ES2256255T3 - Procedimiento y dispositivo para la determinacion cualitativa y/o cuantitativa de un patron de proteinas y/o peptidos de una muestra de fluido que se toma del cuerpo humano o animal. - Google Patents
Procedimiento y dispositivo para la determinacion cualitativa y/o cuantitativa de un patron de proteinas y/o peptidos de una muestra de fluido que se toma del cuerpo humano o animal.Info
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Abstract
Procedimiento para la determinación cualitativa y/o cuantitativa de un patrón de proteínas y/o péptidos de una muestra de fluido (10) que se toma del cuerpo humano o animal para el control de su estado, en el que los péptidos y proteínas de la muestra de fluido (10) se separan mediante electroforesis capilar, a continuación se ionizan directamente y se transfieren en línea a través de una interfaz (18) a un espectrómetro de masas (20) acoplado a la misma para detección, caracterizado porque para el control del estado de un cuerpo humano o animal durante un intervalo de tiempo largo, se almacenan automáticamente en un banco de datos los valores de referencia y de muestra que describen los estados, así como las divergencias y coincidencias derivadas de los mismos, y en una nueva determinación del patrón de proteínas y/o péptidos se buscan automáticamente las mejores coincidencias posibles.
Description
Procedimiento y dispositivo para la
determinación cualitativa y/o cuantitativa de un patrón de proteínas
y/o péptidos de una muestra de fluido que se toma del cuerpo humano
o animal.
La invención se refiere a un procedimiento según
el preámbulo de la reivindicación 1 y a un dispositivo según el
preámbulo de la reivindicación 8.
Las funciones del organismo humano y animal
experimentan un control muy complejo y exacto. Este se realiza entre
otros mediante proteínas y péptidos a través del suero.
A este respecto, desempeñan un papel decisivo las
citocinas. Estas son polipéptidos que se secretan por las células a
la sangre o al tejido circundante, y después de unión a receptores
específicos influyen en funciones como división, crecimiento o
desplazamiento de otras células. Las citocinas regulan entre otras
cosas el complicado despliegue de las células del sistema
inmune.
Pertenecen también a las citocinas las
denominadas interleucinas. Estas son sustancias mediadoras del
sistema inmune que se producen por los leucocitos en bajas
concentraciones e influyen sobre el crecimiento, la diferenciación y
la actividad de las células del sistema inmune.
Para registrar las funciones y el estado de un
cuerpo humano o animal, es necesaria la determinación cualitativa
y/o cuantitativa de las proteínas y/o péptidos de una muestra de
fluido que se toma del cuerpo humano o animal
Para la determinación cualitativa y/o
cuantitativa de proteínas o péptidos individuales en muestras de
fluido que se toman de cuerpos humanos o animales, es conocido el
uso de inmunoensayos enzimáticos. Básicamente, es aquí una reacción
antígeno-anticuerpo acoplada a una reacción
enzimática en la que se usa el conjugado
anticuerpo-enzima o el conjugado
antígeno-enzima, que se determina tras la adición
del sustrato adecuado mediante la medida de la actividad enzimática
del conjugado.
En general, se hace uso de la técnica de fase
sólida de ELISA (ensayo de inmunosorción ligado a enzima), en el que
el antígeno se une a la fase sólida mediante adsorción directa o
mediante otro anticuerpo.
Algunas de las proteínas y péptidos se han
determinado ya cualitativa y/o cuantitativamente en el marco de las
investigaciones médico-clínicas actuales.
Es cada vez más importante un conocimiento exacto
de las proteínas y péptidos así como de su concentración en las
muestras de fluido, especialmente en suero, obtenidas en el marco de
investigaciones médico-clínicas.
Se ha manifestado que el estado de un cuerpo
humano o animal puede describirse relativamente bien mediante
referencia al patrón de proteínas y/o péptidos.
Desventajosamente sin embargo, en los
procedimientos usados hasta ahora de ELISA, puede determinarse
siempre sólo una proteína o péptido. Para obtener un patrón de
proteínas y/o péptidos lo más completo posible, debe determinarse
individualmente por tanto una pluralidad de proteínas y/o
pépti-
dos.
dos.
