una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo.
Las sales fisiológicamente aceptables incluyen sales convencionales
formadas a partir de ácidos o bases orgánicos e inorgánicos
farmacéuticamente aceptables así como sales de adición de ácidos de
amonio cuaternario. Los ejemplos más específicos de sales de ácido
adecuadas incluyen clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico, fosfórico,
nítrico, perclórico, fumárico, acético, propiónico, succínico,
glicólico, fórmico, láctico, maleico, tartárico, cítrico, palmoico,
malónico, hidroximaleico, fenilacético, glutámico, benzoico,
salicílico, fumárico, toluenosulfónico, metanosulfónico,
naftaleno-2-sulfónico,
bencenosulfónico hidroxinaftoico, yodhídrico, málico, esteroico,
tánico y similares. Otros ácidos tales como oxálico, aunque ellos
mismos no son farmacéuticamente aceptables, pueden ser útiles en la
preparación de sales útiles como intermedios en la obtención de los
compuestos de la invención y sus sales farmacéuticamente aceptables.
Más ejemplos específicos de sales básicas adecuadas incluyen sales
de sodio, litio, potasio, magnesio, aluminio, calcio, zinc,
N,N'-dibenciletilendiamina, cloroprocaína, colina,
dietanolamina, etilendiamina, N-metilglucamina y
procaína. Las referencias en lo sucesivo en este documento a un
activador de PPAR delta incluyen tanto los compuestos como sus sales
y solvatos farmacéuticamente aceptables.
Los activadores de PPAR delta y sus derivados
farmacéuticamente aceptables se administran convenientemente en la
forma de composiciones farmacéuticas. Dichas composiciones pueden
presentarse convenientemente para uso de una manera convencional
mezcladas con uno o más vehículos o excipientes fisiológicamente
aceptables. El vehículo o vehículos deben ser "aceptables" en
el sentido de ser compatibles con los otros ingredientes de la
formulación y no perjudiciales para el receptor de la misma.
Aunque es posible administrar terapéuticamente
los activadores de PPAR delta como el producto químico bruto, es
preferible presentar el ingrediente activo como una formulación
farmacéutica.
Las formulaciones incluyen aquellas adecuadas
para administración oral, parenteral (incluyendo subcutánea, por
ejemplo por inyección o por depósito comprimido, intradérmica,
intratecal, intramuscular por ejemplo, por depósito e intravenosa),
rectal y tópica (incluyendo dérmica, bucal y sublingual) o en una
forma adecuada para administración por inhalación de insuflación
aunque la vía más adecuada puede depender, por ejemplo, de la
afección y trastorno del receptor. Las formulaciones pueden
presentarse convenientemente en forma de dosificación unitaria y
pueden prepararse por cualquiera de los procedimientos bien
conocidos en la técnica farmacéutica. Todos los procedimientos
incluyen la etapa de asociar los compuestos ("ingrediente
activo") con el vehículo que constituye uno o más ingredientes
adicionales. En general, las formulaciones se preparan asociando
uniforme e íntimamente el ingrediente activo con vehículos líquidos
o vehículos sólidos finamente divididos o ambos y después, si fuera
necesario, dando forma al producto en la formulación deseada.
Las formulaciones adecuadas para administración
oral pueden presentarse en forma de unidades discretas tales como
cápsulas, obleas o comprimidos (por ejemplo, comprimidos
masticables, en particular para administración pediátrica)
conteniendo cada uno una cantidad predeterminada del ingrediente
activo; en forma de un polvo o gránulos; en forma de una solución o
una suspensión en un líquido acuoso o un líquido no acuoso; o en
forma de una emulsión líquida de aceite en agua o una emulsión
líquida de agua en aceite. El ingrediente activo puede presentarse
también en forma de un bolo, electuario o pasta.
