ES2248962T5 - Uso cosmetico del acido petroselenico. - Google Patents
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Abstract
Uso cosmético de una composición comestible que contiene 2-80% en peso de ácido petroselínico como un componente antienvejecimiento con un impacto positivo en afecciones de la piel seleccionadas del grupo constituido por arrugamiento, flacidez y manchas de edad.
Description
Uso cosmético del ácido petroselínico.
El ácido petroselínico es un compuesto bien
conocido que por ejemplo está presente en aceite de cilantro en
cantidades relativamente altas. Su uso en productos alimentarios se
describe también en la bibliografía. Por ejemplo el documento EP
777971 describe que se pueden obtener composiciones grasas a partir
de grasas que tienen altos contenidos de ácidos grasos
monoinsaturados asimétricos, tales como ácido petroselínico, es
decir, PSA (> 79% en peso) y que simultáneamente tienen
contenidos bajos de ácidos en trans (< 5% en peso). Las
composiciones grasas obtenidas se pueden usar como un reemplazador
de grasas con un número de beneficios tales como proporcionar
buenas propiedades de textura a la comida, mientras que no elevan
los niveles de LDL-colesterol en el suero
sanguíneo. Cuando se considera el ejemplo 5, en particular la tabla
3 de esta solicitud de patente alguien debe concluir que un buen
rendimiento de producto sólo se obtiene si los contenidos de grasa
aplicados contienen aproximadamente 12% en peso de PSA. Los
productos basados en grasas sin PSA funcionan mal (= grasa control
1). Las grasas con sólo pequeñas cantidades de PSA son aún
granulosas, mientras que usando una grasa con un alto contenido de
PSA
(= grasa 4 con aproximadamente 64% en peso de PSA por medio del aceite de cilantro) tiene una apariencia general pobre. Los productos alimentarios que se indican son margarinas, aliños, confecciones, patés, postres helados, helados, mayonesa, mostazas, queso, salsas para recubrir, pan, galleta alargada (biscuit), productos lácteos, aceites para freír, CBE, caramelo, carne, productos del huevo, productos de frutos secos, productos vegetales o frutales, productos para napar, cremas, puddings, galletas redondas (cookies), pastas, tartas, galletas saladas, pasteles, panecillos e ingredientes o por tanto premezclas. Como PSA es el ingrediente activo que proporciona los beneficios para la salud al producto alimenticio hay una gran necesidad de ser capaces de usar grasas con altos niveles de PSA pero que funcionen bien cuando se apliquen a productos alimentarios. Es decir, la apariencia de los productos alimentarios sería buena
también.
(= grasa 4 con aproximadamente 64% en peso de PSA por medio del aceite de cilantro) tiene una apariencia general pobre. Los productos alimentarios que se indican son margarinas, aliños, confecciones, patés, postres helados, helados, mayonesa, mostazas, queso, salsas para recubrir, pan, galleta alargada (biscuit), productos lácteos, aceites para freír, CBE, caramelo, carne, productos del huevo, productos de frutos secos, productos vegetales o frutales, productos para napar, cremas, puddings, galletas redondas (cookies), pastas, tartas, galletas saladas, pasteles, panecillos e ingredientes o por tanto premezclas. Como PSA es el ingrediente activo que proporciona los beneficios para la salud al producto alimenticio hay una gran necesidad de ser capaces de usar grasas con altos niveles de PSA pero que funcionen bien cuando se apliquen a productos alimentarios. Es decir, la apariencia de los productos alimentarios sería buena
también.
Se conoce también que ciertos ácidos grasos se
pueden usar como agente antiinflamatorio, por ejemplo Afifi y col.
"Some pharmacological activities of essential oils of certain
umbelliferous fruits" Vet. Med. Journal Giza vol. 42, nº. 3,
1 de enero de 1994, y también Yagaloff y col. "Essential fatty
acids are antagonists of the Leukotriene B4 Receptor"
Prostaglandins Leukotriened and Essential Fatty acids, vol.
52, nº. 5, 1 de enero de 1995. Estas publicaciones mencionan ácido
petroselínico.
Un problema del consumidor bien reconocido está
formado por el envejecimiento de la piel. En años recientes la
demanda de procedimientos para mejorar la apariencia de la piel y,
en particular, para reducir o prevenir los signos visibles de piel
arrugada, envejecida y/o fotodañada ha crecido enormemente. Se sabe
en la técnica que los niveles de colágeno, una proteína estructural
dérmica y de decorina, un proteoglicano estructural en la piel se
reducen significativamente con piel envejecida y/o fotodañada
(Lavker y col. J. Inv. Derm. 1979 73:79-66,
Bernstein y col. Lab. Invest. 1995 72:
662-669). La reducción en estas proteínas se asocia
con un decrecimiento en la fuerza de tensión de la piel que causa
arrugas y relajamiento.
