ES2257813T3 - Terapia de microdosis de condiciones vasculares mediante donadores de no. - Google Patents

Abstract

Se describen procedimientos de tratamiento de afección vasculares asociadas a un desequilibrio localizado del tono vascular considerado, como principio básico, como ampliamente imputable a una endotelina (ET) elevada. Estos procedimientos consisten en la administración de monóxido de nitrógeno (NO), de agentes capaces de aportar NO (donadores de No, por ejemplo), de agentes que activan la guanil-ciclasa (como YC-1), o de agentes que prolongan la acción de un NO endógeno o de un ácido guanosino monofosfórico (gGMP); una segunda molécula mensajera), como inhibidores de fosfodiesterasa (PDE). Según la invención, dichos agentes se administran en dosis mínimas o microdosis por cualquier vía conocida en la técnica capaz de encaminar dosis comprendidas entre aproximadamente la mita y una vigésima parte (1/2 a 1/20) e las dosis aptas para inducir una vasodilatación en vías circulatorias "normales". La administración de estos agentes en pequeñas dosis restablece el equilibrio del tono vascular sin provocar ningún efecto sistémico en el sistema vascular, y alivia efectivamente afecciones vasculares asociadas a una reducción de la producción de NO o a una atenuación del efecto del NO.

Description

Terapia de microdosis de condiciones vasculares mediante donadores de NO.

Campo de la invención

La presente invención se refiere al tratamiento de la disfunción sexual femenina relacionada con la vasoconstricción periférica. Más particularmente, la invención se refiere a procedimientos para el establecimiento de tono vascular normal en regiones de la circulación que manifiestan una fisiopatología.

Antecedentes de la invención

Es ampliamente conocido que la administración de óxido nítrico (NO) o de compuestos que proporcionan NO (es decir, donadores de NO, agentes productores de NO) a un sujeto, pueden provocar potentes respuestas vasodilatadoras. Esta administración con frecuencia se ve acompañada de varios efectos secundarios indeseables, que incluyen cefalea, eritema e hipotensión.

El papel fisiológico del NO se ha descrito como el de un agente vasodilatador crónico potente basándose en que se produce un marcado incremento del tono vascular tras el bloqueo de la NO sintasa (NOS) (Johnson et al., Am. J. Hypertens. 5:919, 1992; Tolins et al., Hypertens. 17:909, 1991). El papel del NO como un vasodilatador crónico sólo se ha inferido por medios indirectos, es decir, a partir de la eliminación de la actividad de la NOS. Endógenamente, puede inferirse mucha más multiplicidad y solapamiento en el control de la vasodilatación a partir de la literatura científica. Por ejemplo, puede inducirse la vasodilatación con acetilcolina, bradiquinina, adenosina, adenosín trifosfato (ATP), histamina, polipéptido intestinal vasoactivo (VIP) y leucotrienos, entre otros. Las acciones de estos moduladores endógenos se ha demostrado que dependen, por lo menos en parte, de la presencia de endotelio, un efecto probablemente mediado por el factor relajante derivado del endotelio/NO (EDFR/NO) (Garg, U.C. et al., J. Biol. Chem. 266:9, 1991; Garg, U.C. et al., J. Clin. Invest. 83:1774, 1989; Palmer, R.M.J. et al., Nature 327:524, 1987). Existen otros mecanismos vasodilatadores que no dependen del endotelio, tales como la activación del receptor \beta_{2}-adrenérgico, el péptido natriurético atrial (ANP) y determinadas prostaglandinas. Las acciones del NO se ha sugerido que se encuentran mayoritariamente mediadas por GMPc a través de la activación de la guanilato ciclasa, aunque se han sugerido otros mecanismos. Por ejemplo, Garg et al. (J. Biol. Chem. 266:9, 1991; J. Clin. Invest. 83:1774, 1989) y otros (Assender, J.W. et al., J. Cardiovasc. Pharmacol. 17(supl. 3):S104, 1991; O'Conner, K.J. et al., J. Cardiovasc. Pharmacol. 17(supl. 3):S100-S103, 1991) demostraron la existencia de una diferencia en los efectos de los agentes vasodilatadores productores de NO en la inhibición del crecimiento de un cultivo de células vasculares de músculo liso; sin embargo, resulta evidente que el NO no actúa únicamente como un vasodilatador sino que también inhibe las respuestas de crecimiento vascular en varias condiciones (Farhy, R.D. et al., Circ. Res. 72:1202, 1993).

Se ha considerado y practicado ampliamente que el NO, en el ser humano y en animales, producido a través de la infusión de nitroprúsido sódico (SNP), provoca la vasodilatación en la vasculatura periférica a dosis superiores a 10 \mug/kg por minuto. Recientemente se ha determinado que el NO también lleva a cabo una función a través de la interacción con la endotelina (ET) (Banting et al., J. Hypertens. 14:975, 1996; Richard et al., Circulation 91:771, 1995). Previamente a ello, la ET se había considerado que desempeñaba un papel mínimo en el mantenimiento del tono en la microvasculatura periférica y que presentaba poco impacto sobre el estado de contracción del músculo liso en aquellos vasos. Estudios recientes indican (Banting et al., J. Hypertens. 14:975, 1996) que la ET se encuentra bajo el control inhibitorio del NO y que la administración de inhibidores de la NOS resulta en niveles elevados de ET.

Las endotelinas se describieron por primera vez en 1988 y se ha demostrado que son potentes vasoconstrictores, que se encuentran preferentemente en el endotelio vascular y, desde aquel momento, se han identificado y se encuentran disponibles comercialmente (por ejemplo de Sigma, de American Peptides) numerosos antagonistas de ET y sus sales farmacéuticamente aceptables. Pueden encontrarse descripciones detalladas de las estructuras químicas de diversos antagonistas de ET en las patentes US nº 5.284.828, publicada el 8 de febrero de 1994, de Hemmi et al., nº 5.378.715, publicada el 3 de enero de 1995, de Stein et al., y nº 5.382.569, publicada el 17 de enero de 1995, de Cody et al. Además, la patente US nº 5.338.726, publicada el 16 de agosto de 1994, de Shinosaki et al., describe la estructura química de los inhibidores enzimáticos conversores de la ET. Sin embargo, hasta el momento no se han autorizado para el uso terapéutico los antagonistas de la ET, aunque varios investigadores han postulado que los antagonistas de ET podrían utilizarse para condiciones desde la insuficiencia renal, el choque endotóxico, el asma, la angina o la diabetes, hasta la hipertensión pulmonar, y posiblemente para otras indicaciones.

Bajo condiciones fisiológicas normales, la ET puede encontrarse en casi todas las partes del sistema circulatorio a niveles muy bajos. En general, en el sistema circulatorio normal de roedor, no se encuentra ET en cantidades elevadas y aparentemente presenta un papel detectablemente poco importante en la regulación normal del tono vascular, es decir, no se produce una reducción apreciable de la presión sanguínea cuando se administra mediante inyección un antagonista de la ET en la circulación normal. Además, en la actualidad aparentemente no existe ninguna evidencia que sugiera que la ET desempeña un papel fisiológico ni siquiera en una parte pequeña del sistema circulatorio bajo condiciones circulatorias normales en modelos experimentales. Sin embargo, es probable que la circulación sistémica presenta una apariencia normal cuando, de hecho, regiones específicas del sistema circulatorio están experimentando cambios fisiopatológicos, tales como las que se producen en condiciones tales como la disfunción eréctil (DE) (Adams et al., Int. J. Impot. Res. 9:85-91, 1997).

En consecuencia, existen condiciones cardiovasculares que tradicionalmente se tratan en el ser humano con dosis significativas de NO o de donadores de NO, tales como el trinitrato de glicerilo (GTN) (0,2 mg/h o más). Sin embargo, estas dosis es conocido que inducen vasodilatación sistémica y provocan considerables efectos secundarios sistémicos globales (The, L.S. et al., Brit. J. Rheum. 34:636, 1995). Ello es particularmente cierto cuando existe una condición patológica únicamente en determinados órganos mayores (por ejemplo en corazón, riñón, hígado). Como resultado, no se ha podido descubrir un procedimiento satisfactorio para promover la recuperación de la presión de perfusión normal en órganos con determinadas patologías sin producir hipotensión sistémica global.