Un comprimido puede prepararse por compresión o
moldeo, opcionalmente con uno o más ingredientes adicionales. Los
comprimidos comprimidos pueden prepararse comprimiendo en una
máquina adecuada el ingrediente activo en una forma fluida tal como
un polvo o gránulos, opcionalmente mezclado con otros excipientes
convencionales tales como agentes aglutinantes, (por ejemplo,
jarabe, goma arábiga, gelatina, sorbitol, tragacanto, mucílago de
almidón, polivinil pirrolidona) o cargas de hidroximetilcelulosa o
hidroximetilcelulosa (por ejemplo, lactosa, azúcar, celulosa
microcristalina, almidón de maíz, fosfato cálcico o sorbitol),
lubricantes (por ejemplo, estearato de magnesio, ácido esteárico,
talco, polietilenglicol o sílice), disgregantes (por ejemplo,
almidón de patata o almidón glicolato sódico) o agentes humectantes,
tales como lauril sulfato sódico. Los comprimidos moldeados pueden
prepararse por moldeo en una máquina adecuada de una mezcla del
compuesto en polvo humedecida con un diluyente líquido inerte. Los
comprimidos pueden recubrirse o ranurarse opcionalmente y pueden
formularse para proporcionar una liberación lenta o controlada del
ingrediente activo que hay en su interior. Los comprimidos pueden
recubrirse de acuerdo con procedimientos bien conocidos en la
técnica.
Como alternativa, los compuestos de la presente
invención pueden incorporarse en preparaciones líquidas orales tales
como suspensiones acuosa u oleosas, soluciones, emulsiones, jarabes
o elixires, por ejemplo. Además, las formulaciones que contienen
estos compuestos pueden presentarse como un producto seco para
constitución con agua u otro vehículo adecuado antes de su uso.
Dichas preparaciones líquidas pueden contener aditivos
convencionales tales como agentes de suspensión tales como jarabe de
sorbitol, metilcelulosa, jarabe de glucosa/azúcar, gelatina,
hidroxietilcelulosa, carboximetilcelulosa, gel de estearato de
aluminio o grasas comestibles hidrogenadas; agentes emulsionantes
tales como lecitina, mono-oleato de sorbitán o goma
arábiga; vehículos no acuosos (que pueden incluir aceites
comestibles) tales como aceite de almendra, aceite de coco
fraccionado, ésteres oleosos, propilenglicol o alcohol etílico; y
conservantes tales como hidroxibenzoatos de metilo o propilo o ácido
sórbico. Dichas preparaciones pueden formularse también como
supositorios, por ejemplo, que contienen bases de supositorio
convencionales tales como manteca de cacao u otros glicéridos.
Las formulaciones para administración parenteral
incluyen soluciones para inyección estériles acuosas y no acuosas
que pueden contener anti-oxidantes, tampones,
bacteriostatos y solutos que hacen a la formulación isotónica con
la sangre del receptor pretendido; y suspensiones estériles, acuosas
y no acuosas que pueden incluir agentes de suspensión y agentes
espesantes.
Las formulaciones pueden presentarse en
recipientes de dosis única o multi-dosis, por
ejemplo ampollas y viales sellados, y pueden almacenarse en
condiciones de secado por congelación (liofilizado) que solo
requieren la adición de un vehículo líquido estéril, por ejemplo,
agua para inyección, inmediatamente antes de su uso. Las soluciones
y suspensión para inyección extemporánea pueden prepararse a partir
de polvos estériles, gránulos y comprimidos de la clase descrita
anteriormente.
Las formulaciones para administración rectal
pueden presentarse como un supositorio con los vehículos habituales
tales como manteca de cacao, grasa dura, o polietilenglicol.
Las formulaciones para administración tópica en
la boca, por ejemplo por vía bucal o sublingual, incluyen grageas
que comprenden el ingrediente activo en una base aromatizada tal
como agarosa y goma arábiga o tragacanto, y pastillas que comprenden
el ingrediente activo en una base tal como gelatina y glicerina o
sacarosa y goma
arábiga.
arábiga.
Para la administración tópica a la epidermis,
los compuestos pueden formularse en forma de cremas, geles, pomadas
o lociones o como un parche transdérmico.
Los compuestos pueden formularse también como
preparaciones de depósito. Dichas formulaciones de actuación a
largo plazo pueden administrarse por implante (por ejemplo, por vía
subcutánea o intramuscular) o por inyección intramuscular. Por lo
tanto, por ejemplo, los compuestos pueden formularse con los
materiales poliméricos o hidrófobos adecuados (por ejemplo, como una
emulsión en un aceite aceptable) o resinas de intercambio iónico, o
como derivados poco solubles, por ejemplo, como una sal poco
soluble.