La investigación extensiva se ha centrado en
identificar activos que tienen actividad antienvejecimiento. Uno de
los activos más en uso es ácido retinoico, que proporciona retirada
de las arrugas y la reparación de la piel a través de estímulo por
ejemplo mediante síntesis de colágeno (por ejemplo Griffiths y col.
N. Eng. J. Med. 1993 329: 530-535). De
acuerdo con el documento GB 2 181 349 se encontró otra solución en
el uso de triglicéridos derivados de ácidos grasos poliinsaturados
de cadena larga en composiciones cosméticas o dermatológicas. Estas
composiciones son de esta manera no comestibles en general porque
contendrán también componentes no comestibles. Además los
triglicéridos derivados de estos ácidos grasos poliinsaturados son
inestables en particular con respecto a la estabilidad con
oxígeno.
Los inventores estudiaron si podían encontrar un
componente natural que se pudiera usar como agente
antienvejecimiento sin crear problemas de efectos secundarios y no
tener los aspectos negativos de las composiciones antienvejecimiento
conocidas.
El estudio de la actividad antienvejecimiento
resultó en el hallazgo de los autores de la invención de que
derivados del ácido petroselínico (es decir ácido graso libre, éster
de alquilo corto, siendo C_{1}-C_{4} corto,
ésteres de ceras, mono, di o triglicéridos) se pueden aplicar como
un agente antienvejecimiento que actúa estimulando los niveles de
dos proteínas estructurales en la dermis de la piel, colágeno y
decorina.
Por lo tanto la invención de los inventores
presenres se refiere al uso de composiciones comestibles que
contienen ácido petroselínico para la preparación de composiciones
alimentarias o de suplementos alimentarios funcionales, en los que
la composición que contiene ácido petroselínico se usa como un
componente antienvejecimiento que estimula los niveles de decorina
con un impacto positivo en afecciones cutáneas seleccionadas del
grupo constituido por arrugamiento y flaccidez.
Las composiciones alimentarias funcionales están
definiéndose como composiciones de alimentación que contienen al
menos un componente con un beneficio para la salud. Los suplementos
alimentarios están definiéndose como composiciones que no se usan
como comida por sí mismas, pero que se usan como suplementos del
consumo de comida diario, en general en la forma de ingredientes
alimentarios esenciales encapsulados.
Estas composiciones comestibles que contienen
ácido petroselínico se pueden aplicar en muchas formas diferentes,
pero los autores de la invención prefieren aplicar estas
composiciones como una composición que comprende
5-99,9% en peso de grasa o mezcla de grasas.
Las grasas que se pueden usar en las
composiciones que contienen el derivado de ácido petroselínico se
pueden seleccionar del grupo constituido por: equivalentes de
manteca de cacao, aceite de palma o fracciones del mismo, aceite de
palmiste o fracciones del mismo, mezclas interesterificadas de
grasas anteriores, grasas endurecidas o fracciones de las mismas,
aceites líquidos, seleccionados de aceite de girasol, aceite de
girasol altamente oleico, aceite de soja, aceite de colza, aceite
de semilla de algodón, aceite de alazor, aceite de alazor altamente
oleico, aceite de maíz, aceites MCT, aceites líquidos endurecidos o
fracciones de los mismos y mezclas de los presentes.
Estas grasas son casi todas grasas naturales
(siendo la excepción aceites MCT los cuales son grasas sintéticas
basadas en ácidos grasos de cadena media es decir ácidos grasos con
6-12 átomos de carbono).
El nivel del ácido petroselínico en las
composiciones que los autores de la invención pueden aplicar para
sus propósitos es 2-80% en peso, preferiblemente
5-40% en peso de derivado del ácido petroselínico
(calculado como ácido petroselínico).
Como ya se indica anteriormente encontramos que
el ácido petroselínico se pudo usar en diferentes formas. Se
obtuvieron muy buenos resultados usando el ácido petroselínico como
ácido graso libre, o en una forma en la que está unido a un armazón
de glicerol como en mono-, di- o triglicéridos. En este último caso
los glicéridos deben contener al menos un resto ácido
petroselínico. Otras formas son ésteres de alquilo cortos del ácido
petroselínico, significando corto que tiene de uno a ocho,
preferiblemente de 1 a 4 átomos de carbono. Además se pueden
aplicar ésteres de ceras, es decir ésteres de alcoholes cadena larga
de ácido petroselínico. Por supuesto también se pueden usar mezclas
de las formas anteriores.