Basándose en la comprensión de que una parte significativa de los problemas subyacentes a la disfunción eréctil se relacionan con mecanismos "vasculares", mucha investigación puntera actual se dedica a determinar la contribución de los diferentes sistemas de control efector vascular en los estados normales y fisiopatológicos. Existe una comprensión sustancial de los sucesos hemodinámicos que conducen a una erección, y sin embargo siguen estando mal descritos de manera cuantitativa las funciones de cada uno de los sistemas neuroefector, humoral y local en estos sucesos. Desde 1990 se ha considerado que el NO es el neurotransmisor no colinérgico no adrenérgico primario en el pene y se ha considerado el mediador principal de la relajación corporal durante la erección (Ignarro, L.J. et al., Biochem. Biophys. Res. Comm. 170:843, 1990).

Se encuentra bien establecido que, para que se produzca una erección, debe tener lugar la vasodilatación (autonómica) mediada neuralmente de los vasos sanguíneos arteriales peneanos y de la red trabecular (Lue, T.F. et al., J. Urol. 137(5):829, 1987), permitiendo la entrada de un flujo sanguíneo incrementado en los cuerpos cavernosos del pene. El volumen intracorporal en expansión comprime las venas efluentes entre el tejido eréctil y la túnica albugínea fibrosa, relativamente inelástica, circundante. De esta manera, se reduce la capacidad de flujo de salida y se produce la retención de la sangre, resultando en la transformación del pene fláccido en su estado erecto (Lue, T.F. et al., J. Urol 137(5):829, 1987; Juenemann, K.P. et al., J. Urol. 136(1):158, 1986; Lue, T.F. et al., J. Urol. 130:1237, 1983; Weiss, H. et al., Ann. Intern. Med. 76:793, 1980). El nivel de tono vascular arterial (es decir, la presión sanguínea) es un factor de importancia crítica en este proceso, aunque una presión de perfusión adecuada también es un factor necesario. A la inversa, la detumescencia, está mediada por el sistema nervioso simpático (Saenz de Tajada, I. et al., Am. J. Physiol. 254:H459, 1988; Juenemann, K.P. et al., Br. J. Urol. 64, 1989).

El problema de la "impotencia" (definida como "un patrón de incapacidad persistente o recurrente para desarrollar o mantener una erección de suficiente rigidez para la realización con éxito de un coito") se comentó en una conferencia de consenso de los National Institutes of Health (NIH) en Washington en diciembre de 1992, reconociéndose que presenta un amplio abanico de factores causativos o asociados. El estudio "Massachusetts Male Aging Study" (MMAS) ha proporcionado una actualización de la visión epidemiológica disponible sobre la disfunción eréctil. Se acepta que la prevalencia de la impotencia se incrementa con la edad (Kinsey, A.C. et al., "Sexual Behaviour in the Human Male", W.B. Saunders: Philadelphia, 1948). La DE severa o completa se incrementa del 5% al 15% entre los 40 y los 70 años de dad (Feldman, H.A. et al., J. Urol 151:54, 1994). Se ha demostrado que la DE se encuentra ``directamente correlacionada con la enfermedad cardíaca, hipertensión, diabetes, medicaciones asociadas, índices de irritabilidad y de depresión, e inversamente correlacionada con la deshidroepiandrosterona sérica, con la lipoproteína de alta densidad, con el colesterol y con un índice de personalidad dominante.

Se estima en la actualidad que en Norteamérica existen más de 30.000.000 de hombres con alguna forma de DE, un incremento significativo respecto a los 10.000.000 citados apenas 10 años antes (Shabsigh, R. et al., Urology 32:83, 1988; Whitehead, E., Geriatrics 43(2):114, 1988; Furlow, W.L. et al., Med. Aspects Human Sexuality 19:13, 1985). De estos números también resulta razonable estimar que hasta tres millones de hombres en Canadá podrían presentar algún grado de DE. El coste directo del tratamiento de la impotencia es significativo. Algunos datos fiables de 1985 muestran que el coste del tratamiento de la impotencia excedía los 146 millones de dólares sólo en ese año en los Estados Unidos (National Center for Health Statistics) y que este número es únicamente el tamaño estimado del mercado para un tipo de terapia inyectable. Los efectos secundarios y costes indirectos asociados con la DE sugieren que la impotencia y la disfunción sexual son icebergs médicos. Las consecuencias de la disfunción sexual pueden advertirse en tensiones en las relaciones del huésped, que potencialmente conduce a la rotura de la vida marital, a violencia, a secuelas relacionadas con el trabajo, a comportamiento sexual desviado, y a impactos sobre los niños, cuando los hay, que pueden trasladar el daño a una nueva generación de comportamientos no deseados. Si la DE subyace a un porcentaje reducido aunque significativo de las roturas de pareja y familiares, entonces se añade muy considerablemente a la carga social y económica que supone en la sociedad. La cuestión en términos pragmáticos es que en la actualidad se está tratando una gran cantidad de hombres por DE y que la mayoría de los tratamientos utilizados son instrumentos bastante imperfectos (por ejemplo la inyección intracavernosa (IIC) de una mezcla de compuestos vasoactivos, la inserción de una prótesis peneana) con costes y complicaciones significativos (IIC: dolor, priapismo, rechazo de la técnica; prótesis: reoperación, infección, distorsión de la imagen corporal).

Se han propuesto como posibles terapias la administración de NO, o de compuestos capaces de liberar NO; sin embargo, estos agentes pueden provocar respuestas de vasodilatación potentes pero inapropiadas (Brock et al., J. Urol. 150:864, 1993). La administración con frecuencia se ve acompañada de una serie de efectos secundarios no deseables relacionados con la vasodilatación sistémica, incluyendo cefalea, eritema e hipotensión. En consecuencia, existe una necesidad real de procedimientos con los que pueda tratarse con rapidez y efectividad la DE y otras enfermedades vasculares sin ninguno de los efectos secundarios inapropiados.

Sumario de la invención

La disfunción sexual femenina asociada con un desequilibrio localizado del tono vascular, que se ha planteado que se debe en gran parte a niveles elevados de ET, puede aliviarse mediante la administración de NO, de nitroprúsido sódico o de trinitrato de glicerilo en dosis mínimas o en microdosis, que hasta el momento no se habían considerado tratamientos efectivos de los desequilibrios del tono vascular.

En el estado fisiológico normal, existe cantidad suficiente de NO en la vasculatura para mantener niveles apropiados de ET (Banting et al., J. Hypertens. 14:975, 1996). La adición de NO adicional presenta poco impacto sobre el efecto de la ET y, en consecuencia, cualquier vasodilatación adicional observada en la vasculatura de músculo liso normal probablemente es atribuible a efectos del NO sobre la generación de GMPc, resultando el GMPc en niveles reducidos de Ca^{++}. En determinadas condiciones patológicas, tales como la diabetes y las enfermedades cardiovasculares, y/o como consecuencia de la edad, el tejido no puede proporcionar niveles satisfactorios de NO con el fin de suprimir los niveles normales de ET presentes en los tejidos de músculo liso.

De esta manera, las condiciones fisiológicas en las que la producción de NO se encuentra reducida en una circulación local específica indican que la supresión de la actividad de ET debería ofrecer un tratamiento efectivo. En consecuencia, de acuerdo con ello, la presente invención proporciona la utilización de un agente o agentes que producen directa o indirectamente NO a dosis que son de entre aproximadamente un medio y aproximadamente un veinteavo (entre 1/2 y 1/20) de aquéllas que es conocido que inducen vasodilatación en circulaciones "normales", y en consecuencia no ejercen apenas ningún efecto sobre la vasculatura normal. De esta manera, estas dosis bajas, o "microdosis", se plantea la hipótesis de que normalizan el equilibrio entre NO y ET. El intervalo de entre aproximadamente 1/2 y aproximadamente 1/20 se deriva de la observación de que a dosis que se encuentran por debajo de aproximadamente 1/2 en la dosis normal, generalmente ya no se observan efectos sistémicos. Sin embargo, con una dosis normal de aproximadamente 1/20 o el efecto deseado generalmente no se vuelve a observar, es decir, no se produce ningún efecto.

De acuerdo con la presente invención se proporciona la utilización de NO, de nitroprúsido sódico o de trinitrato de glicerilo, en la preparación de un medicamento para el tratamiento de la disfunción sexual femenina por vía oral, sublingual, bucal, intravenosa, transdérmica o por cualquier otra vía efectiva, a concentraciones que son de entre aproximadamente 1/2 y aproximadamente 1/20 de una concentración requerida para inducir vasodilatación en regiones "sanas" o normales, tales como la vasculatura coronaria o de músculo esquelético. Preferentemente, las concentraciones del procedimiento de la presente invención son de entre aproximadamente un cuarto y aproximadamente un veinteavo (entre 1/4 y 1/20) de una concentración requerida para inducir la vasodilatación en regiones "sanas" o normales, tales como la vasculatura coronaria o de músculo esquelético. Todavía más preferentemente, las concentraciones de la utilización de la presente invención son de entre aproximadamente un octavo y aproximadamente un dieciseisavo (1/8 a 1/16) de una concentración requerida para inducir la vasodilatación en regiones "sanas" o normales, tales como la vasculatura coronaria o de músculo esquelético.