Para administración intranasal los compuestos de
la invención pueden usarse, por ejemplo, como un pulverizador
líquido, como un polvo o en la forma de gotas.
Para administración por inhalación, los
compuestos de acuerdo con la invención se suministran
convenientemente en la forma de una presentación de pulverizador de
aerosol en packs presurizados o un nebulizador, usando un propulsor
adecuado, por ejemplo, 1,1,1,2-trifluoroetano (HFA
134A) y 1,1,1,2,3,3,3,-heptapropano (HFA 227), dióxido de carbono u
otro gas adecuado. En el caso de un aerosol presurizado, la
dosificación puede determinarse proporcionando una válvula para
suministrar una cantidad medida. Las cápsulas y cartuchos por
ejemplo de gelatina para usar en un inhalador o insuflador pueden
formularse para que contengan una mezcla en polvo de un compuesto de
la invención y una base en polvo adecuada tal como lactosa o
almidón.
Además de los ingredientes particularmente
mencionados anteriormente, las formulaciones pueden incluir otros
agentes convencionales en la técnica respecto al tipo de formulación
en cuestión, por ejemplo aquellos adecuados para administración oral
pueden incluir agentes aromatizantes.
Los especialistas en la técnica entenderán que
cuando en este documento se hace referencia a tratamiento se
extiende a profilaxis así como al tratamiento de las enfermedades o
síntomas establecidos. Además, se entenderá que la cantidad del
activador de PPAR delta requerida para usar en el tratamiento
variará con la naturaleza de la afección a tratar y de la edad y el
estado del paciente y, en último lugar, estará a discreción del
médico o veterinario practicante. En general, sin embargo, las dosis
empleadas para el tratamiento de seres humanos adultos típicamente
estarán en el intervalo de 0,02-5000 mg por día,
preferiblemente 1-1500 mg por día. La dosis deseada
puede presentarse convenientemente en una única dosis o como dosis
divididas administradas a los intervalos apropiados, por ejemplo
como dos, tres, cuatro o más sub-dosis por día. Las
formulaciones de acuerdo con la invención pueden contener entre
0,1-99% del ingrediente activo, convenientemente del
30-95% para comprimidos y cápsulas y el
3-50% para preparaciones líquidas.
Los activadores de PPAR delta para usar en la
presente invención pueden usarse en combinación con uno o más
agentes terapéuticos distintos, por ejemplo, alivios para el dolor,
tales como antagonista de glicina, un inhibidor del canal de sodio
(por ejemplo lamotrigina), una sustancia P antagonista (por ejemplo
un antagonista de NK1), acetaminofeno o fenacetina; un inhibidor de
metaloproteinasa de matriz; un inhibidor de óxido nítrico sintasa
(NOS) (por ejemplo un inhibidor de iNOS o de nNOS); un inhibidor de
la liberación, o de la actuación, del factor de necrosis tumoral
\alpha; una terapia con anticuerpos (por ejemplo, una terapia con
anticuerpos monoclonales); un estimulante, incluyendo cafeína; un
antagonista de H_{2}, tal como ranitidina; un inhibidor de la
bomba de protones, tal como omeprazol; un antiácido, tal como
hidróxido de aluminio o magnesio; un antiflatulento, tal como
simeticona; un descongestivo, tal como fenilefrina,
fenilprolpanolamina, pseudoefedrina, oximetazolina, epinefrina,
nafazolina, xilometazolina, propilhexedrina, o
levo-desoxiefedrina; un antitusivo, tal como
codeína, hidrocodona, carmifeno, carbetapentano, o dextrametorfano;
un diurético; o un antihistamínico sedante o no sedante; un
inhibidor de COX-2 tal como Vioxx^{TM} o
Celebrex^{TM} y otros AINE. La invención proporciona, por lo
tanto, en otro aspecto el uso de una combinación que comprende un
compuesto de fórmula (I) con otro agente terapéutico en el
tratamiento de la inflamación.
Cuando los activadores de PPAR delta se usan en
combinación con otros agentes terapéuticos, los compuestos pueden
administrarse secuencialmente o simultáneamente por cualquier vía
conveniente.
