ES2253739T3 - Composiciones farmaceuticas y su utilizacion, especialmente para el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas. - Google Patents

Composiciones farmaceuticas y su utilizacion, especialmente para el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas.

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ES2253739T3 ES94928933T ES94928933T ES2253739T3 ES 2253739 T3 ES2253739 T3 ES 2253739T3 ES 94928933 T ES94928933 T ES 94928933T ES 94928933 T ES94928933 T ES 94928933T ES 2253739 T3 ES2253739 T3 ES 2253739T3
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Abstract

LA PRESENTE INVENCION SE REFIERE A LA UTILIZACION DE COMPUESTOS CAPACES DE INHIBIR LA ACTIVIDAD DE LA PROTEINA P53 PARA LA PREPARACION DE UNA COMPOSICION FARMACEUTICA DESTINADA AL TRATAMIENTO DE LAS ENFERMEDADES NEURODEGENERATIVAS.

Description

Composiciones farmacéuticas y su utilización, especialmente para el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas.
La presente invención se refiere a composiciones farmacéuticas y su utilización, principalmente para el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas. Se refiere más particularmente a la utilización de compuestos que actúan sobre la proteína p53 o sobre su gen para la preparación de una composición farmacéutica destinada al tratamiento de enfermedades neurodegenerativas.
El gen p53 codifica una proteína nuclear de 53 kDa. El gen salvaje codificador de la p53 nativa posee una actividad anti-oncogénica [para revisión, véase por ejemplo Oren, FASEB J. 6 (1992) 3169]. En particular, la proteína p53 salvaje es capaz de inhibir la formación de los focos de transformación en fibroblastos de roedores transfectados con diversas combinaciones de oncogenes. La forma mutada para deleción y/o mutación de este gen está implicada por el contrario en el desarrollo de la mayoría de los cánceres humanos [Baker et coll., Science 244 (1989) 217]. Sus formas mutadas son igualmente capaces de cooperar con los oncogenes ras para transformar fibroblastos murinos. Por esta razón, la proteína p53 o su gen han sido estudiados ampliamente como dianas para el tratamiento de cánceres. Además, Chopp et al. (Biochem.Biophys.Res.Com 182 (1992) 1201) han descrito una expresión de p53 en el cerebro de rata isquémico. Sin embargo, nada indica en estos resultados si esta expresión constituye una causa de la neurodegeneración, o un fenómeno paralelo. Además, no se considera ni sugiere ninguna aproximación terapéutica en este documento.
La presente invención resulta en parte de la puesta en evidencia que la proteína p53 constituye un mediador de la degeneración neuronal. Resulta igualmente de la puesta en evidencia que el empleo de compuestos capaces de inhibir al menos parcialmente la actividad de la proteína p53 puede permitir bloquear el proceso de muerte neuro-
nal.
Para estudiar los mecanismos moleculares de la degeneración neuronal, el solicitante ha utilizado como modelo ratones en los que la expresión del gen p53 ha sido inactivado [Donehower et al., Nature 356 (1992) 215]. Se han practicado experiencias de isquemia focal irreversible en estos ratones, y los volúmenes de infarto se han comparado con aquellos observados en ratones salvajes control (misma cepa, mismo sexo, misma edad, mismo proveedor). Los resultados obtenidos han mostrado una disminución estadísticamente significativa de 20% de los volúmenes de infarto después de isquemia de los ratones que no expresan el gen p53 (Cf ejemplos). Además, el solicitante ha demostrado igualmente que la utilización de antisentidos anti-p53 permite ralentizar la muerte inducida por glutamato sobre cultivos de células corticales. Estos resultados demuestran que la proteína p53 juega un papel de mediador de la degeneración neuronal, observación que nunca ha sido descrita en la técnica anterior, y que un control de la actividad de esta proteína permite luchar contra la muerte neuronal. La proteína p53, su gen y el conjunto de los factores susceptibles de interactuar con ella constituyen por lo tanto nuevas dianas farmacológicas en el tratamiento de procesos neurodegenerativos. La invención reside por lo tanto en parte en la utilización de compuestos capaces de bloquear al menos parcialmente la actividad de p53 para el tratamiento de enfermedades neurodegenera-
tivas.