Se describe un "parche" transdérmico de dosis reducida con liberación a corto plazo de GTN a lo largo de un periodo de tiempo inferior a 6 horas (por oposición a la liberación en 12, 18 ó 24 horas), que restaura el tono vascular normal en un lecho vascular local afectado, sin afectar inapropiadamente el tono vascular sistémico o provocar hipotensión, y preferentemente, aunque no necesariamente, sin inducir tolerancia (Bennett et al., Circ. Res. 63:693, 1988) frente a los efectos y/o biotransformación de un compuesto liberador de NO en su forma liberadora.

De acuerdo con un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona un "parche" de dosis baja o de microdosis con la liberación a largo plazo de, por ejemplo, GTN, a lo largo de un periodo de tiempo superior a 6 horas (típicamente una liberación de 12 a 24 horas), que restaura el tono vascular normal en un lecho vascular local afectado, sin afectar inapropiadamente el tono vascular sistémico.

De acuerdo con un aspecto adicional de la presente invención se proporciona una utilización para tratar la disfunción sexual femenina (DS), que incluye la administración de NO, de nitroprúsido sódico o de trinitrato de glicerilo por vía oral, sublingual, bucal, intravenosa, transdérmica, o por cualquier otra vía efectiva, a concentraciones que son de entre aproximadamente 1/2 y aproximadamente 1/20 de una concentración requerida para inducir la vasodilatación en regiones "sanas" o normales, tales como la vasculatura coronaria o de músculo esquelético.

De acuerdo con todavía un aspecto adicional de la presente invención se proporciona una utilización para el tratamiento de la DS, que comprende administrar a un sujeto que lo necesita, una cantidad de GTN por cualquier vía, por ejemplo oral, sublingual, transdérmica, intravenosa o por inhalación, que proporcione concentraciones en plasma inferiores a aproximadamente 250 pg/ml de GTN, de manera que se trate la DS.

De acuerdo con un aspecto, la presente invención hace uso de un "parche" transdérmico de dosis reducida con liberación a corto plazo de, por ejemplo, GTN o nitroprúsido sódico a lo largo de un periodo de tiempo inferior a 6 horas (por oposición a la liberación en 12, 18 ó 24 horas), que restaura el tono vascular normal en un lecho vascular local afectado, tal como la vasculatura pudendal, cervical o vaginal de mujeres con DS, sin afectar inapropiadamente el tono vascular sistémico o provocar hipotensión, y preferentemente, aunque no necesariamente, sin inducir tolerancia (Bennett et al., Circ. Res. 63:693, 1988) frente a los efectos y/o biotransformación de un compuesto liberador de NO en su forma liberadora.

De acuerdo con un aspecto adicional, el nitroprúsido sódico de la presente invención utiliza un "parche" de dosis o microdosis con liberación a largo plazo de GTN, o de nitroprúsido sódico a lo largo de un periodo de tiempo superior a 6 horas (típicamente una liberación en 12 a 30 horas), que restaura el tono vascular normal en un lecho vascular local afectado, tal como la vasculatura pudendal, cervical o vaginal de mujeres con DS sin afectar inapropiadamente al tono vascular sistémico, ni inducir tolerancia frente a los efectos de un compuesto liberador de NO y/o la biotransformación de un compuesto liberador de NO en su forma liberadora.

Definiciones

GTN	trinitrato de glicerilo
ISMN	5-mononitrato de isosórbico
ISDN	dinitrato de isosórbico
PETN	tetranitrato de pentaeritritol
ETN	tetranitrato de eritritilo
SNP	nitroprúsido sódico
SIN-1	3-morfolinosidnonimina molsidomina
SNAP	S-nitroso-N-acetilpenicilamina
SNOG	S-nitrosoglutatión
NOHA	N-hidroxi-L-arginina
AMPc	adenosín monofosfato cíclico
GMPc	guanosín monofosfato cíclico
L-NAME	metil éster de N^{\omega} nitro-L-arginina
IP_{3}	inositol-1,4,5-trifosfato
RIHP	presión hidrostática intersticial renal
T	tumescencia
R	rigidez

La expresión "aplicando diversas formas de NO" tal como se utiliza en la presente memoria incluye la administración de donadores de NO o agentes productores de NO.

La expresión "disfunción sexual" (DS) tal como se utiliza en la presente memoria incluye aspectos de disfunción femenina y de envejecimiento urogenital, tales como lubricación genital disminuida, ingurgitación vaginal reducida, dolor durante el coito, tal como, por ejemplo, dispareunia, infecciones urogenitales; y el aparato urogenital postmenopáusico, diabetes, enfermedad vascular, condiciones de agotamiento del estrógeno, disfunción sexual y sequedad vaginal idiosincrática, respectivamente.

La expresión "diversas formas de NO" tal como se utiliza en la presente memoria se entiende que se refiere a cualquiera de entre NO\cdot, NO'' y NO^{-}, preferentemente NO^{+} y NO:

La expresión "sin afectar inapropiadamente el tono vascular sistémico" tal como se utiliza en la presente memoria se refiere a que no afecta a la presión arterial media de manera que se produzca una vasodilatación sistémica inapropiada con efectos tales como hipotensión, cefalea y eritema.

Breve descripción de los dibujos

A continuación se describen formas de realización de la invención, a título de ejemplo, haciendo referencia a los dibujos adjuntos, en los que:

la figura 1 es una representación gráfica de los resultados de mediciones de la presión sanguínea arterial media en ratas, e ilustra el diferente impacto sobre la presión arterial media (en mmHg) de infusiones de nitroprúsido sódico en ratas de control y tratadas con L-NAME.

La figura 2 es un registro representativo de la presión arterial media medida en una rata, que demuestra el diferente efecto de infusiones de nivel reducido de nitroprúsido sódico en ratas de control y tratadas agudamente con L-NAME.

La figura 3 es una representación gráfica de mediciones de la presión sanguínea arterial media que ilustra una curva de dosis-respuesta incrementada del trinitrato de glicerilo en ratas de control y tratadas agudamente con L-NAME.

La figura 4 es un diagrama esquemático que ilustra un intervalo representativo de una "ventana" de NO de control vascular "normal" comparando ratas de control y tratadas con L-NAME.

La figura 5 es un registro representativo de los cambios de presión arterial media y de presión hidrostática intersticial renal (RIHP) con referencia al bloqueo circulatorio renal de la NO sintasa.

La figura 6 es un registro representativo de los cambios de presión arterial media y de presión hidrostática intersticial renal (RIHP) con referencia a la capacidad de la L-arginina de inducir reducciones de la RIHP en relación a la circulación renal.

La figura 7 es un dibujo representativo de los cambios de presión arterial media y de la presión hidrostática intersticial renal (RIHP) con referencia a niveles decrecientes de RIHP tras la retirada de la L-arginina de la circulación renal.

La figura 8 es un gráfico que compara la sensibilidad de la presión arterial media frente al donador de NO, nitroprúsido sódico (SNP, a la derecha), y frente a la isopropilnorepinefrina (INE, izquierda) en presencia y en ausencia del bloqueante de la NO sintasa llamado L-NAME.

La figura 9 es una curva acumulativa de dosis-respuesta de presión arterial media para la prazosina, un \alpha_{1}-bloqueante, en presencia y en ausencia de bloqueo de la NO sintasa (L-NAME).

La figura 10 es un gráfico que ilustra los cambios de presión arterial media respecto a las condiciones de control en presencia de dosis baja de SNP, de SNP + L-NAME y de únicamente L-NAME.

La figura 11 es un gráfico que ilustra una relación de dosis-respuesta de presión arterial media para diferentes dosis del donador de óxido nítrico SNP (panel superior) y GTN (panel inferior), antes y después del bloqueo de la óxido nítrico sintasa (L-NAME) y del antagonismo de los receptores de la endotelina (PD145065).

Descripción detallada de la invención

Se ha descrito el papel fisiológico del NO como el de un agente vasodilatador crónico que actúa "compensando" persistentemente las acciones de una serie de sistemas de vasoconstricción. Sin embargo, tal como comentan Banting et al. (J. Hypertens. 14:975, 1996), basándose en este argumento, ello revelaría que el sistema vasodilatador del NO normalmente presentaría un nivel de actividad global a cerca del 70% de la capacidad máxima del sistema del NO, dejando al sistema poca reserva o ganancia para que protegiese al organismo frente a desviaciones adicionales de la presión arterial media y de la homeostasis del flujo sanguíneo.