Las combinaciones a las que se ha hecho
referencia anteriormente pueden presentarse convenientemente para
usar en la forma de una formulación farmacéutica y, por lo tanto,
las formulaciones farmacéuticas que comprenden una combinación como
se ha definido anteriormente óptimamente junto con un vehículo o
excipiente farmacéuticamente aceptable, comprenden otro aspecto de
la invención. Los componentes individuales de dicha combinación
pueden administrarse secuencial o simultáneamente en formulaciones
farmacéuticas por separado o combinadas.
Cuando están combinadas en la misma formulación
se entenderá que los dos compuestos deben ser estables y compatibles
entre sí y los otros componentes de la formulación y pueden
formularse para administración. Cuando se formulan por separado,
pueden proporcionarse en cualquier formulación conveniente,
convenientemente de una manera conocida para dichos compuestos en la
técnica.
Cuando un activador de PPAR delta se usa en
combinación con un segundo agente terapéutico activo contra la
misma enfermedad, la dosis de cada compuesto puede ser diferente de
la de cuando el compuesto se usa solo. Las dosis apropiadas las
entenderán fácilmente los especialistas en la técnica.
Los siguientes ejemplos se muestran para
ilustrar la síntesis de algunos compuestos particulares de la
presente invención y para ejemplificar adicionalmente solicitudes
particulares de los procedimientos generales descritos
anteriormente.
Intermedio A
Se enfrió ácido clorosulfónico (15 ml) a 0ºC,
después se añadieron 10,0 g (0,05 M) de
2-metilfenoxiacetato de etilo durante 10 min. La
mezcla de reacción se agitó a 0-5ºC durante 30 m, el
baño se retiró y se continuó agitando durante 2 h. La mezcla de
reacción se vertió en hielo, formándose un sólido blanco que se lavó
con agua enfriada con hielo y se secó a alto vacío dando el
compuesto del título (12,846 g, 86%).
Intermedio B
A una solución bien agitada de LiAlH_{4} (1,52
g, 40 mmol) en THF seco (50 ml) a 0ºC, se le añadió lentamente una
solución de
4-metil-2-[4-(trifluorometil)fenil]-tiazol-5-carboxilato
de etilo (12,6 g, 40 mmol) en THF seco (50 ml). La mezcla se agitó
a temperatura ambiente durante 2 h. La reacción se interrumpió
mediante la adición lenta a 0ºC de agua (2 ml), NaOH 5 N (2 ml) y
agua (6 ml). El precipitado se filtró, se lavó con EtOAc, MeOH,
CH_{2}Cl_{2} y THF. Después de la evaporación, se obtuvo un
sólido amarillo, que se cristalizó en MeOH-agua
dando el intermedio B descrito anteriormente (9,90 g, 36 mmol, 90%)
en forma de un sólido amarillo pf 120-122ºC.
Intermedio C
A una solución agitada fría (0ºC) del intermedio
B (8,2 g, 30 mmol) y Et_{3}N (6,07 g, 8,36 ml, 60 mmol), en
CH_{2}Cl_{2} seco (120 ml) se le añadió lentamente MeSO_{2}Cl
(5,49 g, 3,71 ml, 48 mmol). Después de 2 h a 0ºC se añadieron más
Et3N (6 mmol) y MeSO_{2}Cl (4,8 mmol). Después de 2 horas más una
ccf (hexano:EtOAc, 1:1) mostró que la reacción se había completado.
La mezcla de reacción se diluyó con CH_{2}Cl_{2} (120 ml) y se
lavó con NaHCO_{3} (sat.) (2 x 240 ml) y agua (2 x 240 ml), se
secó, se filtró y se evaporó dando el intermedio C (8,0 g, 27 mmol,
90%) en forma de un sólido amarillo.