Los inventores también encontraron que el efecto
antienvejecimiento del ácido petroselínico se puede incrementar,
incluso en un modo sinérgico usando el derivado del ácido
petroselínico en combinación con uno o más antioxidantes. Los
ejemplos típicos de antioxidantes útiles se pueden seleccionar del
grupo constituido por tocoferoles naturales o sintéticos,
polifenoles naturales, en particular como se presentan en extractos
de té, BHT, BHA, desoxidantes de radicales libres y enzimas con
propiedades antioxidantes. De estos antioxidantes autores de la
invención prefieren los tocoferoles y los polifenoles como se
presentan la mayoría en extractos de té.
Los fibroblastos del prepucio humano primarios
en el pasaje 2 (P2) se sembraron en placas de 12 pocillos a 10000
células/cm^{2} y se mantuvieron durante 24 horas en una atmósfera
de dióxido de carbono al 5% y oxígeno al 4% en Medio Eagle
Modificado de Dulbecco (DMEM) suplementado con suero de ternero
fetal al 10%. Después de este tiempo las células se lavaron con
DMEM libre de suero y después se incubaron en DMEM libre de suero
recién preparado durante unas 60 horas adicionales. Las monocapas de
fibroblastos se lavaron después de nuevo con DMEM libre de suero.
Se añadieron los reactivos de ensayo (ácido petroselínico, EGG y
ácido gálico) y los controles de vehículo a las células por
triplicado en un volumen final de 0,4 ml/pocillo de DMEM libre de
suero recién preparado y se incubaron durante unas 24 horas
adicionales. Este medio acondicionado de fibroblastos bien se
analizó inmediatamente o bien se congeló repentinamente en nitrógeno
líquido y se almacenó a -70ºC para futuros análisis. Las células se
contaron después y los datos del análisis de transferencia por
puntos se estandarizaron subsiguientemente al número de células.
Las muestras de medio acondicionado de
fibroblastos dérmicos tratados con vehículo (como un control) o con
reactivos de ensayo se suplementaron con ditiotreitol 20 mM
(dilución 1:10 de solución de reserva 200 mM) y dodecilsulfato de
sodio al 0,1% (dilución 1:100 de solución de reserva al 10%), se
mezclaron bien y después se incubaron a 75ºC durante 2 minutos. Se
generó un estándar para el ensayo mediante dilución en serie de
medio acondicionado de fibroblastos puro a partir de fibroblastos
sembrados a 10000 células/cm^{2} en un matraz de 175 cm^{2} y
mantenidos en DMEM libre de suero como se describe anteriormente.
Las muestras de ensayo se aplicaron subsiguientemente por
triplicado a una lámina prehumedecida de membrana de transferencia
Immobilon-P usando el Aparato de
Bio-Dot de 96 pocillos de Bio-Rad
como se describe en los manuales de los fabricantes. Se aplicaron
aproximadamente 200 \mul de medio por pocillo. Se permitió al
medio filtrarse a través de la membrana por la fuerza de la
gravedad (30 minutos) después de lo cual la membrana se lavó dos
veces con PBS (200 \mul). Estos lavados con PBS se dejaron filtrar
a través de la membrana por la fuerza de la gravedad (2 x 15
minutos). El aparato de Bio-Dot estaba unido a un
colector de escape de vacío y un tercio y el lavado con PBS final
se llevó a cabo bajo succión. El aparato se desmontó, la membrana se
retiró y rápidamente se cortó como fue necesario antes de situarse
en tampón de bloqueo durante toda una noche a 4ºC. Las membranas
preparadas para análisis de decorina se bloquearon con seroalbúmina
bovina al 3% (peso/volumen) (BSA)/Tween 20 al 0,1%
(volumen/volumen) en tampón fosfato salino (PBS), mientras aquellos
análisis de procolágeno-I se bloquearon con leche
en polvo seca descremada al 5% (peso/volumen)/Tween 20 al 0,05% en
PBS. El día siguiente, las membranas se probaron con dilución
1:10000 de anticuerpos primarios para decorina humana (policlonales
de conejo; Biogenesis) durante 2 horas a temperatura ambiente. Las
membranas se lavaron subsiguientemente con TBS/Tween 20 al 0,05% (3
x 5 minutos) y después se incubaron con dilución 1:1000 de
fragmentos F(ab')2 anti-rata o
anti-conejo conjugados con ^{125}I (Amersham) como
se requirió durante 1 hora a temperatura ambiente. Tras esto las
tiras de Immobilon se lavaron con TBS/Tween 20 (3 x 5 minutos) antes
de dejarse secar al aire a temperatura ambiente. Las membranas
secadas se envolvieron en celofán y se expusieron a una pantalla de
phosphor de almacenaje Molecular Dynamics durante
16-18 horas. Al final de este tiempo la pantalla
expuesta se escaneó mediante un phosphorimager (Molecular Dynamics
Phosphorimager SF) usando software ImageQuant^{TM}. La intensidad
de los puntos se evaluó por análisis de imagen asistido por
computador usando las herramientas de cuantificación en
ImageQuant^{TM}, estandarizado al número de células y los efectos
de diversos reactivos de ensayo en síntesis de decorina
y de procolágeno-I se determinaron en relación a un valor de control tratado con vehículo de 100 unidades arbitrarias.
y de procolágeno-I se determinaron en relación a un valor de control tratado con vehículo de 100 unidades arbitrarias.