Banting et al. (J. Hypertens. 14:975, 1996) propusieron que el papel crónico del NO, in vivo, no es de un sistema vasodilatador crónico sino más bien de inhibidor de la actividad de los agentes vasoconstrictores locales, tales como ET. Es decir, se revertió completamente la hipertensión resultante del bloqueo de la producción de NO al administrar un antagonista del receptor de la ET. Este resultado, en combinación con la comprensión de que la ET aparentemente desempeña un papel mínimo en el control fisiológico "normal" de la presión arterial media de reposo, indica que la función del NO podría ser diferente de la propuesta con anterioridad. Los resultados del estudio cuantitativo, tal como se detallan a continuación, indican, en resumen, que:

(i)

la cantidad de NO requerida para restaurar por completo la presión arterial media en ratas tratadas con L-NAME desde niveles hipertensivos es mucho menor que la requerida para bajar la presión arterial media bajo condiciones de control;

(ii)

el incremento de sensibilidad al NO y a los donadores de NO permite que tan sólo 1/20 de la concentración estándar proporcione una respuesta vasodilatadora dada en ratas con bloqueo de la NO sintasa;

(iii)

el nivel de NO requerido para revertir por completo la hipertensión en la etapa crónica de la hipertensión inducida por L-NAME en ratas de control es del mismo nivel que la requerida para revertir la hipertensión tras el bloqueo agudo de la NO sintasa; y

(iv)

la reducción similar de presión arterial media en ratas tratadas y de control que se produjo al administrar concentraciones "elevadas" de nitroprúsido sódico sugiere que los procesos de señalización se han "normalizado" a un nivel de aproximadamente 10 a 12 \mug/kg por minuto de infusión de nitroprúsido sódico.

Banting et al. (J. Hypertens. 14:975, 1996) han sugerido que un papel importante del NO no es el de vasodilatador crónico, sino más bien de regulador inhibitorio crónico de la vasoconstricción mediada por ET. En este estudio se demostró que la vasoconstricción mediada por ET no contribuye al mantenimiento del tono vascular en una circulación con un sistema generador de NO intacto. Además, se demostró que prácticamente la totalidad de la hipertensión inducida por L-NAME se prevenía y/o se revertía mediante la administración de un antagonista del receptor de ET. Los resultados detallados posteriormente bajo el título "Estudio cuantitativo" cuantifican el nivel exógeno de NO requerido para restaurar este equilibrio de regulación y, considerando los datos conjuntamente, los presentes inventores proponen que el NO funciona suprimiendo la vasoconstricción mediada por ET dentro de una "ventana" fisiológica, tal como se ilustra en la figura 4, de una manera no relacionada con su papel directo como sustancia vasodilatadora. En efecto, se propone que el mecanismo de acción de los donadores de NO administrados a las microdosis que se dan a conocer en la presente memoria no son vasodilatadoras, sino que más bien actúan suprimiendo el papel endógeno de la
endotelina.

Estas conclusiones y su aplicabilidad a otras microcirculaciones se ven apoyadas por estudios realizados en el riñón en relación a mediciones de presión hidrostática intersticial renal y de presión arterial media, tal como se informa posteriormente en la sección titulada "Efecto del NO sobre la vasculatura renal".

Los estudios llevados a cabo en varones humanos con un "parche" de dosis reducida con liberación durante un máximo de 3 horas de NO efectivo, demuestran que la provisión de una "microdosis" de NO restaura la función eréctil normal. Los resultados de estos estudios se detallan posteriormente bajo el título "Datos clínicos: reversión de la disfunción eréctil con microdosis de NO".

De acuerdo con lo anteriormente expuesto, la presente invención proporciona medios para restaurar el tono vascular medio normal en condiciones asociadas con la disfunción sexual femenina mediante la utilización de un agente o agentes que directa o indirectamente generen NO a dosis de entre aproximadamente 1/2 y aproximadamente 1/20 de las utilizadas en la actualidad en las aplicaciones clínicas.

Con respecto a las condiciones detalladas posteriormente, la evidencia en la literatura demuestra que la producción de NO se ve, por lo menos parcialmente, inhibida. Ello conduce a un desequilibrio entre NO y ET en favor de ET. El procedimiento de la presente invención restaura este equilibrio con "cantidades" de NO que no inducen la vasodilatación, o no la inducen apreciablemente, en las circulaciones "sanas" o no deficientes en NO. Entre las condiciones en las que la presente invención resulta aplicable se incluyen las condiciones asociadas con la disfunción sexual femenina que implica la circulación vaginal y/o pélvica.

Por lo tanto, la utilización de la presente invención resulta aplicable en las condiciones de disfunción femenina y de envejecimiento urogenital, tales como lubricación vaginal, ingurgitación vaginal, dolor durante el coito (dispareunia), infecciones urogenitales; y aparato urogenital postmenopáusico, diabetes, enfermedad vascular, condiciones de agotamiento del estrógeno, disfunción sexual, y sequedad vaginal idiosincrática, respectivamente. En estas situaciones, la terapia de la presente invención funciona mejorando el flujo sanguíneo hacia la vagina, conduciendo a la ingurgitación vaginal, estimulando una mejor circulación (lubricación).

Debe entenderse asimismo que entre los usos de la invención se incluyen la administración de lo anteriormente especificado, sea agudamente o crónicamente. La administración aguda es la administración de una duración finita y puede ser, por ejemplo, tan corta como un periodo prescrito de tiempo (por ejemplo de hasta varias horas) en casos discretos cuando se desee el efecto de la administración. La administración aguda también puede ser de duración finita más larga. La administración crónica es la administración de una duración continua e indefinida, y puede ser, por ejemplo, la administración asociada con una condición crónica, tal como la que implica la vasoconstricción inapropiada de la vasculatura renal, en la que la administración crónica resulta necesaria para restaurar la función renal
normal.

La utilización de la presente invención resulta aplicable a la preparación de un medicamento para el tratamiento de la disfunción sexual femenina asociada a condiciones vasculares en las que no se produce ninguna reducción o inhibición apreciable del NO endógeno. Estas condiciones vasculares se producen, por ejemplo, cuando las células endoteliales experimentan fuerzas de fricción elevadas por el movimiento rápido de los glóbulos rojos al pasar tocando o en estrecha proximidad a las células endoteliales, resultando en un nivel incrementado de ET. Los usos de la invención restauran el equilibrio NO/ET. Los niveles elevados de fuerzas de fricción se asocian con, por ejemplo, terapias farmacológicas y la aterosclerosis.

Estudio cuantitativo

El estudio que se detalla en la presente memoria caracteriza de manera cuantitativa el nivel de NO exógeno requerido para restaurar la función vascular "normal" tras el bloqueo agudo o crónico de la NO sintasa. Con referencia a las figuras, y en particular a la figura 1, la relación de concentración-respuesta con niveles crecientes de nitroprúsido sódico (SNP) se encuentra marcadamente desplazada para ratas bajo tratamiento tanto agudo como crónico de bloqueo de la NO sintasa. Las curvas de concentración-respuesta de presión arterial media se dividieron en dos grupos, las concentraciones que no indujeron y las que sí indujeron una reducción de la presión arterial media en los controles. Se demostró una sensibilidad incrementada similar frente a niveles bajos de SNP en las ratas tratadas con L-NAME en las etapas tanto aguda como crónica del tratamiento de bloqueo de la NO sintasa. Este nivel de administración de SNP (0,5 a 8 \mug/kg por minuto) no redujo significativamente la presión arterial media en las ratas de control pero sí resultó en una reducción marcada de la presión arterial media.

A continuación, haciendo referencia a la figura 2, puede observarse un ejemplo ilustrativo de dicho resultado: la respuesta depresora a 2 \mug/kg por minuto en la etapa de bloqueo de la NO sintasa se superpuso a la respuesta de 2 \mug/kg por minuto en el periodo de control. La reducción de presión arterial media inducida por 12 a 32 \mug/kg por minuto indujo una reducción similar en ratas de control y en ratas tratadas (ver la figura 1, panel inferior), indicando una convergencia con respecto a la respuesta depresora de SNP.

A continuación, haciendo referencia a la figura 3, puede observarse que la respuesta de concentración acumulada de trinitrato de glicerilo-presión arterial media demostró resultados similares al SNP. La curva de respuesta de concentración acumulada-presión arterial media también se encontraba desplazada hacia la izquierda en las ratas tratadas mediante bloqueo de la NO sintasa. Nuevamente, la tendencia similar de concentraciones que no reducen la presión arterial media en los controles, prácticamente revertió por completo la hipertensión inducida por el bloqueo de la NO sintasa.