Un primer objeto de la presente invención reside en la utilización de un compuesto que inhibe al menos parcialmente la actividad de la proteína p53 para la preparación de una composición farmacéutica destinada al tratamiento y/o a la prevención de enfermedades neurodegenerativas.
Los compuestos que inhiben al menos parcialmente la actividad de la proteína p53 en el sentido de la presente invención pueden ser compuestos que actúan (i) sobre la síntesis de p53, en los niveles de la transcripción, de la traducción o la post-traducción, o (ii) sobre la unión de p53 al ADN.
Entre los compuestos que actúan sobre la síntesis de la proteína p53, se pueden citar las secuencias nucleótidas antisentido capaces de reducir o de suprimir la expresión de p53, en el nivel de la transcripción o de la traducción.
Tales secuencias pueden en efecto estar dirigidas contra el ARNm de p53 y actuar sobre la traducción de este en proteína: puede tratarse de oligonucleótidos (sintéticos, modificados químicamente, etc. tales como los descritos en los ejemplos en las solicitudes de patente EP 092 574, EP 231 495, WO 92/03568; WO 91/13080, etc.) o de secuencias de ADN codificadoras de ARN capaces de interactuar selectivamente con el ARNm de p53, según la técnica descrita por ejemplo en la solicitud de patente EP 140 308.
Tales secuencias pueden estar dirigidas igualmente contra el gen codificador de p53 y actuar sobre la transcripción de este en ARN. Más particularmente, estas secuencias pueden estar dirigidas contra regiones codificadoras del gen (gen de estructura de p53), o contra regiones no codificadoras: regiones reguladoras de la transcripción, exones, etc. Tales secuencias pueden prepararse en las condiciones descritas por ejemplo en los documentos EP 558 634, WO 91/06626, WO92/10590, WO 93/10820, etc.).
Entre los compuestos que actúan sobre la unión de p53 al ADN, se pueden citar más particularmente antagonistas de p53, o proteínas capaces de interactuar con p53 y de modular así su actividad de unión al ADN. A este respecto, se pueden citar los mutantes dominantes negativos de p53 constituidos esencialmente de forma mutada inactiva, que son capaces de entrar en competición con la proteína salvaje para la interacción con el ADN. Tales mutantes son por ejemplo el mutante p53Va1135, u otras formas descritas por ejemplo en Michalovitz et al. [J. Cell. Bioch. 45 (1991) 22]. Pueden utilizarse tal cual, pero, preferentemente, se utilizan en el marco de la presente invención en forma de construcciones genéticas capaces de expresar in vivo estos mutantes. Otros compuestos capaces de inhibir al menos parcialmente la unión de p53 al ADN están constituidos por ácidos nucleicos de cadena doble que reproducen el sitio de unión de p53 al ADN [El-Deiry et al., Nature 1 (1992) 45; Kern et al., Science 252, 1708; Friedman et al., PNAS 90 (1993) 3319]. El solicitante ha mostrado en efecto que tales ácidos nucleicos eran capaces de complejar los factores de transcripción presentes en las células, de impedirles que se fijen sobre sus sitios endógenos, y así, bloquear su actividad de transcripción.
En un modo preferido, el compuesto utilizado en el marco de la presente invención es un ácido nucleico de cadena doble que comprende todo o parte del sitio de unión de p53 al ADN. Más preferentemente, el ácido nucleico comprende toda o parte de la secuencia SEQ ID nº 2 o una variante activa de esta. El término variante activa designa en el sentido de la invención toda variante de la secuencia SEQ ID nº 2 que ha conservado las propiedades de fijación a la proteína p53. Tales variantes pueden obtenerse por mutación, deleción, sustitución y/o adición de bases sobre la secuencia SEQ ID nº 2, luego verificación in vitro de la actividad de la unión.
En otro modo preferido, el compuesto utilizado en el marco de la presente invención es un ácido nucleico codificador de una forma mutada de la proteína p53 capaz de antagonizar la actividad de ésta.
Siempre en un modo preferido, el compuesto utilizado en el marco de la presente invención es un ácido nucleico antisentido capaz de reducir los niveles de expresión de la proteína p53, en el nivel de la transcripción o de la traducción. Más preferentemente, se trata de un ADN codificador de un ácido ribonucleico antisentido capaz de inhibir la traducción del ARNm celular de p53. Se representa un tal antisentido en la secuencia SEQ ID nº 1.