Además, muchas proteínas o péptidos no son
determinables, ya que no se han puesto a disposición los reactivos
necesarios para la detección, por ejemplo, anticuerpos
específicos.
A causa del bajo número de medidas, a veces es
difícil entonces extraer conclusiones de valor informativo sobre el
estado de un cuerpo humano o animal.
Especialmente, los resultados de las
investigaciones médico-clínicas se ponen a
disposición sólo horas después de la toma de muestra de fluido, de
modo que no es posible ninguna afirmación actualizada sobre el
estado del cuerpo humano o animal.
Con el procedimiento de ELISA no es por tanto
posible elaborar rápidamente un patrón de proteínas y/o péptidos
completo, y por tanto de valor informativo.
Es además desventajoso en el procedimiento de
ELISA que para la determinación de la concentración de proteínas o
péptidos individuales en muestras de fluido desconocidas, sean
necesarias medidas comparativas de muestras de distintas
concentraciones conocidas de proteínas o péptidos, los denominados
patrones. Estas medidas son al mismo tiempo intensivas de tiempo y
de costes, porque igualmente puede determinarse sólo una proteína o
péptido individual.
Del documento WO 98/35226 A es deducible un
procedimiento para el análisis de muestras de fluido cuyos
componentes se separan mediante electroforesis capilar, a
continuación se ionizan directamente y se transfieren a través de
una interfaz a un espectrómetro de masas acoplado a la misma para
detección.
Los procedimientos de análisis conocidos no
posibilitan sin embargo identificar estados similares o distintos
del cuerpo humano o animal.
La invención se basa en el cometido de preparar
un procedimiento para la determinación cualitativa y/o cuantitativa
de un patrón de proteínas y/o péptidos de una muestra de fluido que
se toma de un cuerpo humano o animal, y un dispositivo para la
realización y el análisis del procedimiento para una determinación
completa y rápida de las proteínas y/o los péptidos, y además
posibilita identificar estados similares o distintos del cuerpo
humano o animal.
Este cometido se consigue con un procedimiento
con las características de la reivindicación 1 y con un dispositivo
con las características de la reivindicación 8. Las variantes y
configuraciones ventajosas proceden de las reivindicaciones
subordinadas.
El procedimiento para la determinación
cualitativa y/o cuantitativa de un patrón de proteínas y/o péptidos
de una muestra de fluido que se toma de un cuerpo humano o animal,
en el que las proteínas y/o los péptidos de la muestra de fluido se
separan mediante electroforesis capilar, a continuación se ionizan
directamente y se transfieren en línea a través de una interfaz a un
espectrómetro de masas acoplado a la misma para detección, prevé
que, para el control del estado de un cuerpo humano o animal durante
un intervalo de tiempo largo, se almacenen automáticamente en un
banco de datos los valores de referencia y de muestras que describen
los estados, así como las divergencias y coincidencias derivadas de
los mismos, y que en una nueva determinación del patrón de proteínas
y/o péptidos, se busque automáticamente según las mejores
coincidencias posibles.
Una determinación cualitativa y cuantitativa
fiable de proteínas y/o péptidos en una matriz compleja, como
representa el fluido corporal humano o animal, requiere en primer
lugar el uso de un procedimiento para la separación de sustancias.
Se ha mostrado a este respecto como un procedimiento de separación
adecuado la electroforesis capilar.
El principio de separación de la electroforesis
consiste en los distintos comportamientos de migración de partículas
cargadas eléctricamente en disolución por la aplicación de un campo
eléctrico. La ventaja de los capilares consiste en la favorable
relación superficie/volumen, que posibilita un buen transporte de
salida del calor de Joule formado en el flujo de corriente. Esto
permite además la aplicación de tensiones mayores (convencionalmente
hasta 30 kV) y por tanto un alto rendimiento de separación y cortos
tiempos de análisis.
El alto rendimiento de separación posibilita la
determinación de un patrón de proteínas y/o péptidos completo de la
muestra de fluido. Los cortos tiempos de análisis permiten hacer
afirmaciones actualizadas sobre el estado del cuerpo humano o animal
del que se ha tomado la muestra de fluido.