Se ha demostrado que el ácido petroselínico
estimula los niveles de decorina en fibroblastos, consistentes con
reparación dérmica y actividad antienvejecimiento (Tabla 1). Los
antioxidantes tales como ECGC, ácido gálico, diadzeína y genisteína
pueden ejercer también este efecto (Tabla 2). En combinación, se
observa un estímulo sinérgico en niveles de decorina (Tabla 3).
La producción de decorina mediante fibroblastos
se determinó en células control (sin tratamiento) y en células
tratadas con ácido petroselínico. Los datos se representaron como
media +/- desviación estándar según niveles de decorina como un
porcentaje del control (sin ácido petroselínico). Cada punto de los
datos se determinó por triplicado. Todos los valores de ácido
petroselínico se incrementaron significativamente comparados con el
control.
La producción de decorina mediante fibroblastos
se determinó en células control (sin tratamiento) y en células
tratadas con antioxidantes. Los datos se representaron como media
+/- desviación estándar para niveles de decorina como un porcentaje
del control (sin antioxidantes). Todos los valores de antioxidantes
se incrementaron significativamente comparados con el control. Cada
punto de los datos se determinó por triplicado.
La producción de decorina mediante fibroblastos
se determinó en células control (sin tratamiento) y en células
tratadas con ácido petroselínico y/o con antioxidante. Los datos se
representan como la media \pm la desviación estándar (n = 3) para
niveles de decorina como un porcentaje del control (sin
antioxidante). Se observó un efecto sinérgico en estimulación de
niveles de decorina tanto de antioxidantes como de ácido
petroselínico, comparado con el control.
Claims (6)
1. Uso cosmético de una composición comestible
que contiene 2-80% en peso de ácido petroselínico
como un componente antienvejecimiento con un impacto positivo en
afecciones de la piel seleccionadas del grupo constituido por
arrugamiento y flaccidez.
2. Uso de una composición comestible que
contiene ácido petroselínico de acuerdo con la reivindicación 1, en
el que la composición que contiene el ácido petroselínico se usa
como una composición que comprende 5-99,9% en peso
de grasa o mezcla de grasas.
3. Uso de una composición comestible que
contiene ácido petroselínico de acuerdo con las reivindicaciones
1-2, en el que la grasa en las composiciones que se
usan se selecciona del grupo constituido por: equivalentes de
manteca de cacao, aceite de palma o fracciones del mismo, aceite de
palmiste o fracciones del mismo, mezclas interesterificadas de
grasas anteriores, grasas endurecidas o fracciones de las mismas,
aceites líquidos, seleccionados de aceite de girasol, aceite de
girasol con ácido oleico elevado, aceite de soja, aceite de colza,
aceite de semilla de algodón, aceite de alazor, aceite de alazor con
ácido oleico elevado, aceite de maíz, aceites MCT, aceites líquidos
endurecidos o fracciones de los mismos y mezclas de los mismos.
4. Uso de una composición comestible que
contiene ácido petroselínico de acuerdo con las reivindicaciones
1-3, en el que el ácido petroselínico que contiene
composición contiene 5-40% en peso de ácido
petroselínico.
5. Uso de una composición comestible que
contiene ácido petroselínico de acuerdo con las reivindicaciones
1-4, en el que el ácido petroselínico se aplica en
la forma de ácido graso libre, o en la forma de mono-, di- o
triglicérido con al menos un grupo ácido petroselínico, o en la
forma de ésteres de cera del ácido petroselínico o en la forma de
ésteres de alquilo C1-C4 del ácido petroselínico o
como mezclas de los mismos.
6. Uso de una composición comestible que
contiene ácido petroselínico de acuerdo con las reivindicaciones
1-5, en el que la composición comestible contiene
también un antioxidante, seleccionado preferiblemente del grupo
constituido por tocoferoles naturales o sintéticos, polifenoles
naturales, en particular como se presenta en extractos de té, BHT,
BHA, desoxidantes de radicales libres y enzimas con propiedades
antioxidantes.
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