El ácido nucleico puede utilizarse tal cual, por ejemplo después de inyección en el ser humano o en el animal, para inducir una protección o tratar la degeneración neuronal. En particular, se puede inyectar en forma de ADN desnudo según la técnica descrita en la solicitud de patente WO 90/11092. Puede administrarse igualmente en forma complejada, por ejemplo con DEAE-dextrano [Pagano et al., J.Virol. 1 (1967) 891], con proteínas nucleares [Kaneda et al., Science 243 (1989) 375], con lípidos [Felgner et al., PNAS 84 (1987) 7413], en forma de liposomas [Fraley et al., J.Biol.Chem. 255 (1980) 10431], etc.
Preferentemente, el ácido nucleico utilizado en el marco de la invención forma parte de un vector. El empleo de tal vector permite mejorar en efecto la administración del ácido nucleico en las células a tratar, e igualmente aumentar su estabilidad en dichas células, lo que permite obtener un efecto inhibidor duradero. Además, es posible introducir varias secuencias de ácido nucleico en un mismo vector, lo que aumenta igualmente la eficacia del tratamien-
to.
El vector utilizado puede ser de orígenes diversos, desde el momento en que es capaz de transformar las células animales, preferentemente células nerviosas humanas. En un modo preferido de empleo de la invención, se utiliza un vector viral, que puede elegirse entre los adenovirus, retrovirus, los virus adeno-asociados (AAV), el virus del herpes, etc.
A este respecto, la presente invención tiene igualmente por objeto todo virus recombinante que comprende, insertado en su genoma, un ácido nucleico codificador de una forma mutada de la proteína p53 capaz de antagonizar la actividad de esta, y/o un ácido nucleico que comprende todo o parte del sitio de unión de p53 al ADN y/o un ácido nucleico antisentido capaz de reducir los niveles de expresión de la proteína p53, en el nivel de la transcripción o de la traducción.
El virus recombinante según la invención puede elegirse entre los adenovirus, los retrovirus, los virus adeno-asociados, etc. Preferentemente, se trata de un virus capaz de infectar las células nerviosas, tal como principalmente un adenovirus. Se han descrito vectores derivados de adenovirus, de retrovirus, o de AAV que incorporan secuencias de ácidos nucleicos heterólogos en la bibliografía [Akli et al., Nature Genetics 3 (1993) 224; Stratford-Perricaudet et al., Human Gene Therapy 1 (1990) 241; EP 185 573, Levrero et al., Gene 101 (1991) 195; Le Gal la Salle et al., Science 259 (1993) 988; Roemer et Friedmann, Eur. J. Biochem. 208 (1992) 211; Dobson et al., Neuron 5 (1990) 353; Chiocca et al., New Biol. 2 (1990) 739; Miyanohara et al., New Biol. 4 (1992) 238; WO91/18088].
Ventajosamente, el virus recombinante según la invención es un virus defectivo. La expresión "virus defectivo" designa un virus incapaz de replicarse en la célula diana. Generalmente, el genoma de los virus defectivos utilizados en el marco de la presente invención está por lo tanto desprovisto al menos de las secuencias necesarias para la replicación de dicho virus en la célula infectada. Estas regiones pueden eliminarse (todo o en parte), bien volviéndolas no funcionales, bien sustituyéndolas por otras secuencias y principalmente por el ácido nucleico. Preferentemente, el virus defectivo conserva sin embargo las secuencias de su genoma que son necesarias a la encapsidación de las partículas virales.
Es particularmente ventajoso utilizar las secuencias nucleicas de la invención en forma incorporada a un adenovirus recombinante defectivo.
Existe en efecto diferentes serotipos de adenovirus, cuya estructura y las propiedades varían muy poco, pero que no son patógenos para el ser humano, y principalmente los sujetos no inmuno-deprimidos. Además, estos virus no se integran en el genoma de las células que infectan, y pueden incorporar fragmentos importantes de ADN exógeno. Entre los diferentes serotipos, se prefiere utilizar en el marco de la presente invención los adenovirus de tipo 2 ó 5 (Ad 2 o Ad 5). En el caso de los adenovirus Ad 5, las secuencias necesarias a la replicación son las regiones E1A y E1B.