El Intermedio A (4,68 g,16 mM) se calentó a
reflujo con 9,6 g de polvo de estaño en etanol (20 ml) y dioxano/HCl
(20 ml). Después de 3 h la mezcla de reacción se vertió en hielo y
CH_{2}Cl_{2} (200 ml) y se filtró. Las fases se separaron y la
fase acuosa se extrajo 2 X 50 ml de CH_{2}Cl_{2}. Las fases
orgánicas combinadas se secaron (MgSO_{4}), se filtraron y
evaporaron dando 3,5 g (97%). Este material fácilmente forma
disulfuros y, por lo tanto, se usó inmediatamente. Se disolvió en
acetonitrilo (50 ml) con el intermedio C (4,0 g, 14,0 mM) y
Cs_{2}CO_{3} (10,1 g, 31,0 mM) y se agitó durante 1 h después se
diluyó con éter (200 ml) y agua (200 ml). Las fases se separaron y
la fase orgánica se lavó 2 X NaOH 0,1 N (50 ml), se secó
(MgSO_{4}), se filtró y se evaporó dando el producto bruto (6,57
g), que se suspendió en hexano:éter (1:1) y se filtró dando el
intermedio D puro (5,0 g, 74%). Este material se hidrolizó como se
describe a continuación para preparar el compuesto del título. Una
solución del éster correspondiente (intermedio D) (1 mmol) en THF
(10 ml) (en algunos casos se añadieron unas pocas gotas de MeOH para
ayudar a la solubilidad), se trató con LiOH 1 N en agua (2 ml, 2
mmol), y se agitó 16 h a temperatura ambiente (cuando las reacciones
eran lentas, la temperatura se elevó a 50ºC). La solución se
neutralizó con HCl 1 N (2 ml, 2 mmol) y el disolvente orgánico se
evaporó dando una solución acuosa con un producto insoluble. Si lo
insoluble era un sólido, se filtró y se secó dando el producto
final. Si lo insoluble era un aceite, se extrajo con EtOAc (30 ml).
La solución orgánica se separó, se lavó con agua (2 x 30 ml), se
secó, se filtró y se evaporó dando el producto final.
Intermedio 1
Se añadió NaHCO_{3} (2 mmol) a una solución de
P_{4}S_{10} (0,2 mmol) en tolueno (100 ml) y la mezcla se
calentó a reflujo durante aproximadamente 30 min. La benzamida
sustituida (1 mmol) se añadió y la reacción se agitó a 90ºC durante
1 h. La reacción se evaporó entonces hasta sequedad, se trató con
salmuera (100 ml) y se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (2 X 50 ml). La
fase orgánica se secó, se filtró, y se evaporó dando el producto
final en forma de un sólido amarillo (50%).
EM m/z 223
Intermedio 2
El Intermedio 1 se hizo reaccionar con
2-cloroacetoacetato de etilo (1:1 mmol) y la mezcla
se calentó a reflujo durante una noche. La reacción se enfrió a
temperatura ambiente y el disolvente se evaporó. El sólido se
cristalizó en Et_{2}O o hexano dando el compuesto del título en
forma de un sólido blanquecino (56%).
EM m/z 333
Intermedio 3
El Intermedio 2 se hizo reaccionar con una
solución de LiAlH_{4} a 0ºC. La reacción se agitó mientras se
dejó calentar a ta. Después de que todo el material de partida hubo
desaparecido, la reacción se trató cuidadosamente con agua (5 ml)
seguido de NaOH 1 N (10 ml). La mezcla se filtró a través de celite.
El filtrado se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (3 x 50 ml). La fase
orgánica se secó, se filtró y se evaporó dando el compuesto del
título en forma de un sólido blanquecino (63%).
EM m/z 291
\newpage
Intermedio 4
A una solución del Intermedio 3 (1 mmol) y
Et_{3}N (2 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (100 ml) a 0ºC se le añadió
gota a gota cloruro de metanosulfonilo (1,6 mmol). Después de
2-4 h la reacción se había completado. Se añade
CH_{2}Cl_{2} (50 ml) y la fase orgánica se lavó con una solución
saturada de NaHCO_{3} (2 x 50 ml), agua (2 x 50 ml), se secó, se
filtró y después se evaporó dando el compuesto del título en forma
de un sólido amarillo pálido (100%).
1H-RMN (CDCl_{3}) \delta
2,40 (s, 3H), 4,70 (s, 2H), 7,55-7,75 (m, 3H).
Intermedio 5
Se enfrió ácido clorosulfónico (15 ml) se enfrió
a 0ºC, después se añadieron 10,0 g (0,05 M) de metilfenoxiacetato de
etilo durante 10 m. La mezcla de reacción se agitó a
0-5ºC durante 30 m, el baño se retiró y se continuó
agitando durante 2 h. La mezcla de reacción se vertió en hielo,
formándose un sólido blanco que se lavó con agua enfriada con hielo
y se secó a alto vacío dando el compuesto del título (12,846 g,
86%).