Algunos estudios adicionales evaluaron el impacto de diferentes sistemas vasoactivos sobre la relación entre óxido nítrico y endotelina y, más específicamente, los efectos de dosis bajas de óxido nítrico y la supresión de niveles locales de endotelina (ET), que provocan la vasodilatación y una normalización del tono vascular en regiones focales de la circulación que son, por lo menos en parte, deficientes en NO. En estos estudios, se administró L-NAME con el fin de incrementar la presión sanguínea, y se utilizaron dos otros agentes vasodilatadores: isopropilnorepinefrina (INE, un agonista B_{1}/B_{2}, ver la figura 8) y el \alpha_{1}-bloqueante prazosina (ver la figura 9). La INE inactiva un sistema de transduc-
ción de señales mediado por AMPc, y la prazosina reduce la actividad de un sistema de transducción mediado por IP_{3}.

Las figuras 8 y 9 proporcionan información más detallada sobre el mecanismo subyacente a la sensibilidad incrementada de la presión arterial media frente al NO tras el bloqueo de la NO sintasa. Tal como puede observarse en las figuras 8 y 9, ninguno de estos dos agentes vasodilatadores pudo normalizar la excesiva vasoconstricción que sigue al bloqueo del NO.

Específicamente, las dos curvas en la parte izquierda de la figura 8 demuestran claramente que la respuesta de dosis de la presión arterial media frente a INE era idéntica tanto antes como después del bloqueo de la óxido nítrico sintasa, indicando que la señal mediada por otro vasodilatador, INE, no se ve modificada en presencia o en ausencia de óxido nítrico. Es ampliamente conocido que el mecanismo de acción de INE es a través de la activación de la transducción de señales mediada por AMPc. En contraste, las curvas de la parte derecha de la figura 8 indican que se produce un incremento de la sensibilidad de la presión arterial media al donador de NO llamado SNP tras el bloqueo de la NO sintasa.

Desde un punto de vista mecanístico, la INE provoca la vasodilatación mediante la activación del sistema de transducción de señales mediado por AMPc en la vasculatura, mientras que el SNP provoca la vasodilatación mediante la activación del sistema de transducción de señales mediado por GMPc o mediante los efectos directos del NO (o de un equivalente). La ausencia de un desplazamiento de la sensibilidad de la presión arterial media frente a INE tras el bloqueo del NO indica que la sensibilidad incrementada a los donadores de NO, tales como SNP, es independiente del sistema de transducción de señales mediado por AMPc, y que podría ser directamente dependiente del sistema de transducción de señales mediado por GMPc.

La figura 9 ilustra que la sensibilidad incrementada a los donadores de óxido nítrico se produce tras el bloqueo del NO, pero que no se produce tras el tratamiento con un antagonista del receptor \alpha_{1} (prazosina). Debido a que la prazosina es un segundo agente vasodilatador, similar a INE, estos agentes representan de esta manera dos ejemplos de diferentes mecanismos de vasodilatación que no influyen sobre la relación entre el óxido nítrico y la endotelina, relación que se encuentra de acuerdo con los procedimientos de la presente invención.

Por lo tanto, con el fin de resumir los datos presentados en las figuras 8 y 9, estos datos presentan ejemplos que demuestran la relación entre el óxido nítrico y la endotelina y los efectos de una terapia de dosis baja de NO sobre la normalización de la circulación afectada con respecto a la endotelina y sobre el mantenimiento y/o restauración del tono vascular. Estos datos también demuestran que el desequilibrio en el tono vascular que sigue al bloqueo de la NO sintasa no se debe a la angiotensina II (datos no mostrados), al sistema nervioso simpático, o a la vasopresina (por ejemplo a través del sistema IP_{3}), sino que es específico del sistema de transducción de señales mediado por GMPc o de los efectos directos del óxido nítrico o de su equivalente. Los datos indican además que la adición de un antagonista del receptor \alpha_{1}, en contraste con un antagonista del receptor de la endotelina, no restaura un nivel normal de sensibilidad vascular. Ello está de acuerdo con la invención en que los niveles reducidos de NO (a través de L-NAME) resultan en una marcada regulación positiva de la endotelina, del tipo que podría explicarse mediante un desacoplamiento de la señalización mediada por GMPc.

La figura 10 es similar en principio a la figura 2 y proporciona una cuantificación adicional del nivel de "microdosis" de NO exógeno que mantiene un nivel normal de tono vascular tras el bloqueo de la óxido nítrico sintasa con L-NAME. El gráfico de la figura 10 ilustra que la administración de un nivel de SNP que reduzca la presión sanguínea en 8 mmHg previene completamente el desarrollo de hipertensión tras incluso un bloqueo máximo de la NO sintasa (que habitualmente es de 40 mmHg). De esta manera, de acuerdo con la invención puede observarse que una microdosis de SNP provoca únicamente un nivel mínimo de vasodilatación, pero previene completamente la vasoconstricción excesiva que se produce tras el bloqueo de alto nivel de la NO sintasa utilizando L-NAME.

Existe evidencia adicional que apoya que el óxido nítrico suprime crónicamente los efectos de la endotelina. Tal como se muestra en la figura 11, incluso niveles normales de NO inducen cambios en la vasculatura contrarrestando las acciones de la endotelina. En la figura 11 (panel superior) puede observarse un incremento de sensibilidad de la presión arterial media frente a SNP tras el bloqueo de la NO sintasa, y una reducción de la sensibilidad frente a SNP en presencia de PD145065, un antagonista del receptor de la endotelina. El desplazamiento hacia la derecha de la curva para PD145065 (bajo condiciones de control) indica claramente que la respuesta a NO por sí sola ha sido severamente reducida. El panel inferior de la figura 11 de manera similar indica que la sensibilidad incrementada frente al donador de NO llamado GTN en respuesta al tratamiento con L-NAME se ve anulado en presencia de PD145065. Estos resultados indican que los receptores de la endotelina resultan necesarios para mantener el nivel normal de capacidad vasodilatadora del óxido nítrico bajo condiciones de control.

Como resultará evidente para un experto ordinario en la materia, resulta razonable utilizar la rata como modelo para los sistemas vasculares afectados comentados en la presente memoria, tal como, por ejemplo, la vasculatura pudendal y del pene, y para extender estos estudios a dosis y terapias apropiadas para otros sujetos, tales como seres humanos. Como pone de manifiesto Mordenti en "Man versus Beast: Pharmacokinetic Scaling in Mammals", J. Pharm. Sci. 75:1028-1040, (1986), y artículos similares, las formas de dosificación para animales, tales como por ejemplo las ratas, pueden y son ampliamente utilizadas directamente para establecer los niveles de dosificación en las aplicaciones humanas. Uno de los presentes inventores contribuyó al desarrollo de un bioensayo de función eréctil en un modelo de rata ya en 1991 o incluso antes (Heaton et al., J. Urol. 145:1099-1102, 1991) y también ayudó a demostrar en ensayos comparativos de función eréctil en seres humanos y en ratas, que la estrecha ventana de dosis efectiva de un fármaco administrado oralmente, la apomorfina, es casi igual cuando se ajusta adecuadamente para las diferencias de peso corporal, tal como da a conocer Mordenti, citado anteriormente (Heaton et al., Urology 45:200-206, 1995).

Efecto del NO sobre la vasculatura renal

En esencia, el riñón funciona como un filtro inverso en el que prácticamente todo el contenido de la sangre se filtra formando "orina" inicial del riñón y éste específicamente reabsorbe lo que desea retener después (en las nefronas y en el asa de Henle). Una fuerza física, denominada presión hidrostática intersticial renal (RIHP) en los tejidos del riñón puede presentar un efecto profundo sobre este proceso. La RIHP incrementada ejerce una fuerza física que se opone al proceso de reabsorción, afectando a la reabsorción del sodio, del agua y de otras partes de la orina filtrada inicial. Si no se reabsorbe, el resultado es una respuesta diurética (natriuresis). En los casos de bajo RIHP, se produce lo contrario. La eliminación de la fuerza física que se opone a la reabsorción resulta en la acumulación de volumen (mayor volumen sanguíneo = presión sanguínea más alta). Esta natriuresis mediada por la presión se explica por el hecho de que algunos de los vasos sanguíneos en el riñón no se encuentran "autorregulados" (de manera muy similar a la vasculatura del pene), de manera que la presión generada en el tejido renal (RIHP) viene regida por el nivel de vasoconstricción/perfusión renal. La vasoconstricción excesiva resulta en una reducción de la RIHP, eliminando de esta manera un mecanismo fuerte por el que el riñón evita la reabsorción del contenido de la orina filtrada.