Un modo de realización particular de la invención consiste en un vector, principalmente viral, que comprende al menos dos ácidos nucleicos tal como se han definido anteriormente.
Los virus recombinantes defectivos de la invención pueden prepararse por recombinación homóloga entre un virus defectivo y un plásmido que porta entre otra la secuencia de ácidos nucleicos tal como se ha definido anteriormente [Levrero et al., Gene 101 (1991) 195; Graham, EMBO J. 3(12) (1984) 2917]. La recombinación homóloga se produce después de co-transfección de dichos virus y plásmido en una línea celular apropiada. La línea celular utilizada debe preferentemente (i) transformarse por dichos elementos, y (ii), comprender las secuencias capaces de complementar la parte del genoma del virus defectivo, preferentemente en forma integrada para los riesgos de recombinación. A título de ejemplo de línea utilizable para la preparación de adenovirus recombinantes defectivos, se puede mencionar la línea de riñón embrionario humano 293 [Graham et al., J. Gen. Virol. 36 (1977) 59] que contiene principalmente, integrada en su genoma, la parte izquierda del genoma de un adenovirus Ad5 (12%). A título de ejemplo de línea utilizable para la preparación de retrovirus recombinantes defectivos, se puede mencionar la línea CRIP [Danos et Mulligan, PNAS 85 (1988) 6460].
Luego, los virus que se multiplican se recuperan y purifican según las técnicas clásicas de biología molecular.
La presente invención tiene igualmente por objeto una composición farmacéutica que comprende al menos un virus recombinante tal como se ha definido anteriormente.
Las composiciones farmacéuticas de la invención pueden formularse con vista a una administración por vía tópica, oral, parenteral, intranasal, intravenosa, intramuscular, subcutánea, intraocular, etc.
Preferentemente, las composiciones farmacéuticas contienen vehículos farmacéuticamente aceptables para una formulación inyectable. Puede tratarse en particular de soluciones salinas (fosfato monosódico, disódico, cloruro de sodio, potasio, calcio o magnesio, etc., o mezclas de tales sales), estériles, isotónicas, o de composiciones secas, principalmente liofilizadas, que, por adición según el caso de agua esterilizada o de suero fisiológico, permiten la constitución de solutos inyectables.
Las dosis de ácidos nucleicos (secuencia o vector) utilizadas para la administración pueden adaptarse en función de diferentes parámetros, y principalmente en función del modo de administración utilizado, de la patología referida, del ácido nucleico a expresar, o también de la duración del tratamiento buscado. De una manera general, en lo que se refiere a los virus recombinantes según la invención, estos se formulan y se administran en forma de dosis comprendidas entre 10^{4} y 10^{14} pfu/ml, y preferentemente 10^{6} a 10^{10} pfu/mL El término pfu ("unidades formadoras de placa") corresponde al poder infeccioso de una solución de virus, y se determina por infección de un cultivo celular apropiado, y se mide, generalmente después de 48 horas, del número de placas de células infectadas. Las técnicas de determinación del título pfu de una solución viral están bien documentadas en la bibliografía.
Tales composiciones farmacéuticas pueden utilizarse en el ser humano, para el tratamiento y/o la prevención de enfermedades neurodegenerativas, y en particular, para el tratamiento y/o la prevención de la degeneración neuronal asociada a la isquemia, hipoxia, anoxia, hipoglucemia, ataques epilépticos o también los traumas cerebrales o espinales, o para el tratamiento y/o la prevención de la corea de Huntington, de la enfermedad de Alzheimer, de la enfermedad de Parkinson o de la esclerosis lateral amiotrópica.
La presente invención se describirá de manera más completa por medio de los ejemplos siguientes, que deben considerarse como ilustrativos y no limitativos.
Leyendas de las figuras
Figura 1: Inhibición de la muerte celular inducida por glutamato sobre cultivos primarios de neuronas corticales por un ácido nucleico antisentido anti-p53.