Ejemplo
2a
El Intermedio 5 (4,68 g, 16 mM) se calentó a
reflujo con 9,6 g de polvo de estaño en etanol (20 ml) y dioxano/HCl
(20 ml). Después de 3 h la mezcla de reacción se vertió en hielo y
CH_{2}Cl_{2} (200 ml) y se filtró. Las fases se separaron y la
fase acuosa se extrajo 2 X 50 ml de CH_{2}Cl_{2}. Las fases
orgánicas combinadas se secaron (MgSO_{4}), se filtraron y se
evaporaron dando 3,5 g (97%). Este material forma fácilmente
disulfuro y por lo tanto se usó inmediatamente. Se disolvió en
acetonitrilo (50 ml) con el Intermedio 4 (4,0 g, 14,0 mM) y
Cs_{2}CO_{3} (10,1 g, 31,0 mM) y se agitó durante 1 h después se
diluyó con éter (200 ml) y agua (200 ml). Las fases se separaron y
la fase orgánica se lavó 2 X NaOH 0,1 N (50 ml), se secaron
(MgSO_{4}), se filtraron y se evaporaron dando el producto bruto
(6,57 g), que era el intermedio 54. El material bruto se
cromatografió CH_{2}Cl_{2} (100%) dando el compuesto del título
(50%) en forma de un aceite transparente que solidificó durante el
reposo.
1H-RMN (CDCl_{3}) \delta
1,20 (t, 3H), 2,15 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 4,05 (s, 2H), 4,15 (c,
2H), 4,55 (s, 2H), 6,55 (d,1H), 7,05 (dd,1H), 7,15 (d, 1H), 7,55
(t, 1H), 7,65 (m, 2H).
EM m/z 500 (M+1)
Ejemplo
2b
Una solución del Ejemplo 2a (1 mmol) en THF (10
ml) se trató con LiOH 1 N en agua (2 ml, 2 mmol), y se agitó 16 h a
temperatura ambiente (cuando las reacciones fueron lentas, la
temperatura se elevó a 50ºC). La solución se neutralizó con HCl 1 N
(2 ml, 2 mmol) y el disolvente orgánico se evaporó dando una
solución acuosa con un producto insoluble. Si el insoluble era un
sólido, se filtró y se secó dando el producto final. Si el insoluble
era un aceite, se extrajo con EtOAc (30 ml). La solución orgánica se
separó, se lavó con agua (2 x 30 ml), se secó, se filtró, y se
evaporó dando el producto final.
El material bruto se precipitó en éter dando el
compuesto del título (81%) en forma de una espuma amarilla: pf <
50ºC.
Análisis Calculado para
C_{21}H_{17}F_{4}NO_{3}S_{2}: C, 53,50; H, 3,63; N, 2,97;
S, 13,60. Encontrado: C 53,86; H, 3,63; N, 2,87; S, 13,82.
EM m/z 472 (M+1)
Se examinó la capacidad de los activadores de
PPAR delta para inhibir la actividad y expresión de óxido nítrico
sintasa (INOS) inducible usando potentes agonistas selectivos de
PPAR delta, tales como ácido
(2-{2-metil-4[({4-metil-2-[4-(trifluorometil)fenil]-1,3-tiazol-5-il}metil)sulfanil]fenoxi}acético
(denominado en lo sucesivo en este documento Compuesto A,
sintetizado como se describe en el Ejemplo 1) y ácido
(2-2-metil-4-[({4-metil-2-[3-fluoro-4-(trifluorometil)fenil]-1,3-tiazol-5-il}metil)sulfanil]fenoxi}acético
(denominado en lo sucesivo en este documento Compuesto B,
sintetizado como se describe en el Ejemplo 2b).
En este sistema de ensayo, se usó
lipopolisacárido (LPS) para inducir la expresión de INOS en la línea
celular de macrófago de ratón, J774. El
pre-tratamiento de las células J774, con
concentraciones farmacológicamente pertinentes de agonistas de PPAR
delta, dio como resultado la inhibición de la actividad de INOS.
Esta reducción en la actividad de INOS estaba correlacionada con una
reducción en la expresión de ARNm de INOS inducida por LPS.