Con ayuda de la electroforesis capilar, es
posible separar moléculas neutras, cationes y aniones. Las
partículas neutras migran con la aplicación de una corriente a la
velocidad del flujo electroosmótico, los cationes se aceleran hacia
el cátodo y los aniones se retardan.
Para la detección de las proteínas y/o péptidos
separados mediante electroforesis capilar, se acopla el aparato de
electroforesis capilar a un espectrómetro de masas.
La espectrometría de masas permite la
determinación de la masa molecular de iones libres a alto vacío.
Contiene un analizador de masas que separa los iones según sus
cocientes masa/carga (m/z), y un detector.
La ionización tiene lugar a presión atmosférica,
sin embargo, el análisis de masas requiere alto vacío, por lo que se
prevé una transición correspondiente, la denominada interfaz.
Con la espectrometría de masas es posible medir
rutinariamente en una mezcla compleja 10 fmol de un péptido o
proteína pequeña, es decir, 0,1 ng de una proteína de 10 kDa, con
una exactitud de masa de \pm0,01%. Experimentalmente, se han
medido ya menos de 0,1 fmol.
Así, este procedimiento es ante todo adecuado
para muestras de fluido complejas que se toman de cuerpos humanos o
animales para investigar la presencia de determinadas proteínas y
péptidos.
Los valores de medida obtenidos se analizan y
almacenan automáticamente, y se comparan automáticamente los nuevos
valores de medida con los valores de medida ya almacenados.
Mediante la comparación, se determinan los
parámetros coincidentes y divergentes que pueden referirse a la
descripción del estado de un cuerpo humano o animal.
Mediante el banco de datos, es posible
identificar estados iguales, similares o distintos del cuerpo humano
o animal.
En las determinaciones de varias muestras de
fluido tomadas a intervalos de tiempo del mismo cuerpo humano o
animal, se determinan automáticamente los cambios del patrón de
proteínas y/o péptidos, se analizan y se almacenan.
Así, se asegura el control del estado de un
cuerpo humano o animal durante un intervalo largo de tiempo.
Se elabora automáticamente un banco de datos
compuesto por los valores de referencia, valores de muestra,
divergencias y coincidencias que describen los estados, y se buscan
automáticamente en las nuevas medidas las mejores coincidencias
posibles. De esta manera, es posible poder determinar
automáticamente los estados de cuerpos humanos o animales.
Se prevé especialmente que como muestra de fluido
se utilice suero u orina.
A este respecto, se trata de muestras de fluido,
que se toman del cuerpo humano y que disponen de una composición
proteica y/o peptídica, que son especialmente bien adecuadas para
hacer afirmaciones sobre el estado del cuerpo humano o animal.
El análisis de espectrometría de masas posee la
ventaja frente a los procedimientos corrientes actualmente de que
puede determinarse la concentración de muchos péptidos y proteínas
(>100) de una muestra de suero u orina mediante un único
análisis. Además, pueden identificarse proteínas o péptidos todavía
desconocidos que describen el estado del cuerpo humano o animal.
Mediante el procedimiento según la invención, se
consigue que, frente a los procedimientos de determinación
convencionales, sea necesario sólo una operación de trabajo para
determinar varias proteínas y/o péptidos. Esto significa ahorro de
tiempo y
costes.
costes.
El espectro de masas obtenido puede referirse por
un lado como una especie de "huella dactilar" para la
descripción del estado general de un cuerpo humano o animal.
Especialmente, pueden analizarse también sólo determinados
intervalos del espectro de masas.
Pero, por otro lado, es también posible
identificar individualmente las proteínas y extraer conclusiones
sobre su presencia, ausencia y su concentración respecto al estado
del cuerpo humano o animal.
Además, se prevé determinar el patrón de
proteínas y/o péptidos como, por ejemplo, el patrón de citocinas,
especialmente de interleucinas.
Estas proteínas son esencialmente, según el
conocimiento actual, las proteínas que controlan las funciones del
organismo humano y animal.