Técnicas generales de clonación
Los métodos utilizados clásicamente en biología molecular tales como extracciones preparativas de ADN plasmídico, centrifugación de ADN plasmídico en gradiente de cloruro de cesio, la electroforesis en geles de agarosa o de acrilamida, purificación de fragmentos de ADN mediante electroelución, extracciones de proteínas con fenol o con fenol-cloroformo, precipitación de ADN en medio salino con etanol o isopropanol, transformación en Escherichia coli, etc. son muy conocidos por el experto en la técnica y están descritos abundantemente en la bibliografía [Maniatis T. et al., "Molecular Cloning, a Laboratory Manual", Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N. Y., 1982; Ausubel F.M. et al. (eds), "Current Protocols in Molecular Biology", John Wiley & Sons, Nueva York, 1987].
Los plásmidos de tipo pBR322, pUC y los fagos de la serie M13 son de origen comercial (Bethesda Research Laboratories).
Para las ligaciones, los fragmentos de ADN pueden separarse según su tamaño por electroforesis en geles de agarosa o acrilamida, extraerse con fenol o con una mezcla fenol/cloroformo, precipitarse con etanol y después incubarse en presencia de la ADN ligasa del fago T4 (Biolabs) según las recomendaciones del proveedor.
El relleno de los extremos 5' prominentes puede efectuarse mediante el fragmento de Klenow de la ADN Polimerasa de E. coli (Biolabs) según las especificaciones del proveedor. La destrucción de los extremos 3' prominentes se efectúa en presencia de la ADN Polimerasa del fago T4 (Biolabs) utilizada según las recomendaciones del fabricante. La destrucción de los extremos 5' prominentes se efectúa mediante un tratamiento con la nucleasa S1.
La mutagénesis dirigida in vitro por oligodeoxinucleótidos sintéticos puede efectuarse según el método desarrollado por Taylor et al. [Nucleic Acids Res. 13 (1985) 8749-8764] al utilizar el kit distribuido por Amersham.
La amplificación enzimática de los fragmentos de ADN mediante la técnica dicha de PCR [reacción en cadena catalizada por la polimerasa, Saiki R.K. et al., Science 230 (1985) 1350-1354; Mullis K.B. y Faloona F.A., Meth. Enzym. 155 (1987) 335-350] puede efectuarse al utilizar un "secuenciador térmico de ADN" (Perkin Elmer Cetus) según las especificaciones del fabricante.
La verificación de las secuencias nucleotídicas puede efectuarse por el método desarrollado por Sanger et al. [Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 74 (1977) 5463-5467] al utilizar el kit distribuido por Amersham.
Ejemplos Ejemplo 1 Disminución del volumen de infarto en los ratones isquémicos por supresión del gen p53
Este ejemplo describe el efecto de la supresión del gen p53 sobre el volumen de infarto en ratones isquémicos. Por ello, se indujeron isquemias en ratones mediante oclusión de la arteria cerebral media, y se determinaron los volúmenes de infarto, luego se compararon.
Protocolo: Los animales (ratones machos C57/Blc con edad de 9 a 12 semanas, Genpharm, Danemark; homocigotos tipo salvaje o \Deltap53) se anestesiaron en una mezcla de oxígeno, de protóxido de nitrógeno y de 1,8% de halógeno, y se mantuvieron en estas condiciones durante toda la duración de la intervención quirúrgica. La temperatura rectal se mantuvo a 37ºC +/- 0,5 mediante una manta calefactora. La arteria cerebral media izquierda se cauterizó a continuación por electrocoagulación por medio de una pinza bipolar. Luego la llaga se volvió a coser y los animales se situaron en una sala a 30ºC durante 24 horas, con alimento y bebida a voluntad. Al cabo de 24 horas, los animales se sacrificaron por decapitación. Los cerebros se retiraron, se sumergieron en un baño de isopentano a -30ºC, luego se conservaron a -80ºC. Luego se efectuaron cortes histológicos de 40 \mum en un criostato a -20ºC, a razón de un corte cada 500 \mum, desde la aparición de infarto hasta desaparición. Estos cortes se colorearon luego con violeta de cresilo. El volumen del infarto se determinó por análisis de imagen. El análisis estadístico se hizo con ayuda del ensayo de t de Student para grupos independientes, después de verificación de la homogeneidad de las varianzas. En el caso en el que las varianzas no eran homogéneas, se utilizó el ensayo no paramétrico de Wilcoxon.