Específicamente, la actividad de INOS inducida
por LPS se midió usando las siguientes condiciones de ensayo. Las
células J774 se sembraron a una densidad de
35000-50000 miles de células por pocillo, en una
placa de 96 pocillos negra, de fondo transparente, 24 horas antes
de usarlas. El cultivo celular y las diluciones de fármaco se
realizaron en medios completos, compuestos por DMEM (medio de Eagle
modificado por Dulbecco) que contenía suero de ternera fetal (10%),
glutamina (2 mM), penicilina (100 u/m ) y estreptomicina (100 g/ml).
Las células J774 se pre-trataron con los
activadores de PPAR delta A y B, o con vehículo, durante 6 horas
antes de, y durante las 24 horas posteriores a la adición de LPS
(típicamente, se usó una concentración de 1 \mug/ml de LPS).
Veinticuatro horas después de la adición de LPS, se midió la
actividad de INOS mediante el siguiente procedimiento. El medio de
cultivo celular/diluciones de fármaco se retiraron y las células se
lavaron con D-PBS (solución salina tamponada con
fosfato modificada por Dulbecco). Después se retiró la
D-PBS, y se sustituyó con D-PBS que
contenía DAF-2
(4,5-diaminofluoresceína; 5 uM) y
L-arginina (500 uM). Después de la incubación a 37ºC
durante 3 horas, se midió la fluorescencia de cada pocillo a una
longitud de onda de excitación de 485 nm, y a una longitud de onda
de emisión de 530 nm. Después se calculó la capacidad de LPS para
inducir la actividad de INOS, en presencia y ausencia de activadores
de PPAR delta. Los ejemplos de los datos obtenidos se muestran en
la Figura 1, siendo el control de elevación de la actividad de INOS,
inducida por LPS, una respuesta del 100%.
Por lo tanto, el pre-tratamiento
con Compuesto A o Compuesto B, produjo una marcada inhibición de la
actividad de INOS inducida por LPS en células J774, a
concentraciones
sub-nanomolares-nanomolares.
El mecanismo, asociado con la inhibición de la
actividad de INOS por los activadores de PPAR delta, se investigó
con gran detalle.
Específicamente, se examinó la capacidad de los
agonistas de PPAR delta para inhibir la expresión de ARNm de INOS
inducida por LPS, en células J774. Las células J774 se pusieron en
placas de 6 pocillos (10^{6} células/pocillo), 24 horas antes de
su uso. Las células se pretrataron con el medio de control del
activador de PPAR delta durante 6 horas, antes de la adición de LPS,
que se co-incubó con el activador/control de PPAR
delta, durante 24 horas más. Al final del periodo de incubación, el
medio de cultivo se retiró por aspiración y las células se lavaron
con D-PBS. Después de la retirada de la
D-PBS, se aisló el ARN celular total de cada muestra
usando un kit de aislamiento de ARN disponible en el mercado. La
síntesis de la primera hebra del ADNc se realizó según las
instrucciones suministradas con el sistema de transcripción inversa
AMV (TI). Se añadió una alícuota (1000 ng) del ARN a una mezcla que
contenía (concentraciones finales) MgCl_{2} (5
mM),Tris-HCl (10 mM; pH 8,8), KCl (50 mM),Triton
X-100 (0,1%), dNTP (1 mM), rRNasin(1
U/\mul), transcriptasa inversa AMV (0,75 U/\mul), oligo
(dT)_{15} (25 ng/\mul). Esto se incubó en un ciclador
térmico a 42ºC durante 30 minutos, seguido de 95ºC durante 15
minutos, y, finalmente, 4ºC, hasta transferirlo a un congelador
(-20ºC) para almacenamiento.