Se prevé una variante que acidifica en primer
lugar la muestra de fluido antes de su separación mediante
electroforesis capilar, la purifica de partículas indeseadas
mediante ultracentrifugación y/o la divide mediante ultrafiltración
en fracciones que contienen proteínas y/o péptidos de tamaños
moleculares determinados.
Después de la acidificación, por ejemplo con
ácido fórmico a un valor de pH de 3, es posible separar los
componentes insolubles indeseados de la muestra mediante
ultracentrifugación. Mediante un fraccionamiento de la muestra de
fluido, se consiguen investigar, por ejemplo, sólo las fracciones de
proteínas y/o péptidos de determinados pesos moleculares que sean
precisamente necesarias para la descripción del estado de un cuerpo
humano o animal.
Para ello, se prevé combinar las fracciones de
proteínas y/o péptidos de pesos moleculares <3 kDa,
3-30 kDa, 30-50 kDa y >50
kDa.
En caso de tener que determinar, por ejemplo, las
interleucinas pertenecientes al grupo de las citocinas que
comprenden principalmente glicoproteínas de pesos moleculares de 17
kDa a 26 kDa, basta con usar la fracción de proteínas y/o péptidos
de pesos moleculares 3-30 kDa. Esto significa por
otra parte un acortamiento de los tiempos de análisis.
Además, es posible detectar las proteínas y/o
péptidos directamente después de su separación, pero antes de su
ionización.
Para la detección de las proteínas y/o péptidos
separados mediante electroforesis capilar son ya conocidos una serie
de procedimientos que posibilitan una buena analítica cualitativa y
cuantitativa de proteínas, pero sólo en casos excepcionales.
Por tanto, la detección prevista es sólo adecuada
en asociación con la espectrometría de masas para una determinación
más exacta de las proteínas y/o péptidos.
Una configuración ventajosa de la invención prevé
que para la ionización de las proteínas y/o péptidos se utilice la
ionización por electropulverización.
A este respecto, se pulverizan las moléculas
presentes en solución bajo la influencia, entre otras, de una alta
tensión (1-8 kV), con lo que se forman en primer
lugar pequeñas gotas cargadas que se hacen menores mediante la
evaporación del disolvente. Finalmente, se llega a la formación de
iones libres en forma gaseosa.
La ionización por electropulverización es una
técnica de ionización moderada a causa de las energías relativamente
bajas que actúan sobre las moléculas, de modo que, aun las moléculas
sensibles y parcialmente incluso los agregados no covalentes,
permanecen sin descomponerse en el analizador de masas.
Es ventajoso que en la ionización por
electropulverización no se formen básicamente fragmentos de
moléculas. De esta manera, se dificulta ciertamente la elucidación
de la estructura molecular, pero se posibilita una muy buena
identificación de las proteínas y/o péptidos disueltos en la muestra
de fluido.
Los fragmentos que aparecen a pesar de ello en la
ionización pueden referirse ventajosamente como péptidos pequeños,
por ejemplo oligopéptidos de menos de 20 aminoácidos, para la
identificación de la secuencia aminoacídica.
Además, es posible usar como espectrómetro de
masas un espectrómetro de masas de tiempo de vuelo, el denominado
espectrómetro de masas TOF (del inglés time of flight).
En un espectrómetro de masas TOF, se aplica una
tensión de aceleración determinada que confiere a los iones una
energía cinética de igual magnitud. Después, se mide muy exactamente
el tiempo que necesitan los respectivos iones para recorrer una
distancia de arrastre determinada a través del tubo de vuelo, ya que
a igual energía cinética la velocidad de los iones depende de su
masa.
Los espectrómetros de masas TOF tienen una
velocidad de barrido muy alta y consiguen por tanto una muy buena
resolución. Posibilitan la completa identificación de las proteínas
y/o péptidos que se encuentran en la muestra de fluido.
La invención se refiere además a un dispositivo
para el registro cualitativo y/o cuantitativo de un patrón de
proteínas o péptidos de una muestra de fluido que se toma del cuerpo
humano o animal.
El dispositivo comprende un aparato de
electroforesis capilar, una unidad de ionización, un espectrómetro
de masas acoplado en línea a través de una interfaz y una unidad
informática con un programa para el control del dispositivo, así
como para el análisis y almacenamiento automáticos de los valores de
medida, así como para la comparación de nuevos valores de medida con
los valores de medida ya
almacenados.
almacenados.