Resulta posible simular un tipo de insuficiencia renal, en la que predomina una vasoconstricción excesiva. En estas circunstancias, se crea una situación de conservación del volumen. Esta simulación se lleva a cabo mediante el tratamiento de ratas anestesiadas a las que se incorpora instrumentación para medir la RIHP y la presión arterial sanguínea media con bloqueantes de la NO sintasa (L-NAME). Los resultados de estos experimentos se ilustran en las figuras 5, 6 y 7, que ilustran los registros de presión "crudos" de un ejemplo de estas preparaciones (se proporcionan los procedimientos posteriormente, ver ASPECTOS EXPERIMENTALES DE LOS ESTUDIOS INFORMADOS: Efectos del NO sobre la vasculatura renal). Los registros ilustran que la administración del bloqueante de la NO sintasa llamado L-NAME resulta en una rápida reducción de la RIHP (figura 5) consecuencia de la vasoconstricción de la vasculatura. La administración del precursor de NO, L-arginina (150 a 200 mg/kg por minuto), revertió la vasoconstricción renal (medida como cambios de RIPH, ver la figura 6) pero no alteró el nivel de presión arterial media. Al detener la administración de L-arginina (con la administración continua de L-NAME), nuevamente se redujo rápidamente la RIHP, tal como se ilustra en la figura 7.

Se ha informado en la literatura que la concentración de trinitrato de glicerilo (la forma típica de donador de NO derivada de nitropulverizaciones o de nitroparches) para dichas vías de administración es del orden de 200 a 400 pg/ml de plasma (Sun et al., J. Clin. Pharmacol. 35:390, 1995). Basándose en los estudios de casos clínicos realizados, se advirtió que los efectos beneficiosos de un parche de 0,2 mg/h se observaban tras 20 a 30 minutos. Ello corresponde a una concentración en plasma de 100 pg/ml. Con respecto a la aplicación de la invención a la terapia de la DE, un intervalo preferente de agente NO (tal como GTN) es una concentración en plasma de estado estable) de entre aproximadamente 50 pg/ml y aproximadamente 200 pg/ml. Este intervalo corresponde a la "ventana" a la que se ha hecho referencia anteriormente, tal como se ilustra en la figura 4.

Pueden conseguirse datos que apoyen la proposición de que el mecanismo de acción de los donadores de NO administrados en microdosis que se dan a conocer en la presente memoria no son directamente vasodilatadores, mediante la administración de dosis elevadas de bloqueante de NOS a animales con el fin de provocar una hipertensión. A ello sigue la infusión de un antagonista de la endotelina a una concentración que revierte prácticamente por completo la hipertensión inducida por el bloqueante de NOS. Después, se infusiona con un donador de NO o con una combinación de donadores de NO. La curva de respuesta de la concentración de esta infusión debería ser similar a la obtenida en los animales de control. En otras palabras, las dosis de NO que provocan una reducción de la presión son más elevadas, es decir, de 10 a 24 veces más elevadas, que en un animal bloqueado únicamente con L-NAME, demostrando de esta manera que las dosis elevadas de NO son vasodilatadoras y que las más reducidas, por sí solas, no son vasodilatadoras. Antes bien, actúan suprimiendo la ET.

Aunque las vías de administración de los donadores de NO informadas en la presente memoria incluyen la pulverización nasal o el parche, la presente invención incluye la administración por medio de cremas tópicas, sustancias portadoras orgánicas e inorgánicas farmacéuticamente aceptables que resultan adecuadas para la administración parenteral, entérica, intrauretral, la aplicación vaginal, o la aplicación transmucosal a través de, por ejemplo, el tracto respiratorio (por ejemplo por inhalación, tal como a través de la aplicación intranasal), que no reaccionan perjudicialmente con los compuestos activos.

Las composiciones de la invención se administran a sujetos en una forma biológicamente compatible adecuada para la administración farmacéutica in vivo. La expresión "forma biológicamente compatible adecuada para la administración in vivo" se refiere a una forma de los compuestos activos de la invención a administrar en las que cualquier efecto tóxico se ve compensado por los efectos terapéuticos de los compuestos activos de la invención. El término "sujeto" pretende incluir los organismos vivos en los que puede provocarse una respuesta, por ejemplo los mamíferos. Entre los ejemplos de sujetos se incluyen el ser humano, perros, gatos, ratones, ratas y especies transgénicas de los mismos.

La administración de una cantidad terapéuticamente activa de las composiciones terapéuticas de la presente invención se define como una cantidad efectiva, a dosis y durante periodos de tiempo necesarios para alcanzar el resultado deseado. Por ejemplo, una cantidad terapéuticamente activa de los compuestos activos de la invención puede variar de acuerdo con factores tales como el estado de enfermedad, edad, sexo y peso del individuo y con la capacidad de un agente o combinación de agentes de la invención para provocar una respuesta deseada en el individuo. Pueden ajustarse los regímenes de dosificación para proporcionar la respuesta terapéutica óptima. Por ejemplo, pueden administrarse varias dosis divididas o la dosis puede reducirse proporcionalmente según exija la situación terapéutica.

Los compuestos activos (por ejemplo SNP) pueden administrarse de una manera convencional, tal como mediante inyección (subcutánea, intravenosa, intracavernosa, etc.), administración oral, inhalación, aplicación transdérmica, administración rectal, administración uretral, administración vaginal o introducción intracavernosa. Dependiendo de la vía de administración, el compuesto o compuestos activos puede recubrirse de un material para proteger el compuesto o compuestos de la acción de enzimas, de ácidos y de otras condiciones naturales que podrían inactivar el compuesto o compuestos, o facilitar o permitir la administración de dicho compuesto o compuestos.

Puede administrarse una composición de SNP (u otro donador de NO) o como agente separado, a un sujeto en un portador o diluyente apropiado, coadministrarse con inhibidores enzimáticos o en un portador apropiado, tal como liposomas. La expresión "portador farmacéuticamente aceptable", tal como se utiliza en la presente memoria, pretende incluir diluyentes, tales como solución salina y soluciones tamponadoras acuosas y vehículos en fase sólida, líquida o gaseosa. Con el fin de administrar un agente o agentes de la presente invención mediante una vía de administración diferente a la parenteral, puede resultar necesario recubrir el compuesto o compuestos activos de la invención, o coadministrar el compuesto o compuestos activos de la invención, con un material que prevenga su inactivación. Entre los liposomas se incluyen las emulsiones de agua-en-aceite-en-agua, así como los liposomas convencionales (Strejan et al., J. Neuroimmunol. 7:27, 1984). El compuesto o compuestos activos también pueden administrarse parenteral o interaperitonealmente. Las dispersiones también pueden prepararse en glicerol, en polietilenglicoles líquidos, y en mezclas de los mismos en aceites y en otras soluciones. Bajo condiciones ordinarias de almacenamiento y de utilización, estas preparaciones pueden contener un conservante para evitar el crecimiento de microorganismos, estabilizantes y compuestos para conservar las características físicas que resultan necesarias para la administración apropiada.

Entre las composiciones farmacéuticas adecuadas para la utilización inyectable se incluyen las soluciones y dispersiones acuosas estériles (cuando sean solubles en agua) y los polvos estériles para la preparación extemporánea de soluciones o dispersiones inyectables estériles. En todos los casos, la composición debe ser estéril y debe ser fluida en el grado en que resulte fácil la administración con jeringa. Debe ser estable bajo las condiciones de preparación y almacenamiento, y debe conservarse frente a la acción contaminante de microorganismos, tales como las bacterias y los hongos. El portador farmacéuticamente aceptable puede ser un disolvente o medio de dispersión que contenga, por ejemplo, agua, etanol, poliol (por ejemplo glicerol, propilenglicol, y polietilenglicol líquido, y similares), y mezclas adecuadas de los mismos. La fluidez apropiada puede mantenerse, por ejemplo, mediante la utilización de un recubrimiento, tal como lecitina, mediante el mantenimiento del tamaño de partícula requerido en el caso de la dispersión y mediante la utilización de surfactantes. La prevención de la acción de los microorganismos puede conseguirse con diversos agentes antibacterianos y antifúngicos, por ejemplo parabenes, clorobutanol, fenol, ácido ascórbico, timerosal y similares. En muchos casos, resultará preferible incluir agentes isotónicos, por ejemplo azúcares, polialcoholes, tales como manitol y sorbitol, o cloruro sódico, en la composición. La absorción prolongada de las composiciones inyectables puede conseguirse mediante la inclusión en la composición de un agente que retarde la absorción, por ejemplo el monoestearato de aluminio y la gelatina.