Para uso en PCR, se usaron los siguientes
conjuntos
| INOS sentido de Ratón | CCCTTCCGAAGTTTCTGGCAGCAGC (SEC ID Nº: 1) |
| INOS anti-sentido de Ratón | GGCTGTCAGAGCCTCGTGGCTTTGG (SEC ID Nº: 2) |
| GAPDH sentido de Ratón | TGAAGGTCGGTGTGAACGGATTTGGC (SEC ID Nº: 3) |
| GAPDH anti-sentido de Ratón | CATGTAGGCCATGAGGTCCACCAC (SEC ID Nº: 4) |
La PCR se realizó en un volumen de reacción de
50 \mul que contenía 5 \mul de los cebadores sentido y
antisentido de la reacción RT, para INOS/GAPDH (0,4 pmo/\mul),
dNTPs (160 \muM), KCl (50 mM), Tris-HCl (10 mM;
pH 9,0), Triton X-100 (0,1%), MgCl_{2} (2 mM), y
ADN Taq polimerasa (0,04 U/\mul) (concentraciones finales). La PCR
se realizó en un ciclador térmico usando las siguientes condiciones:
95ºC durante 60 s, seguido de 28 ciclos de 94ºC durante 30 s, 55ºC
durante 60 s, 72ºC durante 90 s. Después de una etapa final de
extensión de 72ºC durante 5 minutos, las muestras se mantuvieron a
4ºC, hasta que se analizó en un gel de agarosa. El análisis de geles
sybr-verde teñidos, por densitometría, se realizó
usando un sistema fluorimager Storm (Molecular Devices).
Por lo tanto el pre-tratamiento
de las células J774, con concentraciones farmacológicamente
pertinentes de activadores de PPAR delta, dio como resultado la
inhibición de la expresión de ARNm de INOS inducido por LPS (1
\mug/ml para los siguientes datos). Estos datos se muestran en la
Figura 2.
Se examinó también la capacidad de los
activadores de PPAR delta para inhibir la expresión/secreción del
factor de necrosis tumoral-\alpha (TNF). Por lo
tanto, la capacidad de los activadores de PPAR delta para inhibir la
expresión de TNF inducida por LPS se correlacionó bien con los
efectos inhibidores de los activadores de PPAR delta sobre la
activación de INOS inducida por LPS.
Específicamente, se midió la actividad de INOS y
expresión de TNF inducida por LPS se midió usando las siguientes
condiciones de ensayo. Se sembraron células J774 a una densidad de
35000-50000 miles de células por pocillo, en placas
de 96 pocillos negros, de fondo transparente. El cultivo celular y
las diluciones de fármaco se realizaron en medios completos, que
estaban compuestos por DMEM (medio de Eagle modificado por Dulbecco)
que contenía suero de ternera fetal (10%), glutamina (2 mM),
penicilina (100 u/m ) y estreptomicina (100 g/ml). Las células J774
se pre-trataron con los activadores de PPAR delta, o
con vehículo, durante 6 horas antes de, y durante las 24 horas
posteriores a la adición de LPS (típicamente, se usó una
concentración de 1 \mug/ml de LPS). Veinticuatro horas después de
la adición de LPS, se midió la actividad de INOS mediante el
siguiente procedimiento. El medio de cultivo celular/diluciones de
fármaco se retiraron para medir las concentraciones de TNF, que se
cuantificaron usando un sistema ELISA disponible en el mercado. Las
células se lavaron con D-PBS. La
D-PBS se retiró después, y se puso con D PBS que
contenía DAF-2
(4,5-diaminofluoresceína; 5 \muM) y
L-arginina (500 \muM). Después se midió la
actividad de INOS como se ha descrito anteriormente. Los ejemplos de
los datos obtenidos se ilustran en la Figura 3.
Claims (3)
1. Uso de un agonista selectivo de PPAR delta en
la fabricación de un medicamento para el tratamiento de
enfermedades o afecciones inflamatorias.
2. Uso de acuerdo con la reivindicación 1 en el
que el agonista de PPAR delta es un compuesto de fórmula (I), y
sales y solvatos farmacéuticamente aceptables del mismo.
En la que X representa un COOH (o un éster
hidrolizable del mismo) o un grupo tetrazol;
X^{1} representa NH, NCH_{3}, O, S, un
enlace (es decir está ausente), CH_{2}, o CH donde la línea
discontinua indica que cuando X^{1} es CH el enlace representado
es un doble enlace;
X^{2} representa O o S;
R^{1} y R^{2} representan independientemente
H, CH_{3}, OCH_{3}, o halógeno;
n es 1 o 2;
uno de Y y Z es N y el otro es S u O:
y es 0, 1, 2, 3, 4 o 5;
cada R^{3} representa independientemente un
CF_{3} o halógeno.
3. Uso de acuerdo con la reivindicación 1 o 2 en
el que el agonista de PPAR delta es:
ácido
{2-metil-4-[4-metil-2-(4-trifluorometil
fenil)tiazol-ilmetiltio]fenoxi}-acético
(Fórmula II):
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