Un dispositivo así posibilita la determinación
fiable de proteínas y/o péptidos en una matriz compleja.
El aparato de electroforesis capilar dispone por
tanto por un lado de un alto rendimiento de separación que
posibilita la determinación de un patrón de proteínas y/o péptidos
completo de la muestra de fluido, y por otro lado de cortos tiempos
de análisis que permiten hacer afirmaciones actualizadas sobre el
estado del cuerpo humano o animal del que se toma la muestra de
fluido.
Para la determinación cualitativa y/o
cuantitativa de las proteínas y/o péptidos, se acopla el aparato de
electroforesis capilar a un espectrómetro de masas que detecta las
proteínas y/o péptidos separados mediante electroforesis
capilar.
La unidad informática contiene un programa para
el control del dispositivo. Además, los valores de medida obtenidos
mediante la detección se analizan y almacenan automáticamente.
Además, el programa compara automáticamente los nuevos valores de
medida con los valores de medida ya almacenados.
Mediante la comparación, se determinan los
parámetros coincidentes y divergentes que pueden referirse a la
descripción del estado de un cuerpo humano o animal.
En las determinaciones de muestras de fluido
tomadas del mismo cuerpo humano o animal a intervalos de tiempo, el
programa analiza y almacena los cambios automáticos en el patrón de
proteínas y/o péptidos.
Así, se asegura el control del estado de un
cuerpo humano o animal durante un largo intervalo de tiempo.
El programa elabora automáticamente un banco de
datos compuesto por los valores de referencia, valores de muestra,
divergencias y coincidencias que describen los estados y busca
automáticamente en las nuevas medidas las mejores coincidencias
posibles. De esta manera, es posible poder determinar
automáticamente estados del cuerpo humano o animal.
Una variante prevé que el programa detecte
automáticamente el patrón de péptidos o proteínas de muestras de
fluido definidas y lo almacene como valores normales en un banco de
datos de referencia.
De esta manera, es posible determinar en primer
lugar el patrón de proteínas y/o péptidos de muestras de fluido del
cuerpo humano o animal y almacenarlo como datos de referencia en los
que es conocido el estado. Se emplea un extenso banco de datos de
referencia al que puede referirse automáticamente para comparación
en las medidas nuevas.
Una configuración ventajosa del dispositivo según
la invención prevé que el programa registre automáticamente el
patrón de péptidos o proteínas de muestras de fluido no definidas,
lo almacene como valores de muestra en un banco de datos separado,
lo compare con los valores normales del banco de datos de referencia
e indique y almacene automáticamente las divergencias y/o
coincidencias.
Las divergencias o coincidencias pueden referirse
como parámetros para la estimación del estado del cuerpo humano o
animal.
Mediante el banco de datos, es posible
identificar estados iguales, similares o distintos del cuerpo humano
o animal.
Además, se prevé que la muestra de fluido sea
suero u orina.
Éstas son muestras de fluido, que se toman del
cuerpo humano o animal y que disponen de una composición proteica
y/o peptídica, que son especialmente bien adecuadas para hacer
afirmaciones sobre el estado del cuerpo humano o animal
Una variante prevé que las proteínas y péptidos
sean, por ejemplo, citocinas, especialmente interleucinas.
Estas proteínas son proteínas importantes que
controlan las funciones del organismo humano y animal, según el
conocimiento actual.
Es además posible que el espectrómetro de masas
sea un espectrómetro de masas de tiempo de vuelo.
Los espectrómetros de masas de tiempo de vuelo
tienen una velocidad de barrido muy alta y consiguen por tanto una
muy buena resolución. De esta manera, es posible determinar el
patrón de proteínas y/o péptidos completo.
Entre el aparato de electroforesis capilar y la
unidad de ionización puede disponerse además un detector. Éste sirve
en asociación con la espectrometría de masas para la mejor
determinación cualitativa y cuantitativa del patrón de proteínas y/o
péptidos.
Una variante prevé que la unidad de ionización
disponga de ionización por electropulverización.