Pueden prepararse soluciones inyectables estériles mediante la incorporación de compuesto o compuestos activos (por ejemplo SNP) en la cantidad requerida en un disolvente apropiado con un ingrediente o una combinación de ingredientes indicados anteriormente, según se requiera, seguido de la esterilización por filtración. Generalmente, se preparan dispersiones mediante la incorporación del compuesto activo en un vehículo estéril que contenga un medio de dispersión básico y los ingredientes requeridos restantes de entre aquellos indicados anteriormente. En el caso de los polvos estériles para la preparación de soluciones inyectables estériles, los procedimientos preferentes de preparación son el secado al vacío y el secado por congelación, que proporciona polvos de un ingrediente activo de la invención más cualquier ingrediente deseado adicional procedente de una solución previamente esterilizada por filtración del mismo.

Cuando se protege adecuadamente un compuesto o compuestos activos, tal como se ha descrito anteriormente, la composición puede administrarse oralmente, por ejemplo con un diluyente inerte o con un portador comestible asimilable. Tal como se utiliza en la presente memoria, la expresión "portador farmacéuticamente aceptable" incluye cualquiera y todos los disolventes, medios de dispersión, recubrimientos, agentes antibacterianos y antifúngicos, agentes isotónicos y retardantes de la absorción, y similares. La utilización de estos medios y agentes para sustancias farmacéuticamente activas es bien conocida de la técnica. Excepto en el grado de que cualquier medio o agente convencional sea incompatible con el compuesto activo, se contempla la utilización del mismo en las composiciones terapéuticas. También pueden incorporarse compuestos activos suplementarios en las composiciones.

Resulta especialmente ventajoso formular las composiciones parenterales en forma de dosis unitaria por su facilidad de administración y uniformidad de dosificación. La forma de dosis unitaria tal como se utiliza en la presente memoria se refiere a unidades físicamente discretas que resultan adecuadas como dosis unitarias para sujetos mamíferos a tratar; conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada de compuesto activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado en asociación con el portador farmacéutico requerido. La especificación para las formas de dosis unitaria de la invención se ven dictadas y son directamente dependientes de: (a) las características únicas del compuesto activo y del efecto terapéutico particular a conseguir, y (b) las limitaciones inherentes en la técnica de formación de compuestos de dicho compuesto activo para el tratamiento terapéutico de individuos.

Aspectos experimentales de los estudios informados Estudio cuantitativo Animales

Se albergaron individualmente ratas Sprague-Dawley macho (de 325 a 400 g) obtenidas de Charles River Laboratories (Montreal, Canadá) bajo condiciones de ciclo luz/oscuridad de 12 horas, con una temperatura ambiental de entre 22ºC y 24ºC, y se les alimentó con Purina rodent chow y agua corriente ad libitum durante por lo menos 2 días antes de iniciar los experimentos.

Medición de la MAP y administración de fármaco de acción corta

El procedimiento quirúrgico se basó en la técnica de Thompson et al. (Hypertens. 20:809, 1992). En resumen, las ratas se anestesiaron con cetamina/xilazina (70/5 mg/kg i.p.) y se cateterizó la aorta distal descendente hasta los riñones con tubos de teflón de diámetro reducido (0,012 pulgadas de d.i., calibre 30, Cole-Parmer, Laval, Quebec, Canadá) insertados en tubos de vinilo (0,02 pulgadas de d.i., 0,060 pulgadas, calibre 23). También se cateterizó la vena cava inferior en posición distal respecto a los riñones con tubos de teflón de diámetro reducido (0,012 pulgadas de d.i., calibre 30, Cole-Parmer). Los catéteres se llenaron con solución salina heparinizada (10 IU/ml) y se fijaron mediante una pequeña cantidad de pegamento de cianoacrilato en el sitio de punción. Los catéteres se tunelaron subcutáneamente, saliendo en la nuca y se fijaron mediante sutura. Dos días después de la cirugía, se pudo iniciar el registro de la MAP (MacLab DAS, ADInstruments, Milford, MA). Tras la conexión, se dejó un periodo de equilibración de aproximadamente 30 minutos para la determinación del nivel de estado estable de la MAP antes de iniciar ningún registro. Se determinó la MAP de línea base a partir de la media de las lecturas registradas a lo largo de 5 minutos, obtenidas de cada rata a intervalos de 15 minutos durante por lo menos 1 hora previamente al inicio de cualquier experimento.

Curvas de respuesta de concentración de nitroprúsido sódico y de trinitrato de glicerol-presión arterial media tras la administración aguda y crónica de N^{\omega}-nitro-L-arginina metil éster

Se asignaron aleatoriamente las ratas a tratamiento con N^{\omega}-nitro-L-arginina metil éster (L-NAME) durante 30 minutos (100 mg/kg, interaperitonealmente) o durante 12 días (100 mg/kg, en agua de bebida) o a agua corriente. Dos días antes del día del experimento, se incorporaron los catéteres a las ratas, tal como se ha descrito anteriormente. Tras las mediciones de línea base de la MAP, las ratas recibieron una infusión de nitroprúsido sódico (SNP, 0,5 a 32 \mug/kg por minuto disuelto en solución salina estéril al 0,9%) con un incremento escalonado de concentración cada dos minutos. Se permitió que las ratas se recuperasen de la administración de SNP durante 30 minutos. A continuación, las ratas recibieron infusiones de trinitrato de glicerilo (GTN, 0,5 a 32 \mug/kg por minuto disuelto en solución salina estéril al 0,9%) con un incremento escalonado de concentración cada dos minutos.

Durante todas dichas manipulaciones farmacológicas, se registró la MAP y la HR a una frecuencia de muestreo de 100 Hz y los datos se almacenaron en una unidad de disco para su análisis posterior.

Efectos del NO sobre la vasculatura renal

Preparación para la cirugía: se llevaron a cabo experimentos con ratas Sprague-Dawley macho, de 250 a 330 g, obtenidas de Charles River Laboratories (Montreal, Canadá). Se les proporcionó alimento (Purina rat chow) y agua ad libitum durante todo el estudio. Las ratas se aclimataron durante por lo menos una semana previamente a la experimentación albergadas en grupo bajo condiciones de ciclo luz/oscuridad de 12 horas, con una temperatura ambiental de entre 22ºC y 24ºC. Se incorporó en las ratas un catéter aórtico 3 a 4 días antes de cada día experimental, tal como se ha descrito en detalle anteriormente (Thompson et al., Hypertens. 20:809, 1992). En resumen, se anestesiaron las ratas con hidrocloruro de cetamina (70 mg/kg i.p., Rogarsetic, Rogar/STB Inc., Montreal, PQ) e hidrocloruro de xilazina (5 mg/kg i.p., Rompum, Haver Inc., Etobickoe, ON) y se colocaron sobre una placa térmica para mantener una temperatura corporal constante de 37ºC. Se administró cetamina adicional, según necesidad, durante la cirugía. Tras realizar una incisión abdominal, se cateterizó la aorta distal descendente hacia los riñones con tubo de teflón de diámetro reducido (i.d. = 0,012 pulgadas, a.d. = 0,030 pulgadas, calibre 30, Cole-Parmer, Laval, Quebec, Canadá), se insertó en tubo de vinilo (d.i. = 0,02 pulgadas, d.o. = 0,060 pulgadas, calibre 23). El catéter se llenó con solución salina heparinizada (50 IU/ml, sal sódica de heparina Grado 1-A, Sigma Chemical Co., St. Louis) y se fijó con una pequeña cantidad de pegamento para tejido de cianoacrilato (Lepage Ltd., Brampton, ON). A continuación, se lavó el catéter con un volumen reducido (0,1 a 0,3 ml) de solución salina heparinizada (50 IU/ml) y se dejó completamente dentro de la cavidad abdominal hasta el día de las mediciones de RIHP. Se suturó la incisión abdominal con hilo trenzado de seda 6-0 (Ethicon Ltd., Peterborough, Ontario). Se dejó que las ratas se recuperasen durante 2 a 5 días, durante los que se albergaron individualmente bajo las mismas condiciones que las indicadas anteriormente. Las ratas se pesaron nuevamente tras el periodo de recuperación y las ratas que habían perdido >30 g se consideró que no se habían recuperado suficientemente de la cirugía y por lo tanto se excluyeron del estudio (Haskins, S.C., Postoperative care, en: Methods of Animal Experimentation, vol. III Parte A, editores Gay et al., Academic Press Inc., Orlando, 1986).