Resultados: Los resultados obtenidos se recogen en la tabla siguiente:
\vskip1.000000\baselineskip
Ratón P53 Ratón testigo
Número total de animales ensayados 45 46
Peso medio (g) 25,73 25,44
Temperatura media (ºC) 36,80 37,01
Volumen medio de infarto (mm^{3}) 24,95 +/- 1,81 31,54 +/- 1,86 
\vskip1.000000\baselineskip
Estos resultados muestran una disminución del orden de 20% de los volúmenes de infarto después de isquemia de los ratones que no expresan el gen p53. Estos resultados demuestran por lo tanto que una supresión de la actividad p53 permite ralentizar la degeneración neuronal.
Ejemplo 2 Inhibición de la muerte celular inducida por glutamato sobre cultivos primarios de neuronas corticales por un ácido nucleico antisentido anti-p53
Este ejemplo describe el efecto de un ácido nucleico antisentido anti p53 sobre la muerte inducida por glutamato sobre neuronas corticales de rata embrionaria, en cultivo primario.
El glutamato es el principal neurotransmisor excitador del sistema nervioso central. Sin embargo, una exposición a glutamato durante períodos anormalmente largos, o a concentraciones más elevadas que las concentraciones fisiológicas puede provocar una toxicidad neuronal designada bajo el término de excitotoxicidad [Olney Adv. Exp. Med. Biol. 203 (1986) 6311. Numerosos argumentos experimentales sugieren que este tipo de toxicidad contribuye a la degeneración neuronal asociada a la isquemia; hipoxia, hipoglucemia, ataques epilépticos o también a traumas cerebrales [Choi, J. Neurobiol. 23 (1992) 12611. La excitotoxicidad estaría implicada igualmente en la patogénesis de enfermedades tales como la corea de Huntington [Young et al., Science 241 (1988) 981] y la enfermedad de Alzheimer [Koh et al., Brain Res. 533 (1990) 315; Mattson et al.; J. Neurosci. 12 (1992) 376]. Este ejemplo muestra que el efecto tóxico del glutamato se inhibe en parte en presencia de un ácido nucleico antisentido capaz de reducir los niveles de expresión de la proteína p53.
Preparación y secuencia del ácido nucleico antisentido: El oligonucleótido antisentido se sintetizó por medio de un sintetizador automático de nucleótidos (Maniatis). La secuencia del oligonucleótido es la siguiente:
5'-CGACTGTGAATCCTCCAT-3' (SEQ ID nº 1).
Estudio de la inhibición: Las células de corteza de rata Wistar embrionaria (E17) se aislaron según el método de Dichter [Brain Res. 149 (1978) 279], se cultivaron en cajas de 6 pocillos (35 mn; densidad 6.10^{5} células/caja) Costar, en medio DMEM (Medio Eagle con modificación de Dulbecco) que contenían 10 \mug/ml de insulina, 10 \mug/ml de transferrina, 10 ng/ ml selenito de sodio, progesterona 10 nM, triiodotironina 1 nM,
y se conservaron en una estufa (37ºC, 5% CO_{2}). Luego se añadieron a los cultivos 2 \muM de ácido nucleico antisentido anti-p53 descrito anteriormente, durante la inoculación, luego en los días 1 y 2. El glutamato (5 mM) se suministró en el día 2, al mismo tiempo que el ácido nucleico antisentido anti-p53. La toxicidad inducida por el glutamato se determinó después de 24 horas de cultivo, al medir la actividad mitocondrial según la técnica descrita por Manthorpe et al. [Dev. Brain. Res. 25 (1986) 191].
Los resultados obtenidos se presentan en la figura 1. Muestran claramente que el ácido nucleico antisentido anti-p53 es capaz de reducir aproximadamente 25% de la toxicidad inducida por el glutamato.
(1) INFORMACIÓN GENERAL:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
SOLICITANTE:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
NOMBRE: RHONE-POULENC RORER S.A.