La ionización por electropulverización es una
técnica de ionización moderada a causa de las energías relativamente
bajas que actúan sobre las moléculas, de modo que, aun las moléculas
sensibles y parcialmente incluso los agregados no covalentes,
permanecen sin descomponerse en el analizador de masas. De esta
manera, se posibilita una muy buena identificación de las proteínas
y/o péptidos disueltos en las muestras de fluido.
A continuación, se ilustra la invención mediante
un ejemplo de realización que se representa en el dibujo. En
éste:
la Fig. 1 muestra una representación esquemática
del procedimiento según la invención.
La Fig. 1 muestra esquemáticamente las etapas
individuales para la determinación cualitativa y/o cuantitativa de
un patrón de proteínas y/o péptidos de una muestra de fluido 10 que
se ha tomado del cuerpo humano o animal.
Se representa la muestra de fluido 10,
preferiblemente suero u orina, las fracciones 12 obtenidas tras
ultracentrifugación y ultrafiltración, un aparato de electroforesis
capilar 14, una unidad de ionización 16 conectada directamente a
éste, un espectrómetro de masas 20 acoplado en línea a través de una
interfaz 18, así como una unidad informática 22 con un programa para
el control del dispositivo, así como para el análisis y
almacenamiento automáticos de los valores de medida, así como para
la comparación de nuevos valores de medida con los valores de medida
ya almacenados.
La muestra de fluido 10 tomada de cuerpos humanos
o animales se acidifica en primer lugar con ácido fórmico a un valor
de pH de 3. A continuación, se purifica la muestra de fluido 10
mediante ultracentrifugación de partículas indeseadas, y se divide
mediante ultrafiltración en las fracciones 12, que contienen
proteínas y/o péptidos de tamaños moleculares determinados. Las
fracciones 12 pueden estar compuestas por proteínas y/o péptidos de
pesos moleculares <3 kDa, 3-30 kDa,
30-50 kDa y >50 kDa.
A continuación, se separan las proteínas y/o
péptidos de las fracciones individuales 12 mediante la
electroforesis capilar 14, se ionizan directamente en una unidad de
ionización 16 y se transfieren en línea a través de una interfaz 18
a un espectrómetro de masas 20 acoplado a la misma para
detección.
Naturalmente, existe la posibilidad de usar
precisamente sólo las fracciones 12 cuyas proteínas y/o péptidos
sean necesarios para la descripción del estado de un cuerpo humano o
animal.
En el espectrómetro de masas 20, se trata
ventajosamente de un espectrómetro de masas TOF que posee una muy
alta velocidad de barrido y alcanza una muy buena resolución.
El espectro de masas obtenido puede referirse por
un lado como una especie de "huella dactilar" para la
descripción del estado general de un cuerpo humano o animal. Por
otro lado, es sin embargo también posible identificar las proteínas
individualmente y extraer conclusiones de su presencia, ausencia y
su concentración sobre el estado del cuerpo humano o animal.
La unidad informática 22 contiene un programa
para el control del dispositivo. Además, se analizan automáticamente
los valores de medida obtenidos mediante la detección y se almacenan
en bancos de datos. Además, el programa compara automáticamente los
nuevos valores de medida con los valores de medida ya
almacenados.
Mediante la comparación, se determinan los
parámetros coincidentes y divergentes que pueden referirse a la
descripción del estado de un cuerpo humano o animal.
Mediante los bancos de datos, es posible
identificar estados iguales, similares o distintos del cuerpo humano
o animal.
El procedimiento según la invención para la
determinación cualitativa y/o cuantitativa de un patrón de proteínas
y/o péptidos de una muestra de fluido que se toma del cuerpo humano
o animal puede llevarse a cabo por personas con formación técnica.
La aplicación no requiere un médico y puede emplearse también fuera
de laboratorios médicos.