Procedimiento experimental: las mediciones de RIHP se llevaron a cabo en ratas anestesiadas con tiobutabarbital sódico (Inactin, 100 mg/kg i.p., Byk-Gulden, Constance, Alemania). Este anestésico es utilizado por otros con más frecuencia para el estudio de la RIHP y la PN y, en estudios preliminares, proporcionó resultados similares a aquellos estudios, en comparación con una preparación anestésica de cetamina/xilazina.

Las ratas se colocaron sobre una placa térmica con el fin de mantener una temperatura corporal constante de 37ºC y se reabrió la incisión abdominal. Se determinaron los hematócritos mediante el procedimiento del tubo microcapilar a partir de muestras de sangre arterial (300 \mul) obtenidas del catéter arterial. Sólo se utilizaron posteriormente las ratas en las que el hematócrito se observó que se encontraba comprendido entre el 40 y el 45 por ciento. Las ratas con hematócritos fuera de este intervalo se consideraron hemodinámicamente comprometidas debido a la pérdida de sangre durante la cirugía y, debido a que las reducciones de hematócrito pueden comprometer la función cardiovascular, y no se utilizaron en el presente estudio (Haskins, S.C., Postoperative care, en: Methods of Animal Experimentation, vol. II parte A, editores Gay et al. (Academic Press Inc., Orlando, 1986); Pirkle et al., Endocrin. 110:7, 1982; Houttuin et al., Am. J. Physiol. 223:63, 1972).

El catéter arterial, insertado anteriormente, se unió a un transductor de presiones (modelo CDX3, Cobe) y se registró la señal pulsátil utilizando un fisiógrafo (Beckman, modelo R511 o MacLab, ADINstruments Pty Ltd., Castle Hill, Australia). Se aislaron secciones pequeñas de la aorta (<0,5 cm proximalmente respecto al riñón derecho), se aislaron las arterias mesentéricas y celíacas y se realizaron ligaduras con seda laxamente alrededor de los vasos.

Se midió la RIHP mediante la implantación de una cánula en el lateral del córtex renal izquierdo (Garcia-Estañ et al., Am. J. Physiol. 256:F63, 1989). El catéter para RIHP se construyó mediante la inserción de un pequeño núcleo de material matricial de polietileno poroso (2 mm, tamaño de poro: 35 \mum, Bel-Art Products, Pequannoc, NJ) en el extremo expandido por calor de un catéter de polietileno (PE-50; d.i. = 0,023 pulgadas, d.o. = 0,038 pulgadas x 10-20 cm) de manera que aproximadamente un tercio de la matriz se extendiese más allá del tubo. Esta técnica garantiza que el tejido no bloqueará el catéter, permitiendo simultáneamente la medición de la presión hidrostática (Roman et al., Am. J. Physiol. 248:F190, 1985; Ott et al., J. Appl. Physiol. 38:937, 1975). Se realizó un orificio de 3 mm de profundidad en la superficie lateral del riñón izquierdo con una aguja de electrocauterización (calibre 26) y se pasó corriente a través de la aguja durante aproximadamente 3 a 5 segundos. Se detuvo el sangrado por completo mediante la aplicación de una presión suave con una gasa de algodón. El riñón se mantuvo seco previamente a la implantación del catéter para RIHP. El catéter para RIHP se insertó en el orificio y después se selló a la superficie de la cápsula renal con cianoacrilato. De manera similar, se unió el catéter para RIHP al fisiógrafo conectado a través del transductor de presión. La falta de presión pulsátil confirmó que el catéter no se encontraba en un vaso sanguíneo. Con el fin de comprobar adicionalmente la localización del catéter, se llevaron a cabo dos procedimientos: (i) se infusionó lentamente un volumen reducido (100 a 200 \mul) de solución salina (10 IU/ml de heparina) con el fin de obtener un incremento característico de la RIHP (Ott et al., 1975), y (ii) se observó una respuesta de la RIHP frente a la oclusión de la vena renal (RVO) (Garcia-Estañ et al., Am. J. Physiol. 256:F63, 1989). Las ratas que no mostraron estas respuestas características (figura 2-1) fueron excluidas del experimento.

Tras un periodo de equilibración de 10 a 15 minutos, se confirmaron nuevamente la respuesta a la RVO del catéter para RIHP y un registro pulsátil del catéter arterial y se registró un valor de línea base para MAP y para RIHP. Durante los periodos de control del experimento, se mantuvo humedecida la cavidad abdominal expuesta cubriendo con un parche de gasa húmeda y solución salina al 0,9%. En cada experimento, se manipuló sistemáticamente la presión arterial de MAP baja a alta mediante el apriete secuencial de las ligaduras alrededor de la aorta superior, de la arteria celíaca y de la arteria mesentérica. Los cambios de presión se mantuvieron inicialmente durante aproximadamente 5 a 7 minutos con el fin de garantizar que tanto la MAP como la RIHP se equilibraban en el nuevo estado estable. Debido a que se determinó que la RIHP se equilibraba en menos de 3 minutos, se recogieron todos los datos antes de este tiempo. Se comprobó periódicamente la respuesta de RVO-RHIP tras alcanzar diferentes presiones arteriales. Esta secuencia de manipulaciones de la presión arterial se repitió tras un periodo de control de 10 a 15 minutos a una MAP y a una RIHP de línea base. Se verificó la posición del catéter para RIHP al final de cada experimento y típicamente se observó que se encontraba en la unión corticomedular.

Los expertos en la materia advertirán, o podrán determinar mediante experimentación rutinaria, equivalentes de las formas de realización específicas descritas en la presente memoria. Estos equivalentes se considera que se encuentran dentro del alcance de la invención y que se encuentran cubiertos por las reivindicaciones adjuntas.

Claims (14)

1. Utilización de NO o de un donador de NO seleccionado de entre trinitrato de glicerilo (GTN) y nitroprúsido sódico, en la preparación de un medicamento destinado al tratamiento de la disfunción sexual femenina asociada con una condición vascular, en la que el medicamento no altera apreciablemente el tono vascular sistémico normal, proporcionando dicho medicamento una dosis de NO o de donador de NO de entre aproximadamente 1/2 y aproximadamente 1/20 de la requerida para inducir la vasodilatación en un sitio anatómico que carece de dicha condición vascular.

2. Utilización según la reivindicación 1, en la que la disfunción sexual femenina es la disminución de la lubricación vaginal.

3. Utilización según la reivindicación 1, en la que la disfunción sexual femenina es la sequedad vaginal idiosincrática.

4. Utilización según la reivindicación 1, en la que la disfunción sexual femenina es la disminución de la ingurgitación vaginal.

5. Utilización según la reivindicación 1, en la que la disfunción sexual femenina es el dolor durante el coito.

6. Utilización según la reivindicación 1, en la que la disfunción sexual femenina se encuentra asociada con la menopausia, diabetes, enfermedad vascular o condiciones de agotamiento del estrógeno.

7. Utilización según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, de un donador de NO que es el trinitrato de glicerilo.

8. Utilización según la reivindicación 7, en la que el medicamento produce una concentración en plasma inferior a aproximadamente 250 pg/ml de trinitrato de glicerilo.

9. Utilización según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en la que dicho medicamento se encuentra adaptado para que un donador de NO proporcione entre aproximadamente 1/4 y 1/20 de la concentración requerida para inducir la vasodilatación en un sitio anatómico que carece de dicha condición vascular.

10. Utilización según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en la que dicho medicamento se encuentra adaptado para que un donador de NO proporcione entre aproximadamente 1/8 y 1/16 de la concentración requerida para inducir la vasodilatación en un sitio anatómico que carece de dicha condición vascular.

11. Utilización según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en la que el medicamento se encuentra adaptado para la administración oral, sublingual, bucal, intravenosa, vaginal, rectal, transdérmica, por inhalación, entérica o parenteral.

12. Utilización según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en la que el medicamento se encuentra en la forma de un parche de dosis reducida, de manera que se administra la dosis de NO transdérmicamente con liberación a corto plazo de una cantidad efectiva de dicho donador de NO a lo largo de menos de 6 horas.

13. Utilización según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en la que el medicamento se encuentra en la forma de un parche de dosis reducida, de manera que se administra transdérmicamente una cantidad efectiva del donador de NO a lo largo de aproximadamente 6 a 18 horas.

14. Utilización según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en la que el medicamento se encuentra en la forma de un parche de dosis reducida, de manera que se administra transdérmicamente una cantidad efectiva del donador de NO a lo largo de un periodo superior a aproximadamente 18 horas.