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
CALLE: 20, avenue Raymond ARON
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
CIUDAD: ANTONY
\vskip0.500000\baselineskip
(E)
PAÍS: FRANCIA
\vskip0.500000\baselineskip
(F)
CÓDIGO POSTAL: 92165
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TÍTULO DE LA INVENCIÓN: Composiciones farmacéuticas y su utilización, principalmente para el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas.
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
NÚMERO DE SECUENCIAS: 2
\vskip0.800000\baselineskip
(iv)
FORMA DE LECTURA EN EL ORDENADOR:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
TIPO DE SOPORTE: Cinta
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
ORDENADOR: PC compatible con IBM
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
SISTEMA OPERATIVO: PC-DOS/MS-DOS
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
PROGRAMA DE ORDENADOR: PatentIn Release #1.0, Versión #1.25 (OEB)
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN DE LA SEQ ID NO: 1:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 18 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
NÚMERO DE CADENAS: simple
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
ANTISENTIDO: SÍ
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 1:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
CGACTGTGAA TCCTCCAT 
\hfill
18 
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN DE LA SEQ ID NO: 2:
\vskip0.800000\baselineskip
(i)
CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
(A)
LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
(B)
TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
(C)
NÚMERO DE CADENAS: doble
\vskip0.500000\baselineskip
(D)
CONFIGURACIÓN: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
(ii)
TIPO DE MOLÉCULA: ADNc
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
HIPOTÉTICO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(iii)
ANTISENTIDO: NO
\vskip0.800000\baselineskip
(xi)
DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO: 2:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskip
GGACATGCCC GGGCATGTCC 
\hfill
20

Claims (14)

1. Utilización de un compuesto que inhibe al menos parcialmente la actividad de la proteína p53 para la preparación de una composición farmacéutica destinada al tratamiento y/o a la prevención de enfermedades neurodegenerativas.
2. Utilización según la reivindicación 1, caracterizada porque se trata de un compuesto que actúa sobre la síntesis de la proteína p53, en los niveles de la transcripción, de la traducción o la post-traducción, y/o sobre la unión de p53 al ADN.
3. Utilización según la reivindicación 2, caracterizada porque el compuesto es un ácido nucleico de cadena doble que comprende todo o parte del sitio de unión de p53 al ADN.
4. Utilización según la reivindicación 2, caracterizada porque el compuesto es un ácido nucleico codificador de una forma mutada de la proteína p53 capaz de antagonizar la actividad de ésta.
5. Utilización según la reivindicación 2, caracterizada porque el compuesto es un ácido nucleico antisentido capaz de reducir los niveles de expresión de la proteína p53, en el nivel de la transcripción o de la traducción.
6. Utilización según la reivindicación 5, caracterizada porque el ácido nucleico antisentido es un ADN codificador de un ácido ribonucleico antisentido capaz de inhibir la traducción del ARNm celular de p53.
7. Utilización según las reivindicaciones 3 a 5, caracterizada porque el ácido nucleico forma parte de un vector.
8. Utilización según la reivindicación 7, caracterizada porque el ácido nucleico forma parte de un vector viral.
9. Utilización según la reivindicación 8, caracterizada porque el vector viral comprende, insertado en su genoma, al menos un ácido nucleico codificador de una forma mutada de la proteína p53 capaz de antagonizar la actividad de esta, y/o un ácido nucleico que comprende todo o parte del sitio de unión de p53 al ADN y/o un ácido nucleico antisentido capaz de reducir los niveles de expresión de la proteína p53, en el nivel de la transcripción o de la traducción.
10. Utilización según la reivindicación 9, caracterizada porque el vector es un adenovirus, un retrovirus, un virus adeno-asociado, o un virus del herpes.
11. Utilización según la reivindicación 10, caracterizada porque se trata de un adenovirus.
12. Utilización según una de las reivindicaciones 7 a 10, caracterizada porque el ácido nucleico comprende todo o parte de la secuencia SEQ ID nº 2 o de variantes activas de ésta.
13. Utilización según una de las reivindicaciones 9 a 12, caracterizada porque el virus comprende varios ácidos nucleicos idénticos o diferentes, tal como se han definido en las reivindicaciones 3 a 5.
14. Utilización según una de las reivindicaciones 9 a 13, caracterizada porque el virus es un virus defectivo.
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