Claims (14)
1. Procedimiento para la determinación
cualitativa y/o cuantitativa de un patrón de proteínas y/o péptidos
de una muestra de fluido (10) que se toma del cuerpo humano o animal
para el control de su estado, en el que los péptidos y proteínas de
la muestra de fluido (10) se separan mediante electroforesis
capilar, a continuación se ionizan directamente y se transfieren en
línea a través de una interfaz (18) a un espectrómetro de masas
(20) acoplado a la misma para detección, caracterizado porque
para el control del estado de un cuerpo humano o animal durante un
intervalo de tiempo largo, se almacenan automáticamente en un banco
de datos los valores de referencia y de muestra que describen los
estados, así como las divergencias y coincidencias derivadas de los
mismos, y en una nueva determinación del patrón de proteínas y/o
péptidos se buscan automáticamente las mejores coincidencias
posibles.
2. Procedimiento según la reivindicación 1,
caracterizado porque se usa como muestra de fluido (10) suero
u orina.
3. Procedimiento según la reivindicación 1 ó 2,
caracterizado porque se determina el patrón de proteínas y/o
péptidos de citocinas, especialmente de interleucinas.
4. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque se acidifica en
primer lugar la muestra de fluido (10) antes de su separación
mediante electroforesis capilar, se purifica mediante
ultracentrifugación de partículas indeseadas y/o se divide mediante
ultrafiltración en fracciones (12) que contienen proteínas y/o
péptidos de tamaños moleculares determinados.
5. Procedimiento según la reivindicación 4,
caracterizado porque las fracciones 12 están compuestas por
proteínas y/o péptidos de pesos moleculares <3 kDa,
3-30 kDa, 30-50 kDa y >50
kDa.
6. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque para la
ionización de las proteínas y/o péptidos se usa la ionización por
electropulverización.
7. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque se usa como
espectrómetro de masas (20) un espectrómetro de masas de tiempo de
vuelo.
8. Dispositivo para la determinación cualitativa
y/o cuantitativa de un patrón de proteínas o péptidos de una muestra
de fluido (10) que se toma del cuerpo humano o animal para controlar
su estado, en el que el dispositivo contiene un aparato de
electroforesis capilar (14), una unidad de ionización (16), un
espectrómetro de masas (20) acoplado en línea a través una interfaz
(18) y una unidad informática (22) con un programa para el control
del dispositivo, así como para el análisis y almacenamiento
automático de los valores de medida y para la comparación de los
nuevos valores de medida con los valores de medida ya almacenados,
caracterizado porque para el control del estado de un cuerpo
humano o animal durante un intervalo de tiempo largo, el programa
almacena automáticamente en un banco de datos los valores de
referencia y de muestra que describen los estados, así como las
divergencias y coincidencias derivadas de los mismos, y en una nueva
determinación del patrón de proteínas y/o péptidos se buscan
automáticamente las mejores coincidencias posibles.
9. Dispositivo según la reivindicación 8,
caracterizado porque el programa registra automáticamente el
patrón de proteínas o péptidos de muestras de fluido (10) definidas
y lo almacena como valores normales en un banco de datos de
referencia.
10. Dispositivo según la reivindicación 8 ó 9,
caracterizado porque el programa registra automáticamente el
patrón de péptidos y/o proteínas de muestras de fluido (10) no
definidas, lo almacena como valores de muestra en un banco de datos,
lo compara con los valores normales del banco de datos de referencia
e indica automáticamente las divergencias y/o coincidencias.
11. Dispositivo según una de las reivindicaciones
8 a 10, caracterizado porque la muestra de fluido (10) es
suero u orina.
12. Dispositivo según una de las reivindicaciones
8 a 11, caracterizado porque las proteínas y péptidos son
citocinas, especialmente interleucinas.
13. Dispositivo según una de las reivindicaciones
8 a 12, caracterizado porque el espectrómetro de masas (20)
es un espectrómetro de masas de tiempo de vuelo.
14. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 8 a 13, caracterizado porque la unidad de
ionización (16) dispone de ionización por electropulverización.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE10021737A DE10021737C2 (de) | 2000-05-04 | 2000-05-04 | Verfahren und Vorrichtung zur qualitativen und/oder quantitativen Bestimmung eines Protein- und/oder Peptidmusters einer Flüssigkeitsprobe, die dem menschlichen oder tierischen Körper entnommen wird |
| DE10021737 | 2000-05-04 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
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